JPS61277612A - 接種用徐放性組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、平均分子量９．５００以上でエチレンオキサ
イドを２５重量％以上含むプロピレンオキサイドとエチ
レンオキサイドとのブロック重合型ポリエーテル系高分
子界面活性剤を含有する接種用徐放性組成物に関するも
のである。

従来、種々の抗腫瘍生理活性物質、免疫生理活性物質、
単クローン抗体、ホルモン、酵素などの生理活性物質及
びその他の活性物質を生体内に投与した際には、これら
の物質が体液中のプロテアーゼ及び種々のインヒビター
等により短時間で分解されあるいは急速に阻害され、こ
れら物質の活性が長時間継続的に発揮し得ないという問
題点があった。

又、インターロイキンなどの局所ホルモン様活性物質が
生体内でその効果を発揮するためには、その活性物質が
目的とする反応局所に滞留し、その活性が該局所に於い
て長時間持続することが必要とされるが、単にこれらの
物質を局所投与しただけでは投与後傾時間のうちに全身
を循環し体外排泄ないしは不活化されてしまうという欠
点があった。そのため従来は、これらの活性を生体内で
有効に発揮させるために、これらの活性物質を持続的な
いし頻回に、又は大量に投与する必要があった。しかし
ながら、これは治療上煩雑であり不経済であるばかりで
なく、大沿投与による副作用という解決すべき問題点を
含んでおり、医薬品として目的とする効果が得られ難い
ことが多かった。

そこで、本発明者は上記の種々の欠点を克服すべく種々
研究した結果、平均分子量９．５００以上でエチレンオ
キサイドを２５重量％以上含むポリオキシエチレン・ポ
リオキシプロピレンブロック重合型ポリエーテル系高分
子界面活性剤、例えばプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ
）Ｆ　−１２７（平均分子量１２．５００．エチシンオ
キサイドア０重鰻％含有、融点５６℃、７７℃での比重
は１．０５、以下、ＰＬＦ−１２７と記す）、ＰＬＦ１
０８（平均分子量１５，５００．エチレンオキサイド８
０重量％含有）及びＰＬＦ−９８（平均分子量１３．５
００．エチレンオキサイド８０重量％含有）などを上記
活性物質の混合基剤として、それらを他の担体を含む混
合物溶液に対して２０重量％〜５０重量％の割合で含有
させることにより、生体内で活性物質に徐放性を持たせ
その生理活性を持続させることができ、その活性作用を
確実なものにするという目的が達成されることを見い出
した。

米国ワイアンドッテ社により開発されたエチレンオキサ
イドとプロピレンオキサイドのブロック重合型ポリエー
テル系高分子界面活性剤のうち、プルロニック類として
広く知られている物質は市場で入手可能である。酸・ア
ルカリ、過酸化物、金属イオン等に対して安定であり、
それらの物質が生体内に於いて、低刺激性、低毒性及び
低催奇形性に加えて水溶性であることは公知の事実であ
る。例えば、林荘−及び永井真−著「ポリエーテル型高
分子界面活性剤の生理作用と安全性について」、フレグ
ランス・ジャーナルＮｏ、　７．　Ｐ８２−Ｐ８７゜（
１９７４）、およびイルヴイング・Ｒ，シモルカ（ＩＲ
ＶＩＮＧ　Ｒ，５ＣＨＨＯＬＫＡ）、ビー・ニー・ニス
・エフ・ワイアンドッテ社、著「ブロックポリマー界面
活性剤概論」ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・オイ
ル・ケミスト・ソサイアティ、　Ｖｏｌ、５４．Ｐｌｌ
ｏ−Ｐ１１６（１９７７）を参照のこと。その中でも平
均分子量９．５００以上でエチレンオキサイドを２５重
量％以上含むものは毒性が特に低く、少なくとも０℃付
近の低温では液状であるにもかかわらず、２０重量％以
上９０重世％までの濃度で水溶液にした場合２５℃以上
ではゲル化するという特性を持つ。かかる特性を利用し
てＰＬＦ−１２７を人工皮膚として用いた例も周知であ
る（イルヴイング・Ｒ、シモＪＬｔ力（ＩＲＶＩＮＧ　
Ｒ，５Ｃ１ｌＨＯＬＫＡ）　、　ヒ−−工−・ニス・エ
フ・ワイアンドッテ社、ジェイ・パイロメト・マチ・レ
ス（Ｊ、ＢＩＯＨＥＤ−ＨＡＴＥＲ，ＲＥＳ）。

Ｖｏｌ、６．　Ｉ）５７１〜＋１５８２．　（１９７２
））。また、それらは生体内に接種された後、徐々に溶
解し、さらにその溶解したものは腎臓より排泄される特
性をもつ（モアー（ＭＯＯｒｅ）、ジェイ・サージ・レ
ス（Ｊ、Ｓｕｒｇ、Ｒｅｓ、　）Ｖｏｌ、８．Ｐ２Ｓ５
（１９６８）参照）　タメ、治療後にそれラノ物質を再
摘出する必要がないという利点を有する。

本発明はかかる特性を持つＰＬＦ−１２７などを徐放性
混合基材として、２０重量％〜５０Ｍ量％の割合で含有
する該接種用徐放性組成物を提供するものである。これ
により、活性物質との混合を０℃付近の低温に於いて液
状で行なうことが可能であり、熱に不安定なインターロ
イキンなどの生理活性物質を使用する際に特に本発明は
有利である。更に本発明は、生体に該混合組成物を接種
した後、該混合組成物がその局所でゲル化することによ
り、活性物質に優れた局所滞留性と徐放性を付与するこ
とができるという利点を有する。

そればかりではなく、本発明においては、ＰＬＦ−１２
７などに活性物質を単に混合するだけで良く、互いに化
学的に結合させる必要がないため、調製に際してそれら
の活性を損なう恐れがない。

かかる徐放性基剤と混合され得る活性物質としてはヒト
免疫担当細胞間の仲介活性物質、抗腫瘍活性物質、単ク
ローン抗体、免疫賦活剤、制癌剤、ホルモン、酵素など
の活性物質、例えばインターロイキン１　（ＩＬ−１）
、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン
３　（ＩＬ−３＞、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）
、インターフェロンβ（ＩＦＮ−β）、インターフェロ
ンγ（ＩＦＮ−γ）、マクロファージ活性化因子（ＭＡ
Ｆ）及び顆粒球活性化因子（ＮＡＦ）などのヒト由来の
リンホカイン、サイモシンＦｒ５、サイモシンα、β及
びサイミュリンなどの胸腺因子並びにトランスファー因
子、ＴＮＦｌＫＢＳ及び０Ｈ−１などの癌細胞壊死因子
、絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ＞及び成長ホルモン
（ＨＧＨ）などのホルモン、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ
）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）　、神経細胞増殖
因子（ＮＧＦ）及びコロニー形成刺激因子（Ｃ８Ｆ）な
どの細胞増殖因子＜ＮＧＦ）、ウロキナーゼ（ＵＫ）、
リゾチーム、アスパラギナーゼ、ヒアウロニダーゼ及び
コラゲナーゼなどの酵素等の生理活性物質、並びにレン
チナン、ＰＳ−に、ＭＥＲ，Ｎ−ＣＷＳＳＢＣＧ−ＣＷ
Ｓ及びレバミゾールなどの免疫賦活剤、プレオマイシン
、５−　Ｆ　Ｕ　、’サイトシンアラビノサイト（Ａｒ
ａ−Ｃ）、シスブラチナン、マイトマイシンＣ及びアト
レアマイシンなどの制癌剤などその他の活性物質が挙げ
られる。

本発明の混合物は活性物質の種類により、局所的あるい
は全身的に投与され得る。局所的投与は癌組織周辺ない
し領域リンパ節付近に、又全身的投与は筋肉内、皮下に
接種によって行なわれる。

接一種層は活性物質の既知の投与量に比例するが、本発
明の徐放性基剤と混合された活性物質は生体内での活性
持続効果が著しく高いので、１回の投与量を減らすこと
ができ、又、投与間隔も従来に較べて長くすることが可
能である。

本発明に用いられるプロピレンオキサイドとエチレンオ
キサイドのブロック重合型ポリエーテル系高分子界面活
性剤の中でも、その低毒性、ゲル特性に鑑みＰＬＦ−１
２７が特に好ましい。また、混合組成物中の該高分子界
面活性剤の濃度は、２０重量％以上でないとゲル化しな
いこと及び５０重量％以上であると混合調製に時間がか
かりすぎるなどの実際上の理由により、２０重量％〜５
０重量％であり、好ましくは２５重恐％〜３５重量％、
更に好ましくは３０重量％である。

又、本発明に於ける担体は、通常の薬剤に用いられるも
のであれば、何でも使用し得、例えば蒸留水、生理的食
塩水及び種々の緩衝液などが適当である。以下、実施例
により本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１ 前述のＰＬＦ−１２７、ＰＬＦ−１０８、及びＰＬＦ−
９８の徐放性効果をそれらと混合したタンパク質の試験
管内に於ける遊出速度から検討した。

即ち、　　　■（放射性同位元素ヨード）標識ア、　　
　１２５ ルブミノ（１−Ｈ３Ａ、ミドリ十字社製、医用キシド）
１００．０００ｃ、ｐ、ｍ、をそれぞれ含む上記プルロ
ニック類の各濃度水溶液を０℃に於いて各２．０ｍ、前
述した引用文献中に記載されている方法に従って混合調
製した。調製した各濃度の水溶液００５−をそれぞれプ
ラスチック尖端試験管底にとり３７℃でゲル化させた後
、同じく３７℃に加温した０、５％人血清添加生理的食
塩水２．０ｍをその上に重層し、３７℃・５％インキュ
ベーター内で一定期間静置した。Ｌ清の生理内素塩水溶
液中に遊出してくる　　Ｉ　−Ｈ８Ａの放射活性をガン
マ−カウンター（アロカ社製ＡＲＣ５００）を用いて経
時的に測定し、最初に加えた量に対する百分率で表記し
た（第１図参照）。

その結果を５０％放射活性量の遊出時間で表わすと下記
のようになった。

表　　１ 以上の結果から、これらプルロニック類が組成物中に混
合されることにより該組成物中のタンパク質に徐放性が
付与されることが判明した。因みに、比較例として行な
った１５重昂％（ＰＬＦ−１２７）の場合は１時間以内
に殆んど全ての活性量が遊出してしまった。

ＰＬＦ−１２７粉末を０℃にて生理的食塩水に静かに撹
拌しながら溶解し重ａ百分比で３３重量％の液状ＰＬＦ
−１２７を調製した。次に、同じく０℃のヒトリコンビ
ナントインターロイキン２（ｒｌＬ−２）（塩野義製薬
、Ｓ−６８２０）水溶液と混和して、最終的にｒｌＬ−
２を２Ｘ１０”Ｌｌ／Ｉｄの濃度で含む最終ＰＬＦ−１
２７濃度がそれぞれ２０重量％、２５重量％、３０重量
％のｒＩＬ−２−ＰＬＦ−１２７混合組成物を調製した
。各濃度の混合組成物のそれぞれ０．５ｄを１５１ｄ試
験管底に付着させた後３７℃でゲル化させた。これに３
７℃に加温した１０％ＦＣ８添加ＲＰＭＩ−１６４０培
地２ｄを加え、３７℃・５％ＣＯ２インキュベーター内
に静置して、経時的に１．５．３．６．１２．２４及び
４８時間後に上清を採取し、培地中に放出されるｒｌＬ
−２活性を測定した。ｒｌＬ−２活性の測定にはＩＬ−
２依存性細胞であるＣＴＬＬを用いた。すなわち、９６
穴のマイクロプレートの各ウェルに１０５個のＣＴＬＬ
細胞を播種し、これに最終希釈倍数が３〜２４３倍とな
るように１０％ＦＯ８添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で希
釈した各検体の上清液を加えて、３７℃・５％ＣＯ２イ
ンキュベーター内で２４時間培養後、ハーベストの８時
間前にトリチウムサイミジン（３Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎ
ｅ。

ＡｌｒＳｈａｌ１１社製Ｔ１１に１２０）　１　ｕＣｉ
を添加しＣＴＬＬ細胞にとりこまれた３Ｈ−ｔｈｙｍｉ
ｄｉｎｅの放射活性を液体シンチレーションカンタ−（
アロカ社製ＬＳＣ９０３）で測定した。その結果、２０
重量％および２５重量％ＰＬＦ−１２７からのｒｌＬ−
２の放出はその５０％活性放出時間として約３時間であ
つが、３０重量％ＰＬＦ−１２７からのそれは１２〜２
４時間で著しい徐放効果を発揮することが認められた（
第２図参照）。

生理的食塩水中で最終濃度３０重量％ＰＬＦ−１２７に
混合した放射性同位元素９９ｍＴｃ　　（医薬用テクネ
シウム、第一ラジオアイソトープ社製）が接種局所にど
のように滞留するかを検討した。

すなわち、９９ＩＩＴｃ　−ＰＬＦ−１２７混合物と生
理食塩水中に９９ｍＴｃ　　（生食９９１１１７　Ｃ）
を溶解しただけのものの両者をそれぞれ別々にラットの
背部皮下（１００μＣｉ、　００５−）ないし足背部（
４０μＣｉ、　０．２ｓｅ）に接種し、その局所に於け
る放射活性の減衰をシンチカメラ（オハイオ・ニュウク
レア（株）製シグマ４１０８）にて測定した。その結果
９９ｍＴｃ　−ＰＬＦ−１２７混合物接種部位の放射活
性の半減時間は背部皮下で約８１分、足背部で約１２７
分であったのに対し、生食９９＋ａＴｃ接種部位のそれ
は、それぞれ平均約２５分および約３５分であり、ＰＬ
Ｆ−１２７と混合することで９９ＩｌｌＴＣ接種局所に
於ける滞留時間（徐放効果）が３〜４倍延長することが
観察された。

大１１１Ａ １２５Ｉ標識人血清アルブミンの局所 、　１２５ 実施例１で用いたのと同し　　Ｉ（放射性同位光−、１
２５ 素ヨード）標識ヒト血清アルブくノ（ｌ−Ｈ８Ａ）を生
理的食塩水中で最終濃度３０重量％ＰＬＦ−１２７と混
合し、あるいはだだの　　■−Ｈ８Ａ生理的食塩水溶液
としてラットの足踏（ｒｏｏｔ　ｐａｄ）に接種（１１
５，０００ｃ、ｐ、Ｉｌｌ、、０．２ｄ）　Ｌ、その局
所滞留性（徐放効果）をガンマ−カウンター（アロカ社
製ＡＲＣ５００）を用いて経時的に測定した。その結果
、ＰＬＦ−１２７との混合物に於いては　　ｌ−Ｈ３Ａ
の半減期は約２．３時間であり、生理的食塩水溶液の半
減期の約０．８６時間に比べて約２．７倍の間、局所に
滞留したことが判明したく第３図参照）。

実施例５ ＰＬＦ−１２７粉末を０℃の低温で生理的食塩水溶液と
し、これにｒＩＬ−２を溶解し、最終濃度ＰＬＦ−１２
７が３０重量％、ｒｌＬ−２が１．２ｘ１０５Ｕ／ｄに
なるように調製した。次に、これのＷＫＡラットの同系
線維肉腫（ＫＭＴ−１７１１１胞を１０５個皮下に移植
し腫瘍化させたもの）に対する治療効果を検討した。Ｋ
ＭＴ−１７細胞移植翌日から比較例としてｒＩＬ−２（
０，６Ｘ１０５Ｕ、０．５ｍ）を単独、あるいはＰＬＦ
−１２７−ｒ　ＩＬ−２混合組成物溶液０．５ｄ！とじ
て、腫瘍局所近傍皮下に計１０回隔日投与（担癌１〜１
９日目）した。生存日数の延長（Ｐｅｒｃｅｎｔ　１ｎ
ｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　１ｉｆｅ　５ｐａｎ：％ＩＬＳ）
はｒｌＬ−２単独投与群で、３８．２％であったのに対
して、ＰＬＦ−１２７−ｒｌＬ−２混合組成物溶液投与
群では　５６．０％と有意の延長（Ｐ＜０．０５）が認
められ、ＰＬＦ−１２７を混合基剤として用いたことに
よる徐放効果が確められた。又、ＰＬＦ−１２７単独投
与群の％ＩＬＳは１４．１％で延命効果はほとんど認め
られなかった。尚、％ＩＬＳは下記の式： より求めた。

実施例６ 実施例５で治療処置した各ラット群それぞれの所属リン
パ節細胞の抗腫瘍活性を検討した。Ｗｉｎｎａｓｓａｙ
に従って、前記各ラット群の所属リンパ節を腫瘍移植後
２５日目に採取し、ＭＥＭ培地を用いて該リンパ節細胞
浮遊液（１０８細胞／ｒｄ）をＩＩ製し、そ（７）Ｏ，
ｌｄをＫＭＴ−１７細胞（７）ＭＥＭ培地浮遊液（１０
６細胞／ＩＩ！ｃ）０．１Ｈ１と混合した。その後それ
ぞれの該細胞混合浮遊液０．２ｄを同系ＷＫＡラットの
皮下に接種した。それぞれの抗腫瘍活性は接種後１１日
目に於ける腫瘍の重量をＫＭＴ−１７細胞単独投与した
もののそれと比較して、下記に示す式から求めた％抑制
率として表わした。

その結果、実施例５に於ける治療効果と一致した傾向が
見られた。即ち、実施例５のＰＬＦ−１２７・ｒｌＬ−
２混合組成物溶液投与群からの所属リンパ節細胞が９０
％の高い抑制率を示したのに対し、ｒｌＬ−２単独投与
群からのそれは１２％、ＰＬＦ−１２７単独投与群から
のそれは一１５％、未治療群からのそれは１０％という
低い値であった。

％抑制率の算出式；

【図面の簡単な説明】

第１図は徐放性効果を　　ｌ−Ｈ８Ａの遊出速度で検討
したもののうちから、代表例としてＰＬＦ−１２７につ
いてグラフで示したものである。 第２図は同じ＜ＰＬＦ−１２７の徐放性効果に関して、
ｒｌＬ−２を活性物質として用いた実験結果を示したも
のである。 第３図は　　■標識人血清アルブミンの局所滞留性に関
してラットを用いて行なった実験結果を示している。 第１図 泣欣絹開　　（賄） 散払合間　　　　　　　（η−） 梼＃伐り叱韻

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）平均分子量９，５００以上でエチレンオキサイド
   を２５重量％以上含むプロピレンオキサイドとエチレン
   オキサイドとのブロック重合型ポリエーテル系高分子界
   面活性剤と活性物質と担体との混合物溶液であって、該
   ブロック重合型ポリエーテル系高分子界面活性剤を該混
   合物溶液中２０〜５０重量％含有することから成る、０
   〜４℃の低温で液体であり且つ体温付近の温度でゲル化
   する接種用徐放性組成物。
2. （２）該ブロック重合型ポリエーテル系高分子界面活性
   剤を２５〜３５重量％含有する特許請求の範囲第１項に
   記載の組成物。
3. （３）該ブロック重合型ポリエーテル系高分子界面活性
   剤を３０重量％含有する特許請求の範囲第１項に記載の
   組成物。
4. （４）該ブロック重合型ポリエーテル系高分子界面活性
   剤が平均分子量１２，５００でエチレンオキサイドを７
   ０重量％含む物質である特許請求の範囲第１項乃至第３
   項に記載の組成物。