JPS61242579A - 安定なアスコルビン酸酸化酵素組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は安定なアスコルビン酸酸化酵素組成物に関する
。更に詳細にはアスコルビン酸酸化酵素とスキムミルク
又は糖類を含有する水性又は乾性組成物からなる安定な
アスコルビン酸酸化酵素組成物に関する。アスコルビン
酸酸化酵素は、近年食品分野に用いられることが期待さ
れている。その目的は、食品中にアスコルビン酸とアス
コルビン酸酸化酵素を共存させることによりデヒドロア
スコルビン酸を生成させることにある。このデヒドロア
スコルビン酸は、魚畜肉製品、水産ねり製品の品質を決
定する重要な因子である結着性やあしくのび）と呼ばれ
る弾力性を改善するものである。しかし、このデヒドロ
アスコルビン酸は現在食品添加物として認可されていな
い。よっ・てアスコルビン酸とアス、コルビン酸酸化酵
素を食品に添加することにより、デヒドロアスコルビン
酸を生ししめ食品の品質改善をうるものである。

従来の技術 アスコルビン酸酸化酵素は、カポチャ、キュウリ、ニン
ジン等野菜類の果皮又は微生物により得られており、該
酵素の精製並にその性質が詳細に研究されてきた。しか
しながら、本酵素の安定性は著しく低く、実用に供し得
るものではなかった。その為、安定化を図る添加剤の検
討がなされてきた。アスコルビン酸酸化酵素を安定化せ
しめる添加剤としては、希薄溶液中におけるゼラチンの
安定化効果（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ、２巻、８３５頁、　１９５５年）、牛血清アルブ
ミン、ホウ酸塩、塩基性アミノ酸より構成される一種又
は二種以上の添加剤を含んでなる安定化方法（特開昭５
７−２６５８７）等がある。しかしながら、前者におい
ては酵素活性測定における短時間の希薄酵素溶液中にお
ける安定性の記載のめであり、又乾燥状態での安定性に
関する報告はなされていない。

一方、後者では塩基性アミノ酸又はホウ酸塩の添加量を
多くしないと充分な効果が得られないことや有機溶剤沈
降時のＩＮ製１程では安定化効果が見られない。更に、
これらの添加物は賦形性が悪く製剤加工に困難性を伴う
ことがあることや、食品として使用出来ない添加剤もあ
ること等の欠点を有している。

発明が解決しようとする問題点 本発明では、かかる事情に鑑みアスコルビン酸酸化酵素
の精製工程、＠剤工程並びに製剤の保存・管理において
アスコルビン酸酸化酵素を安定化させ、その活性を長期
間維持せしめ、なお且つ優れた賦形性を有する安定なア
スコルビン酸酸化酵素組成物を提供することにある。

問題点を解決するための手段 本発明者らは、アスコルビン酸酸化酵素を精製工程で安
定化し、なお且つその製剤化に於いて優れた賦形性を具
備し、食品として好適で新規な安定化剤を検索した。そ
して全く意想外にもスキムミルク又は糖類がアスコルビ
ン酸酸化酵素に対して顕著な安定化効果をもたらすこと
を見い出したのである。特にスキムミルクはその構成成
分としてカゼイン、乳糖を主体としたものであるが、こ
れらを単独に或いは組み合わせて用いた時に比し、卓越
した安定化作用をもたらしたことは驚くべきことであっ
た。

本発明におけるアスコルビン酸酸化酵素はキュウリ或い
はカポチャの果皮より分離され、水溶性有１ａ熔剤沈降
、塩折、脱塩・濃縮、クロマトグラフィー分離等、通常
酵素精製の常套手段を用いて精製し製剤化する。精製さ
れるアスコルビン酸酸化酵素の純度は高度に精製された
ものである必要はなく、その使用用途に応じて適宜使い
わけることができる。

ここで用いられる安定化剤はスキムミルク又は糖類であ
り、スキムミルクは通常市販されている脱脂乳又は粉末
化した脱脂粉乳である。糖類としてはマルトース、ラク
トース、シュクロース等の二糖類が挙げられる。

上記安定化剤は、アスコルビン酸酸化酵素の精製工程即
ち、抽出、水溶性有機溶剤沈降、透析。

塩析、クロマトグラフィー分離、濃縮、凍結乾燥、真空
乾燥等の各工程で任意に使用されうる。

特に、アスコルビン酸酸化酵素は水溶性有機溶剤沈降工
程や乾燥工程の際に失活が著しい為、この工程でスキム
ミルクを添加しておくことは好ましく安定性に大きく寄
与する。スキムミルク又は糖類を添加する量としては、
通常その液量又は重量に対し１〜３０％、好ましくは５
〜２０％である。スキムミルクによる安定化効果は１％
以下では得られない。又、３０％以上ではアスコルビン
酸酸化酵素の単位活性が下がってしまい実用的ではない
。スキムミルク又は糖類は粉末のまま添加してもよいし
、予め水又は緩衝液に熔解させておいてもよい。安定化
剤を含むアスコルビン酸酸化酵素組成物はその性状が液
状の組成物であってもよいし、更にこれを凍結乾燥、真
空乾燥等の何らかの乾燥手段により乾燥した組成物とな
したものでもよい。、又、得られた乾燥品は粉砕９分級
、混合等の製剤加工により、更に必要とあらばアスコル
ビン酸酸化酵素の含量を調整する目的でスキムミルク又
は糖頻を添加し、賦形して完成された組成物となすこと
ができる。かくして長期間にわたり品質の維持を可能な
らしめたアスコルビン酸酸化酵素組成物を得ることがで
きたのである。

アスコルビン酸酸化酵素の活性は以下の方法によって測
定した。

基質溶液１７．６ｍｇのし一アスコルビン酸を５０ｍ１
のｐＨ５，６のリン酸緩衝液に溶解する。用時、その１
０ｍ１を３９ｍ１の緩衝液で希釈して用いる。

酵素溶液　０．０８〜０．３５０　／　ｍｌになるよう
にリン酸二ナトリウム４ｍｍｏｌ　／　ｊ！　＋アルブ
ミン０゜０５％溶液で希釈する。

反応停止液　塩酸０．２ｍｏｌ／　Ｉ！をｍ製する。

反応方法　基質１ｍｌをキュベツトに入れ、２５℃、５
分間予熱後、酵素液（１，１ｍｌを加えて５分間反応さ
せる。塩酸溶液３ｍｌを加えて反応を停止した後十分攪
拌し２４５ｎｍの吸光度を測定する。

酵素単位表示　２４５ｎｍの吸光度の減少から分解され
たアスコルビン酸量を求め、酵素力価を算出する。なお
、ここで表示するＩＵとは１分間に１μｍｏｌのアスコ
ルビン酸が分解される酵素量を示す。

以下に実施例を挙げて本発明の詳細な説明するが、本発
明はこれらに限定されるものではない。

実施例エ キュウリを破砕後、得られた抽出濃縮液（２４１Ｕ　／
　ｍｌ）　１００＋ｎｌに各々のスキムミルク（雪印乳
業製品）を入れて混合し、−２５°Ｃのエタノール４０
０ｍ１中に攪拌しながら添加してアスコルビン酸酸化酵
素を沈澱せしめ、沈澱部分を真空乾燥した。結果を表１
に示す。これから明らかなように、スキムミルクを添加
したものはアルコール沈降に対し、アスコルビン酸酸化
酵素を安定化する作用があることが判る。

（以下余白） 表１ 実施例２ 実施例１の抽出濃縮液を更に濃縮し５２０　　Ｕ／ｍｌ
とした液について、同様の試験をした。結果を表２に示
す。これから明らかなように、スキムミルクを添加した
ものは著しい安定化効果をもたらした。

表２ 実施例３ キュウリの抽出濃縮液（１８３Ｕ　／　ｍｌ）に各々の
添加剤（，１０％水溶液、ｐＨ未調整）　１００ｍ１を
加えて凍結乾燥した。コントロールは水を用いた。乾燥
品や、□、。［”１４Ｅ１間卿卵器、保ヶ６、や。後酵
素カ性を測定した。結果を表３に示す。これから明らか
なように、スキムミルクの安定化は顕著でコントロール
に比べ約３倍の活性を維持している。又、二ｔｔｆＭ類
にも安定化作用がみられる。

（以下余白） 表３ 実施例４ キュウリを破砕後、抽出しこれに硫安を添加し塩析した
。沈澱を溶解後、Ｃトセファロース（登録商標、ファル
マシア製品）によるクロマトグラフィーにて分離し、脱
塩濃縮した′ａ縮液（４２３Ｕ　／ｍｌ）を得た。これ
に実施例３で用いた方法と同じ添加剤を加えて凍結乾燥
し、経時変化をみた。結果を表４に示す。これから明ら
かなように、高度に精製したアスコルビン酸酸化酵素に
ついてもスキムミルクは顕著な安定化効果を示している
。

表４ 実施例５ アスコルビン酸酸化酵素溶液（３２０／ｍｌ）　５ｍｌ
にスキムミルク（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ社製品）及びスキムミルクの構成成分である化合物５
ｍｌを加えて凍結乾燥し、３７°Ｃｌ２Ｏ日間の経時変
化をみた。

結果を表５に示す。これから明らかなように、スキムミ
ルクの構成成分であるラクトース及びミルクカゼインを
組み合わせて用いたものよりもはるかにスキムミルク単
独での安定化作用が高いことが判る。

（以下余白） 表５ ０日日の数値は凍結乾燥上りの活性値（Ｕ　／　ｔｕｂ
ｅ）を示す。

実施例６ カポチャ果皮の抽出液をＩＩＦ濃縮しその濃縮液（２５
０Ｕ　／　ｍｌ）　１００ｍ１にスキムミルク（雪印乳
業製品）又は糖類を加えて、２０℃、１４日間の経時変
化をみた。結果を表６に示す。これから明らかなように
スキムミルク又は糖類の添加効果はアスコルビン酸酸化
酵素が液状の場合でもみられることが判る。

表６ 表中の数値はｍ１当りの活性（［１／ｍｌ）を示す。

発明の効果 本発明は、不安定なアスコルビン酸酸化酵素に食品とし
て好適なスキムミルクを添加することによって長期間に
わたり優れた品質を保持することができるため、食品添
加物として実用に供し得るものとなったばかりでなく、
良好な賦形性により製剤の加工・管理も容易ならしめた
のである。又、スキムミルク又は糖は安価に得られるた
め経済的に製造することが可能である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アスコルビン酸酸化酵素とスキムミルク又は糖類を
   含有する水性又は乾性組成物からなることを特徴とする
   安定なアスコルビン酸酸化酵素組成物。 ２、アスコルビン酸酸化酵素の精製工程でスキムミルク
   を添加する特許請求の範囲第１項記載の安定なアスコル
   ビン酸酸化酵素組成物。 ３、アスコルビン酸酸化酵素の精製工程が水溶性有機溶
   剤沈澱工程又は乾燥工程である特許請求の範囲第２項記
   載の安定なアスコルビン酸酸化酵素組成物。 ４、スキムミルクを１〜３０％添加する特許請求の範囲
   第１項又は第２項記載の安定なアスコルビン酸酸化酵素
   組成物。 ５、糖類が二糖類である特許請求の範囲第１項記載の安
   定なアスコルビン酸酸化酵素組成物。