JPS61165328A - リンフオカインの単離および精製法 - Google Patents
リンフオカインの単離および精製法Info
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- JPS61165328A JPS61165328A JP61002356A JP235686A JPS61165328A JP S61165328 A JPS61165328 A JP S61165328A JP 61002356 A JP61002356 A JP 61002356A JP 235686 A JP235686 A JP 235686A JP S61165328 A JPS61165328 A JP S61165328A
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- amino acids
- purifying
- lymphokines
- lymphokine
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
インターロイキン−２またけＴ−細胞増殖因子は免疫応
答の経過に重要な小心的役割を果している。はプチドシ
グナルとしてこのものは細胞毒性Ｔ−細胞の前駆体細胞
の増殖およびまた活性化され九Ｂ−細施の増殖をも可能
にする（文献、ＲＯｂｔ）氏の「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
ＴｏｄａｙＪ５ （１９８４）２０３〜２０９参照）
。
答の経過に重要な小心的役割を果している。はプチドシ
グナルとしてこのものは細胞毒性Ｔ−細胞の前駆体細胞
の増殖およびまた活性化され九Ｂ−細施の増殖をも可能
にする（文献、ＲＯｂｔ）氏の「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
ＴｏｄａｙＪ５ （１９８４）２０３〜２０９参照）
。
それが遺伝性であろうと、８Ｉ得性であろうと、医原性
であ、ろうとインターロイキン−２（以下工Ｌ−２と略
記する）の欠乏、または工Ｉａ−２の生合成における欠
乏が存在するすべての免疫欠乏症において工Ｌ−２は治
療上使用されうる。
であ、ろうとインターロイキン−２（以下工Ｌ−２と略
記する）の欠乏、または工Ｉａ−２の生合成における欠
乏が存在するすべての免疫欠乏症において工Ｌ−２は治
療上使用されうる。
分子量１ｓｏｏｏを有するヒ） ＩＬ−２は配列の特性
が決定されてお）（文献、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ氏他１’
−ＮａｔｕｒｅＪ 皿（１９８３） ３８５〜３８９頁
参照）、そしてすでに大腸菌中くてクローンされている
。
が決定されてお）（文献、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ氏他１’
−ＮａｔｕｒｅＪ 皿（１９８３） ３８５〜３８９頁
参照）、そしてすでに大腸菌中くてクローンされている
。
天然の、ヒトエＬ−２に関してはこのものが糖残基を有
するがしかしこれらは活性には必須のものではないこと
が知られている。一連のクロマトグラフイ一工程からな
るヒトまたは霊長類ＨＩ−２の精製法は例えば西ドイツ
特許ム１−５２４２８５１号、ヨーロッパ特許Ａｌ−１
０６１７９号および「Ｂｉｏａｈｅｍ、 Ｂｌｏｐｈｙ
ｓ、 Ｒｅｓ、 Ｏｏｍｍｕｎ、Ｊ １１５（１９８３
）７６２〜７６８頁から知られている。
するがしかしこれらは活性には必須のものではないこと
が知られている。一連のクロマトグラフイ一工程からな
るヒトまたは霊長類ＨＩ−２の精製法は例えば西ドイツ
特許ム１−５２４２８５１号、ヨーロッパ特許Ａｌ−１
０６１７９号および「Ｂｉｏａｈｅｍ、 Ｂｌｏｐｈｙ
ｓ、 Ｒｅｓ、 Ｏｏｍｍｕｎ、Ｊ １１５（１９８３
）７６２〜７６８頁から知られている。
組換え工Ｌ−２では分子に幾分親水特性を与える糖残基
が欠落している。それゆえとの工ｌｌ−２は集合する傾
向がある。特にこのものが大腸菌中高い局所濃度で存在
する場合は集合体が形成されそしてそれゆ、え溶解度が
低くなる。この理由から大腸菌中に発現された工Ｌ−２
は（例えば減圧ショックによるかまたはリゾチームのよ
うな酵素を用いて）細胞を崩壊させたのち難溶性形態で
の沈降物中に見出される。溶解させそしてグアニジニウ
ムＨ（Ｊ ｉたは尿素から沈殿させることＫよシこのも
のは同様に精製されうるが、しかしこれＫは大量の窒素
含有物質を必要とし、その除去が困難であシうる。
が欠落している。それゆえとの工ｌｌ−２は集合する傾
向がある。特にこのものが大腸菌中高い局所濃度で存在
する場合は集合体が形成されそしてそれゆ、え溶解度が
低くなる。この理由から大腸菌中に発現された工Ｌ−２
は（例えば減圧ショックによるかまたはリゾチームのよ
うな酵素を用いて）細胞を崩壊させたのち難溶性形態で
の沈降物中に見出される。溶解させそしてグアニジニウ
ムＨ（Ｊ ｉたは尿素から沈殿させることＫよシこのも
のは同様に精製されうるが、しかしこれＫは大量の窒素
含有物質を必要とし、その除去が困難であシうる。
今、驚くべきことに、細菌の崩壊物からの沈降物中の組
み換えＩＬ−２の大部分がこれを良く溶解させるが、し
かし鑞とんど変性させることのない、好ましくは有機酸
を含有する溶媒相を使用して溶解され５ることか見出さ
れた。工Ｌ−２の単離は常法により、例えば凍結乾燥に
より行われうる。それ以上の精製はクロマトグラフィー
、好ましくは逆相Ｆ１ｐ’ｒａａにより行われうる。
み換えＩＬ−２の大部分がこれを良く溶解させるが、し
かし鑞とんど変性させることのない、好ましくは有機酸
を含有する溶媒相を使用して溶解され５ることか見出さ
れた。工Ｌ−２の単離は常法により、例えば凍結乾燥に
より行われうる。それ以上の精製はクロマトグラフィー
、好ましくは逆相Ｆ１ｐ’ｒａａにより行われうる。
それゆえ本発明はリンフォカインまたは修飾されたリン
フォカイン、好ましくはインターロイキン−２またけ修
飾されたインターロイキン−２を単離および精製するＫ
あたシ、これらを細胞の崩壊物からの沈降物から有機溶
媒相を用いて抽出しそしてリンフォカインまたは修飾さ
れたリンフォカインを場合により非極性の固定相でのク
ロマトグラフィーによりさらに精製することからなる方
法に関する。
フォカイン、好ましくはインターロイキン−２またけ修
飾されたインターロイキン−２を単離および精製するＫ
あたシ、これらを細胞の崩壊物からの沈降物から有機溶
媒相を用いて抽出しそしてリンフォカインまたは修飾さ
れたリンフォカインを場合により非極性の固定相でのク
ロマトグラフィーによりさらに精製することからなる方
法に関する。
先に言及したように１ リンフォカインはヒトおよびそ
の他の霊長類細胞の培養物からまたは遺伝子工学的に変
えられた細胞の培養物から単離されうる。リンフォカイ
ンまたは修飾されたリンフォカインの好ましい源は好ま
しくは細菌、特に大腸菌の遺伝子工学的に変見られた細
胞の培養物である。
の他の霊長類細胞の培養物からまたは遺伝子工学的に変
えられた細胞の培養物から単離されうる。リンフォカイ
ンまたは修飾されたリンフォカインの好ましい源は好ま
しくは細菌、特に大腸菌の遺伝子工学的に変見られた細
胞の培養物である。
本発明による抽出法にとって、好ましくは４個までの炭
素原子を含有する低級脂肪族カルボン酸１００チまでを
含有する溶媒相が適当なことが判明した。特に適当な抽
出相は低級アルカン酸好ましくは酢酸を含有するもので
ある。代表的な抽出剤は純粋な脂肪族カルボン酸または
、このカルボン酸ならびに水、アセトニトリルおよび／
または好ましくは４個までの炭素原子を有する低級脂肪
族アルコールを含有する溶媒混合物である。好ましいア
ルコールは飽和の一価または多価アルコール特にエタノ
ールのような（ｃｌ−ａ４）−アルカノールである。ア
ンモニアまたは揮発性有機アミン例えばトリエチルアミ
ン、モルホリンまたはピはリジンを添加することＫよシ
抽出混合物中の酸は緩衝されうる。
素原子を含有する低級脂肪族カルボン酸１００チまでを
含有する溶媒相が適当なことが判明した。特に適当な抽
出相は低級アルカン酸好ましくは酢酸を含有するもので
ある。代表的な抽出剤は純粋な脂肪族カルボン酸または
、このカルボン酸ならびに水、アセトニトリルおよび／
または好ましくは４個までの炭素原子を有する低級脂肪
族アルコールを含有する溶媒混合物である。好ましいア
ルコールは飽和の一価または多価アルコール特にエタノ
ールのような（ｃｌ−ａ４）−アルカノールである。ア
ンモニアまたは揮発性有機アミン例えばトリエチルアミ
ン、モルホリンまたはピはリジンを添加することＫよシ
抽出混合物中の酸は緩衝されうる。
Ｒプチドが記載された方法で一旦溶解されたならば、こ
れは非極性の固定相でのクロマトグラフィー、好ましく
は多孔性のアルキルシリＡ。
れは非極性の固定相でのクロマトグラフィー、好ましく
は多孔性のアルキルシリＡ。
化されたか、アラルキルシリル化されたかまたはアリー
ルシリル化されたシリカゲルでのＩＩＩＦＩＩｃにより
さらに精製されうる。特に好ましい固定相は０４−０１
８のアルキル基またはフェニルを結合した高多孔性の二
酸化珪素（細孔寸法２５０〜３５０Ｘ％好ましくは３０
０〜３３０Ｘ） −ｔ’ある。
ルシリル化されたシリカゲルでのＩＩＩＦＩＩｃにより
さらに精製されうる。特に好ましい固定相は０４−０１
８のアルキル基またはフェニルを結合した高多孔性の二
酸化珪素（細孔寸法２５０〜３５０Ｘ％好ましくは３０
０〜３３０Ｘ） −ｔ’ある。
溶離剤としては例えばａ）低級アルキルシアン化物（好
ましくは４個までの炭素原子を有する本の、特にアセト
ニトリル）、ｂ）低級脂肪族の、先に定義されたような
アルコール（好ましくはｎ−プロ・ぐノール）またはＣ
）例えばトリフルオロ酢酸またはテトラエチルアンモニ
ウムホスヘートで−１〜７に調整されたそれらの混合物
、の勾配を有する水性系が用いられる。
ましくは４個までの炭素原子を有する本の、特にアセト
ニトリル）、ｂ）低級脂肪族の、先に定義されたような
アルコール（好ましくはｎ−プロ・ぐノール）またはＣ
）例えばトリフルオロ酢酸またはテトラエチルアンモニ
ウムホスヘートで−１〜７に調整されたそれらの混合物
、の勾配を有する水性系が用いられる。
組換えＩＬ−２の場合この方法で一段階で純度８０〜９
５チで収量約８０〜９０チが達成されうる。
５チで収量約８０〜９０チが達成されうる。
本発明による方法はリンク才力イン特にヒトＩＬ−２の
アミノ酸配列を有するもの、および修飾されたリンフォ
カイン特にヒトＩ：［、−２のアミノ酸配列の部分を有
するものの単離および精製に適する。
アミノ酸配列を有するもの、および修飾されたリンフォ
カイン特にヒトＩ：［、−２のアミノ酸配列の部分を有
するものの単離および精製に適する。
修飾されたリンフォカインには
ａ）１個またはそれ以上のアミノ酸を他の、遺伝的にコ
ードされうるアミノ酸により変換する、および／または ｂ） Ｎ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸を欠
落させる、または ｃ） Ｎ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコー
ドされうるアミノ酸が付加的に存在する、および／ｌた
は ｄ）σ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸が欠落す
るか、ｆたは ｅ） Ｏ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコー
ドされうるアミノ酸が付加的に存在する、ことによりそ
のアミノ酸配列が修飾されている生物学的に活性なはプ
チド、好ましくは工Ｌ−２配列を有するはプチドが包含
されることが理解されるべきである。
ードされうるアミノ酸により変換する、および／または ｂ） Ｎ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸を欠
落させる、または ｃ） Ｎ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコー
ドされうるアミノ酸が付加的に存在する、および／ｌた
は ｄ）σ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸が欠落す
るか、ｆたは ｅ） Ｏ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコー
ドされうるアミノ酸が付加的に存在する、ことによりそ
のアミノ酸配列が修飾されている生物学的に活性なはプ
チド、好ましくは工Ｌ−２配列を有するはプチドが包含
されることが理解されるべきである。
前記リンフォカインおよび修飾されたす／７オカインは
配列中の１個またはそれ以上のアミノ酸を例えば遺伝子
的にコードされ得ないアミノ酸に酵素により変換する（
例えばＬｙｅをＨｙ２に）および／ｉたけ例えば日ｃｈ
ｒ６ｄｅｒおよびＬｔｉｂｋｅ氏の「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｌｅｓＪ第１巻、ムｃａｄｓｍｉｃｐｒｅｓｓ出版、ニ
ューヨーク（１９６５年）Ｋ記載されているような生理
学的に受容しうる基で置換することによりさらに修飾さ
れうるう 修飾されたＩＬ−２は西ドイツ特許出願Ｐ３４１９９９
５刀号に提案されている。
配列中の１個またはそれ以上のアミノ酸を例えば遺伝子
的にコードされ得ないアミノ酸に酵素により変換する（
例えばＬｙｅをＨｙ２に）および／ｉたけ例えば日ｃｈ
ｒ６ｄｅｒおよびＬｔｉｂｋｅ氏の「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｌｅｓＪ第１巻、ムｃａｄｓｍｉｃｐｒｅｓｓ出版、ニ
ューヨーク（１９６５年）Ｋ記載されているような生理
学的に受容しうる基で置換することによりさらに修飾さ
れうるう 修飾されたＩＬ−２は西ドイツ特許出願Ｐ３４１９９９
５刀号に提案されている。
以下の実施例により本発明を説明するが本発明はそれら
に限定されるものではない。
に限定されるものではない。
実施例１
細菌の崩壊後に得られる凍結乾燥された沈降物を５０％
酢酸水溶液中にとシ、１０分間攪拌し遠心分離して透明
となしそしてファイン炉遇する。
酢酸水溶液中にとシ、１０分間攪拌し遠心分離して透明
となしそしてファイン炉遇する。
実施例２
実施例１で得られるｐ液を直接半調製用取ムｔ−（１＠
−ＩＦｉｄｅｐｏｒｅカラム（粒子寸法１０ ｐｍ 、
直径１５１１％長さ２５３）に適用する。カラム上に吸
着されたはプチドおよびタン７５り質はトリフルオロ酢
酸（ＴＦＡ） ／アセトニトリル（ＡＮ）勾配（２０分
間で３５１！緩衝液Ｂから８５チ緩衝液Ｂｊで）を用い
て毎分２−の流速で溶離したく緩衝液Ｂ−（Ｌ１％ ’
ｒＦＡ、ａｏｑ１Ｇ ＡＩ＞ヨび１９．９％ＨｚＯ）。
−ＩＦｉｄｅｐｏｒｅカラム（粒子寸法１０ ｐｍ 、
直径１５１１％長さ２５３）に適用する。カラム上に吸
着されたはプチドおよびタン７５り質はトリフルオロ酢
酸（ＴＦＡ） ／アセトニトリル（ＡＮ）勾配（２０分
間で３５１！緩衝液Ｂから８５チ緩衝液Ｂｊで）を用い
て毎分２−の流速で溶離したく緩衝液Ｂ−（Ｌ１％ ’
ｒＦＡ、ａｏｑ１Ｇ ＡＩ＞ヨび１９．９％ＨｚＯ）。
インターロイΦンー２はアセトニトリル約６４％で鋭い
ピークで溶出する。
ピークで溶出する。
実施例３
実施例１で得られたＦ液を調製用のＶｙｄａｃ［Ｆ］−
０１６−Ｗｉ４ｅｐｏｒｅカラム（細孔寸法３３０Ｘ、
粒子寸法１５〜２０μｍ１直径２倒、長さ３０α）に適
用しそして実施例２記載の溶離剤を用い流速毎分１２−
で溶離した。
０１６−Ｗｉ４ｅｐｏｒｅカラム（細孔寸法３３０Ｘ、
粒子寸法１５〜２０μｍ１直径２倒、長さ３０α）に適
用しそして実施例２記載の溶離剤を用い流速毎分１２−
で溶離した。
実施例４
実施例１で得られたＦ液を分析用のＢｉｏｒａｄ”−Ｈ
ｌｐｏｒｅ −ＲＦ ３１８カラム（細孔寸法３００Ｘ
、粒子寸法５μｍ％直径４■、長さ２５０ｍ）Ｋ適用し
そして実施例２記載の溶媒系を用い流速毎分１．５−で
溶離した。
ｌｐｏｒｅ −ＲＦ ３１８カラム（細孔寸法３００Ｘ
、粒子寸法５μｍ％直径４■、長さ２５０ｍ）Ｋ適用し
そして実施例２記載の溶媒系を用い流速毎分１．５−で
溶離した。
実施例２〜４におけるようにして得られた工Ｌ−２は高
度に純粋（９０％より良好）である。
度に純粋（９０％より良好）である。
２５〃ｆのｌｌｌ−２を実施例４の記載に従い再クロマ
トグラフィーすると、２４μＶが再び溶離された。
トグラフィーすると、２４μＶが再び溶離された。
これは収率約９５％に相当する。
組換え物質の活性を保持するために精製された工Ｌ−２
１００μｆ当シヒト血清アルブミン約１岬を加えそして
凍結乾燥する。担体夕／・クク質は集合を阻止し、溶解
が容易となり、従って生物学的活性が保持される。
１００μｆ当シヒト血清アルブミン約１岬を加えそして
凍結乾燥する。担体夕／・クク質は集合を阻止し、溶解
が容易となり、従って生物学的活性が保持される。
実施例５
酢酸およびｎ−ブタノールまたはプロピレングリコール
の混合物を用いるＩＬ−２の抽出ＩＬ−２を含有する微
生物をフレンチプレスまたは同様の装置を介する減圧シ
ョックにより溶解させた。ホモジネートを遠心分離し、
Ｒレットを…７．０の（１１ｍ燐酸塩緩衝液で１回洗い
そして次に凍結乾燥した。
の混合物を用いるＩＬ−２の抽出ＩＬ−２を含有する微
生物をフレンチプレスまたは同様の装置を介する減圧シ
ョックにより溶解させた。ホモジネートを遠心分離し、
Ｒレットを…７．０の（１１ｍ燐酸塩緩衝液で１回洗い
そして次に凍結乾燥した。
膜の断片、すべての不溶性タンパク質および比較的小規
模の緩衝塩を含有するこの最初に凍結乾燥されたはレッ
ト各１０ｗｑを酢酸、ｎ−ブタノールまたはプロピレン
グリコールおよび水からなる穐々の混合物１ｍ中に懸濁
した。
模の緩衝塩を含有するこの最初に凍結乾燥されたはレッ
ト各１０ｗｑを酢酸、ｎ−ブタノールまたはプロピレン
グリコールおよび水からなる穐々の混合物１ｍ中に懸濁
した。
１分間撮盪したのち試料を遠心分離しそして上澄み液の
一部分を分析用Ｂｉｏｒａｄ ＲＰ ３１８Ｈ１ｐｐＯ
ｒｅ■−ＨＰＬＣ用カラ用土ラム上記載したようにして
クロマトグラフィーした。
一部分を分析用Ｂｉｏｒａｄ ＲＰ ３１８Ｈ１ｐｐＯ
ｒｅ■−ＨＰＬＣ用カラ用土ラム上記載したようにして
クロマトグラフィーした。
１．５０チ酢酸 α０
１２．６０％ 〃
α０５４五７０チ 〃
α１１０４．５０チ 〃 ＋１０’ｌ
ｎ−ブタノール １０７６５．６０％ 〃＃
＃ α１２４６．７０チ Ｉ
ｌ ｊＦ α１３８
Ｚ５０チ ＃ ２０チ ｌ
α１５６ａ６０チ 〃〃〃 α１
５６９７０％ 〃 Ｉ Ｉ
α２０６１０．５０チ Ｉ ＋１０チ プロ
ピレングリコール （ＬＯ４５１１，６０％
Ｉ 〃 〃 α
０６９１２．７０チ Ｉ Ｉ
Ｉ α１４４抽出容量を減少さ
せるとＩＩ、−２／不純物の比率に劇的な変動を伴うこ
となく抽出された工Ｉ、−２の濃度がほとんど直線状に
増大する。
１２．６０％ 〃
α０５４五７０チ 〃
α１１０４．５０チ 〃 ＋１０’ｌ
ｎ−ブタノール １０７６５．６０％ 〃＃
＃ α１２４６．７０チ Ｉ
ｌ ｊＦ α１３８
Ｚ５０チ ＃ ２０チ ｌ
α１５６ａ６０チ 〃〃〃 α１
５６９７０％ 〃 Ｉ Ｉ
α２０６１０．５０チ Ｉ ＋１０チ プロ
ピレングリコール （ＬＯ４５１１，６０％
Ｉ 〃 〃 α
０６９１２．７０チ Ｉ Ｉ
Ｉ α１４４抽出容量を減少さ
せるとＩＩ、−２／不純物の比率に劇的な変動を伴うこ
となく抽出された工Ｉ、−２の濃度がほとんど直線状に
増大する。
１０■ｌｄ ｔｆｌＲＢ＄ｉＬ ７０％ 特 ＋２
ａｓ ｎ−ブタノール ０．２１− ＩＴ、−２４
０１−７０チ 〃 ＋２０チ ＃ ０．８
９ ＃１０吟匂 ６０チ 〃 ＋３０チ
＃ ０，２ ＃２０号−６０％ ！ ３０チ
＃ ０．４４７Ｆ５０号−６０チ 〃
３０チ ＃ １．０６＃負荷人工物を無視す
る場合全不純物に関連したＸＬ−２ピークのチは３０〜
４０チにある。
ａｓ ｎ−ブタノール ０．２１− ＩＴ、−２４
０１−７０チ 〃 ＋２０チ ＃ ０．８
９ ＃１０吟匂 ６０チ 〃 ＋３０チ
＃ ０，２ ＃２０号−６０％ ！ ３０チ
＃ ０．４４７Ｆ５０号−６０チ 〃
３０チ ＃ １．０６＃負荷人工物を無視す
る場合全不純物に関連したＸＬ−２ピークのチは３０〜
４０チにある。
特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名
２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）リンフォカインまたは修飾されたリンフォカインを
細胞の崩壊物からの沈降物から有機溶媒相を用いて抽出
しそして場合により非極性の固定相でのクロマトグラフ
ィーによりさらに精製することからなるリンフォカイン
または修飾されたリンフォカインの単離および精製法。 ２）遺伝子工学により変えられた細胞の培養物の細胞の
崩壊物からプラスミド原性のリンフォカインまたは修飾
されたリンフォカインを単離および精製することからな
る前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３）遺伝子工学により変えられた細菌、好ましくは大腸
菌の培養物の細胞の崩壊物からリンフォカインまたは修
飾されたリンフォカインを単離および精製することから
なる前記特許請求の範囲第１または第２項記載の方法。 ４）抽出に使用される有機溶媒相が１００％までの低級
脂肪族カルボン酸を含有することからなる前記特許請求
の範囲第１〜３項のいずれか１項記載の方法。 ５）低級脂肪族カルボン酸、またはかかるカルボン酸な
らびに水、アセトニトリルおよび／または低級脂肪族ア
ルコールを含有する混合物が抽出に使用されることから
なる前記特許請求の範囲第１〜４項のいずれか１項記載
の方法。 ６）酢酸または酢酸を含有する混合物が使用されること
からなる前記特許請求の範囲第４または５項記載の方法
。 ７）抽出されたリンフォカインまたは修飾されたリンフ
ォカインを逆相クロマトグラフィー用に誘導体化された
シリカゲルでのＨＰＬＣにより精製することからなる前
記特許請求の範囲第１〜６項のいずれか１項記載の方法
。 ８）固定相として多孔性の、アルキルシリル化されたか
、アラルキルシリル化されたか、またはアリールシリル
化されたシリカゲルが使用されることからなる前記特許
請求の範囲第７項記載の方法。 ９）溶離剤として低級シアン化アルキル好ましくはアセ
トニトリル、または低級アルコール好ましくはｎ−プロ
パノール、またはｐＨ１〜７の範囲にあるそれらの混合
物、の勾配を有する水性系が用いられることからなる前
記特許請求の範囲第７または８項記載の方法。 １０）インターロイキン−２または修飾されたインター
ロイキン−２を単離および精製することからなる前記特
許請求の範囲第１〜９項のいずれか１項記載の方法。 １１）ヒトインターロイキン−２のアミノ酸配列を有す
るペプチドを単離および精製することからなる前記特許
請求の範囲第１〜１０項のいずれか１項記載の方法。 １２）（ａ）１個またはそれ以上のアミノ酸を他の、遺
伝的にコードされうるアミノ酸により変換する、および
／または （ｂ）Ｎ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸を欠落
させる、または （ｃ）Ｎ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコード
されうるアミノ酸が付加的に存在する、および／または （ｄ）Ｃ−末端で１個またはそれ以上のアミノ酸が欠落
するか、または （ｅ）Ｃ−末端で１個またはそれ以上の遺伝的にコード
されうるアミノ酸が付加的に存在する、 ことによりそのアミノ酸配列が修飾されている生物学的
に活性な修飾されたリンフォカイン、好ましくは生物学
的に活性な修飾されたインターロイキン−２を単離およ
び精製することからなる前記特許請求の範囲第１〜１０
項のいずれか１項記載の方法。 １３）配列中の１個またはそれ以上のアミノ酸が変換さ
れるかそして／または生理学的に受容しうる基で置換さ
れていることからなる前記特許請求の範囲第１１または
１２項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853500681 DE3500681A1 (de) | 1985-01-11 | 1985-01-11 | Verfahren zur isolierung und reinigung von lymphokinen |
| DE3500681.1 | 1985-01-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61165328A true JPS61165328A (ja) | 1986-07-26 |
Family
ID=6259590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61002356A Pending JPS61165328A (ja) | 1985-01-11 | 1986-01-10 | リンフオカインの単離および精製法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0187386B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61165328A (ja) |
| DE (2) | DE3500681A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JPH06140697A (ja) * | 1992-10-26 | 1994-05-20 | Fanuc Ltd | レーザ発振装置 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4405601A (en) * | 1981-05-21 | 1983-09-20 | Cancer Research Center | Extraction and purification of biologically active lymphokines |
| FI82266C (fi) * | 1982-10-19 | 1991-02-11 | Cetus Corp | Foerfarande foer framstaellning av il-2 -mutein. |
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| US4675387A (en) * | 1985-07-26 | 1987-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for extracting protein with organic acid |
-
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-
1986
- 1986-01-10 JP JP61002356A patent/JPS61165328A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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