JPS61162196A - セルロ−スの糖化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明はトルナフテートに対して耐性をもつ新規微生物
アクレモニウム・セルロリティカスＴＮ（Ａｃｒｅｒａ
ｏｎｉｕ＋ｗ　ｃｅｌｌｌｕｌｏｌｙＩｌ、ｉｃｕ＋　
ＴＮ）の生産するセルラーゼによセラルロースの処理方
法に関するものである。

〔従来技術〕

セルラーゼはセルロースをグルコース、セロビオースや
セロオリゴ糖に加水分解する酵素反応系を触媒する酵素
群の総称であり、その作用様式により、Ｃ４酵素（アビ
セラーゼ、セロビオヒドロラーゼ、　ＦＰアーゼ、エキ
ソ−β−グルカナーゼなどともいう）、Ｃｘ酵素（ＣＭ
Ｃアーゼ、エンド−β−グルカナーゼともいう）とβ−
グルコシダーゼ（セロビオースともいう）など種々の名
称で呼ばれる酵素が存在する。セルラーゼはこれら複数
の酵素が調和のとれた相互作用をすることにより、セル
ロースを、最終的にはその構成種であるグルコースにま
で分解する。

近年、セルラーゼはバイオ７ス資源の有効利用のｍ点か
ら注目され、盛んに研究されているが。

四りよく研究されてきた、トリコデルマ・レー隻イ（Ｔ
ｒｅｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ）、トリコデルマ
・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｒｉｄｅ）や
アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ペニシ
リウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属などの微生物によ
るセルラーゼの生産は、その生産能力が充分でなく、ま
た、セルラーゼ自体の分解力も充分でないため、セルロ
ースを完全にグルコースまで分解することができず、セ
ロビオースやセロオリゴ糖を多量に生成残存するなどの
問題があった。

本発明者らは、結晶性セルロースに対する分解力が優れ
、且つグルコースの糖化能力の優れたセルラーゼ生産菌
を求めて、広く自然界から微生物の検索を行ってきた結
果、土壌中より分離し、アクレモニウム・セルロリティ
カス（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕ＋ｓ９＋ｄｌｌｕｌｏｌｙｔ
ｉｃｕｇ）と同定した糸状菌の生産するセルラーゼが結
晶性セルロースに対する分解力が強Ｑｉこと、またこの
酵素はβ−グルコシダーゼ活性が、従来よく知られてい
るセルラーゼ生産菌に比べ著しく強いため、セルロース
を、殆んど完全にグルコースにまで分解できる、極めて
糖化性の優れた酵素であることを認め、特許出願した（
特許出願番号昭５８−３８４３２）。しかし、セルラー
ゼの生産能は充分でないため、セルロースの糖化に使用
できるような価格でセルラーゼを製造することはできな
かった。

〔目　　的〕

そこで、この微生物によるセルラーゼの生産能を高める
ための微生物の改良方法について種々検討を行なってき
た結果、　ＮＴＧにトロソグアニジン）処理またはＵＶ
（紫外線）処理した突然変異株の中から、トルナフテー
ト（ｔｏｌｎａｆｔａｔｅ、（ｍ、Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙ
ｌｔｈｉｏｃａｒｂａｎｉｌｉｃ　　ａｃｉｄ　　０−
２−ｎａｐｈｔｈｙｌ　　ｅｓｔｅｒ））に対する耐性
により選択した変異株（Ａｃｒｅｎ＋ｏｎｉｕｍｃｅｌ
ｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ　ＴＮと命名）が、セルラーゼ
生産能が単位培地当り約３倍に増強していることを認め
た。そして、この酵素を用い、セルロースの糖化を行な
ったところ、親株の培養液に対し、約１／３カ使用量で
、セルロースをほぼ完全にグルコースｌで分解できるこ
とを認めた。

第１表はＡｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔ
ｉｃｕｓの親株と’ＴｈＮ−株によるセルラーゼ生産能
の比較の一例を示している。

第１表 表から明らかなように、トルナフテート耐性突然変異Ｔ
Ｎ株のセルラーゼ生産能は、親株に比ペアビセラーゼと
ＣＭＣアーゼは約３倍に、モしてβ−グルコシダーゼは
約２倍に、顕著に増強されたものであった。

Ａｃｒｅｎ＋ｏｎｉｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕ
ａの生産するセルラーゼは、特にβ−グルコシダーゼの
活性が太きいた棒１社、セルロースを完全にグルコース
にまで分解・すや酵素である特徴があるが、これを工業
的に生鯵シ、利用するためには、特に、Ｃ１酵素である
アビセラーゼやＣｘ酵素であるＣＭＣアーゼの生産能を
向上することが要求されている。しかるに訂Ｇ処理など
による突然変異菌の中からトルナフテートに対する耐性
から選択されたトルナフテート耐性株の生産するセルラ
ーゼは、特に、アビセラーゼとＣＭＣアーゼが強く増強
されたものであり、親株のセルラーゼとは質的に異なる
ものであるが。

セルロースの糖化においては、アビセラーゼ活性または
ＣＭＣアーゼ活性を基準としてセルロースに作用させた
とき、セルロースをほぼ完全にグルコースに変換できる
ものであった。

本発明はこのような知見にもとづいてなされたものであ
る。

〔構　　成〕

すなわち、本発明は、トルナフテートに対し耐性をもつ
新規微生物アクレモニウム・セルロリティカス（Ａｃｒ
ｅｍｏｎｉｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）ＴＮ
をセルロースを含む培地で培養し、培養物から得られる
セルラーゼをセルロースまたはセルロース含有物に作用
させることを特徴とするセルロースの糖化方法片側する
ものである。

μ下に１本発明の内容を更に具体的に示す。

４発明において使用されるトルナフテート耐性株は以下
のようにして造成され。

アクレモニウム・セルロリティカス（ＦＥＢＭＰ　−６
８６７）をツアペック（Ｃｚａｐｅｋ）培地（ＮａＮｏ
　３０．３％、　Ｋ２ＨＰＯ４０，１％。

Ｍｇ５０４・７Ｈｚｏ　５Ｘ１０−　”　％、にＣＱ　
　５ＸＩＯ−”　％。

ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１ＸＩＯ−３％、グルコース１％
）に懸濁し、これにＮＴＧ　にトロソグアニジン）を０
〜３×１０−２％濃度となるように加え、室温で０．５
〜３時間インキュベート後、遠心分離して菌体を回収し
、Ｃｚａｐｅｋ培地で充分洗滌後、同培地に懸濁した。

該菌懸濁物の一部を４Ｘ１０−”〜２　Ｘ　１０−″５
％トルナフテートを含むＣｚａｐｅｋ平板培地（ＮａＮ
Ｏ３０，３％、Ｋ２ＨＰＯａ　０．１％、ＭｇＳＯ４−
７Ｈ２０５Ｘ１０−　”％、Ｋ（１５Ｘ１０−”％、Ｆ
ｅＳＯ４４Ｈ２０ｔｘｔｏ−３％、グルコース１％、寒
天１．５％、ストレプトマイシンＢｘｔｏ−”％、　ヘ
ニシＩＪ　ンＧ２．５Ｘ１０−　”　％、ｐＨ”６ｂｔ
４）に散布し、３０℃でインキュベートした。生育しヤ
くるトルナフテート耐性株を上記同組成の斜面培地に釣
菌し保存した。このようにして得られたトルナフテート
耐性株中に、高頻度でセルラーゼ生産増強味が認められ
た。なお、４Ｘ１０−”〜ｌＸｌ０−”　％のトルナフ
テートを含むＣｚａｐｅｃｋ平板培地上に親株および耐
性株の菌体懸濁液を散布して、３０℃で培養したところ
、耐性菌は比較的良好に生育するが、親株は全く生育が
認められなかった。

本面の菌学的性質は親株に対して認識できるほどの差異
は認められないが、以下にＴＮ株の菌学的性質の概要を
記載する。

生育二麦芽エキス寒天培地上では生育は速く。

３０℃７日で直径７０ｍ＋ｓに達する。集落は最初白色
で後にやや黄色味をおびる。気生菌糸はゆるく盛り上が
り羊毛状を呈し１時に編状の菌糸束を形成する。培養後
期には集落裏面は桃褐色ないし赤褐色を呈する。ツアペ
ック寒天培地上でもほぼ同様の生育を示すが気生菌糸の
盛り上がりはより少い。

生育ｐＨ範囲は３．５〜６．０で最適ｐＨは４付近、生
育温度範囲は１５℃〜４３℃で、最適生育温度は３０℃
付近’（４る。

嶋態：菌糸の直径は０．５〜２．５μｍ、無色で菌糸’
ｍ−４隔壁が認められる。また、菌糸表面は滑面である
。

分生子：分生子形成能は非常に不安定でツアペック寒天
および麦芽エキス寒天培地による継代培養により容易に
消失した０分離時における観察では、分生子柄は気化菌
糸側面より突出し、無色である。

分生子番主亜球形（２，５〜５Ｘ２〜４．５μｍ）で滑
面、無色で連鎖は非常にゆるく分散しやすい。

本菌株はアクレモニウム・セルロリティカスＴＮ（Ａｃ
ｒｅｉ＋ｏｎｉｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ　
ＴＮ）微工研条寄第６８５号として寄託されている。

本面により生産されるセルラーゼの性質を以下に記載す
る。

（Ａ）アビセラーゼの酵素的性質 （１）作用 セルロース末、アビセル、脱脂綿など結晶性のｉ１１不
ｍ　性セルロースに対し作用してグルコース、ψ６１ビ
オース等の還元糖を生成する。

（２）作用ｐＨ範聞及び最適作用ｐ）１本酵素の作用ｐ
Ｈ範囲は２〜８．最適作用ｐＨは約４．５に認められた
。

（３）安定ｐＨ クエン酸−リン酸塩緩衝液の下で４５℃で２０時間放置
したときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜約６であった。

（４）作用温度範囲及び最適作用温度 本酵素は約９０’Ｃまでの高温に作用するが、１％アビ
セル、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）（Ｆ）下テ
ｌｏ分間反応させたときの最適作用温度は約６５℃に認
められた。

（５）熱安定性 本酵素を０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）の下で、
各温度で１０分間加熱処理した結果、本酵素は約６０”
Ｃまでの温度ではほとんど失活せず、６５℃、１０分間
の加熱で約５０％、そして７０℃、１ｏ分間の加熱で約
８０％失活した。

（６）阻害剤 各種重金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオンおよ
び銅イオンにより強く阻害される。また、五−害剤であ
るパラクロルマーキュリ−ベンゾニーＣ＋によっても１
ｍＭで約８０％の阻害を受ける。

ｊｉｔＲ製法 本酵素は培養濾液からホロファイバー（アミコンＨＩ　
−Ｐ５）により脱塩濃縮してのち、　ＤＥＡＲ−セファ
ロース（ＣＬ　−６Ｂ）によるカラムクロマトグラフィ
ー（ＮａＣｊ２０→ＩＭグラジェント）と同カラムによ
る再クロマトグラフ　イ（ＮａＣ１４０−＋０．６Ｍ）
　ニより、精製することができる。

（８）分子量 Ｂｉｏ−ｇｅｌ（Ａ　０．５ｍ）カラムによるゲル濾過
法により測定した分子量は約１４０，０００であった６
（９）活性測定法 ０．１Ｍ酢酸緩衝液に０．５％濃度のアビセル懸濁物（
ｐＨ４，５）０゜５ｍＱに適量の酵素液を加え、蒸留水
で全量１．０＋＋Ｑとし、５０℃で反応を行った。そし
て生成する還元糖はソモギー・ネルラン法により測定り
群・ 二の条件で、１分間に１μｍｏｌのグルコースに相＝Ｓ
する還元力を生成する酵素量を１単位とした。

ＣＢ）ＣＭＣアーゼの酵素的性質 （１）ＣＭＣアーゼの多成分性 ＣＭＣアーゼはディスク電気泳動的に少くとも４成分に
分離され、それぞれは分子量と等電点により区別される
。　ＣＭＣアーゼＩは分子量約１６０，０００で等電点
５゜０８、以下同様に■は約１６０，０００．４．９５
、■は約１２０，０００．４．６０．　ｆＶは約１２０
，０００．４．４８であり、これらアイソザイムの複合
物よりＣＭＣアーゼは成っている。

（２）カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶
性セルロース誘導体に作用し、これをグルコース及びセ
ロビオース等に分解する成分（ＣＭＣアーゼ■および■
）とグルコースを極くわずかしか生成せずセロビオース
以上のセロオリゴ糖に分解する作用を持つ成分（ＣＭＣ
アーゼ■、■）が存在する。

（３）作用ＰＨ範囲及び最適作用ｐＨ ＣＭＣアーゼ複合体の作用ｐｉ（範囲は、はぼ２〜８に
わたり最適作用ｐＨは約４．５に認められた。

（４）安定ＰＨ クエン酸−リン酸塩緩衝液の下で４５℃で２０時間放−
シたときの側Ｃアーゼ複合体の安定ｐＨ範囲は柿、￥ｂ
〜約６であった。

（旧作用温度範囲及び最適作用温度 このＣＭＣアーゼ複合体は約９０℃までの高温に作用す
るが、１％ＣＭＣ，０，０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ，５）
の下で１０分間反応させたときの最適作用温度は約６５
℃に認められた。

（６）熱安定性 本酵素を０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）の下で、
各温度で１０分間加熱処理した結果、本酵素は約６０℃
までの温度ではほとんど失活せず、６５℃、１０分間の
加熱で約４０％、そして７０℃、　１０分間の加熱で約
７０％失活した。

（７）阻害剤 各種金属イオンのうちで１ｍに以上の水銀イオンおよび
銅イオンにより強く阻害される。

（８）精製法 ・−酵素は培養濾液からホロファイバー（アミコシ梓゛
ム＝Ｐ５）により脱塩濃縮してのち、ＤＥＡＥ−セファ
ｑＳ−ス（ｃｔ、　−６Ｂ）によるカラムグロマトグラ
フィー（ＮａＣＱ　Ｏ→１にグラジェント）と同カラム
による再クロマトグラフィー及びクロマトフオーカシン
グにより各成分に精製できる。

（９）活性測定法 ０．１Ｍ酢酸緩衝液に溶解させた１％ＣＭＣ溶液（ｐＨ
４，５）０．５ｍＱに、適量の酵素液を加え、蒸留水で
全量１．０＋＋＋Ｑとし、５０℃で反応を行った。そし
て、生成する還元糖はソモギー・ネルラン法により測定
した。

この条件で、１分間に１μｍｏｌのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を１９１位とした。

（Ｃ）　β−グルコシダーゼの酵素的性質（１）作用 サリシン、セロビオース、セロトリオース、セロテトラ
オース１．セロペンタオース、セロヘキサオースのよう
なセロオリゴ糖に作用して、これをグルコースに分解す
る。また、本酵素はアビセルのような高分子セルロース
にも作用するがＣＭＣやＨＥＣ（ヒドロキシエチルセル
ロース）にはほとんど作用しない。サリシン、セロビオ
ース、セロトリオ←・本、セロテトラオース、セロペン
タオース及びヤ゛圓ヘキサオースに対するＫｍ値は、そ
れぞれ３ｐ２．２６．１．１９．０．８２．０．５２そ
して０．５１ｍＭであった。

（２）作用ＰＨ範囲及び最適作用ｐＨ 本酵素の作用ｐＨ範囲は２〜８、最適作用ＰＨは約４．
５に認められた。

（３）安定ｐＨ クエン酸−リン酸塩緩衝液の下で４５℃で２０時間放置
したときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜約５であった。

（４）作用温度範囲及び最適作用温度 本酵素は約９０°Ｃまでの高温に作用するが、１％サリ
シン、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）の下で１０
分間反応させたときの最適作用温度は約６５℃に認めら
れた。

（５）熱安定性 ０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）の下で、各温度で
１０分間加私娼理した結果、本酵素は約６５℃までの高
温では↓とんど失活せず、７０℃、１０分間の加熱で約
４０　％！、活し、そして８０℃、１０分間の加熱で９
０％以上失活した。

（６）阻害剤 各種重金属イオンのうち１ｏＭ以上の水銀イオンおよび
銅イオンにより強く阻害される。また、グルコース−δ
−ラクトンは基質に対して拮抗阻害剤として作用する。

（７）精製法 本酵素は培養濾液からホロファイバー（アミコンＨＩ　
−Ｐ５）により脱塩濃縮したのち、　ＤＥＡＥ−セファ
ロース（ＣＬ　−６Ｂ）によるカラムクロマトグラフィ
ー（ＮａＣＱＯ→ＩＭグラジェント）とクロマトフオー
カシング（ｐＨ６→４）とＢｉｏ−ｇｅｌ（Ａ　０．５
ｍ）によるゲル濾過により、電気泳動的に均一なまでに
精製することができる。

（８）分子量 Ｂｉｏ−ｇｅｌ（Ａ　０．５ａ＋）を用いるゲル濾過法
により測定した分子量は約２４０　、０００であった。

（９）活性測定法 １．１Ｍ酢酸緩衝液に溶解させた１％サリシン溶液ｐｍ
　４．５）０．５ｍ　Ｑに適量の酵素液を加え、蒸留水
で３１、ＯｍＱとし、５０℃で反応を行った。そして生
成するグルコースをソモギー・ネルラン法により測定し
た。

この条件で、１分間に１μｍｏｌのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を１単位とした。

アクレモニウム・セルロリティカスＴＮ株の培養は、炭
素源として、セルロース、アビセル、綿、バガス、小麦
越のような純セルロースまたはセルロース含有物が使用
され、これに窒素源として、硝酸塩、アンモニウム塩、
尿素のような無機窒素またはペプトン、酵母エキス、肉
エキス、大豆粕のような有機窒素源のいずれか、または
併用して使用する。更に、これに補足する培地原料とし
て、マンガン、亜鉛などの金属塩などが添加された培地
で行われるが、この培地に対し、ベタインを０゜０１〜
１％程度添加する。培養は固体培養または液体培養のい
ずれでもよいが通常、２０〜４０℃で２〜１５日間好気
的に培養される。

セルラーゼは菌体外に生産される酵素であるので、液体
培養の場合、培養後、濾過または遠心分−シて得た除菌
液について、また、固体培養の場合は、培養後、水また
は適当な塩類溶液で抽出し左酵素液について、硫安また
は硫酸ナトリウムなどで沈澱させるか、あるいはアセト
ン、アルコールのような有機溶媒を添加してセルラーゼ
を沈澱させ、分離、乾燥して酵素粉末を得る。

本発明のセルラーゼ剤により、セルロースを糖化する反
応は、通常、　ｐＨ３〜７、望ましくはｐＨ４〜５、温
度は、通常３０〜６０℃で行なわれる。基質としては、
セルロース末、綿、アビセルのような純粋のセルロース
のみでなく、バガス、ナピャグラス、稲ワラ、麦ワラ、
モミガラなどのセルロース含有物も使用されるが、これ
ら植物原料は糖化に先立ち、あらかじめ、アルカリ処理
、爆砕処理、放射線処理などの前処理が行なわれる。基
質濃度は、出来るだけ高濃度の方がよく１通常５〜３０
％位で６卆われる。

次に、実施例により本発明の詳細な説明する。

実施例１ セルロース４％、Ｋ２ＨＰＯ４１，２％、バクトペプト
ン１％、にＮｏ３０．６％、尿素０．２％、ＫＣＱ　Ｏ
，１６％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１２％、　ＺｎＳ
Ｏ４・７Ｈ２０１ＸＩＯ−３％、ＭｎＳＯ４・７Ｈ２０
１ＸＩＯ−’％、　ＣｕＳＯ４・５）＋２０１ＸＩＯ−
３からなる培地（ｐｔ（４）を常法により殺菌後、アク
レモニウム・セルロリティカスＴＮ（ＦＥＲＭ　ＢＰ−
６８５）を接種し、３０℃で１０日間好気的に培養した
。培養後、遠心分離して得た上澄液について、生産され
たセルラーゼのアビセラーゼ、ＣＭＣアーゼ及びβ−グ
ルコシダーゼ活性を測定した。結果は第２表に示す通り
であった。

表−２ 表から明らかなように、トルナフテート耐性株（ＴＮ株
）のセルラーゼ生産能は親株に比べ、　ＣＭＣアーゼが
約３倍に、そして、アビセラーゼとβ−グルコシダーゼ
は約２倍に増大したものであった。

実施例２ セルロース原料としてＫＣフロック（ｗ−ｉｏｏ、山膓
国策パルプ製）を使用した。

ＫＣフロック各３ｇに、実施例１の方法により培養。

調製したセルラーゼを、アビセラーゼとして、１５単位
、３０　、ｑｔ位及び６０単位を加え、全量を水で１５
＋＋＋Ωとして、ｐＨ約５，５０℃で反応させた。反応
開始９５時間目に糖化液の一部をとり、還元糖をソモギ
ー・ネルラン法により、モして全糖はアンスロン法によ
り定量した。得られた結果を第３表に示す。

第３表 実施例３ セルロース原料としてＳｏ　Ｑ　ｋａ　Ｆ　Ｑ　ｏｃ（
ＢＶ　−２００、Ｊａｙａｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｃｏ、、
　Ｂｅｒｌｉｎ製）を原料として使用した。

５ｏｆｉｋａＦＱｏｃを０．５ｇとｔｇに、実施例１に
より調製されたセルラーゼを、アビセラーゼとして４０
単位／ｇ基質量加え、全量１０ｍＱとしＰＨ４，５、温
度５０℃で４８時間糖化した。得られた精液について還
元糖、グルコース量を測定した結果は第４表に示す通り
であった。

第４表 糖化率；　（還元糖）／（全糖）　ｘ　１００グルコー
ス含量；　（グルコース）／（還元糖）　Ｘ　１０Ｇ実
施例４ セルロース原料としてアルカリ膨潤セルロース＜１７．
５％ＮａＯＨにセルロース末を２５℃で４時間浸漬後、
水洗）を終濃度９．０，１８．０．２７．０％となるよ
うに反応液に懸濁し、実施例１により調製されたセルラ
ーゼをアビセラーゼとして、５単位／ｇ基質量加え、全
量を５ｒｍＱとし、ｐＨ４，５，温度５０℃で７２時間
糖化した。得られた粘液について還元糖量と全糖量を測
定した結果は第５表に示す通りであった。

第５表 （糖化率；（還元糖量）／（全糖）Ｘ１００）実施例５ セルロース含有物として、過酢酸により脱リグニン処理
した牧草のナピャグラスを、終濃度２，５．７％となる
よう反応液に懸濁し、実施例１により調製されたセルラ
ーゼを、アビセラーゼとして、２０単位／ｇ基質量加え
、全量を５ｍｇとして、　ｐＨ４，５、温度５０℃で２
４時間糖化した。得られた粘液について、還元糖量と全
糖量を測定した結果は第６表に示す通りであった。

第６表

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）トルナフテート耐性をもつアクレモニウム・セル
   ロリティカスＴＮ（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ｃｅｌｌｕ
   ｌｏｌｙｔｉｃｕｓＴＮ）を炭素源と窒素源を含む培地
   で培養し、培養物から得られるセルラーゼをセルロース
   またはセルロース含有物に作用させることを特徴とする
   セルロースの糖化法。