JPS61159162A - エンドトキシンの測定方法 - Google Patents
エンドトキシンの測定方法Info
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- JPS61159162A JPS61159162A JP28161684A JP28161684A JPS61159162A JP S61159162 A JPS61159162 A JP S61159162A JP 28161684 A JP28161684 A JP 28161684A JP 28161684 A JP28161684 A JP 28161684A JP S61159162 A JPS61159162 A JP S61159162A
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- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/82—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a precipitate or turbidity
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- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、被検液中のエンドトキシンの測定方法に関す
る。
る。
エンドトキシンは、発熱性物質（ハイロジェン）の代表
的なものであシ、エンドトキシンが混入した血液、輸液
、注射液が生体内に注入されると強い発熱やショックな
どの重篤な副作用を引き起すことが知られている。この
ため、注射液等の医薬品製造工程に於ては、原料水、洗
浄水中のエンドトキシン量を測定し、その混入を防ぐこ
とが必要不可欠になっている。また、超純水裂造模の機
能 。
的なものであシ、エンドトキシンが混入した血液、輸液
、注射液が生体内に注入されると強い発熱やショックな
どの重篤な副作用を引き起すことが知られている。この
ため、注射液等の医薬品製造工程に於ては、原料水、洗
浄水中のエンドトキシン量を測定し、その混入を防ぐこ
とが必要不可欠になっている。また、超純水裂造模の機
能 。
検査あるいは半導体製造用洗浄水の水質検査として、エ
ンドトキシンの測定が広く行なわれるようになっている
。
ンドトキシンの測定が広く行なわれるようになっている
。
近年、エンドトキシンの測定法として、リムルス・アメ
ーボサイト・ライセード（カブトガニ血球抽出成分、以
下ＬＡＬと略す。）がエンドトキシンと反応してゲル化
することが見出され、これを応用したエンドトキシンの
測定法が開発されている。この測定法は、試験管内で被
検液とＬＡＬ試薬を混合し、一定温度で一定時間放置し
た後、反応試験管を傾斜あるいは転倒し、試料がゲル化
しているか否かを目視で観察して濃度既知のエンドトキ
シン検体とＬＡＬ試薬との同様の反応結果との比較から
、被検液中のエンドトキシン陽性（ト）あるいは陰性（
−）を半定量的に捉えるものである。
ーボサイト・ライセード（カブトガニ血球抽出成分、以
下ＬＡＬと略す。）がエンドトキシンと反応してゲル化
することが見出され、これを応用したエンドトキシンの
測定法が開発されている。この測定法は、試験管内で被
検液とＬＡＬ試薬を混合し、一定温度で一定時間放置し
た後、反応試験管を傾斜あるいは転倒し、試料がゲル化
しているか否かを目視で観察して濃度既知のエンドトキ
シン検体とＬＡＬ試薬との同様の反応結果との比較から
、被検液中のエンドトキシン陽性（ト）あるいは陰性（
−）を半定量的に捉えるものである。
しかしながら、この判定方法は熟練を要すると共に、十
−判定基準が測定者の主観に依存するため、判定に個人
差が大きく出ること、判定限界が０．０５ｎｇ／−程度
で低濃度エンドトキシンの検出ができないこと等の欠点
があった。
−判定基準が測定者の主観に依存するため、判定に個人
差が大きく出ること、判定限界が０．０５ｎｇ／−程度
で低濃度エンドトキシンの検出ができないこと等の欠点
があった。
一方、合成基質として発色性ペプチド誘導体を用い、該
基質がＬＡＬと試料中のエンドトキシンとにより水解さ
れて発色する呈色度を比色定量することによ）エンドト
キシン濃度を定量する測定法も開発されているが、測定
範囲が数ｐｇ ／ ｍｌから１１００ｐ／−と狭いこと
、測定操作が極めて繁雑であること等の理由により、未
だ日常検査に導入されるまでには到っていない。
基質がＬＡＬと試料中のエンドトキシンとにより水解さ
れて発色する呈色度を比色定量することによ）エンドト
キシン濃度を定量する測定法も開発されているが、測定
範囲が数ｐｇ ／ ｍｌから１１００ｐ／−と狭いこと
、測定操作が極めて繁雑であること等の理由により、未
だ日常検査に導入されるまでには到っていない。
本発明者らは、上述した如き従来法の欠点を解決すべく
鋭意研究を重ねた結果、被検液中のエンドトキシンによ
るＬＡＬのゲル化を客観的基準で低濃度まで検出するこ
とができ、低濃度から高濃度迄の広い範囲にわたるエン
ドトキシン濃度の定量を精度よく且つ極めて容易に実施
し得る測定方法を提供する本発明に到達した。
鋭意研究を重ねた結果、被検液中のエンドトキシンによ
るＬＡＬのゲル化を客観的基準で低濃度まで検出するこ
とができ、低濃度から高濃度迄の広い範囲にわたるエン
ドトキシン濃度の定量を精度よく且つ極めて容易に実施
し得る測定方法を提供する本発明に到達した。
即ち、本発明は、エンドトキシンゲル化試薬と被検液と
を混合した試料液を保持するキュベツトに光線を照射し
、時間ｔｉｃ於ける試料液からの透過光量Ｉ （ｔ）と
反応の進行により減少を開始する以前の該試料液からの
透過光量の初期値Ｉｏとの比率を求め、該比率が７５チ
以上９７％以下の範囲にある一定値に到達した時点を前
記試料液のゲル化時点と・判定することを特徴とするエ
ンドトキシンの測定方法および前記試料液の混合時点か
ら該ゲル化判定時間迄を前記試料液のゲル化時間として
求め、予め求めたエンドトキシン濃度と該ゲル化時間と
の関係に基づいて被検液中のエンドトキシン濃度を求め
ることを特徴とするエンドトキシンの測定方法の発明で
ある。
を混合した試料液を保持するキュベツトに光線を照射し
、時間ｔｉｃ於ける試料液からの透過光量Ｉ （ｔ）と
反応の進行により減少を開始する以前の該試料液からの
透過光量の初期値Ｉｏとの比率を求め、該比率が７５チ
以上９７％以下の範囲にある一定値に到達した時点を前
記試料液のゲル化時点と・判定することを特徴とするエ
ンドトキシンの測定方法および前記試料液の混合時点か
ら該ゲル化判定時間迄を前記試料液のゲル化時間として
求め、予め求めたエンドトキシン濃度と該ゲル化時間と
の関係に基づいて被検液中のエンドトキシン濃度を求め
ることを特徴とするエンドトキシンの測定方法の発明で
ある。
本発明では、試料の透過光を測定するため、例えば第１
図に示す光学系を使用することができる。
図に示す光学系を使用することができる。
即ち、測定用キーぺ、ト１（通常、内径６■から内径１
２ｍの範囲のものを使用。）内に保持された、被検液と
ＬＡＬ試薬とを混合した試料液２（通常、被検液０．１
１ｎｔとＬＡＬ試薬０．１ｍｌ１或いはしれる。試料液
２を通過した光線は、絞り４を通り光電検出器６で透過
光量に対応する電気量に変換される。ここで光源５は、
例えばＬＥＤ（発光ダイオード）、タングステンランプ
等の発光素子であり、光電検出器６は、例えばフォトダ
イオード（光電セル等の受光素子でよい。光電検出器６
で検知された透過光量Ｉ （ｔ）は、被検液とＬＡＬ試
薬とを混合した後の反応時間ｔに対して、第２図に示す
様な経時変化を示す。即ち、反応初期の透過光量がほぼ
一定の初期値Ｉｏを示すａの段階、次いで透過光量Ｉ
（ｔ）が急激に減少するｂの段階、最後にＩ （ｔ）が
ほとんど変動のない一定値を示すＣの段階、以上３つの
段階を経て試料はゲル化する。本発明者等は、このｂの
段階が試料内でゲル化が急速に進行している状態である
こと、また、Ｃの段階に到った試料液が従来の目視測定
でゲル化反応陽性と判定される状態であること、更に反
応開始からｂの段階およびＣの段階へ到達する迄の所要
時間が被検液中のエンドトキシン濃度に相関することト
キシンの測定方法を完成するに到った。
２ｍの範囲のものを使用。）内に保持された、被検液と
ＬＡＬ試薬とを混合した試料液２（通常、被検液０．１
１ｎｔとＬＡＬ試薬０．１ｍｌ１或いはしれる。試料液
２を通過した光線は、絞り４を通り光電検出器６で透過
光量に対応する電気量に変換される。ここで光源５は、
例えばＬＥＤ（発光ダイオード）、タングステンランプ
等の発光素子であり、光電検出器６は、例えばフォトダ
イオード（光電セル等の受光素子でよい。光電検出器６
で検知された透過光量Ｉ （ｔ）は、被検液とＬＡＬ試
薬とを混合した後の反応時間ｔに対して、第２図に示す
様な経時変化を示す。即ち、反応初期の透過光量がほぼ
一定の初期値Ｉｏを示すａの段階、次いで透過光量Ｉ
（ｔ）が急激に減少するｂの段階、最後にＩ （ｔ）が
ほとんど変動のない一定値を示すＣの段階、以上３つの
段階を経て試料はゲル化する。本発明者等は、このｂの
段階が試料内でゲル化が急速に進行している状態である
こと、また、Ｃの段階に到った試料液が従来の目視測定
でゲル化反応陽性と判定される状態であること、更に反
応開始からｂの段階およびＣの段階へ到達する迄の所要
時間が被検液中のエンドトキシン濃度に相関することト
キシンの測定方法を完成するに到った。
本発明は、試料液が元々有している濁りや着色 □
に由来する透過光量の差を補正するため、透過光量Ｉ
（ｔ）と反応の進行により減少を開始する以前の透過光
量の初期値Ｉｏとの比率Ｒ（ｔ）を測定する点に・特徴
を有する。即ち、Ｒ（ｔ） ＝ ［： Ｉ （ｔ） ／
Ｉｏ ：１Ｘ１００〔チ〕により求めた該比率Ｒ（ｔ
）は、第３図に示す様にＩ （ｔ）と相似な挙動を示す
が、本発明では、ゲル化反応の進行の段階すに相当する
、Ｒ（ｔ）が７５チ以上９７チ以下の範囲に閾値Ｒｔｈ
を設定し、Ｒ（１）がＲｔｈに到達した時点を試料液の
ゲル化時点と判定する。又、試料液の混合時点からゲル
化判定時点に到達する迄の反応時間をゲル化時間Ｔｑと
して検知しこれを定量に使用する。
に由来する透過光量の差を補正するため、透過光量Ｉ
（ｔ）と反応の進行により減少を開始する以前の透過光
量の初期値Ｉｏとの比率Ｒ（ｔ）を測定する点に・特徴
を有する。即ち、Ｒ（ｔ） ＝ ［： Ｉ （ｔ） ／
Ｉｏ ：１Ｘ１００〔チ〕により求めた該比率Ｒ（ｔ
）は、第３図に示す様にＩ （ｔ）と相似な挙動を示す
が、本発明では、ゲル化反応の進行の段階すに相当する
、Ｒ（ｔ）が７５チ以上９７チ以下の範囲に閾値Ｒｔｈ
を設定し、Ｒ（１）がＲｔｈに到達した時点を試料液の
ゲル化時点と判定する。又、試料液の混合時点からゲル
化判定時点に到達する迄の反応時間をゲル化時間Ｔｑと
して検知しこれを定量に使用する。
尚、ＲｆはＩ （ｔ）が殆ど変動のない一定値を示すＣ
の段階に於けるＲ （ｔ）を示す。
の段階に於けるＲ （ｔ）を示す。
第４図は、エンドトキシン濃度とＲ（ｔ）の関係を試料
液の混合時点からの経過時間をパラメーターとしてプロ
ットしたものである。使用した試薬及び測定方法は下記
の通りである。
液の混合時点からの経過時間をパラメーターとしてプロ
ットしたものである。使用した試薬及び測定方法は下記
の通りである。
ＬＡＬ試薬： Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ 、Ｃａ
ｐｅ Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲル 化転倒法感度０．０５ ｎｇ／ｍｌ エントドキシｙ ： Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ Ｕ Ｋ Ｔ −Ｂ株（阪大微研）より精製。
ｐｅ Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲル 化転倒法感度０．０５ ｎｇ／ｍｌ エントドキシｙ ： Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ Ｕ Ｋ Ｔ −Ｂ株（阪大微研）より精製。
ＦＤＡリファレンスにて含量検
定。
測定方法二上記ＬＡＬ試薬およびエンドトキシンを夫々
注射用蒸留水（大塚裂薬（株） 製）で溶解し、各々０．１コずつを直径１０ｍｍの試験
管内で攪拌混合し透過 光量の変化を測定。
注射用蒸留水（大塚裂薬（株） 製）で溶解し、各々０．１コずつを直径１０ｍｍの試験
管内で攪拌混合し透過 光量の変化を測定。
図中Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆは各々経過時間５分、１０
分、２０分、３５分、６０分、１２０分を示している。
分、２０分、３５分、６０分、１２０分を示している。
第４図より、測定したすべての濃度でＲ（ｔ）はゲル化
に伴って低下し、高濃度試料はど早く低下を開始してい
ることが判る。又、Ｒ（ｔ）が時間の経過に対して殆ん
ど低下を示さなくなる最終値Ｒｊは濃度変化に対応する
顕著な差を示さず、エンドトキシン童の指標として適当
でないことはこの図からも明らかである。これに対し、
Ｒ（ｔ）がＲｆに到達する以前の値であるＲ ｔｈ（例
えば第４図に於てはＲ（ｔ）＝９５％をＲｔｈとして破
線を引いてあも）に到達したことを検出することにより
、広い濃度範囲にわたり試料液のゲル化の判定ができ、
また、Ｒｔｈに到達するまでの反応時間をゲル化時間Ｔ
９として測定することにより、広範囲のエンドトキシン
濃度が定量できることが判る。
に伴って低下し、高濃度試料はど早く低下を開始してい
ることが判る。又、Ｒ（ｔ）が時間の経過に対して殆ん
ど低下を示さなくなる最終値Ｒｊは濃度変化に対応する
顕著な差を示さず、エンドトキシン童の指標として適当
でないことはこの図からも明らかである。これに対し、
Ｒ（ｔ）がＲｆに到達する以前の値であるＲ ｔｈ（例
えば第４図に於てはＲ（ｔ）＝９５％をＲｔｈとして破
線を引いてあも）に到達したことを検出することにより
、広い濃度範囲にわたり試料液のゲル化の判定ができ、
また、Ｒｔｈに到達するまでの反応時間をゲル化時間Ｔ
９として測定することにより、広範囲のエンドトキシン
濃度が定量できることが判る。
Ｒ（ｔ）がＲ７に到達するまでの時間は用いるＬＡＬ試
薬の感度、キュベツトの形状等によって異なるので、本
発明に於ては、これらの点を考慮して、Ｒ（ｔ）の値に
ついてＲ（０）からＲｆの間で広い濃度範囲にわたり確
実にゲル化を検出できる７５チ以上９７チ以下の範囲に
於てゲル化検知の閾値Ｒｔｈを設定することとした。Ｒ
ｔｈを７５％よりも小さくした場合、例えばＲｔｈ＝７
０％とした場合にはゲル化を検出できず、検量線が得ら
れないか、或いは検量関係が得られる濃度範囲が例えば
エンドトキシン濃度ｋ度０．１〜１０ ｎｇ／＋ｄと非
常に狭められる。一方、Ｒｔｈを９７％よりも大きくと
った場合には、ＬＡＬ試薬と被検液とを混合した直後の
試料液内の揺動（対流）や気泡の動きによるＲ （ｔ）
の変動を誤ってゲル化と判定してしまう可能性がある。
薬の感度、キュベツトの形状等によって異なるので、本
発明に於ては、これらの点を考慮して、Ｒ（ｔ）の値に
ついてＲ（０）からＲｆの間で広い濃度範囲にわたり確
実にゲル化を検出できる７５チ以上９７チ以下の範囲に
於てゲル化検知の閾値Ｒｔｈを設定することとした。Ｒ
ｔｈを７５％よりも小さくした場合、例えばＲｔｈ＝７
０％とした場合にはゲル化を検出できず、検量線が得ら
れないか、或いは検量関係が得られる濃度範囲が例えば
エンドトキシン濃度ｋ度０．１〜１０ ｎｇ／＋ｄと非
常に狭められる。一方、Ｒｔｈを９７％よりも大きくと
った場合には、ＬＡＬ試薬と被検液とを混合した直後の
試料液内の揺動（対流）や気泡の動きによるＲ （ｔ）
の変動を誤ってゲル化と判定してしまう可能性がある。
従ってこのようなノイズによる誤検出を防止するための
ノイズ余裕度として３％が必要である。
ノイズ余裕度として３％が必要である。
即ち、本発明に於てはＲｔｈを７５チ以上、９７％以下
、よシ好ましくは８０チ以上、９５％以下の範囲一 の
一定値に設定することが必須構成要件である。
、よシ好ましくは８０チ以上、９５％以下の範囲一 の
一定値に設定することが必須構成要件である。
第５図は、同一被検液について、Ｒｔｈ ＝ ９５チを
設定し本発明の方法によりゲル化を判定した結果と、従
来の目視ゲル化転倒法によりゲル化を判定した結果を比
較したものである。尚、本発明の方法に於惣て使用した
試薬及び測定方法は、第４図に於けるそれと同じである
。第５図よυ明らかな如く、画法の判定結果はよく一致
している。従来のゲル化転倒法は６０分後の試料液のゲ
ル化状態について陽性（＋）あるいは陰性（−）の２値
判定を行うのみであるため、本発明による判定も一定の
測定時間Ｔｍ内に自動判定陽性（ＡＭＪ＋）あるいは自
動判定陰性 □（ＡＭＪ−）の２値判定を行なうよう
にした。
設定し本発明の方法によりゲル化を判定した結果と、従
来の目視ゲル化転倒法によりゲル化を判定した結果を比
較したものである。尚、本発明の方法に於惣て使用した
試薬及び測定方法は、第４図に於けるそれと同じである
。第５図よυ明らかな如く、画法の判定結果はよく一致
している。従来のゲル化転倒法は６０分後の試料液のゲ
ル化状態について陽性（＋）あるいは陰性（−）の２値
判定を行うのみであるため、本発明による判定も一定の
測定時間Ｔｍ内に自動判定陽性（ＡＭＪ＋）あるいは自
動判定陰性 □（ＡＭＪ−）の２値判定を行なうよう
にした。
従来法ではＲ（ｔ）がＲｆに到達した試料液のみを陽性
（＋）と判定できるのに対し、本発明によればＲ／到達
以前の早い段階で陽性判定を行なうことができる。即ち
、本実施例に於ては、Ｔｍ＝２５分であり、従来法の半
分以下の測定時間で同一の判定結果を得ることができた
。しかも、判定に際しては熟練を必要とせず、個人差の
無い客観的な結果を得ることができる。又、Ｔｍを延長
することで、従来法では判定不可能であった低濃度での
ゲル化を検出することもできる。
（＋）と判定できるのに対し、本発明によればＲ／到達
以前の早い段階で陽性判定を行なうことができる。即ち
、本実施例に於ては、Ｔｍ＝２５分であり、従来法の半
分以下の測定時間で同一の判定結果を得ることができた
。しかも、判定に際しては熟練を必要とせず、個人差の
無い客観的な結果を得ることができる。又、Ｔｍを延長
することで、従来法では判定不可能であった低濃度での
ゲル化を検出することもできる。
本発明は又、従来の測定法では実現不可能であった広い
測定範囲にわたる高精度の定量を可能とするものであり
、検出感度及び測定範囲は使用するＬＡＬ試薬の感度に
より異なるが、いずれの場合も従来法である目視ゲル化
転倒法で得られる感度よりもはるかに高く、又合成基質
を用いる比色法の測定範囲よシもはるかに広いダイナミ
ックレンジである。
測定範囲にわたる高精度の定量を可能とするものであり
、検出感度及び測定範囲は使用するＬＡＬ試薬の感度に
より異なるが、いずれの場合も従来法である目視ゲル化
転倒法で得られる感度よりもはるかに高く、又合成基質
を用いる比色法の測定範囲よシもはるかに広いダイナミ
ックレンジである。
以上述べた如く本発明は、試料液の透過光量の測定を独
自の構成によって行うことにより客観的で感度の良い迅
速なエンドトキシンの測定方法を提供するものであると
同時に、従来の測定法では実現不可能であった広い測定
範囲にわたる高精度の定量を簡便な操作で実現し得る優
れたエンドトキシンの測定方法を提供するものであり、
斯業に貢献するところ極めて犬である。
自の構成によって行うことにより客観的で感度の良い迅
速なエンドトキシンの測定方法を提供するものであると
同時に、従来の測定法では実現不可能であった広い測定
範囲にわたる高精度の定量を簡便な操作で実現し得る優
れたエンドトキシンの測定方法を提供するものであり、
斯業に貢献するところ極めて犬である。
以下に実施例を挙げて本発明の作用効果について更に詳
細に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定
されるものではなく、本発明の範囲内で各糧の具体例に
応用することができるものであることは言うまでもない
。
細に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定
されるものではなく、本発明の範囲内で各糧の具体例に
応用することができるものであることは言うまでもない
。
実施例１
以下の測定条件により、エンドトキシン濃度の測定を行
った。
った。
ＬＡＬ試薬： Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ
Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．０５ ｎｇ ／ａｔエントドキシ７
： Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｕ Ｋ Ｔ
−Ｂ株（阪大微研）より精製。
Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．０５ ｎｇ ／ａｔエントドキシ７
： Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｕ Ｋ Ｔ
−Ｂ株（阪大微研）より精製。
ＦＤＡリファレンスにて含量
検定。
測定方法；上記ＬＡＬ試薬およびエンドトキシンを夫々
注射用蒸留水（天場製薬（輿 製）で溶解し、各々０．１コずつを直 径１０簡の試験管内で攪拌混合し透 過光量の変化を測定。
注射用蒸留水（天場製薬（輿 製）で溶解し、各々０．１コずつを直 径１０簡の試験管内で攪拌混合し透 過光量の変化を測定。
第６図に、Ｒｔｈ＝９５％に設定した本実施例に於ける
ゲル化時間とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。
ゲル化時間とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。
第６図より明らかな如く、本実施例に於ては０．ＯＯ０
５ｎｇ鷹から１００ ｎｇ／ｍ迄、非常に広い範囲で良
好な検量関係が得られた。これは同一試薬を使って目視
ゲル化転倒法で得られる検出感度の１００倍の感度であ
シ、また、合成基質を用いる比色法の測定範囲の１００
０倍以上のダイナミックレンジである。
５ｎｇ鷹から１００ ｎｇ／ｍ迄、非常に広い範囲で良
好な検量関係が得られた。これは同一試薬を使って目視
ゲル化転倒法で得られる検出感度の１００倍の感度であ
シ、また、合成基質を用いる比色法の測定範囲の１００
０倍以上のダイナミックレンジである。
尚、本実施例に於て、Ｒｔｈ＝７０％とした場合には、
ゲル化を検出できず、検量線が得られない。
ゲル化を検出できず、検量線が得られない。
実施例２
実施例１と同じ測定条件で、実施例１の範囲内でエンド
トキシン濃度の異なる６種の試料液について、繰り返し
数１６でゲル化時間を測定した。ゲル化時間−ＩＦｋＴ
＠−１及び第６図の検量線を使って換算した濃度値の再
現性を表１に示す。
トキシン濃度の異なる６種の試料液について、繰り返し
数１６でゲル化時間を測定した。ゲル化時間−ＩＦｋＴ
＠−１及び第６図の検量線を使って換算した濃度値の再
現性を表１に示す。
表１より明らかな如く、水沫によりＴｒ、−のＣｖ値で
４．５チ以内、濃度値のＣｖ値で１５％以内という極め
て良好な結果が得られた。このように広範囲なエンドト
キシン濃度範囲にわたり、上述した高精度の定量測定を
行なうことは、本発明に係る技術開示以前に於ては実現
不可能であったが、本発明の方法により初めて、しかも
、目視ゲル化転倒法と同様の簡便な測定操作により実現
できるようになった。
４．５チ以内、濃度値のＣｖ値で１５％以内という極め
て良好な結果が得られた。このように広範囲なエンドト
キシン濃度範囲にわたり、上述した高精度の定量測定を
行なうことは、本発明に係る技術開示以前に於ては実現
不可能であったが、本発明の方法により初めて、しかも
、目視ゲル化転倒法と同様の簡便な測定操作により実現
できるようになった。
表 １
実施例３
以下の測定条件によりエンドトキシン濃度の測定を行っ
た。
た。
ＬＡＬ試薬： Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ
Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．０１ｎｇ／ｍｌ エンドトキシン；実施例１に同じ 測定方法；実施例１に同じ 第７図にＲｔｈ＝９５％に設定した本実施例に於けるゲ
ル化時間とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。第
７図より明らかな如く、本実施例に於てはエンドトキシ
ンｌｋ度０．０００１ｎｇ／７！から１００ ｎｇ／ｍ
７！迄、検量関係が認められた。
Ｃｏｄ社製ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．０１ｎｇ／ｍｌ エンドトキシン；実施例１に同じ 測定方法；実施例１に同じ 第７図にＲｔｈ＝９５％に設定した本実施例に於けるゲ
ル化時間とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。第
７図より明らかな如く、本実施例に於てはエンドトキシ
ンｌｋ度０．０００１ｎｇ／７！から１００ ｎｇ／ｍ
７！迄、検量関係が認められた。
これは、同一試薬を使って目視ゲル化転倒法で得られる
検出感度の１００倍の感度であり、又、合成基質を用い
る比色法の１００００倍程度の測定範囲のダイナミック
レンジである。
検出感度の１００倍の感度であり、又、合成基質を用い
る比色法の１００００倍程度の測定範囲のダイナミック
レンジである。
尚、本実施例に於ても、Ｒｔｈ＝７０％とした場合には
ゲル化を検出できず、検量線が得られない。
ゲル化を検出できず、検量線が得られない。
実施例４
以下の測定条件によりエントドキシ／濃度の測定を行っ
た０ ＬＡＬ試薬： Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ
Ｃｏｄ社裂ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．１ ｎｇ／ｄ エンドトキシン；実施例１に同じ 測定方法；上記エンドトキシンを注射用蒸留水（天場製
薬（株）製）で溶解したも のを被検液とする。直径１２＋ｍａの試験管に凍結乾燥
されたＬＡＬ試薬と 被検液０．２ ｒＩｔを加えて攪拌溶解し透過光量の変
化を測定。
た０ ＬＡＬ試薬： Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ
Ｃｏｄ社裂ＦＤＡリファレンスによる目視ゲ ル化転倒法感度０．１ ｎｇ／ｄ エンドトキシン；実施例１に同じ 測定方法；上記エンドトキシンを注射用蒸留水（天場製
薬（株）製）で溶解したも のを被検液とする。直径１２＋ｍａの試験管に凍結乾燥
されたＬＡＬ試薬と 被検液０．２ ｒＩｔを加えて攪拌溶解し透過光量の変
化を測定。
第８図にＲｔｈ ＝ ８５％に設定した本実施例に於け
るゲル化時間とエントドキシ／濃度との検量関係を示す
。第８図より明らかな如く、本実施例に於てはエンドト
キシン濃度０．０２ ｎｇ／ ｍｌから１００ ｎｇ／
−迄の範囲で検量関係が認められた。これは、同一試薬
による目視ゲル化転倒法の５倍の検出感度であり、合成
基質を用いる比色法の５０倍程度の測定範囲のダイナミ
ックレンジである。
るゲル化時間とエントドキシ／濃度との検量関係を示す
。第８図より明らかな如く、本実施例に於てはエンドト
キシン濃度０．０２ ｎｇ／ ｍｌから１００ ｎｇ／
−迄の範囲で検量関係が認められた。これは、同一試薬
による目視ゲル化転倒法の５倍の検出感度であり、合成
基質を用いる比色法の５０倍程度の測定範囲のダイナミ
ックレンジである。
尚、本実施例に於て、Ｒｔｈ＝７０％とした場合には、
検量関係が得られる濃度範囲が、エンドトキシン濃度０
．１〜Ｌｏｎｇ／−と非常に狭められる。
検量関係が得られる濃度範囲が、エンドトキシン濃度０
．１〜Ｌｏｎｇ／−と非常に狭められる。
第１図は試料液透過光量を測定するための光学系原理図
、第２図は試料液透過光量Ｉ （ｔ）の経時変化特性図
、第３図は試料液透過光量Ｉ （ｔ）と、反応の進行に
より減少を開始する以前の透過光量の初期値■０との比
率Ｒ（ｔ）の経時変化特性図、第４図はエンドトキシン
濃度とＲ（ｔ）の時間変化特性図、第５図は本発明によ
るゲル化判定結果と従来法（目視ゲル化転倒法）による
判定結果との相関図、第６図、第７図及び第８図は夫々
、実施例１、実施例３及び実施例４に於けるエンドトキ
シン濃度とゲル化時間との検量関係図である。 １・・−・・ 測定用キュベツト ２・・・・・・ 試料液 ３．４・・・・・・ 絞り ５・・・・・・ 光源 ６・・・・・・ 光電検出器 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 第２図 第３図 第４図 エンドトキシン濃度 （ｎｍ−ｇ） 第５図 ゲル化時間 （ｍｉｎ、 ） Ｔ品Ｕ＋ｌ Ｔ Ｃ７Ｖ釘−）第６図 エンドトキシン濃度（■７→ エンドトキシン濃度（ｎｇ鷹 エンドトキシン濃度（ｎｇ／ｓｇ） 手続補正書 昭和６１年 ３角２ダ 日 １、 事件の表示 昭和５９年特許願第２８１６１６号 λ 発明の名称 エンドトキシンの測定方法 １ 補正をＴる者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７
鳳屯 補正命令の日付 ５、補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄
。 ６、補正の内容 （１） 特許請求の範囲を別紙のとおり補正する。 （２）明細書７頁１行目から２行目にかけて記載の「該
ｒル化判定時間迄」を「該ｒル化判定時点迄」と補正す
る。 （３） 明細書９頁１１行目に記載の「Ｒ（ｔ）を示
す。」の後に改行して以下の文章を挿入する。 「本発明に於ける透過光量の初期値Ｉ。とじては、透過
光量Ｉ （ｔ）の最大値でも、初期段階一定時間内での
透過光量Ｉ （ｔ）の平均値でも、初期段階一定時間内
での任意の点ｔ３での透過光量Ｉ （ｔ、）でも、また
、初期段階一定時間内での透過光量Ｉ（ｔ）の最小値で
も、いずれにてもよい。」 以上 別 紙 ２、特許請求の範囲 （１） エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合
した試料液を保持するキュベツトに光線を照射し、時間
りに於ける試料液からの透過光量１（ｔ）と反応の進行
により減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の
初期値■ｏとの比率を求め、該比率が７５−以上９７チ
以下の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料液の
グル化時点と判定することを特徴とするエンドトキシン
の測定方法。 （２）透過光量の初期値Ｉｏが、透過光量Ｉ（１）の最
大値である特許請求の範囲第１項記載のエンドトキシン
の測定方法。 （３）透過光量の初期値■ｏが、初期段階一定時間内で
の透過光量１（ｔ）の平均値である特許請求の範囲第１
項記載のエンドトキシンの測定方法。 （４）透過光量の初期値■ｏが、初期段階一定時間内で
の任意の特定の時点ｔ、での透過光量Ｉ（ｔ、Ｉ）であ
る特許請求の範囲第１項記載のエンドトキシンの測定方
法。 （５）透過光量の初期値■。が、秩肌艮！ニュ豆Ｊ内で
の透過光量１（ｔ）の最小値である特許請求の範囲第１
項記載のエンドトキシンの測定方法。 （６）試料液を保持するキュベツトが内径６閣から内径
１２瓢の範囲にある円筒試験管である特許請求の範囲第
１項〜第５項のいずれかに記載のエンドトキシンの測定
方法。 （７）試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｄと
被検液０．１ｒＩＬｌ、あるいはエンドトキシンゲル化
試薬の凍結乾燥品と被検液０．２ ＷＬｌからなる特許
請求の範囲第１項〜第６項のいずれかに記載のエンドト
キシンの測定方法。 （８） エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合
した試料液を保持するキーペットに光線を照射し、時間
りにおける試料液からの透過光量１（ｔ）と反応の進行
により減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の
初期値■。との比率を求め、該比 ・率が７５％以上９
７％以下の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料
液のグル化時点と判定し、前記試料液のグル化時間とし
て求め、予め求めたエンドトキシン濃度と該グル化時間
との関係に基づいて被検液中のエンドトキシン濃度を求
めるこトラ特徴とするエンドトキシンの測定方法。 （９）透過光量の初期値Ｉ。が、透過光量１（１）の最
大値である特許請求の範囲第８項記載のエンドトキシン
の測定方法。 ＱＯ透過光量の初期値Ｉｏが、初期段階一定時間内での
透過光量Ｉ（ｔ）の平均値である特許請求の範囲第８項
記載のエンドトキシンの測定方法。 ある特許請求の範囲第８項記載のエンドトキシンの測定
方法。 （ロ）透過光量の初期値Ｉ。が、初期段階一定時間内で
の透過光量Ｉ （ｔ）の最小値である特許請求の範囲第
８項記載のエンドトキシンの測定方法。 （６）試料液を保持するキュベツトが内径６ｔｍから内
径１２ｍの範囲にある円筒試験管である特許請求の範囲
第８項〜第１２項のいずれかに記載のエンドトキシンの
測定方法。 α→ 試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｄと
被検ｉ ０．１ ｍｌ、あるいはエンドトキシンゲル化
試薬の凍結乾燥品と被検液０．２ ｄからなる特許請求
の範囲第８項〜第１３項のいずれかに記載のエンドトキ
シンの測定方法。 以上
、第２図は試料液透過光量Ｉ （ｔ）の経時変化特性図
、第３図は試料液透過光量Ｉ （ｔ）と、反応の進行に
より減少を開始する以前の透過光量の初期値■０との比
率Ｒ（ｔ）の経時変化特性図、第４図はエンドトキシン
濃度とＲ（ｔ）の時間変化特性図、第５図は本発明によ
るゲル化判定結果と従来法（目視ゲル化転倒法）による
判定結果との相関図、第６図、第７図及び第８図は夫々
、実施例１、実施例３及び実施例４に於けるエンドトキ
シン濃度とゲル化時間との検量関係図である。 １・・−・・ 測定用キュベツト ２・・・・・・ 試料液 ３．４・・・・・・ 絞り ５・・・・・・ 光源 ６・・・・・・ 光電検出器 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 第２図 第３図 第４図 エンドトキシン濃度 （ｎｍ−ｇ） 第５図 ゲル化時間 （ｍｉｎ、 ） Ｔ品Ｕ＋ｌ Ｔ Ｃ７Ｖ釘−）第６図 エンドトキシン濃度（■７→ エンドトキシン濃度（ｎｇ鷹 エンドトキシン濃度（ｎｇ／ｓｇ） 手続補正書 昭和６１年 ３角２ダ 日 １、 事件の表示 昭和５９年特許願第２８１６１６号 λ 発明の名称 エンドトキシンの測定方法 １ 補正をＴる者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７
鳳屯 補正命令の日付 ５、補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄
。 ６、補正の内容 （１） 特許請求の範囲を別紙のとおり補正する。 （２）明細書７頁１行目から２行目にかけて記載の「該
ｒル化判定時間迄」を「該ｒル化判定時点迄」と補正す
る。 （３） 明細書９頁１１行目に記載の「Ｒ（ｔ）を示
す。」の後に改行して以下の文章を挿入する。 「本発明に於ける透過光量の初期値Ｉ。とじては、透過
光量Ｉ （ｔ）の最大値でも、初期段階一定時間内での
透過光量Ｉ （ｔ）の平均値でも、初期段階一定時間内
での任意の点ｔ３での透過光量Ｉ （ｔ、）でも、また
、初期段階一定時間内での透過光量Ｉ（ｔ）の最小値で
も、いずれにてもよい。」 以上 別 紙 ２、特許請求の範囲 （１） エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合
した試料液を保持するキュベツトに光線を照射し、時間
りに於ける試料液からの透過光量１（ｔ）と反応の進行
により減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の
初期値■ｏとの比率を求め、該比率が７５−以上９７チ
以下の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料液の
グル化時点と判定することを特徴とするエンドトキシン
の測定方法。 （２）透過光量の初期値Ｉｏが、透過光量Ｉ（１）の最
大値である特許請求の範囲第１項記載のエンドトキシン
の測定方法。 （３）透過光量の初期値■ｏが、初期段階一定時間内で
の透過光量１（ｔ）の平均値である特許請求の範囲第１
項記載のエンドトキシンの測定方法。 （４）透過光量の初期値■ｏが、初期段階一定時間内で
の任意の特定の時点ｔ、での透過光量Ｉ（ｔ、Ｉ）であ
る特許請求の範囲第１項記載のエンドトキシンの測定方
法。 （５）透過光量の初期値■。が、秩肌艮！ニュ豆Ｊ内で
の透過光量１（ｔ）の最小値である特許請求の範囲第１
項記載のエンドトキシンの測定方法。 （６）試料液を保持するキュベツトが内径６閣から内径
１２瓢の範囲にある円筒試験管である特許請求の範囲第
１項〜第５項のいずれかに記載のエンドトキシンの測定
方法。 （７）試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｄと
被検液０．１ｒＩＬｌ、あるいはエンドトキシンゲル化
試薬の凍結乾燥品と被検液０．２ ＷＬｌからなる特許
請求の範囲第１項〜第６項のいずれかに記載のエンドト
キシンの測定方法。 （８） エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合
した試料液を保持するキーペットに光線を照射し、時間
りにおける試料液からの透過光量１（ｔ）と反応の進行
により減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の
初期値■。との比率を求め、該比 ・率が７５％以上９
７％以下の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料
液のグル化時点と判定し、前記試料液のグル化時間とし
て求め、予め求めたエンドトキシン濃度と該グル化時間
との関係に基づいて被検液中のエンドトキシン濃度を求
めるこトラ特徴とするエンドトキシンの測定方法。 （９）透過光量の初期値Ｉ。が、透過光量１（１）の最
大値である特許請求の範囲第８項記載のエンドトキシン
の測定方法。 ＱＯ透過光量の初期値Ｉｏが、初期段階一定時間内での
透過光量Ｉ（ｔ）の平均値である特許請求の範囲第８項
記載のエンドトキシンの測定方法。 ある特許請求の範囲第８項記載のエンドトキシンの測定
方法。 （ロ）透過光量の初期値Ｉ。が、初期段階一定時間内で
の透過光量Ｉ （ｔ）の最小値である特許請求の範囲第
８項記載のエンドトキシンの測定方法。 （６）試料液を保持するキュベツトが内径６ｔｍから内
径１２ｍの範囲にある円筒試験管である特許請求の範囲
第８項〜第１２項のいずれかに記載のエンドトキシンの
測定方法。 α→ 試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｄと
被検ｉ ０．１ ｍｌ、あるいはエンドトキシンゲル化
試薬の凍結乾燥品と被検液０．２ ｄからなる特許請求
の範囲第８項〜第１３項のいずれかに記載のエンドトキ
シンの測定方法。 以上
Claims (14)
- （１）エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合した
試料液を保持するキュベットに光線を照射し、時間ｔに
於ける試料液からの透過光量Ｉ（ｔ）と反応の進行によ
り減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の初期
値Ｉｏとの比率を求め、該比率が７５％以上９７％以下
の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料液のゲル
化時点と判定することを特徴とするエンドトキシンの測
定方法。 - （２）透過光量の初期値Ｉｏが、透過光量Ｉ（ｔ）の最
大値である特許請求の範囲第１項記載のエンドトキシン
の測定方法。 - （３）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の範囲内
での透過光量Ｉ（ｔ）の平均値である特許請求の範囲第
１項記載のエンドトキシンの測定方法。 - （４）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の時点ｔ
ｓでの透過光量Ｉ（ｔｓ）である特許請求の範囲第１項
記載のエンドトキシンの測定方法。 - （５）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の範囲内
での透過光量Ｉ（ｔ）の最小値である特許請求の範囲第
１項記載のエンドトキシンの測定方法。 - （６）試料液を保持するキュベットが内径６ｍｍから内
径１２ｍｍの範囲にある円筒試験管である特許請求の範
囲第１項〜第５項のいずれかに記載のエンドトキシンの
測定方法。 - （７）試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｍｌ
と被検液０．１ｍｌ、あるいはエンドトキシンゲル化試
薬の凍結乾燥品と被検液０．２ｍｌからなる特許請求の
範囲第１項〜第６項のいずれかに記載のエンドトキシン
の測定方法。 - （８）エンドトキシンゲル化試薬と被検液とを混合した
試料液を保持するキュベットに光線を照射し、時間をに
おける試料液からの透過光量Ｉ（ｔ）と反応の進行によ
り減少を開始する以前の該試料液からの透過光量の初期
値Ｉｏとの比率を求め、該比率が７５％以上９７％以下
の範囲にある一定値に到達した時点を前記試料液のゲル
化時点と判定し、前記試料液の混合時点から該ゲル化判
定時間迄を前記試料液のゲル化時間として求め、予め求
めたエンドトキシン濃度と該ゲル化時間との関係に基づ
いて被検液中のエンドトキシン濃度を求めることを特徴
とするエンドトキシンの測定方法。 - （９）透過光量の初期値Ｉｏが、透過光量Ｉ（ｔ）の最
大値である特許請求の範囲第８項記載のエンドトキシン
の測定方法。 - （１０）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の範囲
内での透過光量Ｉ（ｔ）の平均値である特許請求の範囲
第８項記載のエンドトキシンの測定方法。 - （１１）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の時点
ｔｓでの透過光量Ｉ（ｔｓ）である特許請求の範囲第８
項記載のエンドトキシンの測定方法。 - （１２）透過光量の初期値Ｉｏが、時間ｔの特定の範囲
内での透過光量Ｉ（ｔ）の最小値である特許請求の範囲
第８項記載のエンドトキシンの測定方法。 - （１３）試料液を保持するキュベットが内径６ｍｍから
内径１２ｍｍの範囲にある円筒試験管である特許請求の
範囲第８項〜第１２項のいずれかに記載のエンドトキシ
ンの測定方法。 - （１４）試料液が、エンドトキシンゲル化試薬０．１ｍ
ｌと被検液０．１ｍｌ、あるいはエンドトキシンゲル化
試薬の凍結乾燥品と被検液０．２ｍｌからなる特許請求
の範囲第８項〜第１３項のいずれかに記載のエンドトキ
シンの測定方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28161684A JPS61159162A (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | エンドトキシンの測定方法 |
| EP89114580A EP0347951B1 (en) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Apparatus for measuring endotoxin |
| DE8585107877T DE3586075D1 (de) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Verfahren zur bestimmung von endotoxin. |
| AT85107877T ATE76507T1 (de) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Verfahren zur bestimmung von endotoxin. |
| DE89114580T DE3587510T2 (de) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Gerät zur Messung von Endotoxin. |
| EP85107877A EP0173021B1 (en) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Process for measuring endotoxin |
| AT89114580T ATE92630T1 (de) | 1984-06-27 | 1985-06-25 | Geraet zur messung von endotoxin. |
| US06/748,805 US4740460A (en) | 1984-06-27 | 1985-06-26 | Process for measuring endotoxin and apparatus used therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28161684A JPS61159162A (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | エンドトキシンの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61159162A true JPS61159162A (ja) | 1986-07-18 |
| JPH0531744B2 JPH0531744B2 (ja) | 1993-05-13 |
Family
ID=17641611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28161684A Granted JPS61159162A (ja) | 1984-06-27 | 1984-12-28 | エンドトキシンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61159162A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4936682A (en) * | 1987-08-11 | 1990-06-26 | Associates Of Cape Cod, Inc. | Instrument for independently and kinetically measuring light transpassion through a plurality of samples |
| WO1995014932A1 (fr) * | 1993-11-22 | 1995-06-01 | Seikagaku Corporation | Procede de dosage d'une substance reagissant avec un reactif de limulus |
| JP2009244027A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Sysmex Corp | 血液凝固分析装置、血液凝固分析方法、及び、コンピュータプログラム |
| JPWO2008139544A1 (ja) * | 2007-05-01 | 2010-07-29 | 興和株式会社 | ゲル化測定装置および試料セル |
| WO2010104180A1 (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2010216878A (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-30 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| EP2261642A1 (en) * | 2008-03-19 | 2010-12-15 | Toru Obata | Gel particle measuring apparatus |
| JP2011117812A (ja) * | 2009-12-02 | 2011-06-16 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| US8936753B2 (en) | 2008-03-31 | 2015-01-20 | Sysmex Corporation | Blood coagulation analyzer, blood coagulation analysis method, and computer program product |
-
1984
- 1984-12-28 JP JP28161684A patent/JPS61159162A/ja active Granted
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4936682A (en) * | 1987-08-11 | 1990-06-26 | Associates Of Cape Cod, Inc. | Instrument for independently and kinetically measuring light transpassion through a plurality of samples |
| WO1995014932A1 (fr) * | 1993-11-22 | 1995-06-01 | Seikagaku Corporation | Procede de dosage d'une substance reagissant avec un reactif de limulus |
| JPWO2008139544A1 (ja) * | 2007-05-01 | 2010-07-29 | 興和株式会社 | ゲル化測定装置および試料セル |
| EP2261642A1 (en) * | 2008-03-19 | 2010-12-15 | Toru Obata | Gel particle measuring apparatus |
| EP2261642A4 (en) * | 2008-03-19 | 2011-10-26 | Toru Obata | DEVICE FOR DETECTING HORIZONTAL FORMATION |
| US8462340B2 (en) | 2008-03-19 | 2013-06-11 | Toru Obata | Gel particle measuring apparatus |
| JP2009244027A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Sysmex Corp | 血液凝固分析装置、血液凝固分析方法、及び、コンピュータプログラム |
| US8936753B2 (en) | 2008-03-31 | 2015-01-20 | Sysmex Corporation | Blood coagulation analyzer, blood coagulation analysis method, and computer program product |
| WO2010104180A1 (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2010216878A (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-30 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| US8507282B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-08-13 | Kowa Company, Ltd. | Method for measuring physiologically active substance of biological origin, program for implementing the same, and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin |
| JP2011117812A (ja) * | 2009-12-02 | 2011-06-16 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
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