JPS61126033A - グルコシルトランスフエラ−ゼ類の活性阻害物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、う蝕の原因となる歯垢の一成分である不溶性
グルカンを合成するグルコシルトランスフェラーゼ類の
活性を阻害する新規物質に関する。

従来の技術及びその問題点 従来、う蝕の生成機構として、口腔内のう蝕原因菌がシ
ョ糖を代謝し、グルコシルトランスフェラーゼ類によシ
グルカンを合成すると共に、合成されたグルカンは口腔
内細菌や唾液成分とともに歯牙に沈着し、歯垢を形成す
る。そして、歯垢中のう蝕原因菌が柚々の糖類を利用し
て有機酸を生成し、歯垢を脱灰してう蝕を形成していく
ことが報告されている。

従って、う蝕を予防するためには、う蝕の原因となる歯
垢を除去することが有効であると考えられ、このためα
−１，３−グルカン分解酵素などのグルカンを分解する
酵素を利用して歯垢を除去する方法が提案されているが
、この方法は一度生成した歯垢に酵素を作用させるため
、歯垢の分解は必ずしも十分でない。それ故、むしろ形
成した歯垢を分解させるのではなく、グルカンの合成を
阻害することによって積極的に歯垢の形成を抑制し、う
蝕予防の目的を達成することが望まれる。

発明の概要 本発明者らは、上記事情に鑑み、グルコシルトランスフ
ェラーゼ類の活性を阻害することによシダルカンの合成
を阻害することができる物質につき鋭意研究を行なりた
結果、エメリセラ属の真菌培養物からり蝕原因菌として
代表的なストレプトコッカス・ミュータンスのグルコシ
ルトランスフェラーゼ類の活性を阻害し、ストレプトコ
ッカス・ミー−タンスによるダルカン合成を阻害する新
規物質が得られ、この物質が歯磨等の口腔用組成物の有
効成分として歯垢の形成を抑制し、う蝕を予防するため
に有効に使用されることを知見し、本発明をなすに至り
たものである。

以下、本発明につき更【詳しく説明する。

発明の構成 本発明の新規グルコシルトランスフェラーゼ類活性阻害
物質は、エメリセラ（Ｅｍ＊ｒｉｃｅｌｌａ　）　ｒ４
に属する真菌の培養物から得られるものであるが、この
場合エメリセラ属に属するグルコシルトランスフェラー
ゼ類の活性阻害物質産生菌として特に有効な菌株はエメ
リセラ・クアドリリネータ　、（Ｅｒｐｅｒｉｃｅｌｌ
ａ　ｑｕａｄｒｉｌｌｎｅａｔａ　）　ＬＣ−３である
。本菌株は高知系の山中の土より分離されたもので、生
育は２５℃にて良好であり、米を用いて培養すると白い
菌糸が米上に蔓延し、古くなると淡黄色乃至黄灰色に呈
色する。また、分生子は緑色乃至　　・暗緑色であり、
閉子のう果を多数形成する。

エメリセラ属の真菌よシ本発明新規物質を得る場合は、
下記方法が好適に採用される。即ち、よくといで水をき
った米を培養器に入れ、滅菌した後、これに菌を接種し
、滅菌水を加える。これを好気的に培養して培養物を得
る。この培養物から本発明物質を採取、精製する場合は
、培養した米が浸るまで酢酸エチルを抽出溶媒として加
え、おだやかに振盪しながら抽出処理を行なう。次いで
、抽出液を採取１．、これを濃縮する。更に必要によう
、濃縮物を常法に従かいシリカダルカラムに吸着させ、
１：１のヘキサン−アセトン混液を用いて溶出させ、活
性画分を濃縮するものである。

なお、上述した培養操作において、培養温度は２３〜２
７℃、培養時間は３〜５週間とすることが好ましく、ま
た培養期間中に時々（例えば１日に１度）培養器を振っ
て米をよく混和させることが好ましい。また、上述した
抽出操作において、抽出温度は２０〜２８℃、抽出時間
は７〜９時間とすることが好ましい。

このようにして得られた本発明新規物質は下記の性状を
有する。

（１）　　分子量 １０００以下 （２）　　溶解性 アセトン、エタノール、酢酸エチルにそれぞれ溶解する
。ヘキサン、ベンゼン、水に難溶性である。

（３）　　色、性状 暗褐色、樹脂状 （４）作用 グルコシルトランスフェラーゼによる不溶性グルカンの
活性を阻害する。

（５）−安定性 ｐＨ４〜１０にて安定 （６）熱安定性 ８０℃、２時間で８０％以上の活性を示す。

（７）　　薄層クロマトグラフィー 薄層クロマトグラフィーにてヘキサン−アセトン（１：
１）混液を用いて展開後、薄層板に硫酸を噴霧し加熱す
るとＲｆ　０１６３〜０．６５にて発色を呈する物質。

本発明の新規物質は、歯磨、洗口剤、トローチ。

チューインガム等の口腔用組成物にグルコシルトランス
フェラーゼ類の活性を阻害し、不溶性グルカンの合成を
阻害して歯垢の形成を抑制するだめの有効成分として添
加することができる。この場合、本発明物質の投与量は
０．０００１〜２７％とすることが好ましく、口腔用組
成物中に通常全体のｏ、ｏｏｉ〜１重量％配合し、上記
投与量範囲で使用することがてきる。

本発明物質を口腔用組成物に配合する場合、口腔用組成
物の成分としては、その稲類等に応じて通常使用される
成分が適宜選定され、使用に供される。

例えば、歯磨の場合であれば、第２リン酸カルシウム、
炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム。

不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、結晶質シ
リカ、アルミノシリケート、酸化アルミニウム、水酸化
アルミニウム、レジン等の研磨剤、カルぎキシメチルセ
ルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ア
ルギン酸塩、カラｒナン、アラビアゴム、ポリビニルア
ルコール等の粘結剤、ポリエチレングリコール、ンルビ
トール。

グリセリン、グロピレングリコール等の粘稠剤、ラウリ
ル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム、水素添加ココナツツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫
酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ノジウ
ムラウロイルデルコシネート、Ｎ−アシルグルタミン酸
塩、ラウリルジェタノールアマイド、ショ糖脂肪酸エス
テル等の界面活性剤、サッカリンナトリウム、ステビオ
サイド、ネオヘスペリジルノヒドロカ畠ルコン、グリチ
ルリチン、ペリラルチン、ｐ−メトキシシ／ナミ、クア
ルデヒドなどの甘味剤、香料、防腐剤などの成分を水と
混和し、常法に従って製造する。

また、マウスウォッシュ等の口腔洗浄剤その他において
も、製品の性状に応じた成分が適宜配合される。

なお、口腔用組成物中には、クロルヘキシシン塩、デキ
ストラナーゼ、ムタナーゼ、ンルピン酸。

アレキシシン、ヒノキチオール、セチルピリジニウムク
ロライド、アルキルグリシン、アルキルジアミノエチル
グリシン塩、アラントイン、ε−アミノカプロン酸、ト
ラネキサム酸、アズレン、ビタミンＥ、水溶性第一もし
くは第二リン酸塩、第四級アンモニウム化合物、塩化ナ
トリウムなどの有効成分を配合することもできる。

発明の効果 本発明の新規物質は、不溶性グルカンを合成するグルコ
シルトランスフェラーゼ類の活性を阻害し、歯垢の形成
を抑制し得るため、口腔用組成物の有効成分として使用
できる。

次に、本発明に係るグルコシルトランスフェラーゼ類の
活性阻害成分の製造例、グルコシルトランスフェラーゼ
類の活性阻害効果を示す実験例、及び使用例について述
べる。

〔製造例〕

水道水でよくとぎ、−晩水切シした米１０ゆを培養器に
入れ、′Ｌ２０′Ｃ，１気圧で３０分間高圧滅菌処理し
た後、エメリセラ・クアドリリネータＬＣ−３を接種し
、静置培養する。５日後、これに３ＱｍＡ！の滅菌水を
加える。毎日１回培養器を振って米をよく混和させなが
ら菌が成育するまで温度２５℃で４週間好気的に培養し
た。次に、培養した米が浸るまで酢酸エチルを加え、温
度２５℃で８時間ゆるやかに振盪した。これを戸別して
抽出物を採取し、ロータリーエバポレーターを用いて濃
縮することによシ、暗褐色のグルコシルトランスフェラ
ーゼ類の活性阻害成分（本発明物質■）２８、１．９を
得た。

また、この本発明物質１２８．１１ｉをシリカゲルカラ
ム（和光紬薬社製）に吸着させ、ヘキサン−アセトン混
液のアセトンの量比を順次増加させ、量比１：１の混液
にて溶出した画分を回収した。

得られた活性画分をロータリーエバポレーターを用いて
濃縮することｔこよυ、本発明物質■の精製物（本発明
物質Ｉｆ）０．５５７．！ｉ’を得た。なお、シリカゲ
ルカラムの溶出画分のうち、本発明物質■以外の両分に
は十分な活性が認められなかった。

〔実験例〕

次に、本発明物質Ｉ、Ｈの生理活性を下記方法によυ調
べた。その結果を第１表に示す。

菌体付着率 試験管に４％ショ糖溶液１ゴ、０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ６，８）　２．９ｒｎｌ、ストレプトコッカ
ス・ミュータンス加熱死菌（０Ｄ５５ｏ＝１．５　）　
０．９　ＷＬｌ、開直のグルコシルトランスフェラーゼ
溶液５０μ！、及び所定濃度のサンプル液１００μノを
それぞれ加え、試験管を６０度の傾きに保つて温度３７
℃で１６時間靜装し、試験管壁に付着した菌量を測定し
た。

対照としてサンプル液無添加の本のについても同様の実
験を行ない、その菌量を１００％とした場合のサンプル
液の付着菌量を求めた。

グルカン合成比率 試験管に４％シヨ糖溶液１１ｎｌ、０．１ＭＩＪン酸緩
衝液（ＰＨ６，８）３ｍ、ストレプトコッカス・ミュー
タンス菌のグルコシルトランスフェラーゼ５０μ！、及
び所定濃度のサンプル液１００μｌを加え、温度３７℃
で１６時間靜装し、５５０　ｎｍにて濁度を測定して、
サンプル液無添加の対照の濁度を１００％とした場合の
サンプル液の濁度によシグルカン合成量を求めた。　　
　　　　　　　′第１表 第１表の結果より、本発明物質１１０％或いは本発明物
質Ｉ［１０−５％の添加でストレプトコッカス・ミュー
タンスの歯垢形成を抑制することが示された。

以下、本発明物質の口腔用組成物への使用例を示す。

〔使用例１〕　練歯磨 第２リン酸カルシウム　　　　　　　５０　　チノルビ
ット　　　　　　　　　　　　２０ラウリル硫酸ナトリ
ウム　　　　　　２カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム　　　　　１サツカリンナトリウム　　　　　　　
０．１クロルヘキシシ／クル＝ｒネー）　　　　　　０
．０１本発明物質　　　　　　　　　　　　０．１香料
　　　　　　　　　　　　　　　１１００．０％ 〔使用例２〕　練歯磨 第２リン酸カルシウム　　　　　　　５０　　チグリセ
リン　　　　　　　　　　２０ ラウリル硫酸ナトリウム　　　　　　２カル？キシメチ
ルセルロースナトリウム１サツカリンナトリウム　　　
　　　　０．１香料　　　　　　　　　　　　　　　ｌ
モノフルオロリン酸ナトリウム　　　　　　０．１本発
明物質　　　　　　　　　　　　０．１水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　残１００．０　
　チ 〔使用例３〕、練歯磨 水酸化アルミニウム　　　　　　　４４　チソルピット
　　　　　　　　　　　　　３０ラウリル硫酸ナトリウ
ム　　　　　　１゜５カラダナン　　　　　　　　　　
　　　１す、カリンナトリウム　　　　　　　０．１香
料　　　　　　　　　　　　　　　１デキストラナーゼ
（２００万酵素単位／Ｉり　　　　０．５本発明物質　
　　　　　　　　　　　０．１水　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　残１００．０　　チ 〔使用例４〕　粉歯磨 第２リン酸カルシウム　　　　　　　ＳＯＳ炭酸カルシ
ウム　　　　　　　　　２５ノルビツト　　　　　　　
　　　　　１０ラクリル硫酸ナトリウム　　　　　　１
す、カリンナトリウム　　　　　　　ｏ、ｉ香料　　　
　　　　　　　　　　　　１本発明物質　　　　　　　
　　　　　０．１水　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　残１００．０　　チ 〔使用例５〕　洗口剤 エチルアルコール　　　　　　　　２０　　％α−オレ
フィンスルホネート０．５ サッカリンナトリウム　　　　　　　０．１香料　　　
　　　　　　　　　　　　１クロルヘキシソングルコネ
−トｏ、ｏｉ本発明物質　　　　　　　　　　　　０．
５水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　残１００．０　　％ 水で１０倍に希釈して使用する。

〔使用例６〕　トローチ アラビアコ０ム　　　　　　　　　　６　　チブドウ糖
　　　　　　　　　　　　３６香料　　　　　　　　　
　　　　１ パラチノース　　　　　　　　　３６ 本発明物質　　　　　　　　　　０．１水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　残１００．０　　チ 〔使用例７〕　チューインがム

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、エメリセラ属に属する真菌培養物−から得られ、下
   記（１）〜（７）の性状を有するグルコシルトランスフ
   ェラーゼ類の活性阻害物質。 （１）分子量 １０００以下 （２）溶解性 アセトン、エタノール、酢酸エチルにそれぞれ溶解、ヘ
   キサン、ベンゼン、水に難溶。 （３）色、性状 暗褐色、樹脂状 （４）作用 グルコシルトランスフェラーゼによる不溶性グルカンの
   活性を阻害する。 （５）ｐＨ安定性 ｐＨ（４〜１０にて安定。 （６）熱安定性 ８０℃、２時間で８０％以上の活性を示す。 （７）薄層クロマトグラフィー 薄層クロマトグラフィーにてヘキサン−アセトン（１：
   １）混液を用いて展開後、薄層板に硫酸を噴霧し加熱す
   るとＲｆ０．６３〜０．６５にて発色を呈する物質。