JPS61106517A - ペプロマイシンのポリリジン結合体 - Google Patents
ペプロマイシンのポリリジン結合体Info
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- JPS61106517A JPS61106517A JP59226927A JP22692784A JPS61106517A JP S61106517 A JPS61106517 A JP S61106517A JP 59226927 A JP59226927 A JP 59226927A JP 22692784 A JP22692784 A JP 22692784A JP S61106517 A JPS61106517 A JP S61106517A
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- polylysine
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- amino groups
- pep
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は制癌剤として有用なベグロマイシンーポリリジ
ン結合体に関するものである。
ン結合体に関するものである。
（従来の技術）
ペプロマイシン（５−（（Ｓ） −１’−フェニルエチ
ルアミノコプロピルアミノプレオマイシン）は。
ルアミノコプロピルアミノプレオマイシン）は。
肺毒性の極めて低いプレオマイシンアナログとして、Ｕ
ＳＦ４，１９５，０１８などにより公知のもので１９８
１年よりペプロマイシンは癌治療の臨床面で広く使用さ
れている。
ＳＦ４，１９５，０１８などにより公知のもので１９８
１年よりペプロマイシンは癌治療の臨床面で広く使用さ
れている。
近年、低分子制ガン剤を、ガン特異抗原に対する抗体、
ホルモシ、レクチン類などガン細胞に親和性を有す分子
と結合させ、標的ガン細胞に制ガン剤を集中させる試み
や、低分子制ガン剤を高分子化し、ガン細胞の活発なピ
ノサイト−シスにより効果的にガン細砲内に取り込ませ
る試みがなされている。
ホルモシ、レクチン類などガン細胞に親和性を有す分子
と結合させ、標的ガン細胞に制ガン剤を集中させる試み
や、低分子制ガン剤を高分子化し、ガン細胞の活発なピ
ノサイト−シスにより効果的にガン細砲内に取り込ませ
る試みがなされている。
プレオマイシンに関しても１例えば、赤座ら（日本泌尿
器科学会雑誌７５°巻、２１１−１４（１９８４）は、
プレオマイシンＡ５とコンカナバリンＡの結合体による
マウス膀胱腫瘍の治療実験を報告しており、又、 Ｍａ
ｎａｂｅら〔バイオケミパイオフィス リサーチ コミ
ニュケーション （Ｂ＋Ｂ、Ｒ，Ｃ） １１５巻、
１００９−１４ （１９８！Ｓ）：１は、プレオマイシ
ンを酸化したデキストランヲ介して抗体に結合させた結
合体がその抗体に対する抗原をもつガン細胞の生育を効
果的に阻止することを報告している。
器科学会雑誌７５°巻、２１１−１４（１９８４）は、
プレオマイシンＡ５とコンカナバリンＡの結合体による
マウス膀胱腫瘍の治療実験を報告しており、又、 Ｍａ
ｎａｂｅら〔バイオケミパイオフィス リサーチ コミ
ニュケーション （Ｂ＋Ｂ、Ｒ，Ｃ） １１５巻、
１００９−１４ （１９８！Ｓ）：１は、プレオマイシ
ンを酸化したデキストランヲ介して抗体に結合させた結
合体がその抗体に対する抗原をもつガン細胞の生育を効
果的に阻止することを報告している。
（本発明が解決しようとする問題点）
上記のようにプレオマイシン類の制癌効果を高める試み
が種々なされているが現在満足すべき結果は得られてい
ない。
が種々なされているが現在満足すべき結果は得られてい
ない。
本発明者らはより制癌効果の高いプレオマインンｔ１４
体を見い出すべく種々検討の結果本発明のペプロマイシ
ン−ポリリジン結合体が非常に高い゛ 抗癌活性をも
つことを見い出し本発明を完成した。
体を見い出すべく種々検討の結果本発明のペプロマイシ
ン−ポリリジン結合体が非常に高い゛ 抗癌活性をも
つことを見い出し本発明を完成した。
（問題点を解決するための手段）
本発明は
〔式中、 （ＢＸ）はプレオマイシン酸残基を示す。〕
で表わされるペプロマイシンのカルボキシメチｔ ｙ
ｉｉ□。７，５．つＺ＞Ｅ Ｌ −ｇ ！Ｉ ＩＪ ）
７゜７゜ノ基とアミド結合してなるペプロマイシン−
ポリリジン結合体。
で表わされるペプロマイシンのカルボキシメチｔ ｙ
ｉｉ□。７，５．つＺ＞Ｅ Ｌ −ｇ ！Ｉ ＩＪ ）
７゜７゜ノ基とアミド結合してなるペプロマイシン−
ポリリジン結合体。
に関するものである。
本発明におけるペプロマインンーボリリジン結合体（以
下ＰＥＰ−ポリリジンという）におけるペプロマイシン
は含銅体もしくは脱銅体いずれになっていてもよい。
下ＰＥＰ−ポリリジンという）におけるペプロマイシン
は含銅体もしくは脱銅体いずれになっていてもよい。
ＰＥＰ−ポリリジンにおいて、ポリリジンのアミ７基に
対する一般式ＣＩ）のペプロマイシンのカルボキシルメ
チル置換体（以下単にＰＥＰ ＣＭ置換体という）の
置換割合は特に制限はなく、少なくともポリリジンのア
ミノ基の１つがＰＥＰ−ＣＭ置換体で置換されていれば
よいが、高分子量例えば分子量３０００以上のポリリジ
ンの場合にはその全アミノ基の５％以上、好ましくは１
０％以上より好ましくは２５％以上がｐｉｐ−ｃｍ置換
体によ抄置換されていることが望ましい。上限は特にな
くポリリジ／の全アミノ基に置換してい啼 でもよい。
）またＰＥＰ−ポリリジンにおけるポリリジンの分子
量は特に制限がないが通常平均分子量が約１、’ａ ｏ
ｏ （重合度約８）〜約１ｏロ、ｏ ｏ ｏ （重合
度約８００）好ましくは分子量５ｏｏｏ（重合度約４０
）〜約５ｏｏｏｏ（重合度約４００）である。
対する一般式ＣＩ）のペプロマイシンのカルボキシルメ
チル置換体（以下単にＰＥＰ ＣＭ置換体という）の
置換割合は特に制限はなく、少なくともポリリジンのア
ミノ基の１つがＰＥＰ−ＣＭ置換体で置換されていれば
よいが、高分子量例えば分子量３０００以上のポリリジ
ンの場合にはその全アミノ基の５％以上、好ましくは１
０％以上より好ましくは２５％以上がｐｉｐ−ｃｍ置換
体によ抄置換されていることが望ましい。上限は特にな
くポリリジ／の全アミノ基に置換してい啼 でもよい。
）またＰＥＰ−ポリリジンにおけるポリリジンの分子
量は特に制限がないが通常平均分子量が約１、’ａ ｏ
ｏ （重合度約８）〜約１ｏロ、ｏ ｏ ｏ （重合
度約８００）好ましくは分子量５ｏｏｏ（重合度約４０
）〜約５ｏｏｏｏ（重合度約４００）である。
（式中（ＢＸ：ｌは前記と同じ、ｎは１ないしポリリジ
ンのアミノ基の数までの整数を示し、■、はポリリジン
（通常は分子量約１，０００〜約１００、口ａａ）を示
し、その全アミノ基のうちｎ個のアミノ基はｐＦＸｐ−
ｃＭ置換体とアミド結合している。）で表わすことがで
きる。
ンのアミノ基の数までの整数を示し、■、はポリリジン
（通常は分子量約１，０００〜約１００、口ａａ）を示
し、その全アミノ基のうちｎ個のアミノ基はｐＦＸｐ−
ｃＭ置換体とアミド結合している。）で表わすことがで
きる。
本発明のｐＨ！Ｐ−ポリリジンの好ましい平均分子量範
囲は約’０ｔ０００以上〜約２００，０００以下であり
より好ましくは約１５，０００〜約”Ｏ＋０００程度で
ある。
囲は約’０ｔ０００以上〜約２００，０００以下であり
より好ましくは約１５，０００〜約”Ｏ＋０００程度で
ある。
次にＰｚＰ−ポリリジンの製造法について説明する。
前記一般式（１）で示されるＰ］ＩｉＰ−ＣＭ置換体の
含銅体をポリリジンとペプチド化学において酸アミド結
合を形成させる常法に従って反応きせることによ！７Ｐ
ＥＦ−ボリリジ／の含銅体を得ることができる。
・ ＰＥＰ−ポリリジンの脱銅体とする場合には常法１例え
ば特公昭５２−３１８７５に記載の方法に準じて行うこ
とにより脱銅体とすることができる。
含銅体をポリリジンとペプチド化学において酸アミド結
合を形成させる常法に従って反応きせることによ！７Ｐ
ＥＦ−ボリリジ／の含銅体を得ることができる。
・ ＰＥＰ−ポリリジンの脱銅体とする場合には常法１例え
ば特公昭５２−３１８７５に記載の方法に準じて行うこ
とにより脱銅体とすることができる。
本発明において酸アミド結合を形成させるのに使用され
る方法としてはペプチド化学において使用される方法が
いずれも使用されるが１例えば、縮合剤としてジシクロ
へキシルカルボジイミド、１−メチ／Ｉ／−５−（Ｓ−
ジメチルアミノプロピル）゛ カルボジイミド、１−シ
クロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジ
イミ４ド、ジインプロピルカルボジイミドなどを用いる
カルボジイミド法または縮合剤としてジフェニルホスホ
ルアジディト、ジエチルホスホロシアニブイト、Ｎ−エ
トキシカルボニル−２−エトキシジヒドロキノリンｔた
はＮ−エテル−５−フェニルイソオキサゾリウム−６′
−スルホネートなどを用いる方法もしくはこれらの縮合
剤とともにＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロ
フェノール、ペンタクロロフェノール、１−ヒドロキシ
ベンツトリアソール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネ
ン−２，３−ジカルボキシイミド等を併用する方法など
が好ましい。縮合剤の使用割合は一般式ＣＩ）で示され
るｐｚｐ、−ａｍｔ換体に対して通常１モル当量〜２０
モル当量好ましくは５〜１０モル当量程度である。
る方法としてはペプチド化学において使用される方法が
いずれも使用されるが１例えば、縮合剤としてジシクロ
へキシルカルボジイミド、１−メチ／Ｉ／−５−（Ｓ−
ジメチルアミノプロピル）゛ カルボジイミド、１−シ
クロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジ
イミ４ド、ジインプロピルカルボジイミドなどを用いる
カルボジイミド法または縮合剤としてジフェニルホスホ
ルアジディト、ジエチルホスホロシアニブイト、Ｎ−エ
トキシカルボニル−２−エトキシジヒドロキノリンｔた
はＮ−エテル−５−フェニルイソオキサゾリウム−６′
−スルホネートなどを用いる方法もしくはこれらの縮合
剤とともにＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロ
フェノール、ペンタクロロフェノール、１−ヒドロキシ
ベンツトリアソール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネ
ン−２，３−ジカルボキシイミド等を併用する方法など
が好ましい。縮合剤の使用割合は一般式ＣＩ）で示され
るｐｚｐ、−ａｍｔ換体に対して通常１モル当量〜２０
モル当量好ましくは５〜１０モル当量程度である。
この縮合に用いられる溶媒は１反応に影響を与えないも
のであれば何でも良いが１通常原料化合物を溶解する極
性溶媒が好ましく、水、Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリルおよびそれ１ らの混合溶媒があげ
られる。
のであれば何でも良いが１通常原料化合物を溶解する極
性溶媒が好ましく、水、Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリルおよびそれ１ らの混合溶媒があげ
られる。
１．１． 反応温度は０〜５０℃の範囲で行うこと
ができるが通常１０〜４０℃好ましくは２０℃〜５０℃
である。
ができるが通常１０〜４０℃好ましくは２０℃〜５０℃
である。
原料として用いるポリリジンは平均分子量約ｔ ００
Ｇ〜約１００．０００程度のものまで広範囲のものが使
廊可能である。
Ｇ〜約１００．０００程度のものまで広範囲のものが使
廊可能である。
原料として用いられる一般式〔Ｉ〕のＰＦｉＰ−ＣＭ置
換体の使用量は原料ポリリジン中に含まれるアミン基の
数に対して０．０５倍モル〜１０倍モルの範囲であり、
ＰＥＰ−ＣＭ置換体の使用割合を増加する程ポリリジン
のより多くのアミノ基にＰＥ ’Ｆ −ＣＭ置換体を置
換させることができる。
換体の使用量は原料ポリリジン中に含まれるアミン基の
数に対して０．０５倍モル〜１０倍モルの範囲であり、
ＰＥＰ−ＣＭ置換体の使用割合を増加する程ポリリジン
のより多くのアミノ基にＰＥ ’Ｆ −ＣＭ置換体を置
換させることができる。
上記反応液から目的物であるＰＫＰ−ポリリジンを単離
するには、一般的に蛋白質又は、ポリペプチドの精製に
用いられる方法、例えば、ゲルろ過、限外ろ過、塩析、
透析等の方法、および、これらを組み合わせることによ
り行なわれる。
するには、一般的に蛋白質又は、ポリペプチドの精製に
用いられる方法、例えば、ゲルろ過、限外ろ過、塩析、
透析等の方法、および、これらを組み合わせることによ
り行なわれる。
−例をあげると１反応液ｅ［縮し、Ｏ，ＯＳモルのリン
酸ソーダ緩衝液で平衡化したセファデックス■ＧＩ Ｑ
ＣＩのカラムに通導して、クロマトグラフィーを行ない
１分子量の大きな順に青色の溶出 □液を得る。目
的分画をアミコン■メンブランフィルタ−ＹＭ５で充分
にろ過し、凍結乾燥を行なうことにより、ペプロマイシ
ン（含銅体）を含むポリリジン結合体の粉末を得ること
ができる。
酸ソーダ緩衝液で平衡化したセファデックス■ＧＩ Ｑ
ＣＩのカラムに通導して、クロマトグラフィーを行ない
１分子量の大きな順に青色の溶出 □液を得る。目
的分画をアミコン■メンブランフィルタ−ＹＭ５で充分
にろ過し、凍結乾燥を行なうことにより、ペプロマイシ
ン（含銅体）を含むポリリジン結合体の粉末を得ること
ができる。
脱銅体とする場合には常法により脱銅することにより脱
銅体とすることができる。
銅体とすることができる。
生成物の精造は、ゲルクロマトグラフィーにおいて目的
物の分子量範囲にあること、ペプロマイシン−銅錯体に
由来する青色を示すこと、紫外部吸収スペクトルにおい
て２９２ｍμに極大を示すこと、６規定塩酸を用いて、
１１０℃、１８時間の加水分解によって、プレオマイシ
ン誘導体に共通するアミノ酸、Ｌ−トレオニン、β−ア
ミノ−β−（４−アミノ−６−カルポキンー５−メチル
−ピリミジン−２−イル）プロピオ／酸、４−アミノ−
３−オキジ−２−メチル−ｎ−ペアタン酸。
物の分子量範囲にあること、ペプロマイシン−銅錯体に
由来する青色を示すこと、紫外部吸収スペクトルにおい
て２９２ｍμに極大を示すこと、６規定塩酸を用いて、
１１０℃、１８時間の加水分解によって、プレオマイシ
ン誘導体に共通するアミノ酸、Ｌ−トレオニン、β−ア
ミノ−β−（４−アミノ−６−カルポキンー５−メチル
−ピリミジン−２−イル）プロピオ／酸、４−アミノ−
３−オキジ−２−メチル−ｎ−ペアタン酸。
β−オキクーＬ−ヒスチジン、β−アミノ−Ｌ−アラニ
ン、２’−（２−アミノエチル） −２，Ｎ−ビデアゾ
ール−４−カルボン酸の他にＩ、 ＩＪレジン得られ
ることにより確認される。
ン、２’−（２−アミノエチル） −２，Ｎ−ビデアゾ
ール−４−カルボン酸の他にＩ、 ＩＪレジン得られ
ることにより確認される。
１’ＫＰ−ポリリジンのペプロマづシン含有量の測定に
は、上記アミノ酸の中で、Ｌ−トレオニンと、Ｌ−リジ
ンのモル数を測定し、その比率をもって、推定すること
が可能である。
は、上記アミノ酸の中で、Ｌ−トレオニンと、Ｌ−リジ
ンのモル数を測定し、その比率をもって、推定すること
が可能である。
例えばポリリジンと一般式（１） ノＰ Ｅ Ｐ −Ｃ
Ｍ置換体を重量割合で約１：３・３の割合で使用した場
合にはペプロマイシン含有量は重量割合でＰｇＰ−ポリ
リジンの重量に対して約８０％であり。
Ｍ置換体を重量割合で約１：３・３の割合で使用した場
合にはペプロマイシン含有量は重量割合でＰｇＰ−ポリ
リジンの重量に対して約８０％であり。
ポリリジン中のアミノ基７個に対して約２個のアミノ基
に対して一般式（１）のＰＦＸＰ−ＣＭ置換体が置換し
ているものが得られる。
に対して一般式（１）のＰＦＸＰ−ＣＭ置換体が置換し
ているものが得られる。
なお本発明のＰｚＰ−ポＩ７１７ジンの分子量は次のよ
うにして測定される。
うにして測定される。
ペプロマイシン−ポリリジン結合体の分子量分布の測定
法 ペプロマイシン−ポリリジン結合体を、予め。
法 ペプロマイシン−ポリリジン結合体を、予め。
０．０５モルのリン酸ソーダ緩衝液、ｐＨ７，０，で平
衡化しておいたセファデックス■Ｇ−１００（１４５ｃ
ｒＩ４）Ｘ １４５ ｃｍ” ）に、６ｄ／時間テ通導
する。同緩衝液でクロマトグラフィーを行ない、４．２
ｄずつ分画を行なった。標準蛋白質として、牛血清アル
ブミン、鶏卵白アルブミン、ミオグロビンを用いて検量
線を作成し、検体の溶出位置より各フラクションの分子
量分布を測定する。
衡化しておいたセファデックス■Ｇ−１００（１４５ｃ
ｒＩ４）Ｘ １４５ ｃｍ” ）に、６ｄ／時間テ通導
する。同緩衝液でクロマトグラフィーを行ない、４．２
ｄずつ分画を行なった。標準蛋白質として、牛血清アル
ブミン、鶏卵白アルブミン、ミオグロビンを用いて検量
線を作成し、検体の溶出位置より各フラクションの分子
量分布を測定する。
次に本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例
Ｌ−ポＩＪ ＩＪジン臭化水素酸塩（平均分子量；約５
、０００ ） ８８ ｑを６７％Ｎ、Ｎ’−ジメチルホ
ルムアミド水溶液５ ｍ／に溶解し、攪拌しながら、ト
リエチルアミン５９μｔ、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール１１９ｊ９および参考例で得た粉末２９２ηを添
加した。
、０００ ） ８８ ｑを６７％Ｎ、Ｎ’−ジメチルホ
ルムアミド水溶液５ ｍ／に溶解し、攪拌しながら、ト
リエチルアミン５９μｔ、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール１１９ｊ９および参考例で得た粉末２９２ηを添
加した。
水冷下１−エテル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）カルボジイミドを１６９岬添加し、１時間攪拌を行な
った後、室温で一夜攪拌を続けた。
）カルボジイミドを１６９岬添加し、１時間攪拌を行な
った後、室温で一夜攪拌を続けた。
反応液を真空ポンプで濃縮乾固し、あらかじめ０・０５
モルのリン酸ソーダ緩衝液（ｐＨ７，ｏ）で平衡化して
おいた２４０ｄ容のセファデックス■Ｇ−１ｏｏを充填
したカラムに注入し、同緩衝液「 へ てクロマトグラフィーを行ない、溶出液を４・
２ｄずつ分画した。
モルのリン酸ソーダ緩衝液（ｐＨ７，ｏ）で平衡化して
おいた２４０ｄ容のセファデックス■Ｇ−１ｏｏを充填
したカラムに注入し、同緩衝液「 へ てクロマトグラフィーを行ない、溶出液を４・
２ｄずつ分画した。
溶出液の分子量は、牛血清アルブミン、鶏卵白アルブミ
ン、チトクロムＣ，インシュリンを標準にして作成した
検量線より求めた。得られた画分をアミコン社製メンブ
ランフィルタ−ＹＭ５で充分に脱塩後、凍結乾燥を行な
い、平均公刊１０万以上に相当する両分４０ｍ１ｉ１，
８万に相当する画分１１０岬、４万に相当する画分１５
６ｗｑおよび１万５千に相当する画分１００ｍ９の青色
粉末を得た。
ン、チトクロムＣ，インシュリンを標準にして作成した
検量線より求めた。得られた画分をアミコン社製メンブ
ランフィルタ−ＹＭ５で充分に脱塩後、凍結乾燥を行な
い、平均公刊１０万以上に相当する両分４０ｍ１ｉ１，
８万に相当する画分１１０岬、４万に相当する画分１５
６ｗｑおよび１万５千に相当する画分１００ｍ９の青色
粉末を得た。
本品の蒸留水で測定した紫外吸収極大は２９２ｍμであ
った。
った。
またこれらのＰＥＰ−ポリリジンのベプロマイロ
ジン含量を測定した結果を次の通りであった。
表１ ＰＥＰ−ボＩＪ ＩＪレジン中ベプロマイクン
含量１００．０００ ＋ ５．４４
７９．１チ８へ０００ １ ３．４０
７９．２％ □４Ｑ、０００ １
３．２２ ８０．１％１５．０００ １
３．１９ ８０．５％参考例 一般式〔１〕で表わされるＰＦｆＰ−ＣＭｖＬ換体の合
成 ３−（ＣＢ） −１−フェニルエテルアミノ）プロピル
アミノプレオマイシン２塩酸塩（含銅体）５００■を５
０ａｄのメタノールに溶解しグリオキンル酸ナトリウム
・水和物６６■を添加し、ついで２０■のンアノ水素化
ホウ素ナトリウムを添加した。４０℃、２０時間反応し
た後、６規定塩酸水溶液で反応液のｐＨを１．０に下げ
、１０分間放置して反応を止めた。１規定水酸化す）
ＩＪウムで中和したのち、減圧下でメタノールを留去し
、残渣に蒸留水を加えて１０！／とした。これをあらか
じめｐＨ６，８，１７２０モルリン酸緩衝液で平衡化し
たＣＭセファデックス■Ｃ−２５（Ｎａ十型：ファルマ
シア、ファインケミカル社製）を充填したカラム（１０
０ａｔ／容）に注入し吸着した。
含量１００．０００ ＋ ５．４４
７９．１チ８へ０００ １ ３．４０
７９．２％ □４Ｑ、０００ １
３．２２ ８０．１％１５．０００ １
３．１９ ８０．５％参考例 一般式〔１〕で表わされるＰＦｆＰ−ＣＭｖＬ換体の合
成 ３−（ＣＢ） −１−フェニルエテルアミノ）プロピル
アミノプレオマイシン２塩酸塩（含銅体）５００■を５
０ａｄのメタノールに溶解しグリオキンル酸ナトリウム
・水和物６６■を添加し、ついで２０■のンアノ水素化
ホウ素ナトリウムを添加した。４０℃、２０時間反応し
た後、６規定塩酸水溶液で反応液のｐＨを１．０に下げ
、１０分間放置して反応を止めた。１規定水酸化す）
ＩＪウムで中和したのち、減圧下でメタノールを留去し
、残渣に蒸留水を加えて１０！／とした。これをあらか
じめｐＨ６，８，１７２０モルリン酸緩衝液で平衡化し
たＣＭセファデックス■Ｃ−２５（Ｎａ十型：ファルマ
シア、ファインケミカル社製）を充填したカラム（１０
０ａｔ／容）に注入し吸着した。
上記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを加えることに
よりナトリウム一度を１．０モルまで徐々に上昇させる
直線濃度勾配法により溶出し０．１〜０・１５モル前後
で溶出する青色の分画５０ａｌ’ｉ集め、予め蒸留水で
充填したアンバーライト■ＸＡＤ−２（ローム・アンド
・Ｉ・−ス社製）のカラムに（１００ｓ＋ｊ容）に注入
して、目的物を吸着した。蒸留水１５０ｄでカラムをあ
らった後。
よりナトリウム一度を１．０モルまで徐々に上昇させる
直線濃度勾配法により溶出し０．１〜０・１５モル前後
で溶出する青色の分画５０ａｌ’ｉ集め、予め蒸留水で
充填したアンバーライト■ＸＡＤ−２（ローム・アンド
・Ｉ・−ス社製）のカラムに（１００ｓ＋ｊ容）に注入
して、目的物を吸着した。蒸留水１５０ｄでカラムをあ
らった後。
１０００Ｍ塩酸水溶液−）Ｉｔノー＃ （１： ａ ｖ
／ｖ）で溶出した。青色の分画を集め、陰イオン交換樹
脂、ダウエックス■４４（ＯＨ型；ザ・ダウ・ケミカル
社製）で中和したのち、減圧下で濃縮して凍結乾燥する
ことにより化合物番号１の化合物の青色粉末２７０＃ｌ
ｉ＋を得た。
／ｖ）で溶出した。青色の分画を集め、陰イオン交換樹
脂、ダウエックス■４４（ＯＨ型；ザ・ダウ・ケミカル
社製）で中和したのち、減圧下で濃縮して凍結乾燥する
ことにより化合物番号１の化合物の青色粉末２７０＃ｌ
ｉ＋を得た。
本品の融点は２１０〜２１２℃（分解）で、蒸留水で測
定した紫外吸収極大は２９２ｍμ、Ｂ１％／ １ ｃｍ
は１１８．７であった。臭化カリ錠剤法で測定した赤外
吸収極大波数（ｃＩｎ）は３４００゜１７２０＋
１６４０． １５５０． １４６０゜１３７０、
１３５０． １１！Ｓｏ、 １１００゜＋ Ｏ
６０，１０１０，９８０，９２０，７６０であった。
定した紫外吸収極大は２９２ｍμ、Ｂ１％／ １ ｃｍ
は１１８．７であった。臭化カリ錠剤法で測定した赤外
吸収極大波数（ｃＩｎ）は３４００゜１７２０＋
１６４０． １５５０． １４６０゜１３７０、
１３５０． １１！Ｓｏ、 １１００゜＋ Ｏ
６０，１０１０，９８０，９２０，７６０であった。
（効 果）
下記の試験例から明らかなように Ｈｅ Ｌａ Ｓ５細
胞に対する増殖抑制効果は１本発明のｐｉｐ−ポリリジ
ンの場合ベプロマイ７ンの５倍〜約１７２倍になってお
り１本発明のＰＥＰ−ポリリジンは非常に優れた抗癌活
性を示すことが判る。
胞に対する増殖抑制効果は１本発明のｐｉｐ−ポリリジ
ンの場合ベプロマイ７ンの５倍〜約１７２倍になってお
り１本発明のＰＥＰ−ポリリジンは非常に優れた抗癌活
性を示すことが判る。
試験例
高分子化プレオマイシンの培養ＨｅＬａ５５細胞に対す
る増殖阻害効果 プラスチック・シャーレの培養基（１０％仔牛血清添加
ＭＫＭ）にＨｅＬａ５５細胞を接種し、２日後に被験物
質ｔｍ加した。第１の実験法（長時間法）ではそのまま
、第２の実験法（短時間法）では１時間後に培養液を除
き、細胞を被験物質の入っていない新しい培養液で２回
洗浄した後新しい培養液を加えて、さらに３日間培養を
続けた後。
る増殖阻害効果 プラスチック・シャーレの培養基（１０％仔牛血清添加
ＭＫＭ）にＨｅＬａ５５細胞を接種し、２日後に被験物
質ｔｍ加した。第１の実験法（長時間法）ではそのまま
、第２の実験法（短時間法）では１時間後に培養液を除
き、細胞を被験物質の入っていない新しい培養液で２回
洗浄した後新しい培養液を加えて、さらに３日間培養を
続けた後。
、・ 細胞数を測定した。増殖阻害率は次式％式％）
〔式中、Ａは被験試料添加後３８目の最終細胞数。
Ｂは被験試料を添加しない対照における最終細胞数、Ｃ
は被験試料添加時の細胞数を表わす。〕を用いて算出し
た。試料濃度と阻止率のグラフから、工Ｃ５Ｇ値（５０
％阻害のための濃度）？］ｌ−求めた。
は被験試料添加時の細胞数を表わす。〕を用いて算出し
た。試料濃度と阻止率のグラフから、工Ｃ５Ｇ値（５０
％阻害のための濃度）？］ｌ−求めた。
その結果を表２に示す。
表２ ＰＥ１Ｐ−ポリリジン中のＨｅ Ｌａ Ｂ５細
胞に対する増殖抑制効果 Ｍ、Ｗ １００，０００ ０．００５μ？／！
１８ へｏ ｏ ｏ ｏ＋ｏ
ｏ ｓ４０．０００ ０−Ｃ
１５１５，０００Ｇ、＋６
胞に対する増殖抑制効果 Ｍ、Ｗ １００，０００ ０．００５μ？／！
１８ へｏ ｏ ｏ ｏ＋ｏ
ｏ ｓ４０．０００ ０−Ｃ
１５１５，０００Ｇ、＋６
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、〔ＢＸ〕はブレオマイシン酸残基を示す。〕で
表わされるペプロマイシンのカルボキシメチル置換体の
カルボン酸がＬ−ポリリジンのアミノ基とアミド結合し
てなるペプロマイシン−ポリリジン結合体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59226927A JPS61106517A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | ペプロマイシンのポリリジン結合体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59226927A JPS61106517A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | ペプロマイシンのポリリジン結合体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61106517A true JPS61106517A (ja) | 1986-05-24 |
Family
ID=16852780
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59226927A Pending JPS61106517A (ja) | 1984-10-30 | 1984-10-30 | ペプロマイシンのポリリジン結合体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61106517A (ja) |
-
1984
- 1984-10-30 JP JP59226927A patent/JPS61106517A/ja active Pending
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