JPS6052765A - Ｌ−アミノ酸の定量法 - Google Patents
Ｌ−アミノ酸の定量法Info
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- JPS6052765A JPS6052765A JP15976083A JP15976083A JPS6052765A JP S6052765 A JPS6052765 A JP S6052765A JP 15976083 A JP15976083 A JP 15976083A JP 15976083 A JP15976083 A JP 15976083A JP S6052765 A JPS6052765 A JP S6052765A
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は四重種型質量分析計を用いるし一アミノ酸の定
量法に関する。詳しくは、定量せんとするし一アミノ酸
の酸化酵素を、四重極質量分析計に連なり先端がガス透
過性膜で覆われたガス導入用グローブの隔膜上に取りつ
けた測定グローブを用いるＬ−アミノ酸の定量法に関す
る。
量法に関する。詳しくは、定量せんとするし一アミノ酸
の酸化酵素を、四重極質量分析計に連なり先端がガス透
過性膜で覆われたガス導入用グローブの隔膜上に取りつ
けた測定グローブを用いるＬ−アミノ酸の定量法に関す
る。
Ｌ−アミノ酸の定量法としては蛇毒由来のし一アミノ酸
の酸化酵素を用いて消費される酸素の量をマノメトリー
で測定するワールプルグ検圧法、あるいは溶存酸素電極
で測定する電極法が知られている。また最近では固定化
したＬ−アミノ酸の酸化酵素を溶存酸素電極の検知面上
に取りつけて測定する酵素電極法が用いられている。
の酸化酵素を用いて消費される酸素の量をマノメトリー
で測定するワールプルグ検圧法、あるいは溶存酸素電極
で測定する電極法が知られている。また最近では固定化
したＬ−アミノ酸の酸化酵素を溶存酸素電極の検知面上
に取りつけて測定する酵素電極法が用いられている。
これらは正確で優れた方法であるが、前者では酵素の連
続使用が困難なた。め、高価な酵素１ｉ−測定の度毎に
使用しなければならず、経済的でないうえ、測定の手間
と時間を多く要する。また酵素ケ固定化して連続的に使
用する後者の方法では酸化酵素反応によって消費する酸
素の測定器の応答性に制約があり、従ってＬ−アミノば
の測定速度も隈られたものであった。
続使用が困難なた。め、高価な酵素１ｉ−測定の度毎に
使用しなければならず、経済的でないうえ、測定の手間
と時間を多く要する。また酵素ケ固定化して連続的に使
用する後者の方法では酸化酵素反応によって消費する酸
素の測定器の応答性に制約があり、従ってＬ−アミノば
の測定速度も隈られたものであった。
本発明者は上記した実情に鑑み簡便、正確かつ迅速なＬ
−アミノ酸の定量法について研究した結果、Ｌ−アミノ
酸の酸化酵素を四重極質量分析計に連なり先端がガス透
過性膜で覆われたガス導入用ゾローブの隔膜上に取９つ
けた測定ゾロープを空気通気条件下で該当する上記のし
一アミノ酸全含有する被験液に接触せしめ、該被験液に
酸素を含む気体を導入し、該Ｌ−アミノ酸の濃度と該測
屋ローゾ近傍で消費される酸素に対応する四重種型質量
分析計の出力電流の減少筺を測定することによって、迅
速で正確かつ低コストの測定が可能でおることを発見し
、本発明を完成するに至った。
−アミノ酸の定量法について研究した結果、Ｌ−アミノ
酸の酸化酵素を四重極質量分析計に連なり先端がガス透
過性膜で覆われたガス導入用ゾローブの隔膜上に取９つ
けた測定ゾロープを空気通気条件下で該当する上記のし
一アミノ酸全含有する被験液に接触せしめ、該被験液に
酸素を含む気体を導入し、該Ｌ−アミノ酸の濃度と該測
屋ローゾ近傍で消費される酸素に対応する四重種型質量
分析計の出力電流の減少筺を測定することによって、迅
速で正確かつ低コストの測定が可能でおることを発見し
、本発明を完成するに至った。
Ｌ−アミノ酸の酸化酵素はＬ−アミノ酸を酵素によって
酸化して、２−オキシ酸、アンモニア及び過酸化水素を
生成する反応を触媒する酵素である。
酸化して、２−オキシ酸、アンモニア及び過酸化水素を
生成する反応を触媒する酵素である。
一方、四重種型質量分析計は、近年簡便かつ安価な質量
分析計として実験用のほかに現場用の〃スセン丈として
も着目され、製鉄工業（炉のガスモニター）、医療（呼
吸モニター）など種々の分野で利用されている。四重極
型質撤分析計は、分子量３００程度（理論的には６００
）までのガスの瞬時迅速測定に用いられる。
分析計として実験用のほかに現場用の〃スセン丈として
も着目され、製鉄工業（炉のガスモニター）、医療（呼
吸モニター）など種々の分野で利用されている。四重極
型質撤分析計は、分子量３００程度（理論的には６００
）までのガスの瞬時迅速測定に用いられる。
本発明では四重種型質量分析計の持つガスの迅速測定性
を利用し、Ｌ−アミノ酸の酸化酵素によって生じる酵素
の消費による出力電流の変化を測定して、Ｌ−アミノ酸
の濃［ｆ’に測定するものである。
を利用し、Ｌ−アミノ酸の酸化酵素によって生じる酵素
の消費による出力電流の変化を測定して、Ｌ−アミノ酸
の濃［ｆ’に測定するものである。
一例として本発明で使用するし一アミノ酸の酸化酵素、
その酵素源及びその調製方法を記載した文献を第１表に
示す。
その酵素源及びその調製方法を記載した文献を第１表に
示す。
第１表
以上のし一アミノ酸の酸化酵素のほかに要は、Ｌ−アミ
ノ酸を酸素により酸化する酵素であれば、いずれも本発
明で用いることができる・本発明に使用する測定用ゾロ
ーブは第１図に示すようにステンレスチー−プの先端に
細孔を有する膜の支持体（５）（焼結金属、ノクンテン
グ・メタルなど）を取付け、テフロン、シリコーンなど
のガス透過性を有する隔膜（１）でおおったもので上記
酸化酵素を水に溶解したもの（２）を、ミリポア・フィ
ルター濾紙片、ナイロン・メツシュ等の担体（３）に塗
布し、これを例えばセロファン膜等のような酵素を透過
しない微細孔を有する膜（４）で覆って第１図の如く隔
膜（１）上に取り付けることによって容易に作成するこ
とができる。また上記の酵素を例えばコラ−ダンまたは
アクリルアミド・ダル等で固定化した固定化酵素を用い
ても同様に作成することができる。
ノ酸を酸素により酸化する酵素であれば、いずれも本発
明で用いることができる・本発明に使用する測定用ゾロ
ーブは第１図に示すようにステンレスチー−プの先端に
細孔を有する膜の支持体（５）（焼結金属、ノクンテン
グ・メタルなど）を取付け、テフロン、シリコーンなど
のガス透過性を有する隔膜（１）でおおったもので上記
酸化酵素を水に溶解したもの（２）を、ミリポア・フィ
ルター濾紙片、ナイロン・メツシュ等の担体（３）に塗
布し、これを例えばセロファン膜等のような酵素を透過
しない微細孔を有する膜（４）で覆って第１図の如く隔
膜（１）上に取り付けることによって容易に作成するこ
とができる。また上記の酵素を例えばコラ−ダンまたは
アクリルアミド・ダル等で固定化した固定化酵素を用い
ても同様に作成することができる。
ここに酸素の保持層（２）を掩うための微細孔を有する
薄膜（４）としては、本発明で用いる酵素を通過せず、
酸素を自由に通過させる薄膜（４）であれば何でも良く
、例えばセロファン、動物性半透膜等の透析膜等の上記
の条件を満足するものであればすべて使用することがで
きる。尚固定化酵素膜を用いた場合は上記の薄膜（４）
は不要である。
薄膜（４）としては、本発明で用いる酵素を通過せず、
酸素を自由に通過させる薄膜（４）であれば何でも良く
、例えばセロファン、動物性半透膜等の透析膜等の上記
の条件を満足するものであればすべて使用することがで
きる。尚固定化酵素膜を用いた場合は上記の薄膜（４）
は不要である。
第１図に於て、（１）は測定グローブの隔膜（シリコー
ン膜）、（２）は酵素保持層、（３）は担体、（４）は
透析膜（セロファン膜）、（５）は細孔を有する支持体
、（６）は測定プローブ本体（ステンレスチューブ）、
（７）は四重種型質量分析計へガスを移送する導管（例
えば、ステンレスチューブ）を示す。
ン膜）、（２）は酵素保持層、（３）は担体、（４）は
透析膜（セロファン膜）、（５）は細孔を有する支持体
、（６）は測定プローブ本体（ステンレスチューブ）、
（７）は四重種型質量分析計へガスを移送する導管（例
えば、ステンレスチューブ）を示す。
第２図に示す定量システムのセットは本発明の実施態様
の１つである。第２図の（７）は測定グローブ、（９）
は７０−セル、（８） 、 （８’ ）はゴムバッキン
グ、（１０）は空気吹込口、（１１）はバッファー液注
入口、（１２）はサンプル注入口、（１３）は四重種型
質量分析計、（１４）は１／ニア−／、（１５）は４Ｗ
（ステンレスチューブ）を夫々示す。この第２図のシス
テムに従って本発明の測定法を以下に説明する。
の１つである。第２図の（７）は測定グローブ、（９）
は７０−セル、（８） 、 （８’ ）はゴムバッキン
グ、（１０）は空気吹込口、（１１）はバッファー液注
入口、（１２）はサンプル注入口、（１３）は四重種型
質量分析計、（１４）は１／ニア−／、（１５）は４Ｗ
（ステンレスチューブ）を夫々示す。この第２図のシス
テムに従って本発明の測定法を以下に説明する。
まず最初にバッファー注入口（１１）から一定の流量で
吹込口（１０）から酸素を含有する気体を吹込みながら
フローセル（９〕内に流し、四重種型質量分析計の電流
出力をレコーダー（１４）に記録する。サンプルを注入
口（１２）から注入時間５〜３０秒間で１０〜３０秒間
隔を置いて順次注入する。このサンプル液はバッファー
液で適当に希釈されフローセル（９）内に達する・フロ
ーセル（９）内ではサンプル中の該当Ｌ−アミノ酸が酸
化、酵素により酸化され酸素が消費される。
吹込口（１０）から酸素を含有する気体を吹込みながら
フローセル（９〕内に流し、四重種型質量分析計の電流
出力をレコーダー（１４）に記録する。サンプルを注入
口（１２）から注入時間５〜３０秒間で１０〜３０秒間
隔を置いて順次注入する。このサンプル液はバッファー
液で適当に希釈されフローセル（９）内に達する・フロ
ーセル（９）内ではサンプル中の該当Ｌ−アミノ酸が酸
化、酵素により酸化され酸素が消費される。
この酸素濃度の変化は隔膜（１）を通って四重種型質量
分析計の酸素に対応する質量数（３２）の電流出力を減
少させ、レコーダー（１４）に記録される。
分析計の酸素に対応する質量数（３２）の電流出力を減
少させ、レコーダー（１４）に記録される。
該電流出力の減少値と基質Ｌ−アミノ酸の濃度Ｃの間に
は良好な直線性が認められるのでこの関係を用いて被験
液のＬ−アミノ酸の濃度をめることができる。
は良好な直線性が認められるのでこの関係を用いて被験
液のＬ−アミノ酸の濃度をめることができる。
測定時の条件については、酸化酵素の種類により異なる
が、概ね測定の−は４．０〜８，０、温度は２０〜４０
℃の範囲が良く、サンプルと測定グローブとの接触時間
は５〜３０秒間で充分であシ、通常２０秒でほぼ飽和値
に達する。基質の測定濃度範囲はＯ〜１０””Ｍであり
、広い範囲の測定が可能で、該電流出力の減少値と濃度
Ｃの直線性は非常に良好である。
が、概ね測定の−は４．０〜８，０、温度は２０〜４０
℃の範囲が良く、サンプルと測定グローブとの接触時間
は５〜３０秒間で充分であシ、通常２０秒でほぼ飽和値
に達する。基質の測定濃度範囲はＯ〜１０””Ｍであり
、広い範囲の測定が可能で、該電流出力の減少値と濃度
Ｃの直線性は非常に良好である。
酸素を含有する気体とは空気、酸素ガス及び両者の混合
気体等がある。
気体等がある。
使用するバッファー液としては、クエン酸、フマル酸、
コハク酸等の有機酸バッファー、又はピリジン−塩酸バ
ッファーが用いられる。特にクロラムフェニコールＯ，
１，！９／ｌｌ、ホウ酸ソーダ（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１Ｏ
Ｈ２０）と酢酸（それぞれ２０１１／１３ ）を含有し
たホワ酸−酢酸バッファーは望ましいものである。
コハク酸等の有機酸バッファー、又はピリジン−塩酸バ
ッファーが用いられる。特にクロラムフェニコールＯ，
１，！９／ｌｌ、ホウ酸ソーダ（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１Ｏ
Ｈ２０）と酢酸（それぞれ２０１１／１３ ）を含有し
たホワ酸−酢酸バッファーは望ましいものである。
第２図では空気通気条件にするため酸素を含有する気体
を用いているが、別にこれに限定されるものではなく、
要は溶存酸素が共存していれば良いので６って、予め溶
存酸素を飽和でせたバッファー液を用いても良い。以上
の条件で使用した場合、連続使用で１力月以上活性が持
続される。例えばＬ−アミノ酸としてＬ−リジン七定址
する場合、使用酵素としてトリコデルマ・ビリデ由来の
精製酵素を用いてｐＨ７，４で３０℃の温度で測定して
見たところ、次の第１表に示すように％Ｌ−！Ｊシンを
１００％とした場合、アルギニン、オルニチン、ヒスチ
ジン以外１０％以上の感度を示すものは見当らない。
を用いているが、別にこれに限定されるものではなく、
要は溶存酸素が共存していれば良いので６って、予め溶
存酸素を飽和でせたバッファー液を用いても良い。以上
の条件で使用した場合、連続使用で１力月以上活性が持
続される。例えばＬ−アミノ酸としてＬ−リジン七定址
する場合、使用酵素としてトリコデルマ・ビリデ由来の
精製酵素を用いてｐＨ７，４で３０℃の温度で測定して
見たところ、次の第１表に示すように％Ｌ−！Ｊシンを
１００％とした場合、アルギニン、オルニチン、ヒスチ
ジン以外１０％以上の感度を示すものは見当らない。
第２表 リジン・センサーの選択性
第２表に示きれていｋい、定貴せんとするＬ−グルタミ
ン酸以外の他のＬ−アミノ酸、すなわちＬ−アラニン、
Ｌ−バリン、Ｌ−４ソロイシン、Ｌ−、（レオニン、Ｌ
−セリン、Ｌ−シスチン、Ｌ−システィン、Ｌ−グルタ
ミン酸、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−グルタミン葭、Ｌ−）
リプトファン。
ン酸以外の他のＬ−アミノ酸、すなわちＬ−アラニン、
Ｌ−バリン、Ｌ−４ソロイシン、Ｌ−、（レオニン、Ｌ
−セリン、Ｌ−シスチン、Ｌ−システィン、Ｌ−グルタ
ミン酸、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−グルタミン葭、Ｌ−）
リプトファン。
Ｌ−アス／ぐラギン酸、し−プロリン及びシんご酸、ピ
ルビン酸、グルコース、尿素、 ＤＬ−乳酸、酒石酸、
クエン酸、コハク酸、フマル酸等は全く影響が見られな
かった。
ルビン酸、グルコース、尿素、 ＤＬ−乳酸、酒石酸、
クエン酸、コハク酸、フマル酸等は全く影響が見られな
かった。
以上のように本発明方法はアミノ酸に対する選択性が良
く、かつ高精度でＬ−アミノ酸の濃度が測定できる。又
従来法に比較してその測定時間を数十分から数十秒以下
に短縮することができるので、微生物のスクリーニング
作業などの大幅な効率化が進められる。しかも使用する
測定様器も比較的安価である等の点で優れた方法である
。従って従来法より簡便でかつ正確に、目的とするＬ−
アミノ酸を定量する方法を提供するものである。
く、かつ高精度でＬ−アミノ酸の濃度が測定できる。又
従来法に比較してその測定時間を数十分から数十秒以下
に短縮することができるので、微生物のスクリーニング
作業などの大幅な効率化が進められる。しかも使用する
測定様器も比較的安価である等の点で優れた方法である
。従って従来法より簡便でかつ正確に、目的とするＬ−
アミノ酸を定量する方法を提供するものである。
実施例１゜
特開昭５７−４３６８５号公報記載のＬ−グルタミン酸
酵素２■を少量の水に溶かしイースト状とし、径１０■
のナイロン・メツシュに塗りつけ、これをセロファン膜
（４）を用いて、第１図のように四重種型質量分析計に
連らなシ、先端がガス透過性膜（シリコーン膜）（Ｅ５
０３６型、ラジオメーター社、デンマーク）でおおわれ
たガス導入用プローブのシリコーン膜（１）上に取りつ
けｃＯ この測定プローブを用いて、第２図に示すフローセル（
９）（容、ｔｏ、５ｍＢにコ９ム・バッキング（８、８
’ ） ′ｆｒ、介して挿入し、第２図のような測定シ
ステムを組立てた。
酵素２■を少量の水に溶かしイースト状とし、径１０■
のナイロン・メツシュに塗りつけ、これをセロファン膜
（４）を用いて、第１図のように四重種型質量分析計に
連らなシ、先端がガス透過性膜（シリコーン膜）（Ｅ５
０３６型、ラジオメーター社、デンマーク）でおおわれ
たガス導入用プローブのシリコーン膜（１）上に取りつ
けｃＯ この測定プローブを用いて、第２図に示すフローセル（
９）（容、ｔｏ、５ｍＢにコ９ム・バッキング（８、８
’ ） ′ｆｒ、介して挿入し、第２図のような測定シ
ステムを組立てた。
パワファー液としては、ｐＨｓ、ｏ、ホウ酸−酢酸バッ
ファー（２０，９／ＪのＮａ２Ｂ４Ｏ７”１ＯＨ２０及
び酢酸を含む）を第２図の（１１）から５ゴ／ｍｉｎの
流量で流入させ、（１０）から空気を１．０ノ／ｍｉｎ
の流量で吹込んでフローセル（９）内全通し、測定プロ
ーブ（７）は、そこでの酸素の消費量を測定するためス
テンレスチューブ（１５）ｆｆｉ介して四重種型質量分
析計（１３）、ざらＫは記録計（１４ンに接続した。測
定中、フローセル（９）内の温度は３０℃に保った。サ
ンプルは、８Ｘ１０ ＭのＬ−グルタミン酸水ｍ液及び
その希釈液を順次Ｉ ＴＩＬｔ／ ｍｉｎの速匿で、注
入時間１０秒で（１２）から注入した。このサンプルは
、バッファーにより希釈され、７０−セル（９）に流入
すると同時に、四重種型質量分析計（１３）は指示をし
はじめ、２０秒後には出力電流の減少が飽和レベル近傍
に達し、第３図のようなピークが記録された。第３図中
の各ピークの高さとグルタミン酸濃度の間には第４図の
関係が見られ、濃度０−１０”Ｍの間で非常に良好な直
線性？得た。
ファー（２０，９／ＪのＮａ２Ｂ４Ｏ７”１ＯＨ２０及
び酢酸を含む）を第２図の（１１）から５ゴ／ｍｉｎの
流量で流入させ、（１０）から空気を１．０ノ／ｍｉｎ
の流量で吹込んでフローセル（９）内全通し、測定プロ
ーブ（７）は、そこでの酸素の消費量を測定するためス
テンレスチューブ（１５）ｆｆｉ介して四重種型質量分
析計（１３）、ざらＫは記録計（１４ンに接続した。測
定中、フローセル（９）内の温度は３０℃に保った。サ
ンプルは、８Ｘ１０ ＭのＬ−グルタミン酸水ｍ液及び
その希釈液を順次Ｉ ＴＩＬｔ／ ｍｉｎの速匿で、注
入時間１０秒で（１２）から注入した。このサンプルは
、バッファーにより希釈され、７０−セル（９）に流入
すると同時に、四重種型質量分析計（１３）は指示をし
はじめ、２０秒後には出力電流の減少が飽和レベル近傍
に達し、第３図のようなピークが記録された。第３図中
の各ピークの高さとグルタミン酸濃度の間には第４図の
関係が見られ、濃度０−１０”Ｍの間で非常に良好な直
線性？得た。
一方、プレビパクテリワム・ラクトフェルメンタムＡＴ
Ｃ０１３８６９ｅ第３表の培地を用いて３０℃で通気攪
拌培養を行なった。
Ｃ０１３８６９ｅ第３表の培地を用いて３０℃で通気攪
拌培養を行なった。
第３表 培地組成（ｐＨ７，０）
得られた培養液を２０倍希釈しサンプルＡとし、これに
試薬のＬ−グルタミン酸を既知量だけ添加し、サンゾル
Ｂ、Ｃ，ＤＴｈ調製した。
試薬のＬ−グルタミン酸を既知量だけ添加し、サンゾル
Ｂ、Ｃ，ＤＴｈ調製した。
これらのサングルを第２図のシステムに従い、ビーク匝
を読み取シ標準濃度液で作つ几校正直線からＬ−グルタ
ミン酸の濃度をめた。その結果は、第４表に示す如くで
あり、各サンプルについて従来のオートアナライデー法
（力がチャ酵素を使用）で測定した値と良く一致してい
た。
を読み取シ標準濃度液で作つ几校正直線からＬ−グルタ
ミン酸の濃度をめた。その結果は、第４表に示す如くで
あり、各サンプルについて従来のオートアナライデー法
（力がチャ酵素を使用）で測定した値と良く一致してい
た。
第４表 Ｌ−グルタミン酸プロスの分析結果１実施例２
特開昭５５−７１号公報記載のＬ −ＩＪジン酸化酵素
２１ｎ９ ｔ？用いて実施例１の方法で測定プローブを
構成し、Ｌ −’）ジン発酵液Ａ、Ｂ、Ｃについてｉ、
−ＩＪジン濃ｒＫを定量したところ、第５表のごと〈
従来法の酸性ニンヒドリン法の値とよく一致したＯ 第５表 Ｌｌ！Ｊジン・プロスの分析結果実施列３゜ 特開昭５７−１４６５７３号公報記載のＬ−フェニルア
ラニン酸化酵素２ ｍ＆ ｋ用いて測定プローｆを構成
し、実施例１と同様の試料のし一グルタミン酸発酵液に
異なるＩのＬ−フェニルアラニンを添加し、それぞれ試
料Ａ、Ｂ、Ｃとし液体クロマトグラフィー法の測定陳と
比較し、次の第６表を得た。ただしバッファー液は実施
例１と同様としｐＨｔ７．０に設定したものを用いた。
２１ｎ９ ｔ？用いて実施例１の方法で測定プローブを
構成し、Ｌ −’）ジン発酵液Ａ、Ｂ、Ｃについてｉ、
−ＩＪジン濃ｒＫを定量したところ、第５表のごと〈
従来法の酸性ニンヒドリン法の値とよく一致したＯ 第５表 Ｌｌ！Ｊジン・プロスの分析結果実施列３゜ 特開昭５７−１４６５７３号公報記載のＬ−フェニルア
ラニン酸化酵素２ ｍ＆ ｋ用いて測定プローｆを構成
し、実施例１と同様の試料のし一グルタミン酸発酵液に
異なるＩのＬ−フェニルアラニンを添加し、それぞれ試
料Ａ、Ｂ、Ｃとし液体クロマトグラフィー法の測定陳と
比較し、次の第６表を得た。ただしバッファー液は実施
例１と同様としｐＨｔ７．０に設定したものを用いた。
その結果両者はよく一致していた。
第６表 プロス液中のＬ−フェニルアラニンの分析結果
実施例４゜ 特開昭５７−５０８８６号公報記載のＬ−アルギニン酸
化酵素２ダを用いてプローブを構成し実施例１と同様の
し一グルタミン酸発酵液に異なる量のＬ−アルギニンを
添加して、それぞれ試料Ａ、Ｂ、Ｃとし、本発明の方法
で定量し、一方液体クロマトグラフィーで定量してその
結果を対比して第７表に示すが、表に示すように両者は
よく一致した。尚、使用したバッファー液は実施例１と
同様であった。
実施例４゜ 特開昭５７−５０８８６号公報記載のＬ−アルギニン酸
化酵素２ダを用いてプローブを構成し実施例１と同様の
し一グルタミン酸発酵液に異なる量のＬ−アルギニンを
添加して、それぞれ試料Ａ、Ｂ、Ｃとし、本発明の方法
で定量し、一方液体クロマトグラフィーで定量してその
結果を対比して第７表に示すが、表に示すように両者は
よく一致した。尚、使用したバッファー液は実施例１と
同様であった。
第７表 プロス液中のＬ−アルギニンの分析結果実施例
５゜ 蛇毒（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ ａｔｒｏｘ ）由来のＬ−ア
ミノ酸酸化酵素（シグマ社製）１〜２■を用いて測定ゾ
ローブ全構成し、工程液中のＬ−ロイシンの分析をし、
液体クロマト法と比較した（第８表）。その結果両者は
よく一致した。
５゜ 蛇毒（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ ａｔｒｏｘ ）由来のＬ−ア
ミノ酸酸化酵素（シグマ社製）１〜２■を用いて測定ゾ
ローブ全構成し、工程液中のＬ−ロイシンの分析をし、
液体クロマト法と比較した（第８表）。その結果両者は
よく一致した。
第８表 し−ロイシンの分析結果２
第１図は本発明の方法に用いる四重極型質量分析計に連
らなシ、先端がガス透過性膜でおおわれｆｃガス導入用
プローブの隔膜上に酵素を取り付けた測定ゾａ−プの構
造説明図、図中（１）シリコーン膜又はテフロン膜、（
２）酵素担持層、（３）担体、（４）透析膜、（５）細
孔含有する膜の支持体、（６）測定プローブ本体（ステ
ンレス）。 （７）四重極型質量分析計にガスを移送する導管を示す
。 第２図は本発明の方法に使用する定量システムセットの
一態様を示−１，図中、（７）測定用グローブ、（８）
、 （８’ ）ゴム／ヤシキング、（９）フローセル
、（１０）酸素を含有する気体吹込口、（１１）バッフ
ァー液注入口、（１２）サンプル注入口、（１３）四重
種型質量分析針、（１４）レコーダー〇 第３図は実施例１のＬ−グルタミン酸水溶液及びその希
釈液の注入時間１０秒、洗滌時間２０秒とした時の四重
極型質量分析計の電流出力を示すグラフ、縦軸は電流出
力の減少直（ＸＩＯＡ ＸＡ）。 横軸は時間（分）を示す・ 第４図は第３図中のピークの高さく、Ａ）と、Ｌ−グル
タミン酸液濃度との関係を示すグラフ、縦軸は出力電流
の減少匝（ｘ １ｏ−９Ａ） 、横軸はＬ−グルタミン
酸濃度（ＸＩＯＭ）を示す。 特許出願人味の素株式会社
らなシ、先端がガス透過性膜でおおわれｆｃガス導入用
プローブの隔膜上に酵素を取り付けた測定ゾａ−プの構
造説明図、図中（１）シリコーン膜又はテフロン膜、（
２）酵素担持層、（３）担体、（４）透析膜、（５）細
孔含有する膜の支持体、（６）測定プローブ本体（ステ
ンレス）。 （７）四重極型質量分析計にガスを移送する導管を示す
。 第２図は本発明の方法に使用する定量システムセットの
一態様を示−１，図中、（７）測定用グローブ、（８）
、 （８’ ）ゴム／ヤシキング、（９）フローセル
、（１０）酸素を含有する気体吹込口、（１１）バッフ
ァー液注入口、（１２）サンプル注入口、（１３）四重
種型質量分析針、（１４）レコーダー〇 第３図は実施例１のＬ−グルタミン酸水溶液及びその希
釈液の注入時間１０秒、洗滌時間２０秒とした時の四重
極型質量分析計の電流出力を示すグラフ、縦軸は電流出
力の減少直（ＸＩＯＡ ＸＡ）。 横軸は時間（分）を示す・ 第４図は第３図中のピークの高さく、Ａ）と、Ｌ−グル
タミン酸液濃度との関係を示すグラフ、縦軸は出力電流
の減少匝（ｘ １ｏ−９Ａ） 、横軸はＬ−グルタミン
酸濃度（ＸＩＯＭ）を示す。 特許出願人味の素株式会社
Claims (1)
- 四重種型質量分析計に連なり、先端がガス透過性膜で覆
われたガス導入用グローブの隔膜上に、定量せんとする
Ｌ−アミノ酸の酸化酵素を取りつけ７ｃ測定プローブと
該Ｌ−アミノ醒全含有する被験液とを接触せしめ、該被
験液に酸素を含む気体を導入し、該Ｌ−アミノ酸の渋度
と該測定プローブ近傍で消費される酸素に対応する四重
極型質量計の出力電流の減少値との間の比例関係を利用
して該Ｌ−アミノ酸の濃度をめることからなるし一アミ
ノ酸の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15976083A JPS6052765A (ja) | 1983-08-31 | 1983-08-31 | Ｌ−アミノ酸の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15976083A JPS6052765A (ja) | 1983-08-31 | 1983-08-31 | Ｌ−アミノ酸の定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6052765A true JPS6052765A (ja) | 1985-03-26 |
Family
ID=15700661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15976083A Pending JPS6052765A (ja) | 1983-08-31 | 1983-08-31 | Ｌ−アミノ酸の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6052765A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019007588A1 (de) * | 2017-07-05 | 2019-01-10 | Anvajo GmbH | Vorrichtung und verfahren zum nachweis eines bestimmten analyten in einer flüssigen probe und verwendungen der vorrichtung |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5598348A (en) * | 1979-01-22 | 1980-07-26 | Ajinomoto Co Inc | Determining method of l-amino acid |
| JPS5921400A (ja) * | 1982-07-27 | 1984-02-03 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の測定法 |
-
1983
- 1983-08-31 JP JP15976083A patent/JPS6052765A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5598348A (en) * | 1979-01-22 | 1980-07-26 | Ajinomoto Co Inc | Determining method of l-amino acid |
| JPS5921400A (ja) * | 1982-07-27 | 1984-02-03 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の測定法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019007588A1 (de) * | 2017-07-05 | 2019-01-10 | Anvajo GmbH | Vorrichtung und verfahren zum nachweis eines bestimmten analyten in einer flüssigen probe und verwendungen der vorrichtung |
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