JPS6049800A - イノシンおよび／またはヒポキサンチン測定方法および測定用試験紙 - Google Patents
イノシンおよび／またはヒポキサンチン測定方法および測定用試験紙Info
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- JPS6049800A JPS6049800A JP15888983A JP15888983A JPS6049800A JP S6049800 A JPS6049800 A JP S6049800A JP 15888983 A JP15888983 A JP 15888983A JP 15888983 A JP15888983 A JP 15888983A JP S6049800 A JPS6049800 A JP S6049800A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、魚肉や畜肉等の経度の低下に伴い生成するイ
ノシンとヒポキサンチンを簡易かつ迅速に測定する方法
、およびこの方法に使用する試験紙に関するものである
。
ノシンとヒポキサンチンを簡易かつ迅速に測定する方法
、およびこの方法に使用する試験紙に関するものである
。
近年、生鮮食品の流通において、特に魚肉等の鮮度を科
学的に判定することが品質管理および価格の適正化の観
点から重要な問題となってきている。
学的に判定することが品質管理および価格の適正化の観
点から重要な問題となってきている。
従来から魚肉等の鮮度を判定りる指標として１、魚肉中
のトリメチルアミン、ｐＨ，揮発性塩基性窒素等を測定
することが提案されてさたが、いわゆる゛生きの良さ″
を知るうえでは必ずしも満足すべき指標とは言えない。
のトリメチルアミン、ｐＨ，揮発性塩基性窒素等を測定
することが提案されてさたが、いわゆる゛生きの良さ″
を知るうえでは必ずしも満足すべき指標とは言えない。
魚肉等の生きの良さを判定づ゛るためのより一層有効な
指標としては、動物のエネルギー源であるアデノシン三
リンＭ（ＡＴＰ）の分解生成物の消長を調べることが知
られている。アデノシン三リン酸は次のように分解し、
鮮度の低下に伴いイノシンやヒボキサンチンが生成し、
魚肉中に蓄積する。
指標としては、動物のエネルギー源であるアデノシン三
リンＭ（ＡＴＰ）の分解生成物の消長を調べることが知
られている。アデノシン三リン酸は次のように分解し、
鮮度の低下に伴いイノシンやヒボキサンチンが生成し、
魚肉中に蓄積する。
アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）→アデノシンニリン酸（
△ＤＰ）→アデノシンーリン酸（ＡＭＰ）→イノシン酸
＜ＩＭＰ）→イノシン（ＨＸ Ｒ）→ヒボキサンチン（
Ｈｘ ）従って鮮度を判定するうえで、魚肉中のイノシ
ン〈以下１−Ｉ Ｘ Ｒと略記する）とヒボキサンチン
（以下ＨＸと略記する）を定量することが重要となる。
△ＤＰ）→アデノシンーリン酸（ＡＭＰ）→イノシン酸
＜ＩＭＰ）→イノシン（ＨＸ Ｒ）→ヒボキサンチン（
Ｈｘ ）従って鮮度を判定するうえで、魚肉中のイノシ
ン〈以下１−Ｉ Ｘ Ｒと略記する）とヒボキサンチン
（以下ＨＸと略記する）を定量することが重要となる。
ｔ−１ｘＲとＨＸの簡易定量法の１つとして、本願と同
一出願人により酵素を用いる次のような方法が提案され
ており、既に特許出願されているく特願昭５７−２２５
，４９１） 、、すなわちこの先願発明は、ヌクレオシ
ドホスホリラーゼとキサンチンオキシダーぜとテトラゾ
リウム塩と１１５０１％素剤とをＨｘＲおよび／または
Ｈｘを含む試料液に作用させて、生成するホルマザン色
素の濃淡から試料液中のｔ−１ｘＲおよび／または１−
１×淵度を測定することを特徴とするものである。
一出願人により酵素を用いる次のような方法が提案され
ており、既に特許出願されているく特願昭５７−２２５
，４９１） 、、すなわちこの先願発明は、ヌクレオシ
ドホスホリラーゼとキサンチンオキシダーぜとテトラゾ
リウム塩と１１５０１％素剤とをＨｘＲおよび／または
Ｈｘを含む試料液に作用させて、生成するホルマザン色
素の濃淡から試料液中のｔ−１ｘＲおよび／または１−
１×淵度を測定することを特徴とするものである。
この先願発明で使用するヌクレオシドホスホリラーゼは
酵素分類表２・４・２・１の酵素であり、ＨＸＲをト１
×に加リン酸分解づる。一方、キサンチンオキシダーゼ
は酵素分類表１・２・３・２の酵素であり、ＨＸを酸化
して尿酸に分解する。これら２種の酵素を併用する理由
は次の通りである。すなわち魚種によってはＡＴＰを１
−１ｘまで分解するものと１４×Ｒまでしか分解しない
ものとがあり、キサンチンオキダーゼのみを使用した場
合にはＩ−ＩＸＲには作用けず従ってＨＸ Ｒ１は測定
できないが、ヌクレオシドボスホリラーゼをＯｆ用すれ
ばＨＸＲは１−１×に分解されるから、この分解により
生成された）（Ｘと試料中に本来含有されていた１−１
×との合計量がキサンチンオキシダーゼによる酸化分解
を受けて尿酸とされるのである。上述のごとき酵素反応
系に酸化還元色素であるテトラゾリウム塩を存在させで
あるから、キサンチンオキシタ＝１が（」×を尿酸に酸
化する際に同時にテトラゾリウム塩を還元してホルマザ
ン色素を生成する。
酵素分類表２・４・２・１の酵素であり、ＨＸＲをト１
×に加リン酸分解づる。一方、キサンチンオキシダーゼ
は酵素分類表１・２・３・２の酵素であり、ＨＸを酸化
して尿酸に分解する。これら２種の酵素を併用する理由
は次の通りである。すなわち魚種によってはＡＴＰを１
−１ｘまで分解するものと１４×Ｒまでしか分解しない
ものとがあり、キサンチンオキダーゼのみを使用した場
合にはＩ−ＩＸＲには作用けず従ってＨＸ Ｒ１は測定
できないが、ヌクレオシドボスホリラーゼをＯｆ用すれ
ばＨＸＲは１−１×に分解されるから、この分解により
生成された）（Ｘと試料中に本来含有されていた１−１
×との合計量がキサンチンオキシダーゼによる酸化分解
を受けて尿酸とされるのである。上述のごとき酵素反応
系に酸化還元色素であるテトラゾリウム塩を存在させで
あるから、キサンチンオキシタ＝１が（」×を尿酸に酸
化する際に同時にテトラゾリウム塩を還元してホルマザ
ン色素を生成する。
ホルマザン、色原の生成量は反応系中に存在するｆｉｘ
！によって変化し、トＩＸＭＩが多ければホルマザン色
素の生成量も増加して濃色に発色し、ＨＸｆｆｉが少な
ければホルマザン色素の生成量も減少して発色は淡くな
る。従ってホルマザン色素の濃淡を測定すれば、これか
ら反応系中のＨｘｆｆｉをめることができるのである。
！によって変化し、トＩＸＭＩが多ければホルマザン色
素の生成量も増加して濃色に発色し、ＨＸｆｆｉが少な
ければホルマザン色素の生成量も減少して発色は淡くな
る。従ってホルマザン色素の濃淡を測定すれば、これか
ら反応系中のＨｘｆｆｉをめることができるのである。
このときの反応系中のＨｘｌは試料液中の１−ＩＸＲと
ト１ｘの合計量に相当づる。
ト１ｘの合計量に相当づる。
この先願発明においては、テトラゾリウム塩としてネオ
テトラゾリウムクロライドやトリノ工二ルテ］−ラゾリ
ウムクロライドを使用するが、これらのテトラゾリウム
塩の還元によるホルマザン色素の生成反応は、反応系に
酸素が存在すると効果的に進行しないため、この測定方
法を人気下で行なえるようにするには反応系に亜硫酸ナ
トリウム等の脱酸素剤を存在させておく必要がある。
テトラゾリウムクロライドやトリノ工二ルテ］−ラゾリ
ウムクロライドを使用するが、これらのテトラゾリウム
塩の還元によるホルマザン色素の生成反応は、反応系に
酸素が存在すると効果的に進行しないため、この測定方
法を人気下で行なえるようにするには反応系に亜硫酸ナ
トリウム等の脱酸素剤を存在させておく必要がある。
しかしながら、上記先願発明の方法をより一層簡便・迅
速に実施するた−めに、濾紙等の固定化材に予め酵素と
テトラゾリウム塩と脱酸素剤とを吸収せしめた試験紙を
用いる場合には、２種類の酵素とテトラゾリウム塩とを
吸収させた酵素−色素紙と、脱酸素剤を吸収させた説酸
素紙とを各々別個に作製しなければならない。同一の固
定材に吸収させると、試験紙の作製中および保存中に脱
酸素剤による酵素の失活が起るからである。また、試験
紙を使用り−るに際しては、酵素−色素紙と脱酸素紙と
を重ね合１ま、魚肉等をホモジナイズした試料液を必ず
試験紙の脱酸素紙側から接触さセたのら酵素−色素紙側
の発色の濃淡を判定する必要がある。酵素−色素粗側か
ら接触させると、脱酸素状態でのテトラゾリウム塩の還
元ににるホルマザン色素の生成反応が確実になされない
ｊｐ ＋ろて゛ある上述したように先願発明の方法にお
いでは、特に試験紙を用いて実施する場合に、ｌｌ！ｆ
酸素剤の使用が不可欠であるがための試験紙作製−１−
あるいは使用上の繁雑さかあった。
速に実施するた−めに、濾紙等の固定化材に予め酵素と
テトラゾリウム塩と脱酸素剤とを吸収せしめた試験紙を
用いる場合には、２種類の酵素とテトラゾリウム塩とを
吸収させた酵素−色素紙と、脱酸素剤を吸収させた説酸
素紙とを各々別個に作製しなければならない。同一の固
定材に吸収させると、試験紙の作製中および保存中に脱
酸素剤による酵素の失活が起るからである。また、試験
紙を使用り−るに際しては、酵素−色素紙と脱酸素紙と
を重ね合１ま、魚肉等をホモジナイズした試料液を必ず
試験紙の脱酸素紙側から接触さセたのら酵素−色素紙側
の発色の濃淡を判定する必要がある。酵素−色素粗側か
ら接触させると、脱酸素状態でのテトラゾリウム塩の還
元ににるホルマザン色素の生成反応が確実になされない
ｊｐ ＋ろて゛ある上述したように先願発明の方法にお
いでは、特に試験紙を用いて実施する場合に、ｌｌ！ｆ
酸素剤の使用が不可欠であるがための試験紙作製−１−
あるいは使用上の繁雑さかあった。
そこで本発明は、土）ホの先願発明において不可欠てあ
つｌζ脱酸素剤を使用しなくとも、テトラゾリウム塩の
還元およびホルマザン色素の生成反応が確実かつ効果的
になされるように改良されたｌ−１ＸＲＪ３よび１−１
×の測定方法と測定用試験紙を提供することを目的どし
てなされたものである。
つｌζ脱酸素剤を使用しなくとも、テトラゾリウム塩の
還元およびホルマザン色素の生成反応が確実かつ効果的
になされるように改良されたｌ−１ＸＲＪ３よび１−１
×の測定方法と測定用試験紙を提供することを目的どし
てなされたものである。
本発明者等は、テトラゾリウム塩のなかで特に」−ドニ
トロテトラゾリウムクロライド（正式名＝２−ｐ−ヨー
ドフＪ二ニル−３−ｐ −二１〜１１ノエニルー５−フ
ェニル−２１１−テトラゾリウムクロライド）およびニ
トロブルーテトラゾリウムク［コライド（正式名： ３
．３−（３，３’−ジメ］〜キシ−４，４−ビフェニリ
レン）−ビス（２−（＋１−二１〜口フェニル）−５−
フェニル−２］」−テ［−ラゾリウムクロライド）〉を
用いた場合には、酸素が存在する状態でも還元されてホ
ルマザン色素を確実に生成づることを見出し、本発明を
完成させたのである。
トロテトラゾリウムクロライド（正式名＝２−ｐ−ヨー
ドフＪ二ニル−３−ｐ −二１〜１１ノエニルー５−フ
ェニル−２１１−テトラゾリウムクロライド）およびニ
トロブルーテトラゾリウムク［コライド（正式名： ３
．３−（３，３’−ジメ］〜キシ−４，４−ビフェニリ
レン）−ビス（２−（＋１−二１〜口フェニル）−５−
フェニル−２］」−テ［−ラゾリウムクロライド）〉を
用いた場合には、酸素が存在する状態でも還元されてホ
ルマザン色素を確実に生成づることを見出し、本発明を
完成させたのである。
すなわち本発明は、ヌクｌノオシドホスホリラーＵとキ
サンヂンＡキシダーゼとヨードニドロチ１〜ラゾリウム
クロライドまたはニトロブルーテトラゾリウムクロライ
ドから選ばれデ］−レゾリウム塩とをｔ−４ｘＲおよび
／またはトＩＸを含む試料液に作用さけて、生成り−る
ホルマザン色素の濃淡から試料中のＨＸＲおよび／また
はＩ＠Ｘ濃度を測定することを特徴とづる１−ＩＸＲお
よび／またはｆ−１ｘの測定方法である。これによって
、脱酸素剤を用いずども酸素の存在下でＨｘＲおよびＨ
Ｘの測定を効果的に行なうことがＣ′さる。
サンヂンＡキシダーゼとヨードニドロチ１〜ラゾリウム
クロライドまたはニトロブルーテトラゾリウムクロライ
ドから選ばれデ］−レゾリウム塩とをｔ−４ｘＲおよび
／またはトＩＸを含む試料液に作用さけて、生成り−る
ホルマザン色素の濃淡から試料中のＨＸＲおよび／また
はＩ＠Ｘ濃度を測定することを特徴とづる１−ＩＸＲお
よび／またはｆ−１ｘの測定方法である。これによって
、脱酸素剤を用いずども酸素の存在下でＨｘＲおよびＨ
Ｘの測定を効果的に行なうことがＣ′さる。
本発明を実施づるに際しては、先ず上記した２種類の酵
素とテトラゾリウム塩とを溶解せしめた溶液を調製する
。なお、溶液中での酵素あ活性を安定に保つため、ｌ）
ｌ−１７、５〜８のリン酸緩衝液を溶液中に添加覆る
ことが望ましい。次いで、魚肉等をホモジナイズした試
η″８１液を前記の溶液と接触せしめて数分間放置づる
。この間、酵素による試料液中の１−ＩＸＲの１」×へ
の分解、ｔ」ｘの尿酸への酸化、これに件うデ１へラゾ
リウム塩の還元が起り、可視部に吸収をもつホルマザン
色素が生成するのは上述した先願発明と同じである。な
お、上記の発色反応は必要に応じて真空状態のものでも
行なわせることができるのは勿論である。
素とテトラゾリウム塩とを溶解せしめた溶液を調製する
。なお、溶液中での酵素あ活性を安定に保つため、ｌ）
ｌ−１７、５〜８のリン酸緩衝液を溶液中に添加覆る
ことが望ましい。次いで、魚肉等をホモジナイズした試
η″８１液を前記の溶液と接触せしめて数分間放置づる
。この間、酵素による試料液中の１−ＩＸＲの１」×へ
の分解、ｔ」ｘの尿酸への酸化、これに件うデ１へラゾ
リウム塩の還元が起り、可視部に吸収をもつホルマザン
色素が生成するのは上述した先願発明と同じである。な
お、上記の発色反応は必要に応じて真空状態のものでも
行なわせることができるのは勿論である。
生成しノｃホルマザン色素の淵ｄ５を肉眼的に観察する
ことも可能であるが、より精度よく測定するには、酢酸
エチル等の抽出溶媒を用いて反応液中の不溶性ホルマザ
ン色素を抽出し、この抽出液の可視部吸収を測定づるこ
とによって発色の濃淡を判定することが望ましい。
ことも可能であるが、より精度よく測定するには、酢酸
エチル等の抽出溶媒を用いて反応液中の不溶性ホルマザ
ン色素を抽出し、この抽出液の可視部吸収を測定づるこ
とによって発色の濃淡を判定することが望ましい。
本発明はまた、先願発明と同様に、酵素とテトラゾリウ
ム塩とを予め吸収せしめた試験紙を用いることによって
、より一層簡便、迅速に実施づることかできる。。′？
Ｉなわち、２種類の酵素とテトラゾリウム塩とを水溶液
にして濾紙等に吸収さゼだのち、酵素の失活を防ぐため
凍結真空乾燥（幾を用いて乾燥し試験紙を作製する。
ム塩とを予め吸収せしめた試験紙を用いることによって
、より一層簡便、迅速に実施づることかできる。。′？
Ｉなわち、２種類の酵素とテトラゾリウム塩とを水溶液
にして濾紙等に吸収さゼだのち、酵素の失活を防ぐため
凍結真空乾燥（幾を用いて乾燥し試験紙を作製する。
なおこの場合にも、酵素の活性を安定に保つためリン酸
緩衝液を用いたり、さらには酵素の失活を防ぐために酸
化防止剤および安定剤を水溶液中に添加しておくことが
望ましい。
緩衝液を用いたり、さらには酵素の失活を防ぐために酸
化防止剤および安定剤を水溶液中に添加しておくことが
望ましい。
かくして得られた試験紙を使用するに際しては、魚肉等
をホモジナイズした試料液を試験紙に接触さけて５〜１
０分間放置後、試験紙の発色の濃淡を判定する。試験紙
上の発色の濃淡は色票などを用いて肉眼的に容易に判定
覆ることができ、色票の読みとＨＸ Ｒ，ＨＸの濃度と
の関係を予めめておりば、色票の読みから試料液中のｌ
−１ｘ Ｒ、ｌ−ｌ ｘ淵■を定量することができる。
をホモジナイズした試料液を試験紙に接触さけて５〜１
０分間放置後、試験紙の発色の濃淡を判定する。試験紙
上の発色の濃淡は色票などを用いて肉眼的に容易に判定
覆ることができ、色票の読みとＨＸ Ｒ，ＨＸの濃度と
の関係を予めめておりば、色票の読みから試料液中のｌ
−１ｘ Ｒ、ｌ−ｌ ｘ淵■を定量することができる。
試験紙作製用の固定化＋Ａとしては濾紙以外にもゼラチ
ンやコラーゲン等を必要に応じ（使用することができる
。
ンやコラーゲン等を必要に応じ（使用することができる
。
以」この説明かられかるように本発明方法によれば、テ
トラゾリウム塩として酸素存在下でも還元されてホルマ
ザン色素を生成しうる］ −１’ニトロ７ ｔ−ラゾリ
ウムクロライ［一または二］−ロプルーチー１−ラゾリ
ウムク１コライドを用いたｈ冒ろ、脱酸素剤を使用ゼず
ともＨＸＲおよＵ’ Ｈｘの測定を効果的に行なうこと
ができる。特に試験紙を用いて本発明を実施するに際し
Ｃは、Ｉｌｉ’を酸素剤を用いる先願発明の場合のよう
に酵素−色素紙と脱酸素紙とを別個に作製覆る必要やこ
れらを重ね合せて脱酸素紙側から試料を接触させたりづ
゛る必要がなく、酵素と１１〜ラゾリウム塩どを同一の
固定化材に吸収さけた単一の試験紙を作製し使用づれば
よいという利点がある。
トラゾリウム塩として酸素存在下でも還元されてホルマ
ザン色素を生成しうる］ −１’ニトロ７ ｔ−ラゾリ
ウムクロライ［一または二］−ロプルーチー１−ラゾリ
ウムク１コライドを用いたｈ冒ろ、脱酸素剤を使用ゼず
ともＨＸＲおよＵ’ Ｈｘの測定を効果的に行なうこと
ができる。特に試験紙を用いて本発明を実施するに際し
Ｃは、Ｉｌｉ’を酸素剤を用いる先願発明の場合のよう
に酵素−色素紙と脱酸素紙とを別個に作製覆る必要やこ
れらを重ね合せて脱酸素紙側から試料を接触させたりづ
゛る必要がなく、酵素と１１〜ラゾリウム塩どを同一の
固定化材に吸収さけた単一の試験紙を作製し使用づれば
よいという利点がある。
以１ｑに実施例を挙げて本発明をさらに説明づる。
実ｊｌ！ｉ例１゜
１０ｎ＋Ｍ臼−ドニＩ−［］］テ１−ランリウｌり［］
ライト ０．１ｍ、Ｇ、ギサンｙ−ンＡキシターゼ０．
１酵素単位、ヌク１ノＡシトボスホリラーゼｏ 、 ４
６１素単位を混合し、さらにｒｌＨ７，Ｉｌｌのリン酸
緩衝液で定量とした。この７１７合溶液中のＨｘＲまた
はト１×淵庶がそれぞれ２，５，１０．２０．４０゜６
０μＭＰｉ！度どなるように基質溶液を添加して敢冒し
、上記テトラゾリウム塩の）２元により生成−するさと
色不溶性小ルマリ゛ンを牛或さけた。次いでこの溶液に
同量の［ｌｉ１′酸■デルを加え（振とうし、発色不溶
性ボルンリ“ンを酢酸王デル相に抽出させ、この抽出液
の吸光度を５０５ｎｍの波長で測定した。ＨｘＷａＩｕ
と吸光度との関係を第１図に、ＨＸ Ｒ４１！麿と吸光
度どの関係を第２図に示覆。
ライト ０．１ｍ、Ｇ、ギサンｙ−ンＡキシターゼ０．
１酵素単位、ヌク１ノＡシトボスホリラーゼｏ 、 ４
６１素単位を混合し、さらにｒｌＨ７，Ｉｌｌのリン酸
緩衝液で定量とした。この７１７合溶液中のＨｘＲまた
はト１×淵庶がそれぞれ２，５，１０．２０．４０゜６
０μＭＰｉ！度どなるように基質溶液を添加して敢冒し
、上記テトラゾリウム塩の）２元により生成−するさと
色不溶性小ルマリ゛ンを牛或さけた。次いでこの溶液に
同量の［ｌｉ１′酸■デルを加え（振とうし、発色不溶
性ボルンリ“ンを酢酸王デル相に抽出させ、この抽出液
の吸光度を５０５ｎｍの波長で測定した。ＨｘＷａＩｕ
と吸光度との関係を第１図に、ＨＸ Ｒ４１！麿と吸光
度どの関係を第２図に示覆。
第１図および第２図のグラフかられかるように、本発明
の測定方法によつｃＨｘＲまたはＨｘを可視部の発色で
、しかも大気下で精度よく定ｆｆ１−Ｊることが可能で
ある。
の測定方法によつｃＨｘＲまたはＨｘを可視部の発色で
、しかも大気下で精度よく定ｆｆ１−Ｊることが可能で
ある。
実施例２゜
１０１１Ｍニトロブルーテトラゾリウムクロライド０．
１…Ω、キザンヂンオキシダーヒ０．１酵素型位、ヌク
レオシドホスポリラーゼ０．４酵素型位を混合し、さら
にｐＨ７，８のリン酸緩衝液で一定量とした。この混合
溶液中のｌ−Ｉ Ｘ Ｒまたは１−１ｘ淵度がそれぞれ
２，５．１０．２０，４０゜６０μＭ程度となるように
基質溶液を添加１〕Ｔ放置し、上記テトラゾリウム塩の
１７元に」、り生成する発色不溶性ホルマザンを生成さ
けた。次いでこの溶液に同量のｎ酸エチルを加えて振と
うし、発色不溶性ホルマ蚤アンを酢酸エヂル相に抽出さ
せ、この抽出液の吸光度を５５０１１ｍの波長で測定し
た。１−ＩＸ Ｒ１１度と吸光度との関係を第３図に、
ＨＸｉｌ１度と吸光度との関係を第４図に示す。
１…Ω、キザンヂンオキシダーヒ０．１酵素型位、ヌク
レオシドホスポリラーゼ０．４酵素型位を混合し、さら
にｐＨ７，８のリン酸緩衝液で一定量とした。この混合
溶液中のｌ−Ｉ Ｘ Ｒまたは１−１ｘ淵度がそれぞれ
２，５．１０．２０，４０゜６０μＭ程度となるように
基質溶液を添加１〕Ｔ放置し、上記テトラゾリウム塩の
１７元に」、り生成する発色不溶性ホルマザンを生成さ
けた。次いでこの溶液に同量のｎ酸エチルを加えて振と
うし、発色不溶性ホルマ蚤アンを酢酸エヂル相に抽出さ
せ、この抽出液の吸光度を５５０１１ｍの波長で測定し
た。１−ＩＸ Ｒ１１度と吸光度との関係を第３図に、
ＨＸｉｌ１度と吸光度との関係を第４図に示す。
第３図および第４図のグラフかられかるように、本発明
の測定方法によってｔｌｘＲまたはＨＸを可視部の発色
で、しかも大気上て精度よく定量することが可能である
。
の測定方法によってｔｌｘＲまたはＨＸを可視部の発色
で、しかも大気上て精度よく定量することが可能である
。
実施例３゜
ｐｔ−１７，８のリン酸緩衝液５ｍρ、ヨードニ１〜［
１テ］−ラゾリウムクロライド０．１ｍ ｍｏｌｅｓ
、キサンチンオキシダーゼ１０酵素単位、ヌクレオシド
ボスホリラーゼ２０酵素単位、ショ糖（安定剤）１ｇ、
１％メルノノブ１〜土ツタノール酸化防止剤） ０．２
…Ωに水を加えて１５ｎｌとし酵素−色素溶液を調製し
た。この溶液をクロマミル用逼紙に吸収させたのら、凍
結真空乾燥して本発明の試験紙を作製した。
１テ］−ラゾリウムクロライド０．１ｍ ｍｏｌｅｓ
、キサンチンオキシダーゼ１０酵素単位、ヌクレオシド
ボスホリラーゼ２０酵素単位、ショ糖（安定剤）１ｇ、
１％メルノノブ１〜土ツタノール酸化防止剤） ０．２
…Ωに水を加えて１５ｎｌとし酵素−色素溶液を調製し
た。この溶液をクロマミル用逼紙に吸収させたのら、凍
結真空乾燥して本発明の試験紙を作製した。
ｌ−１ｘＲまたは１−１ｘ瀧度がそれぞれ０，０２ 。
０．０５ 、Ｏ，＋０ 、 ０，１５ 、 ０，２０
、 ０．３０ 。
、 ０．３０ 。
０ 、４ ｆｌ Ｉｌｌ Ｍとなるように調製した基質
溶液を本発明試験紙に滴下し、５〜１０分後に試験紙の
発色（７１ＧＨＷヲ色ｉ （Ｊ Ｉ ８ ７−８７２１
） ヲ用イｃ測定した。結果を第１表に示す。
溶液を本発明試験紙に滴下し、５〜１０分後に試験紙の
発色（７１ＧＨＷヲ色ｉ （Ｊ Ｉ ８ ７−８７２１
） ヲ用イｃ測定した。結果を第１表に示す。
第１表かられかるように、本発明試験紙によればｌ」ｘ
Ｒまｌζは１−１ｘ澗麿を試験紙の発色（可視部の赤紫
色）の濃淡によって測定覆ることができる。
Ｒまｌζは１−１ｘ澗麿を試験紙の発色（可視部の赤紫
色）の濃淡によって測定覆ることができる。
第１表
実施例４゜
鯉を即殺後氷冷保存し、一定時間経過づる毎に試料を採
取し、この試料の９イ８鼻の水を加えてホモジナイズし
て試＃ｌ ’ｔａを調製した。この試料液を実施例３で
作製した本弁明試験紙に滴］・し、実施例３と同様にし
て試験紙の発色のｉｌｔ淡を色票を用いて測定し、色票
の読みから試料液中のＨｘＲと１１×の合計量濃度をめ
た。結果を第２表に示づ。
取し、この試料の９イ８鼻の水を加えてホモジナイズし
て試＃ｌ ’ｔａを調製した。この試料液を実施例３で
作製した本弁明試験紙に滴］・し、実施例３と同様にし
て試験紙の発色のｉｌｔ淡を色票を用いて測定し、色票
の読みから試料液中のＨｘＲと１１×の合計量濃度をめ
た。結果を第２表に示づ。
上記の本発明試験紙を用いた測定と並行して、従来のカ
ラム法を用いて１−ＩＸＲとｌ−Ｉ ＸのｆＡ度を測定
した。このカラム法による測定においては、上記で調製
し！、：試料液を過塩素酸処理して除タンパクしたのち
、イオン交換樹脂（強塩基性陰イオン交換樹脂）を充填
したカラムで分離分画後、紫外部の吸光度を測定づるこ
とによって試料液中のＨＸＲとＨＸの合８１量淵葭をめ
た。
ラム法を用いて１−ＩＸＲとｌ−Ｉ ＸのｆＡ度を測定
した。このカラム法による測定においては、上記で調製
し！、：試料液を過塩素酸処理して除タンパクしたのち
、イオン交換樹脂（強塩基性陰イオン交換樹脂）を充填
したカラムで分離分画後、紫外部の吸光度を測定づるこ
とによって試料液中のＨＸＲとＨＸの合８１量淵葭をめ
た。
結果を第２表に併記Ｊ−る。
第２表
第２表かられかるように、本発明試験紙を用いる方法は
カラム法よりも精度は劣るが、現場においてきわめて簡
易にしかも迅速に行なえるため、流通過程にお（）る魚
肉の鮮度の良否判定にイｊ効に利用できるものである。
カラム法よりも精度は劣るが、現場においてきわめて簡
易にしかも迅速に行なえるため、流通過程にお（）る魚
肉の鮮度の良否判定にイｊ効に利用できるものである。
実施例５、
小売店にて販売されているサンマ、マイワシ。
マザバ、サケ、マグロおよびハマチの生身６種類１４検
休の試料（試料￥Ｒ号Ｎｏ、 １〜Ｎｏ、 １４ ）か
ら筋肉部を採取し、実施例４ど同様にしてそれぞれの試
料液を調製した。
休の試料（試料￥Ｒ号Ｎｏ、 １〜Ｎｏ、 １４ ）か
ら筋肉部を採取し、実施例４ど同様にしてそれぞれの試
料液を調製した。
これらの試料液中のｌ」ｘＲとＨｘの合計濃度を、実施
例３で得た本発明試験紙による方法と従来のカラム法を
用いて実施例４と同様にして測定した。゛ さらに、本発明試験紙法と従来のカラム法を用いてに値
〈鮮度恒数）をめた。１く値は特に魚類の生鼾度判定の
尺度となるもので、総ＡＴＰ関連化合物（ＡＴＰ、△Ｄ
Ｐ、△ＭＰ、、ＩＭＰ、 １−１ｘ Ｒ，ｆ］ｘ ）全
量に対するｌ−ｌ ｘ Ｒ−＋−ｔ−１ｘ量の百分率で
あり、次式によって算出されるニドＩＸ Ｒ＋１−ＩＸ Ｋ（％）＝ Ｘ１００ △ＴＰ＋ＡＤＰ＋ＡＭ＋）＋ＩＭＰ＋ＨＸ Ｒ＋ＨＸな
お、カラム法によるに値は、個々に総△ＴＰＩ！］連化
合物濃度を測定して算出したが、本発明試験紙法による
１（値の算出は、一本実施例で用いた以外の魚種旬の試
料について予め総ＡＴＰ関連化合物濃度を測定し、この
平均値を上式の分母として用いた。
例３で得た本発明試験紙による方法と従来のカラム法を
用いて実施例４と同様にして測定した。゛ さらに、本発明試験紙法と従来のカラム法を用いてに値
〈鮮度恒数）をめた。１く値は特に魚類の生鼾度判定の
尺度となるもので、総ＡＴＰ関連化合物（ＡＴＰ、△Ｄ
Ｐ、△ＭＰ、、ＩＭＰ、 １−１ｘ Ｒ，ｆ］ｘ ）全
量に対するｌ−ｌ ｘ Ｒ−＋−ｔ−１ｘ量の百分率で
あり、次式によって算出されるニドＩＸ Ｒ＋１−ＩＸ Ｋ（％）＝ Ｘ１００ △ＴＰ＋ＡＤＰ＋ＡＭ＋）＋ＩＭＰ＋ＨＸ Ｒ＋ＨＸな
お、カラム法によるに値は、個々に総△ＴＰＩ！］連化
合物濃度を測定して算出したが、本発明試験紙法による
１（値の算出は、一本実施例で用いた以外の魚種旬の試
料について予め総ＡＴＰ関連化合物濃度を測定し、この
平均値を上式の分母として用いた。
結果を第３表に示す。これらの結果かられかるように、
本発明試験紙法による数値はカラム法による数値と実質
的に一致しており、このことから、本発明試験紙法によ
って魚肉のＨＸＲとＨＸの合計濃度ａ３よびに値をきわ
めて簡便。
本発明試験紙法による数値はカラム法による数値と実質
的に一致しており、このことから、本発明試験紙法によ
って魚肉のＨＸＲとＨＸの合計濃度ａ３よびに値をきわ
めて簡便。
迅速に測定できることがわかる。
第３表
第１図は、ヨードニド！］アトラゾリウムクロライドを
用いて本発明ノ）法により反応液中に生成した発色不溶
性ホルマザン色素を酢酸Ｊ−デルで抽出し！、二仙出液
の波長５０５１１ｍにお（Ｊる吸光度ど１〜］Ｘ１１＆
度との関係を示すグラノであり、第２図（よ第１図（ご
・１メけると同様にしで測定した吸光度ど）（ｘ ＲＧ
度どの関係を示すグラノである。 第３図は、二１〜［二１ブルーデトラゾリウムクロシイ
ドを用いて第１図と同様にして抽出し抽出液の波長５５
０ｎｎｌにお（〕る吸光麿どｔ−１ｘ’Ｒ澗度との関係
を示すグンフであり、第４図は第３図におけると同様に
し−（測定した吸光度とＨＸｉｌ＋Ａ度どの関係を示リ
グラフである。 特許出願人 株式会社 環境分析センター代 理 人
尾 股 行 離 間 茂 児 穣 同 荒 木 友之助 第１図 Ｈｘｊ縫（ＰＭ） 第２図 ＨｘＲ凛度（ＪＪＭ） 第３図 ＨＸＲ；ｉ／Ｌ（ＰＭ ） 第４図
用いて本発明ノ）法により反応液中に生成した発色不溶
性ホルマザン色素を酢酸Ｊ−デルで抽出し！、二仙出液
の波長５０５１１ｍにお（Ｊる吸光度ど１〜］Ｘ１１＆
度との関係を示すグラノであり、第２図（よ第１図（ご
・１メけると同様にしで測定した吸光度ど）（ｘ ＲＧ
度どの関係を示すグラノである。 第３図は、二１〜［二１ブルーデトラゾリウムクロシイ
ドを用いて第１図と同様にして抽出し抽出液の波長５５
０ｎｎｌにお（〕る吸光麿どｔ−１ｘ’Ｒ澗度との関係
を示すグンフであり、第４図は第３図におけると同様に
し−（測定した吸光度とＨＸｉｌ＋Ａ度どの関係を示リ
グラフである。 特許出願人 株式会社 環境分析センター代 理 人
尾 股 行 離 間 茂 児 穣 同 荒 木 友之助 第１図 Ｈｘｊ縫（ＰＭ） 第２図 ＨｘＲ凛度（ＪＪＭ） 第３図 ＨＸＲ；ｉ／Ｌ（ＰＭ ） 第４図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヌクレオシドホスホリラーゼとキリーンチーンオキ
シダーゼとヨードニドロチトラゾリウムクロライドまた
はニトロプループトラゾリウムクロライドｌ）＋ ＋ろ
選ばれたテトラゾリウム塩とをイノシンおよび／または
ヒボキサンチンを含む試料液に作用させて、生成するホ
ルマザン色素の発色の濃淡から前記試料液中のイノシン
および／またはヒポギサンヂンｉｌＡ度を測定覆ること
を特徴とするイノシンおよび／またはヒボキサンチンの
測定方法。 ２、ヌクレオシドホスホリラーゼとキサンチンオキシダ
ーゼと前記テトラゾリウム塩とを含む溶液を前記試料液
と接触させ、生成するホルマザン色素の発色の濃淡を吸
光度によって測定する特許請求の範囲第１項記載の方法
。 ３、ヌクレオシドホスホリラーゼとキサンチンオキシダ
ーゼと前記テトラゾリウム塩とを固定化材に保持せしめ
て酵素−色素固定化物を作製し、この酸素−色素固定化
物に前記試料液を浸したのち、この酵素−色素固定化物
に生成づるホルマザン色素の発色の濃淡を肉眼的に測定
づる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、ヌクレオシドホスホリラーゼとキサンチンオキシダ
ーゼとヨービニ１〜ロチトラゾリウムクロライドまたは
ニトロブルーテトラゾリウムクロライドから選ばれたテ
トラゾリウム塩とを固定化材に保持せしめた酵素−色素
固定化物からなることを特徴と覆るイノシンＪ３よび／
またはヒボキ→ノンチン測定用試験紙。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15888983A JPS6049800A (ja) | 1983-08-30 | 1983-08-30 | イノシンおよび／またはヒポキサンチン測定方法および測定用試験紙 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15888983A JPS6049800A (ja) | 1983-08-30 | 1983-08-30 | イノシンおよび／またはヒポキサンチン測定方法および測定用試験紙 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6049800A true JPS6049800A (ja) | 1985-03-19 |
| JPS6250120B2 JPS6250120B2 (ja) | 1987-10-22 |
Family
ID=15681592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15888983A Granted JPS6049800A (ja) | 1983-08-30 | 1983-08-30 | イノシンおよび／またはヒポキサンチン測定方法および測定用試験紙 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6049800A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997039352A1 (en) * | 1996-04-15 | 1997-10-23 | Fox Chase Cancer Center | Assays for detection of purine metabolites |
| EP2351849A1 (en) * | 2008-10-17 | 2011-08-03 | Tokyo University of Marine Science and Technology | Reagent kit for measuring freshness |
-
1983
- 1983-08-30 JP JP15888983A patent/JPS6049800A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997039352A1 (en) * | 1996-04-15 | 1997-10-23 | Fox Chase Cancer Center | Assays for detection of purine metabolites |
| EP2351849A1 (en) * | 2008-10-17 | 2011-08-03 | Tokyo University of Marine Science and Technology | Reagent kit for measuring freshness |
| EP2351849A4 (en) * | 2008-10-17 | 2013-10-30 | Tokyo University Of Marine Science And Technology | REAGENT KIT FOR FRESH MEASUREMENT |
| JP2016101176A (ja) * | 2008-10-17 | 2016-06-02 | 国立大学法人東京海洋大学 | 鮮度測定用試薬キットの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6250120B2 (ja) | 1987-10-22 |
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