JPS6049796A - ネオコピアマイシンａとその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質、特にネオコピアマイシ：／　
Ａ　（ｎｅｏｃｏｐｉａｍｙｃｉｎ　Ａ）と命名された
抗生物質、及びこれを製造する方法に関するものである
。

本発明者らは、コピアマイシン生産菌としてストレプト
ミセス・ハイグロスコピクス・バール・クリスタロケ゛
−ネスと命名された公知の放線菌（日本特公昭４１−１
５５１９号公報：Ｊ、Ａｎｔｉ−’　ｂｉｏｔｉｃｓ、
　１Ｂ、　２．６３−６７、１９６５　）　ＩＦＭ１ｉ
１’、３６株がコピアマイシンより更に抗菌力の優れた
新規抗性７２１０号（ＦＩＲＭ　Ｐ−７２１０）として
寄託した。この閑は次のような菌学的性質を有する。

（１）形態 本菌は固型培地中に断裂しない栄養菌糸を生育し、特定
の培地では豊富な気菌糸を着生する。気菌糸は多数の分
岐を行い、その末噛は４〜６回転のコンパクトなラセン
を形成する。この気菌糸の先端は１０個以上のレンサ状
の分生胞子よりなっている。分生胞子は楕円及び短円柱
状であり、大きさは１．０〜２．０　Ｘ　１．０〜１，
２μ、電子顯微鏡的にはその表面は凹凸があるが（Ｗａ
ｒｔｙ）、特異な刺状突起も髪状生成物も観察されない
。

放線菌同定用の各種培地上の発育所見は次の如くである
。なお色調の判定はメルノ・アンド・ボウルズのディク
ショナリイ・オブ・カラー（マツフグロウ・ヒル社、１
９５０年発行）によった。

また使用培地は放線菌培地マニュアルの記載処方による
（ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ａｃｔｉｎｏ
ｍｙｃｅｔｅｓ、日本放線菌研究会、１９７５）。

１）シュークロース・ナイトレイト寒天培地：淡黄色か
ら褐色を帯びたしわ状の発育をなし、旧い培養では表面
に亀裂を生ずる（ＰＬ　）。白１２−Ｄ−３ 色の気菌糸を着生するが、分生胞子の成熟とともに、灰
白色となる＜　ＰＩ、　３ｌ−Ａ−１）。

旧い培養では、この気菌糸はところどころ湿潤し黒色の
斑点あるいは、白黒のモザイク状の外観を呈する。可溶
性色素の生産はないが、極く薄い褐色調の色素が生産さ
れる。

２）グルコース・アスパラギン寒天培地：レモン黄色か
ら褐色を帯びた集落を形成し、菌糸は深く培養基中に侵
入する。集落は扁平孤立し、白色から薄い黄灰色（ＰＬ
　１Ｏ−Ｆ−３）、次いで灰色から灰黒色綿状の気菌糸
を着生する。気菌糸の湿潤は遅く出現する。可溶性色素
の生産はない。

３）栄養嫁天培地： 孤立した集落を形成し、栄養菌糸は黄褐色で表面は盛り
土シ、小量の白色粉状の気菌糸を着生する。集落の周辺
には、ひだが入る。可溶性色素の生産は見られない。

４）イースト抽出液肉汁寒天培地： 黄褐色の孤立した集落を形成し、その中央は陥没する。

周辺には放線状のひだが生じ、花弁状の外観を呈する。

気菌糸は白色からやや灰色を帯びる。可溶性色素の生産
はない。

５）馬鈴薯のくさび培地。

薄い灰褐色のしわの多い２集落として旺盛に発育し、表
面にわずかに白色の気菌糸を着生する。くさびの色調は
変らない。

６）人参のくさび培地： 淡黄褐色の発育をし、表面に白色からやや緑黄色の色調
を帯びた気菌糸を着生する。くさびの色調に変化はない
。

７）リ　トマスミルり培地コ 淡クリーム色の表面薄層として発育し、白色の気菌糸を
着生することもある。

８）ゼラチン培地： 薄い褐色の発育をし、ゼラチン液化力は強い。

可溶性の色素の生産はない。

９）血液寒天培地： 緑褐色、円形、盛り上った発育をし、表面は平滑で、周
辺はしわを生じ、気菌糸の着生はない。

可溶性色素の生産はない。

１０）リンゴ酸・カルシウム寒天培地：黄褐色から、暗
褐色の発育で表面は比較的平坦な円形集落を形成する。

気菌糸は、灰白色から緑黄色１．粉状である。薄い黄緑
色の可溶性色素の生産がみられる。

１１）チロシフ寒天培地： 扁平な大集落を形成し、赤褐色から殆んど黒色発育をな
す。気菌糸は粉状、灰白色である。薄いピンク色の可溶
性色素を生産するが、チロシナーゼ生成は陰性である。

１２）セルロース培地： セルロースを唯一の炭素源とした合成培養液で発育しな
い。

１３）　Ｈ，Ｓの生産はみられない。（ワックスマン、
はプトン鉄寒天） １４）硝酸塩の還元は陰性である。

１５）デンプン分解力は中等度である。

常法に従いプリダムの合成培養基中に各種の糖類を含有
せしめて、炭素源利用能を検すれば次の如くである。

グルコース、アラビノース、フルクトース、うクトース
、マルトース、シュークロース、イノジット、ラフィノ
ースを旺盛に利用し、ガラクトース、ラムノース、キシ
ロース、イヌリン、アトニット、ズルシット、マンニッ
ト、ソルビット、コハク酸ソーダ、クエン酸ソーダをや
や利用し、酢酸ソーダは全く利用できない。以上の諸性
状から、本菌１．ＦＭ１１３６株をパーシス、マニュア
ル、オプ、デターミナテイブ、バクテリオロジイ（第８
版、１９７４）　ワックスマンのザ・アクチノミセーテ
ス第２巻、（米国、ウィリアムス・アンド・ウイルキン
ス社、１９６２年）及びプリーダムの論文、（アプライ
ド、マイクロバイオロジイ、６，５２゜１９５８）　新
井、（アクチノミセーテス　ザ・パウンタリーマイクロ
オルガニスム、トツパン出版、１９７６）並びに、その
後に発表された内外の文献に照合して既知両種との比較
、同定を行えば、分類の最重要点となるべき、形態的特
徴からは本菌は、１）気菌糸にう七ンを形成するスピン
（ｓｐｉｒａ）に属し、２）蛋白質合成培地で黒褐色の
可溶性色素の生産がなく、チロシナーゼ陰性であるから
、ノンークロモヂエニツク（ｎｏｎ−ｃｈｒｏｍｏｇｅ
ｎｉｃ）のタイプに属せしめるべきことは明らかである
。

６）本菌、Ｉ　ＦＭｌ　１６６株の合成培養基上の気菌
糸の色調は、培養の時期、合成培地の種類によって多少
異なるにしても、いずれも灰色を基調としている。

この５大特徴を備える既知菌種は、ストレプトマイセス
・ミタカエンシス（ミカマイシン生産菌）、フンギシデ
イクス（ファンギサイジン生産菌）、アルボグリセウス
（ネオマイシン生産菌）、シュードグリゼオシス（キサ
ントマイシン生産菌）、アトロオリバセウス（ムトマイ
シン生産菌）、ラトガーセンシス（キサントマイシン、
ルチン／、カカオマイシン生産菌）、チャッタヌーゲン
シス（テネセチン生産菌）、ビオラセウス（アクチノロ
ヂンその他の生産菌）、カーヌス（アンフオマイシン生
産菌）、ノードズス（アンホテリシン生産菌）、グリセ
ウス・バリアント・スピラーリス（７、＜　ｚ’！ルト
シン生Ｓｔ菌）、）ヨカエンシス（トヨカマイシン生産
菌）、ハルステンデイ（カカオマイシン生産菌）、カカ
オイ（カカオマイシン生産Ｈ）　、ツベルシデイクス（
ツベルシジン生産Ｕｎ）、フミヅス（デヒドロストレプ
トマイシン生産菌）、エンダス（エンドマイシン生１ａ
菌）、　ノ１イグロスコピクス及びその変種（アンゲス
トマイシン、デコイニン、その他の抗生物質生産菌、プ
ラテンシス（オキシテトラサイクリン生産菌）が見出さ
れる。このうち合成培地上の発育が褐色乃至黒色のラト
ガーセンシス、ハルステンデイ、赤からｔ　色のヴィオ
ラセウス、紫褐色のツベルシデイクス、濃オレンジ色の
可溶性色素を合成培地上で生成するチャタヌーゲンシス
、同じくコノ・り色の色素を生成するカーヌスとは、先
づ直ちに識別することができる。カカオイは、そのラセ
ンが長いオープン・スパイラルであり、その合成培地上
における発育は赤褐色でちシ、トヨカエンシス、アトロ
オリバセウスはその胞子表面に刺状突起を有することか
ら本菌と明らかに識別される。アルボグリセウスは、胞
子の表面に毛裳状突起物を有している。

従って、ミタカエンシス、フンギシテイクス、ノドーズ
ス、グリセウス・バリアント・スピラーリス、フミツス
、エンダス、ハイグロスコピクス及びその他の変種、プ
ラテンジス、シュードクリゼオシスが更に詳細に比較検
討さるべき菌種である。

このうち、ミタカエンシスはリンゴ酸カルシウム、グリ
セロール寒天培地上の気菌糸が白色乃至黄白色、チロシ
ン寒天培地上の無色の発育、気菌糸の生じない点、シュ
ークロース・ナイトレイト寒天、グルコース・アスパラ
ギン寒天の各培地上の気菌糸は灰黒色にならず、又合成
培養基上での発育は暗褐色となるなどの点で本菌Ａｌ８
９８株と異る。又記載のいずこにも気菌糸の湿潤する特
徴はみられない。

フンギシデイクスは、合成培地上の発育が無色であり、
リンゴ酸カルシウム上の気菌糸が緑黄色でなく灰色であ
り、馬鈴薯のくさびで黒褐色の可溶性色素を生成し、硝
酸塩の還元が陰性である点で明らかに異なシ、ノドーズ
スは、シュークロース・ナイトレート寒天の発育が緑色
調の白色、栄養寒天上の発育が貧弱で、気菌糸を生じな
い点で異なるが、更に本菌は、ワックス１ンの書によれ
ハ、ストレプトマイセス・ラトガーセンシスニ近似であ
るとされていて、気菌糸が灰色から黒色、湿旧する傾向
は全く有しない。グリセウス・バリアント・スピラーリ
スは、シュークロース・ナイトレイト寒天で、アンスラ
セン、パープルの発育をし、青紫色の可溶性色素を生成
する。

シュードグリゼオシュは合成培地上に灰褐色の発育をし
、リンゴ酸カルシウム寒天上の気菌糸が灰褐色であり、
ゼラチンの液化は強くない。

いずれの菌種も気菌糸湿潤化の特徴は有しない。

このように、本菌ＩＦＭ１１．３６株は明らかに、フミ
ツス、エンダス、ハイグロスコヒクスナトノハイグロス
コピクスシリーズの菌と同定さ４″１．るのである。Ｉ
ＦＭ１ｉ３６株は、このシリーズの代表菌種であるハイ
グロスコピクスとは、合成培地上の発育の色調、可溶性
色素の生成、ゼラチン液化能の強弱、硝酸塩還元能で異
なるが、トレスナー及び、バッカス（１９５６）、ディ
エッッ（１９７６）によるハイグロスコピクスの基本的
特徴、１）胞子柄がクローズドタイプのラセンを形成す
ること、２）褐色をおびた灰色の気菌糸を着生すること
、３）ある種の培地上で、著量に気菌糸が湿潤する傾向
をあげている。

以上のことから、本菌株はワックスマンのグループスベ
シイスの観点に従い、ストレプトマイセス・ハイグロス
コピクスに属せしめるのが妥当と考えられるが、種々の
培養性状に相違点があり、イーストエキストラクト・モ
ールドエキストラクト寒天培地上に発育せしめた時、培
地中に結晶を生じ、又特異な抗生物質、コピアマイシン
、ネオコピアマイシンＡを大量に菌体内に生産するなど
の特徴から本菌株を、ストレプトマイセス・ハイグロス
コピクス・パール・クリスタロゲーネスと命名した。

ネオコピアマイシンＡを製造するには、ネオコピアマイ
シン人生産菌、例えばストレプトマイセス・ハイグロス
コピクス１．ＦＭ１１３６株あるいはその他のネオコピ
アマイシンＡ生産…と次の如き培地が使用される。すな
わち、同化しうる窒素源として、例えば大豆粉、とうも
ろこし含浸液、魚肉エキス、ベゾトン、コーンスチープ
リカー、との蛋白質、あるいはその分解物、アミノ酸、
酵母エキス又はその混合物又は硫酸アンモニウム、硝酸
ソーダ、塩化アンモニウムなどの無機窒素化合物などに
、炭素源としてグルコース、デンプン、デキストリン、
乳糖などの同化しうる炭水化物や、炭素誘導体を主成分
とし、この窒素源、炭素源に少量の無機塩類、例えば、
嬶酸カリ、硫酸マグネシウム、塩化カリ、硫酸鉄、硫酸
銅、硫酸亜鉛、塩化カルシウム、塩化マンガン、炭酸カ
ルシウム、食塩などを加えてｐＨを６．０〜８．０に調
整して、醗酵液を作製する。本培養液に、前記放線菌を
接種し、２７℃に２４〜９６時間液内通気培養を行えば
、最も収量よくネオコピアマイシンＡを採取することが
できる。醸酵が完了後戻の様な方法によって抗生物質を
抽出、精製する。

力価の測定は、ギャンデイダ・アルビカンスを被検菌と
する稀釈検定法や寒天拡散法によって行うことができる
。

醗（′ｉγ液中にもネオコピアマイシン人は存在するが
、有効物質は主として菌体中に多量含有される。

醗酵液より菌体を分別採取し、これを水洗後メタノール
、エタノール等の低級アルコールなどの水溶性の溶媒で
抽出する。溶媒抽出液を濃縮すれば、有効成分を含んだ
徂物質が沈殿する。この含水濃縮物のｐＨを下げれば、
更にこの沈殿が多量となる。

この沈殿をろ別採取し、水、アセトンで洗浄後、再び低
級アルコールに溶解した後、活性炭、セライト、シリカ
ゲル、セルロースなどのカラムクロマトグラフィーを行
い、クロロホルムとメタノール、エタノール、あるいは
ブタノールの混液で展開し、有効画分を集めて濃縮すれ
ば、コピアマイシン及びネオコピアマイシンＡの両者を
含む微黄白色の粗コピアマイシンが得られる。

これを分取用ｉＷ層クロマト（シリカゲル６０％プレー
トＴｕ４）を使用し、２−ブタノール−水（４：１）の
混液で展開を行うと、ネオコピアマイシンＡはＲｆｏ、
３６のスポット、コピアマイシンはＲｆｏ、２ｓのスポ
ットとして分離する。分取用＊層クロマトから抽出して
得られた粗ネオコピアマイシンＡをアセトン−エタノー
ル（５：１）、又は含水エタノールから再結晶すれば、
白色結晶状粉末トシてネオコピアマイシンＡの純品が得
られる。

かくして得られたビオコピアマイシン人の物理化学的性
質を次に示す。

（１，）中性の白色吸湿性粉末 融点　１３４〜１３６°Ｃ（分解） （２）元素分析値及び分子量 Ｃ５Ｂ、９４：　Ｈ８，９９；　Ｎ　ろ、８９；　０　
２Ｂ、１８％（分子量１０４３、ｍａｓｓ　） （３）比旋光度：　〔α〕も”−−１−２３°　（ｃ＝
０．１、メタノール）（４）溶解性： メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの低級ア
ルコール、ピリジン、ジメチルフォルムアミド、氷酢酸
などには溶解するが、アセトン、ジオキサン、クロロホ
ルム、四塩化炭素、酢酸エチル、酢酸ブチル、エチルエ
ーテル、石油エーテル、ベンゼン、メチルイソブチル　
ケトン及び水には難溶もしくは不溶である。

（５）呈色反応： 濃硫酸で最初に桃色、次いで褐色を呈し、過マンガン酸
カリ、臭素液を脱色する。

ビュクレット、二／ヒドリン、モーリッシュ、フェーリ
ング、過りロール鉄、リーベルマン・バーチヤード、２
．４−ジニトロフェニールヒドラジンの反応は陰性で、
ドラーゲンドルフ、ヨード白金酸の反応は陽性、坂口反
応は陽性であシ、これらのことから６級あるいは４級ア
ミンの存在、グアニジン基の存在を示す。

（６）紫外線吸収スはクトル： 第１図に示す通りであり、メタノール溶液で２１０〜３
６０　ｎｍの範囲内では末端吸収（８１％−１０ｍ　− １４３ｊａｔ２１０ｎｍ）を呈する。

（７）赤外線吸収スはクトル： 第２図に示す通シである。ＫＢｒ錠で測定したネオコピ
アマイシンＡの赤外部吸収は次の波数（ｃｉ−”）に特
異の吸収帯を示す。

５５Ｂ０．２９７５．２９２５．１７１５．１６５５．
１５９５．１／１５５゜１５７５、　１２４０．　１１
４０．　１０７０．　９７５．　８４５Ｃｒｎ−”（８
）核磁気共鳴スＲクトル： 第３図に示す通りである。

（９）この物質の薄層クロマトグラフィー（シリカゲル
６０、プレー）　Ｆ２＋ｎ　）は次表に示す各溶媒系で
次のＲｆに単一のスポット（紫外線吸収、または抗菌性
で検出）を与える。

第１表 （１０）各種スペクトルの測定値から本発明のネオコピ
アマイシン人の構造は次のように一応推定される。

コピアマイシン　：　Ｒ”’　ＣＨｓ ネオコピアマイシンＡ：Ｒ＝Ｈ Ｏυ抗菌スペクトル： ネオコピアマイシンＡの抗菌スはクトル（ＭＩＣ）は後
記の第２表、第６表、第４表の通シである。

試験法は寒天稀釈法によシネオコピアマイシン人はエタ
ノール原溶液を水で稀釈、寒天培地中に混釈した。寒天
培地中の溶媒濃度は１％以下で測定した。コピアマイシ
ンに比較して抗繭力は強くスベクトルも広い。

（ｌり急性毒性： ｄｄＹ雄マウマウス週令（１９〜２１！ｊ）を使用し、
ネオコピアマイシンＡは１０％エタノール食塩水に溶解
して注射した。腹腔内、経口投与では１９／に９まで何
ら毒作用を示さなかった。静脈内投与のＬＤ、。は′５
０ｍ９／に９以上である。

Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ　２５　６．２
５Ａｓｐｅｒｇ口１ｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ　２５　
２５人ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎ１ｄｕｌａｎｓ　２１
　６．２５Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　２２
　６．２５Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｉｚａｅ　Ｉ
ＦＭ−４０６０７６，２５Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｖ
ｅｒｓｉｃｏｌｏｒ　２６　１２．５Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ　ｇｌａｕｃｕｍ　３−１　３．１２Ｅｐｉｄｅ
ｒｍｏｐｈｙｔｏｎ　ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ　Ｏ，７８Ｍ
ｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｃａｎｉｓ　１．５６Ｍ１ｃｒ
ｏｓｐｏｒｕｒｎ　ｇｙｐｓｅｕｍ　ＩＦＭ−４０７２
７１：５６Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒ
ｏｐｈｙｔｅｓ　ＩＦＭ−４０７３７１、５６Ｔｒ　１
ｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ　
Ｋａｍｉｙ−１、５６Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｒｕ
ｂｒｕｍ　ＩＦＭ−４０７３２０ｊ９８ｐｏｒｏｔｈｒ
ｉｘ　５ｃｈｅｎｃｋ目ＩＦＭ−４０７５０　６．２５
８ｐｏｒｏｔｈｒｉｘ　５ｃｈｅｎｃｋ目ＩＦＭ−４０
７５１（ｙｅａｓ　ｔ　ｐｈａｓｅ）　３　、１２Ｆｏ
ｎｓｅｃａｅａ　ｐｅｄｏｒｏｓｏｉ　ＩＦＭ−４０７
５６３，１２第３表　酵母様真菌に対する抗菌スペクト
ルＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ＩＦＭ　４００
０１　１．５６Ｃａｎｄｉｄａ　ａｉｂｉｃａｎｓ　Ｉ
ＦＭ　４０００２　３．１２Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉ
ｃａｎｓ　ＩＦＭ　４０００３　３．１２Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ＩＦＭ　４０００４　６．２５
Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ＩＦＭ　４０（３
０５１，５６Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ＩＦ
Ｍ　４０００７　１１２Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａ
ｎｓ　ＩＦＭ　ａｏｏｏｓ　１．５６Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ　ＩＦＭ　４０００９　（７Ｎ）　６
．２５Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｕｌｌｉｅｒｍｏｎｄ目ＩＦ
Ｍ　４００１７　３．１２Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉ
ｃａｌｉｓ　ＩＦＭ　４００１８　３．１２Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ｋｒｕｓｅｉ　ＩＦＭ　４００１９　３．１２Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　ＩＦＭ　４
００２０　３．１２Ｃａｎｄｉｄａ　５ｔｅｌｌａｔｏ
ｉｄｅａ　ＩＦＭ　４００２１　３．１２Ｃａｎｄｉｄ
　ｕｔｉｌｉｓ　ＩＦＭ　４００９９　１２．５Ｃｒｙ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　ＩＦＭ　
４００３７　＜０．７８Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎ
ｅｏｆｏｒｍａｎｓ　ＩＦＭ　４００３８　＜０．７８
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　Ｉ
ＦＭ　４００４７　１．５６Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃ
ａｎｄｉｄｕｍ　ＩＦＭ　４００６８　１．５６Ｔｏｒ
ｕｌｏｐｓｉｓ　ｇｌａｂｒａｔａ　ＩＦＭ　４００６
５　６．２５Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅ
ｕｍ　ＩＦＭ　４００６６　６．２５第４表　細菌に対
する抗沼スはクトル ′） Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ目ｉｓ　ＰＣＩ　２１９　
１２．５８ａｒｃｉｎａ　１ｕｔｅａ　ＩＦＭ　２０６
６　６．２５Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅ
ｕｓ　２０９Ｐ　１２．５８ｔａｐｈｙｒｏｃｅｃｃｕ
ｓ　ａｌｂｕｓ　ＩＦＭ　２０ｆ３　１２．５Ｓｔａｐ
ｈｙｒｏｃｏｃｅｕｓ　ｃｉｔｒｅｕｓ　ＩＦＭ　２０
２５　１２．５Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃ
ａｌｉｓ　ＩＦＭ　２００１　＞１１００Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕ　ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ　ＩＦＭ　２
０５６　５．１２Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｊａ　ｃｏ目　〉
１００Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　
ＩＦＭ　５００Ｂ　２５Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖ、ｉｌ・ｇ
ａｒｉｓ　ＩＦＭ　３０１４　＞１００Ｐｓ１００Ｐｓ
ｅｕｄｏ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＩＦＭ　３０１１　
＞１００Ｓａ１ｍ１００５ａ１　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ
ｓ　ＩＦＭ　３０２３　＞１００８ｅｒｒａｔｉａ　ｍ
ａｒｃｅｓｃｅｎｓ　ＩＦＭ　３０２７　＞１００Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　６０７　＞１０ｃｊＮｏｃａ
ｒｄｉａ　ａｓｔｅｒｊｄｅｓ　ＩＦＭ　００４２　２
５Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｂｒａｓｉｌｌｅｎｓｊｓ　ＩＦ
Ｍ　００８２　２５普通寒天、３７℃、２４時間（Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、　Ｎｏｃａｒｄｉａ。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓは４８時間）実施例１ ストレットミセス、バイグロスコピカス、バール、クリ
スタロゲーネス１．Ｆ）Ｍｌｌ　３６株（ＦＦｉＲＭ　
Ｐ−７２ｉｏ　）をイースト、スターチ斜面寒天（ＹＳ
Ａと略すこともおる）（イーストエキス０．１％、可溶
性デン粉０．５チ、寒天１．５饅、水道水１，０００Ｍ
、ｐＨ７，０）に２５℃で、２週間培養したものの胞子
を２白金耳量宛、下記の生産用培地を５００ｍ、ｌの坂
ロフラスコに１０Ｏｍｇ宛分注して１２０℃、１５分間
高圧釜滅菌したもの１００本に、接鍾し２７℃で７２時
間振盪培養した。

生産用培地の組成は次の如きものである。

ミートエキストラクト　０．５チ Ｒゾトン　１．０チ ブドウ糖　０．１％ 可溶性デンプン　１，０チ ＮａＣ１０，５％ 消泡剤　０．０５チ 水道水　１０００ｍｌ ｐＨ７，０〜６．８ 培養が終了した後、菌体を戸別すると湿菌体７００ｇが
得られる。この菌体を充分水洗後、メタノール２１で６
０分間撹拌抽出する。

更に同量のメタノールで抽出し、両袖出液を合わせて減
圧濃縮する。褐色の濃縮物をブタノールで繰シ返し抽出
、再び減圧で濃縮乾固すると４９ｇの粗物質が得られる
。この物質を１００−の水で洗滌した後乾燥すると粗粉
末２４９が得られる。

これを小量のメタノールに溶解後シリカゲル（シリカゲ
ル６０．７０〜１６０メツシユ）Ｑカラムクロマトグラ
フィーを行う。展開はクロロホルム：メタノール（３：
２）の混合溶媒で行い、抗菌力の高い分画を合併し、減
圧下に乾燥すれば黄色粉末２．５ｇが得られる、これを
メタノール、水で洗滌すれば白色粉末１．００９が得ら
れるが、これはコピアマイシン、ネオコピアマイシン人
その他活性物質の混合物である。

この混合物をシリカゲル分取用薄層クロマト（シリカゲ
ル６０プレートＦ２５４　）を行い、２−ブタノール−
水（４：１）の混合溶媒でＲｆ　Ｏ，３６の部分からエ
タノールで有効物質を抽出すれば、粗ネオコピアマイシ
ンＡ　Ｏ１６３！！が得られる。これをアセトン−エタ
ノール（３：１）および含水エタノールから再結晶すれ
ばネオコピアマイシンＡの純品が白色粉末として０，４
５．！９？４られた。

実施例２ 上記ＩＦＭ　１１！１　’３６株をＹＳＡ斜面寒天に２
５℃、２週間培養したものから実施例１と同様に培養し
たもの１４をタンク培養の種培養とする。タンク培養に
は２００１のステンレススチール製の醗酵槽を使用し、
前記の生産用培地１００１を仕込む、毎分１００ｄ／分
の滅菌空気を通気しなから２５０ｒ、ｐ、ｍ、で撹拌し
２７℃で醗酵を行なわせると、７２時間で抗生物質の生
産は最高となる。

醗酵完了後培地を１０．００Ｏｒ、ｐｏｍ、で連続遠心
７．８ｋ（ｊの湿菌体が得られる。これを２０１のメタ
ノールで６０分宛３回撹拌抽出を行い、抽出液を合併す
ると６４６となる。とれを連続フラッシュエバポレータ
ー（コントロ装置）で６６に濃縮し、同量の水を添加後
ＮａＣ６５１ｃ９　を加えた後ｉｏｌのブタノールで６
回抽出する。抽出液を濾過し減圧濃縮すると４８０ｇの
粗物質が得られる。これを５１の水で洗滌した後乾燥す
ると、粗粉末２５０ｇが得られる。これを小量のメタノ
ールに溶解後シリカゲルのカラムクロマトグラフィーを
行う。展開はクロロホルム−メタノール（３：２）の混
合溶媒で行い、抗菌力の高い分画を合併し、減圧下に乾
燥すれば黄色粉末１１０ｇが得られる。これをメタノー
ル、水で洗滌すれば白色粉末４３１Ｉがイ（Ｉられるが
、これはコピアマイシン、ネオコピアマイシン人及びそ
の他活性物質の混合物である。

この混合物をシリカゲルとブタノール−水（４：１）の
混合溶媒で分取用薄層クロマトを行い、Ｒｆｏ、６６の
部分からエタノールで有効物質を抽出すると粗ネオコピ
アマイシンＡが得られる。これをアセトン−エタノール
（３：１）および含水エタノールから再結晶すると、ネ
オコピアマイシン人の純品が白色粉末として１．６９得
られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のネオコピアマイシンＡ（メタノール中
）の紫外線吸収スペクトル図、第２図はネオコピアマイ
シンＡ　（Ｋ、Ｂｒ錠）の赤外線吸収スペクトル図、第
３図は同物質の核磁気共鳴スにクトル図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　融点１５４〜１３６℃（分解）を示す中性の白色
   吸湿性粉末状の物質であり、分子式Ｃ！！３Ｈ９３０１
   ７Ｎ３が与えられ、メタノール、エタノール、ｎ−ブタ
   ノールなどの低級アルコール、ピリジン、ジメチルホル
   ムアミド、氷酢酸には溶解するが、アセトン、ジオキサ
   ン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチル、酢酸ブチ
   ル、エチルエーテル、石油エーテル、ベンゼン、メチル
   イソブチル　ケトン及び水には難溶もしくは不溶であり
   、濃硫酸で最初に桃色、次いで褐色を呈し、過マンガン
   酸カリ、臭素液を脱色するが、ビュウレット、ニンヒド
   リン、モーリッシュ、フェーリング、過りロール鉄、リ
   ーベルマン・パーチャード、２．４−ジニトロフェニー
   ルヒドラジンの反応は陰性で且つドラーケ゛ンドルフ、
   ヨード白金酸の反応は陽性、坂口反応は陽性の呈色反応
   を示すことを特徴とする新規抗生物質、轡、゛≠ココ２
   フイシン人。 ２、　ストレプトミセス属に属するネオコピアマイシン
   生産菌を培養し、培養物からネオコピアマイクン人を採
   取することを特徴とするネオコピアマイシンＡの製造法
   。