JPS6040832B2 - 培地成分 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、培地成分に関するものである。

一般に、デイステイラーズ・ソルブルスは、例えばウイ
スキー等の蒸留廃液中に存在する粒子のあらい部分を除
いた水に溶解乃至は懸濁したものを総称していわれてい
るもので、これを乾燥してドラィド・ソリューブルスに
したり、濃縮又は半固体状にして、飼料などに添加され
て、広く使用されている。

また、このデイステイラーズ・ソルブルスは、デイステ
イラーズ・ドライド・ソルブルスとともにかなりの分野
において使用されてきている。

しかし、このように有用なディスティラーズ・ソルブル
スやデイステイラーズ・ドライド・ソルブルスにあって
も使用後に多く浮遊爽雑物及び脂肪が残存しその除去が
きわて困難であるという大きな欠点があった。本発明者
らは、先に、このようなデイステイラーズ・ソルブルス
やデイステイラーズ・ドライド・ソルプルスを敬質し、
広く微生物培地の有効成分、例えばイーストエキストラ
クトに代替できるもの、として使用できるように鋭意研
究したところ、意外にもヂィステイラーズ・ソルブルス
又はディステイラーズ・ドライド・ソルプルスの抽出液
が遠心処理、炉過処理によつ急速に清澄化され、この清
澄液に微生物生育有効成分が多量含有され、かつ、これ
ら清澄液に含有される物質において低分子範囲及び／又
は高分子範囲にその有効成分が多く集中していることを
知り、更にこの有効成分によって微生物菌体の増殖がす
ぐれ、しかも各種発酵生産物が高収率に得られることも
わかつた。

しかし、このようにして得られた培地でも、殺菌のため
の加熱処理、保存時、培養中などに多量の沈澱物を生じ
るという大きな欠点を有することがわかった。

このような欠点があると実験用培地として使用できない
ばかりでなく、菌体や発酵生産物中にとりこまれるおそ
れもあるために一般的培地としても使用されないことが
考えられる。本発明者らは、この沈澱を防止するために
更に研究を重ねたところ、得られた清澄液にアルカリを
添加し、ｐＨ７以上、好ましくはｐＨ７〜１２に調整す
ることによって沈澱物が分離され、後殺菌しても沈澱物
が生じないことが明らかとなった。本発明は、この知見
により完成されたものでデイステイラーズ・ソルブルス
もしくはデイステイラーズ・ドラィド・ソルブルスの抽
出液、又はその濃縮物を遠心処理もしくは炉過処理し、
得られた清澄液にアルカリを添加し、ｐＨ７以上に調整
し、沈澱物を除去してなる培地成分である。本発明では
ｐＨ処理の前又は後に異なる分子量成分の分画を適宜行
うことができる。本発明において用いられるディスティ
ラ−ズ・ソルブルスはウイスキー蒸留廃液、またはグレ
ィンアルコール蒸留廃液などの蒸留廃液で、また、デイ
ステイラーズ・ドライド・ソルプルス（Ｄｉｓｔｉｌｌ
ｅ岱 ｄｒｉｅｄ ｓｏｌ地ｌｅｓ）、デイステイラ−
ズ・ドライド・グレイン・ウイズ・ソルフルス（Ｄｉｓ
ｔｍｅ岱ｄｒｉｅｄ餌ａｍｓｗｉｔｈｓｏｌ肋ｌｅｓ）
、デイステイラーズ・ドライド・グレインズ（Ｄｉｓｔ
ｍｅ岱ｄｒｉｅｄｇａｉｎｓ）などと呼ばれるこれらの
濃縮固形化物が使用される。

本発明においては、ディスティラーズ・ソルプルスはそ
のまま、また、デイステイラーズ・ドラィド・ソルブル
スは抽出して溶液状としたものが、それぞれ使用される
。

以下いずれもデイステイラーズ・ソルブルスという。遠
心処理においては脱脂されることがないので、あらかじ
め脱脂しておくと遠心処理によって直接清澄液を得るこ
とができる。あらかじめ脱脂する場合は、これらデイス
テイラーズ・ソルブルスまたはその関連物にエーテル等
の有機溶媒を加えて抽出除去される。この脱脂工程は遠
心処理前における必須工程ではなく、任意のもので、こ
こで脱脂処理しなければ、遠心処理後に溶媒抽出、炉過
等によって脱脂すれば十分である。ここにおけるデイス
テイラーズ・ソルブルスの遠心分離処理は、５０，００
０×多×分以上、好ましくは７０，０００×夕×分以上
で行われる。

一般に、多＝議論。

Ｓ＝ｒｐｍ ｙ＝回転軸から液部端までの距離（伽） の式でのま表わされ、これに時間の因子として分をかけ
たもの、即ち、夕×分によって遠心処理の程度が表わさ
れる。

また、本発明においてディステイラーズ・ソルブルスを
炉過処理するに際しては、炉過助剤を添加して行なわれ
る。

添加される炉過助剤としてはセライト、夕ルク、紙パル
プ、オガクズ、短繊維などがあり、これが有効に使用さ
れる。ディスティラーズ・ソルブルスもしくはその濃縮
物に対し、１〜１０％の量で炉過助剤が加えられ、よく
蝿拝して、炉過される。

炉過は、連続式またはバッチ式のいずれでも良いが、加
圧下又は減圧下における炉過が効率上好ましく、連続式
ドラム炉過機などが工業上の炉過手段としては最も好ま
しいものである。

以上、遠Ｄ処理もしくは炉過処理によって得られたもの
は、薄黄褐色透明液で、従釆知られたディスティラーズ
・ソルブルスの黒褐色泥状の性状とは全く相違するもの
で、別異のものとも思えるものである。

そして、この薄黄褐色透明液にはディスティラーズ・ソ
ルブルスの有効成分がほとんど含有されていて、また、
この透明液には浮遊爽雑物は含まれていない。

ここに得られた清澄炉液は、このままで有効であるが、
含有成分的にみた場合、低分子範囲及び高分子範囲にか
なりの量が含有され、それらの中に真の有効成分乃至は
有効成分群が存在することが考えられる。

本発明においては、ｐＨ処理の前又は後に、必要に応じ
てこの清澄炉液を限外炉過等の処理にかけ低分子の物質
群及び高分子の物質群を含む液として分離し、有効成分
を顕著に濃縮することを可能とするものである。低分子
物質及び高分子の物質含有液を得るには分子節、メンブ
ランフィルター等を用いるいかなる手段でもよいが、工
業的に有効なのは安価なメンブランフィルターを用いる
限外炉過によるものである。

限外炉過には各種メンブランフィルターが使用できるが
、例えばアミコン社製のメンブランフイルターＸＭ−１
００，ＵＭ−１０，ＵＭ一２，ＵＭ−０５などを組合せ
て異なる分子量の物質の含有液を得ることができる。こ
こではＵＭ−０５を通過する液部を分離すれば低分子物
質含有液を得、またＵＭ−０５を通過しない部分の液部
を分離すれば、高分子物質群を含有する液を得ることが
でき、更にこの高分子物質含有液はＵＭ−２，ＵＭ−１
０，ＸＭ−１００等を用いておおよそその分子量１ぴ〜
１ぴ，１ぴ〜１び，１び以上の各分子量物質群含有液に
分画することができる。次に、デイステイラーズ・ソル
ブルス未濃縮液を脱脂後遠心処理し、得られた清澄液を
各メンブランフィルターを通過させて得られた液部とそ
の５倍濃縮物の窒素量を測定したところ、次の表３の結
果が得られた。

表 ３ デ・イステイラーズ・ソルフルス 未濃縮液の脱脂液の限外炉過 （ァミコン社のメンブランフィルタ一ＸＭ−１００，Ｕ
Ｍ−１０，ＵＭ−２，ＵＭ−０５Ｋよる。

）Ｎ 量 ５倍濃縮Ｎ量肝量１９説±，。

〇）。・Ｏ８靴微 。・４１２の微Ｎ 量 ５倍濃縮
Ｎ量１０４〜１０５ ０．３４２ ０．７１
２（ＯＭ−１０）１０３〜１０４ ０．０５６
０．２８４（ＵＭ−２）５００〜１０３ ０
．０２０ ０．１００（ＯＭ−０５）５００以
下 ０．１３７ ０．６８５デイステイラ
ーズ・ソル ０．７ブルス未濃縮液 Ｎ量はキェルダール法によって分析。

各分画物はディスティラーズ・ソルブルス未濃縮液換算
である。例えば、ここに得られたＵＭ−０５通過及びＸ
Ｍ−ｌｏＧ露過−ＵＭ−１０下通過の物質を含有する液
はきわめて薄い黄色を帯びた透明の溶液でディスティラ
ーズ・ソルブルスの有効成分が多量含有されている。

また、ディスティラーズ・ソルブルス清澄液は逆浸透法
によってきわめて単時間に高分子物質群と低分子物質群
に分画できる。

逆浸透法による場合は、ＲＯ逆浸透膜としてＡＳ−２１
５，ＡＳ−２３０，ＡＳ−２９０（いずれもＡｂｃｏｒ
社製）などを用いて行なわれるが、ディスティラーズ・
ソルブルス有効成分をおおよそ分画し、精製するのに有
効である。この分子量成分の分画は、ｐＨ処理の前又は
後に行なわれるが、本発明においては必須のものではな
く、清澄液にアルカリを添加し、ｐＨ７以上、好ましく
はＰＨ７〜１２、最も好ましくはｐＨ８にして、いまろ
く放置すると沈澱物が生じる。

このとき添加するアルカリとしてはカセイソーダ、カセ
イカリ、アンモニャ水、アンモニャ、水酸化カルシウム
などがよい。ＰＨ‘ま７〜１２の間であればよいが後で
ｐＨを中性にもどすときにはｐＨ８程度が最も好ましい
。得られた沈澱物は炉過又は遠心分離で簡単に除去され
る。

ここに得られる沈澱物除去ディスティラーズ・ソルブル
ス有効成分液は、加熱殺菌したり、長期保存しても沈澱
物を生じない安定なものとなっている。

この有効成分液は容易に濃縮したり、乾燥したりするこ
とができる。乾燥する場合、再溶解する場合に適するよ
うに、そのままもしくは各種塩類、糟類、その他の補助
剤を添加、混合して、贋霧乾燥、凍結乾燥などによって
粉末状とする。

このような濃縮物、粉末物は「運搬等に便利であり、し
かも使用時には直ちに水に熔解し、透明液状に再現でき
る。更に、ディスティラーズ・ソルブルス清澄液や有効
成分液の効果的な濃縮法としてエタノール、ァセトン、
メタノール等の有機溶媒による沈澱処理があげられる。
デイステイラーズ・ソルブルス有効成分は有機溶媒の濃
度を高めて行くと、順次沈澱するので、それを炉過分鱗
すれば、これをそのまままたは適宜粉末化して使用でき
る。例えばエタノールであれば、エタノール最終濃度で
７０〜８０％まで添加したときに、有効成分のほとんど
が沈澱するので、これを炉過または遠心分離によって分
離すれば、箸じるしく精製された状態で有効成分を固状
で得ることができる。本発明の堵地成分を用いる培養に
際しては、本発明の各種培地成分が培養源の一部もしく
は全部として培養液もしくは固体塔地に含有させられる
。

酵素の製造における数堵地にはディスティラーズ・ソル
ブルスの清澄炉液で３０〜１００肌／１００タ程度添加
され、アミノ酸、抗生物質、有機酸、生理活性物質等の
生産に用いる廃糖蜜、澱粉分解物、コーン・スチープ・
リカーなどを添加した液体培地ではディスティラーズ・
ソルブルスの清澄炉液で３０〜７０の【／１００奴程度
添加される。

この培地には、それぞれ目的とする発酵生産物生産菌が
接種され、培養される。培養は、２５〜４０ｑｏで３０
〜５餌時間程度もしくはそれ以上培養される。

本発明における培地は殺菌したり、長期保存しても沈澱
を生じないので、実験用塔地、食品用発酵生産物塔養培
地として好適であり、又本発明の培養法においては、デ
ィスティラーズ・ソルプルスの有効成分の添加によって
発酵生産物は増収され、しかも爽雑物を全く含有させな
いため、培養液の処理がきわめて楽になり、特に食品、
医薬品の製造に益するところきわめて大である。

次に本発明の製造例、試験例及び実施例を示す。

ここにおいてはデイステイラーズ・ドライド・ソルブル
スを用い、その油出液をＤＳと示し、清澄炉液をＤｅｆ
ａｔｔｅｄＤＳと示し、その高分子区分をＤｅｆａ比ｅ
ｄＤＳ高分子区分と示し、その低分子区分をＤｅｆａＵ
ｅｄＤＳ低分子区分と示した。

また、エタノール分区物をＤｅｆａ比ｅｄＤＳエタノー
ル区分と示し、更にディスティラーズ・ドライソルブル
スをＤＤＳと示し、デイステイラーズ・ドライ・グレイ
ンス・ウイズ・ソルブルスをＤＤＧｗＳと、示し、デイ
ステイラーズ・ドライド・グレインズをＤＤＧと示した
。試験例 １ 製造例１で得られたＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ
ｔｔｅｄＤＤＣｗＳを用い下記に示す菌株、培養条件に
したがって培養テストを行なった。

Ｉ Ｂａｃｍｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ ｌＡＭ １５２３
培養条件 ３０ｑＣ ４０ｈｒ 振とう培養２ Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｓｅｒｅｖｉｓｉａｅ『００２
０３培養条件 ３０ｑ０ ４伽ｒ 振とう培養３ ＄
ｐｅｒｇｌｌｕｓｏひＺａｅＡＴＣＣ１２８培養条件
３０ｑ０ ４日間振とう培養４ ＬａＣｔｏｂａＣｉ
ｌｌ雌Ｃａｓｅｉ ＩＦ。

３４２５培地 亀ｕｃｏｓｅ
２％ポリベプトン １酵母エキス
０．５ 酢酸ソーダ ０．５ ※ＳａｌｔＡ Ｉ※Ｓａｌ
ｔＢ Ｉ※ＳａｌｔＣ
Ｏ．１※ＳａｌｔＡ：ＫＨ２Ｐ
０４，Ｋ２ＨＰ０４各々５％液※Ｓａｌｔ Ｂ：ＭｇＳ
０４・７日２０ ３％、ＮａＣ１、硫酸マンガン各々０
．１％、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化コバ ルト、モリブデン酸アンモ ニウム、棚砂、メタバナジ ン酸アンモニウム塩化ニッ ケル各々０．０１％液 Ｓａｌｔ Ｃ：ＦｅＳ０４・７ＱＯ Ｏ．１％、クエン
酸０．２７％液培養条件 ３０ｑ０ ４皿ｒ 静贋培
養５ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ餌ｌｓｅ肌 ＩＦＯ
１３１８９培養条件 ２７０ ６７ｈｒ 振とう培養
６ Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ ｍ０４９０２培地
ｇ１ｕＣＯＳｅ １ ％ ＦｅＣ１３‐６日２〇
○・００１酵母エキス ０．２４ ＭｎＣ１２・４日２
０ ０．０００７２ボリベプトン ０．２４ ＺｎＣ１
２・４日２０ ０．０００４ＫＨ２Ｐ０４ ０．１
ＣｕＳ０４・５日２０ ０．０００１ＭｇＳ０４・
ｏ．０５７日２０ ＣａＣ１２・ ｏ．ｏ５ ｐＨ ５．０２日２０
培養条件 ２５℃ 振濠培養上記菌株を用いたＤｅｆ
ａｔｔｅｄＤＤＳ培養テスト結果試験例 ２製造例２で
得られたＤｅｆａｔねｄ ＤＯＳ−ｐＨ，Ｄｅｆａはｅ
ｄＤＤＧｗＳ−ＰＨ，戊ｆａｔｔｅｄＤＳ−岬を用い培
養テストを行なった菌株、培養条件は試験例１と同様に
行ない、次の表の結果を得たが、これによるとｐＨ変動
による沈澱処理を行なっても活性が低下しないことが明
らかである。

試験例 ３ 製造例３で得られたＤｅｆａｔｔｅｄＤＯＳの粉末化物
について培養テストを行なった（表Ｎｏ．１〜３の粉末
）菌株、培養条件は試験例１と同様に行ない次の表の結
果を得たがこれによると粉末化による活性の低下はきわ
めてわずかであることが明らかである。

試験例 ４ 製造例４で得られたＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳのエタノー
ル沈澱処理物について培養テストを行なった（製造例４
の表のエタノール沈澱処理物）菌株、培養条件は試験例
１と同様に行ない次の表の結果を得た。

試験例 ５ 製造例５で得られた戊ｆａｔｔｅｄＤＤＳの高分子区分
、低分子区分を用いて培養テストを行なった菌株、培養
条件は試験例１と同様に行ない次の表の結果を得た。

試験例 ６ 製造例６で得られたＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ−ｐＨの直
接濃縮エキス、除糖濃縦エキスについて培養テストを行
なった菌株、培養条件は試験例１と同様に行ない次の表
の結果を得たがこれによるとエキスにしても活性の低下
がほんどないことが明らかである。

※ 培地は基本培地Ｋそれぞれの区分を添加製造例 １
Ｄｉｓｔｍｅ岱ＦｅｅｄからのＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ
（あるいはＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＧｗＳの調製。

ＤＤＳ ５０夕（あるいはＤＤＧＷＳ２０夕）を水５０
０の上に懸濁し、１０分間煮沸抽出する。

この抽出液にセラィト（商品名スーパーセル）を添加、
あるいは添加せずにろ過、または遠心分離して清澄液を
うる。この清澄液をＤｅｆａｔｔｅｄ ＤＤＳ（あるい
はＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＧｗＳ）と称する。

この清澄液の分析値はつぎのとおりである。

彰そｐＨ霧鎌霧酸度＊Ｄｅｆａｔｔｅｄ ＤＤＳ ４．０７ ４‐１ ０．３６ １．６
４ ０−１５ ３２．劫略ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＧＷＳ
２０９ ４‐１ ０‐１６ ０‐７７ ０‐０７
２２‐４の必＊ １ノ５州ａＯＨでＰＨ７．０までに
中和するに用いた量製造例 ２ Ｄｅｆａ比ｅｄ ＤＤＳ，Ｄｅｆａｔにｄ ＤＯＧＷＳ
およびＤｅｆａ比ｅｄＤＳの沈澱処理。

ＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ（あるいは戊ｆａｔｔｅｄＤＤＧ
ｗＳおよび※ＤｅねｔｔｅｄＤＳ）※（いわゆるＤＳ原
液を遠心または過処理したもの）をアンモニャを添加し
ｐＨ７〜１２（最適解８．０）とし、生じる沈澱をろ過
、あるいは遠心分離により除去し、えられたろ液を減圧
濃縮してＮＡを除去せしめて清澄液をうる。この清澄液
をＤｅｆａはｅｄＤＯＳ−ｐＨ（あるいはＤｅｆａ比ｅ
ｄＤＤＧＷＳ一冊およびＤｅｆａｔにｄＤＳ−軸）と称
する。

この清澄液を各種の培地調整に使用するとｐＨを変えて
も、また加圧殺菌後も沈澱を生じない。

ＤｅｆａｔにｄＤＯＳの場合下記左欄のｐＨに調整した
とき、６６仇ｍでＯＤを測定するとィ欄のＯＤ値を示す
が、加圧殺菌後はロ欄のＯＤ値を示す。以上のようにＯ
Ｄ値にある程度の差が認められる。

しかるに、戊ｆａｔｔｅｄＤＤＳ−ＰＨの場合には下記
の通りとなり、殺菌後も殆んどＯＤ値の変化は認められ
ない。製造例 ３ ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳあるいはＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ
−柵（およびＤｅｆａはｅｄ ＤＤＧＷＳ，Ｄｅねｔｔ
ｅｄ ＤＳ，ＤｅｆａはｅｄＤＤＧｗＳ−ｐＨ，Ｄｅｆ
ａｔｔｅｄＤＳ−ｐＨ）の粉末化。

上許ＰＳをそのまあるいは澱粉等のバインダーを用いて
スプレー・ドライヤー（ニロ社製）にかけて、入口温度
１５０〜３００℃、出口温度８５〜１３０００で粉末化
した。ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳの粉末化条件の相違によ
る粉末の状態。製造例 ４ Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳあるいはＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ一
ｐＨ（およびＤｅねｔｔｅｄ ＤＤｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅ
ｄ ＤＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＧＷＳ−ＰＨ，Ｄｅｆａ
ｔにｄＤＳ一ＰＨ）の工タノ−ル沈澱処理。

ＤｅｆａｔｔｅｄＤＯＳあるいはＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ
−ｐＨ等にエタノールを最終濃度で０から９５％まで順
次添加し、ゆっくり燈拝し、各濃度で生じた沈澱を炉過
分離する。

○ｅｆａｔにｄＤＤＳの場合、それぞれの固形分を測定
したが、各区の固形分の含有比はつぎのとうりである。

製造例 ５Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳあるいはＤｅねｔｔｅ
ｄＤＯＳ−ｐＨ（およびＤｅｆａ比ｅｄ ＤＤＧＷＳ，
Ｄｅねｔｔｅｄ ＤＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＧｗＳ一対
，Ｄ治ｆａはｅｄ ＤＳ−軸）の膿分画処理。

上記ＤＳＩＯＯの‘をアミコン社製メンブランフイルタ
−ＸＭ−１００及びＵＭ−１０をセットした分子炉過機
にかけＸＭ−１００を通過し、ＵＭ−１０を通過しない
で残留した液部を採取し９．物‘を得た。

これを上記ＤＳの高分子区分とした。又上記ＤＳＩＯＯ
泌をアミコン社制メンブランフィルターＵＭ−１０をセ
ットしＵＭ−１０を通過した液９４の‘を得た。

これを上記ＤＳの低分子区分とした。ＤｅｆａｔにｄＤ
ＤＳの高分子区分及び低分子区分の窒素量は※ キェ
ルダール法 ※※ 製造例１で調製 製造例 ６ Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳあるいはＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ−
ＰＨ（およびＤｅｆａｔｔｅｄ ＤＤＧＷＳ，Ｄｅねｔ
ｔｅｄ ＤＳ，Ｄにｆａ比ｅｄＤＤＧｗＳ一ｐＨ，Ｄｅ
ｆａｔにｄＤＳ一ｐＨ）よりエキスの調製。

ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳあるいはＤｅ側ｔｅｄＤＤＳ−
ｐＨ等をそのまま、あるいはイオン交換樹脂を使用して
糖分のみを除去して、減圧濃縮装置などにて濃縮してエ
キス状に調製する。

このようにしてえられたエキスの分析値はつぎのとおり
である。

ＤｅｆａｔｔｅｄＤ虹Ｓ−ｐＨ Ｄｅｆａｔｔ幻ＤＤＳ
−ｐＨ直接濃縮エキス 除糖濃縮エキス水分
２７．０８紫 １９．０１％全糖 ３０
．１１ ３６．３２直糖 ６．５９
０．８１Ｎ ２．７ ３
３．３ ０製造例 ７Ｄｅｆａ比ｅｄＤ
ＤＳあるいはＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ一ｐＨ（およびＤｅ
ｆａｔｔｅｄＤＤＧＷＳ，ＤｅねｔｔｅｄＤＳ，Ｄｅｆ
ａ比ｅｄＤＤＧｗＳ一冊，ＤｅｆａｔにｄＤＳ一冊）の
ホットパックＤｅｆａ比ｅｄＤＤＳあるいはＤｅねｔｔ
ｅｄＤＤＳ一冊等液そのままで使用する場合は極めて保
存性が悪い。

そこでＤｅｆａ比ｅｄＤＤＳ等を８０〜１００ｏＣに加
熱しホットパックすれば相当長期間の保有性がえられる
。なお、要すればパック後殺菌を行へば更に長期の保存
に耐えられる。また、窒素置換を行なって保存性を高め
る。

次に本発明の実施例を示す。実施例 １ （アミラーゼの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧＷＳ， Ｄｅｆａ比ｅｄ ＤＤＳ−ＰＨ，Ｄ
ｅｆａはｅｄ ＤＤＳ粉末を用いてアミラーゼ生産に対
する効果を検討した。

使用菌株：ふｐｅｒｇｌｌｕｓｏひｚａｅＡＴＣＣ１２
８＄ｐｅｒざ１１ｕｓｎｌ鉾ｒＮＲＲＬ３１２２ＢＧＣ
ｍｕＳＳｕｂｔｊｌｉＳＩＡＭ１５２２基本塔地：カビ
用塔地：Ｒｉｃｅｐｏｗｄｅｒ２．０％大豆粕粉末０．
７５％、ＫＨ２Ｐ０４ ０．２％、ＭｇＳ０４ ７４００．０５％ 細菌用塔地：Ｓｏｌ肋ｌｅｓｔａｒｃｈ２．０％、Ｃａ
Ｓａｍー肌 ａｃｉｄ 〇，６％、ＮａＨＰ０４ １２日２０ ０．２８％、Ｋ４Ｐ０４ ０．１３％、Ｃ
ａＣ１２・２も０ ０．０１％、 ＭｇＳ０４、 ７比００．００５％ ＰＨ７．０ 試験用培地 カビ用 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のＰＨは基本塔地
に等しくした。

ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のｐＨ‘ま基本塔
地に等しくした。

培養方法 カビ：胞子懸濁液を調製して、５０のと容坂口フラスコ
（培地１００の【）に接種、３０℃にて振顔培養。

細菌：２皿ｒ基本培地で前培養したものを、５００の‘
客坂口フラスコ（培地１００の‘）に接種、３０ｑｏ振
糧培養。

酵素液の調製法 カビ：培養液をＮｏ．−成る紙を用いて、ろ過し、その
ろ液を酵素液とした。

細菌：培養液を１０００仇ｐｍ，耳ｈｉｎの遠心後その
上燈液を酵素液とした。

糖化力測定法 ‘１） ２％可溶性でん粉液 ■ Ｍ／１０酢酸、酢酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ５．
０）湖 糖化力の程度に応じて適当に希釈 糖化率の算出法 三戸弓２×１００ ａ：酵素反応後の生成糖量 ｂ：でん粉溶液ｌｏ地中の直接還元糖 ｃ：酵素液中の直接還元糖 Ｔ：でん粉溶液中１０叫中の加水分解後の全糖試験結果
１ ＄ｐｅｒざ１ｌｕｓｏひｚａｅＡＴＣＣ１２８培養
３日目の分析値は下記の通りであった。

２ 松ｐｅｒｇｌｌｕｓｎｌ鉾ｒＮＲＲＬ３１２２培養
４日目の分析値は下記の通りであった。

３ 母ｃｉｌｌｕｓｓゆｔｍｓ 実施例 ２ （プロテアーゼの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＳ−ＰＨ，ｏｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ高分子区
分、Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳエタノール７０％不溶区分を
用いてプロテアーゼ生産に対する効果を検討した。

使用菌株：実施例１で用いた菌株を使用した。

基本塔地：カビ用培地：Ｇｌｕｃｏｓｅ ｌ％、Ｐｅｐ
ｔｏｎｅｏ．４２％、ＫＨ２Ｐ０４ ３％、ＭｇＳ０４
・７日２０ ０．０１％、ｐＨ７．５ 細菌用 ：Ｓｏｌｕｂｌｅ ｓねｒｃｈ ２．０％、
Ｃａｓａｍｌｎｏａｃｉｄｏ．６％、ＮａＨＰ０４・１
２ＬＯ Ｏ．２８％、Ｋ比Ｐ０４ ０．１３％、ＣａＣ
１２・２ＬＯ ０．０１％、ＭｇＳ０４・７日２０ ０
．００５％、ｐＨ７．０試験用培地：カビ用 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のＰＨは基本培地
に等しくした。

細菌用 ＤｅｆａｔにｄＤＯＳ類を加えた培地のｐＨは基本培地
に等しくした。

培養方法 カビ、細菌いずれも実施例１と同機に行なった。

酵素液の調製法 カビ、細菌いずれも実施例１と同様に行なった。

プロテアーゼ力価測定法 ‘１１ ２％カゼイン溶液 ‘２｝ Ｍ／５リン酸２ナトリウム、Ｍ／１０クエン酸
緩衝液（ｐＨ６．０）‘３１ 酵素力に応じて適当に希
釈 ‘４ー ０．４Ｍトリクロール酢酸液 【５｝ ０．４Ｍ炭酸ナトリウム液 力価表示方法：６６帥ｍにおける吸光度に希釈倍率を乗
じた数値で示した。

試験結果 １ ＄ｐｅｒｇｌｌｕｓｏびＺａｅＡＴＣＣ１２８培養
４日目の分析値は下記の通りであった。

２ 船ｐｅｒｇｌｌｕｓｎｌ袋ｒＮＲＲＬ３１２２培養
４日目の分析値は下記の通りであった。

３ ８２ｃｍｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ ｌＡＭ１５２２実
施例 ３（レンニンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＧｗＳ高分子区分を用いてレンニン生産に対
する効果を検討した。

使用菌株：ＭｕｃｏｒｍｊｅｈｅｉＮＲＲＬ３１６９基
本培地：乳清（ホェー）５０％、コーンスターチ５％、
Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ｏ．５％、グルコース１
％、水４３．５％試験用培地 （ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類を加えた培地のｐＨは基本
培地と等しくしたＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類は４倍濃縮
物で添加）培養方法 上記培地を坂口フラスコに入れ３７０で１８曲寿間振盤
培養した。

試験結果 ※ 標準レンネット活性検定によるレンネット活性（Ｓ
ＲＡ値）に３０００を掛けたものである。

実施例 ４ （リパーゼの生産法） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＳ高分子区分を用いてリパーゼ生産に対する効
果を検討した。

使用菌株：ＰｈｙｃｏｍｙｃｅｓｎｉｔｅｎｓＮＲＲＬ
２４４４基本塔地：数１．０％、米糠１．０％、ポリベ
プトン５％、ＫＨ２Ｐ０４ ０．５％、ＣａＣ１２・２
ＬＯＯ．２％、シリコン０．１％ ＰＨ６．０試験用塔
地 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のｐ則ま基本塔地
に等しくした。

培養方法 ５００泌容坂口フラスコに上記培地１００の‘を分注滅
菌し、これに接種２４℃で振盤培養した。

酵素活性測定法 基質５泌（２％ポリビニルアルコールと局方オリーブ油
とを３：１の割合でまぜ４℃で１０分間ホモゲナイズし
たもの）を、０．１Ｍリン酸ｂｕｆｆｅｒ（斑７．０）
４の‘とをＬ字管に入れ、それに酵素液１泌（遠心で菌
体を分離したもの）を加え、３７０、５０分モノー式振
濠機で反応させ、反応終了後、アセトンーェタノール混
液（１：１）２０の‘で反応を止め、直ちに１％フェノ
ールフタレィンを指示薬として０．００９ＭＮａＯＨ水
溶液で通定する。

すなわち、１分間にオレフィン酸１マイクロモル相当の
脂肪酸を生ぜしめる酵素量を１単位とした。試験結果培
養３日目の分析値は下記の通りである。

実施例 ５ （セルラーゼの生産法） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＳ高分子区分を用いてセルラーゼ生産に対する
効果を検討した。

使用菌株：船ｐｅｒｇｌｌｕｓｐｈｏｅｎｊｃｉｓＩＦ
０６６７０基本塔地：大豆粕３％、廃糖蜜５％、硫酸ア
ンモニウム０．２％、第一リン酸カリウム０．２％、硫
酸マグネシウム０．１％ ＰＨ６．０試験用培地Ｄｅｆ
ａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のｐＨは基本培地と等し
くした。

培養方法 ５００の‘客坂口フラスコに上記培地１００泌を入れこ
れに接種した後、３０ｑｏで１１ｑ時間振蜜培養した。

実施例 ６（カタラーゼの生産法） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，ＤｅねｔｔｅｄＤＤＧｗＳを用いてカ
タラーゼ生産に対する効果を検討した。

。使用菌株：Ｐｉｃｈｉａｆａｒｉ肌ｓａＩＦＯＯＩ９
３基本塔地：ｎーパラフィン４％、リン酸二アンモニウ
ム０．４％、塩化カリ０．１％、硫酸マグネシウム０．
１％、硫酸第一鉄０．０２％、塩化カルシウム０．０１
％、塩化ナトリウム０．０１％ ｐＨ４．０培養方法 上記酵母を５００の‘客坂口フラスコに接種し３０００
で振糧培養した。

試験用培地 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のＰＨは基本塔地
と等しくした。

カタラーゼ活性の測定方法 セーレンセン・リン酸ｂｕＨｅｒ（ｐＨ７．０）で稀釈
した酵素液１の‘を、同じくｂｕｆにｒで０．０１Ｍに
稀釈した過酸化水素５の【中に加え、３０ｑｏで５分間
反応後ＩＮ−日２Ｓ０４液２のＺを加え、１０％沃化カ
リウム液１の‘、１％モリブデン酸アンモニウム液１滴
、デンプン指示液を加え、０．０１Ｎ−チオ硫酸ナトリ
ウムで滴定する。

この条件において１分間に１マイクロモル日２０２を分
解するに必要な酵素量を１単位とした。試験結果 実施例 ７ （グルコース・ィソメラーゼの生産） 製造例で調製したＤｅｆａ比ｅｄＤＤＳを用いてグルコ
ース・ィソメラーゼ生産に対する効果を検討した。

使 用 菌 株 ： Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｕＢｓｔｒａｉｎ
ＳＫ基本培地ＸｙｌｏｓｅとＧＩｕｃｏｓ濠液（７：３
）１％、Ｐｏｌｙｐｅｐねｎｅ１％、Ｍｅａｔｅ幻ｒａ
ｃｔ０．５％、Ｙｅａｓｔｅ幻ｒａｃｔ ｏ．２５％、
ＭｇＳ０４・７弦０ ０．０５％、ＮａＣＩＯ．５％、
ＣｏＣ１２１０‐３Ｍ ｐＨ７．０（炭素源別殺菌）培
養方法あらかじめ基本培地からＣｏ＋＋を除いた培地で
前培養したもを試験培養地に４％接種して２８ｑｏで振
顔培養した。

試験結果 ２岬時間培養後、グルコース・ィソメラーゼ活性を測定
した結果、基本塔地では１１８４ｕであったのに対して
ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ４％（Ｖ／Ｖ）を基本培地に添
加すると１４２劉とィソメラーゼ活性の増加がみとめら
れる。

実施例 ８ （ペニシリンＧの生産） 製造例で調製したｏｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＧｗＳ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ高分子を用
いてペニシリンＧの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：Ｐｅｎｉｃｍｉｕｍ ｃｈひｓｏ度ｎ山ｍ
Ｔｈｏｍび０４６２６基本培地：落花生油３％、乳糖４
％、Ｎａ２Ｓ０４０．１％、ＣａＣ〇３１％試験用塔地 ＤｅｆａＷｅｄＤＤＳ類は予め中性として添加した。

培養方法胞子懸濁液を調整し、５００泌客坂口フラスコ
に、おのおの培地１００叫を入れ、２７℃で振糧培養し
た。

なお、培養２蝋時間後、８時間おきにフェニール酷酸を
０．１タづつ添加した。

試験結果 培養７幼時間後におのおのペニシリン生産量を定法によ
り定量したがつぎのとおりであった。

実施例 ９（ストレプトマイシンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＳ−ＰＨ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ高分子区分
を用いてストレプトマイシンの生産に対する効果を検討
した。

使用菌株：Ｓｔｒｅｐ■ｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｉｎ雌
ＷａｋｓｍａｎＩＦＯ１２８６９基本塔地：グルコース
１．０％、大豆ミール１．５％、食塩０．５％ ＰＨ：
６．８試験塔地 培養方法 ５００の【客坂口フラスコにおのおの培地１００の‘を
入れ、１白金耳を接種、２７００で毎分１３の主復、振
幅８肌で振顔培養した。

試験結果 培養「 ７日後、定法によりストレプトマイシンの定量
をおこなった。

結果はつぎのとおりである。実施例 １０ （プレオマイシンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ高分子区分を
用いてブレオマィシンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：ストレプトミセス・バーチシラスＢ８０−２
２ＡＴＣＣ １５００３基本培地：大豆粉３．５％、で
ん粉２．５％、グリコース０．５％、食塩０．３％、第
二燐酸カリ０．１％、硫酸亜鉛０．０５％ ＰＨ：７．
０試験培地 Ｄｅｆ汎ｅｄＤＤＳ類添加後、舟を７．０に調整した。

培養方法５００机上客坂口フラスコにおのおの培地１０
０の‘を入れ、２７０で毎分、１４の主復、振幅８肌で
振糧培養した。

試験結果 培養７日後、定法によりブレオマィシンの定量をおこな
ったがつぎのようである。

実施例 １１ （ジョサマイシンＳの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＳ−軸，ＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ高分子区分を用
いてジョサマィシンＳの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：Ｓｔｒｅｐのｍｙｃｅｓ 船てのｎｅ船ＩＳ
Ｖａｒ・ぬｓａｍｙｃｅｔｉｃｕｓＡＴＣＣ１７８３
５基本培地：大豆粉２％、でん粉１％、グルコース１％
、食塩０．５％、燐酸第二カリウム０．１％、硫酸マグ
ネシウム００５％ＰＨ：７．０試験用培地 ・ ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類添加後、ｐＨを７．０に調整
した。

培養方法５００の‘客坂口フラスコにおのおの培地１０
０の‘を入れ、２７〜２８℃で毎分１３の主復、振幅８
肌で振函培養した。

試験結果 培養３日後、定法によりジョサマィシンの定量をおこな
ったがつぎのようであった。

実施例 １２ （カスガマイシンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ高分子区分を用
いてカスガマィシンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＫａｓｕｇａｅｎ
ｓｉｓＡＴＣＣ１５７１４基本塔地：大豆油４．０％、
グルコース１．０％、脱脂大豆粉５．０％、第二燐酸カ
リ０．１％ ｐＨ６．４試験用培地 Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ類添加後、斑を６．４に調整した
。

培養方法５００の【客坂口フラスコにおのおのの堵地３
０の‘を分注し、それに、寒天斜面培養した胞子を接種
し、２８００で振幅７肌、振動数１３０回毎分の振鍵培
養を行なった。

試験結果 培養７日後、カスガマィシンの生産が最高に達したとこ
ろでおのおの生産量を定法により定量した。

その結果はつぎのようである。

実施例 １３ （Ｌーグルタミン酸の生酸） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ高分子区分を
用いてＬ−グルタミン酸の生産に対する効果を検討した
。

使用菌株：ミクロコツカス・グルタミクスＡＴＣＣ １
３０３２ 基本塔地：グルコース５％、尿素１．２％、硫安０．１
％、ＫＨ２Ｐ０４ ０．３％、ＭｇＳ０４・７は００．
０５％、ＭｎＳ０４・４も０ ０．００１％、ＦｅＳ０
４・７日２００．００１％ ｐＨ：７．０試験用培地培
養方法 おのおのの培地１００私を５００私客坂口フラスコに入
れ、これにグルコ−ス・ブイヨン・アガー・スラントに
２畑時間培養したものを一白金耳接種、３日間振糧培養
する。

培養温度は３０ｑｏ。試験結果 培養後のＬーグルタミン酸の生産量はつぎのとおりであ
る。

実施例 １４ （Ｌーリジンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ高分子区分を用
いてＬ−リジンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：コリネバクテリウム・ハイドロカーボクラス
タＮｏ．２４総のメチオニンおよびスレオニン要求株
ＡＴＣＣ２１１３１ 基本培地：グルコース１０％、Ｋ仏Ｐ０４ ０．１％、
ＫＨ２Ｐ０４０．１％、Ｍが０４・７日２００．０１％
、ＭｎＳ〇４・虹ＬＯ Ｏ．００２％ 、ＦｅＳ０４
・７４００．０２％、サイアミン塩酸塩ｌｏｏｙ／Ｌ、
Ｌーホモセリン１００ｙ／の‘、硫安２．０％、ＰＨ：
６．５ 試験用培地 ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類添加後、ｐＨを６．５に調整
。

予め、イースト・ブイョン培地で３０３０，２独特間振
濠培養したものを、おのおの５０の‘の培地を５００の
【客坂口フラスコに分注したものに５の‘を接種、３０
℃，３日間、１１の主復、振幅８伽で振濠培養した。試
験結果３日後の培地中のＬ−リジン生産量はつぎのよう
であった。

実施例 １５ （Ｌ−プロリンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＧｗＳ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＯＳ高分子区分
を用いてＬ−プロリンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：サッカロミセス・セレビシェ−ＫＹ６０３３
ＡＴＣＣ ２０１６９基本塔地：グルコース１０％、硫
安２％、ＫＱＰ０４０．０５％、Ｋ２ＨＰ０４ ０．０
５％、ＭｇＳ０４・７比０ ０．０２５％、酵母エキス
０．２５％、Ｌ−イソロイシン１２５の９／ぞ、ＣａＣ
０８３％、 舟：７．２試験用培地 ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類添加後、風：７．２に調整し
た。

培養方法グルコース２％、ベプトン１％、酵母エキス１
％、ＮａＣＩＯ．２５％の組成の培地に３０℃で２岬時
間培養したものを、おのおのの培地２０の‘を含む２５
０心容三角フラスコに２の‘を接種、３０午○、４日間
培養した。

試験結果 培養４日後の培地中のＬープロリンの蓄積量はつぎのよ
うであった。

実施例 １６ （Ｌ−スレオニンの生産） 製造例で調製した戊ｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔｔ
ｅｄＤＤＧｗＳ，戊ｆａｔｔｅｄＤＤＳ低分子区分を用
いてＬ‐スレオニンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：ェッシェリキア・コリ ＡＴＣＣＩ３０７０
基本塔地：グリセロール５．０％、硫安１．４％、ＫＨ
２Ｐ０４０．１％、Ｍが０４・７日２００．０３％、メ
ソジアミノピメリン酸１５０ｍｏ／Ｌ，ＤＬーメチオニ
ン２５のｐ／Ｌ ＰＨ：７．８試験培地 ＤｅｆａｏｅｄＤＤＳ類添加後、ｐＨを７．８に調整し
た。

培養方法グルコース２％、ベプトン１％、酵母エキス１
％、食塩０．２５％、メソジアミノピメリン酸５０雌／
Ｌの組成の種培養塔地３０泌を含む三角フラスコに植菌
し、３０℃で２処時培養してものを１０％（容量）種と
して接種する。

本培養はおのおのの培地２０羽を２５０の‘客三角フラ
スコに分注、接種、３０ｑｏで４錨時間、培養後ヒドロ
キシルアミン塩酸塩を１の９／泌の濃度を添加し、更に
４錨時間培養して分析する。

試験結果 培養後のスレオニン蓄積革はつぎのとおりである。

実施例 １７ （Ｌーイソロイシンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ低分子を用いて
Ｌーイソロィシンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：アルスロバクター・シトレウスＮＯ．２３−
２ＡＡＴＣＣＮｏ．１７７７５基本塔地：グルコース１
０％、硫安３％、リン酸第一力リ○‐１％、ＭｇＳ。

４・７日２００‐０４％、鉄イオン独ｐｍ、マンガンイ
オンかｐｍ、ＤＬーホモリン１．０％、味液１の【／ｄ
【、ビオチン２０ｙ／Ｌ、ビタミンＢ塩酸塩８００ｙ／
Ｌ ｐＨ：７．０謎験培地 Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ類添加後、ｐＨを７．０に調整す
る。

培養方法おのおの塔地２０の‘を５００机【容坂口フラ
スコに分注し、別に紬菌した炭酸石灰１夕を添加、これ
に．ブイヨン寒天上の生育菌体を一白金耳接種、３１ｑ
ｏにて振盤培養、２４時間にＤＬ−ホモセリン１．０％
相当量を追添加し、７数時間で発酵を終了させる。

試験結果実施例 １８ （Ｌ−セリンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａｔ
ｔｅｄＤＤＳ高分子を用いてＬーセリンの生産に対する
効果を検討した。

使用菌株：ブレビバクテリウム・ヘルボラムＡＪ１４斑
ｌＡＭ１４３４基本塔地：グルコース５％、ポリベプト
ン０．１％、酵母エキス０．３％、グリシン０．５％Ｐ
Ｈ：６．０試験塔地 ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ類添加後、解６．０に調整。

培養方法おのおのの培地１００の‘を５００の【容坂口
フラスコに分注し、ブイヨン寒天スラント上に生育した
菌体、一白金耳を接種、３０ｑｏで７幼時間振顔培養す
る。

試験結果 実施例 １９ （イノシン酸の生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａけ
ｅｄＤＤＳ低分子区分を用いてイノシン酸生産に対する
効果を検討した。

使用菌株：ミクロコツカス・グルタミクスＡＴＣＣ１４
３０５ 基本塔地：ＧＩ比ｏｓｅ ｌｏ％、ＫＱＰ０４ ０．６
％、ＫＨ２Ｐ０４ ０．３％、Ｍ交０４・７日２００．
０２％、ＭｎＳ〇４・４Ｌ〇０．００４％、クエン酸ソ
ーダ１％、尿素０．１％、ビオチン１０ｙ／１００机【
、アデニン２０ｙ／１００の【ＰＨ：７．４培養方法 下記の試験培地を５００の【客坂口フラスコに７０の‘
づつ分注し、あらかじめ前培養した種菌１０％を接種し
て２３℃で振盤培養した。

試験培地 試験結果 ９母時間培養した後のイノシン酸の生成量を測定した結
果は下記の表りである。

実施例 ２０ （５′ープリンヌクレオチドの生産） 製造例で調製したＤｅねｔｔｅｄＤＯＳを用いて５′ー
プリンヌクレオチドの生産に対する効果検討を検討した
。

使用菌株：ブレピバクテリウム・アンモニアゲネスＡＴ
ＣＣ ６８７２基本培地：Ｇｌｕｃｏｓｅ ｌｏ％、Ｋ
Ｈ２Ｐ０４ １％、ＫＨ２Ｐ０４１％、ＭｇＳ０４・７
４０ １％、ＣａＣ１２・２日２０ ０．０１％、ビオ
チン３０ｙ／ぞ、パントテン酸カルシウム５ｙ／の‘、
サィアミン塩酸塩３ｙ／肌、 Ｃ．Ｓ．ＬＯ．３％、ヒポキサンチン４雌／の上培養方
法２５０私客三角フラスコに３０の‘の培地を分注、殺
菌後、３０℃で振麹培養する。

試験結果 基本培地で１２０時で蓄積する５′−イノシン酸ソーダ
量は６．９地／泌であるが基本培地にＤｅｆａ比ｅｄＤ
ＤＳ６％を添加して培養したものは９．０のｏ／の上と
増収する。

実施例 ２１ （そ−リンゴ酸の生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，ＤｅｆａＵ
ｅｄＥｔＯＨ７０％不溶区分についてそーリンゴ酸生産
に対する効果を検討した。

使用菌株：コリネバクテリウム・メラセコラＡＴＣＣ
１７９６５基本培地：ＧＩＭｏｓｅ ２％、尿素０．２
％、リン酸一カリ０．２％、硫酸マグネシウム０．０５
％、Ｃ．Ｓ．ＬＩ％（Ｖ／Ｖ）、フマール酸５％ ＰＨ
７．０ 培養方法 下記に示す試験用塔地を５００の‘客坂口フラスコに入
れ、コリネバクテリウム、メタセコラＡＴＣＣＩ７９６
５菌株を接種して３０ｑｏで振綾培養した。

試験用塔地ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地のＰＨ
は基本培地と等しくした。試験結果 培養３曲時間後に〆−リンゴ酸生成量を測定した結果は
下記に示す表の通りである。

実施例 ２２ （クエン酸の生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ高分子区分につ
いてクエン酸生産に対する効果を検討した。

使用菌株：べニシリウム・センチネルムＡＴＣＣ１３１
５４基本培地 ノルマルバラフィン混合物（Ｃ，２からＣ，４の等客演
合物）１０％、ＮＨ４ＮＱ Ｏ．１％、ＭｇＳ０４・７
４００．０２％、ＫＨ２Ｐ０４ ０．０２５％、Ｎａ２
ＨＰ０４・１２ＬＯＯ‐０２５％、ＣａＣ１２・２ Ｌ
〇０．００１％、ＭｎＳ〇４・山Ｌ〇０．００１％、Ｚ
ｎＳ０４・７日２０ ０．００１％、日３Ｂ０３ ０．
５雌／夕、コーンスチープリカー０．０５％、ノニオン
〇Ｔ２２１０‐０５％、Ｎａ２Ｍ。

〇４・２ Ｌ〇１０ｙノク，Ｃ雌０４・９も０ １０ｙ
／Ｚ，ＣｏＣ１２・が夕 １０ｙ／そ、ＦｅＳ０４・７
比０ ３の夕／夕，ＣａＣ０３ ４％、餌５．０試験塔
地 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を加えた培地の舟は基本塔地に
等しくした。

培養方法 上記試験用培地を５００叫客坂口フラスコに５０の‘づ
つ分注し、接種した後２が０で振濠培養した。

試験結果２８℃で１５日間培養した後、クエン酸の生成
量を測定した結果を下記に示した。実施例 ２３ （ビオチンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａＵｅｄＤＤＳを用いてビオチ
ンの生産に対する効果を検討した。

使用菌株：Ｓｕｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｖｅｎｄｕｌａ
ｃび０３１４５基本培地：ｇｕｃｏｓｅ２．０％、でん
粉３．０％、大豆粉１．０％、ポリベプトン０．５％、
コーン・スチープリカ−１．０％、ＮａＣＩ Ｏ．５％
、ＣａＣ０３０．５％培養方法 上記菌株を接種し、５００凧【容坂口フラスコ（培地１
００の‘）を用い、２蟹０で４日間振盤培養した。

試験塔地試験結果 ４日間培養した培養液を日２Ｓ０４でｐＨ３．０に調製
し、セラィトを混せて菌体をろ過しそのろ液についてそ
れぞれラクトバチルス・アラビノーサスに対してビオチ
ン活性を測定し、それぞれ下記に示した。

実施例 ２４ （リボフラピンの生産） 製造例で調製したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＳＥｔＯＨ処理９０％可溶区分、Ｄｅｆａ比ｅ
ｄＤＯＳ粉末を用いてリボフラビン生産に対する効果を
検討した。

使用菌株：Ｐｉｃｈｉａｆａｒｉ肌ｓａＩＦＯＯＩ９３
基本培地：ｎ−へキサデカン２．５８％、尿素０．１９
％、リン酸第一カリウム２．５０％、硫酸マグネシウム
０．１０％、コーン・スチープ・リカー０．０１％、ポ
リオキシン・エチレン・ソルビタン・モノラウレート０
．０２２５％、ソルビタン・モノラウレート０．０２７
５％ＰＨ６．０培養方法 ５００の‘客坂口フラスコに下記試験塔地１００の‘を
入れ３０００、１２日間振濠培養した。

試験塔地 試験結果 ３０℃で１２日間培養した後、リボフラピン生産量を測
定した結果、下記の表の通りであった。

※ リボフラビンの定量は衛生試験法に規定してあるル
ミフラビン蛍光法による総ビタミン＆を測定した。

実施例 ２５ （ビタミンＢ２群化合物の生産） 製造例で調製した戊ｆａはｅｄＤＤＳを用いてビタミン
Ｂ８群化合物の生産に対する効果を検討した。

使用菌株：ノカルジア・ガルドネＩＪＡＴＣＣ２１５１
９基本塔地（ＮＨ４）２ＳＱＩ．３２％、尿素０．６％
、ＫＨ２ＰＱ ２％、Ｎａ２ＨＰ０４・１が２０ ３夕
、Ｍ簿０４・７日２００．２％、Ｎａ２Ｃ０３ ０．１
％、ＣａＣ１２・２日２０ ０．０１％、ＦｅＳ０４・
７母０ ０．００５％、ＭｎＳ０４・４〜ＳＬＯＯ．０
０２％、ＣＯＳ０４・７４００．００１％、灰化酵母エ
キス０．０２％、ｎ−へキサデカン１０％ ＰＨ７．２
試験塔地ＤｅｆａｔにｄＤＤＳを加えた培地の軸は基本
培地に等しくした。

培養方法 上記試験用培地１００の‘を５００の【客三角フラスコ
に分注し、回転式振濠培養機（２２比ｐｍ）上で３００
０で振鶴培養した。

試験結果 ３０午０で振盤培養し、最大増槌に達した時の菌体量と
ビタミンＢ２生産量を測定した結果について下記の表に
示した。

ビタミンＢ２含有量の測定は、培養終了後、遠心分離し
た後、それぞれにシアンカリを加えｐＨ５〜６で９５℃
、２０分間抽出し菌体部および培養炉液中の全ビタミン
Ｂ２活性物質をシアノ型にかえて、これをビタミンＢ２
要求菌である大腸菌を用いてシアノコバラミンを測定し
て行なった。

実施例 ２６（食用担子菌の生産） 制造例で調整したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＯＳ−ｐＨ，Ｄｅ
ｆａｔｔｅｄＤＯＧｗＳ−ＰＨ，ＤｅｆａｔｔｅｄＤＤ
Ｓ−粉末、Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＧｗＳ−粉末を用いて食
用担子菌の生産に対する効果を検討した。

使用菌株： シイタケＬｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ び０４９０２
ナメコ ＰｈｏｌｉｏｔａｎａｍｅｋｏＩＦ０ ６１４
１スヱヒ ロタケＳｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｍｍ ｃｏｍ
ｍｕｎｅ ＩＦ０４９２８ヒラタケＰｉｅ川ｏｔ順ｏｓ
ｔｒｅａｔｕｓ『０６５１５基本培地：グルコース１０
夕、Ｙｅａｓｔｅ幻ｒａｃｔ２．４夕、ベプトン２．４
夕、ＫＨ２Ｐ。

４ １夕、ＭｇＳ。

４．７日２００．５夕、ＣａＣ１２・２日２〇 〇‐５
夕、ＦｅＣ１３・母日２〇１０の９、ＭｍＣ１２・４日
２０７．２雌、ＺｎＣ１２ ４の９、ＣｕＳ。

４・８も０１地、水１〆 ＰＨ：５．０ 試験用培地： ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類を添加した場合は、それに相当
するＮ量だけべプトン添加量を滅んじた。

Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ類の添加量はＤｅｆａ比ｅｄＤＤ
Ｓは６％（Ｖ／Ｖ）、その他はＤｅｆａｔにｄＤＤＳ
６％（Ｖ／Ｖ）相当量である。培養方法： 培地１００の‘を５００の‘客坂口フラスコに入れ、そ
れぞれ接種して２５ｑＣ、１０仇ｐｍ（ストローク７伽
）で培養した。

試験結果： 培養はシイタケ９日、ナメコ６日、スェヒロタケ６日、
ヒラタケ７日間おこなった。

培養後、培養液は炉適し、培養液についてはｐＨ、残糖
を測定し、菌体は水を加えて炉別、洗総し、これを乾燥
して乾燥菌体量（ＤＣＷ（夕））を測定した。結果は次
表のとおりである。表 実施例 ２７ （パン酵母の製造法） 製造例で調整したＤｅｆａｏｅｄＤＤＳを用いてパン酵
母の製造に対する効果を検討した。

使用菌株：市販パン酵母（オリエンタル酵母工業：Ｎｊ
ｔｂｙｅａｓｔ）基本培地： 種酵母用（次の表１の培養段階１〜Ｗ）：糠蜜、硫安を
表１に示すような比率に添加した。

他の成分はＫＱＰ０４１．４２、Ｍが０４・７＆００．
９夕、Ｋ一ｅｉｔｒａに ５ 夕、ＣｉＰｉＣ ａｃｉ
ｄ １多 ｙｅａｓｔｅ幻ｒａｃｔｌ夕を１〆に溶か
した液を１０％（Ｖ／Ｖ）添加した。主槽用（次の表１
の培養段階血）：出発液は４６４３の‘で、その組成は
硫安６５．５夕、尿素１２２夕、ＫＨ２Ｐ０４９４夕を
１そに溶かした液を３０．７の【添加したもので、さら
に流加糖容液（糖分２０％）３５７私をべリスミニポン
プで流加した。

Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ培地： 種酵母用（次の表１の培養段階１〜の）：基本培地と同
じ。

主槽用（次の表１の培養段階血）：基本培地のＮ源をＤ
ｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ ６％で置換し出発液に添加した
。

総Ｎ量は基本塔地と等しくした。ＫＨ２Ｐ０４、流加糖
蜜液は基本培地と全く同様に取り扱った。

なお、出発液のｐＨは基本培地、ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ
培地ともに５．６とした。

接種量：前槽（の）より種酵母２８．６夕（Ｗｅｔ）を
主檀に接種。

主槽の培養は５ク培地で５〆／分の通気量で６０仇ｐｍ
の通気蝿枠培養を行った。

培養時におけるｐＨ，ＯＤ策ｏはよる菌体量、増殖倍数
を基本培地とＤｅねｔｔｅｄＤＤＳ培地で比較して示せ
ば表２のとうりとなる。

培養終了後、培養液を３００仇ｐｍ，１５分遠心分離し
、集菌し、さらに一度菌体洗浄した。

（１０，００仇ｐｍ，１０分）これについて水分、発酵
力（マィセス価）を測定した値を表３に示したがＤｅｆ
ａｔｔｅｄＤＤＳ培地のパン酵母の発酵力が著しく高い
。

表１ 表２ 表３ 実施例 ２８ （単細胞蛋白の製造） 制造例で調整したＤｅｆａｔｔｅｄＤＤＳ，Ｄｅｆａ比
ｅｄＤＤＧｗＳ，Ｄｅｆａ比ｅｄＤＤＳ粉末を用いて単
細胞蛋白の製造に対する効果を検討した。

。使用菌株：Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｍｓ ＩＦＯ０６１
９Ｃａｎｄｉ船ｌｉｐｏｌれｉｃａＩＦＯ０７１７基本
培地：Ｃａｎｄｉｄａｕｔｍｓ用：（ＮＨ４）２ＨＰ０
４ ０．０８９夕、硫安０．３０７夕、ＫＣＩＯ．０４
８夕、ＭｇＳ０４・７４００．０７８夕、亜硫酸バルブ
廃液（全糖３．０％）８０の‘以上を水道水で１００の
‘とする。

（ｐＨ５．５）Ｃａｎｄｉ舷ｌｉｐｏｌｙ０ｃａ用：ｎ
−パラフィン５％、Ｎ比ＣＩ Ｏ．５％、ＫＨ２Ｐ０４
０．０２％、ＭｇＳ０４・７４００．０２％、ＦｅＳ
〇４・７日２〇１０の夕／そ、ＭｎＳ〇４・４４０ ２
雌／夕、ＺｎＳＱ・７日２０ ２雌／〆、ＣａＣ０３１
％、Ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｏ．１％試験用塔地：Ｃ
ａ中ｉ船ｕｔｉｌｉｓ用 ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類添加区はそれに含まれるＮ量相
当分の硫安量を滅んじた。

Ｃａｎｄｊ地ｌｉｐｏｌれｉｃａ用： ＤｅｆａｔにｄＤＤＳ類添加区はそれに含まれるＮ量相
当分の塩化アンモニウム量を城んじた。

培養方法：５００松坂口コルベンにＣａｍｄｉｄａｕｔ
ｉｌｊｓの場合は１００の‘，Ｃａｎｄｉ船ｌｉｐｏｌ
のｉｃａの場合は３０叫の培地を入れ、３０ｑｏにて振
とう培養。

（１５びｐｍ）ｌｎｏｃ山ｕｍｓｉｚｅｌび／私。

試験結果：Ｃａｎｄｉ畝ｕｔｉｌｉｓの場合： Ｃａｎｄｉ船ｌｉｐｌ×ｉｃａの場合：培養６畑時間実
施例 ２９（ルーメン微生物に対する生育促進） 制造例で調製したＤｅｆａ比ｅｄＤＤＳを用いてルーメ
ン微生物に対する生育促進に対する効果を検討した。

使用菌株： Ｓｅｌｅ皿ｍｏＭＳＳｐ，４−・−２５ Ｓｅｌｅ側ｍｏＭＳＳｐ，ｐ−３−７ ＳｈｅｐｔｏＣＭＣ雌ｂｏｒｉＳ ３−Ｃａｔｔｌｅ−
１３Ｂ２ｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｒｕｍｉｎｉｅｏｌａ
Ｂｒ−１９１８９Ｂｉｆｉｄ松ｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．３
１脇ｃｔｅｒｏｉｄｅｓｂｒｅｖｉｓ だ‐６Ｂ９ｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓｂｒｅｖｉｓ ７−２−２ＢｕｔＭｉｖ
ｉｂｒｉｏｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓ ２−４０Ｂｕｔ
のｉｖｉｂｒｉｏｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓ だ−２９
ＢｕｔＭｊＶｉｂｒｉｏｆｉｂｒｉＳｏＩＶｅ船 ７−
３３ＢｕｔＭｉＶｉｂｒｉｏｆｉｂｒｉＳｏＩＶｅ船
７−１９Ｅ肋ａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．お−２７Ｂ９ｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓｏｒａｌｉｓ ７−４Ｒｍｍｉｎｏｃｃ
ｕｓ ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ Ａ−１７Ｎｅ餌ｓｐ
ｈｅｌａｅｌｓｄｅｎｊｉ ４一３一３２Ｂｕｔのｉｖ
ｉｂｒｉｏｓｐ．お−３０培地及び培養条件 基本培地 Ｓｕｇａｒ（ＧｌｕｃｏｓｅｏｒＭａｌｔｏｓｅ）
１０ タＰｏｌｙｐｅｐのｎｅ
１０ タＹｅａｓｔｅ丸ｒａｃｔ
１０ タＣ＄ｔｅｉｎｅ一日ＣＩ
・０．５夕０．１％ Ｒｅｓａｚ側ｎ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ １ の【※Ｓａ１＄ Ｓ
。

１ｕｔｉ。

ｎ Ａ ６ Ｍ″
Ｂ６泌ａｄｄｗａｔｅｒｂ１そ ａｎｄａｄｊ船ｔ Ｐ
Ｈ６．９※Ｓａｌ＄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＡＯ．６％
Ｋ２ＨＰ０４ Ｓａｌ＄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂ ＫＨ２Ｐ０４ ０．６
％ＮａＣＩ
Ｉ．２（Ｎ比）２Ｓ０４ １
．２ＭｇＳ０４・７日２０
０．１２ＣａＣ１２・２日２０
０．１２試験塔地Ａ：基本培地

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ デイステイラーズ・ソルブルスもしくはデイステイ
   ラーズ・ドライド・ソルブルスの抽出液を遠心分離もし
   くは濾過処理し、得られた清澄液にアルカリを添加し、
   ｐＨ７以上に調整し、沈澱物を除去し、必要に応じて得
   られた濾液から異なる分子量成分を分画してなる培地成
   分。 ２ デイステイラーズ・ソルブルスもしくはデイステイ
   ラーズ・ドライド・ソルブルスの抽出液を遠心分離もし
   くは濾過処理し、これを異なる分子量成分に分画し、得
   られた清澄液にアルカリを添加し、ｐＨ７以上に調整し
   、沈澱物を除去してなる培地成分。