JPS6039680B2 - ３‐（メチルメルカプト）プロピルアミノブレオマイシンの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、３−（メチルメルカプト）プロピルアミノブ
レオマイシン（以下「デメチルプレオマィシンん」とい
う。

）の製造法に関するもので、より詳しくは、３−（Ｓ・
Ｓ−ジメチルメルカプト）プロピルアミノブレオマイシ
ン（以下「プレオマィシンん」という。）を、ィオウ原
子を含む求核試薬（以下ィオウ化合物という。）の存在
下に熱分解することを特徴とするデメチルブレオマィシ
ン〜の製造法に関するものである。本発明で得られるヂ
メチルブレオィシンＡ２は、マイコバクテリウム・スメ
グマチ‐ス６０７（Ｍｙｃｏ舷ｃｔｅｒｉｍｍｓｍｅｇ
ｍａｔｌｓ６０７）に対するブレオマィシンＡ２の抗菌
力が１００瓜ｈｃｇ力価／の９であるのに対して、デメ
チルブレオマイシンＡ２のそれは、２４斑肌ｃｇ力価／
服と極めて強く、かつ、ＩＣＲ担ガンマゥスに腹腔内１
０日間連続投与した場合のＬＤ則は、ブレオマイシンＡ
２が１２．５の９′ｋ９であるのに対して、デメチルブ
レオマイシンＡ２のそれは、２２．鰍９／ｋ９と約２倍
の湊性低下が認められ、抗ガン性抗生物質として有用な
物質である。

抗ガン性抗生物質ブレオマィシン群は、放線菌ストレプ
トミセス・ハーチシラス（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＶ
ｅｎｉｃｍｕｓ）に属するブレオマィシン生産菌株を栄
養培地中で培養することによって得られる。

（特許第４６５５２５号参照）また、上記の培養に際し
て、塩基性基と第一級ァミノ基の両基を持つアミノ化合
物をプリカーサーとして椿地に添加すれば、そのアミノ
化合物を側鎖として持つ公知、又は新規のブレオマィシ
ンを選択的につくることができる。（特許第７２８１５
８号、特許第７２８１５ｙ号参照）。しかるに、デメチ
ルブレオマィシンんの場合は側鎖アミンに相当する３−
（メチルメルカプト）プロピルアミンは、第一級ァミノ
基を有するのみで培養時にプリカーサーとして添加して
も、本アミンのブレオマイシン分子中へとり込まれず目
的とするデメチルブレオマィシンＡ２は得られない。

この場合培養液中に、徴量にあるデメチルブレオマィシ
ンＡ２は非酵素的にプレオマィシンんが分解したものと
思われる。さきに本発明者の一人である藤井らは、ブレ
オマィシンＡ２を塩基性溶媒中で熱分解しデメチルブレ
オマィシンＡ２を得る方法（特関昭５０−１９７斑号参
照）を見出した。

しかしながらその後になって、含鋼ブレオマィシンをア
ルカリ条件下におくと、ブレオマィシン分子中の８ーラ
クタム環とピリジン環との付け根の部分の炭素の立体配
置が反転し、ェピーブレオマィシンが生成するというこ
とが明らかにされた〔日本農芸化学会、昭和４ｇ玉度大
会講演要旨３１２（１９７４）〕。従ってブレオマィシ
ンＡ２を塩基性溶媒中で分解して得られるデメチルブレ
オマイシンＡ２中にもエピーデメチルプレオマイシンん
の混入が予想される。そこで本発明者らはその確認のた
め、プレオマィシンＡ２（含鋼・塩酸塩）を用い、上記
方法に準じて追試した。すなわち一つはブレオマイシン
Ａ２（含鋼・塩酸塩）１００扱夕をピリジン２の‘、メ
タノール５の上の塩基性溶媒中で４幼時間還流煮沸し、
一つはブレオマィシンＡ２（合鋼・塩酸塩）１００脚を
モリホリン０．２泌、メタノール１の‘の塩基性溶媒中
で７〆○で５時間加温したのち、各反応液を精製、分画
しデメチルブレオマィシンん（含銅‐」塩酸塩）を青色
粉末として得た。さらにこれをェピ−ブレオマィシンと
ブレオマィシンとの分離が可能な、高速液体クロマトグ
ラフィーで分析した。クロマトグラフィーの条件は次の
条件は次の通りである。装置：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ
Ｍ−１２２０ 液体クロマトグラフカラムの長さ：２５
仇肋、内径２．６肌 充填剤：ＭｅｒｃｋｓｏｒｂＳＩ６。

■、粒子径５ミクロン、移動相：１０％酢酸アンモニウ
ム−４％酢酸：メタノール：無水メタノール（２：１０
：２８）カラム温度：６０午○圧力：１１０岬ｓｉ 流量：０．５の【／分 試料：１ムそ（１％水溶液） 検出器：ＵＶ吸光光度計（波長２５４の仏）、０．２×
２吸光度フルスケール図１はそのクロマトグラムであっ
て縦軸は２５４の仏吸光度を、機軸は保持時間（分）を
とったもので図中、１はデメチルブレオマイシンＡ２、
２はエピーデメチルブレオマイシンん、３はピリジンー
メタ／−ル系デメチルブレオマイシンん、４はモルホリ
ンーメタノール系デメチルブレオマィシンんについてそ
れぞれ示したものである。

図１のピーク面積比によりェピーデメチルブレオマイシ
ンんの含量を算出した。

その結果は表１に示す通りで、予想した通りェピーデメ
チルブレオマィシンＡ２の混入が認められ、この塩基性
溶媒中で、プレオマィシンんを熱分解するデメチルブレ
オマィシンＡ２の製造法も必ずしも理想的な方法とはし
、）得ないことがわかつた。

表Ｉ （ ）内の数字はェピーデメチルブレオマイシンんの含
量を示す。

そこで本発明者らは、ェピーブレオマィシンの生成を伴
なわない、脱メチル化反応について種々検討した結果、
ブレオマィシンＡ２を中性溶媒、たとえばメタノール、
水、ジメチルホルムアミドなと、にとかし、これに例え
ばソジウムチオシアナート、ポタシウムチオシアナート
、ソジウムチオサルフエート、ポタシウムチオサルフエ
ート、チオフエノール、ｐ−アミノチオフエ／−ル、ソ
ジウムベンゼンスルホネートなどの求核試薬であるィオ
ゥ化合物を添加し、短時間加熱するときは、ェピ化が起
ることなく、極めて効率よく、脱メチル化が進行し、目
的とするデメチルブレオマィシンんが得られることを見
出した。

本発明では、培養によって得られるブレオマィシンＡ２
（含鋼・塩酸塩）をそのまま使用することができる。

またプレオマィシンんの陰イオンの種類は、脱メチル化
に殆んど影響を与えないので、いかなる陰イオンを有す
るプレオマィシンんでもよく、さらに硫化水素などでブ
レオマィシンＡ２中の銅を除去したブレオマィシンＡ２
も本発明の原料として使用することができる。本発明の
方法によりプレオマィシンんを脱メチル化してデメチル
ブレオマィシンＡ２を製造するためには、ブレオマィシ
ンＡ２をその可溶な溶煤たとえば水、メタノール、ジメ
チルホルムアミド‘こ、またはそれらの混合溶媒に溶か
し、これに１．５乃至２５倍量のソジウムチオシアナー
ト、ポタシウムチオシアナート、ソジウムチオサルフエ
ート、ポタシウムチオサルフエート、チオフヱノール、
ｐ−アミノチオフエノール、ソジウムベンゼンスルホネ
ートなどを加え、７０乃至１２０００で、１時間乃至２
岬時間作用せしめる。

溶媒としては、収率、取り扱い易さの面を考慮すると、
メタノールが最も適当な溶媒ということができるが、ィ
オウ化合物の溶解度を増加させる目的で必要ならば、こ
れに、水、有機溶媒、たとえばエタノールなどの低級ア
ルコール、低級ケトン、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ンなどを添加してもよい。

反応溶液のｐＨはアルカリ性ではェピ化の危険があり、
一方低いｐＨでは加水分毅などの副反応を伴う。

この事実を勘案し、ｐＨ範囲は４乃至７が適当である。
反応は高温で行なう程、脱メタル化は速く進行する。し
かしながら１４０午０以上では、副反応を伴なうので、
結局７０ｑ○乃至１２０００の範囲で、反応時間は１乃
至２独特間の内で選択するのがよい。

つぎに反応終了後、反応生成物を単離するには、添加し
た有機溶媒を減圧蟹去したのち、残溝を、また場合によ
っては、たとえば過剰のィオウ化合物の有機溶媒による
抽出が可能な場合または添加した溶媒の沸点が高い場合
には、エーテルなどを加えてプレオマイシンを沈澱せし
め、炉取したのち、この沈澱物を水に溶かし、予め蒸留
水で充填し、よく洗ったアンバーライト■×ＡＤ−２カ
ラムに通し、反応生成物および原料のプレオマィシンん
を吸着せしめる。

カラムを蒸発水で水洗したのち、塩酸酸性メタノール水
たとえば０．０２規定塩酸ーメタノール（１：４）で溶
出し２９２の山に吸光度を示す分画を集め、メタノール
を減圧留去し、残液を予め０．０２モル塩化アンモニウ
ム水溶液で充填し同液で洗ったＣＭ−セフアデックス■
Ｃ−２５カラムに通し反応生成物およびプレオマィシン
んを吸着せしめたのち、段階的に塩化アンモニウム水溶
液の濃度を０．１モルから０．３モルへ上昇させながら
溶出を行なうと、まずデメチルブレオマィシンんが、続
いてブレオマィシンＡ２が溶出されてくる。各々の分画
を集め、上記のようにアンバーライト■×ＡＤ−２カラ
ムで脱塩し、必要ならば、弱塩基性イオン交換樹脂ダゥ
ェックス■４４（ＯＨ型）で、溶出液のｐＨを６．８に
修正したのち、減圧濃縮乾固し、デメチルブレオマィシ
ンんを粉末として得る。またブレオマィシンＡ２を同様
に粉末で回収することができる。本発明によって得られ
るデメチルブレオマィシンＡ２中には、高速液体クロマ
トグラフィーで分析してもェピーデメチルブレオマィシ
ンＡ２は認められない。

またこのものはマイコバクテリウム、スメグマチス６０
７に対し２５５皿ｃｇ力価／の９の抗菌力を示す。本品
（合銅体）は２０１乃至２１〆Ｃで徐々に分解し、脱錦
体では２００つ０附近から除々に分解する。融点および
その他の理化学的性状については公知の分解方法で製造
した純粋なデメチルブレオマィシンんと全く一致した。
また図２は純粋なデメチルブレオマィシンおよび本発明
で得たデメチルブレオマイシンのそれぞれの高速液体ク
ロマトグラムを示したものであるが本図から明らかなよ
うに本発明で得たデメチルブレオマィシンには全くェピ
体のピークが認められなかった。

以下実施例により本発明を具体的に説明する。

実施例 １プレオマィシンＡ２（合鋼・塩酸塩）１１０
０のｏを５０の【客の耐圧瓶にとりメタノール５．５の
‘を加えて溶解し、これにソジウムチオシアナート５８
１の９を添加して溶解した。

反応容器を密栓したのち、１２０午○の油裕中で２時間
加熱したのち、反応液からメタノールを減圧留去し、残
澄を１０叫の蒸留水に溶解した。これを予め蒸留水で充
填したアンバーライト■×ＡＤ−２カラム（１００奴容
量）に通し、プレオマィシンを吸着させたのち、カラム
を１５０の‘の蒸留水で水洗し、続いて０．０２規定塩
酸−メタノール（１：４）を通し、青色の分画を集め、
メタノールを凝圧留去した。次にこの残液を予め０．０
２モル塩化アンモニウムで充填し、同液で洗ったＣＭー
セフアデツクス■Ｃ−２５カラム（１１０の‘容量）に
通し、一たんブレオマィシンを吸着せしめる。つぎに０
．１モル塩化アンモニウム水溶液９０の‘を通し、溶出
してくるデメチルブレオマィシンＡ２の青色の分画１８
０の‘を集め、この総出分画を上記のごとく、アンバー
ライト■×ＡＤ−２を用いて脱塩し、袴出液のｐＨを弱
塩基性イオン交操縦脂ダウェックス■４４（ＯＨ型）に
より６．８に修正し減圧濃縮乾固し、デメチルブレオマ
ィシンん（合鋼・塩酸塩）９１０柵の青色粉末を得た。
デメチルブレオマィシンＡ２（含鋼・塩酸塩）を除いた
ＣＭーセフアデツクス■Ｃ−２５にはなお天分解のプレ
オマィシンんが吸着しており、さらに０．３モル塩化ア
ンモニウム水溶液で綾出を行ない、ブレオマィシンＡ２
（合繊・塩酸塩）の青色の分画部分を集め、以下デメチ
ルブレオマィシンＡ２（合鋼・塩酸塩）と同様に処理を
行ない青色のブレオマィシンＡ２（含銅・塩酸塩）６２
Ｍを回収した。実施例 ２ ブレオマィシンＡ２（含鋼・塩酸塩）５００の９を５叫
の蒸留水に溶解し、これに、ソジウムチオサルフェート
８０９の夕を添加して溶解し、溶媒のｐＨを０．１規定
塩酸で７に修正した。

封管したのち８０ｑＣで１５時間加熱し、反応液を冷却
後、予め蒸留水で充填し、洗ったアンバーライト■×Ａ
Ｄ−２カラムに通し、以下実施例１に準じて後処理を行
ない、デメチルブレオマィシンＡ２（合銅・塩酸塩）３
２５ｍｏの青色粉末を得た。またブレオマイシンＡ２（
合鋼・塩酸塩）１１５の夕を回収した。実施例 ３ ブレオマィシンＡ２（含鋼・塩酸塩）１５０の９を、１
の‘のメタノールに溶解し、これに９５ｍｐのポタシゥ
ムチオシアナートを添加して溶解した。

反応容器を封管後、１１０ｏｏで１時間加熱し、反応を
終了した。以下実施例１に準じて後処理を行いデメチル
ブレオマィシンＡ２（含銅・塩酸塩）、１１３雌の青色
粉末を得た。実施例 ４ プレオマイシンＡ２（含鋼・塩酸塩）１５０の９をメタ
ノール１泌に溶解しこれにソジウムチオシアナート８３
雌を添加し溶解した。

反応容器を封督したのち１１０ｑｏで１時間加熱し、反
応を終了した。以下実施例１に準じて後処理を行ない、
デメテルフレオマィシンん（脱銅・塩酸塩）１２２のｏ
の白色粉末を得た。実施例 ５ ブレオマイシンＡ２（含銅・塩酸塩）１００の９をメタ
ノール２の‘に溶解し、これにチオフェノール１２のｃ
を添加したのち、この溶液をトリェチルアミンで中和し
た。

封管後７０つ○で１４時間加熱し反応を終了した。反応
液にエーテルを加えて、ブレオマィシンを沈澱せしめ、
これを炉取した。この沈澱物を水に溶解後、実施例１に
準じて後処理を行ない、デメチルブレオマィシンん（脱
銅・塩酸塩）７３のｐの白色粉末を得た。

【図面の簡単な説明】

図１は純粋なデメチルプレオマィシンＡ２、純粋なェピ
ーデメチルブレオマィシンＡ２、ピリジンーメタノール
系溶媒で分解して得たデメチルブレオマイシンん１およ
びェピーデメチルブレオマィシンＡ２２混合物およびモ
ルホリンーメタノール系溶媒で分解して得たデメチルブ
レオマィシンＡ２１およびエピーデメチルブレオマイシ
ンＡ２２混合物のそれぞれを高速液体クロマトグラフィ
ーで分析して得たクロマトグラムである。 図２は純粋なデメチルブレオマィシンＡ２および本発明
で得たデメチルブレオマィシンＡ２のそれぞれを高速液
体クロマトグラフィーで分析して得たクロマトグラムで
ある。矛，図 才２図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ３−（Ｓ・Ｓ−ジメチルメルカプト）プロピルアミ
   ノブレオマイシンを、イオウ原子を含む求核試薬の存在
   下に熱分解することを特徴とする３−（メチルメルカプ
   ト）プロピルアミノプレオマイシンの製造法。