JPS6031058A - 妊娠診断試薬 - Google Patents
妊娠診断試薬Info
- Publication number
- JPS6031058A JPS6031058A JP13878083A JP13878083A JPS6031058A JP S6031058 A JPS6031058 A JP S6031058A JP 13878083 A JP13878083 A JP 13878083A JP 13878083 A JP13878083 A JP 13878083A JP S6031058 A JPS6031058 A JP S6031058A
- Authority
- JP
- Japan
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- reagent
- latex
- hcg
- pregnancy
- hog
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗ＨＯＧ （ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ａｈｏｒ
ｉｏｎｉ。
ｉｏｎｉ。
ｇｏｎａｄｏｔ？ｏｐｉｎ ）抗体を愚作したポリスチ
レンラテックス試薬を用いる凝集反応による妊娠診断法
において、前記ラテックス試薬の１回量をガラスアンノ
ルに充填封入し、被検液中のＨＯＧの嵐を測定するに際
し、アンノル内へ被検液を注入することによりアングル
内において凝集反応を行うことを特徴とする妊娠診断試
薬に関するものである。
レンラテックス試薬を用いる凝集反応による妊娠診断法
において、前記ラテックス試薬の１回量をガラスアンノ
ルに充填封入し、被検液中のＨＯＧの嵐を測定するに際
し、アンノル内へ被検液を注入することによりアングル
内において凝集反応を行うことを特徴とする妊娠診断試
薬に関するものである。
従来よりラテックス凝集反応による免疫学的妊娠診断法
としてはガラススライド上で被検液とラテックス液等の
試液を混合し、数分間揺動させた後、ラテックス粒子の
凝集状態から妊娠の判定を行う方法が用いられて来た。
としてはガラススライド上で被検液とラテックス液等の
試液を混合し、数分間揺動させた後、ラテックス粒子の
凝集状態から妊娠の判定を行う方法が用いられて来た。
しかし、これらの既知の方法で用いられる試薬は、ラテ
ックス試薬等の試液を保管容器から滴下ピンやスポイト
などを使用して、−回分を正確に取り出す必要があるた
め、医師、臨床検査技師等の専門の技伶者でなければ測
定操作が困鄭であるなどの欠点があった。
ックス試薬等の試液を保管容器から滴下ピンやスポイト
などを使用して、−回分を正確に取り出す必要があるた
め、医師、臨床検査技師等の専門の技伶者でなければ測
定操作が困鄭であるなどの欠点があった。
もし被検液、特に尿中のＨＯＧ値を簡単な方法で測定す
ることが可能となれば、医師等の専門的な検査技術を有
する者を介することなく、通常の被検者が随時、自己診
断を行うことができるため妊娠の管理、迅速な治療、諸
疾患の経過観察等の点からも極めて有用な方法であると
考えられる。被検者において行う自己診断用の妊娠判定
検査試薬として望ましい性能は、 （１１操作が簡便であり、診断結果の判定が容易である
こと。
ることが可能となれば、医師等の専門的な検査技術を有
する者を介することなく、通常の被検者が随時、自己診
断を行うことができるため妊娠の管理、迅速な治療、諸
疾患の経過観察等の点からも極めて有用な方法であると
考えられる。被検者において行う自己診断用の妊娠判定
検査試薬として望ましい性能は、 （１１操作が簡便であり、診断結果の判定が容易である
こと。
（２） 判定結果が正確であること。
（３） 妊娠成立後、できるだけ早く判定できること。
（４） 判定上偽陽性の反応の出現の可能性が少いこと
。
。
（５） 保存しやすく、変質しないこと。
などがあげられる。特に流産を初めとする異常妊娠の予
知や、予防の上からも妊娠成立後、−日も早く妊娠の判
定を下すことが望ましい。
知や、予防の上からも妊娠成立後、−日も早く妊娠の判
定を下すことが望ましい。
本発明者らは上記した既存の妊娠診断試薬製品の欠点を
改良し、自己診断用に好ましい妊娠検査試薬の開発を目
的として、鋭意研究を行った結果、ラテックス試薬の１
回の測定に必要な量をアンゾルに分注した、アンプル内
で被検液を混合して凝集反応を行うことにより、極めて
簡単にＨＯＧの定性反応を行うことが可能であることを
見い出し、妊娠診断試薬はりサヤ等の動物を免疫して得
られり抗ＨＯ（） 抗体を精製した後、ポリスチレンラ
テックスに感作し、１回の測定に必要な量のラテックス
試液をアングルに注入してそのまま、又は、凍結乾燥し
て、窒素ガスを封入した後、熔閉することにより得られ
る。妊娠診断の判定に際しては、アンノルの先端部を切
断し、アンノル内に被検液（尿）をピペットを用いて一
定量注入し混合すれば、正常妊娠の被検液（尿）では数
秒〜３分以内にラテックス粒子の凝集が観察され妊娠の
判定ができる。
改良し、自己診断用に好ましい妊娠検査試薬の開発を目
的として、鋭意研究を行った結果、ラテックス試薬の１
回の測定に必要な量をアンゾルに分注した、アンプル内
で被検液を混合して凝集反応を行うことにより、極めて
簡単にＨＯＧの定性反応を行うことが可能であることを
見い出し、妊娠診断試薬はりサヤ等の動物を免疫して得
られり抗ＨＯ（） 抗体を精製した後、ポリスチレンラ
テックスに感作し、１回の測定に必要な量のラテックス
試液をアングルに注入してそのまま、又は、凍結乾燥し
て、窒素ガスを封入した後、熔閉することにより得られ
る。妊娠診断の判定に際しては、アンノルの先端部を切
断し、アンノル内に被検液（尿）をピペットを用いて一
定量注入し混合すれば、正常妊娠の被検液（尿）では数
秒〜３分以内にラテックス粒子の凝集が観察され妊娠の
判定ができる。
本発明の診断用試薬は使用に際して、被検液の一定量を
アングル中に滴下して、混合するだけで判定結果が得ら
れるので、極めて短時間に妊娠の診断試験を行うことが
できる。本発明の妊娠診断試薬の形態は測定操作が容易
であり、また試薬の１回分毎の小ｔｊｔ単位の包装であ
る点で被検者の自己診断に適している。また、従来の免
疫学的診断に用いられたスライド板、撹拌棒などの用具
が不要であり、試薬の製造費が廉価であり、かつ携帯に
極めて便利である。
アングル中に滴下して、混合するだけで判定結果が得ら
れるので、極めて短時間に妊娠の診断試験を行うことが
できる。本発明の妊娠診断試薬の形態は測定操作が容易
であり、また試薬の１回分毎の小ｔｊｔ単位の包装であ
る点で被検者の自己診断に適している。また、従来の免
疫学的診断に用いられたスライド板、撹拌棒などの用具
が不要であり、試薬の製造費が廉価であり、かつ携帯に
極めて便利である。
本発明の妊娠診断試薬を調製するにはまず市販品のＨＯ
Ｇを等電点電気泳動法によって比活性が１０．０００工
Ｕ／Ｉｎ９以上になるように精製し、これｔ［［とじて
Ｉ Ｔｎ９ ／ ｍｌの濃度になるように生理的食塩水
に溶解し、その０．１ｄを７０インドの完全アジュバン
トと混合し、この混合物を体重１．６〜２．０ｋｇの雌
性家兎の皮内に週１回の割合で７回以上注射して免疫し
た。８週間後に家兎の頚動脈から全面採血し、抗血清を
得た。この抗血清をアフイニテイクロマトグラフ等の手
段により精製し、得られた抗ＨＯＧ抗体を粒子径０．１
〜０．８ ｔクロン、好ましくは０．２〜０．３ミクｐ
ンの一すスチレンラテックスの１％Ｍｆｉ液に加え、イ
ンキュベートした後、グリシン、リン酸緩衝液又は硼酸
酸価液中に分散することにより、本発明の試薬が得られ
る。
Ｇを等電点電気泳動法によって比活性が１０．０００工
Ｕ／Ｉｎ９以上になるように精製し、これｔ［［とじて
Ｉ Ｔｎ９ ／ ｍｌの濃度になるように生理的食塩水
に溶解し、その０．１ｄを７０インドの完全アジュバン
トと混合し、この混合物を体重１．６〜２．０ｋｇの雌
性家兎の皮内に週１回の割合で７回以上注射して免疫し
た。８週間後に家兎の頚動脈から全面採血し、抗血清を
得た。この抗血清をアフイニテイクロマトグラフ等の手
段により精製し、得られた抗ＨＯＧ抗体を粒子径０．１
〜０．８ ｔクロン、好ましくは０．２〜０．３ミクｐ
ンの一すスチレンラテックスの１％Ｍｆｉ液に加え、イ
ンキュベートした後、グリシン、リン酸緩衝液又は硼酸
酸価液中に分散することにより、本発明の試薬が得られ
る。
この際、ポリスチレンラテックスは染料等を用いて抗体
感作に先だって着色することにより、凝集像の判定はよ
り容易となる。また最終懸濁液にショ糖、マンニトール
、乳糖、デキストラン゛等の糖類、グリシン、尿素等か
ら選ばれた一種又は二種以上の添加物等をそれぞれ０．
２〜１０重量％の範囲で添加すれば、凍結乾燥に適した
安定性の高い試薬が得られる。この他、抗体感作蛍の増
減、正常ウサギ血清、牛血清アルブミン、界面活性剤等
を添加、反応糸の…、イオン濃度の調節、あるいはこれ
らの幾つかを組合せることにより、得られるラテックス
試薬の感度を適宜調節することができる。得られたラテ
ックス試液は、ガラスアンプルに２５〜５０μｌ ずつ
分注し、そのまま熔閉するか、又は凍結乾燥する。凍結
乾燥物は、乾燥後アンプル内に窒素ガスを封入すること
により、優れた安定性が保持される。診断検査に際して
は、アングルを先端部で切断し、被検液（尿）の一定量
（約６０〜１００μｌ） をアングル内に滴下し、アン
プルを揺動させて、尿とラテックスとを混合させること
により、正常妊娠法の場合は数秒がら約６分以内に凝集
粒子が観察される。凝集反応はガラス壁を通して観察す
るのでたとえばアングルの外壁の一部に黒色塗料を塗布
しておくことにより、凝集粒子の観察はより容易となる
。本発明の試薬により妊娠法、１３０例および非妊娠尿
２６例について凝集反応を調べたところ、妊娠法１３Ｃ
ｌ例中１２６例陽性、４例偽陽性、非妊娠尿２６例中２
５例陰性、１例偽陰性を示した。以下本発明の試薬の効
果を実施例により更に具体的に説明する。
感作に先だって着色することにより、凝集像の判定はよ
り容易となる。また最終懸濁液にショ糖、マンニトール
、乳糖、デキストラン゛等の糖類、グリシン、尿素等か
ら選ばれた一種又は二種以上の添加物等をそれぞれ０．
２〜１０重量％の範囲で添加すれば、凍結乾燥に適した
安定性の高い試薬が得られる。この他、抗体感作蛍の増
減、正常ウサギ血清、牛血清アルブミン、界面活性剤等
を添加、反応糸の…、イオン濃度の調節、あるいはこれ
らの幾つかを組合せることにより、得られるラテックス
試薬の感度を適宜調節することができる。得られたラテ
ックス試液は、ガラスアンプルに２５〜５０μｌ ずつ
分注し、そのまま熔閉するか、又は凍結乾燥する。凍結
乾燥物は、乾燥後アンプル内に窒素ガスを封入すること
により、優れた安定性が保持される。診断検査に際して
は、アングルを先端部で切断し、被検液（尿）の一定量
（約６０〜１００μｌ） をアングル内に滴下し、アン
プルを揺動させて、尿とラテックスとを混合させること
により、正常妊娠法の場合は数秒がら約６分以内に凝集
粒子が観察される。凝集反応はガラス壁を通して観察す
るのでたとえばアングルの外壁の一部に黒色塗料を塗布
しておくことにより、凝集粒子の観察はより容易となる
。本発明の試薬により妊娠法、１３０例および非妊娠尿
２６例について凝集反応を調べたところ、妊娠法１３Ｃ
ｌ例中１２６例陽性、４例偽陽性、非妊娠尿２６例中２
５例陰性、１例偽陰性を示した。以下本発明の試薬の効
果を実施例により更に具体的に説明する。
本発明はその主旨の範囲内で種々の応用が可能であり、
本発明は以下の実施例によって限定されるものではない
。
本発明は以下の実施例によって限定されるものではない
。
実施例１
２ ＷのＨＯＧ （８０００工Ｕ／ｍ？ ）を１ｒＩＬ
ｌノ生理的食塩水に溶解し、１ｍｌのフロイントの完全
アジュバントと混合し、家兎に２週間隔で８回以上免疫
して抗ＨＯＧ血清を得た。この抗血清を硫安塩析により
得たγ−グ四ゾリン画分を透析後、リン酸緩衝液（ｐＨ
７，２）に溶解したγ−グロブリン溶液に等容量のポリ
スチレンラテックス液（粒子径０．３５μ、リン酸緩衝
液ｐＨ７，２に分散）を加え、１％ウシ血清アルブミン
を加えて、６７℃、２時間インキュベーションを行なっ
た。次いで、１２．０００ｒ、ｐ、ｍ・＼１５分間遠心
分離を行ない、稀釈液”を用いて１％の濃度になるよう
、懸濁して抗ＨＯＧ感作ラテックス試薬を得た。（＊稀
釈液としてＨＥＰＥｊＳ緩衝液（ｐＨ８，０）に１％デ
キストラン、０．５％尿ｇ、０．５％牛血清アルブミン
、０．１％ナトリウムアジドを加えたものを用いた。） 上記のように得られたラテックス試薬を丸底アングルに
６０±６μｌ の割合で分注し、次いであらかじめ一４
０℃に冷却した真空凍結乾燥機のチャンバー内に入れ、
−４０℃で２時間、−４ｏ〜＋３０℃で８時間、＋３０
℃で２時間の温度推移で凍結乾燥した。乾燥終了後、ア
ンプル内に窒素ガスを封入したのち、溶閉し、抗ＨＯＧ
抗体うテックス感作ラテックス粒子組成物を得た。次い
でアングル中の感作ラテックス粒子組成物にＱ 、 ５
ｘＵＡｎｌ 。
ｌノ生理的食塩水に溶解し、１ｍｌのフロイントの完全
アジュバントと混合し、家兎に２週間隔で８回以上免疫
して抗ＨＯＧ血清を得た。この抗血清を硫安塩析により
得たγ−グ四ゾリン画分を透析後、リン酸緩衝液（ｐＨ
７，２）に溶解したγ−グロブリン溶液に等容量のポリ
スチレンラテックス液（粒子径０．３５μ、リン酸緩衝
液ｐＨ７，２に分散）を加え、１％ウシ血清アルブミン
を加えて、６７℃、２時間インキュベーションを行なっ
た。次いで、１２．０００ｒ、ｐ、ｍ・＼１５分間遠心
分離を行ない、稀釈液”を用いて１％の濃度になるよう
、懸濁して抗ＨＯＧ感作ラテックス試薬を得た。（＊稀
釈液としてＨＥＰＥｊＳ緩衝液（ｐＨ８，０）に１％デ
キストラン、０．５％尿ｇ、０．５％牛血清アルブミン
、０．１％ナトリウムアジドを加えたものを用いた。） 上記のように得られたラテックス試薬を丸底アングルに
６０±６μｌ の割合で分注し、次いであらかじめ一４
０℃に冷却した真空凍結乾燥機のチャンバー内に入れ、
−４０℃で２時間、−４ｏ〜＋３０℃で８時間、＋３０
℃で２時間の温度推移で凍結乾燥した。乾燥終了後、ア
ンプル内に窒素ガスを封入したのち、溶閉し、抗ＨＯＧ
抗体うテックス感作ラテックス粒子組成物を得た。次い
でアングル中の感作ラテックス粒子組成物にＱ 、 ５
ｘＵＡｎｌ 。
１．０工０淘、１０工Ｕ７ｊｎｌ； ％ １０００ 工
ＵＡ’のＨＯＧ濃度に調製したＨＯＧ溶液を５０μノず
つ、それぞれ別々に滴加した。このＨＯＧ溶液を加えた
アン７°ルを数分間、手で振ったのち螢光灯の下で凝集
状態を観察した。その結果０．５ 工Ｕ／ｆｌｌＪ％
１工■〜、１゜工■〜、１０００工Ｕ汐ノ（２）ＨＯＧ
ｍ度において凝集が認められた。また、非妊娠尿８検
体では凝集は認められなかった。これらの結果を第１表
に示す。
ＵＡ’のＨＯＧ濃度に調製したＨＯＧ溶液を５０μノず
つ、それぞれ別々に滴加した。このＨＯＧ溶液を加えた
アン７°ルを数分間、手で振ったのち螢光灯の下で凝集
状態を観察した。その結果０．５ 工Ｕ／ｆｌｌＪ％
１工■〜、１゜工■〜、１０００工Ｕ汐ノ（２）ＨＯＧ
ｍ度において凝集が認められた。また、非妊娠尿８検
体では凝集は認められなかった。これらの結果を第１表
に示す。
実施例２
Ｋａｙａｓｅｔ ｌ３１ｕｅ ＦＲ（日本化薬製）をキ
シレンの１０ｄに飽和量を溶解し、濾過したのち濾液の
２ｍｌを１０％ポリスチレンラテックス（粒子径０．２
２μ）に加え、１晩激しく撹拌する。ナス型フラスコに
上記の溶液を移したのち少量の水を加え、エバポレータ
ーでキシレンを除去した後、ガラスフィルターで一過し
、青色ポリスチレンラテックス液を得た。
シレンの１０ｄに飽和量を溶解し、濾過したのち濾液の
２ｍｌを１０％ポリスチレンラテックス（粒子径０．２
２μ）に加え、１晩激しく撹拌する。ナス型フラスコに
上記の溶液を移したのち少量の水を加え、エバポレータ
ーでキシレンを除去した後、ガラスフィルターで一過し
、青色ポリスチレンラテックス液を得た。
実施例６
実施例１と同様の方法で得られたリン酸緩衝液（ｐＨ７
，２）に溶解したγ−グロブリン溶液に等容置の実施例
２で得られた青色ポリスチレンラテックス液（グリシン
緩衝液（ｐＨ８，４）に分Ｖｒ１．）を加え、１％ウシ
血清アルブミンを加えて、３７℃、２時間インキュベー
ションした。次いで１２，０００ｒ、ｐ、ｍ、、１５分
間遠心分離を行ない、稀釈液 を用いて濃度１％になる
よう懸濁して抗ＨＯＧ感作ラテックス試薬を得た。（＊
９稀釈液としてグリシン緩衝液（ｐ）１８．４）に０．
７％デキストラン、０．５％グリシン、０．５％牛血清
アルブミン、ｏ、１％ナトリウムアジドを加えたものを
用いた。）次いで、実施例１の方法に従い、凍結乾燥し
、次いでアングル中の感作ラテツクス粒子組成物に別途
調製したＨＯＧ溶液及び非妊娠尿を用いた、定性試験を
実施し凝集状態を＠察し、実施例１と同様の結果を得た
。その結果を第１表に示す。
，２）に溶解したγ−グロブリン溶液に等容置の実施例
２で得られた青色ポリスチレンラテックス液（グリシン
緩衝液（ｐＨ８，４）に分Ｖｒ１．）を加え、１％ウシ
血清アルブミンを加えて、３７℃、２時間インキュベー
ションした。次いで１２，０００ｒ、ｐ、ｍ、、１５分
間遠心分離を行ない、稀釈液 を用いて濃度１％になる
よう懸濁して抗ＨＯＧ感作ラテックス試薬を得た。（＊
９稀釈液としてグリシン緩衝液（ｐ）１８．４）に０．
７％デキストラン、０．５％グリシン、０．５％牛血清
アルブミン、ｏ、１％ナトリウムアジドを加えたものを
用いた。）次いで、実施例１の方法に従い、凍結乾燥し
、次いでアングル中の感作ラテツクス粒子組成物に別途
調製したＨＯＧ溶液及び非妊娠尿を用いた、定性試験を
実施し凝集状態を＠察し、実施例１と同様の結果を得た
。その結果を第１表に示す。
第１表 ラテックス定性試験
代理人 浅 村 皓
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ＋ｌ） ガラスアンノル中に抗ＨＯＧ （ａｎｔｉ−ｈ
ｕｍａｎｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉ
ｎ ） 抗体を愚作したポリスチレンラテックス試液の
１＠量を充填ｍ閉してなる妊娠診断試薬。 （２） 抗ＨＯＧ抗体を感作したポリスチレンラテック
ス試液の１回量をガラスアングル中に充填した後、凍結
乾燥することを含む特許請求の範囲１項記載の妊娠診断
試薬。 （３） ポリスチレンラテックスが着色したポリスチレ
ンラテックスである特許請求の範囲１項記載の妊娠診断
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13878083A JPS6031058A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 妊娠診断試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13878083A JPS6031058A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 妊娠診断試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6031058A true JPS6031058A (ja) | 1985-02-16 |
Family
ID=15230022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13878083A Pending JPS6031058A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 妊娠診断試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6031058A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52110563A (en) * | 1976-03-15 | 1977-09-16 | Hitachi Ltd | Hexagonal boride cathode |
| JPH06180320A (ja) * | 1987-04-27 | 1994-06-28 | Unilever Nv | 検定法 |
| JP2017181492A (ja) * | 2016-03-24 | 2017-10-05 | 三洋化成工業株式会社 | 粒子組成物、免疫測定用試薬及び免疫測定方法 |
-
1983
- 1983-07-29 JP JP13878083A patent/JPS6031058A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52110563A (en) * | 1976-03-15 | 1977-09-16 | Hitachi Ltd | Hexagonal boride cathode |
| JPS6030054B2 (ja) * | 1976-03-15 | 1985-07-13 | 株式会社日立製作所 | 熱陰極 |
| JPH06180320A (ja) * | 1987-04-27 | 1994-06-28 | Unilever Nv | 検定法 |
| JP2017181492A (ja) * | 2016-03-24 | 2017-10-05 | 三洋化成工業株式会社 | 粒子組成物、免疫測定用試薬及び免疫測定方法 |
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