JPS60260594A - ＧｎＲＨ拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒトを含む哺乳動物の下垂体からの生殖腺刺激
ホルモンの放出を抑制するはプチド類、ならびに排卵を
抑えかつ／またステロイド類の放出を抑える方法に関す
る。詳細には、本発明は生殖腺機能およびステロイドホ
ルモン（プロゲステロンおよびテストステロン）の放出
を抑制するベプチビ類に関する。

発明の背景 下垂体は視床下部として知られる脳の基底部に細い茎で
もってつながっている。この下垂体からは生殖腺刺激ホ
ルモンと呼ばれる卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および黄
体形成ホルモン（ＬＨ）が分泌される。これらのホルモ
ンは協働して生殖腺の機能を調節し、精巣でテストステ
ロンをそして卵巣でプロゲステロンとエストロゲンを産
生ずる。これらはまた配偶子（生殖細胞）の発生および
成熟を調節する。

一般に、下垂体前葉からのホルモンの放出は視床下部に
よって産生される別の種類のホルモンが前もって放出さ
れることを必要とする。これらの視床下部ホルモンのう
ちの１種は生殖腺刺激ホルモン（特にＬＨ）の放出を誘
発させる因子として作用し、本明細書ではこのホルモン
をＧｎＲＨと呼ぶことにするが、これはまたＬＨ−ＲＨ
およびＬＲＨとも呼ばれている。ＧｎＲＨは単離されて
、次の構造： ｐ　−Ｇｌｕ　−Ｈｌｓ　−Ｔｒｐ　−８ｅｒ　−Ｔｙ
ｒ　−Ｇ’１ｙ−Ｌｅｕ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌ
ｙ　−ＮＨ２で表わされるデカ啄ゾチｒとして性状決定
がなされた。

はプチドとは２個またはそれ以上のアミノ酸を含み、そ
して一方のアミノ酸のカルボキシル基が他方のアミノ酸
のアミノ基に結合している化合物のことである。先に示
したＧｎＲＨのための式は、アミノ末端が左にそしてカ
ルボキシル末端が右に記載されるペプチドの慣用表示法
に従っている。

アミノ酸残基の位置は左から右へアミノ酸残基に番号を
付すことＫより確認される。ＧｎＲＨの場合は、グリシ
ンのカルボキシル基のＯＨ部分がアミノ基（Ｎ）Ｉ２）
によって置換されている。上記の個々のアミノ酸残基の
ための略号は慣用的であってアミノ酸の俗名に基づいて
おり、例えば、ｐ　−Ｇｌｕはピログルタミン酸、　Ｈ
ｌｓはヒスチジン、　Ｔｒｐはトリプトファン、Ｓｅｒ
はセリン、　Ｔｙｒはチロシン、Ｇ１７　ハ／　リシン
、　Ｌｅｕはロイシン、　Ｏｒｎはオルニチン、Ａｒｇ
、はアルギニン、　Ｐｒｏはプロリン、　Ｓａｒはサル
コシン、　ＰｈｅはフェニルアラニンオヨヒＡｌａはア
ラニンをそれぞれ表わす。これらのアミノ酸は一般にバ
リン、インロイシン、トレオニン、リシン、アス／Ｒｙ
ギン酸、アスノラギン、グルタミン、システィン、メチ
オニン、フェニルアラニンおよびゾロリンと共に自然界
に存在するアミノ酸、すなわち蛋白質から誘導される普
通のアミノ酸であると考えられる。グリシンを除いて、
本発明４プチドの各アミノ酸は特に指示がない限り５体
である。

雌性哺乳動物における排卵を抑制ビたい理由が多々存在
し、そして排卵を抑制しまた遅らせるためにＧｎＲＨの
正常機能に対して拮抗的に作用するＧｎＲＨ類似体が投
与されてきた。こうした理由のために、ＧｎＲＨの拮抗
物質であるＧｎＲＨ類似体は避妊薬としてのそれらの使
用可能性について又は妊娠期間を調節することについて
研究されつつある。またＧｎＲＨ拮抗物質は早発思春期
症および子宮内膜症の治療に使用することができる。こ
の種の拮抗物質は更忙雄性哺乳動物の生殖腺刺激ホルモ
ンの分泌を調節するのに有用であることが見出され、そ
して例えば雄性哺乳動物の避妊薬とじて精子形成を阻止
するために、および前立腺肥大の治療のために使用され
る。内因性ＧｎＲＨに対して強力な拮抗作用を示し、か
つＬＨの分泌ならびに哺乳動物の生殖腺からのステロイ
ド類の放出を抑制する改善されたペプチド類を提供する
ことが望まれる。

発明の要約 本発明はヒトを含む哺乳動物の生殖腺刺激ホルモンの放
出を抑制する被プチド類を提供し、また雄性および雌性
哺乳動物の生殖腺からのステロイド類の放出を抑制する
方法を提供する。改善されたＧｎＲＨＱ似体はＧｎＲＨ
に対する強力な拮抗物質であって、哺乳動物の生殖過程
に阻害作用を示す。

これらの類似体は早発思春期症、ホルモン依存性新生物
（腫瘍）、月経困難症および子宮内膜症を含む種々の情
況下で生殖腺刺激ホルモンおよび性ホルモンの産生を阻
止すべく使用される。

一般に、本発明によれば、ヒトを含む哺乳動物の下垂体
からの生殖腺刺激ホルモンの分泌を強く抑制し、かつ／
また生殖腺からのステロイド９類の放出を阻止するペプ
チドが合成された。これらのペプチドは好適にはデヒド
ロ−Ｐｒｏまたはβ−（１−または２−す７チル）−Ｄ
−アラニン（以後はβ−Ｄ−ＩＮＡＬまたはβ−Ｄ　−
２ＮＡＬと記す）の形の１位置換；修飾Ｄ−Ｐｈｅの形
の２位置換；好適には置換Ｄ−Ｔｒｐ、　Ｄ−３ＰＡＬ
またはβ−Ｄ−ＮＡＩ、の形の３位置換；５個より少な
い炭素原子′をもつジアミノ酸の４位における任意置換
；（ａ）ハロゲン化またはメチル化Ｌ−ＰｈｅまたはＬ
　−Ｔｙｒ　、もしくは（ｂ）　Ａｒｇの形の５位にお
ける任意置換；　Ｎｌｅ、　ＮＭＬ、　Ｐｈｅ。

Ｎｖａ、　Ｍｅｔ、　Ｔｙｒ、　Ｔｒｐ、　Ｃｙｓ、　
ＰＡＬおよび４Ｆ　−Ｄ　−Ｐｈｅのような６位置換お
よび７位の任意置換；が存在するＧｎＲＨ類似体である
。２位の修飾Ｄ−Ｐｈｅは（ンゼン環に特定の修飾が存
在する結果として増大された拮抗作用を与える。ｋンゼ
ン環の水素原子に代わる単一置換はパラ位または４位に
おいてなされ、そしてその置換基はクロル、フルオル、
ズロムおよびニトロ基より選択され、クロル、フルオル
およびニトロ基が好ましい。ジクロル置換。

はベンゼン環の２，４位または３，４位においてなされ
る。α−炭素原子もメチル化されてよく、例えば（ＣＣ
ｔＭθ／４０１）Ｐｈｅであり得る。未置換のＤ　−Ｔ
ｒｐまたはβ−Ｄ−ＮＡＬが３位に存在する場合に、Ｒ
７はＴｙｒ、　ＰＡＬ、　Ｐｈｅまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈ
ｅであるのが好ましい。またＤ　−３ＰＡＬが３位に存
在する場合にＲ５はＡｒｇである。１位置換基はそのα
−アミノ基がアシル基、例えばホルミル基（Ｆｏｒ）。

アセチル基、アクリリル基、ビニルアセチル基（Ｖａｃ
）またはベンゾイル基（ＢＺ）を含むように修飾されて
もよく、この場合アセチル基（Ａｃ）およびアクＩＪ　
ＩＪル基（Ａｃｒ）が好適である。ＰＡＬおよびＤ＝Ｐ
ＡＬはピリジル−アラニンのＬ−およびＤ−異性体を表
わし、Ａｌａのβ−炭素原子が好ましくはピリジン環の
３位に結合しているものである。

β−Ｄ−ＮＡＬが１位に存在しかっＲ６がＡｒｇでない
場合は、４−　Ｎｌ２−　Ｄ　−Ｐｈｅ　ｔ　４−グア
ニド−Ｄ　−Ｐｈｅ　。

Ｄ−Ｈｉｓ、　Ｄ−Ｌ１７Ｂ、　Ｄ−Ｏｒｎ、　Ｄ−Ａ
ｒｇ、　Ｄ−Ｈａｒ　（ホモアルギニン）またはＤ−Ｐ
ＡＬのような親水性Ｄ−アミノ酸が６位に存在する方が
よい。デヒドロ−Ｐｒｏが１位に存在する場合は、Ｄ−
’Ｔｒｐ、　Ｄ　−Ｐｈｅ。

Ｆｏｒ−Ｄ−Ｔｒｐ、　Ｎｏ２−Ｄ−Ｔｒｐ、　Ｄ−Ｌ
ｅｕ、　Ｄ−１１θ。

Ｄ−Ｎｌｅ、　Ｄ−Ｔｙｒ、　Ｄ−Ｖａｌ、　Ｄ−Ａｌ
ａ、　Ｄ−８ｅｒ（ＯｔＢｕ）。

β−Ｄ−ＮＡＬまたは（ｉｍＢｚｔ）　Ｄ−Ｈｌｓのよ
うな親油性アミノ酸のＤ−異性体が６位に存在するのが
好ましいが、　Ｄ−ＰＡＬを用いてもよい。Ｇｌｙに代
わるＤ−Ａｌａの１０位置換は以後に述べるその他の置
換と共に任意に行いうると考えられ名。

これらのペプチド９はＬＨの放出を阻止するという優れ
た効力を有するので、それらはしばしばＧｎＲＨ拮抗物
質と呼ばれる。これらのペプチドは、それらを発情前期
に極めて低い用量で投与する場合、雌性哺乳動物の排卵
を阻止し、また妊娠直後に投与する場合受精卵の再吸収
を引きおこすのに有効である。さらに、これらの投プチ
ドは雌性哺乳動物の避妊処置に対しても有効である。

より詳細には、本発明のはメチド類は次の式Ｉで表わさ
れる。

Ｘ−Ｒ□−（Ｗ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６
−Ｒ７−Ａｒｇ−ＰｒｏａＲｌ。

〔式中、Ｘは水素原子または７個以下の炭素原子をもつ
アシル基であり；Ｒ１はデヒドロ−Ｐｒｏ、　Ｄ−ｐＧ
ｌｕ、　Ｄ−Ｐｈｅ、　４ａｚ−ｎ−Ｐｈｅ、　Ｄ　−
Ｔｒｐ、　Ｐｒｏまたはβ−Ｄ−ＮＡＬであり；ＷはＧ
Ａ、　Ｆ、　ＮＣ）ｚ、　Ｏ”Ｍｅ／４０１、　Ｃ１０
またはＢｒであり；Ｒ３はＤ−３ＰＡＬ、β−Ｄ−ＮＡ
Ｌまたは（Ｙ）　Ｄ−Ｔｒｐ　（ここでＹはＨ，Ｎｏ□
ＮＨ２，ｏｃｕ３．　Ｆｅ　Ｃ１−、Ｂｒ、　（：ｉＨ
３，Ｎ”ＦｏｒまたはＮ　１ｎＡｃである）であり；Ｒ
４はＳｅｒ、　Ｏｒｎ、　ＡＡＬ又はａＢｕであり；Ｒ
５はＴ７”ｖ　Ａｒｇ、　（３Ｆ）Ｐ１ｘｒ＋、　（２
Ｆ）Ｐｈｅ、　（３Ｉ）Ｔｙｒ、　（３Ｃ；Ｎ３）Ｐｈ
ｅ、　（２ＣＨ３）Ｐｈｅ、　（３Ｃ４）Ｐｈｅ又は（
２０ｔ）Ｐｈｅであり；Ｒ６は親油性アミノ酸のＤ−異
性体であるか、或いは４−　ＮＨ２−Ｄ　−Ｐｈｅ　ｅ
　Ｄ−Ｌｙｓ、　Ｄ−Ｏｒｎ、　Ｄ−Ｈａｒ、　Ｄ−Ｈ
ｉｓ、　４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ。

Ｄ　−ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇであり；Ｒ７はＮｌｅ、
　Ｌｅｕ。

ＮＭＬ、　Ｐｈｅ、　Ｍｅｔ、　Ｎｖａ、　Ｔｙｒ、　
Ｔｒｐ、　Ｃｙｓ、　ＰＡＬまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅで
あり；そしてＲｌｏはＧｌｙ−ＮＨ２゜Ｄ　−Ａｌａ　
−ＮＨ２またはＮＨ−ＹｌにこでＹｌは低級アルキル基
、シクロアルキル基、フルオル低級アルキル基またはＮ
ＨＣＯＮＨ−Ｑであり、ＱはＨまたは低級アルキル基で
ある）である；但しＲ３がＤ−３ＰＡＬであるときＲ５
はＡｒｇであり、そしてＲ３がβ−Ｄ−ＮＡＬまたはＤ
−ＴｒｐであるときＲ７はＴｙｒ　。

ＰＡＬ、　Ｐｈｅまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅである〕Ｒ１
がβ−Ｄ−ＮＡＬであってＲ５がＡｒｇでないとき、Ｒ
６は４−ＮＨ２−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｌｙｓ、　Ｄ−Ｏ
ｒｎ、　Ｄ−Ｈａｒ。

Ｄ−Ｈｌｓ、　４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−ＰＡＬ
またはＤ−Ａｒｇであるのが好ましい。

β−Ｄ　−ＭＡＬとはβ−炭素原子がナフチル基で置換
されているアラニンのＤ−異性体を意味し、３−Ｄ　−
ＮＡＬとも呼ばれる。好適にはβ−Ｄ　−２ＮＡＬが使
用され、ナフタリンへはその環構造の２位で結合される
。しかしβ−Ｄ−Ｉ　ＮＡＬを使用してもよい。

ＰＡＬはβ−炭素原子がピリジル基で置換されているア
ラニンを表わし、その結合はピリジン環の３位において
なされることが好ましい。３位のＤ−Ｔｒｐの場合、水
素原子に代わる単一置換は５位または６位で行われ、そ
の置換基はクロル、フルオル、ブロム、メチル基、アミ
ノ基、メトキシ基およびニトロ基より選択されるがクロ
ル、フルオルおよびニトロ基が好適である。また、イン
ド−と窒素はアシル化されてもよく、例えばホルミル基
（Ｎ１ｎＦｏｒ−またはｌ　Ｆｏｒ　）またはアセチル
基でアＶｋ化され得る。Ｎ”　Ｆｏｒ　−Ｄ−Ｔｒｐお
よび６　Ｎｏ２−Ｄ　−Ｔｒｐが好適な置換トリプトフ
ァン残基である。

未置換Ｄ　−Ｔｒｐが３位に使用される場合、特定のア
ミノ酸残基、すなわちＰｈｅまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅ。

好適にはＴｙｒまたはＰＡＬが７位に導入される。

ＮＭＬとはＮＣｔＣＨ３−Ｌ　−Ｌｅｕを意味する。Ａ
ＡＬはβ−アミノーＡｌａであり、そしてａＢｕはα、
γ−ジアミノ酪酸であって、これらのうち何れかまたは
Ｏｒｎが４位に存在し得る。Ｓｅｒが４位に存在しない
場合にはデヒト９０−Ｐｒｏが１位に存在するのがよい
。４−　ｇｕａ　−Ｄ−Ｐｈｅはパラ位がグアニジンで
置換されているＤ−Ｐｈｅの残基を意味する。

本発明ペプチドは基本的溶液合成法もしくはクロルメチ
ル化樹脂、メチルベンズヒドリルアミノ（ＭＢＨＡ）樹
脂、イ／ズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂または当技術
分野で知られた他の適当な樹脂を使う固相法により合成
することができる。固相法は米国特許第４２１１６９３
号に詳細に説明される方法でペプチド鎖にアミノ酸を段
階的に付加させることｋより実施される。当技術分野で
周知の如く、側鎖保護基がＳｅｒ、　ＴｙｒおよびＡｒ
ｇにおよび置換基のある桟のものに付加されるのが好ま
しく。

また場合によりＴｒｐに付加されてもよく、その後これ
らのアミノ酸は樹脂上に形成されつつあるペプチド鎖に
カップリングされる。この方法は充分に保護されたペプ
チド−樹脂中間２体を与える。

本発明の中間体は次式で表わされる。

Ｘｌ−Ｒ，−（Ｗ）　Ｄ　−Ｐｈｅ−Ｒ３（Ｘ２）　−
Ｒ４（−Ｘ３）−Ｒ５（Ｘ’またはＸ　５）　−Ｒｅ　
（Ｘ５）−Ｒ７（Ｘ’　）　−Ａｒｇ　（Ｘ　５）　−
Ｐｒｏ　−Ｘ　７式中、Ｘはポリペプチドの段階合成法
の分野で有用であることが知られた型のα−アミン保護
基であり、目的とするはプチドのＸが特定のアシル基で
ある場合にその基は保護基として使用できる。Ｘによっ
て包含されるα−アミノ保護基の例としては（１）アシ
ル型保護基、例えばホルミル（Ｆｏｒ）、　）リフルオ
ルアセチル、フタリルｓ　ｐ−トルエンスルホニル（Ｔ
Ｏ９）　、ベンゾイル（ＢＺ）、ベンゼンスルホニル、
Ｏ−ニトロフェニルスルフーエニル（Ｎｐｓ）、）リチ
ルスルフェニル、０−ニトロフェノキシアセチル、アク
リリル（Ａｃｒ）、クロルアセチル、アセチル（Ａｃ）
およびγ−クロルブチリル；（２）芳香族ウレタン型保
護基、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および置
換インジルオ゛キシカルボニル（例工ばｐ−クロルベン
ジルオキシカルボニｋ（ＯＩＺ）、ｐ−ニトロインジル
オキシカルボニル、ｐ−ｆロムベンシルオキシカルボニ
ルおよびｐ−メトキシインジルオキシカルボニル）；（
３）脂肪族ウレタン型保護基、例えばｔ−ブチルオキシ
カルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボ
ニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボ
ニルおよびアリルオキシカルボニル；（４）シクロアル
キルウレタン型保護基、例えばシフ四ペンチルオキシカ
ルボニル、アダマンチルオキシカルボニルおよびシクロ
ヘキシルオキシカルボニル；（５）チオウレタン型保護
基、例えばフェニルチオカルボニル；（６）アルキル型
保護基、例えばアリル（Ａｌｙ）、トリフェニルメチル
（トリチル）およヒインジル（Ｂｚｔ）　；　（７）　
）リアルキルシラン基、例えば、トリメチルシラン；が
ある。好適なα−アミノ保護基はＸが水素原子であると
きＢｏｃである。

Ｘ２は水素原子またはＴｒｐのインドール窒素のための
保護基例えばインジルである。しかし、大抵の合成では
Ｔｒｐを保護する必要がない。

Ｘ３は水素原子またはＳｅｔのアルコール性ヒドロキシ
ル基のための保護基であり、モの保護基はアセチル、ベ
ンゾイル、テトラヒドロピラニル、ｔ−ブチル、トリチ
ル、ベンジルおよび２．６−ジクロルベンジルよりなる
群から選択されるものであり、インジルが好適である。

また、Ｓｅｔに代わって置換が行われる場合には、Ｘは
側鎖アミン基のための保護基、例えばＴｏｓ、　Ｚまた
はＣｔＺでありうる。

Ｘは水素原子またはＴｙｒが存在するときにはＴｙｒの
７エノール性ヒドロキシル基のための保護基であり、そ
の保護基はテトラヒドロピラニル、ｔ−７’チル、トリ
チル、ベンジル、Ｚ、ａ−ブロムベンジルオキシカルボ
ニルおよび２．６−：）クレルイン：）ルよりなる群か
ら選択される。２．６−　：）クロルインジル（ＤＣＢ
）が好適である。

Ｘ５はＡｒｇ、　ＬｙｅまたはＨｌｓなどの側鎖グアニ
ジノ基のための保護基、例えばニトロ、Ｔｏｓ、）リチ
ル、ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカ
ルボニル、ＺおよびＢｏａであるか、或いはｘ４のよう
なＴｙｒのための保護基もしくはｘ２のようなＴｒｐの
ための保護基である。また、Ｘは水素原子であってもよ
く、この場合は側鎖基原子上に保護が存在しないことを
意味する。

Ｘ６は水素原子　Ｘ４のようなＴｙｒのための保護基ま
たはＣｙｓのための保護基であり、そのＣｙｓ用保護基
は好ましくはｐ−メトキシインジル（ＭｅＯＢｚｔ）、
ｐ−メチルインジル、アセトアミドメチル、トリチルお
よびＢｚｔよりなる群から選択される。最適な保護基は
ｐ−メトキシベンジルである。

Ｘ７はＧｌｙ　−ｏ　−ＯＨ２−（樹脂支持体〕、ｏ　
−ＯＨ２−〔樹脂支持体〕、Ｄ　−Ａｌａ　−０−ＣＨ
２−［樹脂支持体〕、（，１Ｆ　−ＮＨ−［樹脂支持体
〕またはＤ−Ａｌａ−ＮＨ−〔樹脂支持体〕であるか、
またはＧ１７もしくはＤ−ＡｌａのＯＨ，エステル、ア
ミドまたはヒト９う：）ドであるか、あるいはＰｒｏに
直接結合したＯＨ，エステル、アミドまたはヒト９ラジ
ドである。

側鎖保護基ｘ２〜Ｘ６を選択するときの規準は、その保
護基が合成の各段階でα−アミノ保護基を除去する反応
条件下に試薬に対して安定であると〜・５ことである。

側鎖保護基はカップリング条件下に切断されず、目的と
するアミノ酸配列の合成完了時点にペプチド９鎖を変性
させない反応条件下で除去できなければならない。

Ｘ７がＧ１７−０−ＯＨ２−（樹脂支持体〕、Ｄ−Ａｌ
ａ−０−ＣＨ２−（樹脂支持体〕または０−０Ｈ２−［
樹脂支持体〕である場合、ポリスチレン樹脂支持体の多
数の官能基のうちの１つのエステル部分が表わされてい
る。ＸがＧｘｙ、−Ｎｄ−Ｃ樹脂支持体〕またはＤ−Ａ
ｌａ−ＮＨ−［：樹脂支持体〕である場合、アミド結合
がＧ１７またはＤ　−ＡＩａとＢＨＡ樹脂もしくはＭＢ
ＨＡ樹脂とをつないでいる。

最終の式においてＸが例えばアセチルである場合、それ
は］）　−ＮＡＬまたは１位で使用されるその他のアミ
ノ酸のα−７ミノ基のためのＸ保護基として使用するこ
とができ、それはこの最後のアミノ酸をはプチド鎖へカ
ップリングする前に付加される。しかしながら、反応は
側鎖基を保護したままでα−７ミノ保護基を除去した後
の樹脂上のペプチドを用いて、例えばジシクロへキシル
カルボジイミｒ（ｐｅａ）の存在下での酢酸と、好適に
は無水酢酸と反応させることにより、または当技術分野
で知られた他の適当な反応により実施するのが好ましい
。

充分に保護されたベプチＰは当分針で周知のアンモノリ
シスによってクロルメチル化樹脂支持体から切り離され
て、充分に保護されたアミド中間体を生成する。ペプチ
ドの保護基の除去、ならびにそのペプチドのベンズヒド
リルアミン樹脂からの切り離しは弗化水素酸（ＨＦ　）
を用いて０℃で行うことができる。好適には、ＨＦでの
処理に先だってアニソールが硬プチドに加えられる。真
空下でＨＦを除去した後、樹脂から切り離されかつ保護
基を除去されたペプチドは都合よくエーテルで処理され
、デカントされ、希酢酸に溶解され、そして凍結乾燥さ
れる。

こうして、本発明は次式： ％式％ 〔式中、Ｘは水素原子または７個以下の炭素原子をもつ
アシル基であり；Ｒ１はデヒドロ−Ｐｒｏ、　Ｄ−ｐＧ
ｌｕ、　Ｄ−Ｐｈｅ、　４Ｃｔ−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｔ
ｒｐ、　Ｐｒｏまたはβ−Ｄ−ＮＡＬであり；ＷはＯ２
，ｒ、’Ｎｏ□Ｏ”Ｍｅ／４０ｔ、　０１２またはｓｒ
であり；Ｒ３はＤ−３ＰＡＬ。

β−Ｄ　−ＮＡＬまたは（Ｙ）　Ｄ　−Ｔｒｐ　（ここ
でＹはＨ２Ｎｏ２ＮＨ２０ＣＨ３Ｆ、　Ｇｔ、　Ｂｒ、
　０Ｈ３Ｎ　ＦｏｒまたはＮ　Ａｃである）であり；Ｒ
４はＳｅｒ、　Ｏｒｎ。

ＡＡＬまたはａＢｕであり；Ｒ５はＴｙｒ、　Ａｒｇ、
　（３Ｆ）Ｐｈｅ、　（２Ｆ）Ｐｈｅ、　（３Ｉ）Ｔｙ
ｒ、　（３Ｃ’Ｈｓ）Ｐｈｅ−（２０［（３）Ｐｈｅ、
　（３Ｃｔ）Ｐｈｅまたは（２Ｃ４）Ｐｈｅであり；Ｒ
６は親油性アミノ酸のＤ−異性体であるか、あるいは４
−ＮＨ２−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｌｙｓ、　Ｄ−Ｏｒｎ、
　Ｄ−Ｈａｒ、　Ｄ−Ｈｌｅ、　４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈ
ｅ、　Ｄ−ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇであり；Ｒ７はＮ１
ｅ、　Ｌｅｕ、　ＮＭＬ、　Ｐｈｅ、　Ｍｅｔ、　Ｎｖ
ａ。

Ｔｙｒ、　Ｔｒｐ、　Ｃｙｓ、　ＰＡＬまたは４Ｆ　−
Ｄ−Ｐｈｅであり：・そしてＲｉｏはＧｌｙ　−ＮＨ２
、Ｄ　−Ａｌａ　−ＮＨ２またはＮＨ，−Ｙ　（ここで
Ｙは低級アルキル基、シクロアルキル基、フルオル低級
アルキル基またはＮＩＣ０ＮＨ−Ｑであり、ＱはＨまた
は低級アルキル基である）である；但しＲ３がＤ　−３
ＰＡＩ、であるときＲ５はＡｒｇであり、そしてＲ３が
β−Ｄ　＋　ＮＡＬまたはＤ−ＴｒｐであるときＲ７は
Ｔｙｒ、　ＰＡＬ、　Ｐｈｅまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅで
ある〕 で表わされるはプチドまたはその無毒性塩の製造方法を
提供し、その方法は （ａ）　次式： ％式％（ 〔式中、Ｘは水素原子またはα−アミノ保護基であり；
Ｘは水素原子またはインドール窒素のための保護基であ
り：Ｘは水素原子またはＳｅｒのアルコール性ヒト９０
キシル基もしくは側鎖アミノ基のための保護基であり；
Ｘは水素原子またはＴｙｒのフェノール性ヒドロキシル
基のための保護基であり；ｘ５およびｘ６は各々水素原
子または存在する側鎖のための保護基であり；そしてｘ
７はＧｌｙ−０−ＯＨ２−（樹脂支持体）、ｏ−ａＨ２
−（樹脂支持体）　、　Ｄ　−Ａｌａ　−０−ＯＨ２−
（樹脂支持体）　ｔ　Ｇｌｙ　−ＮＨ−（＊脂支持体Ｌ
　Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ−（樹脂支持体）。

Ｇ１７−　ＮＨ２およびエステル、アミドならびにヒド
ラジドよりなる群から選択される〕 で表わされる中間体化合物を形成し； （ｂ）　基Ｘ１〜ｘ６のうち１つまたはそれ以上を除去
するか、あるいはＸに含まれる樹脂支持体を切り離し；
そして所望により （Ｃ）　得られた滅ゾチドをその無毒性塩に変換する； ことから成る。

ペプチドの精製はＣＭＯカラムでのイオン交換クロマト
グラフィー、その後のセファデックスＧ−２５を充填し
たカラムでｎ−メタノール：０．ＩＮ酢酸（容量比１：
１）の溶出系を使用する分配クロマトグラフィーにより
、または当技術分野で知られかつＪ、　Ｒｌｖｉｅｒら
のＪ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、２８ｇ＋３０
３〜３２８　（１９８４）に詳細に説明されるＨＰＬＣ
を使って行われる。

本発明イプチドは雌ラットの排卵を抑制するのに、発情
前期の日の正午頃に投与すると体重Ｉ　Ｋｇ当たり１０
０μ２以下の量で有効である。排卵の長期抑制のために
は、体重Ｉ　Ｋｑ当たり約０．１〜２．５■の投与量を
使用する必要があるかもしれない。これらの拮抗物質は
更に、雄哺乳動物に定期的に投与する場合、精子形成を
抑えるのに有効であって避妊薬として使用することがで
きる。これらの化合物はテストステロンレベルを低下さ
せうる（これは正常の、性的に活動する雄にとって望ま
しくない結果である）ので、　ＧｎＲＨ拮抗物質と共に
置換量のテストステロンを投与することが合理的である
だろう。また、これらの拮抗物質は先に示したような他
の目的のために生殖腺刺激ホルモン及び性ステロイド９
類の産生を調節するのに用いられる。

実施例　１ 表夏に示した次式： ％式％ の４プチト９は既述の固相法によって製造される。

表　１ ｌＲ３Ｒ６ １β−Ｄ　−２ＮＡＬ　（６ＮＯ２）　Ｄ　−Ｔ’ｒｐ
　Ｄ　−Ａｒｇ１ ３　デヒト’口Ｐｒｏ　ｙ　β−Ｄ−２ＮＡＬ４　β−
Ｄ−２ＮＡＬ　（６ＮＨ２）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｄ−Ａｒｇ５
　（５００Ｈ３）Ｄ−Ｔｒｐ　ｔ ６　（５Ｂｒ）Ｄ−Ｔｒｐ ７　（５Ｆ）Ｄ−Ｔｒｐ ８　（５Ｇｔ）Ｄ−Ｔｒｐ ９１（５ＣＨ３）Ｄ−Ｔｒｐ １０　（Ｎ”Ｆｏｒ）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｄ−Ａｒｇｌｌ　（
ｓＦ）Ｄ−Ｔｒｐ　（４ｇｕａ）Ｄ−Ｐｈｅ１２　１　
（５０ｚ）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｄ−Ｈ１ｓ１３　デヒドロＰｒ
ｏ　（６ＮＯ２）Ｄ　−Ｔｒｐ　Ｄ−Ｌｅｕ１４　Ｄ−
Ｔｒｐ　（５Ｆ’）１１−Ｔｒｐ　Ｄ−Ｐｈｅ１５　Ｄ
−ｐＧ’ｌｕ　（５Ｆ）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｄ−１１ｅ１６　
Ｄ−Ｐｈｅ　（６ＮＯ３）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｄ−’Ｖａｌ９
５４− Ｒ１゜ Ｇｌｙ　−Ｎ、Ｏ２ Ｄ−Ａｌａ　−ＮＯ２ Ｇｌｙ　−ＮＯ２ Ｇ］、ｙ−ＮＯ２ ＮＨＣＨ２ＧＨ３ Ｄ　−Ａｌａ　−ＮＯ２ ＮＨＮＨＣＯＮＨ２ １つの例として、〔Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ’、　（４
Ｆ）Ｄ−Ｐｂｏ２．　（６ＮＯ□）Ｄ−Ｔｒｐ３．　Ｄ
−Ａｒｇ’　）　−ＧｎＲＨと呼ばれる上記の投プチド
Ａ１の代表的同相合成法を以下に述べる。このペプチド
９は次式：％式％） で表わされる。その他のペプチドも′同様に合成され、
精製される。

ＢＨＡ樹脂を使用し、そしてこの樹脂にＢｏｃ　−保護
Ｇ１７をＣ；Ｈ２ａｔ２中２時間にわたって３倍過剰の
Ｂｏａ誘導体と活性化試薬ＤＧＯを用いてカップリング
させる。グリシン残基はＢＨＡ樹脂にアミド結合で定着
する。

各アミノ酸残基のカップリング後、洗浄、保護基の除去
ならびに次のアミノ酸残基のカップリングは自動合成機
を使用しまた約５ｔの樹脂から開始することＫより以下
のスケジュールに従って実施される。

１ＣＨ２Ｃｔ２洗浄−８０ｍｇ（２回）　３２　メタノ
ール（ＭｅＯＨ）洗浄−３０ｍ（２回）　３３ＣＨ２Ｃ
ｔ２洗浄−８０ゴ（３回）　３４ＣＨ２Ｃｔ２中の５％
１．２−エタンジチオールプ５ス５０ｑ６ＴＦＡ−７０
ｄＣ２回）　１０５　イソプロピルアルコール＋１％エ
タンジチオール洗浄−ｓｏ′ＩＲｔ（２回）　３６９Ｈ
２Ｃｔ２中１２．５％のＴＥＡ　−７０ｒＲ１（２回）
　５７　ＭｅＯＨ洗浄−４０ｍ（２回）　２８　０Ｈ２
Ｃｊｔ２洗浄−８０ｗｄ　Ｃ３回）　３９３０ゴのＤＭ
ＦまたはＣＨ２Ｃ２２（個々の保護アミノ酸の溶解性に
応じて選択される）中のＢｏｃ−アミノ酸（１０ミリモ
ル）プラスＣ上２Ｃｔ２中のＤＣＣ（１０ミリ％ル）（
１回）３０〜３ｏ。

１０　ＭｅＯＨ洗浄−４０１ｎ！（２回）　３１１ＣＨ
２Ｃｔ２中１２．５　％（７）ＴＥＡ　−７ＱＷ１．（
１回）　３１２　ＭｅＯＨ洗浄−３０ｄ（２回）　３１
３ＣＨ２Ｃ４２洗浄−８０ｍ（２回）　３段階１３の後
、アリコートを採取してニンヒドリン試験を行い、もし
この試験が陰性であるときには次のアミノ酸のカップリ
ングのために段階１へ戻り、もしこの試験が陽性または
僅かに陽性であるときには段階９〜１３へ戻って繰り返
し行５′。

上記のスケジュールは最初のアミノ酸が結合した後に本
発明ペプチドの各アミノ酸′をカップリングさせる際に
使用される。Ｎ”Ｂｏｃ保護は合成全般にわたって残存
する各アミノ酸に対して用いられる。Ｎ“Ｂｏｃ−β−
Ｄ　＋　２　ＮＡＬは当技術分野で知られた方法、例え
ば米国特許第４２３４５７１号（１９８０年１１月１８
日付）に詳細に記載されるようにして製造できる。Ａｒ
ｇの側鎖はＴｏｓで保護する。０ＢｚｔはＳｅｒのヒＦ
ロキシル基の側鎖保護基として用いる。（６ＮＯ２）Ｄ
−Ｔｒｐは保護しないでおく。ＮｃｔＢｏｃ−β−Ｄ−
２ＮＡＬは最後のアミノ酸として導入する。Ｂｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｅ）およびＢｏｃ−（６ＮＯ□）Ｄ−Ｔｒｐ
はどちらもＧＨ２Ｃ，ｔ、での溶解性が低いのでＤＭＦ
　：　０Ｈ２Ｃ，ｔ２混合溶媒を用いてカッ・プリング
する。

Ｎ−末端のα−アミノ基の保護基を除去した後、ジクロ
ルメタン中の大過剰の無水酢酸を用いてアセチル化を行
う。樹脂からのペプチドの切り離しならびに側鎖保護基
の完全な除去はＨＦを用いて０℃で簡単に行われる。Ｈ
Ｆ処理に先だってスキャベンジャ−としてアニソールを
加える。真空下にＨＦを除去した後樹脂を５０％酢酸で
抽出し、洗液を凍結乾燥して粗ペプチド粉末を得る。

次に、ＣＭＣカラム（ワットマンＣＭ３２．５０１５０
メタノール／水中の０．０５〜０．３ＭＮＨ４０Ａｃ）
勾配を使用）でのイオン交換クロマトグラフィー、その
後のｎ−ブタノール：０．ＩＮ酢酸（容量比１：１）の
溶出系を用いるゲルｆ過方ラムでの分配クロマトグラフ
ィーによりにプチドの精製を行う。

ペプチドは薄層クロマトグラフィーと数種の異なる溶剤
系を用いて、ならびに逆相高圧液体クロマトグラフィー
と燐酸トリエチルアンモニウム水溶液プラスアセトニト
リルを用いて均質であるかどうか判定する。得られた精
製はプチドのアミノ酸分析は実質的にペプチド鎖中の各
アミノ酸のための整数値を示し、用意した構造式と一致
する。

旋光度は光電偏光計で測定して〔α）２２＝３１．８°
±Ｉ（ｃ＝１．５０チ酢酸）である。

このペプチドはインビボ検定を行い、またインビトロで
試験してもよい。インビトロ試験を行う場合には検定に
先立って４日間培養したラット下垂体の解離細胞が用い
られる。はプチドの施用に応答して影響をうけるＬＨレ
ベルはラッ）ＬＨに対して特異的なラジオイムノアッセ
イ・で検定する。

細胞の対照器は３ナノモルのＧｎＲＨのみを受け取り、
一方実験皿は３ナノモルのＧｎＲＨと、０．０１〜１０
ナノモルの濃度範囲の比較目的用の標準拮抗物質すなわ
ち（Ａｃ−デヒドｏ　Ｐｒｏ　、　（４Ｆ）Ｄ−Ｐｈｅ
２．　Ｄ　−Ｔｒｐ　’　）　−ＧｎＲＨまたは試験ペ
プチドの倒れか一方とを受け取る。ＧｎＲＨのみで処理
したサンプルのＬＨ分泌量はイブチドゾラスＧｎＲＨで
処理したサンプルのＬＨ分泌量と比較する。３ナノモル
のＧｎＲＨによって放出されたＬＨ量を低下させる試験
ペプチドの効力は標準ペプチドのそれと比較する。イン
ビボ試験は雌ラットの排卵を抑制するその有効性につい
て測定する。この試験では、Ｓｐｒａｇｕｅ　−Ｄａｗ
ｌｅｙ系の成熟雌ラットの一定数すなわち６匹（体重は
各々２２５〜２５０ｇである）に、発情前期の日の正午
頃トウモロコシ油中すペプチドを一定用量（μｆ）注射
する。発情前期は排卵の日の午後である。別の雌ラット
群は被プチドを投与しないで対照として使用する。対照
器ラットは各々発情前期の夜に排卵し、そして処理ラッ
トのうち排卵するものの数を記録する。各ペプチドは極
めて低用量で雌ラットの排卵抑制に非常に有効であると
考えられ、また各ペプチドは約５μｆの用量で完全に有
効であると考えられる。

より低い用量で追加の試験を行い、その結果を以下の表
Ａに示す。

表　Ａ １、　１　０１５ ２、　１　１／１０ ３、　２．５　２／１０ ４、　１　５／１４ ６、　２　０／１０ ７−　５　２／１０ ８、　１　７／１４ ０．５　２／７ ９、　２．５　０／１０ １　１０／４６ １０・　ｉ　ｏ／１゜ Ｏ，５９／１７ 表■に示したペプチド９は全である適当な濃度でインビ
トロでのＧｎＲＨ−誘導ＬＨ分泌を阻止するの−に有効
であると思われる。これらのペプチドの多くはインビボ
において標準ペプチド９よりもさらに強い効力を有する
。これらのペプチドは全て極めて低い用量で雌性哺乳動
物の排卵を抑制すると考えられ、そして若干の選ばれた
４プチドは試験された既知ＧｎＲＨ拮抗物質の少なくと
も２倍の効力を有すると思われる。

実施例　■ 表■に示した次式： ％式％ のペプチドは既述の同相法によって製造される。

表　■ Ｗ　Ｒ３Ｒ４ １７４Ｂｒ　（６ＮＯ□）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｓｅｒ８ １９４ｃｚ　（ＩＦｏｒ）Ｄ−Ｔｒｐ ０ １ ２２　１ ３ ４ ５ ２６　４ＮＯ２（５ＧＨ３）Ｄ　−Ｔｒｐ２７　（５Ｆ
）Ｄ−Ｔｒｐ　０ｒｎ ２８　２．４０１２（５Ｃ４）Ｄ　−Ｔｒｐ　５ｅｒ２
９　（６ＮＯ２）　Ｄ　−Ｔｒｐ　ＡＡＬ３０　０”Ｍ
ｅ／４０１　（５Ｆ）Ｄ−Ｔｒｐ　ａＢｕ３１　３．４
ｃｚ２（５Ｆ）Ｄ　−Ｔｒｐ　Ｏｒｎ５Ｒ７ Ｔｙｒ　Ｎ１ｅ （２Ｆ）Ｐｈｅ　Ｌｅｕ Ｔｙｒ　Ｎｖａ ＬθＵ １ｅ （２０Ｈ３）　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ ’ｒｙｒＮＭＬ ｚ　（Ａｌａ　） （２Ｃ４）Ｐｈｅ　ＮＭＬ （３０Ｈ３）Ｐｈ。

Ｔｙｒ　Ｎｌθ （３Ｆ）Ｐｈｅ　Ｉ（酢酸塩） Ｎｖａ （３Ｉ　）　Ｔｙｒ　ＮＭＬ （３Ｃ４）　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ 表■に示したにプチドのインビトロおよび／またはイン
ビボ試験は、これらのペプチドが適当な濃度でインビト
ロでのＧｎＲＨ−誘導ＬＨ分泌を阻止するのに有効であ
ることを示す。これらの４ゾチドの多くはインビボにお
いて標準はプチドよりも更に強き・効力を有する。これ
らのペプチドは全て極めて低い用量で雌性哺乳動物の排
卵を抑制すると考えられる。

実施例　■ 表■に示した次式： ％式％ （） のペプチドは既に述べた固相合成法により製造される。

９５７− するのに有効であることを示す。これらのペプチド９の
多くはインビボにおいて標準ペプチドよりも更に強い効
力を有する。ペプチドは全て極めて低い用量で雌性補乳
動物の排卵を抑制すると考えられる。

実施例　Ｎ 表■に示した次式： ％式％ の啄プチドは既に述べた固相合成法によって製造される
。

表　■ ＲＲ６Ｒ７Ｒ１゜ ４５　β−Ｄ−２ＮＡＬ　Ｄ−ＡｒｇＮｘｅ　Ｄ　−Ａ
ｌａ４６　Ｍｅｔ ４７　Ｔｙｒ ４Ｂ　、−ｔ、　Ｎ１ｅ　Ｇｌｙ ４９　Ｍｅｔ ５０　Ｔｙｒ ５１　＃　Ｐｈｅ’　Ｄ−Ａｌａ ５２　１　４Ｆ’−Ｄ−Ｐｈｅ ５３　Ｃｙｓ ５４　デヒドＣＩ　Ｐｒｏ　Ｄ　−Ｔｒｐ　Ｎ１ｅ５５
　β−Ｄ　−２ＮＡＬ　Ｄ　−Ａｒｇ　Ｔｒｐ５６　Ｄ
−Ｈａｒ　Ｃｙｅ ５７　Ｄ−Ｌｙｓ　Ｎｖａ ５８　Ｄ−Ａｒｇ　３ＰＡＬ ５９、デヒドｏＰｒｏ　ｐ　−Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　ＮＨＣ
Ｈ２０Ｈ３［Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ　、　４Ｇｔ−Ｄ
−Ｐｈｅ　、　Ｄ　−Ｔｒｐ　。

Ｄ−Ａｒｇ　、　Ｎ１ｅ　、　Ｄ　−Ａｌａ　）−Ｃｒ
ｎＲＨと呼ばれる上記のペプチド９Ａ４５は次式： ％式％ 合成ペプチド類の旋光度は５０チ酢酸（（１４＝１　）
中で光電偏光計を用いて測定され、その結果を後述の表
Ｂに報告する。

表■に示した全てのペプチドは適当な濃度でインビトロ
でのＧｎＲＨ−誘導ＬＨ分泌を阻心するのに有効である
と考えられる。これらのばプチドの多くはインビボにお
いて標準ペプチドよりも更に強い効力を有する。被プチ
ドは全て極めて低い用量で雌性哺乳動物の排卵を抑制す
ると思われ、ある種の選ばれたペプチドは試験された既
知ＧｎＲＨ拮抗物質と少なくとも同程度の効力を有する
と考えられる。

実施例　■ 表Ｖに示した次式： ％式％ のペプチドは既に述べた固相合成法によって製造される
。

表　Ｖ ＲｌＷ　、　Ｒ３ ６０β−Ｄ−２ＮＡＬ　４Ｂｒ　（６ＮＯ□）Ｄ−Ｔｒ
ｐ１４Ｆ ６２　Ｄ−Ｔｒｐ ６３　デヒドｏ　Ｐｒｏ　ｚ （５４４ＮＯ□　β−Ｄ−Ｉ　ＮＡＬ ６５　β−Ｄ−２ＮＡＬ　４０１　Ｎ”Ｆｏｒ−Ｄ−Ｔ
ｒｐ６１ ６７　デヒドｏ　Ｐｒｏ　４Ｂｒ　β−Ｄ−２ＮＡＬ８ ６９　＃　ＧｃＩＭｅ／４０１ ７０　Ｄ−ＰＡＬ ７１　４０ｔ ７２　β−Ｄ−２ＮＡＬ　４ＮＯ２ ３ ７４３，４０ｔ２Ｄ　−Ｔｒｐ ７５　４０１　Ｄ−ＰＡＬ ６Ｒ７ Ｄ−Ａｒｇ　Ｎ切 り　−Ｈｌｓ　Ｔｙｒ ４ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ Ｄ　−Ｔ１：ｐ　Ｐｈｅ Ｄ−ＶａＩ　Ｍｅｔ Ｄ−Ａｒｇ　Ｎ’ｌｅ ｖａ Ｄ−ＴｙＴ　４Ｆ　−Ｄ　＝Ｐｈｅ Ｄ−Ｎｌｅ　Ｔｒｐ Ｄ　−Ｐｈｅ　Ｎｌｅ β−Ｄ−２ＮＡＬ　Ｐｈｅ ｅｕ Ｄ−Ｏｒｎ　４Ｆ　−Ｄ−Ｐｈｅ 、１ＮＨ２−Ｄ　−Ｐｈｅ　Ｍθｔ ｙｒ Ｄ　−ＰＡＬ　Ｌｅｕ 表Ｖに示した〈プチト９のインビトロおよび／またはイ
ｙビボ試験は、これらの４ゾチドが適当な濃度でインビ
トロでのＧｎ　ＲＨ−誘導ＬＨ分泌を阻止するのに有効
であることを示す。これらのイプチドの多くはインビボ
において標準イプチドよりも強い効力を有する。はプチ
ト９は全て極めて低い用量で雌性哺乳動物の排卵を抑制
する２と考えられる。

実施例　■ 表■に示した次式： ％式％ のはプチドは既に述べた固相合成法によって製造される
。

チドの多くはインビボにおいて標準ペプチドよりも強い
効力を有する。これらのはプチドは全て極めて低い用量
で雌性咄乳動物の排卵を抑制すると考えられる。

実施例■ 表■に示した次式： ％式％ のＲプチドは既に述べた同相合成法によって製造される
。

表　■ １Ｗ ８８　デヒドｏＰｒｏ　４０／、　（ ８９４Ｆ ９０（ ９１１ ９２４ＮＯ２（ ３ ９４β−Ｄ−２ＮＡＬ　］ ９５　１ ９６　デヒドロＰｒｏ　１ ９７　ＣＣ１Ｍｅ／４（３ｔ ８ ９９　４Ｂｒ １００　ｌ　３，４０１２ ３Ｒ４Ｒ６ ６ＮＯ□）　Ｄ　−Ｔｒｐ　Ｏｒｎ　β−Ｄ−２ＮＡＬ
＃　Ｄ−Ｖａｌ 、６Ｆ）Ｄ−Ｔｒｐ　ＡＡＬ　４ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ’
　Ｄ−Ｏｒｎ ’、　５０ＣＨ８）　Ｄ　−Ｔｒｐ　＃　Ｄ　−Ｌｙｅ
Ｉ　Ｄ−ＰＡＬ ＩＡｃ−Ｄ−Ｔｒｐ　Ｓｅｒ　Ｄ　−ＨａｒｌＦｏｒ−
Ｄ　−Ｔｒｐ　＃　Ｄ−Ｔｒｐ（６Ｂｒ）Ｄ−Ｔｒｐ　
ａＢｕ　ｐ−Ｎ１ｅｌ　Ｄ−Ｌｅｕ （６０Ｈ３）　Ｄ　−Ｔｒｐ　ｔ　β−Ｄ　−ｚＮＡＬ
（６ＮＨ２）Ｄ−Ｔｒｐ　Ｏｒｎ　４ＮＨ２−Ｄ−Ｐｈ
ｅ（５ＮＨ２）Ｄ−Ｔｒｐ　ｚ　Ｄ−Ｌｙｅ表■に示し
たペプチドのインビトロおよび／またはインビボ試験は
、これらのペプチドが適当な濃度でインビトロでのＧｎ
ＲＨ−誘導ＬＨ分泌を阻止するのに有効であることを示
す。これらのペプチドの多くはインビボにおいて標準ペ
プチドよりも強い効力を有する。これらのペプチドは全
て極めて低い用量で雌性哺乳動物の排卵を抑制すると考
えられる。

各種のＲプチドについてのインビボ、試験がいろいろな
用量で行われ、その結果を表Ｂに示す。

表Ｂ １７、　１　１／１０ １９、　１　２／７ ２０、　１　６／７ ２１、　２．５　４／１１ ２２、　１　７／９ ２３、　２．５　１１５ ２４、　１　５／６ ２５、　１　１１５ ４５、　−２８．０°　１　３／１６ ０．５　９／１０ ４６、　−２２．４°　２．５　２／１５１３／９ ４７、　−１８．８°　１　０／１０ ０．５　４／７ ５１　−２２．５°　２．５０／８ １　６／１５ ０．５　２／３ 実施例　■ 表■に示した次式： ％式％ のはプチドは既に述べた固相合成法によって製造される
。

１１８　デヒドロＰｒｏ　４Ｆ−Ｄ−ＰｂｅＤ　−Ｔｒ
ｐ１１９ ２０ １２１　β−Ｄ−２ＮＡＬ １２２　Ｐｒ。

１２３　β−Ｄ−２ＮＡＬ　３，４Ｃ２−Ｄ　−Ｐｈｅ
　β−Ｄ−１．ＮＡＬ１２４　Ｄ−Ｔｒｐ １２５　４ｃｚ、−Ｄ＝Ｐｈｅ　Ｄ−Ｔｙｒ表■忙示し
たはプチドは雌ラットの排卵を抑制するそれらの有効性
についてインビボで試験される。それらの全ては極めて
低い用量で雌ラットの排卵を抑制し、約１０μ２の用量
で完全に有効であると考えられる。多（のペプチドに対
して更に低い用量でインビボ試験が実施され、その結果
を以下の表Ｃに示す。

９６３− ４Ｆ−Ｐｈｅ　Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２ ＮＭＬ　ＮＨＮＨＣＯＮＨ２ Ｎ１ｅ　Ｎ　ＨＧ　Ｈ２ＧＨ３ Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　−ＮＨ２ ｖａ Ｔｙｒ　Ｄ−−Ａｌａ−ＮＨ２ Ｍｅｔ　Ｄ　−Ａｌａ　−ＮＨ２ ３ＰＡＬ　Ｉ（酢酸塩） 表　Ｇ １０１．−３０．３″ｌ±１　１　０／６０．５　２／
１０ １０２、　１　１／１６ ０．５　５／１０ １０３、　１　０１５ ０．５　６／１０ ０．２５７／１０ １０８、　１　９／１０ １０９、　０．５　０／６ １１０、　０．５　ｏｌｓ 本発明のペプチドは薬学的に許容される無毒性塩、例え
ば酸付加塩または亜鉛、バリウム、カルシウム、マグネ
シウム、アルミニウムなどの金属との錯体（本明細書で
はこれも付加塩として考える）の形で、あるいはこれら
２つの組合せの形でしばしば投与される。このような酸
付加塩の例としては塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸基、燐
酸塩、硝酸塩、蓚酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、タ
ンニン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息
香酸塩、コハク酸塩、アルギン酸塩、リン！酸塩、アス
コルビン酸塩、酒石酸塩などがある。

例えば、ゴプチドの水溶液をＩＮ酢酸と繰り返し処理し
、その後凍結乾燥することばより酢酸塩が生成する。活
性成分を錠剤の形で投与する場合にその錠剤は結合剤（
例えばトラガカイト、トウモロコシ殿粉またはゼラチン
）、崩壊剤（例えばアルギン酸）および滑沢剤（例えば
ステアリン酸マグネシウム）などの薬学的に許容される
希釈剤を含み５る。液剤の形で投与する場合には甘味料
および／または風味料を薬学的に許容される希釈剤の一
部として使用してもよく、また等張塩水や燐酸緩衝液で
の静脈内投与を行うこともできる。

医薬組成物は通常ペプチドと共に薬学的に許容される慣
用の担体を含むだろう。一般に、投与量は静脈内投与の
場合、患者の体重］Ｋｔ当たり４ゾチド約１〜１００μ
？であり、経口投与量はこれよりも多くなるだろう。結
局、これらのペプチドでの患者の治療は他のＧｎＲＨ拮
抗物質を用いる臨床治療と同じ方法で行われる。

これらの纜プチドは生殖力の抑制および／または調節を
行５ために、あるいは例えば早発思春期症の管理や放射
線療法もしくは化学療法期間中のよ５な生殖腺の活動を
可逆的に抑制する必要がある場合に、哺乳動物に対して
静脈内、皮下、筋肉内、経口的または経皮的（例えば鼻
腔内、腟内）に投与される。有効投与量は投与形体およ
び治療をうける個々の哺乳動物の種類により変化するだ
ろう。１つの代表的な投与形体の例は静菌ペプチド水溶
液であって、この溶液は約０．１〜２．５１１％’／Ｋ
ｔ（体重）の用量で投与される。ペプチドの経口投与は
固体または液体の形のいずれかで行われる。

本発明は好適な実施態様に関して述べてきたが、当技術
分野で通常の知識を有する者にとって明らかな種々の変
更ならびに修飾が添付の特許請求の範囲に記載される本
発明の範囲から逸藤すること−なくなされうろことは理
解されるだろう。例えばペプチドの有効性を有意に損う
ことのない当技術分野で知られた他の置換を本発明ペプ
チド９において使用することができる。Ｄ　−Ｐｈｅ　
残基のフェニル環の置換が３位および２．４位に存在し
てもよく、これらは均等物と考えられる。同様に、Ｄ　
−２ＰＡＬおよびＤ−４ＰＡＬはＤ　−３ＰＡＬの均等
物と考えられる。Ｃ−末端・において、Ｐｒｏ　は」般
に均等物と考えられる次の部分：　Ｇｌｙ−ＯＣＨ３Ｇ
ａｙ−ＯＣＨ２０Ｈ３Ｓａｒ−ＮＨ２またはＮＨ−Ｙ”
　（ここでＹｌは低級アルキル基、特にエチル基、シク
ロアルキル基、フルオル低級アルキル基またはＮＨＣＯ
ＮＨＱであり、ＱはＨまたは低級アルキル基である）の
うちの１つへ結合される。Ｓａｒはサルコシンを意味す
る。

第１頁の続き

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　次式で表わされるペプチドまたはその無毒性塩
   。 Ｘ−Ｒ１−（Ｗ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ６−Ｒ６
   −Ｒ７−Ａｒｇ−Ｐｒｏ７Ｒｔ〔式中、Ｘは水素原子ま
   たは７個以下の炭素原子をもつアシル基であり；Ｒ工は
   デヒドロ−Ｐｒｏ　。 Ｄ−ｐＧＩＬＬ、　Ｄ−Ｐｈｅ、　４０ｔ−Ｄ−Ｐｈｅ
   、　Ｄ−Ｔｒｐ、　Ｐｒｏまタハβ−Ｄ　−ＮＡＬ　テ
   ア’７　ｐ　Ｗ　ハＧｌ−Ｆ　、ＮＯ２ＣａＭｅ／４０
   ｔ、　Ｇｔ２またはＢｒであり；Ｒ３はＤ−ａＰＡＬ。 β−Ｄ−ＮＡＬまたは（Ｙ）Ｄ−Ｔｒｐ（ここでＹはＨ
   。 ＮＯ２Ｎｌ２　０ＣＨ３Ｆｔ　ＯＺ、　Ｂｒ、　ｃ）１
   ３Ｎ”ＦｏｒまたはＮ”Ａｃである）であり；Ｒ４はＳ
   ｅｒ、　Ｏｒｎ。 ＡＡＬまたはａＢｕであり；Ｒ５はＴｙｒ、　Ａｒｇ、
   　（ａＦ）Ｐｈｅ　ｅ　（２Ｆ　）　Ｐｈｅ　ｙ　（３
   工）　Ｔｙｒ　＊　（３ＣＨ３）　Ｐ）１ｅ　、（ｚｃ
   Ｈ３）Ｐｈｅ　、　（３ＯＬ　）　Ｐｈｏまたハ（２０
   ｔ）　Ｐｈｅであり：Ｒ６は親油性アミノ酸のＤ−異性
   体であるか、あるいは４−Ｎｌ２−Ｄ−Ｐｈｅ、’Ｄ−
   Ｌｙｓ、　Ｄ−Ｏｒｎ、　Ｄ−Ｈａｒ、　Ｄ−Ｈｌｓ、
   　４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−ＰＡＬまたはＤ−Ａ
   ｒｇであり；Ｒ７はＮｌｅ、　Ｌｅｕ、　ＮＭＬ、　Ｐ
   ｈｅ、　Ｍｅｔ、　Ｎｖａ。 Ｔｙｒ、　Ｔｒｐ、　Ｏｙａ、　ＰＡＬまたは４Ｆ−Ｄ
   −Ｐｈｅであり；そしてＲｌｏはＧｌｙ−Ｎｌ２．　Ｄ
   −Ａｌａ−Ｎｌ２またはＮ）１−Ｙｌ（ここでＹｌは低
   級アルキル基、シクロアルキル基、フルオル低級アルキ
   ル基またはＮＨＣＯＮＨ−Ｑであり、ＱはＨまたは低級
   アルキ呪基である）である：但しＲ３がＤ　−３ＰＡＬ
   であるときＲ５はＡｒｇであり、そしＣＲ３がβ−Ｄ−
   ＮＡＬまたはＤ−ＴｒｐであるときＲ７は’ｒｙｒ、　
   ＰＡＬ、　Ｐｈｅまたは４Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅである〕 （２）Ｗが４Ｃ４または４Ｆである特許請求の範囲第１
   項記載のペプチド。 （３）　Ｒ，がβ−Ｄ−２ＮＡＬであり、Ｒ６が４−　
   Ｎ）Ｉ２−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｌｙｅ、　Ｄ−Ｏｒｎ、
   　Ｄ−Ｈａｒ、　Ｄ−Ｈｌｓ、　４−ｇ＋ｉａ　−Ｄ　
   −Ｐｈｅ、　Ｄ−ＰＡＬまたはＤ　−Ａｒｇである特許
   請求の範囲第１項または第２項記載の４プチド。 （４）　Ｒ６がＤ−Ａｒｇである特許請求の範囲第３項
   記載のはプチド。 （５）　Ｒ７が°ｒｙｒまたは３　ＰＡＬである特許請
   求の範囲第１〜４項の何れか１項に記載のはプチド。 ＋６）　Ｒ３がＤ−Ｔｒｐである特許請求の範囲第５項
   記載の４ゾチド。 （７）　Ｒ７がＬｅｕである特許請求の範囲第１〜４項
   のいずれか１項に記載のペプチド。 （８）　Ｒ３が（Ｙ）Ｄ−Ｔｒｐであり、Ｙが６ＮＯ□
   またはＮ”Ｆｏｒである特許請求の範囲第７項記載のは
   プチド。 （９）　Ｒ３がＤ　−ａ　ＰＡＬであり、Ｒ５がＡｒｇ
   である特許請求の範囲第１項または第２項記載のはブチ
   ０ Ｑｌ　Ｒ１がβ−Ｄ　−２ＮＡＬである特許請求の範囲
   第９項記載のＲプチド。 Ｑｌ）　Ｒ，がＳｅｒである特許請求の範囲第９または
   １０項に記載のペプチド。 α３　Ｒ６がＤ−Ｔｒｐ、　Ｄ−ＰＡＬ、β−Ｄ−ＮＡ
   Ｌ、　（ｉｍＢｚｔ）　Ｄ−Ｈｌｓまたは（５ＮＯ２）
   　Ｄ　−Ｔｒｐである特許請求の範囲第９〜１１項のい
   ずれか１項に記載のはプチド。 α３　Ｒ７がＬｅｕである特許請求の範囲第９〜１２項
   のいずれか１項に記載のペプチド。 （１４）　Ｒ３が（Ｙ）Ｄ−Ｔｒｐであり、ＹはＨ以外
   のものである特許請求の範囲第１項記載の４ゾチド。 （Ａｓ　Ｙが６ＮＯ２またはｌ　Ｆｏｒである特許請求
   の範囲第１４項記載の被プチド。 （１，ｅ　Ｒ７４；Ｌｅｕ、　Ｎ’ｌｅ、　Ｎｖａまた
   はＮＭＬ　テある特許請求の範囲第１４または１５項記
   載のはプチド。 （１７）　Ｒ，がβ−Ｄ−２ＮＡＬであり、Ｒ４がＳｅ
   ｒである特許請求の範囲第１３〜１５項のいずれか１項
   に記載のペプチド。 （Ｉｅ　Ｒ３がＴｙｒまたは（２Ｇ／−）　Ｐｈｅであ
   る特許請求の範囲第１４〜１７項のいずれか１項に記載
   のイプチｒ０ （１９ＸがＡｃまたはＡｃｒである特許請求の範囲第１
   〜１８項のいずれか１項に記載のＲプチド。 （２ＩＲ１ｏがＤ−Ａコ、ａ　−ＮＯ２またはＧｌＦ　
   −ＮＯ２である特許請求の範囲第１−、−１９項のいず
   れか１項に記載のペプチド。 ｃ！ｎ　ｘがＡＣテアリ、Ｒ１カβ−Ｄ　−２ＮＡＬ　
   テ、！、、すＷが４０ｔであり、Ｒ４がＳｅｒテあり、
   Ｒ５がＡｒｇであり、Ｒ７がＬｅｕであり、そしてＲ１
   ０がＤ　−Ａ’ｌａ　−ＮＯ２である特許請求の範囲第
   １項記載のペプチド。 （社）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のはプチド。 （ハ）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ｃ２４　次式： ％式％） で表わされる特許請求の範囲第１項記載のにプチド。 □□□次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載の４プチド。 （至）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 （２）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 （至）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のはプチド。 −次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のはプチド。 （至）次式： ％式％ で表わされる特許請求の範囲第１項記載のＲプチド。 ｃ３１）活性成分として有効量の特許請求の範囲第１〜
   ３０項のいずれか１項に記載のＲプチドを主要量の無毒
   性希釈剤と共に含有してなる、哺乳動物の生殖腺刺激ホ
   ルモンの分泌を調節するための医薬組成物。