JPS60235060A - 放射性物質を利用した迅速免疫測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫反応により被検体中の成分を定量する方法
、更に詳細には、免役反応及び放射性標識物質の捕捉を
毛細管中で行なう免疫測定法に１−）−１するい 従来、完投測冗法としては、被検体中の抗原又は抗体を
、放射性同位元素で標識した抗原又は抗体と免疫反応さ
せ、斯くして得られる放射性標識物質を測定する方法が
採用されている。

面して、この免疫測定法は、従来、その免疫反応を試験
管の中で行なっていたため、その結果得られる反応した
放射性標識物質と未反応の放射性標識物質を分離するこ
とが必要でβつた。しかし、この分離には繁雑な操作、
専門的熟練及び長時間を懺するという欠点がめつｆＣｃ
＋ そこで、本発明者らは、斯かる従来の欠点を解決すべく
誠意研究を行なっｆｃ結果、毛細管中で免役反応を行な
い、毛細管現象と固定化親和物を利用して、反応した放
射性標識物質を固定化栽第１物の位置に固定し、未反応
の放射性標識物質をその位置から移動させるか、或いは
未反応の放射性標識物質を固定化親和物の位置に固定し
、反応した放射性標識物質をその位置から移動させるこ
とにより、簡単かつ短時間に被検体中の成分を定量し得
ることを見出し、本発明を完成した。

尚、本発明において「固定化親和物」とは、放射性標識
物質に対する抗体若しくは抗原、又は放射性標識物質と
の反応生成物と親和性を有する抗体若しくは抗原を担体
に固定化した物をいう。

すなわち本発明は、放射性標識物質を利用した免疫測定
法に於て、固定化親和物を毛細管に充填し、該毛細管に
放射ａ？Ｉ買を含む試料を吸入させ、毛ａ管中で免疫若
しくは親和反応を行なわせ、放射性標識物質又は放射性
標識物質との反応生成物を固定化親和物に不動化させた
のち、この不動化された毛細管中の放射能量を測定する
ことを％徴とする迅速放射性免疫測定法を提供するもの
である。

また、本発明は、同定化親和物及び担体に放射性標識物
質を混合したものを毛細管内に充填し、該毛細管に被検
体を吸入させ、毛細管中で免役若しくは親和反応を行な
わせ、放射性標識物質又は放射性標識物質との反応生成
物を固定化親和物に不動化させ、この不動化された毛細
管中の放射能蓋を測定するととを特徴とする迅速放射性
免疫測定法を提供するものである。

本発明で測定せんとする被侠体中の成分としては、例え
は免疫グロブリン、ペンスゾヨンズ蛋白、αｌ−ｌ−ア
ンチトリジシン１−マイ２０グロブリン、Ｃ１−アンチ
キモトリジシン、Ｃ２−マイクログロブリン、βズーマ
１クログロブリン、ハプトグロビン、フェリチン、トラ
ンスフェリン、セルロゾラスミン、アンチトロンビン量
、ミオグロビン、ミオシン軽鎖、クリオグロブリン、カ
ルモデユリン、Ｃ蛋白反応ゾロテ１ン（ＣＲＰ）、プレ
アルブミン、アルブミン、トランスフェリン、チロキシ
ン結合蛋白、レチノール結合蛋白、ヘモベキシン等生体
成分中の蛋白質。ＩｇＧ、ＩｇＡ％ＩｇＭ、ＩｇＤＳＩ
ｇｈ；、免疫グロブリンの６鎖（γ、μ、α、δ、ε、
λ、ん）等の免疫グロブリン類。

グルタミルオキプレ１トドランスアミナーゼ（ＧＯＴ）
、クルタミルビルベ（））ランスアミナーゼ（ＧＰＴ）
、アルカリホオスファターゼ（ＡＬＰ　）、ラクテ１ト
デハイドログナーゼ（ＬＤＨ）、γ−グルタミルトラン
スペゾテターゼ（γ−ＧＴＰ　）　、クレアチニンキナ
ーゼ、ロイシンアミノベプ゛チダーゼ（ＬＡＰ　）　、
アミラーゼ、マクロアミラーゼ、コリンエステラーゼ、
アルドツーゼ、七ノアミンオキシダーセ（ＭＡＯ）と七
のアイソエンザイム、５′−ヌクレオチダーゼ、アテド
ポスファターゼ、ＯＣＴすいリパーゼ、プラスミノグン
アタテペーター、カタラーゼ、レシチンコレステロール
アシルトランスフェラーゼ（Ｌ　−ＣＡＴ　）、す？蛋
白リノＱ−ゼ、ホスホリノＱ−ゼＡ　５ｌ）Ｎａｓｅ　
。

ＲＮａｓｅ、ターミナルトランスフェラーゼ、ペゾシン
、トリフ″７ノグン、キモトリプシノゲン、エンアロキ
ナーゼ、レニン、アミノペプテ、ダーゼ、ペルオキシダ
ーゼ、カタラーゼ、エノラーゼ、ナロシン水酸化師素、
ドー、Ｑ脱炭酸酵素、ドーノ♀ミンβ−水酸化酔紫寺の
酵素。酸性ムコ多糖類、１ヌリン、ノイラミン酸、ガン
ゲルオシド、ムコ多糖類等の糖質。

コレステロール、リポゾロティン、アポリボプロティン
類、トリグリセラ１ド、遊離側肪酸、リン脂質、胆汁酸
、過酸化脂質等の脂質。

ビタミンＡ％　Ｂ６、Ｂ１２、Ｄ、Ｅ及びに１ユビキノ
ン、チアミン、リボフラビン、ニコチン酸、葉酸、アヌ
コルビン酸、４ノシトール等のビタミン。フィグリノグ
ン、フ１プリン分麟産物１ゾロトロンビン、ｌ因子、■
因子、■因子、Ｖｌｌｉ因子、Ｘ因子、Ｘ因子、Ｘｌ子
、Ｘ［ｌ因子、プラスミノダン、βトロンボグロブリン
、Ｃ１インヒビター、β２マクログログリン、α２ゾラ
スミン１ンヒビター等の凝血因子。ｃｌｌ、Ｃ１ｒ−Ｃ
ｌｓ％Ｃ２ｓ　ｃ３ｓ　Ｃ４ｓ　ａｓ　ｓ　ｃｓ％Ｃ７
％Ｃ８％ＣｈβＩＥ　ｆ　ｏ　クリンの稲体系成分。成
長ホルモン、ンマトメゾン、黄体形成ホルモン、卵胞刺
戟ホル％　７　、ＦＭＪ　’ＩＮ　Ｅｌ　貝ｉｌ１戦ホ
ルモン、リボトロピア　（ＬＰＨ）、プロラクチン、Ｍ
ＳＨ（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ
　ｈｏｒｍｏｎｅ　）、β−エンドルフィン、エンケフ
ァリン、甲状腺刺戟ホルモン、バングレシン、ニューロ
フ１シン、オキ７トシン等の下垂体分泌物質。Ｔ３（Ｔ
ｒｌｌ　ｏｄｏ　ｔｈｙｒｏｎｉ　ｎｏ　）、総サイロ
キシン、遊離サイロキシンインデックス、遊離す１０キ
シン、トリヨードサイロニン、リバースＴ３、持続性甲
状腺刺戟物質、サイドグロブリン等ノ甲状腺分泌物質。

カルシトニン、カテコールアミン、メタネフリン、ノル
メタネフリン、ノ署ニルマンディル酸、ホモバニリン酸
、’３　。

４−ゾハイドロキ７フェニルアラニン、３゜４−シバ１
ドロキ７フエニル酢酸、３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニルエテレンクリコール、ドーノＱミンーβ−ハイ
ドロキシレース等の副腎髄質、父感神経分泌物質。アル
ドステロン、１１−７’オキシコルテコステロン、コル
テステロン、１８−ハイドロキシコルテコステロン、コ
ルチゾール、１１−デオキクコルテゾール、１１−ハイ
ドロキシコルテコステロ４Ｆ、１７−ハづドロオキシコ
ルチコイド、１７−ケドゾエエックステロづト、テヒド
ロエピアンドロステン、デヒドロエピアンドロステロン
サルフェート、アンドロステジオン、１７−ケドステロ
イド等の副腎皮質分泌物質。テストステロン、５α−ジ
ヒドロテストステロン、アントロスタンディオール、エ
ストロン、エストラジオール、エストリオール、エネテ
トロール、カテコールニストロジエン、プロゾエステロ
ン、プレグナンジオール、１７α−ハイドロキシゾロゾ
エステロン、プレグナントリオール、じゆう毛社ゴナド
トロピン、胎盤ラクトータン等の性腺、胎盤分泌物質、
インスリン、ゾロインスリン、Ｃ−ベデタイド、すいグ
ルカゴン、ガストリン、セクレチン、ＣＣＫ　−ＰＺ　
（ｅｈｏｌｅｃｙａｔｏｋｉｎｌｎｐａｎｃｒｓｏｚｙ
ｍｉｎ　）、モチリン、エンテログルカゴン、ノｑンク
レアテイツク？リペゾテド、ソマトスタチン、サブスタ
ンスＰ、ニューロテンシン等のすい、消化分泌物質。単
純はう疹ヴイルス、水痘、帯状はう疹ヴ１ルス、サイト
メガロウィルス、ＥＢヴイルス抗体、アデノウィルス、
ＡＢ型１ンフルエンザヴ１ルス、Ｃ型インフルエンザウ
ィルス、パラ１ンフルエンザヴイルス、ＲＳヴイルス、
ムンゾヴイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、日本脳
炎ウイルス、？リオヴイルス、Ａ型肝炎ヴイルス、ｎｆ
ｆ１肝炎ヴ１ルス、う１ノヴづロス、コロナウィルス、
外来性伝染病、ロタウィルス、狂犬病、流行性耳下腺炎
、コクサンキーウィルス、痘そう等のウイルス。ンツガ
虫病、発疹チフス等のリケッチア。梅梅トレはネーマ、
黄だん出血症レプトスピラ叫のスピロヘータ。葡萄球口
、溢血性７７サ球菌、肺炎双球−１淋劇、髄膜炎菌、炭
そ菌、ジフテリア佑、大腸菌、サルモネラ菌、赤痢菌、
針先病菌、百日咳角、族１Ｌプルセラ、らいｖ１４ｓの
ｈ−ｍ。アスペルギルス、カンシタ、クリシトコンカス
等の真菌。アメーバ、膣トリコモナス、マラリア、トキ
ソプラズマ、住血吸虫等の蚕生虫。抗核抗体、抗ＤＮＡ
（Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　）抗体、抗Ｅ
ＮＡ（Ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅ　ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎ
ｔｉｇｅｎ　）抗体〜すユウマノイド因子、抗グロブリ
ン、ＬＥ細胞、抗ミトコンドリア抗体、抗平滑筋抗体、
抗冑壁抗体、杭内因子抗体、抗横赦筋抗体、抗心筋抗体
、抗開腎皮質抗体、抗す１０グロブリン抗体、抗甲状腺
マイクロシーム、抗インスリン抗体、抗インスリン受容
抗体、抗アセチルコリン受答抗体等の自己抗体。Ｔ細胞
、Ｂ細胞、マクロファゾ尋の細胞物質。楯胎児性抗原、
α−フェトプロティン、塩基性フェトゾロティン、フェ
リチン、イソフェリチン、ポリアミン、Ｃ反応プロティ
ン、β２−ミクログロブリン等のチューモアマーカー （Ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒ　）　。フエノバルビクー
ル、７’ｌＪミドン、フエニトニン、カルバマゼピン、
パルプｎ敵、塩酸プロシラノロール、利尿系、合成ステ
ロイド剤、クロラムフェニコール系薬剤、アミノ配糖体
系薬剤、抗結核剤、メトトレキセート、オピエート、メ
サトン、バルビタール、アンフェタミン、フカ１フ代謝
物、ベンゾジアゼピン代謝物、プロトキクフェン、フェ
ンシフリジン、カンナピノイド等の薬物。

ＨＬＡ　（）Ｉｕｍａｎ　１ｅｕｃｏｃｙｔｅ　ａｎｔ
ｌｇｅｎ　）　％血液戯、血液交叉適合試験等。その他
、抗体スクリーニング、梅毒検査、病原微生物の免疫血
清学的検査、マイコゾラズマ抗体、クラミジア、リケッ
チア、抗ストレゾトリシン０、抗ストレプトキナーゼ、
抗デオキγリボヌクレオキナーゼＢ等。これらの抗原及
びこれらの抗原に対する抗体が挙げられる。

また、本発明に使用する抗体には１ムノグロブリンの他
、これを加工したＦ　（ａｂ”）　２、Ｆａｂ’、Ｆａ
ｂなどが使用出来、これら祉自体公知の方法で調製され
る（免役学−１−１中山簀店−１９８１年−）。

担体としては、容易に移動しない物がよく、例えば天然
性の木綿、麻、わら等の植物性、羊毛、絹などの動物性
、石綿などの無機性の物、及び例えば人工或いは化学的
の、ガラス、ロック、スラッジ、金、銀、合金などの無
機、セルロース、蛋白（カゼ１７繊維、巨大分子の蛋白
質）、アセテート７にどの半加工品、ポリアミド系、？
リエステル糸、ポリビニールアルコール系、ポリ塩化ビ
ニール系、ポリ塩化ビニリデン系、アクリル系、モダク
リル系、ポリオレフィン系、フルオロカーボン系、？リ
ウレタン糸フェノール樹脂、ボ′リプロピレン、ポリテ
レフタレート、ポリカーｌネート等の球状、多角形粒子
又は繊維状の物が皐けられる。上記粒子はその直径が０
．０５−０．３ｍｍ　ｓ特に０．１−０．１７ｍｒｎの
ものが好ましく、多角形粒子は４０−３００メツ７ユ、
特に８０−１５０メンシユのものが幻−１しい。絨維は
直往１μｍ０．３　ｍｍ　、　％に０．０１ｍｍ−０−
０８ｍｍのものが好ましい。

放射性化合物負としては、例えば測定せんとする被検体
甲の抗原又ｅよ抗体に対する抗体又は抗原に放射性化合
物をｍｉ＆：したもの、或いは競合反応に用いる抗原又
は抗体に放射性化合物を標識したものを￥けることがで
きる。

放射性化合物とじてをま、例えは１３１１　、１２５１
、１４Ｃ、ＭＨ、３２８等が挙けられる。これらの放射
性化合物で上記の抗原又は抗体を標識するには自体公知
の方法が採用される（続うゾ第１ムノアンセイー講談社
サイエンテイフイク−１９７９年−）。

親和物としては、免疫反応の結果生ずる測定せんとする
放射性標識抗原と結合するものでわれは良く、例えば抗
体、抗原おるいは抗原、抗体もしくは放射性物質に対し
て親和性をもつ物質が￥けられる。

固定化親和物の１１１４ｍ方法は、自体公知の方法によ
り担体に親和物を納付させる。結合には担体の持つ吸着
性を利用するか、化学的な結合をオＵ用するか、いずれ
の方法５でも良い（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｅｎ＋Ｌｙ
ｍｏｌｏｇｙ　ｖｏｌ、　４４　＋（１９７６））。

本発明では、上述のようにして調製した固定化親和物、
及び必要に応じて生体から直接被検体を採取する時に用
いる凝固防止剤、免疫反応又は酵素反応に対する阻止剤
を保持させた担体（以下、試薬保持担体という）を毛細
管に充填しても良い。

毛細管はガラス又は合成樹脂、例えば塩化ビニール、？
リステレン、アク・リルフタル醒樹脂尋の材質のものを
使用することができ、毛細管の直径は（１５−２ｍｍ、
特に１．０−１．１ｍｎｌ５ｋさは３−２０ｃｒＩＬ％
　特に５−１５０１１が好ましい。この毛細管の内壁は
蛋白質が吸着しないことが必猥であり、例えば内壁を予
め蛋白質で飽オＤ嘔せ、検体の蛋白質がつかないように
しておくのが好ましい。

毛細管に固定化親和物及び試薬保持担体等を充填するに
は、毛細管の基端に繊維性の栓を詰め、この基端よシ吸
引器具を用いて減圧にして上記担体を吸入充填する。こ
の毛細管中には、少なくとも固定化親和物及び担体、或
いは固定化親和物及び担体に放射性標識物質を混合した
もの及び担体を充填する。

本発明において、被検体中の（１４１１足せんとする成
分（以下、岬］定目的物質という）を抗原とした場合の
固足化栽オロ物（例えは固定化抗体）及び放射性標識物
質の毛細管への充填順序の一例を以下に示す。

■　担体、固定化抗体、担体。

■　担体、放射性標識抗原、担体、固定化抗体、担体。

■　担体、放射性標識抗体、担体、固定化抗体、担体。

このように充填した測定用毛細管を用いて被検体中の成
分ケ検出又は定量するには、測定用毛細管の基端を試料
または被検体中に浸漬し、該毛細管中に吸入させる。こ
のとき、測定目的物質が抗原の場合、測定用毛細管中で
次のような反応が生起し、放射ａ標識物質が不動化され
る。

例えは■の毛細管に、放射性標識物質（測定目的物質を
標識したもの）と被検体を混合した試料を吸入させると
、競合的に測定目的物質と放射性標識物質が固定化抗体
と反応し不動化される。この放射能量を測定する。この
不動化された是ｔｔ”；１．６４１Ｊ定目的物質の限度
上昇と共に減少する。ｉｅいて２−４目に吸い込む液、
例えば燐酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略す）は余分
な放射性標識物質と被検液を洗い流しながら移動する。

その結果不動化された放射性標識物質及び測定目的物質
が残ることになる。

又、■の毛細管に、放射性標識物質（測定目的物質と親
和性を持つ抗体に標識したもの）と被検体とを混合させ
た試料を吸入させると、測定目的物質と放射性標識物質
が結合したものが固定化抗体と反応し不動化される。こ
の不動化ちれる放射性標識物質の量は、測定目的物質量
が増加すると共に増加する。続いて２８目に吸い込む液
、例えばＰＢＳは余分な放射性標識物質と被検液を洗い
流しながら移動する、その４ｉＪｉ呆、不動化された測
定目的物質が残ることになる。

一方、（Ｚ）の毛細管に被検体を吸入させると、被検液
は放射性標識抗原と混合されながら移動する。この混付
物は、次に測定目的物質と親和性を持つ抗体である固定
化抗体と接触し、測定目的物質と放射性標識物質とが競
合しながら、該固定化抗体に不動化される。続いて２査
目に吸い込む液、例えばＰＢＳは余分な放射性標識物質
と被検液を洗い流しながら移動する。その結果不動化さ
れた放射性標識抗原及び測定目的物質が残ることになる
。

一方、■の毛細管に被検体を吸入させると、被検体は放
射性標識抗体と混合反応し放射性標識抗体結合抗原とな
υながら移動する。この混合反応物は、史に固定化抗体
と混合反応し、不動化される。続いて２管目に吸い込む
液、例えばＰＢＳは余分な°放射！標識物質と被検液を
洗い流しながら移動する。その結果不動化された放射性
標識抗体及び測定目的物質が残ることになる。

このように測定用毛細管に不動化された放射性標識物質
又は放射性標識ｖｌ質との反応生成物はガンマ−カウン
ターに毛細管の基端を下にしてそのまま測定しても良い
し、不動化部分を切って測定してもよい。又ガンマ−カ
ウンターで測定できない放射能はシンナレーションカウ
ンターで測定する。

尚被検体としては、血液、血清、皿しよう、唾液及び尿
砺の体数そして排水令、が使用出来る。−力、試料とし
ては被検体そのもの、被検体と６川足目的物質に放射性
標識がしである物との混＠液又は被検体と測定目的物質
と親和性を持つ物質に放射性標識がしであるものとの混
合液等が利用出来る。尚、被検体中に本反応を阻害する
成分が存在する場合は、あらかじめ阻害物を不活化又は
除外するか、或いは測定に影＃會およほさない礫度迄希
釈することによシ側足が可能になる。

成上の如く、本発明は完投反応と放射性標識物質の捕捉
反応を毛ｍ盲中で行なうことが出来るので、次のような
利点を有する。

■　試薬がほとんど毛細管に充填されているので、従来
法のように測定に当って各試薬を調製するとか、余分な
試薬を廃業しなけれはならないという欠点がない。

（２）被検液に毛細管の基端を浸漬するだけで被検体中
の成分を検出又は定量出来るので、操作が極めて簡単で
あり、専門的熟練を特に敬することなく測定出来るし、
また極めて短時間で測定を行なうことが出来る。

■　被検体は極めて少量でよく、例えば耳たぶを切開し
、これに毛細管の基端をあてて血液を吸入して測定も可
能でりる。

次に実施例を与けて説明する。

実施？１Ｊ１ （１）　試薬及び器具 ■　アルブミン吸瘤ガラス毛細管 ガラス毛細管（直径１　ｍｍ　、長さ１００ｍｍ）にア
ルブミン２０．ｍ９／ｍｌの０．ＯＩＭ燐酸緩衝生理食
塩水（ｐＨ７，２）Ｃ以下ＰＢ８と略す）を通し、吸引
して余分な液を除き乾保する。

■　ガラスピーズ、直径（１１７ｍｍ　（以下％ＧＢと
略す）　゛ 市販品を利用。

■　アルブミン吸着ＧＢ　（以下１．　ＱＢ、ＢＡＡと
略す）ＱＢをアルブミン２０ｎ！／１ｎｅのＰＢＳに浸
し、ＱＢを精敦水で２−３回洗浄後、乾燥する。

■　ぼりエステル繊維 市販品を利用。

■　１２８１αフエトゾロテ１ン試薬（以下、ＲＩ−ム
ＦＰと略す） 市販αフェトプロティン（以下、ＡＦＰと略す）　６１
１Ｊ定試薬（第一ラフオア１ソトー１社製）の測定キッ
ト自答試薬、放射性ヨウ化α−フエｔ”　７’　０７　
’Ｉ　ン（１２’　Ｉ　）　（０，９μＣ１／　バイア
ル）全そのまま使用する。

■　抗ＡＦＰ紹合ＧＢ　（以下、抗ＡＦＰ　−ＧＢと略
す）ＧＢ　５　ｇに承り−Ｌ−リジン（１九）３ＷＬｌ
を加え室温放置させた板、鞘埃水で洗浄する表面加工Ｇ
ＢＫゲルタールアルデヒドを加え、放置させた後、同様
に鞘製氷で洗浄する。次いで、架橋ＧＢ　Ｋ　ＡＦＰ抗
俸５■を加えて室温２時間反応させた彼、乾保し抗ＡＦ
Ｐ　−ＧＢを作成した。

■　ｐｎｓ （２）　測定用毛細管の作成 アルブミン吸着ガラス毛細管の基端より、３、５　ｍｍ
　、間隔にて５本の印をつける。最初にポリエステル繊
維（ａ−１）を詰める。この基端を真空７Ｉヒンゾに連
結して毛細管内を防圧とし、次の１０．５　ｍｍ　４Ｃ
ＧＢ、８８人（ａ−２）全吸引充填する。同様にして次
の３．５　ｍｍに抗ＡＦＰ　−ＧＢ　（ａ　−３）を順
次充填する。残り上端５　ｒｎｍ下までＧＢ、ＢＳＡ（
ａ　−４）を充填し、ｉ＃：後に再度承りエステル繊維
（ａ−５）を残シ５　ｍｍに詰める。最後に基端よシ３
．５儂のｈに印をつける（人）。（第１図）（３）　血
清中αフェトプロティンの測定７本の測定用毛細管を用
慈し、その基端を既知―度ＡＦＰ：０，３０．３００ｎ
ｆ／ｒｄ。

１．２５．５０μ２７ｍ１、そして残り１本に被検血清
＊＝Ｘ図の（ａ−３）までそれぞれ均一に浸漬させて吸
入する。この時の採取蓋は５μｌでｂつｆＣＣ次Ｋ　Ｒ
Ｉ　−ＡＦＰを第１図の（Ａ）までそれぞれ均一に浸漬
させて吸入する。

この時も採取量は５μｔである。次にこの毛細管の基端
をＰＢＳに浸し測定用毛細管の上端まで吸入する。この
測定に資した時間は１５分でめった。

上記毛細管をそのまま基端を下にしてガンマ−カウンタ
ーにて測定した後、この毛細管の固定化親和物（ａ−３
）が入っている部分を切シ取シ、同様にガンマ−カウン
ターで側足する。

（４）結　果 毛細管γ線測定値（ＣＰＭ） 濃度／−毛細管をその−１ま測定　切って測定ムＦＰ　
Ｏｎｆ　９４７　８６４ ３０　９４３　８３０ ３００　８９０　７５５ １１１ｆ　７４０　６６４ ２５　３０１　１７３ ５０　２４７　１０９ 被検体　６０８　５１０ 以上の結果ＡＦＰ＃Ｊｉ上昇とともに不動化される放射
能量は減少し、被検体中のＡＦＰ濃度は約２．５−３μ
ｆ／−と測定できた。

実施例２ （１）　試薬及び器具 ■　アルブミン吸着ガラス毛細管 ガラス毛細管（直径１ｍｍ、長さ１００ｍｍ）にアルブ
ミン２０η／ｌｎｔのＰＢＳを通し、吸引して余分な叡
を除き乾燥する。

（２）ａｎ、直径０．１７　ｍｍ １１販品を利用。

■　ＧＢ＋ＢＳＡ ＧＢをアルブミ：’　２０　ｍｙ／　ｍｈノＰＢＳ　Ｋ
浸Ｌ、ＧＢを精製水で２−３回洗浄後、乾燥する。

■　破りエステル繊維 市販品を利用。

■　１２５１αフ工トゾロデイン試薬混合ＧＢ、ＢＳＡ
　’（以下、８１−　ａｆｐ混合ＧＢ、ＢＳＡと略す）
市販ＡＦＰ　（ｌｌｊ１足試薬（第一ラシオアイソトー
；ゾ社製）の側足ヤント内谷試薬の放射性ヨウ化ＡＦＰ
　（”’Ｉ　）７［（（０，９ｐ　ｃｉ　／ハイフル）
Ｋ　ＧＢ、ＢＳＡを１，０２加え均−ＶＣ混合し、五酸
化燐で乾燥する。

■　抗ＡＦＰ　−ｕＢ ＧＢ　５９　ＶＣポリ−Ｌ−リゾ７（１％）３＊を加え
室温放置させた後、′！ｆｔ製氷で洗かする表面加工Ｇ
Ｂにゲルタールアルデヒドを加え、放置させた後、同様
Ｋａ製氷で洗浄する。次いで、架檎ＧＢにＡＦＰ抗体５
■を加えて室温２時間反応させた後、乾燥し抗ＡＦＰ　
−ＧＢを作成した。

′７）ＰＢＳ 実施例１の■のＰＢＳを使用、 ２）　測定用毛細管の作成 アルブミン収鍔ガラス毛細管の基端よシ、３．５ｍｍ間
隔Ｖ（て５本の印をつける。最初にポリエステル繊維（
ｂ−１）を詰める。この基端を真空ボンデに連結して毛
細管内を防圧とし、次の３．５　ｒｎｍ　Ｋ　ＧＢ、Ｕ
ＳＡ　（ｂ　−２）を吸引充填する。同体にして次の３
．５　ｍｍ　Ｋ　Ｒ１−ａｆｐ混合ＧＢ、ＢＳＡ　（ｂ
　−３）、続いてＧＢ、ＢＳＡ（ｂ−４）、抗ＡＦＰ　
−ＧＢ　（ｂ　−５）を順次充填する。残り上端５　ｍ
ｍ下までＧＢ　、ＢＳＡ（ｂ−６）を充填し、最後に再
度示すエステル繊維（ｂ−７）を残り５　ｍｍに詰める
。（第一２図） （３）　血清中αフェトプロティンの測定５本の測定用
毛細管を用意し、そのうち４本の基端を既知旋度ＡＦＰ
：０．３．１２５．２５．５０μ９／ｍｌ、ヤしてムシ
１本に被検血清を第２図（ｂ・−３ンまで、それぞれ均
一に浸漬させて牧人する。この時の採取量は５μｔであ
った。次にこの毛細管の基端をＰＢＳに浸し測定用毛Ｉ
ｊ４ｊｉ管の上端まで吸入する。この測定に歎した時間
は１０分でめった。

上記毛細管をそのまま基端を下にしてガンマ−カウンタ
ーにて測定した後、この毛細管の固定化親和物（ｂ−５
）が入っている部分を切り取り、同様にガンマ−カウン
ターで測定する。

（４）結果 毛細管γ線測定値（ＣＰＭ） 磯度μｆ／ゴ　毛細管を七のまま測定　切って測定ＡＦ
Ｐ　Ｏ１２２６１２１１ ３，１２５１２１９１１８１ ２５１０７６１０７１ ５０７１４７２３ 被検体　７６８　７２５ 以上の結果ＡＦＰ　濃度上昇とともに不動化される放射
能量は減少し、被検体中のｈｐｐ濃度は５５−６０μ？
／ｍと測定できた。

実施例３ （１）　試薬及び器具 ■　アルブミン吸着ガラス毛細管 ガラス毛ＩＩＪＪｉ官（直径１ｍｍ、長さ１００　ｍｍ
　）にアルブミン２０　Ｗ　／ｍｌ　ＰＢＳを通し、吸
引して余分な液を除き乾燥する。

（２ｐＧＢ、直径０．１７　ｍｍ 市販品を利用。

■　ＧＢ、ＢＳＡ ＱＢをアルブミン２０■／−のｐｎｓ　Ｋ授し、ＧＢを
精製水で２−３回洗浄後、乾燥する。

■　？リエスデル繊維 市販品を利用。

■　１２６Ｉ抗ａフエトプロテイン試薬（以下、ＲＩ−
抗ＡＦＰと略す） 市販ＡＦＰ測定試薬（第一ラゾオアイントーゾ社製）の
測定キット内容試薬放射性ヨウ化α−フェトゾロティン
抗体（１２５１）（凍結乾燥品０．９μ口／バイアル）
をとり蒸溜水５００μｔを加え均一に溶解する。

■　抗ＡＦＰ　−ＧＢ ＧＢ　５　ｆ　Ｋポリ−Ｌ−リシン（１％）３−を加え
室温放置させた後、精製水で洗浄する表面加工ＧＢにゲ
ルタールアルデヒドを加え、放置させた後、同様に精製
水で洗浄する。次いで、架橋ＧＢ　Ｋ　ＡＦＰ抗体５ｑ
を加えて室温２時間反応させた後、乾燥し抗ＡＦＰ　−
ＧＢを作成した。

■　ＰＢ８ 実施例１の■のＰＢＳを使用。

（２）　測定用毛細管の作成 アルブミン吸着ガラス毛細管の基端よシ、３、５　ｍｍ
　、間隔にて５本の印をつける。最初にポリエステル繊
維（ｃ−１）を詰める。こ゛の基端を真空ポンプに連結
して毛細管内を防圧とし、次の１０．５　ｍｍのにＧＢ
、Ｂ８Ａ　（ｅ　−２）を吸引充填する。同様にして次
の３．５　ｍｍに抗λＦＰ−ＧＢ（ｅ−３）を順次充填
する。残９上端５　ｍｍ下までＧＢ、８８人（ｅ−４）
を充填し、最後に再度ポリエステル繊維（ｅ−５）を残
９５ｍｍに詰める。（第３図） （３）　血清中αフェトクロティンの測定７本の測定用
毛細管を用意し、そのうち６本の基端を既知黴度ＡＦＰ
　：　０．３．１０．１００．１０００．１００００　
ｎ９　／　＠ｇとＲＩ　−ＡＦＰを５μｔずつ均一にし
た混合液に、他の一本を被検血清とＲＩ　−ＡＦＰを５
ｐｔずつ同様に均一にした混合液に、浸漬させて吸入す
る。そのとき女した時間は３０秒であった。

次にこの毛細管の基端をＰＢＳに浸し測定用毛細管の上
端まで吸入する。これに要した時間は１０分であった。

上記毛細管をそのまま基端を下にしてガンマ−カウンタ
ーにて測定した後、この毛細管の固足化親和物（ｃ−３
）が入っている部分を切り取り、同様にｆンマーカウン
ターで測定する。

（４）舶来 毛細管ｒ線測定値（ＣＰＭ） ＡＦＰ　Ｏ７７３６２ ３８５０６３ １０’１１７９　１０９ ３０　１２３５　２４１ １００　１２５５　３９７ ３００　２１３６　８７０ 被検体　１３３５　３３０ 以上の結果ＡＦＰ碌度上昇とともに不動化される放射能
量も増加し、被検体中のＡＦＰ濃展は約５０ｎｆ／−と
測定できた。

実施例４ （１）　試柴及び器具。

■　アルブミン吸着ガラス毛細管 ガラス毛細管（［径１ｍｍ＋、長さ１００ｍｍ）Ｉｃア
ルブミ７２０　Ｗ　／　ｔｎｅ　ＰＢＳを通し、吸引し
て余分な液を眩き乾燥する。

■　ＧＢ、直径０−１７　ｍｍ 市販品を利用。

■　ＱＢ　、　ＢＳＡ ＧＨをアルブミン２０り／−のＰＢＳに浸し、ＧＢを和
１ｑ水で２−３回洗浄後、乾燥する。

■　ポリエステル繊維 市販品を利用。

■　１２５Ｉ抗αフ工トプロテイン試薬混合ＧＢ、ＢＡ
Ａ（以下、ＲＩ−抗ａｆｐ混合ＧＢ、ＢＳＡと略す）市
販ＡＦＰ測定試薬（第一ラゾオアイントーゾ社製）の測
定キット内容試薬放射性ヨウ化ａ−フェトゾロティン抗
体（１２ｓＩ）（凍結乾燥品０．９μＣ１／バ４アル）
にＧＢ　、ＢＳＡ　ｆ　１．　Ｏｆ加え均一に混合する
。

■　抗ＡＦＰ　−ＧＢ ＧＢ　５９　Ｋポリ−し−リジン（１％）３−を加え室
温放置させた後、精製水で洗浄する表面加工ＧＢ　Ｋゲ
ルタールアルデヒドを加え、放置させた後、同様に精製
水で洗浄する。次いで、架橋ＧＢ　Ｋ　ＡＦＰ抗体５Ｈ
ｉを加えて室温２時間反応させた後、乾燥し抗ＡＦＰ　
−ＧＢを作成した。

■　ＰＢＳ 実施例１の■のＰＢＳを使用 （２）　測定用毛細管の作成 アルブミン吸着ガラス毛細管の基端よシ、３．５ｍｍ間
隔にて５本の印をつける。最初にｙｒ５　ＩＪエステル
繊維（ｄ−１）を詰める。この基端をＪＡ窒ボンゾに連
結して毛細管内を防圧とし、次の３．５　ｍｍ　ＩＩＣ
ＧＢ、ＢＳＡ（ｄ−２）を吸引元横する。同様にして次
の３．５　ｍｍＫＲＩ　−抗ａｆｐ混合ＧＢ、Ｂ８Ａ　
（ｄ　−３）、絖いてＧＢ　、ＢＳＡ（ｄ−４）、抗ム
にＰ−ＧＢ（ｄ−５）を順次充填する。残シ上端５　ｍ
ｍ下までＧ　Ｂ　、ＢＳＡ（ｄ−６）を充填し、最後に
再度？リエステル稙維（ｄ−７）を残９５　ｍｍに詰め
る。

（ｊＡ　４図） （３）　血清中αフェトプロティンの測定７本の測に用
毛細管を用意し、そのうち６本の基端を既知濃度ＡＦＰ
　：　Ｏ１３，１０，１００，１０００、ｌｏ　ｏ　ｏ
ｏ　ｎｆ／Ｗｔに、他の一本を被検血清に浸漬させ、（
ａ−４）迄吸入する。そのときの吸入量は約５μｔであ
った、次にこの毛細管の基端をＰＢＳに浸し測定用毛細
管の上端まで吸入する。これに喪した時間は１０分でめ
った。

上記毛細管をそのまま基端を下にしてガンマ−カウンタ
ーにて測定した後、この毛細管の固定化親和物（ｄ−５
）が入っている部分を切υ取シ、同様にガンマ−カウン
ターで測定する。

（４）結果 毛細＠ｒ線測足値（ＣＰＭ） ＡＦＰ　０　５６４　１１０ ３　５８５　１１２ １０　６２８　１３８ １００　７７６　１５４ ５００　８４１　１９１ ５０００　８５６　５８５ 被検体　７２７　１４９ 以上の結果ＡＦＰ濃度上昇とともに不動化される放射能
量も増加し、被検体中のムＦＰ譲度は５０　１００ｎｆ
／ｆＩｔｌと測定できた。

【図面の簡単な説明】

第１〜４図は本発明に使用する測定用毛細管である。 以上 出願人　第一化学薬品株式会社 代理人　弁理上布　賀三辛、１．４ −″−雫 弁理士　筒　野　登志雄 −０−、、−１，′ 弁理士小野信夫−−］ 第１図　第２図 ａ　（ａ−１）　口　（ｂ−１） 第３図　第４図 ＠　（Ｃ刊）　ＩＩＩ　（ｄ−１） 手続補正書（自発） 昭和６０年　１．・月２８日 特許庁長官志　賀　学殿 昭和５９年　特　許　願第９１３７９　号２　発明の名
称 放射性物質を利用した迅速免＆　ｎ＋１＋定法３、　補
正をする者 事件との関係　出願人 住　所　東京都中央区日本橘三丁目１３番５号名　称第
−化学薬品株式会社 代表者内藤武男 ４代理人 氏　名　（７７５６）弁理士　高　野　登志雄　。 住所間　上 ◆ ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、　補正の内容 Ｕ）　明細書中、第１５頁第６行〜第７行「抗インスリ
ン受容抗体、抗アセチルコリン受容抗体」とあるを 「抗インスリン受容体抗体、抗アセチルコリン受容体抗
体」と訂正する。 ？）　同、第２９頁第４行 ［抗ＡＦＰ結合ＧＢＪとあるを 「抗ＡＦＰ抗体結合ＧＢＪと訂正するうＣ）　同、同第
９行 ｒＧＢにＡＦＰ抗体」とあるを ｒＧＢに抗ＡＦＰ抗体」と訂正する。 （４）　同、第３３貞第８行 ｒＲＩ−ａｆｐ混合」とあるを ｒＲＩ−ＡＦＰ混合」と訂正する。 （５）同、第３４頁第４行 ｒＧＢＫＡＦＰ抗体」とあるを ｒＧＢに抗ＡＦＰ抗体」と訂正する。 （６）同、第３７頁最下行 「１２ｓＩ抗αフエトノロテイ／試薬」とある金「１２
ｓ工抗αフ工トゾロテイン抗体試薬」と訂正する。 （７２同、第３８頁第１２行 ｒＧＢにＡＦＰ抗体」とあるを ｒＧＢに抗ＡＦＰ抗体」と訂正するっ （８）同、第４２頁第１１行 「１２Ｊ抗αフエトゾロテイノ試薬」とあるを［１！Ｊ
抗αフ工トゾロテイン抗体試薬］と訂正する、 （９）同、同第１２行 ｒＲＩ−抗ａｆｐ混合」とあるを ｒＲＩ−抗ＡＦＰ混合」と訂正する。 （１１同、第４３頁第８行 ｒＧＢｌｃＡＦＰＫ体」とあルｅ ｒＧＢに抗ＡＦＰ抗体」と訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、放射性標識物質を利用した完投測定法にお、いて、
   放射ａ標識物質に対する抗体若しくは抗原又は放射性標
   識物質との反応生成物と親和性を有する抗体若しくけ抗
   原を担体に固定化した固疋化栽和！１ｌ１７を毛細管に
   充填し、該毛細管に試料を吸入させ毛細管中で完投治し
   くけ親和反応ヶ行なわせ、放射性標識物質又は放射性標
   識物質との反応生成′＠を固定化親和物に不動化させた
   のち、この不動化式れた毛細管中の放射舵鈑を測定する
   ことを％似とする迅速放射性完投測定法。 ２、　試料が被検体と、測定目的物質に放射性標識がし
   ておるものとの混合液である特許請求の範囲第１項員し
   躯の迅速放射性完投測定法。 ３、　試料が被検体と、測定目的物質と親和性を有する
   ＠質に放射性標識がしであるものとの混合液である特許
   請求の範囲第１項記載の迅速放射怪兄投側足法。 ４、　放射性標識物質を利用した免に測定法に２いて、
   放射性標識物質に対する抗ぜ若しくは抗原又は放射性物
   質との反応生成物と親和性を徊−する抗体若しくは抗原
   を担体に固定化したー冗化親和物及び担体に放射性標識
   物質を混合したもの全毛細管内に充填し、該毛細管に被
   検体を吸入させ、毛細管中で免役看しくＬ賊和反応を？
   Ｔなわせ、放射性標識物質又は放射性標識物質との反応
   生成物を固定化親和物に不動化させたのち、この不動化
   石れた毛細管中の放射能量を測定することを％徴とする
   迅速放射性免疫測定法。 ５、　放射性標識物質が測定目的物質に放射性標識がし
   であるものである％許請求の範囲第４項記載の迅速放射
   性免疫測定法。 ６、　放射性標識物）Ｘが測定目的物質と親和性を有す
   る物質に放射ａ標識がしであるものである特許請求の範
   囲第４歩記載の迅速放射性免役測定法。