JPS60225548A - 家畜受精卵の凍結，保存，融解，移殖方法及びそれに使用するストロ−管 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は家畜の受精卵の凍結、保存、融解。

移殖方法及びそれに使用するストロ−管に関する。

家畜の改良は人工受精の急速な普及により雄畜側からの
改良が主流をなしてきた。しかし、優秀な雌畜といえど
も一生涯に生産する子畜の数には限りがあり、牛ではせ
いぜい１０頭前後である。

家畜の受精卵移植は優秀な雌畜の受精卵を数多く別の雌
畜の子宮に移しかえて子畜を生産し雌畜側から効率的な
家畜の改良増殖を図る新しい育種繁殖技術であるが、移
殖に使用される受精卵の保存及び移殖方法に難点があり
、生存率が低く、また再現性が悪く、満足すべき結果が
得られていないのが実状である。

即ち、受精卵の保存方法としては大きくわけてｆｌｌ室
温保存、（２）低温保存、（３）体内保存、（４）凍結
保存の４種類があるが、（１）〜（３）の各方法は（４
）に比較して保存期間が短期間である。したがって最も
長期間保存出来る凍結保存技術の確立が１番望まれてい
る。

その凍結保存は、採取した受精卵を濃度の薄い耐凍剤溶
液から濃い耐凍剤溶液に順次浸漬して凍結の前処理を行
なって凍結させ、凍結した受精卵を移殖に供する時は融
解器にて融解した後、受精卵に浸透した耐凍剤を除去す
る。この耐凍剤の除去は凍結の前処理で行なった手順と
は逆の手順、即ち凍結時に使用した濃度の濃い耐凍剤溶
液から薄い耐凍剤溶液に順次移しかえて受精卵に浸透し
た耐凍剤を除去する。そして、耐凍剤を除去した受精卵
をストロ゛−管に入れ、ストロ−管を注入管に装着して
移殖を行なうものである。

しかしながら、融解後における耐凍剤の除去は濃度の異
なった耐凍剤を夫々無菌シャーレ（時計型）に入れ、融
解後の受精卵を毛細ピペットを使用し顕微鏡下でそれぞ
れ濃度の異なった耐凍剤溶液に移しかえ、ストロ−管へ
の収納もピペットを使用して行なっている。

そのため、受精卵には毛細ピペットによる取り扱いで傷
が付きやすく、又、無菌操作をしなければならないので
野外での作業では雑菌感染の危険が多い。

更に、耐凍剤溶液中から取り出して順次移しかえる作業
は非常に微細で神経をつかうため作業も困難なものであ
り、熟練した技術者を必要とする。

本発明は上述したような事情に鑑みてなしたもので、凍
結保存した受精卵を融解後移殖までの間、耐凍剤除去及
びストロ−管への収納を受精卵に触れることなく行なう
ことが出来るようにしたものである。

斯る目的を達成する本発明方法は、雌畜から採取した受
精卵を濃度の異なった耐凍剤に順次浸漬して凍結の為の
前処理を行ない、次いでその受精卵を、予め耐凍剤の濃
度が薄いものから濃い順番に収納したストロ−管の最上
層の凍結用耐凍剤溶液中に浸漬し、ストロ−管上部に栓
をして凍結保存し、移殖に供する際はストロ−管上部の
栓を外して融解し、常温下に静置して受精卵をストロ−
管内を降下させて耐凍剤溶液を除去し、最下部の耐凍剤
溶液が入った部分でストロ−管を切断し、それを注入器
に装着して移殖することを要旨とするものであり、上記
方法に使用するストロ−等は透明合成樹脂によって細径
で長尺なストロ−管本体を形成し、その一方端に綿栓を
備え、他の端末に樹脂性を閉栓すると共に、ストロ−管
本体の外周には長さ方向を等分する目印線が複数個表示
されていることを要旨とするものである。

本発明方法に於いて使用するストロ−管は、内径３朋、
長さ２７釧の透明なプラスチック管で、一方端にパウダ
ーなどの綿栓が設けられ、その栓より上方の外周面には
等間隔をおいて目印線が複数個表示されており、その目
印線に従って耐凍剤の濃度が薄いものから順次濃度の濃
いものが数段階に分けて収納されており、最上階の一番
濃度が濃い耐凍剤溶液中に前処理を完了した受精卵を収
納し、ストロ−管の開口端に栓をして凍結させる。

受精卵凍結の際の保存液としては、Ｄｕｌｂｅｃ。

リン酸緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）や、それを修正したものに
牛血類アルブミンまたは非動化牛胎児血清を２０〜２５
％加えたものが多く用いられる。

耐凍剤としては、１．０Ｍから１．５Ｍのジメチルスル
ホオキサイド（ＤＭＳＯ）及び１．０Ｍ〜１．５Ｍのグ
リセロールが多く用いられ、凍結のための前処理に用い
る耐凍剤の濃度は例えばＯＭ、　０．５Ｍ、１．０Ｍ、
１．５Ｍ等とし、ストロ−管中に収納する耐凍剤の濃度
は前処理で使用したと同じもの、又は１．５Ｍ、０．２
５Ｍ、ＯＭ或いは１．５Ｍ、ＯＭ、ＯＭ等とするも任意
である。

以下、本発明の一実施例を図面に基づいて説明すると、
（１）は−万端に綿栓（２）を有したストロ−管で、そ
のストロ−管（１）の外周面に綿栓（２）より上方の収
納部を複数に等分する目印線（３）及び移殖の際に切断
する箇所を示す切断線（３“）が表示されており、この
目印線（３）にならってストロ−管（１）内に濃度の薄
い耐凍剤から濃い順番に耐凍剤を収納するようになって
いる。

次に、保存の手順を説明すると、雌畜から採取した受精
卵を、耐凍剤の濃度ＯＭから０．５Ｍ−１，ＯＭ　−１
，５Ｍと１０分間位づつ浸漬し、順次移しかえて凍結の
前処理を行なう。

次に、ストロ−管（１）には濃度の薄い耐凍剤溶液（５
ｚ）から順次濃い耐凍剤溶液（５ｚ）、（５３）、（５
４）、そして受精卵（４）を含んだ濃い耐凍剤溶液（５
ｓ）とストロ−管（１）の目印線（３）に従って段階状
に区分は収納し、ストロ−管（１）の上端開口部を栓（
６）で封止して凍結させる。

凍結した受精卵を移殖に供するときは、ストロ−管（１
）上端の栓（６）を外し、融解器に入れて融解し、常温
下（２０〜２５℃）にて綿栓（２）側を下にした状態で
ストロ−管（１）を垂直に立て、耐凍剤溶液（５−ｓ）
と（ト１）間の空気層（７）に軽い振動を加えることに
よってこの空気層（７）を除去し、濃い耐凍剤溶液中（
５ｓ）に収納された受精卵（４）は薄い耐凍剤溶液（５
４）と混合し、耐凍剤溶液（５４）＋（５５）の濃度は
受精卵（４）を収納していた時の濃度より低く　（薄く
）なる。

このままの状態で約１０分間放置しておくと受精卵（４
）内に浸透した耐凍剤溶液の除去が徐々に行なわれる。

同様に、耐凍剤溶液（５−４）と（５ｓ）とを混合した
ものに耐凍剤溶液（５３）を、更に（５ｚ）、（５’　
１）を順次混合させてストロ−管（１）内の濃度を下方
に至るに従って順次低下させ、受精卵（４）を順次下方
に降下させることにより受精卵（４）内の耐凍剤溶液の
除去が自動的に行なわれる。

そして、移殖にあたっては受精卵（４）がストロ−管（
１）内を自然降下し、耐凍剤溶液又は保存液（５−ｚ）
内へ入ったことを確認した後、ストロ−管（１）を切断
線（３′）の処で切断し、受精卵（４）が入ったストロ
−管（１“）を注入器に装着して子宮頚管径由で移殖を
行なう。

上記した方法により凍結後に於ける耐凍剤の除去及び移
殖のためのストロ−管への収納を受精卵に全く触れるこ
となく出来ると共に、凍結保存のために使用するストロ
−管をそのまま所要の寸法に切断して注入器に装着し、
移殖操作することが出来るため、受精卵に傷を付けると
いった危険を大幅に減少でき、人工授精に供し得る安定
した授精卵を提供することが出来るものである。

本発明は以上の如き方法としたものであるから、凍結、
融解後の耐凍剤の除去をストロ−管内で自動的に行なう
ことが出来ると共に、耐凍剤除去後はストロ−管を切断
することによってそのまま注入器に装着して人工授精と
同様な方法で移殖に供し得るものである。

又、これに使用するストロ−管は凍結保存と移殖の両方
に使用でき、しかも外周面に目印線及び切断線が表示し
であるため、ストロ−管内へ溶液を分注するにあたって
目安となり、分注作業の能率アップを計ることが出来る
と共に、融解後は切断線の位置でストロ−管を切断すれ
ばそのまま注入器に装着して移殖操作を行なうことが出
来るものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明方法に使用するストロ−管の正面図、第
２図は凍結のために受精卵をストロ−管に収納した状態
を示す断面図、第３図はストロ−管を切断して注入器に
セットし得るようにした断面図である。 図中 （１）ニスドロー管、（４）：受精卵 （５−１）・・・（５ｓ）：耐凍剤溶液（６）ニスドロ
ー管の開口部を封止する栓特許庁長官　若　杉　和　夫
　殿 （特許庁審査官　股） １、事件の表示 昭和　５９　年　特　訂　願　第　８１５９２　月２、
発明の名称 家畜受精卵の凍結、保存、融解、移植ＩＪ法及びそれに
使用するストロ−管 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　小　林　軍　次　部 ４、代理人 住　所　東京都文京区白山５１目１４Ｍ７号５、補正命
令の日付く自発補正） 昭和　年　月　日 ６６補正の対象 補正明　細　書 １、発明の名称 家畜受精卵の凍結、保存、融解、移植方法及びそれに使
用するストロ−管 ２、特許請求の範囲 （１）雌畜から採取した受精卵を濃度の異なった耐凍剤
に順次浸漬して凍結の為の前処理を行ない、次いでその
受精卵を、予め耐凍剤を濃度が薄いものから濃い順番に
収納したストロ−管の最上層の凍結用耐凍剤溶液中に浸
漬し、ストロ−管上部に栓をして凍結保存し、移植に供
する際はストロ−管上部の栓を外して融解し、常温下に
静置して受精卵をストロ−管内を降下させて耐凍剤溶液
を除去し、最下部の耐凍剤溶液が入った部分でストロ−
管を切断し、それを注入器に装着して移植することを特
徴とする家畜受精卵の凍結、保存、融解。 移植方法。 ＋２１　ｉ３明合成樹脂によってｍ径で長尺なストロ一
管本体を形成し、その−万端に綿栓を備え、他の端末に
樹脂栓を閉栓すると共に、ストロ−管本体の外周には長
さ方向を等分する目印線が複数個表示されていることを
特徴とする家畜受精卵の凍結、保存、融解、移植に使用
するストロ−管。 ３、発明の詳細な説明 この発明は家畜の受精卵の凍結、保存、融解。 移植方法及びそれに使用するストロ−管に関する。 家畜の改良は人工受精の急速な普及により雌畜側からの
改良が主流をなしてきた。しかし、優秀な離俗といえど
も一生涯に生産する子糸の数には限りがあり、牛ではせ
いぜい１０ｉ１１前後である。 家畜の受精卵移植は優秀な離俗の受精卵を数多く別の離
俗の子宮に移しかえて子糸を生産し離俗側から効率的な
家畜の改良増殖を図る新しい育種繁殖技術であるが、移
植に使用される受精卵の保存及び移植方法に難点があり
、生存率が低（、また再現性が悪く、満足すべき結果が
得られていないのが実状である。 即ち、受精卵の保存方法としては大きくわけて（１１室
温保存、（２）低温保存、（３）体内保存、（４）凍結
保存の４種類があるが、（１１〜（３）の各方法は（４
）に比較して保存期間が短期間である。したがって最も
長期間保存出来る凍結保存技術の確立が１希望まれてい
る。 その凍結保存は、採取した受精卵を濃度の薄い耐凍剤溶
液から濃い耐凍剤溶液に順次浸漬して凍結の前処理を行
なって凍結させ、凍結した受精卵を移植に供する時は融
解器にて融解した後、受精卵に浸透した耐凍剤を除去す
る。この耐凍剤の除去は凍結の前処理で行なった手順と
は逆の手順、即ち凍結時に使用した濃度の濃い耐凍剤溶
液から薄い耐凍剤溶液に順次移しかえて受精卵に浸透し
た耐凍剤を除去する。そして、耐凍剤を除去した受精卵
をストロ−管に入れ、ストロ−管を注入管に装着して移
植を行なうものである。 しかしながら、融解後における耐凍剤の除去は濃度の異
なった耐凍剤を夫々無菌シャーレ（時計回）に入れ、融
解後の受精卵を毛細ピペットを使用し顕微鏡下でそれぞ
れ濃度の異なった耐凍剤溶液に移しかえ、ストロ−管へ
の収納もピペットを使用して行なっている。 そのため、受精卵には毛細ピペットによる取り扱いで傷
が付きやすく、又、無菌操作をしなければならないので
野外での作業では雑菌感染の危険が多い。 更に、耐凍剤溶液中から取り出して順次移しかえる作業
は非常に微細で神経をつかうため作業も困難なものであ
り、熟練した技術者を必要とする。 本発明は上述したような事情に鑑みてなしたもので、凍
結保存した受精卵を融解後移植までの間、耐凍剤除去及
びストロ−管への収納を受精卵に触れることなく行なう
ことが出来るようにしたものである。 斯る目的を達成する本発明方法は、離俗から採取した受
精卵を濃度の異なった耐凍剤に順次浸漬して凍結の為の
前処理を行ない、次いでその受精卵を、予め耐凍剤の濃
度が薄いものから濃い順番に収納したストロ−管の最上
層の凍結用耐凍剤溶液中に浸漬し、ストロ−管上部に栓
をして凍結保存し、移植に供する際はストロ−管上部の
栓を外して融解し、常温下に静置して受精卵をストロ−
管内を降下させて耐凍剤溶液を除去し、最下部の耐凍剤
溶液が入った部分でストロ−管を切断し、それを注入器
に装着して移植することを要旨とするものであり、上記
方法に使用するストロ−等は透明合成樹脂によって細径
て長尺なストロ−管本体を形成し、その−万端に綿栓を
備え、他の端末に樹脂栓を閉栓すると共に、ストロ−管
本体の外周には長さ方向を等分する目印線が複数個表示
されていることを要旨とするものである。 本発明方法に於いて使用するストロ−管は、内径３龍、
長さ２７ｃｍの透明なプラスチック管で、−万端にパウ
ダーなどの綿栓が設けられ、その栓より上方の外周面に
は等間隔をおいて目印線が複数個表示されており、その
目印線に従って耐凍剤の濃度が薄いものから順次濃度の
濃いものが数段階に分けて収納されており、最上階の一
番濃度が濃い耐凍剤溶液中に前処理を完了した受精卵を
収納し、ストロ−管の開口端に栓をして凍結させる。 受精卵凍結の際の保存液としては、Ｄｕｌｂｅｃ。 リン酸緩衝液（ＰＢＳ）や、それを修正したものに牛血
漿アルブミンまたは非動化牛胎児血清を２０〜２５％加
えたものが多く用いられる。 耐凍剤としては、１．０Ｍから１．５Ｍのジメチルスル
ホオキサイド（ＤＭＳＯ）及び１．０Ｍ＝１．５Ｍのグ
リセロールが多く用いられ、凍結のための前処理に用い
る耐凍剤の濃度は例えばＯＭ、０．５Ｍ、１．０Ｍ、１
．５Ｍ等とし、ストロ−管中に収納する耐凍剤の濃度は
前処理で使用したと同じもの、又は１．５Ｍ、０．２５
Ｍ、ＯＭ或いは１．５Ｍ、ＯＭ、ＯＭ等とするも任意で
ある。 以下、本発明の一実施例を図面に基づいて説明すると、
（１）は−万端に綿栓（２）を有したストロ−管で、そ
のストロ−管（１）の外周面に綿栓（２）より上方の収
納部を複数に等分する目印線（３）及び移植の際に切断
する箇所を示す切断線（３°）が表示されており、この
目印線（３）にならってストロ−管（１）内に濃度の薄
い耐凍剤から濃い順番に耐凍剤を収納するようになって
いる。 次に、保存の手順を説明すると、離俗から採取した受精
卵を、耐凍剤の濃度ＯＭから０．５Ｍ−１，０Ｍ　−１
，５Ｍと１０分間位づつ浸漬し、順次移しかえて凍結の
前処理を行なう。 次に、ストロ−管（１）には濃度の薄い耐凍剤溶液（５
ｚ）から順次濃い耐凍剤溶液（５−２）、（５−３）、
（５４）、そして受精卵（４）を含んだ濃い耐凍剤溶液
（５ｓ）とストロ−管（１）の目印線（３）に従って段
階状に区分は収納し、ストロ−管（１）の上端開口部を
栓（６）で封止して凍結させる。 凍結した受精卵を移植に供するときは、ストロ−管（１
）上端の栓（６）を外し、融解器に入れて融解し、常温
下（２０〜２５℃）にて綿栓（２）側を下にした状態で
ストロ−管（１）を垂直に立て、耐凍剤溶液（５ｓ）と
（５４，）間の空気Ｎ（７）に軽い振動を加えることに
よってこの空気Ｎ（７）を除去し、濃い耐凍剤溶液中（
５ｓ）に収納された受精卵（４）は薄い耐凍剤溶液（５
４）と混合し、耐凍剤溶液（５４）＋（５−５）の濃度
は受精卵（４）を収納していた時の濃度より低（（薄く
）なる。 このままの状態で約１０分間放置しておくと受精卵（４
）内に浸透した耐凍剤溶液の除去が徐々に行なわれる。 同様に、耐凍剤溶液（５−４）と（５ｓ）とを混合した
ものに耐凍剤溶液（５３）を、更に（５−ｚ　）　、（
５−Ｌ　）を順次混合させてストロ−管（１）内の濃度
を下方に至るに従って順次低下させ、受精卵（４）を順
次下方に降下させることにより受精卵（４）内の耐凍剤
溶液の除去が自動的に行なわれる。 そして、移植にあたっては受精卵（４）がストロ−管（
１）内を自然降下し、耐凍剤溶液又は保存液（５１）内
へ入ったことを確認した後、ストロ−管（１）を切断線
（３゛）の処で切断し、受精卵（４）が入ったストロ−
管（ｌｏ）を注入器に装着して子宮頚管径由で移植を行
なう。 上記した方法により凍結後に於ける耐凍剤の除去及び移
植のためのストロ−管への収納を受精卵に全く触れるこ
となく出来ると共に、凍結保存のために使用するストロ
−管をそのまま所要の寸法に切断して注入器に装着し、
移植操作することが出来るため、受精卵に傷を付けると
いった危険を大幅に減少でき、人工授精に供し得る安定
した授精卵を提供することが出来るものである。。 、本発明は以上の如き方法としたものであるから、凍結
、融解後の耐凍剤の除去をストロ−管内で自動的に行な
うことが出来ると共に、耐凍剤除去後はストロ−管を切
断することによってそのまま注入器に装着して人工授精
と同様な方法で移植に供し得るものである。 又、これに使用するストロ−管は凍結保存と移植の両方
に使用でき、しかも外周面に目印線及び切断線が表示し
であるため、ストロ−管内へ溶液を分注するにあたって
目安となり、分注作業の能率アンプを計ることが出来る
と共に、融解後は切断線の位置でストロ−管を切断すれ
ばそのまま注入器に装着して移植操作を行なうことが出
来るものである。 ４、図面の簡単な説明 第１図は本発明方法に使用するストロ−管の正面図、第
２図は凍結のために受精卵をストロ−管に収納した状態
を示す断面図、第３図はストロ−管を切断して注入器に
セットし得るようにした断面図である。 図中 （１）ニスドロー管、（４）：受精卵 （５ｚ）・・・（５ｓ）：耐凍剤溶液

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１雌畜から採取した受精卵を濃度の異なった耐凍剤
   に順次浸漬して凍結の為の前処理を行ない、次いでその
   受精卵を、予め耐凍剤を濃度が薄いものから濃い順番に
   収納したストロ−管の最上層の凍結用耐凍剤溶液中に浸
   漬し、ストロ−管上部に栓をして凍結保存し、移殖に供
   する際はストロ−管上部の栓を外して融解し、品温下に
   静置して受精卵をストロ−管内を降下させて耐凍剤溶液
   を除去し、最下部の耐凍剤溶液が入った部分でストロ−
   管を切断し、それを注入器に装着して移殖することを特
   徴とする家畜受精卵の凍結、保存、融解。 移殖方法。 （２）透明合成樹脂によって細径で長尺なストロ−管本
   体を形成し、その−万端に綿栓を備え、他の端末に樹脂
   柱を閉栓すると共に、ストロ−管本体の外周には長さ方
   向を等分する目印線が複数個表示されていることを特徴
   とする家畜受精卵の凍結、保存、融解、移殖に使用する
   ストロ−管。