JPS60214878A - 好気性糸状菌の培養方法 - Google Patents
好気性糸状菌の培養方法Info
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- JPS60214878A JPS60214878A JP7151584A JP7151584A JPS60214878A JP S60214878 A JPS60214878 A JP S60214878A JP 7151584 A JP7151584 A JP 7151584A JP 7151584 A JP7151584 A JP 7151584A JP S60214878 A JPS60214878 A JP S60214878A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は細胞培養方法に関する。
、（従来技術）
培養液内で、かび、放線菌等の細胞を増殖培養して、グ
リセリン、アルコール等の一次代謝産物またはペニシリ
ン、ストレプトマイシン等の二次代謝産物の生産が工業
的レベルで行なわれていることはよく知られている。
リセリン、アルコール等の一次代謝産物またはペニシリ
ン、ストレプトマイシン等の二次代謝産物の生産が工業
的レベルで行なわれていることはよく知られている。
培養液内で細胞を培養すると、培養する細胞の種類によ
って、細胞はベレット増殖あるいはノ４ルビー増殖によ
って増殖する。４レツド増殖とは培養細胞の菌糸と菌糸
とが培養中にからまシ、粒状の細胞のかたまりを形成し
て増殖する増殖形態をいい、ペニシリンの生産等におい
て生じる。パルビー増殖とは増養液中に増殖細胞が均一
に分布した状態で増殖する増殖形態をいい、ストレプト
マイシンの生産等において生じる。しかしながらこれら
従来の増殖形態においては種々の問題があった。（レッ
ト増殖を起こすと、細胞の増殖率が極めて低く、効率よ
く細胞を増殖することができないことはよく知られてい
る。また、／４’ルビー培養を起こす細胞の場合は、培
養細胞が培養液中に均一に混合した状態で存在するので
、培養液の粘度が極めて高くなり、培養液の攪拌に要す
る動力が著しく高くなる。さらに、ペレット増殖、ノや
ルビー増殖の両方とも培養液中に細胞が混合された状態
で存在するので、培養液から代謝産物を分離抽出する際
あるいは細胞増殖中の培養液から少量のサンプルを採取
して、培養液および代謝産物を分析する際において、固
形物である細胞を除去する必要があり、培養液からの代
謝産物の分離抽出あるいは培養液のモニターを行なうの
が極めて厄介かつ時間の浪費をともなうものであった。
って、細胞はベレット増殖あるいはノ４ルビー増殖によ
って増殖する。４レツド増殖とは培養細胞の菌糸と菌糸
とが培養中にからまシ、粒状の細胞のかたまりを形成し
て増殖する増殖形態をいい、ペニシリンの生産等におい
て生じる。パルビー増殖とは増養液中に増殖細胞が均一
に分布した状態で増殖する増殖形態をいい、ストレプト
マイシンの生産等において生じる。しかしながらこれら
従来の増殖形態においては種々の問題があった。（レッ
ト増殖を起こすと、細胞の増殖率が極めて低く、効率よ
く細胞を増殖することができないことはよく知られてい
る。また、／４’ルビー培養を起こす細胞の場合は、培
養細胞が培養液中に均一に混合した状態で存在するので
、培養液の粘度が極めて高くなり、培養液の攪拌に要す
る動力が著しく高くなる。さらに、ペレット増殖、ノや
ルビー増殖の両方とも培養液中に細胞が混合された状態
で存在するので、培養液から代謝産物を分離抽出する際
あるいは細胞増殖中の培養液から少量のサンプルを採取
して、培養液および代謝産物を分析する際において、固
形物である細胞を除去する必要があり、培養液からの代
謝産物の分離抽出あるいは培養液のモニターを行なうの
が極めて厄介かつ時間の浪費をともなうものであった。
（発明の目的）
本発明の目的は、従来の培養法によるとペレット増殖を
生じる細胞をペレット増殖とは異なる増殖形態により増
殖させ、効率よく細胞の培養方法を提供することにある
。また、本発明の目的は、培養液中には増殖細胞を存在
せしめない状態で細胞を増殖でき、培養液中から固形物
である細胞を除去する工程を介すことなく、培養液中か
ら容易に代謝産物の分離抽出あるいは培養液の分析を行
なうことのできる細胞培養方法を提供することにある。
生じる細胞をペレット増殖とは異なる増殖形態により増
殖させ、効率よく細胞の培養方法を提供することにある
。また、本発明の目的は、培養液中には増殖細胞を存在
せしめない状態で細胞を増殖でき、培養液中から固形物
である細胞を除去する工程を介すことなく、培養液中か
ら容易に代謝産物の分離抽出あるいは培養液の分析を行
なうことのできる細胞培養方法を提供することにある。
さらに、本発明のさらに別の目的は、細胞増殖中の培養
液の粘度を上昇せしめず、低い動力で培養液を攪拌する
ことのできる細胞培養方法を提供することＫある。
液の粘度を上昇せしめず、低い動力で培養液を攪拌する
ことのできる細胞培養方法を提供することＫある。
（発明の構成）
本発明の細胞培養方法は、培養液中に分散された複数の
発泡担体内で細胞を培養することを特徴とする。
発泡担体内で細胞を培養することを特徴とする。
本発明で使用される発泡担体としては、親水性材料を発
泡したもの、疎水性材料を発泡した中のいずれのものを
も使用できるが、例えばポリビニルアルコールを発泡し
たもの、ウレタンフオーム等を挙げることができる。ウ
レタン７オームとしても、例えば？リエチレングリコー
ルゾイソシアネートとポリプロピレングリコールジイソ
シアネートから連続発泡法で製造したものを使用するこ
とができる。発泡担体の細孔径が７０４ｍ乃至／θ燗の
ものが細胞増殖を発泡担体の細孔内で効率よく行なうこ
とができ好ましい。発泡担体を培養液に分散して使用す
る場合は、発泡担体の大きさ培養槽の大きさの／／、３
−以下好ましくは、／〃以下とすることが攪拌効率向上
の点から望ましくまた発泡担体の最大量体積（発泡担体
内部の発泡の体積をも含めた見かけの体積は培地ｌθθ
−尚りｌθｏｃｍ’好ましくはＳθ〜１０ｃｒｒＬ’
とするのが好ましい。本発明の方法で増殖できる細胞と
しては、カビ、放線菌等の微生物細胞、固定化細胞等の
種々の細胞を挙げることができる＠ （発明の効果） 本発明は細胞培養を発泡担体の細孔内で行なうよう圧し
たものであり、本発明の細胞培養方法を使用すると、従
来の培養方法を用いた場合と異なった増殖形態により細
胞が増殖する。
泡したもの、疎水性材料を発泡した中のいずれのものを
も使用できるが、例えばポリビニルアルコールを発泡し
たもの、ウレタンフオーム等を挙げることができる。ウ
レタン７オームとしても、例えば？リエチレングリコー
ルゾイソシアネートとポリプロピレングリコールジイソ
シアネートから連続発泡法で製造したものを使用するこ
とができる。発泡担体の細孔径が７０４ｍ乃至／θ燗の
ものが細胞増殖を発泡担体の細孔内で効率よく行なうこ
とができ好ましい。発泡担体を培養液に分散して使用す
る場合は、発泡担体の大きさ培養槽の大きさの／／、３
−以下好ましくは、／〃以下とすることが攪拌効率向上
の点から望ましくまた発泡担体の最大量体積（発泡担体
内部の発泡の体積をも含めた見かけの体積は培地ｌθθ
−尚りｌθｏｃｍ’好ましくはＳθ〜１０ｃｒｒＬ’
とするのが好ましい。本発明の方法で増殖できる細胞と
しては、カビ、放線菌等の微生物細胞、固定化細胞等の
種々の細胞を挙げることができる＠ （発明の効果） 本発明は細胞培養を発泡担体の細孔内で行なうよう圧し
たものであり、本発明の細胞培養方法を使用すると、従
来の培養方法を用いた場合と異なった増殖形態により細
胞が増殖する。
具体的には、従来法によるとペレット増殖を起していた
細胞が、パルビー増殖によすあるいは発泡担体内のみで
細胞の増殖が行なわれ、培養液内には細胞が存在しない
新たな増殖形態により増殖される。また従来法によると
ノやルビー増殖を起していた細胞が、培養液内の細胞の
数がより減少したノ々ルビー増殖によりあるいは発泡担
体内のみで細胞の増殖が行なわれ培養液内に細胞が存在
しない新たな増殖形態により増殖される。
細胞が、パルビー増殖によすあるいは発泡担体内のみで
細胞の増殖が行なわれ、培養液内には細胞が存在しない
新たな増殖形態により増殖される。また従来法によると
ノやルビー増殖を起していた細胞が、培養液内の細胞の
数がより減少したノ々ルビー増殖によりあるいは発泡担
体内のみで細胞の増殖が行なわれ培養液内に細胞が存在
しない新たな増殖形態により増殖される。
従って、本発明を使用すると従来ベレット増殖を起して
いた細胞を、ペレット増殖とは異なる増殖形９により効
率よく細胞の増殖を行なうことができる。また、発泡担
体内のみで細胞の増殖が行なわれ、培養液中には細胞が
存在しない新たな増殖形態により細胞の増殖が行なわれ
る場＠は、固形物である細胞を培養液から分離抽出する
工程を省略することができるので、培養液からめ代謝産
物の分離抽出および培養液の分析を簡易にかつ短時間で
行なうことができる。ノ４ルビー増殖を行なう場合であ
っても、従来法の場合よりも培養液中の細胞の量が少な
いので、固形物の分離を容易に行なうことができる。さ
らに、培養液中に細胞がほとんど存在しないか、存在し
ても従来法の場合よりも少量であるので、培養液の粘度
を低くおさえることができ、培養液の攪拌を低動力で効
率よく行なうことができる。
いた細胞を、ペレット増殖とは異なる増殖形９により効
率よく細胞の増殖を行なうことができる。また、発泡担
体内のみで細胞の増殖が行なわれ、培養液中には細胞が
存在しない新たな増殖形態により細胞の増殖が行なわれ
る場＠は、固形物である細胞を培養液から分離抽出する
工程を省略することができるので、培養液からめ代謝産
物の分離抽出および培養液の分析を簡易にかつ短時間で
行なうことができる。ノ４ルビー増殖を行なう場合であ
っても、従来法の場合よりも培養液中の細胞の量が少な
いので、固形物の分離を容易に行なうことができる。さ
らに、培養液中に細胞がほとんど存在しないか、存在し
ても従来法の場合よりも少量であるので、培養液の粘度
を低くおさえることができ、培養液の攪拌を低動力で効
率よく行なうことができる。
（実施例）
以下、本発明を実施例により説明する。
〈実施例／〉
水／ｌに、ラクトース弘Ｏｇ、コーンスチープリカ−ａ
ｏｇ、ＮａＮ０． Ｊ ｇ、ＫＨ２ＰＯ，０，３ｇおよ
びＭｇ５Ｏａ Ｏ，，２ｋｇを添加混合して調整した培
養液１００ｍ１！を容積３θθ−の三角フラスコに入れ
、この培養液に４ニシリウム クリソゲナム（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒ７ｓｏｇｅｎｕｍ） の前培養液
／ｍ７！を添加し、さらに三角フラスコ内に平均細孔径
約０．３咽を有する約Ｓｆｍ角の日東電気工朶製人工土
壌用ウレタンホーム２ｇ＜、２２ｃｍ ）を入れた。三
角フラスコ内の培養液の温度を、２４’Ｃに保持して、
この三角フラスコをロータリーシェーカにより攪拌速度
−２０Ｏｒｐｍで攪拌して培養し、これを実施例／とし
た。
ｏｇ、ＮａＮ０． Ｊ ｇ、ＫＨ２ＰＯ，０，３ｇおよ
びＭｇ５Ｏａ Ｏ，，２ｋｇを添加混合して調整した培
養液１００ｍ１！を容積３θθ−の三角フラスコに入れ
、この培養液に４ニシリウム クリソゲナム（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒ７ｓｏｇｅｎｕｍ） の前培養液
／ｍ７！を添加し、さらに三角フラスコ内に平均細孔径
約０．３咽を有する約Ｓｆｍ角の日東電気工朶製人工土
壌用ウレタンホーム２ｇ＜、２２ｃｍ ）を入れた。三
角フラスコ内の培養液の温度を、２４’Ｃに保持して、
この三角フラスコをロータリーシェーカにより攪拌速度
−２０Ｏｒｐｍで攪拌して培養し、これを実施例／とし
た。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記実施例１
と同様にして細胞を培養し、これを比較例／とした。
と同様にして細胞を培養し、これを比較例／とした。
比較例／の場合は増殖細胞が培養液中に均一に混合して
増殖する／ＩＰルビー増殖であったが、実施例１の場合
は細胞が発泡担体内で増殖し、細胞増殖後においても、
培養液中には細胞が存在せず、細胞増殖開始時と同様培
養液は透明な状態を保持し続けた。
増殖する／ＩＰルビー増殖であったが、実施例１の場合
は細胞が発泡担体内で増殖し、細胞増殖後においても、
培養液中には細胞が存在せず、細胞増殖開始時と同様培
養液は透明な状態を保持し続けた。
第１図に、実施例／と比較例／における培養液中のラク
トース濃度と生成にニジリンの生産量を示すＯ ラクトース濃度は比較例／の方が実施例／よりも早く低
下したが、ペニシリンの生産量は実施例／および比較例
１ともにりＢ１で同程度の最大量を示した。生成ペニシ
リンの量単位γはμ９／ｌを意味する。
トース濃度と生成にニジリンの生産量を示すＯ ラクトース濃度は比較例／の方が実施例／よりも早く低
下したが、ペニシリンの生産量は実施例／および比較例
１ともにりＢ１で同程度の最大量を示した。生成ペニシ
リンの量単位γはμ９／ｌを意味する。
〈実施例コ〉
実施例／と全く同様の培養液ｌθθ−を容積３００−の
三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリウム ク
リソゲナム（Ｐｅｎｌｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅ
ｎｕｍ） の前培養液ｌ−を添加し、さらに三角フラス
コ内に平均細孔径約θ、ｋｍの約Ｓ燗角のＩリデロピレ
ングリコール（ＲＰＣ）ウレタンホーム／ｇ（３θ儂３
）を入れた。実施例／と同様にして三角フラスコ内の培
養液の温度を２１１ｏＣに保持して、この三角フラスコ
をロータリーシェーカを用い攪拌速度、２００ ｒｐｍ
で攪拌して培養し、これを実施例コとした。
三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリウム ク
リソゲナム（Ｐｅｎｌｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅ
ｎｕｍ） の前培養液ｌ−を添加し、さらに三角フラス
コ内に平均細孔径約θ、ｋｍの約Ｓ燗角のＩリデロピレ
ングリコール（ＲＰＣ）ウレタンホーム／ｇ（３θ儂３
）を入れた。実施例／と同様にして三角フラスコ内の培
養液の温度を２１１ｏＣに保持して、この三角フラスコ
をロータリーシェーカを用い攪拌速度、２００ ｒｐｍ
で攪拌して培養し、これを実施例コとした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記実施例コ
と同様にして細胞を培養し、これを比較例コとした。
と同様にして細胞を培養し、これを比較例コとした。
比較例コの場合は増殖細胞が培養液中に均一に混合して
増殖するパルビー増殖であったが、実施例コの場合は細
胞が発泡担体内で増殖し、細胞増殖後においても、培養
液中には細胞が存在せず、細胞増殖開始時と同時培養液
は透明な状態を保持し続けた。
増殖するパルビー増殖であったが、実施例コの場合は細
胞が発泡担体内で増殖し、細胞増殖後においても、培養
液中には細胞が存在せず、細胞増殖開始時と同時培養液
は透明な状態を保持し続けた。
第２図に、実施例コと比較例コにおける培養液中のラク
トース濃度と生成ペニシリンの生産量を示す。
トース濃度と生成ペニシリンの生産量を示す。
ラクトース濃度は比較例コの方が実櫂例コよりも早く低
下したが、ペニシリンの生産量の最大値は実施例コの方
が比較例コよりも１日おくれて示されたが、その生産量
はほぼ同じであった。
下したが、ペニシリンの生産量の最大値は実施例コの方
が比較例コよりも１日おくれて示されたが、その生産量
はほぼ同じであった。
〈実施例３〉
水／ｌに、サッカロース３０ｇ、酵母エキスＳ１ ＝
Ｋ２ＨＰＯａ ／ １！ 、 ＮａＮＯ３３１１、Ｍｇ
５Ｏａ ・７Ｈ２００、！； ｇ、 ＫＣＩθ、！；
１１ 、 Ｆｅ５Ｏａ ・７Ｈ２００−０／ １１ を
添加混合してなるチャペック（Ｃｚａｐｅｋ）培養液１
０θ−を容積３θＯ−の三角フラスコに入れ、この培養
液にアスペルギルス オリゼ−（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｏｒｙｚａｅ ）の前培養液ｌ−を添加し、さらに三
角フラスコ内に平均細孔径約θ、！ｆｖｘｓの約５ｍｍ
角の日東電気工業製人工土壌用ウレタンホームｏ、ｓ
ｇ（ｊ、５ｃｒｒＬ’）を入れた。次に、三角フラスコ
内の培養液のｉ度を、２４”Ｃに保持して、この三角フ
ラスコをロータリーシェーカにより攪拌速度コＯＯｒｐ
ｍで攪拌して、これを実施例３Ａとした。この実施例３
Ａと全く同様にして別の三角フラスコで培養したものを
実施例３Ｂとした。
Ｋ２ＨＰＯａ ／ １！ 、 ＮａＮＯ３３１１、Ｍｇ
５Ｏａ ・７Ｈ２００、！； ｇ、 ＫＣＩθ、！；
１１ 、 Ｆｅ５Ｏａ ・７Ｈ２００−０／ １１ を
添加混合してなるチャペック（Ｃｚａｐｅｋ）培養液１
０θ−を容積３θＯ−の三角フラスコに入れ、この培養
液にアスペルギルス オリゼ−（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｏｒｙｚａｅ ）の前培養液ｌ−を添加し、さらに三
角フラスコ内に平均細孔径約θ、！ｆｖｘｓの約５ｍｍ
角の日東電気工業製人工土壌用ウレタンホームｏ、ｓ
ｇ（ｊ、５ｃｒｒＬ’）を入れた。次に、三角フラスコ
内の培養液のｉ度を、２４”Ｃに保持して、この三角フ
ラスコをロータリーシェーカにより攪拌速度コＯＯｒｐ
ｍで攪拌して、これを実施例３Ａとした。この実施例３
Ａと全く同様にして別の三角フラスコで培養したものを
実施例３Ｂとした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記実施例３
Ａおよび３Ｂと同様にして、コ個の別の三角フラスコで
細胞を培養し、これを比較例３Ａおよび３Ｂとした。
Ａおよび３Ｂと同様にして、コ個の別の三角フラスコで
細胞を培養し、これを比較例３Ａおよび３Ｂとした。
比較例３Ａおよび３Ｂの場合は、培養液中拠細胞の固ま
りを作るベレット増殖により細胞増殖が行なわれたが、
実施例３Ａおよび３Ｂの場合はパルビー増殖により細胞
増殖が行なわれた。
りを作るベレット増殖により細胞増殖が行なわれたが、
実施例３Ａおよび３Ｂの場合はパルビー増殖により細胞
増殖が行なわれた。
第３図に実施例３Ａおよび３Ｂと比較例３Ａおよび３Ｂ
における培養液中のラクトース濃度とα−アミラーゼ活
性の生産量を示す。
における培養液中のラクトース濃度とα−アミラーゼ活
性の生産量を示す。
第３図に示されるように、本発明の実施例３Ａおよび３
Ｂにおけるα−アミラーゼ活性の生産量は比較例３Ａお
よび３Ｂよりも極めて高い。首た、グルコースの分解も
比較例３Ａおよび３Ｂよりも実施例３Ａおよび３Ｂの方
が早かった。α−アミラーゼ活性の量単位ＤＰはブルー
パリニー（ｂｌｕｅ ｖａｌｕｅ） 法において、グ０
°Ｃ３θ分間に青色ヨウ緊定色ｌθチ低下せしめたアミ
ロースのミリグラム数である。
Ｂにおけるα−アミラーゼ活性の生産量は比較例３Ａお
よび３Ｂよりも極めて高い。首た、グルコースの分解も
比較例３Ａおよび３Ｂよりも実施例３Ａおよび３Ｂの方
が早かった。α−アミラーゼ活性の量単位ＤＰはブルー
パリニー（ｂｌｕｅ ｖａｌｕｅ） 法において、グ０
°Ｃ３θ分間に青色ヨウ緊定色ｌθチ低下せしめたアミ
ロースのミリグラム数である。
〈実施例ｔ〉
水／ｌに、グルコース、２．！ｔｇ、大豆粉、２ｓｙ、
乾燥酵母、？Ｉ −（Ｎ）１４）２ｓＯ４−２１！ 、
ＮａＣ１ｊ ｉ 。
乾燥酵母、？Ｉ −（Ｎ）１４）２ｓＯ４−２１！ 、
ＮａＣ１ｊ ｉ 。
ＫＨ２ＰＯ４θ、／Ｉｌ 、 ＣａＣＯｇＪｇｌ大豆油
２．’１ｍｌを添加温容して作成した培養液／θＯ−を
容積３θθ−の三角フラスコに入れ、この培養液にスト
レプトマイセス グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ
ｇｒｉｓｅｖｓ）を前培養液ｌ−を添加し、さらに三
角フラスコ内に細孔径約θ１ｇｒａｍの約３ｍｎ角の平
均日東電気工業製人工土壌用ウレタンホームθ−！；
９ （３，！ｒ ｐ’ ）を入れた。次に、三角フラス
コ内の培養液の温度を、２＋’ｅに保持して、この三角
フラスコをロータリーシェーカＩ／Ｃより攪拌速度−〇
０ ｒｐｍで撹拌して培養し、これを実施例ｔＡとし
た。この実施例１ＩＡと全く同様にして別の三角フラス
コで培養したものを実施例ダＢとした。
２．’１ｍｌを添加温容して作成した培養液／θＯ−を
容積３θθ−の三角フラスコに入れ、この培養液にスト
レプトマイセス グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ
ｇｒｉｓｅｖｓ）を前培養液ｌ−を添加し、さらに三
角フラスコ内に細孔径約θ１ｇｒａｍの約３ｍｎ角の平
均日東電気工業製人工土壌用ウレタンホームθ−！；
９ （３，！ｒ ｐ’ ）を入れた。次に、三角フラス
コ内の培養液の温度を、２＋’ｅに保持して、この三角
フラスコをロータリーシェーカＩ／Ｃより攪拌速度−〇
０ ｒｐｍで撹拌して培養し、これを実施例ｔＡとし
た。この実施例１ＩＡと全く同様にして別の三角フラス
コで培養したものを実施例ダＢとした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は上配実絢例１Ｉ
ＡおよびｌＩＢと同様にして、２個の異なる三角フラス
コで細胞を培養し、これを比較例＋Ａおよび４１Ｂとし
た。
ＡおよびｌＩＢと同様にして、２個の異なる三角フラス
コで細胞を培養し、これを比較例＋Ａおよび４１Ｂとし
た。
実施例４／Ａおよび＋Ｂ、比較例１ＩＡおよび弘Ｂのい
ずれの場合も、培養液中に細胞が均一に混合するパルビ
ー増殖により細胞が増殖したが、実施例４Ａおよび４Ｂ
における培養後の培養液の粘度は比較例１ＩＡおよびＩ
ＩＢの培養後の培養液の粘度よりも低かった。
ずれの場合も、培養液中に細胞が均一に混合するパルビ
ー増殖により細胞が増殖したが、実施例４Ａおよび４Ｂ
における培養後の培養液の粘度は比較例１ＩＡおよびＩ
ＩＢの培養後の培養液の粘度よりも低かった。
第り図に、実施例りＡおよびりＢと比較例１ＩＡおよび
弘Ｂにおける培養液中のグルコース濃度と生成ストレプ
トマイシンの生産量を示す。
弘Ｂにおける培養液中のグルコース濃度と生成ストレプ
トマイシンの生産量を示す。
第り図に示されるように、本発明の実施例＋Ａおよびｌ
ＩＢにおける生成ストレプトマイシンの生産■は比較例
＋ＡおよびｌＩＢよジも短期間でょシ多く得た。
ＩＢにおける生成ストレプトマイシンの生産■は比較例
＋ＡおよびｌＩＢよジも短期間でょシ多く得た。
〈実施例Ｓ〉
実施例／と全く同様の培養液ｌθＯｍｌを容積３θＯ−
の三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリウム
クリソｒナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｆｕｍｃｈｒｙｓｏｇ
ｅｎｕｒｎ ）の前培養液／ ｍｌ！を添加し、さらに
三角フラスコ内に平均細孔径的０．ｋｔａｎの約、ｆｆ
ｍｍ角の日東電工製人工土壌用ウレタンホームｏ、ｓ
ｙ（、ｔ４ ａｍ、’ ） を入れた。次に実施例／と
同様にして三角フラスコ内の培養液の温度を、１４Ｚ’
ｌＴに保持して、この三角フラスコをロータリーシェー
カを用い撹拌速度、２０ｏｒｐｍで攪拌して培養し、こ
れを実施例３Ａとした。この実施例３Ａと全く同様にし
て別の三角フラスコで培養したものを実施例３Ｂとした
。
の三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリウム
クリソｒナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｆｕｍｃｈｒｙｓｏｇ
ｅｎｕｒｎ ）の前培養液／ ｍｌ！を添加し、さらに
三角フラスコ内に平均細孔径的０．ｋｔａｎの約、ｆｆ
ｍｍ角の日東電工製人工土壌用ウレタンホームｏ、ｓ
ｙ（、ｔ４ ａｍ、’ ） を入れた。次に実施例／と
同様にして三角フラスコ内の培養液の温度を、１４Ｚ’
ｌＴに保持して、この三角フラスコをロータリーシェー
カを用い撹拌速度、２０ｏｒｐｍで攪拌して培養し、こ
れを実施例３Ａとした。この実施例３Ａと全く同様にし
て別の三角フラスコで培養したものを実施例３Ｂとした
。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記実施例＆
Ａおよび３Ｂと同様にして、ツ個の異なる三角フラスコ
で細胞を培養し、これを比較例５ＡおよびＳＢとした。
Ａおよび３Ｂと同様にして、ツ個の異なる三角フラスコ
で細胞を培養し、これを比較例５ＡおよびＳＢとした。
比較例左Ａおよび３Ｂの場合は、培養液中に細胞の固″
！、シを作るベレット増殖により細胞増殖が行なわれた
が、実施例！Ａおよび３Ｂの場＠け増殖細胞が培養液中
に均一に混合したパルビー増殖によシ細胞増殖が行なわ
れた。
！、シを作るベレット増殖により細胞増殖が行なわれた
が、実施例！Ａおよび３Ｂの場＠け増殖細胞が培養液中
に均一に混合したパルビー増殖によシ細胞増殖が行なわ
れた。
第５図に、実権例５Ａおよび５Ｂと比較例左Ａおよび、
ｌｔＨにおける培養液中のラクトース濃度と生成波ニジ
リンの生産量を示す。
ｌｔＨにおける培養液中のラクトース濃度と生成波ニジ
リンの生産量を示す。
第Ｓ図に示されるように、本発明の実拘例ＳＡおよび、
ｔＢにおける生成ペニシリンの生産量は比較例ＳＡおよ
び３Ｂよりも短期間でより多く得られた。また、ラクト
ースの分解も比較例＆ＡおよびＳＢよりも実施例＆Ａお
よび３Ｂの方が早かった。
ｔＢにおける生成ペニシリンの生産量は比較例ＳＡおよ
び３Ｂよりも短期間でより多く得られた。また、ラクト
ースの分解も比較例＆ＡおよびＳＢよりも実施例＆Ａお
よび３Ｂの方が早かった。
次に本発明を利用する工業レベルでの細胞培養方法を説
明する。
明する。
第６図は本発明の方法を利用する細胞培養装置の一実櫂
態様の概略図である。培養槽１内部には上記各実施例に
おいて記載された培養液２が保持されている。培養液２
には複数の発泡担体３が分散混合されており、培養液２
には培養する細胞が混入されている。培養液２は攪拌装
置４によシ攪拌される。また培養液２は温度コントロー
ラによりｔｌは一定に保持される。培養液は上方のドリ
ップ装置５から順次培養槽１内に滴下されており、増殖
細胞への栄養が補給されている。培養槽１には培養液の
状態を測定するｐＨセンサ溶存酸素濃度センサー７、温
度センサー８などのプローブ７が設けられているが、こ
のプローブ６．７．８は培養液２が攪拌されることにと
もなり発泡担体３により常時洗浄されるので培ｇｌ液２
の状態を正確に測定することができる。培養液２をサン
プルするためあるいは代謝産物を集穫するために、培養
液２を取り出す際は培養槽１の下部に設けられた取出口
９から培養液２が取り出されるが、発泡担体３が培養液
２に分散混合されている場合は、細胞の増殖は専ら発泡
担体３の細孔の内部で行なわれるので、培養液２中には
増殖細胞がほとんど存在しない状態となるかあるいはよ
シ減少した状態となり固型物である細胞の分離を全く必
要としないかあるいはこの分離作業が極めて容易になる
。
態様の概略図である。培養槽１内部には上記各実施例に
おいて記載された培養液２が保持されている。培養液２
には複数の発泡担体３が分散混合されており、培養液２
には培養する細胞が混入されている。培養液２は攪拌装
置４によシ攪拌される。また培養液２は温度コントロー
ラによりｔｌは一定に保持される。培養液は上方のドリ
ップ装置５から順次培養槽１内に滴下されており、増殖
細胞への栄養が補給されている。培養槽１には培養液の
状態を測定するｐＨセンサ溶存酸素濃度センサー７、温
度センサー８などのプローブ７が設けられているが、こ
のプローブ６．７．８は培養液２が攪拌されることにと
もなり発泡担体３により常時洗浄されるので培ｇｌ液２
の状態を正確に測定することができる。培養液２をサン
プルするためあるいは代謝産物を集穫するために、培養
液２を取り出す際は培養槽１の下部に設けられた取出口
９から培養液２が取り出されるが、発泡担体３が培養液
２に分散混合されている場合は、細胞の増殖は専ら発泡
担体３の細孔の内部で行なわれるので、培養液２中には
増殖細胞がほとんど存在しない状態となるかあるいはよ
シ減少した状態となり固型物である細胞の分離を全く必
要としないかあるいはこの分離作業が極めて容易になる
。
第１図乃至第Ｓ図はそれぞれ実施例１乃至実施例５の実
験結果を示すグラフ、 第６図は本発明の方法を使用する工壷レベルでの細胞培
養方法を説明する概略図である。 ■・・・・・・・・・培養槽、 ２・・・・・・・・・
培養液、３・・・・・・・・・発泡担体、 ４・・・・
・・・・・搏拌装置、５・・・・・・・・・ ドリップ
装置、６・・・・・・・・・ｐＩＩセンサー、 ７・・
・・・・・・・溶存酸素濃度センサー、７′ ８・・・・・・・・・Ｐｉセンザー、 ９・・・・・・
・・・取出口第５図 培 養 哨 間 （日） 第６図
験結果を示すグラフ、 第６図は本発明の方法を使用する工壷レベルでの細胞培
養方法を説明する概略図である。 ■・・・・・・・・・培養槽、 ２・・・・・・・・・
培養液、３・・・・・・・・・発泡担体、 ４・・・・
・・・・・搏拌装置、５・・・・・・・・・ ドリップ
装置、６・・・・・・・・・ｐＩＩセンサー、 ７・・
・・・・・・・溶存酸素濃度センサー、７′ ８・・・・・・・・・Ｐｉセンザー、 ９・・・・・・
・・・取出口第５図 培 養 哨 間 （日） 第６図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ／）培養液中に分散された複数の発泡担体内で細胞を培
養する細胞培養方法。 コ）前記発泡担体の細孔径が７０μｍ乃至１０ｍである
特許請求の範囲第１項記載の細胞培養方法。 ３）前記発泡担体の大きさが、前記培養液を保持する培
養槽の大きさの／Ａ以下である特許請求の範囲第１項ま
たは第一項記載の細胞培養方法。 ダ）前記発泡担体の最大量体積が前記培養液／θ０−当
り１０Ｏ１００Ｃ以下である特許請求の範囲第１項乃至
第３項いずれか７項の細胞培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7151584A JPS60214878A (ja) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | 好気性糸状菌の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7151584A JPS60214878A (ja) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | 好気性糸状菌の培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60214878A true JPS60214878A (ja) | 1985-10-28 |
| JPH0380467B2 JPH0380467B2 (ja) | 1991-12-25 |
Family
ID=13462923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7151584A Granted JPS60214878A (ja) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | 好気性糸状菌の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60214878A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6374479A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-04 | Nitto Electric Ind Co Ltd | 微生物培養用発泡体 |
| JPS63133978A (ja) * | 1986-11-26 | 1988-06-06 | Rikagaku Kenkyusho | 細胞培養装置 |
| US4921703A (en) * | 1986-09-19 | 1990-05-01 | Nitto Electric Industrial Co., Ltd. | Vermin exterminating element and vermin exterminating method using it |
| US5589390A (en) * | 1989-09-11 | 1996-12-31 | Nitto Denko Corporation | Vermin exterminating element and vermin exterminating method |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54117085A (en) * | 1978-02-08 | 1979-09-11 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Culturing of microorganisms |
| JPS5945891A (ja) * | 1982-09-08 | 1984-03-14 | Mitsubishi Kakoki Kaisha Ltd | アルコ−ル発酵方法 |
-
1984
- 1984-04-10 JP JP7151584A patent/JPS60214878A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54117085A (en) * | 1978-02-08 | 1979-09-11 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Culturing of microorganisms |
| JPS5945891A (ja) * | 1982-09-08 | 1984-03-14 | Mitsubishi Kakoki Kaisha Ltd | アルコ−ル発酵方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6374479A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-04 | Nitto Electric Ind Co Ltd | 微生物培養用発泡体 |
| US4921703A (en) * | 1986-09-19 | 1990-05-01 | Nitto Electric Industrial Co., Ltd. | Vermin exterminating element and vermin exterminating method using it |
| JPH0347835B2 (ja) * | 1986-09-19 | 1991-07-22 | Nitto Denko Corp | |
| JPS63133978A (ja) * | 1986-11-26 | 1988-06-06 | Rikagaku Kenkyusho | 細胞培養装置 |
| US5589390A (en) * | 1989-09-11 | 1996-12-31 | Nitto Denko Corporation | Vermin exterminating element and vermin exterminating method |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0380467B2 (ja) | 1991-12-25 |
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