JPS5998698A - グラム陽性菌と陰性菌の鑑別試薬 - Google Patents
グラム陽性菌と陰性菌の鑑別試薬Info
- Publication number
- JPS5998698A JPS5998698A JP20849382A JP20849382A JPS5998698A JP S5998698 A JPS5998698 A JP S5998698A JP 20849382 A JP20849382 A JP 20849382A JP 20849382 A JP20849382 A JP 20849382A JP S5998698 A JPS5998698 A JP S5998698A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gram
- solution
- bacteria
- positive bacteria
- positive
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- Pending
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は細菌のアミノペプチダーゼ活性を測定すること
により、ダラム陽性菌と陰性菌とを鑑別する試薬に関す
る。詳記すれば節易な操作で、正確かつ迅速に送別する
ことを目的とした試薬に関するものである。
により、ダラム陽性菌と陰性菌とを鑑別する試薬に関す
る。詳記すれば節易な操作で、正確かつ迅速に送別する
ことを目的とした試薬に関するものである。
細菌同定の第一歩となるダラム陽性菌と陰性菌の鑑別に
は染色法が最もよく応用されており、それには普通法お
よびＨｕｃｋｅｒ ヤＫｏｐｅｌｏｆｆ−Ｂｅｅｒｍａ
ｎらの変法など種々の方法があるが、いずれも塗抹標本
の作成、染色および鏡検が必要で、繁雑であり、習熟が
必要である。
は染色法が最もよく応用されており、それには普通法お
よびＨｕｃｋｅｒ ヤＫｏｐｅｌｏｆｆ−Ｂｅｅｒｍａ
ｎらの変法など種々の方法があるが、いずれも塗抹標本
の作成、染色および鏡検が必要で、繁雑であり、習熟が
必要である。
これに対して、劉の工夫したダラム陽性菌と陰性菌の鑑
別法は水酸化カリウム溶液の少量に細菌を懸濁して、そ
の懸濁液の粘稠性の有無を測定する方法であり、手技が
簡単で、鏡検も必要ないが、鑑別に習熟が必要であった
。
別法は水酸化カリウム溶液の少量に細菌を懸濁して、そ
の懸濁液の粘稠性の有無を測定する方法であり、手技が
簡単で、鏡検も必要ないが、鑑別に習熟が必要であった
。
簡単でかつ鏡検を要しない方法として、細菌のアラニン
アミノペプチダーゼ活性を測定することによってダラム
陰性菌と陰性菌とを区別する乙とができる。すなわち、
ダラム陰性菌はすべてアラニンアミノペプチダーゼ活性
が特異的に高く、ダラム陽性菌てはその活性がほとんど
ないので、その活性を測定することにより、ダラム陽性
菌と陰性菌とを区別することができろ。
アミノペプチダーゼ活性を測定することによってダラム
陰性菌と陰性菌とを区別する乙とができる。すなわち、
ダラム陰性菌はすべてアラニンアミノペプチダーゼ活性
が特異的に高く、ダラム陽性菌てはその活性がほとんど
ないので、その活性を測定することにより、ダラム陽性
菌と陰性菌とを区別することができろ。
従来、細菌のアミノペプチダーゼ活性の測定には、アミ
ノ酸−β−ナフチルアミドおよびファーストガーネット
ＧＢＣが用いられていたが、これらの試薬は発ガン性が
ある上、安定性を犬いていた。また、アミノ酩−ｐ−ニ
トロアニリドを用いて測定する方法もあるが、この反応
の呈色は黄色を示すため、菌体の色調が影響して、陽性
と陰性の鑑別が肉眼的に困難なことがある。
ノ酸−β−ナフチルアミドおよびファーストガーネット
ＧＢＣが用いられていたが、これらの試薬は発ガン性が
ある上、安定性を犬いていた。また、アミノ酩−ｐ−ニ
トロアニリドを用いて測定する方法もあるが、この反応
の呈色は黄色を示すため、菌体の色調が影響して、陽性
と陰性の鑑別が肉眼的に困難なことがある。
本発明は上述の欠点をとりのぞき、簡単な操作で、迅速
かつ正確にグラム陽性菌と陰性菌とを鑑別する試薬で、
その基質として、Ｌ−アラニン−ｐ−ニトロアニリド溶
液、緩衝液として、トリスアミノメタン溶液および呈色
液として、ｍ−トリルジェタノールアミン溶液から成る
。
かつ正確にグラム陽性菌と陰性菌とを鑑別する試薬で、
その基質として、Ｌ−アラニン−ｐ−ニトロアニリド溶
液、緩衝液として、トリスアミノメタン溶液および呈色
液として、ｍ−トリルジェタノールアミン溶液から成る
。
反応用容器としてはガラスやプラスチング等のスライド
、試験管およびマイクロクイタートレイなどが使用でき
る。
、試験管およびマイクロクイタートレイなどが使用でき
る。
本発明による試薬を用いての、細菌のグラム陽性菌と陰
性菌の鑑別は以下の様にして行なう。
性菌の鑑別は以下の様にして行なう。
寒天培地上に純粋培養した菌体の１白金耳量を採取し、
反応容器に分注した緩衝液０．０５ｍ１中に懸濁し、さ
らに基質液０．０５ｍ１および呈色液０．０５ ｍｌを
加えて、混合する。混和後、１分間室温で静置した後、
赤色を呈するものをアミノペプチダーゼ反応で、これを
グラム陽性菌と判定する。グラム陽性菌は無色または黄
色を示す。
反応容器に分注した緩衝液０．０５ｍ１中に懸濁し、さ
らに基質液０．０５ｍ１および呈色液０．０５ ｍｌを
加えて、混合する。混和後、１分間室温で静置した後、
赤色を呈するものをアミノペプチダーゼ反応で、これを
グラム陽性菌と判定する。グラム陽性菌は無色または黄
色を示す。
上記のように、グラム陽性菌はグラム陽性菌に比較して
、アラニンアミノペプチダーセ活性が特異的に高い。す
なわち、グラム陽性菌（よ菌体中のアラニンアミノペプ
チダーゼによって、基質であるＬ−アラエソ−ｐ−ニト
ロアニリドを分解シ、Ｌ−アラニンとｐ−ニトロアニリ
ンを遊離させる。
、アラニンアミノペプチダーセ活性が特異的に高い。す
なわち、グラム陽性菌（よ菌体中のアラニンアミノペプ
チダーゼによって、基質であるＬ−アラエソ−ｐ−ニト
ロアニリドを分解シ、Ｌ−アラニンとｐ−ニトロアニリ
ンを遊離させる。
乙のｐ−ニトロアニリンはｍ−トリル−ジェタノールア
ミンと反応し、ジアゾ色素（赤色）を生ずる。これに対
して、グラム陽性菌は酵素活性がないか、または非常に
低いので上述の反応が生しないために、無色または黄色
を示す。
ミンと反応し、ジアゾ色素（赤色）を生ずる。これに対
して、グラム陽性菌は酵素活性がないか、または非常に
低いので上述の反応が生しないために、無色または黄色
を示す。
以下、実施例を示し本発明を説明する。
実施例
基質液ばＬ−アラニン−ｐ−ニトロアニリド］Ｏｇを蒸
留水１００ 圧１に溶解したもの、緩衝液はトリスアミ
ノメタン２．４３ｇを蒸留水１００ｍ１に溶解したもの
、さらに呈色液は田−トリル−ジェタノールアミン５ｇ
を蒸留水１００ｍ１に溶解したもののそれぞれを濾過滅
菌して、滅菌容器に分注し冷所に保存したものを使用し
た。
留水１００ 圧１に溶解したもの、緩衝液はトリスアミ
ノメタン２．４３ｇを蒸留水１００ｍ１に溶解したもの
、さらに呈色液は田−トリル−ジェタノールアミン５ｇ
を蒸留水１００ｍ１に溶解したもののそれぞれを濾過滅
菌して、滅菌容器に分注し冷所に保存したものを使用し
た。
被検菌１０株は寒天培地またはチョコレート寒天培地上
で純粋培養し、それぞれの１白金耳量を採取して、緩衝
液０．０５ｍ１に懸濁し、さらに基質液０．０５ｍ１を
加え、混合後、呈色ｆ（ｌ Ｏｏｏ ５ ｍｌを添加し
た。再び添加して、１分間静置した後、判定した。なお
、被検菌については同時にＩ（ｕｃｋｅｒの変法による
ダラム染色および劉の方法を実施し、グラム陽性菌と陰
性菌の鑑別を行なった。その結果を第１表に示す。
で純粋培養し、それぞれの１白金耳量を採取して、緩衝
液０．０５ｍ１に懸濁し、さらに基質液０．０５ｍ１を
加え、混合後、呈色ｆ（ｌ Ｏｏｏ ５ ｍｌを添加し
た。再び添加して、１分間静置した後、判定した。なお
、被検菌については同時にＩ（ｕｃｋｅｒの変法による
ダラム染色および劉の方法を実施し、グラム陽性菌と陰
性菌の鑑別を行なった。その結果を第１表に示す。
本状によるグラム陽性菌１０株は明瞭な赤色を示し、グ
ラム陽性菌との鑑別は、他の２法に比べ容易であった。
ラム陽性菌との鑑別は、他の２法に比べ容易であった。
本発明のアミノペプチダーゼ反応によるグラム陽性菌と
グラム陽性菌の鑑別試薬（よ上述の如き、細菌を染色お
よび顕微鏡検査することなく簡単に、かつ迅速にグラム
陽性菌と陰性菌とを区別することができる。
グラム陽性菌の鑑別試薬（よ上述の如き、細菌を染色お
よび顕微鏡検査することなく簡単に、かつ迅速にグラム
陽性菌と陰性菌とを区別することができる。
第１表二本法および他の方法によるグラム陽性菌とグラ
ム陽性菌の鑑別結果 （＋）ニゲラム陽性菌 （−）ニゲラム陰性菌手続
補正書（自発） 昭和５８年２月１日 特許庁長官 若杉 和犬 殿 １、事件の表示 昭和５７年特許願第２０８４９３ 号 ２、発明の名称 ダラム陽性菌とダラム陰性閃の江別試薬３、補正をずろ
者 事件との関係 特許出願人 明細書全文 ６、補正の内容 別紙の通り黒色により鮮明に記載した明細書全文（内容
１ζ変更なし）に補正する。
ム陽性菌の鑑別結果 （＋）ニゲラム陽性菌 （−）ニゲラム陰性菌手続
補正書（自発） 昭和５８年２月１日 特許庁長官 若杉 和犬 殿 １、事件の表示 昭和５７年特許願第２０８４９３ 号 ２、発明の名称 ダラム陽性菌とダラム陰性閃の江別試薬３、補正をずろ
者 事件との関係 特許出願人 明細書全文 ６、補正の内容 別紙の通り黒色により鮮明に記載した明細書全文（内容
１ζ変更なし）に補正する。
Claims (1)
- 細菌のアラニンアミノペプチダーゼ活性を測定すること
によるダラム陽性菌と陰性菌の江別試薬において、基質
としてＬ−アラニン−ｐ−ニトロアニリド溶液、緩衝液
としてトリスアミノメタン溶液および呈色液としてｍ−
トリル−ジェタノールアミン溶液から成ることを特徴と
するダラム陽性菌と陰性菌の性別試薬
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20849382A JPS5998698A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | グラム陽性菌と陰性菌の鑑別試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20849382A JPS5998698A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | グラム陽性菌と陰性菌の鑑別試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5998698A true JPS5998698A (ja) | 1984-06-07 |
Family
ID=16557065
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20849382A Pending JPS5998698A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | グラム陽性菌と陰性菌の鑑別試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5998698A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002501756A (ja) * | 1998-01-28 | 2002-01-22 | ビヨ・メリウー | 微生物のペプチダーゼを検出するインドールアミン誘導体 |
-
1982
- 1982-11-30 JP JP20849382A patent/JPS5998698A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002501756A (ja) * | 1998-01-28 | 2002-01-22 | ビヨ・メリウー | 微生物のペプチダーゼを検出するインドールアミン誘導体 |
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