JPS5955198A - 赤外吸収分析を用いる生物活性の存在の検出 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 １、発明の分野 本発明は一般的には生物活性の検出法に関するものであ
る。特記すれば、本発明は代謝によりガス状生成物を生
成する培養培地を含む容器の上部空間を赤外分析するこ
とにより微生物等の存在を調べろ試料物質の迅速な分析
法に関するものである。

例え、ば、バクテリアをグルコースのような炭素源を含
む適当な培地で培養すると、この炭素源は：バグ、す□
リアの生育および代謝時に分解され二酸化株酸を生成す
る。生物活性の有無を決定するため′：に培養培地の上
部空間に生成するガス層の分析用の直接的かつ非破壊的
な方法を提供することが望まれている。

２、旧来法の説明 テストする試料物質を密閉した容器内で放射性同位体で
標識した培地と培養し、放射性ガスの産生の有無を測定
することからなるバクテリアの検出法は開発されている
。この型のシステムは米国特許第３，６７６，６７９号
および第６．９３５．Ｏ’７３号に開示されている。こ
のようなシステム−敏速かつ信頼のおけるものであるが
、しかし多くの不便な点がある。放射性標識化合物は高
価であり、保存、使用および廃棄に特別な取り扱いが必
要である。更に、このようなシステムは一般に、微生物
により生成されたガスの試料を別の試料管および検出容
器に取り出すために培養培地の」二部空間に侵入するこ
とを必要とする。しかしながら、一般に放射性同位体お
よび測定機器システムは、生物活性な微生物種の存在を
検知する場合のような比較的細時間に生成する代謝生成
物ガスの微量を検知ために必要なものとされてい。

る。

米国特許第４，１８２．６５＜Ｓ号には更に次の方法の
記載がある。即ち、バクテリアのような生物活性な種の
存在を培養培地および生物活性な種を含む容器の」二部
空間の生物活性な種による代謝生成物をモニターするこ
とにより検知する。この方法では生物活性な種により代
謝される　Ｃ標識基質を含む培地で部分的に満たされた
シールできる容器に、生物活性な種の存在についてテス
トする試料物質を注入する。容器の残りの部分は培養ガ
スで満たされている。この容器およびその内容物はあら
かじめ定められた培地が代謝され二酸化炭素を生成する
のに十分な期間、生物活性を発揮できる状態にする。次
いで、容器内の培養ガス中の　ＣＯ２に対すを１３ＣＯ
□の比を測定し培養ガス中の１２ＣＯ２に対する１３Ｃ
Ｏ２の初期の比と比較し、試料中の生理活性ａｇｅｎｔ
の存在を示唆する相違を検知する。この方法もまた同様
に、比較のための試料を採取するために容器の上部空間
に侵入する必要がある。

バクテリア等を検出するために」二部空間ガスの試料を
取り出すために侵入することなく、代謝により生成した
ガスを測定するための実用的かつ非放射性のシステムが
必要とされている。

故って、本発明の第一の目的は生物活性な種の混ざった
物質中の生物活性な種の有無を検知できる迅速な方法を
提供することである。

比較的低廉な器具および材料を用いる生物活性な種の存
在の有無を検知するための方法を提供することも本発明
の目的である。

更に培養した試料および培養培地を含む容器から上部空
間の試料を取り出すことなく生物活性ブよ種の有無を検
知する機器分析法を提供することも本発明の目的である
。

放射性物質を使用することなく生物活性な種の有無を検
知する機器分析法を提供することも本発１明の目的であ
る。

上記以外の本発明の目的は下記の説明および添付の！特
許請求の範囲を考慮すれば明らかとなろう。

本発明の要旨　　　　　　・ 本発明の目的とするところは滅菌した培養培地で部分的
に満たされた、滅菌した密閉容器を供する段階からなる
生物活性な種の存在を検知する方法を提供することによ
り達成される。この容器は更に生物活性をテストする試
料物質を含む。容器の残りの部分はテストする生物活性
な物質に対して適したガス上部空間が備っている。・こ
の密閉した容器およびその内容物は、次いで、培養培地
の代謝により赤外吸収スベク十ルにより検知できる・ガ
ス状生成物を生ずるのに十分なあらかじめ定めた期間、
生物活性を発揮できる状態に置く。多くの場合はガス状
生成物は二酸化炭素である。その後、赤外スペクトル装
置で容器の側壁を通して上部空間を走査し、この分析結
果を、通常の空気からなる−１部空間を走査することに
より得られる基準の透過度と比較することにより二酸化
炭素を検知する。　　　　。

最も好ましい実施例においては、本発明は代謝により二
酸化炭素を生成する基質を含む滅菌した培地で一部が満
だ、された滅菌した密閉できる容器（この容器の残りの
部分は適当な上部空間ガスで満だ、されている）を設備
することを含む。生物活性のテストをする試料物質を容
器に入れ、この容器を密閉する。この密閉した容器およ
びその内容物は、次いで、もし生物活性な種が存在する
ならば、あらかじめ定めた培地が代謝され、二酸化炭素
を生成するのに十分な期間、生理活性を発揮できる状態
にする。赤外線ビームが培養培地の上部空間ガスを通過
するように培養培地の無いレベルに赤外線ビームを容器
を通して通過させる。

図１は本発明に有効な装置の概略図である。

図２〜４に種々のプラスチックやガラス材料で作られた
瓶やバイアルの赤外吸収スペクトルを示しである。

図５および６は種々の濃度の二酸化炭素を含む容器の上
部空間の赤外吸収スペクトルを示す。

図７および８は赤外分析により検出・される微生物代謝
による二酸化炭素の生成を示す。

ここに掲げる実施−＼の詳細な説明　　。

本発明の原理および概念を実施する検出器は図１におい
て数字１１に示されている。検出器１１は血液、尿、を
髄液および水試料等力ような物質中における医学的に最
も・重要なバクテ□リアの一般的な存在を容易に検知す
るのに特に有用である。

バクテリアによる代謝、発酵により二酸化炭素を生ずる
グルコースのような炭□素源を含む培養培地に分析した
い物質を加えたときに生成する二酸化炭素の量を測定す
ることにより、このようなバクテリアの存在が検出され
る。・培養培地上の空間内の二酸化炭素の存在は最初の
試料物質中に微生物が存在していることを示すものであ
る６本発明の装置において培養培地上の上部空間におけ
る二酸化炭素の存在は赤外線ビームを容器の側壁を通し
て通過させ、容器内の上・部空間ガスの赤外吸収を測定
することにより、検出され・る。

血液、尿等のような分析したい試料は生物代謝による二
酸化炭素生成に適した培養培地と共に滅菌した培養容器
１６に入れる。次いで、試料を培養バイアル内で培養す
る。適当な期間毎に、培養バイアルは赤外線源１５およ
び赤外線検知器１７を含む赤外線測定装置に移される。

培養バイアルの上部空間内の赤外線吸収を検知し、ライ
トシグナル２１およびコンピュータープリントアウト２
６の同時ディスプレイ付属のメーター１９に表示される
。

培養バイアル１６は、培養バイアル１ろを赤外線源と赤
外検出器との間に容易に位置できるように軌道２５（こ
の形状は直線形、円周形あるいはらせん形であろう）上
に置かれる。次の培養バイアル１６Ａは赤外線源１５と
赤外検出器１７によりテストされるのを侍つ位置に見か
けの図として描いである。モータ２７は軌道２５を作動
させるために働（。シーフェンスコントローラー２９は
モーター２７、赤外線源１５およびメーターディスプレ
イ１９を順序よく作動させるのに使用する。

時には、不均一な側壁の厚さを補正するために赤外線源
が作動し７ている間に培養バイアルを回転ずイ）装置を
用意することが望キしい。

本発明は非破壊的な方法であり、赤外線ビームを液体培
養培地中のテスト物質のための容器を通（７て完全に）
１１過さぜることにより、代謝により生じたｍ−酸化炭
素のような’ｔｊメ類の上部空間ガス濃度の変化を検知
１７、定量するものであり生物活性特にバクテリアの成
長に関連したようなもの、に対する自動化システムの１
犯発への重装な応用範囲を有する。赤外線ビームが液体
培養培地の表面よりにの」二部空間ガスを通過するよう
に培地の無いレベルにてバイアルを通して赤外線ビーム
を通過させろ。この非破壊的な方法は代謝により生じた
ガスの検出に対して放射性Ｃの検出のような、４ 旧来の方法とは実質的に異なるものである。ガスはバイ
アルの外にも、内にも移すことは全くなく、培養ガスの
いかなる変化を測定するために容器に侵入すイ）ことは
全くない。バイアルセプタムを通してＸ！−１人する必
要も全くない。このような非破壊的手法は旧来の方法と
比べて下記のいくつかの利点がある。即ち、バイアルセ
プタムの釦や探り釦による貫通によって起こる汚染の可
能性がな（・０自動化装置のデザインは簡素化されてお
り、針を通ずための上部部品あるいはその他の試料を採
るための侵入用の装置を設置する必要がない。フラッシ
ュした上部空間ガスを滅菌した培養ガスで置換する必要
性が除かれる。特別な培養ガスの使用を必要としない。

単に）くイアルを所定の位置につけるだけでよく、」二
部の動きは必要ないのでノクイアルをより速くサンプル
化することが可能である。

培養培地材料の価格は、いかなる放射性標識した基質を
も使用しないので低価にずろことができろ。

また、いかなる放射性同位体も使用しないので低レベル
の放射性同位体の輸送、敗り扱いおよび貯蔵の問題もな
い。

培養容器は代謝されたガス生成物を検知するのに適した
波数幅の赤外線透過のための窓を有していなければなら
ない。二酸化炭素の場合に必要な波数幅は約２４００ｃ
ｍ　　な（・し２５００ｍπ　の波数である。ガス生成
物の吸収波数幅内での容器の赤外透過度は赤外分析によ
りガス状生成物を検知づるのに有効であるためには少な
くとも約１％でなければならない。　　　　・ 本発見の実施において有用１（種々のタイプのガラスバ
イアルおよび特別なタイプのプラスチックバイアルが発
見されている。特にプロシケートガラスバイアルおよび
ノーダライムガラスノ（イアルが有用であイ）ことが示
された。又、ポリメチルペンテンプラスチックが二酸化
炭素の分析波数で透明な窓を而して℃・ることもわかっ
た。

赤外スペクトルの当業者はガラスあるいはプラスチック
が赤外分析用の試料セルとして有用であるとば渚えない
ことは埋角Ｉ（されるべきである。ガラスは可視光線は
透過するけれども、二酸化炭素分析に適し７た波長より
わずかに長い赤外波長は不透過である。二酸化炭素は２
ろ４９ｃｎＬ　に強い赤外吸収を有しており、これは水
蒸気による妨害をうづ゛ない。

ガラスは赤外スペクトルの分野では多くの有機化合物の
赤外分析に適さないものとされてきた。

有機化合物であるプラスチックは通常の赤外の波数領域
、４００ｃｒｒＬ　から４０００Ｃｉ、にわたって赤外
吸収帯を有している。驚くことに、ポリメチルペンテン
は二酸化炭素の分析に十分な透過度の若干透過する窓を
２３４９ｃｍ　　に示す。何らかの理論に固執するつも
りはないけれども、二酸化炭素は有機分子の共有三重結
合に対応する波数領域に赤外エネルギーを吸収する。培
養）くイアルとしての使用には、このポリマー物質は滅
菌されなければならない。通常のオートクレーブあるい
はガスあるいはラジエーション滅菌法にかかわらず、ポ
リメチルペンテンは滅菌性を得るに適した温度に耐える
という点に関しても適当である。

典型的な培養培地は一般に水、炭素源および窒素源を含
有している。この炭素源は炭水化物、アミノ酸、モノあ
るいはジカルボン酸あるいはそれらの塩、ポリヒドロキ
ノアルコール、ヒドロキノ酸あるいはその他の代謝可能
１よ炭素化合物であろう。通常、炭素源はグルコース、
サッカロース。

ンルクＩ・−ス、キノロース、マルトース、ラクトース
等のような少なくともひとつの糖を含むであろう。リジ
ン、グ１ノンン、′アジニン、チロシン。

スレオニン、ヒ妄チジン、ロイシン等めようなアｌノ酸
も又［７ばＩ２ば培養培□地の炭素源の一部となイ）、
。

窒素源は硝酸塩、　１−１１ｉ硝酸塩、アンモニア、尿
素あるいはその他の消化吸収□できる有機あるいは無機
の窒素源で七ノろう。アミ）酸は炭ｈｊｊ耘よび窒素源
と（７て共用される３、細胞のＭ’ｌ’Ｍを促ｊｉＧす
るためにば１”・芥な窒素源がり、釧も才店なければな
らない。

□イＩＥ々のカルシウム、））す・ン入およびマダネシ
ウノ、塩類が塩酸Ｊ′ＩｒＡ　、（ｌＩｆｃ酸塩、リン
酸塩等として培養培地に使用されよう。同様にリン酸お
よび硫酸イオン（Ｊ斗）ｊ々の塩と１．て供給するｇと
ができる。このような物質類は発酵培地にお（゛・ては
通例とされているので、各々の物質の割合忌よび選択＋
−ｉ肖業者の判断にゆノシねられるものとＩｌ、１．ｊ
　１ＩＩＩ（される。

微１１１．に存在する、いわゆる二次的な元素類はマン
ガン、鉄、　１ｆ＋ｉ鉛、コバルトおよびその他の可能
なものど１般的に理解される。

多くの生物活性〕上′微生物の種は強酸性あるいは強ア
ルカリ性培地では成長できないので、培養培地のｐｉｌ
を中性刊近に維持するために、もし必要ｌｉらばリン酸
カリウムあるいはアンモニウムのよつな適当な緩衝液が
使用されよう。

本発明において使用されるよく知られた培養培地の例と
しては、ペプトンブロス、１−リグティソクンイプロス
、ニュートリアントブロス、チオグリコレートプロスあ
る（・はプレイ／バー１−　イア　７ユージヨンプロス
カアル。

本操作の最初にｐｌｌを約６１０ない（〜約８．０に、
好ましくは約７２に維持して、テストする試料物質を植
えつしする。使用する試料の鼠は広い範囲にわたるであ
ろうが、好ましくは培養培地の体積の約１０ないし約２
０％がよい。少し遅れてから、存在してＣ・た微生物は
急速に増殖を始め、やがてその度合いが減少する。加え
て、代謝速度、従って二酸化炭素の発生の速度は栄養分
の組成、Ｉ）Ｉｌ、温度、接種の割合およ□び存在する
微生物のクイズに依って異なるであろう。　　　。

多くのバクテリアの効果的なｉ曳謝にとって、試料を含
む培地の温度は好ましくは約６５°Ｃないし約６７℃に
保つのがよソ。あ、る種の、微生物は２０゛Ｃの温度で
最大の増殖速、度に達、ｊるであろうが、別の微生物は
４５℃あるいはそ、れ以上？温度で最大増殖速度を示す
であろ、う。、本、見間では状況に応じて最も適した温
度を用いるの、がよい。攪拌なしで満、足できる増殖を
得、る１こと欠チきるけれども、ニー化炭素が培地から
、適、度に挾出されるのを効果的に行なうために、代興
ユ好まし、く、は竺しい振動攪拌、下に行なわれる。好
ま、しい実、施の一例では、液体培地中に攪拌により、
うす巻き１ヶ発生させるように設定さ、れてい、る。時
には、外部の振揺器によりうず巻きを生じさせるのも望
ましい。

極くルばしば、上記、の試料が好気性ノ、＜クチリア全
含むか否か今決定ずやことに興味が持たれるで、あろう
から、一般には齋輝内、の気体は酸素を含むであろう。

しかしながら、±些囮は上、秤’Ｅ、間ガス中の＃素の
量を最少限顛抑えろ、ことにより、嫌気性バクテリアを
検知するのに使用することもできる。もし光レスポンシ
ブあるいは光トキシックな微生物を調べたい時は、それ
に応じて光を与えたり、又は遮断したりしなければなら
ない。

図１に示されている機械装置についてもつと詳しく述で
、れば、培養容器１ろおよび１３Ａは６０ｍ１ｌないし
１５０．ｍｌの全容量で、そのうちの２−１０９　ｍｌ
が培養培地およびテスト試料で占められるものがよい。

例えば、血液、尿あるいはその他の試料の量は０．１７
．、．１０　ｍ／！である。微生物の検知および予備テ
ストのような、二酸化炭素の赤外吸収による特出が有効
である特殊な応用にはより小さい培養容器がしばしば有
効である。

以下の実施例竺本発明の種々の特色を述べるが添付の特
許請求の範囲で定義した本発明の適応範囲を制限するも
のではない。特に、下記の実施例では、問題とする代謝
生成物は二酸化炭素であるが、代謝によつ、て生成する
他の気体も以下の場合し主検出できや。即ち、その気体
が赤外吸収帯を有し、かつ容器材料が問題となる波長領
域で最低１％の透過度でその気体状生、成物の吸収波長
の、少なくとも士／＝１０ｃ１ｒｌ　　の赤外透過領域
を有する場合である。

実施例１ ６種の異なるＡＡ料動物質通しての赤外透過度の相対量
が図２から５にテし、である、。図２においては側壁の
厚さ約０．０６インチおよび外径１．８８インチの１２
５ｍ１のポリメチルペンテＸ瓶を装置の中に入れ、赤外
走査を行った。ＣＯ□吸収の範囲を図２中に略記しであ
る。示、されるように、Ｃ０２吸収の範囲は透過度にし
て約２％から約７％まで変化する。これはＣＯ２の走査
、を行なうに際して十分許容できる範囲である。、図６
においては、側壁の厚さ０．［］５５３インチ外径１．
６６インチのギロシリケートガラスの試験管バイアルを
注目している波数において走査した。示、されるように
ＣＯ２の吸収の範囲よりわずかに低波数側の赤外領域の
ボロシリケートガラスの透過度はＤである。ＣＯ２吸収
の範囲でのパーセント透過度は約７％から約１４％にわ
たる。図４では外径約１．フインチのソーダライムガラ
ス製の５ＣＪｍ、ｌｌ瓶を赤外走査した。Ｃ０２吸収の
波継よりわずかに小さい赤外波数におけるパーセント透
過度はやはり０である。Ｃ０２吸収の範、囲においてパ
ーセント透過度は約６から約９である。こ？サンプルあ
るいは他のサンプルの赤外走査はいずれも、Ｎ１ｃｏｌ
ｅｔ　５−ＭＸ、　ＦＴ−ＩＲスペク、トロフォトメー
ターで行なった。、図２から５の走査はすべて口を開け
たバイアルで行ない、６０回の走査を加え工尤均化した
結果である。室内空気についてろｃ！回行なった走査を
参照として差し引いである。どちらの場合も壬酸化炭素
の吸収について注目すべき範囲は約２４００から２６０
０ｃｎＬの領域であ乞 実施例２゜ 図５および乙においては種々の濃度の二酸化炭素ガスが
ポリメチルペンテン瓶およびポロシリケートガ、ラス試
験管バイアルの上部空間に入れである。それぞれの容器
の参照の走査は初めに容器を開放系にしてＮ１ｃｏｌｅ
ｔスペクトロメーターで６０回測定した。次いでバイア
ルに約２．５％、５．０％および１００係の二酸化炭素
を含むガスを吹き込みすばやくシールする。各濃度のガ
スを吹き込んだ後に瓶あるいはバイアルをＮ１ｃｏｌｅ
ｔ、　Ａペタトロフォトメーターで６０回走査する。こ
の結果が図５および６に縦軸を赤外□吸光度のｏ、　ｏ
　１感として示してあ□る。２４００ｃＴＬ　から２３
００ＣｒｒＬ　の範囲の赤外吸収の増加とバイアル中の
二酸イし炭□素濃度の増加との間に明らかな相関関係が
見られる。

微生物の成長に伴う赤外吸収の増加が□図７に示しであ
る。

２つのポリメチルペンテン瓶に入れた’、５Ｑ’ｒｎｌ
のトリブチイックソイプロス（ＴＳＢ）はオートクレー
ブにより滅菌した。１つの瓶は一晩培養した大腸菌（Ｅ
、　ｃｏ’＋　”）　の培養成約１．５　ｍｌを植えつ
げた（この時点を０時とする）。もう１′つめ瓶は接種
せずに参照として使用したにれらお瓶はそれぞれ図７に
示した時間に′６０回走査した。図７に示した結果は接
種した瓶から接種してな℃；瓶の走査を引いたものを表
わ毛である。瓶は測定の間は６７°Ｃで培養した。明ら
かな相関関係が微生物の成長と二酸化炭素の吸収領域で
の赤外吸収の間に見られる。

図８は滅菌した培地を含むソーグーライムガラスバイア
ルの走査および滅菌した培地と長期間の培養で定状状態
に達したクロストリジウム・ペルフ９’７デ７２　（’
Ｃ１ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　Ｐｅｒｆｒｉｎｇｅ＋、８
）を含むソーダライムガラスバイアルの走査を示しであ
る。両者の赤外走査は開放したソーグーライムガラスバ
イアルの走査を参照として差し引いである。

すべての走査はＮ１ｃｏｌｅｔスペクトロフ第１・メー
ターにて６０回行なった。クロストリジウム・ベルフリ
ンゲンスを含むバイアルは培養培地のみを含むバイアル
よりはるかに大きな二酸化炭素のシグナルを示す。

本発明の方法と装置は微□生物の検出に関して記述しで
あるが、この方法と装置は生物細胞、組織培養細胞、酵
母、酵素反応等格含めて広く生物活性の検出に利用でき
るであろう。ここに述べた発明の種々の応用は当業者に
とっては明白であろう。

従って、本発明は添付の特許請求の範囲においてのみ制
限されうるものである。

【図面の簡単な説明】

図１は本発明に有効な装置の概略図である。 図２〜４に種々のプラスチックやガラス材料で作られた
瓶やバイアルの赤外吸収スペクトルを示しである。 図５および６は種々の濃度の二酸イ、ヒ、炭素を含む容
器の上部空間の赤外吸収スペクトルを示す。 図７および８は赤外分析によ、り検出される微生物代謝
による二酸化炭素の生成を示す。 １１：検出器　　　１３：培養バイアル１５：赤外線源
　　　１７：赤外線検知器２１ニライトシグナル ２３：コンピュータープリントアウト （外４名） ＦＩＧ、１ ＦＩＧ、２ ５反　覆り　（Ｃｍ−Ｊ） 〕ｋ　敢　＋ｃｍ−１） ＦＩＧ、７ 浪　牧（Ｃｍ”す ＦＩＧ、８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　二酸化炭素を代謝により生成する炭素源を含
   む培養培地および生物活性物質試料を入れるための容器
   、この容器、すなわち培地および試料を通常の代謝過程
   の進行を促がす状態にずろ装置。 」二記容器および培養培地のレベルより上の上部空間ガ
   スを通過する赤外線ビームを発生する装置および上記容
   器の上記上部空間ガスの赤外線吸収を検知するための赤
   外検出装置からなる試別物質中の生物活性の存在を検出
   する装置。 （２）上記容器が約２６００ＣｆＩＬ−１ないし約２４
   ００園　の波数領域で少なくとも約・１％の赤外透過度
   を有する特許請求の範囲第（１）項に記載の装置。 （３）上記容器材料がボロシリケートガラス、ソーダラ
   イムガラスおよびポリメチルペンテンからなる群より選
   択される特許請求の範囲第（１）項に記載の装置。　　
   　　　　　　　　　′　　　：・・（４）上記容器がボ
   ロシリケートガラスである特許請求の範囲第（３）項に
   記載の装置。 （５）上記容器がソーダライムガラスである特許請求の
   範囲第（３）項に記載の装置。 （６）上記容器がポリメチルペンテンである特許請求の
   範囲第（３）項に記載の装置。 （７）二酸化炭素を代謝により生成する炭素源を含む培
   養培地と共に、試料物質を密閉した容器に入れ、上記密
   閉容器中の試料を含む培地を上記炭素源の代謝により二
   酸化炭素が生成するのに十分な期間５通常の代謝過程の
   進行を促がず状態にして、しかる後に上記容器および」
   二記ガス層を通して赤外線ビームを通過させ、上記ガス
   層の赤外吸収を検出することにより上記容器内のガス層
   の赤外吸収を測定し、上記培地から上のガス層中の二酸
   化炭素の存在を決定することからなる試別物質中の生物
   活性の存在を検出する方法。 （８）上記容器が約２３００鋼　ないし約２４００備　
   の波数領域で少なくとも約１％の赤外透過度を有する特
   許請求の範囲第（力項に記載の方法。 （９）」二記容器材料がポロシリ埃−トガラス、ソーダ
   ーライムガラスおよびポリメチルベンテン力、−１らな
   る群から選択される特許請求の範囲第（７）項に記載の
   方法。　　　　　　　　　　　　　□　　　−（１０）
   上記容器がボヮくリフ−トガラスである特許請求の範囲
   第（９）項に記載の方法。 （月）上記容器がソーダライムガラスである特許請求の
   範囲第（９）項に記載の方、法。　　　　　　　　。 （１２）上記容器がポリメチルペンテンである特許請求
   の範囲第（９）項に記載の方法。 ０３）上記容器が赤外吸収測定時に回転する特許請求の
   範囲第（７）項に記載の方法。