JPS59502118A - 内分泌活性細胞に由来する顆粒区分に対する抗血清の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 内分泌活性細胞に由来する顆粒 区分に対する抗血清の製造方法 この発明は、所定の内分泌活性細胞を同定するための物質の製造方法に関する。

ペプチドホルモン産生細胞は、種々のタイプの生物学的に活性なポリペプチド、 すなわちホルモンを合成し、そして分泌する該細胞の能力により特徴付けられる 。ホルモンはしばしば細胞の特定の部位、いわゆるリボゾームにおいて、プロホ ルモント称スる大型の前駆体分子の形で産生され、このプロホルモンは細胞の他 の部分、通常、隔膜によって周囲の細胞質から隔離されている特定の空洞又は小 胞に貯蔵され、そしてホルモンの最終的な形に変換される。

これらの空洞又は小胞は、顕微鏡的に試験する場合、その形状の故にしばしば顆 粒と称される。前４駆体分子−ｉなわちプロホルモンの最終ホルモンへの変換の ために多くの切断生成物が生ずる。細胞顆粒中に貯蔵されそしてそこで変換され る公知のプロホルモンにはプロインシーリン、ＡＣＴＨ親脂性′前駆体、及びい わゆるビッグガストリン（ｂｉｇ　ｇａｓｔｒｉｎ）が含まれる。

細胞顆粒には、構成蛋白質のほかに他の活性蛋白質、例エバプロホルモンをホル モンに変換するのに関与する酵素も存在する。

２ 組織学的切片において内分泌活性細胞を同定するために、長期間にわたって確立 された技法が存在し、この技法においてはホルモンに対する抗体（免疫グロブリ ン）がこれらの細胞に結合するという事実が用いられる。次に、この抗体を螢光 物質、例えばフルオレツセインーイソチオシアネート、又は適当な物質によって 可視化される酵素と結合せしめることによシ該抗体が確認される。

しかしながら、幾つかの内分泌活性細胞については適当な同定手段が存在しない 。なぜなら、関連細胞中に貯蔵されるホルモンに対する抗体を調製することが今 まで不可能であったために上記の方法を適用することができなかったからである 。

この発明は、前記した後者のタイプの内分泌活性細胞を同定するための物質、及 びその製造方法を提供することを目的とし、これらは請求の範囲第１項に記載し た特徴を有する。

特に、この発明によシ、従来一般的な技法を適用することによって同定すること ができなかった内分泌活性細胞由来の一２ｆチド又は蛋白質成分を分離し、この 成分に対する抗血清を調製し、次にこれを顕微鏡組織切片に適用することによシ 、該切片中の前記の細胞の存在を検出することが意図される。

次に、いわゆるエンテロクロマフィン細胞系に関する胃腸管中の特定の内分泌活 性細胞への前記の方法の適用について記載することによシこの発明を説明する。

胃腸管中のペプチドホルモン産生細胞は集中して存在せずむしろ広く分散して散 在するため、これらの細胞から個々の被ゾチドを分離することは非常に困難であ る。従って、選択した適用例においては、腫瘍から関連細胞成分を分離する可能 性があるにもかかわらず、物質Ｐ産生類癌腫として同定Ａれた腫瘍群の細胞から 出発した。

０．３Ｍシュークロース溶液中でホモジナイズすることによって腫瘍細胞を破砕 し、そして得られた均質生成物を０℃にて２０分間１０００ｘ、９で遠心分離す ることによシ、細胞、細胞核及び他の多くの断片から清澄にした。上澄液を、８ ０００．５０００．３０００．１２００及び８００　ｎｍとだんだん小さくなる ポアーサイズを有する一連のミリポアフィルタ−を通した。次に、ｐ液、すなわ ち８００　ｎｍ未満の粒子サイズを有する不溶性区分を、４００００Ｘ、９　に て３０分間遠心分離した。こうして得た沈澱物すなわちイレットを蒸留水に分散 せ、しめ、水に対して約２４時間透析し、そして凍結乾燥した。

次に、凍結乾燥物を水溶液に懸濁し、ホモジナイズし、壁中の可溶性及び不溶性 成分、並びに顆粒の内容物から成る懸濁液を得た。この懸濁液をいわゆるフロイ ントのアジュバントと共に皮肉注射することによシ多数の家兎を免疫した。６週 間後、物質Ｐ産生類癌腫からの腫瘍細胞が常用の免疫細組学的着色において反応 したことにより、懸濁液中の成分に対する抗体を確認することができた。

前記の方法において得られた抗血清中に抗体を生成せしめる抗原は従来確定的に 同定されていない。

この抗血清を正常な胃腸管からの組織学的切片に適用した場合、抗体が、物質Ｐ 産生類癌腫がそこから発生したと考えられる内分泌活性細胞に結合し得ることか 見出された。上記のようにして調製したＰＡＰ−着色抗血清を用いて一連の類癌 腫を試験し、そしてこれらの腫瘍が抗血清と陽性反応することが見出された。し かしながら、この抗血清は由来を異にする細胞とは反応しない。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　内分泌活性細胞に由来するペプチド又は蛋白質成分に対する抗血清であっ て、顕微鏡切片に適用することによって該細胞を同定するためのものを製造する 方法において、前記内分泌活性細胞を有する組織を破砕し、細胞質に由来する前 記ペプチド又は蛋白質成分を含有しそして８００ｎｍの粒子サイズを有する不溶 性顆粒区分をそれ自体公知の方法により前記の破砕生成物から分離し、この不溶 性顆粒区分を水溶液に懸濁し、そしてこの水性懸濁液を用いて抗血清を製造する ことを特徴とする方法。 ２、破砕される組成が前記の細胞に由来する腫瘍から成ることを特徴とする請求 の範囲第１項記載の方法。 ３、沈澱物を水に分散せしめ、そして水溶液に懸濁する前に凍結乾燥することを 特徴とする請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 ４、顆粒区分が、物質Ｐ産生類癌腫型の腫瘍から調製されることを特徴とする請 求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記載の方法。