JPS59501315A - 移植片・宿主疾患防止のための移植片処理方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 移植片・宿主疾患防止のための移ｈＩ′ｉ片処理方法技術分野 この発明はヒトのＴ細胞に作用するモノクローン抗体に関する。この抗体はＴＡ −１と呼ばれるもので、毒性リチンに関する共有結合作用を有し、ヒトの骨髄を 受容者に注輸する際に供与者の骨随の処理に利用される。ざらに、ＴＡ−１、Ｔ １０１およびＵ　ＣＨＴ　１と呼ばれるモノクローン抗１木はそれぞれ別々の毒 性リチンとの共有結合作用を備えており、混合に」−って結合される。これらの モノクローン抗ｆ間・：もヒト・の骨随を受容者に注輸づる際に供与者の骨髄の 処理に利用される。

従来技術 １９８２年３月発行の「シト−ナル・オブ・エクスベリメンタル・メディシン（ Ｊｏｕｒｎａｌ　ａｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　ｊ　 、第１５５巻、第９４９ないし９５４ページっなａ３、この技術はダニエル・エ イ・バレラ、リチャード・ジェイ・コール、テビッド・エム・ネビル・ジュニア およびジョン・エム・カーシーによるものである、１米国特許第１１，３５９． ／１５７号。なお、この技術はネビルおよびコールによるもので、ネズミリンパ 腫細胞汚（■旧゛団ｅ１シ゛町）ｈｏｍａ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｒｅａｇｅｎｔ ）として抗Ｔｈｙ１．２モノク［ｌ−ン抗仏を使用し、これを未反応のち性リチ ン（ｉｎｔａｃｔ　ｒｉｃｉｎ　ｔｏｘｉｎ）と結合させるというものである。

有用性 この発明（ｊヒトの移植ハ・宿主疾患防止のための移植ハ処理プ〕沫に関する。

ＴＡ−１と呼ばれるモノクローン抗体および３秒混合の−［ツク［］−ン抗体は いずれも毒性リチンに対して結合作用を有し、Ｔ−Ｌｙ（Ｔ−１ｙｍｐｈｏｃｙ ｔｅ）抗原を右する細胞に対して鏡れた除去（１用を発揮づ−る。ごれらの抗体 は骨随移植を必要とする場合（ごおいて、移植片を処理する揚台に有用である。

図面の説明 第１図はヒ１への母菌幹細胞およびＴ＠胞に対する■＾−１／ジー１複合体の’ ＡＸ性の比較図である。なお、この結果は、ＴＡ−１／リチン＋１００ｍＭラク トースを用いた場合の結果である。

第２図は各種濃度のＴＡ−１，／リチン＋ラク１〜−人で処理したヒ［〜骨髄お よび周辺面ｈ　ｉ１５核細胞（ｐｅｒｉｐｔ’１ｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎ ｏ−ｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ）ニ関する図である。コロニー（ｃｏｌｏｎｙ ）形成による幹細胞の活性はＣＦ　ｔＪ　−ＧＥＭＭ法（ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒ ｎｔｉｎｇ　ｕｎｉｔｓ、ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ　ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ　ｍｏ ｎｏｃｙｔａ　ｍａｇａｋａｒｙｃｃｙｔｅ、これについては、アッシュ、アー ル・シー外により、１９８１イ１のブラッド（Ｂｆｏｏｄ）　、第５８巻、第３ ０９−３１６ページに開示されている）によってモニターされる。一方、Ｔ細胞 の活性はＮ１１１−Ｒ法（ｍｉｘｅｄ　Ｉｙｍｌ＋ｌ＋ｏｃｙｔｅ　ｒｅａｃｔ ｉｏｎ　、これについては、ボンデビック、ｌイヂ他ニＪこり、１９７４年の一 ７−イシ］−−・アンデジ１ンズ（ＴｉＳＳ１１（！　Ａｎｔｉ（］ｅｎＯ３） 、第４巻、第４６９−４８１ページに開示されている）によって上口ターされる 。データは各資料につぎ７乃￥１０回試験を行なって１５１だ。

イして、図中水平ラインは±１の標１１＋−偏差を示寸、２標準偏差が大きいに もかかわらず、幹細胞の活性にほとんど影響を与えない濃度の複合体にＪ、って Ｔ細胞の活性が抑制されるが、’１０００　ｎｇ／ｍｌの複合体濶痘で処理して も、■細胞の活性を完全・に抑制できない場合もある。

第３図は各種濃度の［八−１／リヂン、Ｔ１０１／リチンおよびＵＣ１ｌＴ１／ リチンの雪量混合物（太線で示す）で処理したヒトの周辺血液の中核細胞に関刀 る図である。Ｔ細胞活性はＮ　Ｌ　Ｒ法で測定した。個々の複合体および混合物 （こよる処理［ｊ、すべて同一の（バ与者および同一の需要細胞について同日に 行なった。データ＋、Ｊ、　４回の試験の平均である。複合体の混合物（３１個 々の複合体の場合Ｊ、りすぐれた］−細胞不活性化能を有している。

第４図は各種濃度のＴＡ−１／リチン、ｒｉｏｉ、ｚリチンおよびＵＣＩＩＴｌ 、／リチンの等量混合物（太線で示す）で筑埋したけ１への周辺血液の単杉絹胞 に閂する図である。Ｔ細胞活性はＰＨＡ法（ｐｌｌｙＬＯｌｌｅｍａ（］Ｉｊ１ １．ｌｊ！ｎ！ｎ）で測定した。

このＰｌ−１△法については、ベルンハイム、ジエイ・］−ル外により、１９７ ７年のレギコレイトリ〜・メカニズム・ンブ・リン“ノＡυイｌ−・アクティヘ イシー３　ン（ＲｅｑｕｌａｔＯｒｙ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ａｔ　ｌ−ｙｍｐ ｈｏｃｙＬｅ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、イレブンス・ル−］サイト・カルヂャ ー・コンフエレンス（１１ｔｈ　Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣＯｎｆ ｅｒｅｎｃｅ）　、第４７９−５０５ページに開示されているＰ　ｉ−Ｉ　Ａ法 によって測定された混合物の抑制効果は、り、１数表示した場合、３０（ｉｎ（ ］／１〕ｌｌの濃度において、単一の箇合体の抑制効果曲線からずれる。

このことは、３００　ｎｇ／ｍｌの濃度において、抑制群（Ｔ’ｅＳ！５ｊａｒ ｌ　ｌ’１ｏｌ）ｔｌｌａｔｉＯｎ）が存在覆ることを意味している２高温度に おける抑制の原因として（ま、受容体の飽和あるいはＴＡ−ｉ、Ｔ　１０１　ｔ ｉよびＵＣＩＩＴＩが作用づろ１種類もしくは２種類のみの抗原決定基を含む細 胞群の存在がぢえらねるーこの混合物（太線で示す）は、対数表示（こおいて、 ３００　＋ｌ（］／Ｉｎ　ｌ　まで直秤をなし、悠れだ細胞戦ｔｐｊ能を発揮す る。

発明の費用 移植片・宿主疾患は異種０１．ｊう者から骨髄移植を受りた再η−不良性貧白、 白血病等の患者に見られる。刊・随移植におりる最大のＲ１嘗は供与者の移植片 中に免疫適格Ｔリンパｌｊｌ’ｄ（ｉｍｎ＋ｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　Ｔ　ｌ ｙｍｌ＋１＋ｏｃｙｔｅｓ）が存在することである。このＴリンパ細１抱によっ て移植７４・梢主疾患（ＧＶＨＤ）が発症覆るからである、８このＧ　Ｖ　ｌ− Ｉ　Ｄに罹患−リ４と、拝・めで悪い病状もしくは死に至ることか多い。洪′ゴ 省のｌ”Ｉ”５３：中の「引瞭Ｉまπ１主（こ作用してＧＶｌ−ＩＤを発症させ る、１従来の問題点（＝１、ＪのＧ　Ｖ　ＨＤ　１７′）発症を防止するために 、移植片中のＴ細胞を除去すると、−万においで伺随の幹細胞が破壊されるとい うことである。従来性なわれている移ｈｃ１ｉ−Ｔ　”ｅ（４主必患の抑制方法 は、補体Ｈ抗イ÷、を使用して骨’、ｊＥｒ中の「丑砲を１４つ壊づるど（ハ） ものＣ・ある。しかじｔがら、Ｍｉ　（本のｌ私１矛（重用（ｊ不′）尚当−（ あろとされている１、その理由は、標ｉｌｌ化がＩＮ勤であること（二加え、ヒ １−の骨髄斡細胞に夕・１して毒性を示すことが多いためである。１７口４＼は 単独て（まＧ　Ｖ　１−（１〕の発ｈｉ”を側止するための充分４１涛性を示さ ない、すなわち、抗体は補１本の存在下で初めてＧ　Ｖ　）−１，Ｄの発症阻止 り用を六づ。

マウスを使った予備実験によれば、抗Ｔｔ＋ｙｌ’、’ｌモノク［１−ン抗体も しくは抗Ｔｈ￥１．２モノクローン抗（本に毒性リチンを結合させることによっ て、Ｇ　Ｖ　ｌ−Ｉ　Ｄの発症がほぼ抑制（抗Ｔｔ）ｙｌ、１）されることが（ イｆも２さねた１Ｊ、の実験の結果、マウスのＧ　Ｖ　ｌ−Ｉ　Ｄを防１１−す る部分（ｍｎｉｅｔｉｐｓ）が類別されＩこ。

一部の抗Ｔｈｙ１．１モノクローン抗体もしくは抗Ｔｔ＋ｙ１．２モノクローン 抗体は未処理のリチン（ｉｎｔａｃｔ　ｒｉｃｉｎ）と共に使用され、別の一部 の抗Ｔ１１７１．ＩＬｌし、くは抗ｆＬ＋ｙ　１　、２　’Ｅ　／り［１−ン抗 ｆ、’ｂ　ハ’Ｊ　ｆ　ン（Ｄ　Ａ、鎖もＬ　（ｌ１口ｊｒｌ　トｐ　（：　（ ｉている。すなわち、活性りチンをや（１１泡壁を？山場させて、タンノマクＩ Ｃｉをｒ′リチンを使用した場合、もしくに１、抗ＴｈＶ１１千ツクローン抗体 （こりチンのへ１ｒ１を結合３Ｉ−ｊ　７過剰のりチンの１８鎖を別に加えた揚 台に効）仝−のＪ、（へコノ抗（Ａ、ｌ：１　Ｆ：；汀’）ブ７１４・（ｌ１１ １ｆ＜ｊ　空ｈｒｊ　室内ｐ＼ｒ、）ｊ）　９的ニトン入さｌ！　ロｒ貴ｊ）　 ｌｊ−、’ｊＥ　’５ｊな親和力と受容部位を（；（ｊえてい７口＜てｆｊ：　 ｊ戊ない。この［細胞（５作１月づる抗１本としては〕△−１、Ｔ１０１　おＪ 、σ１ＩｃｌＩＴ１が望づ：しいか、これら（、二限定す’Ｑ　Ｚｒ　ｔ）　ｌ −Ｊ　−（’　ｌｅｔ　ｆ、；　イ。ＴＩ’ｌＶ　１．１　をＪ５　Ｊ−、Ｄ　 Ｔｌ＋ｙ　１．２型抗１１ｉ’Ｍ　、！＝　Ｉｒ１ｌ　４ｉ、ＴＡ−１抗１．イ （は公知の容易（こ＃　４４−Ｌ得るモノクローン圭゛１仏てあ”’　ｔ、％　 ｉｌ’ｊ、この抗体（ｊ米ｍカリフＡルニア州、ラジョラに所看のハイブリナッ ク（ｌｌｙｂｒｉｔｃｃｌ＋）で入手できる。また、このＦｄ４＼については、 １９８ｏ汗、ブラックウェル・イブイエンティフィック・バフ゛リグイション（ ８１ａｃｋｗＣ１ｌ　５ｃｉａｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉａｎｓ）から出 版されたＩ−ツゼンシＡフル・イムノ［］ジー（Ｉｓ！ｌ、ｐｎｔｉａｌ　１ｎ ｌｎ１１１１１０１ＯＣＩ’７）、第３，４章にお（づル”　イｔ−・ｌ　イノ ＊’：’５カル：＋ル１．Ｑｔ　！Ｆ者から取り出されたヒトの拐随は、［Ａ− １どリチンとの複合体もしくは杼−１、Ｔ１０１および１ｌｃｌＴ１を匿名した もので処理した後、患習に移植される。

この発明は、ヒトの畳隨移植片の９′１′細１抱を１員傷させることなく、での Ｔ細胞のみを選択的に破壊させる複合体に関する。

発明の開示 この発明は、更−のモノク［］−ンに’Ｌ　（’！、（’Ｉハ霞）とりチンとの 複合ｔ４＼ａ３、Ｊ：　ヒ３　種ｆｉノ抗１　’ｉ（Ｊ］ｌ１ａＥ　／　’／　 Ｎ　−ンｉダＬ’　Ｄｌ（ＴＡ−１，１１０１Ｊ３Ｊ：ヒＩＪＣＩＩＴＩ　）ど リチンとの複合体の混合物の使用（，７閏づる５、なお、混合複合体をｊｌいる 揚台は、混合比を等しくすることが望まし、Ｑｌ、（各複合（イ＼（こついて、 その潤度依存性について第３０１に示”Ｉ−、）ｊＲ“含複合イペを使用した場 合の抗体２、′リチンの１号合１本の篩黍度を、１）ｉ−のｌｊ’：、’体を使 用した場合の抗（２、／リチンの複合体の総淵麿ど同一に覆れば、−Ｆ細胞に対 づる不活１Ｊｌ化能は混合抗体を使用した場合のけうが高い１ｔ（４を示で。

供与者から取り出したし１〜のｆ１随細胞を移（ゴ１して治療覆る場名、ぞの（ 」髄内のＴ細胞が’＋５主の罰１ｐと反応して、移１′ｌ！′］ハ・°宿主疾患 を介プ１づる。

−［細胞の活１１、すなわち、移！ＩｌｌにＪ、る移（ゾ４片・宿主％（、患の 発ｈ１能カ（Ｊ、、供与者の細胞ど受疼者の％ｉｎ　、＋Ｅどの間の混合リンパ 細＋１．Ｎ反応（ｍｉｘｅｄ　ｌｙｍｐｈｏ（：ｙｔｅ　ｒｏｉｌｃｉ：Ｏｎ） にｊ、ろ’Ｉ−、ｉ！ＩＩ胞刺激作用の測定にｊ、って判断される、１県出願に おいて開示したｌ八−１とりチンの複Ａ　（’Ｉ、（Ｊ上ろ課狸プノ法全使用し た場合でも、その効果（：）−明されているが、未知の作用に５」、る口々の” ＆ｉｆ’ｊもしく（ユ周々の想省ＩＪよる変動（、Ｈ）　、ｊ３固し−（変動が 起る（第１図にお（Ｊるピ訃１１１１．ｉ差（ま−（−１）。３種ｙ０の抗−「 細胞モノクローン抗体とりチンとの複合１（＼を等ｉＩ；づ゛つ混合づ−ること に１、って、ぞの温合複合体の「細胞不活ｔ［ｆ′ｌ：、ｆ旧（、Ｌ名しく向上 する。一部の−「細胞は、抗体との結合に必要４℃Ｌ二だ１つの抗原決定桔のみ の担体とイｒると考えられている。３種類の複合体の混合物は、最ｂｌのれた処 理能力を協えていることが確π、スされた。

発明の詳細な説明 ヒｌー０１細胞に対づる抗体どリチンの複合体の合成において、ヒ１〜の一ｒ　 ｔ１１＋胞にス・１１−ろしツク［Ｔ１−ン抗体（ＩｏＧ）すなわら■Δ−１は りチンと共イｊ結含さねる。ここて゛使用する抗体−「Ａ−１はカリフＡルニア 州、ラジ］ラのハイブリデックで入手したものである。このＴ　Ａ　−　１を２ Ｑｎｉｌ＋の１へ’Ｊ　スＣ　ｌ　（１１＋１７．（’ｌ）　ｉコミ３解ＬＴ２ ．６ｎ＋ｇ／ｍｌ　とｉる。コノ溶液０．２５ｍｌを１　ｌＩ，・１の［Ｄ丁］ −２５λと晶合し、！記で３０分間ｉｇ；　ｉする。次に、このｒ）　Ｔ　Ｔを Ｇ　２　５　Ｆのゲル濾過によって除去する。一方、Ｉ　Ｑ　、　６ｍ（］／ｍ 　ｌ（／）　’，）　フ−　’ｙ　ｌ）　０．４８　ｍｌヲＭ　Ｂ　Ｓ溶液１７ λど４４合し、′ｉ’４Ｊｎで３０分間培Ｘ゛一ηる、、イ「ｄ３、この：＼’ ｌＢｓＩｍｌ１１．５ｍＩ］σ）＋ｎー７レイ：Ｅ．　ドベン’）−イルーＮー ヒドｌｌ：ｌ＝シー１ノクシンイミ１−］−ステル（ｍ−ｌｎａｌｅ！ｍ！ｄｏ ｌ）Ｏｎ７０：　ｌ−Ｎ−ｌ１ｙｄｌ’ｏ：＜ｙ−ＳＩＩＣＣ！ＩＩ！Ｉｎ：ｄ ｏ　Ｏｓｉｅｒ）を０．４ｍｌのシメヂル小ルムアミド（ｄｉｍｃｔｌｌｙｌ　 ｒｏｒｍａｍ　ｉ　ｄ＋！　）　ニ溶解したものである．、そして、Ｄ　Ｔ　Ｔ を除去した一ｒ　Ａ−１　ｉ？’ｉ液ａ３Ｊ、びＭ　［３　Ｓ−リブーン溶液を 混合し、室〈昌で３Ｍ１間培養する。次に、０　、　２　ＭＩ７）Ｎ　−　■ー プルマレイミド（Ｎ−ｅｔｈｙｌ　ｍａｌｃｉｍｉｄｅ　）　２０λを添加号る ４こうして形成ざれた複合体を、１０００年に出１ｖされたプロセス・づシ］ブ ノレ・ｊ′力力板ミー４Ｊイ］ニンス，コーエスエイ（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｉｌ。

Ａｃａｄｅｍｙ　Ｓｃｉ．、ＵＳＡ）　、第７７巻、第５４８３ないし５４８６ ページにお１ハ−（Ｊ−ル，リブＡ・−ド・下イおよびディー・］−１１・ネヒ ノレ・シニｌ−ｊ′が発表した方７ノ、によって“績要する１抗１不−１−’　 １　０　１どリチンの複合｛本の合成においては、ヒ１〜のＴ細胞にス１づる１ ノク１１−ン抗ｆＡ＼−「１０１はリチンと共看結合される、、この抗体Ｔ１　 ０　１　ｉ：Ｕ米国、；ＩＪ　ＩＪ　ノ７１　）ｌｖニア州、ラジ〕ラのＴ−１ ０１を２　ｏｎｌ＋４の１〜リス−Ｃ　ｌ　（１＋ｌｌ７．６）にｊｂ　Ｍ’？ 　Ｌで２　、　６　１１ＩＱ／Ｉｌ１　ｌ　とずる。この溶，イに０．２５１１ １１を０．１〜１のＤＴＴ２５λと混合し、Ｔ温で３０分ｉ８養Ｊる　次に、こ のＤＴＴをＧ２５［のグル滅１過によって除去する。一方、１０．６ロ＋ｇ／ｍ ｌのリチン［）　０．２４　ｍｌをＭ　Ｂ　Ｓ溶液８．０人と混合し、空温で３ ０分培養する。なお、このＭ　Ｂ　Ｓ溶液は１．５ｍりのｍ−マしノイミドベン ゾイルーＮーヒドロキシーサクシンイミｌ’　Ｉステルを０．４ｍｌのジメヂル 小ルムアミドに溶解したものである５，そして、ＤＴＴを除去したＴ１０１溶液 およひＭＢＳ−リチン溶液を混合し、空席１で３時間培ゴｌでる１，次に、０。

２　ＮＩＩのＮ−エチルマレイミド２０，’ｔを添加する。こうして形成された 複合｛ホを前記のコール，リチャード・エイおよびアレー・エム・ネビルの方： 去に上っ一Ｃ重装する。

出｝合物内の第３の複合体、邦ｒゎちＵ　Ｃ　Ｈ　Ｔ　１とリチンの複ｒ）捧｛ 才、１八−１とりチンの複合体の場合と同様な方法によって合成される。モノク ［二］ーン抗ＩＡ＼（ラＣ　１１　Ｔ　１はドクター・ピータ−・ビバリーから 購入し，たしのである。なお、Ｕ　Ｃ　１１　Ｔ　１の代わりに同一の持ｆｉｌ ，ｊ性およＴｊ類似した親和力を｛イ：１えたモノク［１−ン抗ＩＡ．Ｏ　Ｋ　 Ｔ　３を使用寸ることもできる。このＯ　Ｋ　Ｔ　３　１５↓Ａノレソ・ファー マシ］．ーティカル（Ｏｒｔｈａ　Ｐｈａｒｎ＋ａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）で入手 できる。

移植用のヒ１への骨髄を実際にタハ理ゴる方法を以下に示づ１．まげ、骨髄を供 与者から取り出し、これを、過剰の細胞外ツク［・−スを含む試験管内において 、ＴＡ−１／リブン、ＴＩＯＩ／　’Ｊ　チンｊｒ３　ヨヒＵｃｌｌＴｉ／　’ Ｊ　チ：／　（７）８ｍ　ｇ｛本の等１混合物にＪ：−：）て処理づる。そして 、α１！Ｉ！１稔のｉ’ｉ’　ｉ’：ｉ）を黒石に注翰する。

実茄関１ ヒ１〜のＴ細胞おＪ、びヒ１・の仝？細１抱に対づ−るＴＡ−１，／リチンの複 合体の効果を評価した。試駆１で９内においては、この複合｛ム（（１．６♀帽 胞を１誌（１穴り′ろごセ度の１／５０の：；足咽−（１↑１１胞苓除去した（ ♂）１し１ヅ，ミ！那）。

丁』１ １、５００ｃｃの容器に拐随（１３＝〜ＩＮｆｌｌｕを人ね、これ１丁１０００ ｍｑ／″ｍｌのＴＡｍ１／リブンの複合１本と０．１Ｍのツク１・−スを添カＬ る．次（二、そのうちの／ＩＯｃｃの１３　１ｖｌ　ＩＩ胞含右液を５０ｃｃの 複数の円１｛；形のポリスヂレンヂニｌ−ブに入れる。これらの各Ｂ　Ｍ　、９ Ｒ　Ｊｌ訝含右液（　ＰＦｊ　ｊ，ｌ　ｓ）、Ｌ同一の１、ン人で処｝！Ｉｌ？ ｊ　る。

２、次の３種類の試ゎ１を含む升！−ブをゆリくり撹１’Ｆ　Ｌ”（τがら３７ ゛ｃで２０１間培λ刀る。

Ｃ）　Ｉ”Ｂ〜＋ｓ，′ＴＡ−　１．、−リチン３、　Ｊ：’ｊ　Ｆｉ’ｌ２、 ＠ｉ　Ｊｆｌ　＠．　１％のｌ−Ｉ　Ａを含むＰ　Ｂ　Ｓ　＋１　５　ｍＨのツ クｌ−　−−　１’２　テ．７４［１！Ｉ　！翫ン９し、｝欠の冴１′１をｔ： ｉなう。

ａ）　Ｂ　Ｍ．／−１−Δ−１／′リチンは、１　％　ｌ−Ｉ　Ｓ　Ａ含イｊ生 理食１、−１ホで２回，）゜。

（ｆ’　Ｌｙてプールされる，２回目の洗（′Ｊ１の後、ブール（７ノニＢＮｌ ｒ＜レンＩ・を第１ブ−２−Ｖ内に入れ、これに、５０ＣＣのＰＢＳｅ汀人づろ ，試験色内での分析（ヒノノヒリティのブ−「ツクおよびＣＦＵ−Ｃ＞用にその 一部を１１＜リ、ン曳りを受容化（こン主輪覆る、。

涸である。ヘラスター’ｆ　（ｌｌｅｔａｓｌ’ａｒｃｌｌＪ＞よヒ７イ＝１− Ｌ　（Ｆｉｃｏｌｌ）　かラの実収４壮！．Ｊ．　２　５　９＋’＋　であるが らｔ［］胞Ｎ８　８（、は０．２５　ｘ２０ｘ　１０”　＝　６ｘ　４０９ｐＪ −で゛ある。

実施例２ ヒ１〜の−１−ζ眉ｉｌａ　ｒｊ’；よびヒトの※↑斤』胞（二対づる１八−１ ，″リチン、ｒ＋ｏｉ．’リチン、お」：　Ｑ　ＩＩｃＨ丁１／リチンの各複合 １オ、の効牙？　ヲＴトｉ．ｌｒｉ　Ｌ　７ｊ　、、、’；（　、’＋；ｉ　’ Ｌ’ｉ．［大１　１−二Ｊｊ　Ｏでは、これらの各複合体は幹細胞を破壊づる淵 １ヶの１　／５　０　引〔、”亀−ｃ’Ｉ−　”、１１胞を彼１ｉ４ｊいこ（第 ２図参照）。

手，順 １、２％のヒ１ー血清アルブミン、１０ｏ！＋ｌＩのツク１〜−スお上ひ１０７ ／ｍｌの温度勾配で遠心分難精製しｌこヒト単核ｆ■■胞を含むＲＰＭＩ媒体（ ｊｉｌｃｄｉｕｍ）４０ＣＣを５０ｃｃの円１１形のポリスブレンチューブ１， 二入れ、ごれに、■Ａｍ１，／リブン、Ｔ１０１／リチンおよび（ＩＣＩＩＴＬ ／リヂンの各複リチ４・の混合物３３３１ｌ１ｊｌ．′ｎｌ　ｌ　（　Ｆ３　終 ３度）を添加する。

３、培養後、細胞を１％の１」△含イＩＰＢＳ＋１　５ｎｌＨ・のツク１−ース ２回て、先ｃ７１い次の操｛１−を行なう。

ａノ　大部分の例随細胞は体中１ｋｇ当り２×１ｏ　涸の割合て受容化に注輸さ ねる。

ｂ）ロ随細胞の一部を採取し、クロノシエニツクｊ′ツセイｆｃｌａｎａｇａ旧 ｃ　ａｓｓａｙ　、ＣＩＵ−ＧＥＲＭ）によッテ試装管内ニａ３　イＴＪそノＩ ｆ７Ｌ：：’）ティ（ｖｉａｖφコレトロールう占・１・主 φコント０−ル（Ｔ糸Ｉｉｌ陀５古４゛杢もＬ＋Ｊ折…乞コロニー）Ｄ／Ｄコン １．−０−ルＴ麹０乞拮（・１（−ＬＲ）２ｉｌ言イ本／”ｈ’ｔ７４合イ本” ａ　ｌｉ　（憎／　Ｍ　ｌ　）Ｆ／６４ 国際調査報告 ａＣＴ／＋＋＜８’１１０１０３７

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒトの移植片・宿主疾患に対する移植片の処理に使用されるモノクローン抗 体／リチン複合体であって、前記モノクローン抗体がＴＡ−１であることを特徴 とするモノクローン抗体／リチン複合体。 ２、人の移植片・宿主疾患に対する移植片の処理に使用されるモノクロあること を特徴とするモノクローン抗体／リチン複合体ｔ３、ヒトの移植片・宿主疾患に 対する移植片の処理に使用されるモノクローン抗体／リチン複合体であって、前 記ｔツク［１−ン抗体がＵＣＨＴｌであることを特徴とするモノクローン抗体／ リチン複合体９゜４、ヒ１−の移植片・宿主疾患に対する移植片の処■」に使用 される混合物であって、前記混合物が本質的にＴＡ−１／リチン複合体、１’１ ０１／リヂン複含体ｃ１′３才びＩＩＣＩＩＴＩ／リブン複合体よリチることを 特徴とする混合物。 ５、前記混合物が木質的に１八−１／リチン複合体、Ｔ　１０１’／リチン複合 体およびＩＩｃＩＩＴＩ／リチン複合体の等ｆｆｌｏ合物であることを特徴とす る請求の範囲第４項記載の混合物。