JPS5947599B2 - 酵母菌体の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵母菌体の製造方法に関する。

近年、飼料、食品、医薬品、工業原料などに微生物菌体
を有効に利用する方策が探究されている。

菌体培養に最も主要である炭素源には、以前は天然の炭
水化物が専ら利用されていたが、最近では石油類も使用
され始めている。

しかしながら化学工業で大量にかつ安価に供給される見
通しがあるメタノールが炭素源として期待されるに至っ
ている。

本発明者等は、かかる事情に鑑み、主たる炭素源として
メタノールを好気的に資化し、効率よく培養できる微生
物菌体を自然界より汎く探索した結果、酵母の新菌種ト
ルロプシス・メタノロフイラを発見し、これを利用して
酵母菌体を経済的に製造する方法を確立した。

本発明の要旨は、Ｉ・ルロプシス・メタノロフイラに属
する菌株を、メタノールを主たる炭素源とする培地で培
養して菌体を増殖させ、培養物がら該菌体を採取するこ
とを特徴とする酵母菌体の製造方法に存する。

本発明にお・ける酵母は、菌学的性質からすればトルロ
プシス属に属するものとみられるが、トルロプシス属に
属する公知の菌種と比較すると種々の点で相違しでいる
ので、これを新菌種と断定しトルロプシス・メタノロフ
イラ （Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ −ｍｅｔｈａｎｏｌ、
ｏｐｈｉｌａと命名した。

本発明における酵母の代表的な菌株としでは、トルロプ
シス・メタノロフイラ・ＢＡ−１（４１工研受託番号：
微工研菌寄４０４７号）及びＩ・ルロプシス・メタノロ
フイラ・ＢＡ−２（微工研受託番号：微工研菌寄４０４
８号）であるが、これらの菌学的性質を次に示す。

（１） ｌ−ルロプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−１
の菌学的性質 （ａ）各培地における生育状態 ■ ＭＹ液体培地：２８℃で２〜７日培養、栄養細胞の
大きさは（４，０〜４．５）μｘ（３，２〜４．５）μ
。

形状は円形、卵形又は短楕円形であり、単独又は二連と
なる。

分裂子を形成せず多極出芽で増殖する。

皮膜を形成しない。

■ ＭＹ寒天培地：２８℃、４日培養で、コロニーは白
色、不透明、台状。

表面は平滑で周辺は波状。

光沢あり。■ メタノール含有寒天培地：２８℃、４目
培養で、コロニーは淡黄色、不透明、台状。

表面は平滑で周辺は波状。

■ トウモロコシ抽出液寒天培地によるスライド培養：
２８℃、４週間培養で菌糸及び仮菌糸は形成せず。

■ バレイショ抽出液寒天培地によるスライド培養：２
８℃、４週間培養で菌糸及び仮菌糸は形成せず。

（ｂ） 子嚢胞子の形成 改良ゴロドコワ寒天培地、酢酸ソーダ寒天培地、麦芽汁
寒天培地及び石こう培地では子嚢胞子の形成なし。

（ｃ） 射出胞子の形成：ＭＹ寒天平板培養において
射出胞子の形成なし。

（ｄ） 各生理的性質 ■ 最適生育条件 ２０〜４０℃でよく生育する。

ｐＨ３〜１１でよく生育する。

■ 生育の範囲 ４２℃では増殖がやや悪い。

４５℃では増殖しない。

ｐＨ１５，ｐＨ１２では生育しない。

■ 硝酸塩の同化性 ： なし ■ 脂肪の分解性 ： なし ■ 尿素の分解性 ： なし ■ ゼラチンの液化性： なし ■ 耐浸透圧性：１０重量％以下の塩化ナトリウム水溶
液中で生育する。

■ カロチノイドの生成：なし ■ 顕著な有機酸の生成：なし ［相］ デンプン様物質の生成：なし ■ ビタミンの要求性：ビオチンを絶対的に、サイアミ
ンを刺激的に要求する。

０ エステルの生成：なし ０ アルブチンの分解性：あり ０ リドマスミルク：凝固せず ｅ）糖類の発酵性 ■ Ｄ−グルコース ＋ ■ Ｄ−ガラクト−ス − ■ マルＩ・−ス −■ サッカロ
ース − ■ ラクト−ス − ■ メリビオース − ■ セロビオース ＋ ■ Ｉ・レバロース −■ ラフィノ
ース − ［相］ α−メチル−Ｄ−グルコシド −■ 可溶性
デンプン − ０ イヌリン − （ｆ） 各種炭素源の資化性 ■ Ｄ−アラビノース ± ■ Ｌ−アラビノース ＋ ■ Ｄ−リホ゛−ス ＋■ Ｄ−キシ
ロース ＋ ■ Ｄ−グルコース ＋ ■ Ｄ−マンノース ＋ ■ Ｄ−ガラ７Ｉ・−ス −■ Ｌ−ラム
ノース − ■ Ｄ−フラグＩ・−ス ＋［相］ Ｌ−
ソルボース ±０ マルＩ・−ス
− ０ サッカロース 十 〇 ラクトース − ０ メリピオース − 〇 セロビオース ＋ ［相］ トレハロース −〇 ラフィ
ノース − ［相］ メレジＩ・−ス −０ α−
メチル−Ｄ−グルコシド − ［相］ アルブチン 十〇 可溶性
デンプン − ［相］ エタノール ＋［相］
エリトリット −■ イノジット
− ［相］ Ｄ−マンニット ＋［相］
Ｄ−ソルビット 十〇 グリセリン
± ［相］ ２−ケト−グルコン酸カルシウム ＋［相］
ＤＬ−乳酸 −［相］ コハク酸
士■ クエン酸
−［相］ 酢酸ソーダ
十分離源 ： 土壌 （２） ｌ−ルロプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−２
の菌学的性質。

ｌ・ルロスプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−１と下記の
点で相違する以外は前記菌学的性質に同じ。

（ｆ） 各種炭素源の資化性 ■ Ｄ−アラビノース ＋ ［相］ ８−メチル−Ｄ−グルコシド ±■ クエン
酸 土木発明における菌株は子
嚢胞子、射出胞子および分裂子を形成せず、栄養細胞は
円形、卵形又は短楕円形で、多極出芽で増殖すること、
仮菌糸を形成しないこと、カロチノイドの生成がないこ
と、及びデンプン様物質を生成しないことからロッゾ（
Ｌｏｄｄｅｒ ）著「ザ・イースツ・ア・タキソノミツ
クスタデイ （Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ、 Ａ Ｔａｘｏ
ｎｏｍｉｃ Ｓｔ −ｕｄｙ （１９７０＞ ）Ｊによ
ってトルロプシス属に属する酵母と考えられる。

又本菌株をロツダーの上記著書に記載されている公知の
酵母菌種と比較すると、硝酸塩を同化しない、ラクトー
スを発酵しない、グルコースおよびサッカロースを資化
する、ツルＩ・−ス及びラフＩ・−スを資化しない、マ
ンニット及びツルピッＩ・を資化する、セルビオースを
資化すること等からＩ・ルロプシス・グロペンギーセリ
（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓｇｒｏｐｅｎｇｉｅｓｓｅｒｉ
）に近似する。

次に本菌株とトルロプシス グロペンギーセリとの相違
点を第１表に示す。

第１表より明らかなようにトルロプシス グロペンギー
セリとは異なり、またロツダーの著書に記載の公知の酵
母のいずれとも一致しない。

又本菌株と上記以外の公知文献に記載されている酵母を
比較すると、特開昭５２−１８８７７号公報におけるト
ルロプシスＴＭが最も近いと考えられるが、第２表に示
す点において相違する。

第２表より本菌株はトルロプシス・ＴＭとは異なり、ま
たその他の公知の菌株のいずれとも一致しないことが判
明した。

又Ｉ・ルロプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−１゜Ｉ・ル
ロプシス・メタ・ノロフイラ・ＢＡ−２の両者間には炭
素源の資化性において若干の相違があるにすぎないから
同一菌種としで一括した。

又前記の結果から新菌種に属するものと断定した。

上記の同定に当っては、前記のロツダーの著書及び飯塚
広、後藤昭二著「酵母の分類同定法」（１９６９）に
従った。

またメタノール含有寒天培地として次の組成の培地を用
いた。

（ＮＨ４）２ ＳＯ４３ｇ、 ＫＨ２ＳＯ４４ｇ、
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｇ、Ｃａｃ１２ ・２Ｈ
２００，１ｇ、 Ｎａｃｌ Ｏ，１ｇＦｅＳＯ４・７Ｈ
２００，０１ｇ、 ＭｎＳＯ４・５Ｈ２０１ｍｇ。

ＣｕＳＯ４・５Ｈ２００，２ｍｇ、ビオチン１０μｇ。

サイアミン塩酸塩１００μｇ、イーストエキス０．０１
ｇ寒天 ２０ｇ、蒸溜水 ＩＩ２ 上記組成のものをｐＨ４，５に調整し、１２０℃で１５
分間殺菌後メタノールを１０ｍρ加えた。

尚メタノール液体培地とは上記の場合において寒天を除
いたものである。

培地には、主たる炭素源としてメタノールを使用するが
、メタノールの量は５０ｇ、＃以下であるのが酵母の生
育の程度からみて好ましい。

窒素源としては、無機物としてアンモニウム塩、有機物
として尿素、カゼイン等が用いられ、燐源としては燐酸
塩などを、硫黄源としては硫酸塩などが用いられる。

又マグネシウム、カルシウム、カリウム、ナトリウム、
鉄、マンガン、銅などの金属源としては、その金属塩を
適当量加える。

更にビオチンを適当量加え、必要に応じてアミノ酸、サ
イアミンを加えるが、これらはイーストエキス、コーン
ステーブリカーなどで代用することができる。

又培地としては、メタノール及び窒素源、無機物、ビタ
ミンその他の生長必須及び促進物質を適量含有するもの
であれば天然培地であってもよい。

培地のｐＨの調節はリン酸塩とアンモニアによるのが便
利である。

培養にあたっては、温度２０〜４０℃、ＰＨ３〜１１の
条件で好気的、液体培養法を行なうのが望ましい。

又回分培養でも連続培養でもよい。

培養物より菌体を採取するには、浜過、遠心分離等を常
法に従って行なえばよい。

本発明によれば、化学工業から豊富に供給されるメタノ
ールを主たる炭素源として利用でき、酵母菌体を収率よ
く大量に製造することができる。

又得られた菌体は、飼料２食品、医薬品、工業原料など
に有効利用することができる。

以下に本発明の実施例を記す。

実施例 １ （ＮＨ４）２ ＳＯ，ｉ ３ｋＫＨ２ＰＯ４
４ｇ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５゜ Ｃａｃ１２ ｍ ２Ｈ２００、１ｇ Ｎａｃｌ ０．１ ｇ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２ｏ Ｏ，０１ｇイースＩ・
エキス ０．０１ 。

ビオチン １０μ。

ザイアミン塩酸塩 １００μ。

蒸溜水１ｐ当り上記各成分を溶解し、ＰＨ４，５に調整
された培地から１００ ＋Ｊをとり容量が５００ ｍ（
！の坂ロフラスコに入れ、１２０℃で１５分間殺菌後、
メタノールを１ｍｇ無菌的に添加した。

これに、同組成の培地で、３０℃で４８時間をかけて前
培養して得られたＩ・ルロプシス・メタノロフイラ・Ｂ
Ａ−１の培養液を１容量％植菌し、３０℃で４８時間振
とう培養を行なった。

培養終了後、培養物を遠心分離にかけて菌体を分離し、
更に水洗を２回行なった後、１０５℃で１２時間をかけ
て乾燥し、培養物１ρ当りり２．７ｇの乾燥菌体を得た
。

この培養の対数増殖期の世代交代時間は２．８時間であ
った。

実施例 ２・ （ＮＨ４）２Ｓ０４１０ｇ ＫＨ２ＰＯ４４ｇ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０２ｇ ７Ｈ２Ｏ２１２Ｈ２００，５ｇ ＮａＣｌ ０．２５ ｇＦｅＳ０４
・７Ｈ２０７Ｈ２Ｏ ２５］ＳＯ４・５Ｈ２Ｏ１０ｍ５ Ｈ２Ｏ１０・５Ｈ２０２ｍｇ ピ゛オチン １０μｇ サイアミン塩酸塩 ４００μｇ 蒸溜水１ｒ当り１−記各成分を溶解し、ＰＨ４，５に調
整された培地１５ｐを３０Ｉの容量のジャーファーメン
タ−に入れ、１２０℃で２０分間殺菌後、メタノールを
０．５容量％無菌的に添加した。

これに、実施例１と同組成の培地で３７℃で４６［Ｊ↓
間をかけて前培養して得られたトルロプシス・メタノロ
フイラ・ＢＡ−１の培養液を３容量％植菌し、３７℃で
通気、攪拌条件下に培養を行なった。

この間ＰＨ値はアンモニア水で４．５になるように自動
的に調節され、メタノールは消費量に合わせて培養中の
濃度が０．１乃至０．５容量％を保持するように逐次添
加された。

培養開始から４８時間経過後メタノールの流力目量は７
．５容量％に達した。

培養終了後、培養物を遠心分離にかけて菌体を分離し、
更に水洗を２回行なった後、１０５℃で２４時間をかけ
て乾燥し、培養物１ρ当り１５ｇの乾燥菌体を得た。

実施例 ３ 実施例１におけると同組成の培地を使用し、培養温度を
３７℃にかえた他は実施例１と同条件下にトルロプシス
・メタノロフイラ・ＢＡ−２の培養を行い、次いで実施
例１と同様にして培養物から菌体を分離し、培養物１ｐ
当り２．５ｇの乾燥菌体を得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ トルロプシス メタノロフイラに属する菌株を、メ
   タノールを主たる炭素源とする培地で培養して菌体を増
   殖させ、培養物から該菌体を採取することを特徴とする
   酵母菌体の製造方法。 ２ １−ルロプシス・メタノロフイラに属する菌株が、
   トルロプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−１であることを
   特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵母菌体の製造
   方法。 ３ トルロプシス・メタノロフイラに属する菌株が、ト
   ルロプシス・メタノロフイラ・ＢＡ−２であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵母菌体の製造方
   法。