JPS5926279B2 - プレグナン系１７−エステルの製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物によるプレグナン系ステロイドの１７
−エステルの製法に関し、さらに詳しくは、副腎皮質ホ
ルモン剤として極めて有用な１７α、２１−ジヒドロキ
シ−２０−ケト−プレグナン系１７−エステルを容易に
得ることができる新規な製法に関する。

従来、プレグナン系ステロイドの１７α−エステルを得
るには化学的に合成する方法が行なわれていた。

この１７α−エステルを得るには酸を用いてプレグナン
系ステロイドの１７α−ヒドロキシ体を直接エステル化
する方法があるが、１１位と２１位にヒドロキシ基があ
る場合には、エステル化に先立ってこれらのヒドロキシ
基を保護しなければならず、また１７位のヒドロキシ基
をエステル化した後、１１位と２１位の保護基をはずさ
なければならない。

しかも、酸に強酸を用いるために好ましくない副反応を
起こしやすく、目的物である１７−エステルだけを選択
的に得ることはできなかった。

また、プレグナン系ステロイドの１７α、２１−ジヒド
ロキシ体を１７α、２１−ｉ伏オルトエステル体となし
、これを酸加水分解により１７α−エステルとなす方法
がある。

酸としては無機酸または有機酸のいずれも使用できるが
、シュウ酸またはプロピオン酸などの概して弱い酸が適
当とされている。

しかし、この場合、加水分解により１７α−エステルの
他に２１−エステルが副生じ、この不要な２１−エステ
ルを取り除く工程が必要となる欠点があった。

このため塩酸−クエン酸ソーダなどの酸の緩衝された水
−崩機性媒質を用いることにより２１−エステルの生成
はある程度減少させ得るが２１−エステルの副生を完全
に抑制することはできなかった。

本発明者らは、プレグナン系ステロイドの１７α−エス
テルのみを高収率かつ工業的に製造できる方法につき種
々研究した結果、微生物を利用することにより本発明の
目的を達成することができた。

すなわち本発明は、 部分構造式 （式中、Ｒはアルキル基またはアラルキル基を示し、Ｒ
′は低級アルキル基を示す。

）を有する１７α、２１−ジヒドロキシ−２０−ケト−
プレグナン系ステロイド １７α、２１−環状オルトエ
ステルを加水分解して開裂する、ストレプトミセス属に
属する菌株を、前記環状ステロイドを含む培地で培養し
、培養物から 部分構造式 （式中、Ｒは前記と同意義である。

）を有する１７α、２１−ジヒドロキシ−２０−ケト−
プレグナン系ステロイド １７−エステルを採取するこ
とを特徴とするプレグナン系ステロイド １７−エステ
ルの製法である。

本発明の式（Ｉ）２式（ＩＩ）における置換基Ｈのうち
、アルキル基としてはたとえばメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘ
キシルなどの炭素数１〜９個の基があげられる。

アラルキル基はたとえばペンデル、フェニル−エチル、
フェニルプロピルナトのフェニル基によって置換された
低級アルキル基の意味である。

前記式（ｎ）の置換基Ｒ′は低級アルキル基たとえばメ
チル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソ
ブチル、ペンチルなど炭素数１〜５個の直鎖状または分
校法の基があげられる。

本発明に用いられるストレプトミセス属に属する菌株は
たとえばストレプトミセス属に属するＴＭ５１１菌株で
あり、この菌株は土壌より分離、保存したもので、Ｓ
、Ａ−Ｗａｋｓｍａｎの分類によればＳｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓに属する一枚線菌である。

なお、この菌株は、微生物の名称「ストレプトミセス属
放線菌株 ＴＭ ５１１ Ｊおよび微生物寄託番号「微
工研菌寄第３５７９号（ＦＥＲＭ−ＰＡ３５７９）Ｊと
して工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている
。

本発明に使用するストレプトミセス属に属するＴＭ ５
１１の菌学的性質は次の通りである。

■形態 本形態は原株を３０℃で酵母エキス・麦芽エキス寒天培
地およびオートミル寒天培地で培養した結果である。

（１）胞子形成菌糸の分校法：単純分枝 （２）胞子形成菌糸の形態 ：螺旋法（緩く伸びた３〜
４回程度の開放螺旋 （３）胞子の数（着生数） ：数個〜２０個前後（４）
胞子の形状 ：卵形ないし円筒形（５）胞子の
大きさ ：平均０．５Ｘ０．９μ（６）電子顕微
鏡による胞子：粗面（ｆ伏、Ｗａｒｔｙ）表面構造 （７）胞子の着生部位 ：気中菌糸（二次菌糸）上 （８）鞭毛胞子、胞子溝、菌核：何れも観察されない。

■ 各種培地上の生育状態（３０℃、６週間）■ 生理
的性質 （１）生育温度 酵母エキス・麦芽エキス寒天培地において２２〜４２°
Ｃまで良好な生育を示し、３０°Ｃ附近に至適温度を有
する。

（２）ゼラチンの液化：陽性 （３）澱粉の加水分解：陽性 （４）脱脂乳の凝固とペプトン化：それぞれ陽性（５）
メラニン様色素の生成：陽性 （６）硝酸還元能：陽性 （７）瀕化水素の形成：陰性 ■ 炭素源の利用性 （ブリードハム・ゴツトリーブ培地（３０°Ｃ） （１）生育状態が極めて良好のもの Ｌ−アラビノース （２）生育状態が良好のもの Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
シュークロース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、Ｄ−
マンニット （３）生育状態が不良のもの ラフィノース 本発明の実施にあたり、好気的条件下において上記性状
の菌株を式（ＩＩ）を有する化合物に作用させることに
より、式（１）を有する化合物が容易に得られる。

前記式（ｎ）を有する化合物は、酵素を比較的不活性化
しない有機溶剤たとえばアセトン、酢酸エチルもしくは
アルコール類に溶かし、この溶液を本発明方法に使用す
る菌の植付けと同時に培地に入れるかあるいは当該菌の
植付後その菌が増殖した２日後に培地へ入れてもよい。

培養液に対する式（ＩＩ）を有する化合物の濃度はｍ１
７１０〜２００μｇである。

使用する培地は、たとえば炭素源としてブドウ糖、果糖
、乳糖、グリセリン、澱粉、大豆油などであり、窒素源
としては肉エキス、ペプトン、きな粉、コーンスチープ
リカー、綿実粕などを用いることができ、微量成分とし
ては各種ビタミン、金属塩類を添加することができる。

これらの一連の操作は無菌室内で行う。

このようにして得られた培養液は３０℃にて２日〜６日
間振盪あるいは撹拌処理を行う。

反応の終点は反応液の一部をとり、酢酸エチル抽出した
液の薄層クロマトグラフィーにより知ることができる。

反応終了後、反応液はＰ紙あるいはＰ布で沖過し、ｐ液
に酢酸エチルを加えて振盪抽出する。

これを遠心分離して得た酢酸エチル層を減圧下に濃縮し
て粗生成物を得る。

この粗生成物は再結晶して目的物１７α。２１−ジヒド
ロキシ−２０−ケト−プレグナン系ステロイドの１７α
−エステルを得ることができるが、さらに分取薄層クロ
マトグラフィーかカラムクロマトグラフィーに付せばよ
り純度の高い目的物を効率良く集めることができる。

本発明の式（ｎ）を有する原料化合物は公知の方法によ
り製造することができる。

たとえば、１７α、２１−ジヒドロキシプレグナン類と 一般式 ％式％（０ （式中ＲおよびＲ′は前記式（１，ＩＩ）と同意義であ
る。

）で表わされるオルトエステルとをトルエンスルホン酸
、ナフタリンスルホン酸などの酸性触媒の存在下、ジメ
チルホルムアミドなどの適当な有機溶媒中で６０〜１３
０℃加熱するなどして式（ＩＩ）を有する化合物を得る
。

この反応に使用できる式（Ｉ）のオルトエステルとして
はたとえばオルト酢酸、オルトプロピオン酸、オルト酪
酸、オルトイソ酪酸、オルト吉草酸、オルトイソ吉草酸
、オルトカプロン酸、オルトイソカプロン酸、オルトカ
プン酸、オルトカプリル酸、オルトシクロプ叫＊ロパン
カルボン酸、オルトシクロブタンカルボン酸、オルトヘ
キサヒドロ安息香酸、オルト安息香酸、オルトβ−フェ
ニルプロピオン酸などの各エステルがあり、このうち特
に望ましいものはメチルエステルまたはエチルエステル
である。

前記式（ｎ）を有する１７α−２１−環状オルトエステ
ルは、以上の記載から容易に理解されるとおり、反応に
関与しない部分について特に限定を要するものではない
が、代表的なものとして次の一般式（ＩＶ）で表わされ
る化合物があげられる。

式中Ｙ１はヒドロキシ基、ハロゲン原子もしくはケトン
伏の酸素原子を示し、￥２は水素原子もしくはハロゲン
原子を示し、または￥１ と￥２ は各各が結合して
いる炭素原子と共にエポキシ環もしくは二重結合を形成
する。

￥３は水素原子、ハロゲン原子もしくはメチル基を示し
、Ｗｌ とＷ２は各々水素原子もしくは一方が水素原
子のときは他方はメチル基またはハロゲン原子を示し、
またはＷｌ とＷ２は各々が結合している炭素原子と
共にシクロプロパン環もしくは二重結合を形成する。

Ｒ“は水素原子、α位もしくはβ位のメチル基またはヒ
ドロキシ基を示し、ＲおよびＲ′は前記と同意義である
。

Ｂｉの点線は二重結合もしくは単一結合を示し、１８位
もしくは１９位のメチル基はあってもなくてもよい。

また、一般式（５）のステロイド構造は環ノル体もしく
は環ホモ体であってもまたは各ケトン基のエノール体で
あっても差し支えない。

本発明の新規な製法によれば副生成物や異性体の生成を
見ることなく式（Ｉ）を有する目的化合物１７α、２１
−ジヒドロキシ−２０−ケト−プレグナン系ステロイド
の１７α−エステルのみをわずか一工程で定量的かつ高
収率で製造することができる。

したがって、従来法では不可欠の好ましくない副生成物
２１−エステルを除去する工程を全く必要としなくなっ
た。

また、本発明では、１７位以外にもヒドロキシ基を有す
るものであっても、これらのヒドロキシ基を保護し、１
７位をエステル化した後、再び前記保護基をはずすとい
う煩雑な行程は全く必要としない。

また、ステロイド環の各種置換基および二重結合は、本
発明の実施に全く関与することがないばかりでなく、１
７α、２１−ジヒドロキシ体から製造した式（ｎ）を有
する原料化合物は精製することなく、粗生成物のまま本
発明に使用することができる。

本発明で得られる式（１）を有する目的化合物は臨床上
著効を有する副腎皮質ホルモン剤であり、リュウマチの
治療に有効である。

とりわけ局所抗炎症剤として各種の皮膚疾患すなわち皮
膚炎症、日焼は症、神経皮膚炎症、湿疹、肛門性器掻痒
症などに著効を示すばかりでなく、抗アレルギー炎症剤
として喘息にも極めて有効である。

次に実症例および参考列を挙げて本発明を詳細に説明す
る。

参考例 ■ Ｗａｋｓｍａｎ培地の調製：イオン交換樹脂で精製
した水２１にグルコース２０ｇ１肉エキス１０ｇ１ペプ
トン１０ｇ１塩化ナトリウム１０ｇを溶解しｌＮ−Ｎａ
ＯＨでｐ Ｈ７，４に調製しオートクレーブ殺菌し、培
養液とした。

■ きな粉培地の調製：イオン交換樹脂で精製した水２
１に可溶性澱粉２０ｇ１グルコース２０ｇきな粉２０ｇ
１イーストエキス１０ｇ、塩化ナトリウム５９ Ｎ炭酸
カルシウム４ｇ１金属無機塩（ＣｕＳ０４．ＭｎＣｌ２
．ｔ ＺｎＳＯ４、ＦｅＳＯ４Ｍｇ５０４）微量を溶解
しｌＮ−ＮａＯＨでｐＨ７，２に調製し、オートクレー
ブ殺菌をおこなって培養液とした。

実施例 １ デキサメサゾン１７−プロピオネート〔９α−フルオロ
−１６α−メチル−１７α−プロピオニルオキシ−１１
β、２１−ジヒドロキシ−１゜４−プレグナジェン−３
，２０−ジオン〕の製造 （ａ） デキサメサゾン１７．２１−エチルオルトプ
ロピオネート〔９α−フルオロ−１６α−メチル−１７
α、２１（１′−エトキシ−１しエチル−メチレンジオ
キシ）−１１β−ヒドロキシ−１，４−プレグナジェン
−３，２０−ジオン〕（ｍ−ｐ−２１９〜２２１℃）５
００ダをアセトン２５ｍ１に溶解した。

前記参考例で調製したＷａｋｓｍａｎ培養液２１を５０
０ｍ１フラスコ２０個に１００ｒｒＬｌずつ分配しそれ
ぞれストレプトミセスＴＭ５１１を接種した。

これに上記のステロイド液をそれぞれ１．２５ｍＡ’ず
つ加え３０℃で４日間振盪培養した。

培養終了後、各フラスコの培養液をＦ紙にてア過し、酢
酸エチルで抽出、遠心分離後分離した酢酸エチル層を集
めた。

これを水洗し減圧下に濃縮して得た粗生成物をシリカゲ
ルを吸着剤、クロロホルムを展開剤とする乾式カラムク
ロマトグラフィーに付した。

溶出液をシリカゲル板を用いた薄層クロマトグラフィー
〔展開剤；アセトン：クロロホルム：ｎ−ヘキサン（３
：３：４））でチェックしてＲｆｏ、２１を示す目的物
の部分を集め得られる結晶をアセトン−ヘキサン混液か
ら再結晶した。

収量４６０７７２９．ｍ、ｐ、２１８〜２２１°Ｃ（ｂ
） きな粉培地を２０ｍ１ずつ入れた試験管２０本に
ストレプトミセスＴＭ５１１を接種後、（ａ）と同じ原
料２００ｍ９をアセトン１０ｒＩｌｌに溶解し０、５
ｍｌずつ加えた。

これを３０℃４時間振盪培養した。

培養終了液を沖紙で沢過し酢酸エチル抽出、抽出液を水
で洗浄した。

これをある程度減圧下に濃縮してから薄層クロマト板上
に塗布し展開剤にアセトン：クロロホルム−ヘキサン（
３：３：４）を用いて分取薄層クロマトグラフィーを実
施した。

Ｒｆｏ、２７付近の目的物を集め、アセトン−ヘキサン
混液で再結晶した。

収量１７７ｍ９．ｍ−ｐ、２１８〜２２２℃実施例 ２ ベータメサゾン１７−プロピオネート〔９α−フルオロ
−１６β−メチル−１７α−プロピオニルオキシ−１１
β、２１−ジヒドロキシ−１゜４−プレグナジェン−３
，２０−ジオン〕の製、造 ベータメサゾン１７，２１−エチルオルトプロピオネー
ト〔９α−フルオロ−１６β−メチル＝１７α、２ｌ−
（１’−エトキシ−１′−エチル−メチレンジオキシ）
−１１β−ヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，
２０−ジオン） （ｍ、ｐ２０８〜２１１°Ｃ）２００
〜をアセトン１０ｍ１に溶解した。

次にＷａｋｓｍａｎ培地２０ｍ１を入れた試験管２０本
にストレプトミセスＴＭ５１１を接種しこれに上記のス
テロイド溶液を０．５ ｍｌずつ加えた。

これを３０°Ｃ４日間振盪培養し以後実施例１（ｂ）と
同様に処理し、分取薄層クロマトグラフィーによって生
成物を得、これをアセトンより再結晶した。

収量１８５１７２ｐ、ｍ−ｐ、２３２〜２３５°Ｃ実施
例 ３ ベータメサゾン１７−バレレート〔９α−フルオロ−１
６β−メチル−１７α−バレロイルオキシ−１１β、２
１−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，２０
−ジオン〕の製造ベータメサゾン１７，２１−メチルオ
ルトバレレート〔９α−フルオロ−１６β−メチル−１
７α、２ｌ−（１’−メトキシ−１′−ブチル−メチレ
ンジオキシ）−１１β−ヒドロキシ−１，４−プレグナ
ジェン−３，２０−ジオン）（ｍ、ｐ、１５２〜１５４
℃）５００〜を用いて実施例１（ａ）と同様に、Ｗａｋ
ｓｍａｎ培地でストレプトミセスＴ Ｍ５１１で６日間
処理した。

以後実施例１（ｂ）に示したような処理をし分取薄層ク
ロマトグラフィーを利用して生成物を分離、アセトン−
ヘキサン混液で再結晶し目的物を得た。

収量４６０ｍ９ｍ、ｐ、１８２〜１８４°Ｃ実施例 ４ ヒドロコーチシン１７−−ｊチレート〔１７α−プチリ
ルオキシ−１１β、２１−ジヒドロキシ−４−プレグネ
ン−３，２０−ジオン〕の製造ヒドロコーチジン１フ、
２１−メチルオルトブチレート〔１７α、２ｌ−（１’
−メトキシ−１′−プロピルーメチレンジオキシ）−１
１β−ヒドロキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン
〕（ｍ。

ｐ、１８６〜１８７°Ｃ）２００■を用いて実施例１（
ｂ）と同様にストレプトミセスＴＭ５１１で処理した。

以後同じように分取薄層クロマトグラフィーを利用して
生成物を得、これを酢酸エチル−ヘキサン混液より再結
晶した。

収量１８７７％ｌ、ｍ、ｐ、２０５〜２０７°Ｃ実施例
５ ヒドロコーチシン１７−プロピオネート〔１７α−プロ
ピオニルオキシ−１１β、２１−ジヒドロキシ−４−プ
レグネン−３，２０−ジオン〕の製造 ヒドロコーチシン１７，２１−エチルオルトプロピオネ
ート〔１７α、２ｌ−（１’−エトキシ−１′−エチル
ーメチレンジオキシ）−１１β−ヒドロキシ−４−プレ
グネン−３，２０−ジオン〕（ｍ−ｐ 、 １８２．５
〜１８３．５°Ｃ）２００７ｉＱをアセトン１０ｍ１に
溶解し、実施例２と同様にＷａｋｓｍａｎ培地中で３０
°Ｃ４日間ストレプトミセスＴＭ５１１と処理した。

以後実施例１（ｂ）に示すような操作をおこない、得ら
れた粗生成物を、アセトン−ヘキサン混液で再結晶した
。

収量１８５ｍ９．ｍ、ｐ、１８８〜１９１°Ｃ実施例
６ ヒドロコーチゾン１７−カプロエート〔１７α−カブ口
イルオキシ−１１β、２１−ジヒドロキシ−４−プレグ
ネン−３，２０−ジオン〕の製造 ヒドロコーチシン１７，２１−メチルオルトカプロエー
ト〔１７α、２ｌ−（１’−メトキシ−１′−ペンチル
−メチレンジオキシ）−１１β−ヒドロキシ−４−プレ
グネン−３，２０−ジオン〕（ｍ、ｐ 、 １１９〜１
２０°Ｃ）１００７Ｑを酢酸エチル５ｍＡに溶解した。

次にＷａ ｋ ｓ ｍ 訂賠地２０ｒｎｌｌを入れた試
験管１０本にストレプトミセスＴＭ５１１を接種し、こ
れに上記のステロイド溶液を０、５ ｍｌ！ずつ加えた
。

これを３０℃４日間振盪培養し、以後実施例１（ｂ）と
同様に処理し、分取薄層クロマトグラフィーをおこなっ
た。

得られた粗生成物をアセトン−ヘキサン混液で再結晶し
た。

収量８９〜． ｍ 、 ｐ 、 １５６〜１５９℃実施
例 ７ プレドニソロス１７−アセテート〔１７α−アセトキシ
−１１β、２１−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジェ
ン−３，２０−ジオン〕の製造プレドニソロン１７．２
１−メチルオルトアセテート〔１７α、２ｌ−（１′−
メトキシ−１′−メチル−メチレンジオキシ）−１１β
−ヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，２０−ジ
オン〕（ｍ、ｐ、１８５〜１８８°Ｃ） １００７Ｖを
アセトン５ｍｌに溶解した。

前記参考例で調製したきな粉培地４００ｍ１を１００Ｔ
ｒＬｌフラスコ２０個に２０ｍ１！ずつ分配し、それぞ
れにストレプトミセスＴＭ５１１を接種し、３０℃２日
間保ってから、上記のステロイド溶液をそれぞれ０．２
５ ｒｎｌずつ加えて３０°Ｃで４日間処理した。

以後、実施例１（ｂ）と同様に処理し、得られた生成物
をアセトン−ヘキサン混液で再結晶した。

収量９０１１１９．ｍ、ｐ、２４０〜２４２°Ｃ実施例
８ ベータメサゾン１７−ブチレート〔１７α−ブチリルオ
キシ−９α−フルオロ−１６β−メチル−１１β、２１
−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，２０−
ジオン〕の製造ベータメサゾン１７，２１−メチルオル
トブチレート〔９α−フルオロ−１６β−メチル−１７
α、２ｌ−（１’−メトキシ−１′−プロピル−メチレ
ンジオキシ）−１１β−ヒドロキシ−１，４−プレグナ
ジェン−３，２０−ジオン） （ｍ−ｐ −１４８°Ｃ
）２００ｍ９をアセトン１０ｍ１に溶解し、実施例５と
同様にＷａｋｓｍａｎ培地中で３０°Ｃ５日間ストレプ
トミセスＴＭ５１１と処理した。

以後、実施例１（ｂ）と同様に処理して得た生成物をア
セトン−ヘキサン混液にて再結晶した。

収量１８３ｍ９、ｍ、 ｐ−１９３〜１９５°Ｃ実施例
９ ベータメサゾン１７−イソバレレート〔９α−フルオロ
−１７α−イソバレロイルオキシ−１６β−メチル−１
１β、２１−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−
３，２０−ジオン〕の製造 ベータメサゾン１７，２１−メチルオルトイソバレレー
ト（９α−フルオロ−１６β−メチル−１７α、２ｌ−
（ｉ’−イソブチル−１′−メトキシ−メチレンジオキ
シ）−１１β−ヒドロキシ−１゜４−プレグナジェン−
３，２０−ジオン〕（ｍ。

ｐ、１７５〜１７６°Ｃ）１００〜をエタノール５ｒｄ
に溶解したものを使って、Ｗａｋｓｍａｎ培地中３０℃
４日間実癩例６と同様にストレプトミセスＴＭ５１１で
処理した。

以後、実施例６と同様に処理し、得られた生成物をアセ
トン−ヘキサン混液にて再結晶した。

収量８７ｍ９．ｍ、ｐ−２１９〜２２１°Ｃ実施例 １
０ ベータメサゾン１７−ベンゾエート〔１７α−ベンゾイ
ルオキシ−９α−フルオロ−１６β−メチル−１１β、
２１−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３，２
０ジオン〕の製造ベータメサゾン１７，２１−メチルオ
ルトベンゾエート〔９α−フルオロ−１６β−メチル−
１７α、２ｌ−（１’−メトキシ−１′−フェニル−メ
チレンジオキシ）−１１β−ヒドロキシ−１，４−プレ
グナジェン−３，２０−ジオン）（ｍ、ｐ−１６９〜１
７２°Ｃ）２００７７１１？をアセトン１０ｍ１に溶解
し、Ｗａｋｓｍａｎ培地中、３０°Ｃ６日間実施例１（
ａ）と同じような方法で、ストレプトミセスＴＭ５１１
と処理した。

以後、実施例１（ｂ）と同じような方法を用いて生成物
を分離し、アセトン−エーテル混液で再結晶した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 部分構造式 （式中、Ｒはアルキル基またはアラルキル基を示し、Ｒ
   ′は低級アルキル基を示す。 ）を有する１７α、２１−ジヒドロキシ−２０−ケト−
   プレグナン系ステロイド １７α、 ２１−ＪＪＪ伏オ
   ルトエステルを加水分解して開裂する、ストーブ＋−−
   。 セス属に属する菌株を、前記環状ステロイドを含む培地
   で培養し、培養物から 部分構造式 （式中、Ｒは前記と同意義である。 ）を有する１７α、２１−ジヒドロキシ−２０−ケト−
   プレグナン系ステロイド １７−エステルを採取するこ
   とを特徴とするプレグナン系ステロイド １７−エステ
   ルの製法。