JPS5920229A - 強化されたオプソニン活性を有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木ブも明は、治療に用いるための？Ｉ′ｉ川な組成物に
関づる。＊光明の更なる目的は以下の記述から明らかに
なるであろう。なお木明ＩＩＩ　ｉ！にｊ３いて部及び
バーセン１−は断らない限り重量によるものとする。

フィブロネタチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｌｎ　）又は冷
不溶性クロプリンは、いくつかの最）丘の鞠説、雑誌及
び臨床（ｉ）１究の主題であった（　Ｍ　ｏｓ’５ｅｓ
ｓｏｎら。

５２１−５２８．１９７９）。

内皮細胞、上皮細胞及び腹膜大食細胞を含む種々の細胞
によって生産されるこの物質ｔよ細胞内マトリックスの
主成分として多分必須である。循環フィブロネクチンは
分子量約１５００００の糖蛋白分子であり、ジスルノ、
ｒド拮合′（連結されｌζ凡ぞ等しい大きさの２木の分
子鎖から４【つむいる（　ｌｖｌ　ｏｓｓｅｓｓｏｎら
、同上）。フィ７’　Ｌｌネクヂンは細胞と細胞の含着
を中介する、細胞を基′ｊｑへ固定し且つ拡散させる、
細胞の移動を調ｆｌＤする、フィフリノーグン及び大食
細胞のコラーゲンへの１：Ｊ加を中介する及びある神の
粒子に対しく７Ｉフソニン（ｏｐｓｏｎｉｎ　）又は（
ｌ加因子（ａ目ａｃｌｖｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒ　）どし
Ｃ作用りる点にｉ１５いＣ重要であると考えられる（上
記参考文献）。ひどい外Ｉｍ又は大きな太閤ＩＪ、血漿
フィブロネクチンを減少さけ、またフィブロネクチンを
含有り”るクリ１」プレシビテ−１−の注入によつで正
常にリ−ることのＣきるΔグソニン欠陥（ｏｐｓｏｎｉ
ｃ　＋１ｅｆｅｃｔ　）を随伴する（ＩＲＯ旧＋Ｉｎｓ
ら、同上、及び５ｃｏｖｉｌｌｅら、同上）。壬のよう
な治療は、心肺機能、ショックの補正、及び曲の血液学
的因子の正常化に著るしい改善をもたらし、フィブロネ
クチンの器官及び微小面Ｗｔ　Ｉ／ｃ合性にＡ３　＋ノ
る重要な役割を示唆した（　３　ｃｏｖｉ　ｌ　Ｉｅら
、同上）。

細胞内皮系（ＲＥＳ）とは、相体中に散在ｊ−るが、血
液に含まれる微粒子物を１ンガルフする（　ｅｎｇｕ　
Ｉ　ｒ　：食作用４るン酋通の能力を有づる単核細胞の
系に関して使用される。これらの細胞は、１ぺＣが循環
単核細胞に由来し、多くの器官系に見出されるが、特に
牌、リンパ腺及び肝臓にお（〕る固定組繊細胞要素どし
Ｕ　ｉｆｉ！ｌ　ＳＩ？！されている。ＲＥＳはフィブ
リン、フィブリンモノマー、内生毒素、血小板凝縮物、
損１易された細胞要素、バクテリＶ、ウィルス及び抗体
−抗原複合体を含む微粒子物の血液を消浄し且つ解毒ｇ
゛るために、身体の１次宿主防禦機構の１つとして機能
づる。この重要な宿主防御系の血管は潜在的に有害な微
粒子物を血液中に保持づることに通し、この結果血管の
透過及び浮腫又は微小血管の閉塞が起こり、Ｒ柊的に機
Ｏｕ障害をもたらしうる。

ＲＥ　Ｓに帰ぜられる他の機能は、１ン抗原−抗体過程
及びリンパ細胞との相互作用、１常な抗体メト産ｔ、二
必要とされる過程、及びｉＶ阜な細１１べ免疫の発現、
２）一時的に隆起りる腫瘍に３・ｊりる宿主防御、３）
伺肺の造血の制御、／ｌ）傷の＞ｆ３　ＩＩ！　、及び
５）青の再生、を含む。

Ｉｔ　Ｅ　Ｓが中介りる宿主防御１幾措の抑圧は、手術
後の外Ｈの愚者に、ひどい火傷又は藺をもつ患者に、バ
クテ１鳳７感染、ｔ１１形成、伝染型血管内’ｔ１（集
（１）　ｌ　Ｇ＞　、及び他の変質免疫の病気の患者（
こ見られる。１このような宿主防御の欠陥は、敗血症及
び多器官の不全をもｌζらしうる。ＲＬ：　Ｓ機能にＪ
３（Ｊる不全は、一部これらの状態においＵ　Ｊｌｌｌ
　ｉ上さ１しることが４つかつＣいる血漿フイブ１」ネ
クチンの不足に基づくと考えられる。フィブロネクチン
Ｉ；１１ｆＭの）ｈ謔１の過程に含まれることも公λｌ
Ｉ　Ｆ　ｉｔりる。

フィｆ　１．ＪネクブーンはＩｇＧ、ｌすｔｖＬｃ３１
）及υ′Ｃ５１１と−Ｉ／ｉに、（Φ々の異なるね干物
（こ夕・］リイ）訓ブソニン＜　ｆＪ　Ｊｔｌｌ叉は摂
取因子）として作用する（Δノソ二ン活性）。このΔブ
ソニン活性に幻りる初期の分析は、ラツ１−の肝臓の薄
Ｊ１及び故剖性元素で標識したゼラチン被覆の脂質乳化
液を使用した。この系におい−でヘパリンは必須成分で
あることがわかり、フィブロネクチン分子の、β−メル
カプトエタノールの添加によるアルコール変性の防止が
必要であった。後に、〜１ｏｌｎ旧゛ら（Ｆｅｄ。

Ｐｒｏｃ、、３８，３０３　（１９７９））は、１〜リ
ブシンで処置した及び処置しでないラツ１〜の肝臓の薄
片を用いることにより、ゼラチンで被覆したラテックス
粒子がフィブロネクチンによって肝臓細胞に結合するが
、消化されないということを見出した。［３ｅｖ　ｉ　
ｌ　ａＨｕａら（Ｊ　、　ＥＸＩｌ、　Ｍｅｄ、　、　
　１５３、／１２〜６０（１９８’ｌ））は、続い°Ｃ
フイブＵネクヂンがげラチンで被覆した赤血球細胞の、
人間の単核細胞父は峻膜の大食細胞への付加を中介Ｊる
が、これを消化しないことを発見した。この系の場合の
活性には、フィブロネクチン【ま変質コラーゲン又はゼ
ラチンとの相互作用及びマグネシウムイオンの存在を必
鼓とづ゛る。フイブロネクヂンーゼラチン基質にイ」加
しｌ〔単核細胞は、プラスデック表面１．１（＝Ｊ加さ
れた単核細胞よりも、ｌｕＧ、１　ｕ　Ｍｌ、１Ｃ３１
＋　Ｆ増感サレタｉ　血ＪＡｉ　ヲ４　Ｈ（５稈多く結
合しＩこ。このＪ：うに（二Ｊ　ＪＪＩされた甲核副！
泡は、ｌ：ｃ及びＣ３１〕受イｑの故の増加を示！１．
．即ち、−ノイノ（」ネクチンは、イれ自体間１ヒを１
；ｅ進しないけれど、１り及びＣ３１）のｎ在した内部
移行を促進しうる（　（３ｅＶｔ　ＩａＣｆｌＬＩａら
、同上）。

Ｋｕｕｓｅｌａ（Ｎａｔｕｒｅ　　　、　　　２　７　
６．　　７　１　８　〜７　２０ｉ１９７８））による
更なるｒｉｌｌ究は、標識したフィブロネクチンが黄色
ノドウ球閑に強く結合づることを示しでいる。この効果
は（Ｍ識しく゛すいフィン１」ネクチン、フィンｌ」ネ
クチンを含イうりる血６１．１つ一りルコリミン、Ｄ−
カラク１−リ゛ミン、］−−リシン、塩化プトリウム及
び尿素によ−）（−妨害された。フィン１」ネクチンの
この右聞体への結合に【ま、２両の）Ｊ　′Ｆ７１ンが
必要Ｃなかツｌ’：　６１ｆｊｃ　＜　Ｐ　ｒｏｃｔｏ
ｒらの報告（にｆｉｎ　、　ｌりｅｓ、　、　　２７．
６５０Δ（１９’７９　）　）は、標識したフィブロネ
クチンが黄色ノドウ球菌及びミクＵコツカス・ルテウス
（Ｍｌ−ｃｒｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ）に強く結合り
るが、大胆菌に結合しないことを示しＩ〔。これは高め
られた黄色ブト１り球菌及びミクロコツカス・ルテウス
誘導の好中球の化学発光及び殺バクプリ１７性活性と関
係があった。これらの初期の報告以来、２つの相反ジる
報告が提出された。［）ｏｒａｎら（ｌ　ＩｌＦ、　ａ
ｌｌｄ　ｌ　ｌ１ｌ−ｎ叩１１，１工、６８３〜６８９
　（１９８１））による１つの報告は、標識したフィブ
ロネクチンの結合がいくつかの菌種の細胞蛋白△の含量
に直接比例するから、フィブロネクチンが多分黄色ブド
ウ球菌の表面上の蛋白△に結合す゛るということを示し
た。更に、結合は可溶性蛋白△の添加によつＣ禁止され
た（　５０９６まＣ）。しかしながら、これらのデータ
は、＋＜ＩＩＩＩｓｃ！ｌａ、同上及びＶ　ｅ　ｒ　ｂ
　ｒ　ｕ　ｇｈら、ｌｎｒ、ａｎｄ　　１ｍｍｕｎ、、
’３３．　８１　１〜８１９　　（１９８１）の？１１
告と早退ＪるものであつＩζ。ｌ＜ＬＩＩＪＳ−θｌａ
及びＶ　ｅ　Ｉ’　ｂ　Ｉ’　１１　ｊＪ　ＩＩらは、
フィブロネクチンの結合と蛋白Ａの含量との間に関連を
見出せず、この蛋白の１００μｇ、／ｍｌまでとの結合
を抑制り−ることができなかった。後者のグルー１（コ
、更に人間のｉｌｅすＥルホヌクレｉ’　（１＋ｏｌｙ
ｍｏｒｐｌ＋ｏ＋＋ｕｃｌｅａｒ　）白面法（１”　Ｎ
＝Ｉ　Ｎ　）　ノ単核細胞ＮＶＩＮ）或イｌ；１１１１
６状の大食細胞による、人間の抗１ホ含１ｉ面消の存在
又は不存ａｌ；にａ３りる、成用性標識の黄色ノＩ・つ
球菌の実際の捕捉に関しＣ、フィブロネクチンが−Ｃの
ｆｉｌｌ捉の淀進に重要な役割をし〔いることを承りこ
ともできなかった。しかしながら、これらの後者の１ｉ
ｌｌ究は、フィブロネクチンの粒”Ｉ−（Ｊ加に及ぼす
影響を調Ｉ＼ることが意図され−Ｃいなかったことを指
摘しｌｃ’ｃｌ）れは’Ｊらない。即ちフィブロネクチ
ンが宿主防御ａ構にＪ３い′Ｃ示す実際の役割には論争
が存在しくいる。１）１・ｏｃｔｏｒら（Ｂ　ｌｏｏ＋
ｌ、辷史、６ε３１〜６８７　（＋９０２））は、ノｒ
ノしＪネクチンがＭ［Ｑブドウ球菌の人間のＰ　Ｍ　Ｎ
への（−Ｊ加を中介りるが、バクテリ曳２σ）　Ｉ：’
　Ｍ　Ｎ食作用を１）Ｃ進しないことを示した。

今回、ノイ７’　１１ネクチン及び免疫グログリンを自
／υ（”なる組成物は、フィブロネクチン或いは免疫ク
ロノリンのいずれか単独よりも大きいオプソニン又は粒
子食作用活性にＪ３りる相乗効果を有り−ることが発見
された。結果どして、これらの２つの個々の試剤の治療
能力及び効果は本組成物で使用したときに著るしく且つ
相乗的に高められる。

それ故に木１ｆｉ明は免疫治療で使用づるための？Ｉ′
ｉ現な組合せ生成物に関する。本発明の調製剤は、例え
は非感染性及び感染性の病気であり、生体内Ａプソニン
作用の絶対的又は相対的欠陥の存在する状態の及び細網
内皮系（ｒｅｔｉｃｕｌｏｅ＋＋ｄｏｔｌ＋ｅｌｉａｌ
ｓｙｓｔｅｍ）の異常が存在する場合の病気の予防及び
処置に適用できる。

本発明のある具体例は、免疫りＵプリン及びフィブロネ
クチンを、明々の薬剤単独のオブソニン活性の和よりも
大きい組成物のΔブソニン活性を与えるのに十分な徂て
、或いはフィブロネクチン又は免疫クロッリン単独で中
介されるものよりも大きい食作用を与えるのに十分なｆ
ｆ１Ｆ含んでなる治療に用いるための製薬学的組成物に
関づる。

１（ｉｌとしく、ひどい火傷の患者はフィー）Ｉｊネク
ヂン及び免疫りＵプリン双方の吊を抑制りる。結果とし
ものフイノＩｊ　、？クヂン吊の減少は１＜トＳの機ｌ
１ｌを損い、カンマク１」ノリン用の減少は感染性作因
のＡノ′ソニン作用を６弱なものとりる１、ノイグ１＝
１ネクヂン及び免疫りｌ」プリンの抑制が（ｉｌ　ｆ−
１され（ま、藺の治癒が１（１なわれ、Δブソニン作用
が抑圧される。これらの双方は感染性作因（Ｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｕｓａ１ノｅｎｔｓ）及び全肖的浸入を１゛１（
なつ（闇の転移Ｊ１ｇ殖４助長りる。ｌ：＜　Ｅ　Ｓ　
Ｉ幾１１シも損なわれるから、白液に八−）だ感染性作
因は容易に清浄されり１敗血及Ｕ多器官不全が起こる。

そのような患者の場合、本発明のイ１］合ぜ生成物での
代Ｗｉ泊療は、閑の治癒、オプソニン作用及びＲＥ　Ｓ
　ｌ幾重にＪ３いＣ相乗的に作用りる成分を！うえるこ
とによつＣ非出゛に右利Ｃｄりることが］；明される。

第１図は木光明の組成物の、１０−６ペ・１ルミノール
の１７在トにεＩ＞　ＩＪる１し常光光を示すクラノ゛
Ｃある。

上述のように、本発明の第１１成物は、精製されＩＣ免
疫グロブリン及び精製されたフィブロネクチンを、個々
の薬剤単独のオブソニン活性にりも大きいＡプソニン活
性を生成づる或いは個々の薬剤単独Ｊ：りも大きい感染
性作因（例えば微粒子物、バクプリ１）、免疫釦合体、
ウィルスなど）の食作用を与えるのに十分な吊Ｃ含ｌυ
７：′なる。一般に組成物中の免疫グロブリンの量は、
フィブロネクチン′１部当り約０．０１〜１０００部、
好ましくは約０．０１〜５００部、更に好ましくは約１
〜１００部ＣあるＣあろう。

好適な精製された免疫グロブリン（ＩＧ）としては、静
脈内（ＩＶＩＧ）投与の意図された物質を調製づるのと
同一の方法で調製した物質を用いることができる。ＩＶ
ＩＧは良く知られており、公知の手段例例えば超遠心法
（１３ａｒａｌ（ｄｌＪｌｌら。

Ｖｏｘ　　Ｓａｎｇ、、　　７．　１５７−１　７４　
　［１９６２］　　　）　　　、　　　　ｐｉ−１ｇｉ
　　ｆｉｎ　　　＜　　Ｋ　　ｏｂｌｅｔ　　　ら　、
　　　Ｖｏｘ　　　　３ａｎｇ、。

工夫、９３−１０２　［１９６７］　）、、注意深い分
別（Ｓｃｌ＋ｎａｉｔｌｃｒら、　　ＶＯＸ　　３ａｎ
ｇ、、　　３　’Ｉ　、　　’Ｉ　４１−１５１［１９
７６Ｊ）、　　酵素改変ｆ　Ｆ　ａｌｌｅｙら。

迂２　、　　’Ｉ　５９−１６　’Ｉ　Ｃ’Ｉ　９７７
　Ｊ　）　、　ｆｒ４造改変（Ｂａｌ’ｆｌｌｌｆＩｌ
ｌｌｌ　　ら、　　ｆｖｌｏｎｏｇｒ　　、△１ｌｅｒ
（Ｊｙ、　　史、３３９−６０［１９７５］）、化学改
変（３ｔｅｌ＋ｈａｌ＋。

ＶＯＸ　　５ａｌｌＬ、　　２８．　４２２−４３７　
１１９７５　］　　）　　；　Ｍ　ａｓｕｌ＋ｏ　　ら
、　　Ｖｏｘ　　３ａｌｌｑ、、　　３２　、　１　７
５−１８　’ｌ　［１９’７７　］　）　、　ａｌｌｄ
　還元及びアルキル化（Ｐ　ａｌ＋ｊ＋ｅ＋＋ｌ＋ａｇ
ｅｎら、Ｕ、８．４Ｈ’ＦＷ！３９０３２６２号）によ
って調ＩＰＬｌることができる。曲の１＼／１０生成物
はト配番号の米国性ｉ’ｌ’　３９６６９ｆ）（３：４
’１６５３７０；４１６８３０３：４１８６　’ｌ　９
２　：　／１２７２５２　’Ｉ　：　４２７６２８３　
：　３１１６６３６８；３９１６０２６；３９２０５８
０；／１１５／ｌ８１９：／′１２１６２０５：、′３
６０７８５８；３７／１５１５５；３７６３１３５；３
（１０８′ｌ　８９　：　Ａ　ＯＥ５９５７１　：　４
０　’７５１９３　：　４０８２７３４　１０９３６０
ｃ３：４１１８３７９；４１２４５７Ｇ：４１２６６０
５：４１３７２２２；４１６０７６３：４１６４４９５
；及び４２５６６３１に記；ホされＣいる。

使用しうる他のＩＧの分別法は、多電解質親和性吸着、
米国特許第４２４６０８５　＠に開示され−Ｃいる如き
大規模な電気泳動、イオン交換吸着、ポリエチレングリ
コール分別などを含む。しかしながら、Ｉ（Ｉ　Ｇ、　
　Ｉ（Ｉ　Ｍ、　　Ｉｕ　ｔｖｌ、　　ＮＩ　Ｅ又はＩ
ｑＤ或いはその亜種を含／νてなる免疫グロブリンを、
人間又は人間以外の起源から分別するいづ゛れかの方法
が本発明にＪ′３いて使用しうる。またＩｕの治療学的
に活性な断１４”　を例えばＦｃ、Ｆ（Ｉ又はＦａｌ＋
フラグメンＩ〜も水光明の範囲内に包含される。

上；ボの１へての刊行物及び特許の開示は本明細儲に参
考文献として引用される。

生物」二学的技法、即ちモノクロナル（ｍ０１１０ＣＩ
−ｏｎａｌ）抗体又は相変えＤＮＡ技術を用いＣ製造さ
れる精１’ｌ　Ｉ　Ｇ生成物も意図される。

精製されＩこフィブロネクチンの製；聞に対しＣは多く
のノ）法が開示され一℃いる：　Ｅ　ｎ＋７ｖａｌｌら
、ｌＩ＋ｔ。

Ｊ、ｔ、；ａ＋＋ｃｅ＋’　　、Ｖｏｌ、　　２０．　
２　　（１９７７）。

Ｍｏ　ｌ　ｎａ　ｒ　　ら、　　Ｂｉｏｃｌ＋ｃｍｌｓ
ｔｒｙ　　、Ｖ（１１，１８，３９０９（１９７９）　
、　Ｃｈｅａｔら、７！（＋＋ａｌｙロｃａｌ１３ｉ−
ｏｃｌ＋ｅｍｉｓＬｒｙ、　Ｖｏｌ、　７９．　１４４
−−−１５１　（１９７７）　’、　　Ｍｏ５ｓｅｓｓ
ｏｎら、　　Ｊ　、　　Ｂ　ｔｏｌ　　、Ｑｌ＋ｃｍ、
。

Ｖｏｌ、２４５．ＮＯ，２１，５７２８−５７３６（’
Ｉ　　９７０）、Ｖｉａｎｔｏ　　ら、　　Ｂ　１ｏｃ
ｌ＋ｅｍ、　　Ｊ　、　　。

Ｖｏｌ、１８３，３３１−．３３７　（１９’７９）、
Ｕ。

Ｓ　、　１７ｊ　ＩＴ第４２　’Ｉ　Ｏ５８０号及び第
４３　’Ｉ　５９０６号及び米Ｉｌｌ　１＃＋；’ｒ願
第１２７３＝１０号。−フィブロネクチンの治療上活性
なフラグメントｂ本発明の範囲内に含まれる。

循通ｔｔｆｆ　１３Ｉ！ＪされたフイノＬ」ネクチン及
び免疫り１」７リンを含む本発明の組成１υｊは、面９
１中（こ通、Ｉｉｊ見出される他のくＩｉ白鷺を実？１
的に含１しない、叩らそのＪ、うなくｌｉ白冒を１５％
父はそれ以ト、好ましくはＩ　ｆＪ％叉は−ＣれＬスト
て−しか含イ１しない。しかしながら、組成物に他の蛋
白質例えばフィブリノーゲン又はＣ１〔１を、特別な環
境のもとて必要とされるり１」き量Ｃ混入することがで
きる。

本発明の好適な生成物は、静脈内投与に適当ひある治療
に用いるための無菌の製薬学的組成物である。生成物は
、凍結乾燥の形で適当な希釈剤で再組成化して使用づる
ことができ、或いは水溶液の形であってもよい。

本弁明に従って凍結乾燥した生成物を再組成化する場合
には、凡その生理学的条１′１に対して一般に認められ
ている及び／又は政府の規制“Ｃ要求されＣいる如き物
質を含有していてもよい無菌の希釈剤を用いることもで
きる。この観点にｄ３いて、無菌の希釈剤は、生理学的
に許容しつるｐＨを得るための緩衝剤、塩化す１〜リウ
ム、及び／′又は生理学的に許容できる及び、／又は人
間に用いて安全て゛ある他の物質を含有することができ
る。一般に、静脈内注射に対づる物質は、食品及び薬品
の関連省庁で確立された規制に適合゛リベきである。本
弁明の生成物の蛋白Ｖ］の調型は重用・Ｖｔ；む１阜１
１（１こ、ｂいで杓０．　’Ｉ　”□３０９６、りＩ’
　：Ｌ　シ＜　ＩＬＬ　Ｉ’Ｊ　’Ｉ　”−’ｌ　り　
％Ｐ　ｉｔうるべきＣ−ある。

本弁明の製薬学的組成物は、凍結乾燥した生成物の再組
成化に関しＣ上述したものと同一の物質の多くを含有り
る水溶）１投の形のｂのひあテ）（もよい。免疫クロノ
リン又は）−Ｃノ１コネクブ−ン１こり］づる安定剤を
必要に応じて含有することも本弁明σ〕範囲に含まれる
。例え゛ば、木組酸物、は米国性、ｉ′［第１１１８６
１９２号又は第４０８９９４４号【こ記）ホされ（いる
如く糖又は糖アルコールのＪ−二）なＩ？Ａｙ）＜化物
も含有しつる。必９１ならは、本弁明の組成物は第１１
１８　（３−１９２４（参考文ｉ！ｔｌｉとしく引用さ
↑しる）の牧示に従つ−ＣＣシル〜−スを含イｊしうる
。

感染性の旧炎ウィルスを含まない生成物を投与！Ｉイ）
ことがｌｒ）商ｅある。この観点に（１ハ）（、本ｙテ
明の組成物又ＩＪフイノＬ１ネクチン１）１独＋１１１
１炎σ、）感染性をｉｔｉｌｉす゛るために、例えば滅
菌により、即ら杓６０　′ｃ父はそれ以上の如ぎ温度に
約”ｌ　０１１１’ｊ間又はそれ以上加熱プ°ることに
よって処置してもよい。

水組成物中の蛋白１４を熱に対して安定化さけるには、
Ｎ水化物を単独ぐ或いはアミノ酸又は他の公知の安定剤
と相合ヒて使用づるとよい。この目的に対しては、単、
二又は三糖類例えばアラビノース、グルコース、カラク
１−−ス、マル１〜−ス、フルクト−ス、フィボース、
マンノース、ラモース、クスロースなど、或いは糖アル
コール例えばツルじ１・−ル及びマンニ１−−ルなどを
、０．１〜１０％蛋白質含有の溶液１ｍｌ当り約０．５
〜２．４９の聞で、炭水化物として使用することができ
る。

上述のように、本発明の生成物は治療の目的に１史用し
うる製薬学的調製剤に混入しうる。しかしながら、「製
薬学的調製剤Ｊは、木明細由の場合に広い意味において
−１）Ｉ！？療の目的に対してばかりでなく、技術的に
公知の薬剤又は診断に対して或いは組織培養に対し℃°
使用される本発明の蛋白質組成物を含む調製剤を包含プ
ることが意図される。

）ｈ療の用途が意図される製薬学的調製物はフィブ１」
ネクチン及び免疫りＵプリンを、治療学的用（゛、即ち
予防的父は）ｈ癒的な健康の尺ｊ腹にＩｇ＋蚊な（６）
て゛含ｈリベき（ある。製薬学的調製剤を試薬又は診１
１７ｉに用いる場合には、それはフィン“１」ネクチン
及び免疫りＵプリンをＲ＋（薬又は診ｉ１’Ｊｉ用？ニ
ー含ＰｉリベぎＣある。

実施例 次の実施例は上述の本弁明を更に例示する。用いたＩｊ
法は現存の方法の改変法７：″あった。

確立されＣ′いる放射性標識のバクプリ＼〕捕捉法（Δ
ＩＩｃｅ（ｌ　　ら、　　Ｊ　、　　ｌ　ｎｖｔ団ｏｆ
、Ｍｅｔｌ＋ｏｄｓ、　　２　（３。

３３５５〜６３　（１９７９））、ケミルミネッレンス
）人（Ｈｅｎｕｎ　ｉ　ｎｇら、　　Ｊ　、　　ＣＩｉ
ｎ、　ｌ　ｎｖｅｓｊ、、　　５　Ｑ　。

１３７９−０７　（１９７Ｃ３）　、及びＢ１’ｙｉｌ
ｌＨら。

ｌ　Ｉｌｌ　Ｉｌｌ　１１１１０面ａｌ’ｍａｃＯ１ｏ
（Ｉｙ　　、　　３．　１９＝−２９（’１９８１））
、及びグループＢの連鎖球菌の食作用的捕１；Ｃを計１
ｄｌ＋するための肉１１ＲＭ　１ｇ３１ｉｆｔ倹査法（
１−１ｃｍｍ　ｉ　＋＋ｇら、同上）を用いた。これら
の検問（−用い１．：材層は、Ｉ＼／ＩＧ（木明細轡に
参考文ｔｌｔＡ　Ｃ引用される米国時！ｉ′［ｆｆｉ　
３９０３２　（３２月及び第４１８６１９２号の方法で
調製）及びフィブロネクチン（本明細用に参考文献とし
゛（引用さｆしる米国特訂願第１２７３／１０Ｊ’Ｊの
方法ＣＲＦＩ　Ｍ　）によってオブソニン作用でさる■
型グループＢの連鎖法菌属（ＲＵＳ）を含んだ。

リーベての工作は、人間の食作用細胞（ＰＭＮ）を液体
媒体に懸濁させて或いはこれをＵラヂン被覆のオーバー
スリップ（ｏｖｅｒｓＩｉｌ））に付加して行なった・
げラヂン被覆のガラス製オーバースリップ（１８Ｘ１８
ｍｍ、１番）は、暖Ｕラチン（Ｓｉ−ｇｍａ　Ｃｂｅｍ
ｌｃａ１社）の２％溶液中に浸して調製しｌζ。このオ
ーバースリップを、使用前に１８時間、室温で放置し、
調製物を４８時間以内に使用した。

故割性Ｉｆｐ、識実験の場合、マックコイ媒体中［３１
−１コヂミジン（５マイクロキコ一リー／ｍ１〉を添加
し又は添加しない【バクブリＶ有）媒体を夜通し生育さ
せ、洗浄し、Ｉ　Ｘ　１０”コロニー形成用Ｉｎ／ｍｌ
　（６２０μｍにおいて０Ｄ＝０．９＞まで５］η！Ｊ
　した。Δ／ソニン作用前に、ｂ々川に［（〕識ｌ１幾
体を（３０’ＣＦの熱’ｅ　２１１１間に亘り死ｉｐＨ
さμｌζ（△ｌｌ＋・０（１ら、ＩＦｉ３Ｊ−〉。

バクブリ１ＺｆＪ機１本を、ノイブ１」ネクチン及びＩ
１０ど相合ｌ物中にＪ５いて並びにこれらの調製物甲独
中にＪ３０で、３７℃ぐ６０分間回転しながらΔゾソニ
ン作用１こ供しＩＪ（Δ１１１・ｃｄら、同上；！Ｉｅ
ｎｌｎｌｉすら、同上：　Ｂ　ｒｙａ＋＋ｔら、同上）
、、Δブソニン作用混合物は３．４Ｘ’ｌ・０？右１１
！１４１コロニー彩成単ＫＬ　ＣＦ　ＩＪ　＞　、、／
　ｍ　Ｉの濃度℃のクルー１′ＢのｉＵｉ　ｔ１４　Ｉ
ｆｆ　ｉｉ　３　ｍ　ｌ、ＩＶＩＧ、−７イア’　Ｕネ
クｆ−ン、或いは両方の相合ｌ物を、全容量４ｍｌ；Ｊ
：Ｕひ金石した。マイク［」ネクチンの、単独（の及び
Ｉ＼／ＩＧとの相合ｌＩＣの量は１００及び２００　μ
１１　、”　＋１１１であり：　ｌ　Ｖ　Ｉ　Ｇを１０
１ｉｕ　／ｎｕの淵１哀（゛使用した。

次い（°有（媒体をＩ）　Ｂ　Ｓ中においＣ洗）Ｖ１シ
、媒体１９９　　（Ｇ　ｒａ＋ｕｌ　　　ｌ　５ｌａｎ
ｔｌ　　１３　ｌｏｌｏｇｉｃａｌｓ社）中（こ２゜５
　Ｘ　’ｌ　（、）　’　、・’　ｍ　ｌのｔｎ度で１
り懸濁した。

成人０月）　Ｍ　Ｎを標準法（Ａｌｌｒｅｄら、同上及
び１−１　ｅｍｍ　＋　１１（］ら、同上）で分離し且
つ上述の如く使用しＵ　１８ｎ＋ｍｘ　４８ｍｍのガラ
ス製Ａ−バースリップ上にＩＩ一層を調製した。前述し
ｌζようにこのオーバースリップは２％のゼラチンで処
理して又は処理しないで使用した。１１着してない細胞
を３０分間の培養浚に洗い出し、オブソニン１′「用せ
しめた１？？Ｉ識ハクプリｔｙｏ、５ｍｌを添加した。

９０又は１８０分間の間隔て、オーバースリップを激し
く洗浄して消化されてないバクプリ１フを除去し、６１
のアクアゾルを金石する泪数管ヒン中に入れ、３　ｅｃ
ｋｍａｎｌ　Ｓ　−８０００シンデレージヨン・力「ン
ンターで１０分間３１数した。消化された夕固体からの
ｆり着物を微分する他の研究では、シ１−カラシン（ｃ
ｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ）　−Ｂ　＜Ｓｉｇｍａ　　Ｃ
ｈｅｍｉｃａ１社）を５μｇ／ｍｌの濃度で使用した。

この試薬は、消化を防止するがバクテリＶの食細胞への
１＝Ｊ加に影響しないことが報告されでいる（　Ｚ　１
ｌｒｌｅｌ・ら。

Ｐｒｏｃ　、Ｎａｔ−Ｉ　、△ｃａｄ　、３ｃｉ、　Ｌ
ＪＳ△、７０：８’１４−４８．　１９７３　；ｌｙｊ
ａｌａｗｉｓｔａら、ＹａｌｅＪ　、　　［３ｉｏｌ　
　１Ｍｅｄ、　　、　　±４　野　２０Ｇ−３（Ｊｏ、
１９７１　　：　Ｚ　ｉｇｍｏｎｔｌら、　　Ｅ　Ｘｌ
ｌ、　　Ｃｅ１１　１’（Ｏ３，、ヱメし：３８３−３
９．　　’１９７２　：　Ｐｒｏｃｊｏ＋゛ら、同」二
）　。

）りれたΔ−バースリッグを検査もし、Δ−パースリッ
プ当りの１１着した食作用細胞の数を接＋１ｒＪ　Ｉｎ
マイク１」メーター（′決定した（△１ｌｒｅ＋Ｉら、
同上）。

次いで消化された右態体のバーレン１〜を、放射性カウ
ントにより及び関連づるバクテリ１７に関するＰ〜ＩＮ
のバーレン１〜の肉眼での３Ｔ　Ｉ＋ｌｌｉにより決定
した。

敢割性標識の捕捉実１験に加え（、上ｊホの如く調製し
た）備副ゾソ二ン作用さｉｔ　／こ牛さく゛いる無１悟
識バクアリ−７にｉｉ１呈した人間のＩ）　Ｎ−Ｉ　Ｎ
ににるケミルミネツヒンスの発生ｔｔ　ｉｆ価した。こ
れらの検問ては、弁理１した人間０月”ＭＮ（約５Ｘ１
０６）を、１１Ｈ１色の適し！、−旧数管ヒン中におい
（−予備Δプソニン作用された生きているバクテリ＼７
　（ｌ　ｘ　’Ｉ　Ｏ’−□”　ｎｌ　ｌ　）　０　、
　５　ｍ　ｌと混合した（　ｌ−１ｅｍｍ　’＋　ｎｇ
ら）。コのｌＦ＋　８４は細１１３をＣａＣｌ２含む１
）ｔｍ）ｅｃｃｏのｌ）　１３８３．５ｍｌの全容器中
に懸濁させて行なっｌζ。ビンを直ぐにシシヂレーショ
ンカウンター中に置き、１０分ＩＬ’ｌ隅ｒ２４０分よ
ての全期間旧教した。

結果を下表及び第１図に要約Ｊる。

実験ＩＶＩＧＣＬＦＮｂＩＶＩＧ＋ＦＮ１　　　　４４
％　　　　０％　　　　５ｏ、３％２　　　３３％　　
　　ｏ、＋％　　　　７１．１％３　　　　３３．７％
　　　３．５９６　　　　４８．２％平均＋ＳＤ　　　
３９．０−１−　（ｉ、２　　　Ｌ２＋　２．０　　　
５０．ｆ３＋＋２．６１＋、　１００１１０　、’ｍｌ
　テＯ）　Ｆ　Ｎ第２表 肉ＩＩＩＪ　ｒＭ’　ｌ１ｌｌｌシた及び／ＪＩ　ＱＪ
性＋＝　ＦＮ’ｊＡのバクデ１月ア捕１１ｉ：”にＪ：
　ル９−ｆグｌ１ｌＧＩ３Ｓｌ：３Ｊ　９ルＩ　Ｖ　Ｉ
　Ｇ及（／Ｉ”　ＮのＡブソニン酒１′ト 標識した　　　　　　門ｊ１１！バクテリＶハクテリ１
７の捕捉　　を含む［〕〜ＩＮＦＮｂ　　　　　　　　
　３．５　　　　　　　６Ｉ　Ｖ　Ｉ　Ｇ　ｌ−Ｆ　Ｉ
’ｌ　　　　　４８　、２　　　　　３３ａＪプソニン
）１２合物中１　ｏｎｌｇ、’ｍｌｒノＩ　Ｖ　Ｉ　Ｇ
ｂ　　ｙｊグソニン混合物中１００　μｕ　、−”ｍｌ
Ｔ：σ月：Ｎ※実計ｉ　１ｉｆＪからハッククラランド
のカラン１へ数を差し引いた。

第　　３　　表 Ｉ　Ｖ　Ｉ　（３及びΔブソニン作用したタイプＩＩＩ
　（３［３Ｓ　”に露呈されたＩ）ＩνＩＮにＪ：っＣ
発生けしめたビークツ７ミルミンツＬンス 実　験　　　　ピークＯＬ、ＣＩ）ＭＸ　１０−’１＼
／ＩＧα　　ｌ−Ｎｂ　　　ＩＧＩＶＮ−１＝Ｎ１　　
　　　’１３００　　　４５０　　　２７００２　　　
　　１５３　　　　４４　　　　　２２４３　　　　：
３０　（ｊ　Ｏ−７１／Ｉ　　　Ｏ２９（１※実゛、験
１ｉ１Ｊからハッククラ・ノンドの力１ンン１〜数を差
し弓１いた。

ＦＩ　　　Ｉ　Ｖ　Ｉ　Ｇ　’ｌ　Ｏｍ（１１１１１、
）　　Ｆ　Ｎ　ｉ　ｆＪ　Ｏμｎ　、−ｎ１１第１図は
、Ｉ　Ｏ−’　Ｍルミノールの存在下における、分単位
の時間に対する挿々の組合せ物のケミルミネッセンス（
ＣＰＭＸ’ＩＯ−”）をグラフ的に示づ。線は次の通り
意味を右する。

１ｍ　　　　　　　１−一【 ’＋０　　　１）ＭＮ単独 １２　　　　ＰＭＮ＋バクテリア １　　／Ｉ　　　　　　　　ｄｏ、　　　−ト　ＦＮｌ
　６　　　　ｄｏ、＋シトカラシンＢ　（ｃｙｔｏＢ　
）１　Ｆ３　　　　ｄｏ、　＋ｃｙｔｏＢ　−１−Ｆ　
Ｎ２０　　　ｔＪｏ、　＋Ｉ　Ｖ　ｌＧ ２２　　　　ｄｏ、十ＦＮ＋ＩＶＩＧ ２４　　　　ｄｏ、　−１−Ｉ　Ｖ　Ｉ　Ｇ　十〇Ｖｔ
０Ｂ２　（３ｆｌｏ、　＋Ｉ　Ｖ　Ｉ　Ｇ＋ＦＮ＋ｃｙ
ｔｏＢＦ　Ｎ及びＩＶ’ｌＧの組合Ｕ物は、理解される
ように、ＦＮ　（４１，１５＞７ｉＨ７ＥＶＥＧ　（紳
２０＞ＩＮ独のケミルミネッンスの総和よりも大きい白
血球ケミルミネッセンス（食作用の間接測定）　（線、
２２）を与えた。付加してない消化は梓２２と２４を比
較することによ−）Ｃ示される。１：Ｎ及０・１＼／Ｉ
Ｇの相合Ｕ物は、　ｃｙＬｏＢの存在にＪ３い（、実質
的に減少したノノミルミネッレンスを示し、従−〉（ハ
クプリＩＩの、単なるｆ」加Ｃはなく（消化を示した。

【図面の簡単な説明】

第′１図は本発明の組成物の、１ｏ　−ｑ　ｘ−＋ルミ
ノールの存ａ１・にｉＪ３１Ｊる化学発光を示すクラフ
Ｃある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、精製された免疫グロブリン及びフィブロネクチンを
   、免疫グロブリン及びフィブロネクチン単独のΔブソニ
   ン活性の総和よりも大きいオプソニン活性を組成物に生
   じさぼるのに十分な苗で含んでなる製薬学的組成物。 ２、無菌水溶液である特許請求の範囲第１項記載の組成
   物。 ３、免疫グロブリン及びフィブロネクチンの濃度が約１
   〜３０重量、・′容量％である特許請求の範囲第２項記
   載の組成物。 ４、免疫グロブリンが静脈内免疫グロブリンであり、免
   疫グロブリン及びフィブロネクチンの１１度が約５御１
   ５ 第２項記載の組成物。 ５、免疫グロブリンが筋肉的免疫グロブリンであり、免
   疫グロブリン及びフィ′ノ１」ネクチンの）ＦＡ度が約
   １　（Ｊ−２　０重量５，・′容旦９６り゛ある特ａＴ
   　Ｍ求の範囲第２項記載の組成物。 ６、フイフ゛Ｕネクヂンｔｆｆ１部当り免疫グロブリン
   ０、０１〜１　０　０　０劃ｆｉ　ａｌｌを含りする特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。 ７、フィブＵネクヂン重徂部当り免疫グロブリン０、１
   ・〜５００川吊部金倉有りる特３１［請求の範１１ＪＩ
   第６項記載の組成物。 ８、フィブロネクチン１ｍ部当り免疫クロ１リン１　−
   　’１　０　０重布部を含有す゛る特許請求の範囲第７
   項記載の組成物。 ９、免疫グｕ１リンが免疫自消りＬｌ−ノリン゛Ｃｄ５
   る特許請求の範囲第１項記載の組成物。 １０、免疫面）ｈグロブリンが静脈内投りに適当Ｃある
   ′４Ｊｇｉ′Ｉ情求の範＋ｆｌ＋第９項記載の組成物。 １１、静脈内に性用しうる精製免疫グ１」ノ′リン及び
   ノｆノ１」ネクチンを、車用７／車ｉｄ基１１ｔ−にお
   いＣ、ノイ７’　［Ｊネクヂン′１部当り免疫グロブリ
   ン約０．０１〜１０００部の割合で含んでなる、損なわ
   れた細網内皮系機能及び感染性作因の２１７２２作用に
   対する減少した能力を処置するための静−扉内投与に適
   当な製薬学的組成物。 １２、重量／用量曇１１匙において、フィブロネクチン
   １部当り免疫クロッリン約０．１〜５００部を含有ｇる
   特許請求の範囲第１１項記載の組成物。 １３、重量／重邑基準において、フィブロネクチン１部
   当り免疫グロブリン約１〜１００部を含有する特許請求
   の範囲第１１項記載の組成物。 １４、免疫グロブリン及びフィブロネクチンの合Ｂ１の
   ｉ９度が重量／′容最基準で水性媒体巾約１〜３０％で
   ある時８′［請求の範囲第１１項記載の組成物。 １５、損なわれた細網内系（環能及び感染性作因の２１
   ７２２作用に対づる減少した能力を有する患者に特許請
   求の範引１１項記載の組成物を投与することからなる該
   患者の処置法。 １６、精製されＩζ免疫グロブリン及びフィブロネクチ
   ンを、免疫グロブリン及びフィブロネクチン単独の７１
   ／諷〕二ン作用の紛、和よりら人さい感染１ｊ（ユ作囚
   の食（′）−用を生じさけるのに十分４１■（含ん（な
   る！′ｊ共学的組成物。 １７、Φ量、／ｆｆ１ｆｆｌ基１１（においで、］（）
   ＬＪネクチン１部当り免疫グロブリン約０．０１−１　
   （、）　００部を含有りる特ｈ′ｆ請求の範［１４１第
   １６項記載の組成物。 １８、免疫グロブリン及びフイブＵネクチンσ〕合乳１
   の１１青度が■■重量・容量基準で水性媒体中物゛１−
   ・３０９６η“ある１■′［請求の範囲第１６項記載の
   組成物。 １０、ノイフロネクチンを相乗作用奥で含む、免疫グ１
   」プリンを含／υＣなる組成物。 ？（）、ノイｆ１．Ｕネクチン′１部当り免疫グし１ノ
   リンＯ１’１−ｒ３０　（Ｊ部を含有りる！＊　Ｋ’ｌ
   請求の範囲第′１９−項記載の組成物。 ２１、炭水１じ物を更に含む特許請求の範囲第１９項記
   戦の組成物。 ２２、炭水化物の債が約１〜２０川爪？６であるＦｆ　
   ｉｉ１舶求の範囲第２′１項記戦の組成物。