JPS59146597A

JPS59146597A - Production of interferon-like polypeptide

Info

Publication number: JPS59146597A
Application number: JP58019327A
Authority: JP
Inventors: Toshiaki Tanaka; 利明田中; Takuhei Kimura; 拓平木村; Susumu Matsuda; 進松田
Original assignee: Toray Industries Inc
Current assignee: Toray Industries Inc
Priority date: 1983-02-08
Filing date: 1983-02-08
Publication date: 1984-08-22

Abstract

PURPOSE:To produce a polypeptide resembling interferon by a recombined material, by adding a zinc compound to a medium. CONSTITUTION:In cultivation of a recombined material obtained by cloning a structural gene of interferon, a zinc compound is added to a medium. In this case, an interferon-like polypeptide is a polypeptide similar to interferon derived from a human fibroblast. The zinc compound added is zinc chloride, zinc sulfate, or zinc acetate, and the amount added is about 1mug/ml-10mg/ml.

Description

[Detailed description of the invention]

本発明は、組換えＤＮ’Ａ技術によシ得られる組換え体
を用いたインターフェロン様ポリペプチドの生産方法に
関する。インターフェロン（Ｉ　ＰＮ　）はウィルスや二本鎖Ｒ
Ｎ　Ａなどの刺激によって、動物細胞が産生ずるつ・ｆ
ルス増殖抑制あるいは抗癌作用など広範な生物活性を有
するある種の蛋白質であり、その作用は種特異性を有す
ることが知られている。ヒトインターフェロン１ｄ現在６種類の存在が知られて
いる。即ち白血球細胞等が産生ずるβ型、線維芽細胞等
が産生ずるβ型およびリンパ球等が産生ずるγ型があり
、化学構造および生物活性に差異があることが証明され
ている。ヒトに対して有効なインターフェロンはヒト細胞によっ
てのみ生産されるため、大量のインターフェロンを得る
には大きな困難が伴って来た。最近組換えＤＮＡ技術の
発達によりＩＦＮ−、１．　　、　　　ｉ　　　Ｉパ　
Ｎ　−β　、　　ＴＦ’Ｎ　　−７・　ｉ４　大）１易
　］）−１、１・−ス１．　、？、と微年′１才パｆ　
ｆｌｉいて生産−Ｊ−ることか可イ止となり、大−：１
（の１．・乏−ノエロンを生産する見通しか母ら−）Ｌ
るにい／こってい占（Ｇｏｃｄｄｏｌ　、　Ｄ、　ＶＣ
イ　；ｉｆ、Ｎｕｃｌｅｉら　Ａｃ　ｉ　ｃｌ　　Ｒ（
ゝ３（ゝ旧Ｃ１）、旦　、４０５７（１９ε３（］）、
Ｎ　；ｌ　ｉ旧ｃ、　２８７．４’１１　（１９８０）
、Ｎ；＋Ｉ旧Ｃ２９５、５０３（１９Ｂ　２　）　ｊ。し２かし７Ａ・かり、従来技術によもインク−ノエ（１
ンの）１−産力価り」、末に−（−分一〔、ぐ；、く、
ｉ該力仙１０Ｄ　Ｉｉ、＋１−４．か要永さ！−１−Ｊ
′い。。木完明渚Ｌ）（−１、ｔｌ！？；造遺伝子１ｊりｒ−−
−’−ＩＵ　Ｃ／＝大１１罠氏ｌ四のイ紋生物による・
１ンターフーｒ−・１ンｉｓｉ　−ｌ＋リペゾナドの４
Ｌ産力価向−にについで倹訓したＩ、Ｊ：果、旧シｊ−
の培地を用いることに、にり力価か名［−７く白土する
（８とを見昌デ１じ、不発り１１　Ｋ到ｆ’ｆシ／こ。 −１：Ｖ、わち不発り月にｔ、インノーフ上「ノン４．
ｉｌ；徨６１″丈仏子を、りＵｌ−ン化した大ＩＬ！、
）菌卑）の組換２え体（’）土、・］１渣に、１、・い
−（、培ｉ也中にｌＩＤ−６，：＼化合１吻をイ奈力ｌ
］　−１’　／；、）ことを特徴と才ど）、組換え体に
よる（、／ターフエＶ１ン４ｉ−ＩＮリベー・′天１・
の生産力；去である。斗発明のインタ−ノエThe present invention relates to a method for producing an interferon-like polypeptide using a recombinant obtained by recombinant DNA'A technology. Interferon (IPN) is a virus or double-stranded R
When stimulated by NA, animal cells produce sluggish f.
It is a type of protein that has a wide range of biological activities such as inhibition of virus growth and anticancer activity, and its effects are known to be species-specific. Six types of human interferon 1d are currently known to exist. That is, there is a β type produced by white blood cells, a β type produced by fibroblasts, and a γ type produced by lymphocytes, and it has been proven that they have different chemical structures and biological activities. Since interferon, which is effective for humans, is produced only by human cells, it has been very difficult to obtain large amounts of interferon. With the recent development of recombinant DNA technology, IFN-, 1. , i I pa
N -β, TF'N -7・i4 large) 1 easy ]) −1, 1・−s1. ,? , and a 1-year-old paf
It is possible to stop production by fli, and it is large: 1
(No. 1. Scarcity - The prospect of producing Noelon? From the mother -) L
Gocddol, D, VC
i ;if, Nuclei et al. Acl R(
ゝ3 (ゝOld C1), Dan, 4057 (19ε3(]),
N;li old c, 287.4'11 (1980)
, N; +I old C295, 503 (19B 2 ) j. However, compared to the prior art, ink-noe (1)
) 1 - production price', at the end - (-minute [,gu;,ku,
i Rikisen 10D Ii, +1-4. Kanamega! -1-J
'stomach. . Kikanaki Nagisa L) (-1, tl!?; Zogen 1jri r--
-'-IU C/=Due to the large 11 traps and 4 imprints.
1interfu r-・1-isi-l+ripezonado 4
I, J: Fruit, former Shij-
By using the culture medium, the garlic titer was -7. t on the month, Innofu ``Non 4.''
il; A large IL made from a 61" long Butsuko!
) recombinant 2 forms of (') soil, ・] 1 residue, 1, ・i-(, cultivar ID-6,:\compound 1 proboscis)
] -1'/;,) Characteristics and talents), recombinant (,/terhueV1-4i-IN ribe, 'ten1,
The productivity of Doo Invention's Internoe

【−・ン様ポリベグｆｌ−とは、
インターフェロン構造遺伝子でり【−・−ン化し、た大
ｊ１ζＩＪｉ）１ｕの微生′吻か生産するインター７コ
ー■］ンてあり、ＥＦＮ−βの、場合は分子量約２　ｕ
、　Ｄ　００のポリベゾチトであ４）。ヒト細胞が生産
−］４るインター７コー「１ノは糖タノバク質であるか
、・ｒノターンｊ’　Ｉ−＋　７遺伝子でクローンｉｆ
；　Ｌ１５−犬、：１１″届°］７ケとの微生物がノイ
ー件する１ンターノエＩ−・７１．’、１．１２．１１
を屁１合してい４・いポリベフチトてあり、この１．’
（ｆヒｌ−六ｉｌｌ胞か生産−４゛る天然のｉｉ　Ｊ−
”　Ｎと′、“１１つ’／ｊＱ勿宣て惠り、従つ−（（
し学的性質、生物ごコ、、的・１ノー・ｉｉ［ｉ／ｌ−
、：’；ｒいて両者の間に！・：を若干の相異か認、７
ｐｉ　Ｅ）れ６０゜一１ンターノより　／　仔ポリペプチドは、たとえ（二
［］１・Ｉ　Ｎ　−β（つ」易合に（：１谷Ｄ　ｃ、の
方法（ＰｒｏｃＮ　ａｌ　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　
　７７　、５２ろ口（１９８０））によＪＨ＋次の様に
して製造１゛ることがてきる。〈ンター了７　ｘ　「＋ンーβを産生するヒト線に４ｆ
芽Ａｎｔｉ　ｌｊ’ｇ　カ＝、ｍ−ＲＮ　Ａ混合”ｌｙ
ｔ　’ｒ　Ｍ−ｆｓｌＬ　Ｌ、ｃ　ｔｉ、　ＩＩＣＹＪ
応するｇ−１）　Ｎ　Ａを作製して、大腸菌のフジスミ
　（’　＋１１日’Ｊ　５２２４トｊ：ｉ’ｊ合τ゛≦
−）−ム　＜　ｙ　＞−、ｙ　ｙ−ｒ】７−　β、７・
−）　（、’１７　：＜：’ｌ−・、′ｌ′□ｉｉべ１
４寸ｔつ大腸１ｚｉ　ｋζ：イ１する。この時１、・・
）−ノエＩコノの（ｌ′〜造ユ＋、１４伝子か太１１？
ｔ　ｌ’ｉ）ｌ中て発しｔ、’、　Ｌ、　−Ｃ□ｉ　、
’電ンーノニＶ１ンタ／バイ“・質を生７ヴＩＬする１
−）ｂ　！’（７１’：口１、＋１１仁軸遺伝イのヒ流
にＩ）　Ｎ　Ａを出−屯Ｎ　Ａ（・５−１弘′ｌ７−ｊ
−る）［コ七−・ノーｉ”ｉｔＦ、列く５−結合させ、
か一つ’Ｉ−ｔ）ｃｍ　−ＲＮ　Ａかり、）クソームと
Ａ”ｌ’−１”１１．’　Ｌ７　’−ｔ−，、夕／゛か
−り質に翻訳心５ノ匹：、　Ｓ　ｆ）配列、′、□、：
　、”　？九゛Ｊ’ｉζつ必要か５１）　　リ　１、　
−ぞ　め）アこ　九・、）（・］　、　　丁／“　１−
！　　→　　−一　タ　−　　、　　Ｓ　］〕　門己　
・２１ｊ　　の１’　７％ｆ、　”、（ｉｙ　、９−７
７　ｖ：＋　Ｈ−βの’Ｓ；’　：’？ｌ：　遺４Ｅ　
’Ｊ’　”：　結合さ−ｔｒ　ｚＬｔ　。（−こて１４ｊ／こフロー１−−一ター領域とＩＦＮ−
βＯ’：’ｉ’７ｊ’１゛１．−遺１゛□・、＋９と、
Ｂ、、　Ｊ、ｌＪで−）フシメミトて犬１１Ｌｂ　ｌｈ
：ｌ　１−Ｉ　Ｊ、Ｉ　１口にＨ−、＜Ｈ，ツノ・７つ
・・１．ど）０、ｌＮ７ｒ−ｉ’：ｐ；−Ｃｆヨ、いｊ
］’Ｊ”　、Ｑグｙ　”　４．′Ｍ　Ｉ）　ＩＩ１　、
’＝　ｌ−７−Ｃ１ｉ１１　Ｋ、　Ｔ、　Ｅレ−８−２
７ソ）（ミｌ−ぺ肩）ＫへＩ−４フジスミ　ｉ・ゾ３４
１：υ・ｒ”’）　Ｉ）　Ｃ−Ｊ’Ｌ　（Ｌ、　ｔｉ）
ｉ、　；、Ｉ、、の（Ｂ）＜な値アロ□をイ］場づしフ
ジスミ［パ１必る。ｐ　］（１”仁−６ノー・−＼ぐｌ−’　！ｔｒｊ−，
←’、’ｒ　ｏ　ｃ　ｄ　（１＋川　らか（・Ｉげ、し
］、−７’　５　スミトｐ　Ｐ　Ｉ　Ｉｉ’　ｔｒｐ　
、６９　　と本質的に同一・の）１゛へ浩のフンスミＩ
・であく）　、　　（］）　、　Ｖ　、Ｇｏｃｄｄｃｌ
ｃｌ、ｔ　、　ａｌ、　、　Ｎｕｃｌｃｉｃ　Ａｃ１（
ｌ　Ｒｃｓｃ旧Ｃｈ、８４０６８（１９８０））すなわ
ら、りＢ１もへ２２のト；ｃ、ｏ　Ｒ，＋　。１、−１　ｉ　ＩＩ　ＣＩ　Ｉｌｌ　　シリ１′１７［
［部位の間に大腸菌のトリブトファノン＋１モー之・−
、Ｓ　Ｉ）配シ１ｊ　、ｐ、、　、１、ひ］ＦＮ−βの
１’ｌ’ｌ　ｉ：、’Ｌ遺伝子τ」、１１）ズクレ８チ
計断片をｉｉ＋１人口六−１１−シ青を１、）、つ３、
Ｓ　Ｄ　７１１夕：；かし］’　Ｉ・＋　Ｎ　−βの本
４（Ｋ反［ン１１ｂｉｊコドン（！＼’ｌ”０）−１て
の１矛、、・、基配列（１］、−ζ−１，−）７靜１、ｐ　Ｉ＜−＼１・ｌ　；−ｉ　１）　ｉ＜　Ｔう−８の
ＳＤ配列と開始コドン１）、ｌ　　）Φ塩、ｊ１（−配
夕）：ｉじ’１．”　Ｔ　Ｇ　ＧＴ　（−”、　’Ｌ”
　Ａ　Ｇである９塩占（−１・・１己・′メＩＪ　−（
Ｊ　ｉ１′”Ｈ′、　３私−１じだ＋ｉｆ；ユ？工合−
づ、ｌＪつ１）　？二のようにし−で・（Ｂｙ←−、ｆ
Ｌ　／、：、：グフスミトりＮ二相い’１・：　、　ｃ
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　−）ＩＢｉ　［）　１　（１〕ＫＴ　３−１□３）あ
るいζ・」、ト〕ｃｏｌｉ　　　：　　１（１３１（コ
　　１（ｐｉぐ　Ｎ・１−　４　　　）　　か　イ号し
　　れ　２）（。形ａ、リリ々換し７でｍられプこ組換え体は、最初Ｆ・
Ｔ３坏！５地で前培養し、この−夜培養［１ｔ１体を、
カザミノ酸１係、クルコース１％を含有するＭ　９培地
に２〜５％植閑した後に培養する。本発明で使用することのできる培地としては、具体的に
はＬＢ（酵母エキスｏ５％バクトドリブｌ−７１，０％
、食塩０５％、グル：＋　、−スｏ、　２％、ｐ　Ｉ−
Ｉ　ＺＯ〜７．１’）を代表とする天然培地、お上びへ
・１９（リン酸１カリ０６％、リン酸２ナトリウム０６
係、食塩、０５％、塩化アンモニウム０１％、グルコー
ス、硫ｅマグネシウム０．０２↓ 飴）、Ｉ）ａｖｉｓの培地、Ｖｏｇｃｌ＆；入’０１ｌ
Ｄｅｌ培などの合成培地と、更にそれにカザミノ酸、酵
母゛エキスなどを加えた半合成培地等が挙げられるが特
にこれに限定されるものではない。本発明は、この培地に亜鉛化合物を添加することを植機
とするが、亜鉛化合物としては例えば耐酸亜鉛、臭化亜
鉛、塩化亜鉛、フッ化亜鉛、蟻酸亜鉛、ヨウ化亜鉛、硝
酸亜鉛、過塩素酸亜鉛、過マンカン酸亜鉛、炭酸亜鉛、
サリチル酸亜鉛、硫酸亜鉛、亜硫酸亜鉛、チオノアン酸
亜鉛、バレリン酸亜鉛、β−フェノールスルホン酸亜鉛
、次亜リン酸亜鉛、酒石酸亜鉛、６７ツ化ケイ酸亜鉛等
か挙げられる。この中でも塩化亜鉛、硫酸亜鉛　、：Ｈ
＋、酸亜鉛が特に好ましい。也鉛化合物の添加方法としては、最初から培地に添加す
ると、大腸菌の生育を阻害するため、大腸菌が１−９Ｔ
定の瀝度に達してから、すなわち、対数増殖後期に添加
するのが好ましい。また１回だけの添加では数時間後に
インターフェロン生産力価の減少が見られる場合がある
ので、数七しく、特に１０　μｇ／　ｍｌ　〜１００　
ｔ、ｚｇ　／　ｍｌ　（７）添加か好−ましい。培養方法としては、好ましくは通気攪拌培養で行い、ｐ
ｆ−１は６０〜ＺＯの任意の点にアンモニア水で調節す
る。その後所定の○Ｄに達した時点でインドールアクリ
ル酸１０〜２０μｇ　／　ｒｎｌを加え、培養を継続し
、適当な時点で培養を終了する。本発明方法により、従来法の２〜５倍のインターフェロ
ン様ポリペプチド生産力価向上をするととがてきる。亜鉛化合物の効果は、（１）インターフェロンが亜３１
八に対し規和性を持つことから、糾胞内でのインターフ
ェロン分子の安定化への寄−’＋、（１：）ＲＮ　Ａポ
リメラーゼの活性化による、インターフェロン蛋白の合
成促進などが考えらノする。以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。実施例１組換え体大腸閑１℃、　ｃｏｌｉ　ＨＢ　１　Ｄ　１　
（ｐＫ’ｒ”、　３−８）のＬＪ３培地（１％バクトＩ
・リントン、０．５％ＮａＱＩ、０５％酵母エキス、０
．１％グルコース）での−夜培養菌体を、１％カザミノ
酸１％グルコースを含有する１ｔのＮｉ　９培地１０．
３％に、ｉＬＰ○４．０．６　％　Ｎ　ａ　２　ＨＰ　
Ｏ、、，０１％Ｎ１−１．、　ＣＩ　、　０．０５％Ｎ
ａＯＩ　、　１ｍＭＭｇ５Ｏ，，０，０９ｍＭ　　Ｃａ
Ｏ１２）に接種し、２６ｔＢミニジヤーて培養した。６
０℃て溶存酸素制限にならない様に通気攪拌培養を行い
ｐＨはアンモニア水により６５に調整した。０Ｄ５５ｏ
−１０になった時点−ごインドールアクリル酸２０μｇ
　／　ｍｅを加えインターフェロン生産を誘導し、更に
一方には塩化亜鉛５０μｇ　／ｍ／！を添加し、培養を
継続した。その粘果２５時間目には塩化亜鉛無添加のも
ののインターフェロン力価が１２万０／ｍｌであるのに
対し添加したものはろ６万ＴＪ／ｍｅで、６倍の力価向
上が見られた。第１図にその培養経過を示した。実施例２１２、ｃｏｌｉへ４Ｍ２９４　　（１）ＩぐＴ３−８）
を用いて、実施例１と同じ培養を行った。塩化亜鉛無添
加の場合（では１１万（Ｊ　／　ｍｅ　１添加の場合に
は２３万（Ｊ／ｍｅの力価が得られた。実施例ろ他のフラスミドｐ■ぐＭ４を保持する、Ｅ、ｃｏｌｉＨ
，Ｉ３１０１　（ｐＫＭ４　）を用いて、同様に培養を
行った。塩化亜鉛無添加の場合には６８万Ｕ／ｍｅ。添加の場合には９０万（Ｊ／ｍｌの力価が得られた。１、・′１？、をｆ−ｊつだ。玲、・、化亜鉛無添ノＪ
１］の場合に、ｌ　２　ｙ５しｌ　、”　１ｉｔ（・、
添加の場合（ｌ′（二８．５万［−］／・〃ｉｉの力価
が待’：ｌ：）：Ｆ”ｉ−ｆメロ−０、夫ｈ（ｕ例５１・：、　ｃｏｏｌ　ｌＩ［ｒＪ　１　Ｑ　１　（ｐＩ
ぐＭ４）七へ−「１−１いて塩化亜、α′＋’ｌ（ｌ　
　μ紅　／　　ｒ＋＋毛、　　４Ｉてｉ（’欠イ奈九’
：、：　　（６１月齢　）　　し　て　１；・”へ　養
　７１で１３名９７計、・１８則及コク・その低培五条１！１は丈ｈ１Ｆ３例１（
て同し、：ごと）ら、１．Ｉｆ　’、’ＪＩこ−、２５
　ｔｈ”４間口には庁、化亜（沿・１ル（冷力［１のＪ
ｌう合５５　）５　ｒＪ　／　ｍｅｌ、１、ヌ次添７Ｊ
ｌ　（ｌｃ　Ｊ、＄９合、１７０　、）Ｊ　Ｌ１７’　
ｍｌ’　（、ｊ）力１曲が召られプこ。、１、二　、１．イ「シ　イ刈　６Ｅ、　ｃ−ｏｌ　ｉ　　ＭＭ　２９４　（ｐ−ｒ＜Ｍａ
　）　　’５ｒ用いて実施１グ１）！；　！　ｌＩ；）
　ｉへ（・（二がへ養生・イボない、巧７・メ）六、ｔ
１角局盃、化１１ＬＸ’ｌ’Ｊ久ｌ・、（小力ＬＩ＝１
５ノラ１３７ｙ）５　ｔ／ＣりＪし、りｊ６カし’　／
　ｍｌの力価７彦　イ＋、Ｉ’　　Ｅ：）　　：ｉと　
／ζ　５、実施例７ ■・）白＋ｌ　ｉ　　ＨＩ３１０１　（ｐＩ（へ４４）
を用い塩化亜鉛、１１′Ｉ酸亜（（六硫１酸【１１Ｌ鉛
につい下の添加効果杏倹１β１した例を表１に示す。培
養方法（・１１、Ｉ’ｌ　ＧＯＩ　ｉ■−■Ｂ１０Ｂ１
０１（ｐＫのＬ　Ｂての一夜培養曲体をカリ　り７／１
唆　１　楚、　乙′　ル　ニ・　−−−ス　１　係　・
ン　菖　むＭ　　９　　土８１也・ン・１植（，１′、
１シ１″ζ−９、Ｓ　Ｉ］　’ＩＣでフラスコ中回骨、
培養を１−１い、（月）９．ｏ＝　１　Ｆ、］　ｔ、て
なつノこ時点−（′、（７）’−ルーブクリノし酸２０
　ｚｉｇ　／　ｍｅ　と各設［及の伸（１１化合物ｊ　
−と−）ｔ　−’、と一；１′ｌ−添　力ＩＬ；メ、二
　。　　ぞ　ヮつ）　−１１−４−１音　養　庖　ｊゾ
に　（・・す　５　１１５Ｈ’ｉ、、ｌ　Ｌ−１，１０
時間目（・こつい−Ｊ　Ｔ　Ｉ”　Ｎ力価を６＋１１定
［−７・７こ・ビＩ′、１あ／・−りのＩ　Ｆ　Ｎ力価
（Ｕ　／　ＯＤ６．、ｏ）　＋（１：、伸侑化合物をに
へυｆｉ　した場合に（−よ、全ての場合（４二；」１
’、・、冷力ＩＩ　ＣＱ　ｉｏ：］２−　フイ音の比７
占叶向−ヒか見られ／ｖ。以　　１・　　余　　白図面の簡ｊ゛１１な；況りＩ−ｊ[--N-sama Polybeg fl- is
The interferon structural gene is produced by microbial proboscis of 1 u, and the molecular weight of EFN-β is about 2 u.
, D 00 polybezocyte 4). Produced by human cells - ] 4 Inter 7 Cor 'Is 1 a glycotanobacter? - If cloned with r no turn j' I-+ 7 gene
;L15-Dog, :11'' Notification] 7 cases of microorganisms 1 turn I-71.', 1.12.11
There is a fart 1, and there is a 4-high polybeft, and this 1. '
(F Hill - 6 ill cells produced - 4 natural II J-
”N and ′, “11”/jQ, despise and obey-((
Scientific properties, biology,, target, 1 no, ii [i/l-
, :';r between the two!・: There may be slight differences in 7.
pi E) is 60° from 11 ntano / the child polypeptide can be obtained even if (2[]1・IN-β(tsu) easily (:1 valley Dc, method of (ProcNal Acad, Sci.,
77, 52 Roguchi (1980)) JH+ can be manufactured as follows. 〈Interryo 7 x 4f to the human line that produces
Bud Anti lj'g Ka=, m-RN A mixture"ly
t 'r M-fslL L, c ti, IICYJ
Corresponding g-1) Prepare NA and strain E. coli Fujisumi ('+11 days' J 5224)
-)-mu <y >-, y y-r]7- β, 7・
-) (,'17 :<:'l-・,'l'□iibe1
4 cm t large intestine 1zi kζ: i1. At this time 1...
)-Noe I Kono's (l'~Zouyu+, 14 den or Tai 11?
t l'i) uttered in l, t,', L, -C□i,
'Dennoni V1 Nta/Bai'・Quality raw 7VIL 1
-)b! '(71': 口1, +11 in the inheritance of I)
-ru)
11. 'L7'-t-,, 5 people in the evening/゛-like quality translation mind:, S f) Sequence,', □,:
,”?Do you need 9゛J'iζ51) li 1.
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7 So) (Mi l-pe shoulder) to K I-4 Fujisumi I・Zo 34
1:υ・r”') I) C-J'L (L, ti)
i, ;, I,,'s (B) p ] (1" jin-6 no・-\gl-' !trj-,
←','r oc d (1+kawa Raka (・Ige, shi], -7' 5 Sumito p PI Ii' trp
, 69 (essentially the same as) 1゛Hehiro's Funsumi I
・Deaku) , (]) , V , Gocddcl
cl, t, al, , Nuclcic Ac1 (
l Rcsc old Ch, 84068 (1980)), i.e., ri B1 mohe 22 to; c, o R, +. 1, -1 i II CI Ill 1'17[
[Escherichia coli tributophanone + 1 mo.-] between the parts
, SI) Arrangement 1j, p, , 1, h] 1'l'l i of FN-β:,'L gene τ', 11) Zukure 8-chi total fragment ii + 1 population 6-11-shi blue 1, ), 3,
S D 711 evening:;Kashi]'I・+N-β book 4 (K anti[n11bij codon (!\'l"0)-1,..., base sequence (1), -ζ-1,-)7靜1, p I<-\1・l ;-i 1) i< T-8 SD sequence and start codon 1), l) Φ salt, j1(-sei) ：iji'1." T G GT (-", 'L"
9 salt fortune telling that is A G (-1...1self/'me IJ -(
J i1'"H', 3 I-1jida+if; Yu? Koai-
zu,lJtsu1)? As in the second, - (By←-, f
L/, :, :Gufusumi Tori N two-phase '1・:, c
:ol i: 1-IBl 01 te 1 warm reno 1 shi 11
! coli
-) IBi [) 1 (1] KT 3-1□3) or ζ・'', To] coli: 1 (131 (ko 1 (pigu N・1-4) or A number 2) (. Form a, recombinant 7 and m recombinants were initially F.
T3 Kyo! 5 pre-culture, and this night culture [1t1 body,
Culture is carried out after inoculating 2 to 5% on M9 medium containing 1% casamino acid and 1% crucose. Specifically, the medium that can be used in the present invention is LB (Yeast Extract O5% Bactodrib I-71.0%
, salt 05%, Glue: +, -suo, 2%, p I-
I ZO~7.1') is a representative natural medium, Oagebihe 19 (1 potassium phosphate 06%, disodium phosphate 06
Salt, 05%, ammonium chloride 01%, glucose, magnesium sulfate 0.02↓ (candy), I) avis medium, Vogcl &;
Examples include, but are not limited to, synthetic media such as Del culture, and semi-synthetic media in which casamino acids, yeast extract, etc. are added thereto. In the present invention, a zinc compound is added to this medium as a planting machine. Examples of zinc compounds include acid-resistant zinc, zinc bromide, zinc chloride, zinc fluoride, zinc formate, zinc iodide, zinc nitrate, and zinc compound. Zinc chlorate, zinc permancanate, zinc carbonate,
Examples include zinc salicylate, zinc sulfate, zinc sulfite, zinc thionoate, zinc valerate, zinc β-phenolsulfonate, zinc hypophosphite, zinc tartrate, and zinc 67-silicate. Among these, zinc chloride, zinc sulfate, :H
+, zinc acid is particularly preferred. The method for adding lead compounds is that if added to the medium from the beginning, it will inhibit the growth of E. coli, so if the E. coli is
It is preferable to add the compound after a certain level of fertility is reached, that is, at the late stage of logarithmic growth. In addition, if the interferon is added only once, a decrease in interferon production titer may be observed after several hours.
t, zg/ml (7) Addition is preferred. The culture method is preferably carried out by aeration agitation culture,
f-1 is adjusted to any point between 60 and ZO with aqueous ammonia. Thereafter, when the predetermined ○D is reached, 10 to 20 μg/rnl of indole acrylic acid is added, culture is continued, and the culture is terminated at an appropriate time. The method of the present invention can improve the interferon-like polypeptide production titer by 2 to 5 times compared to conventional methods. The effects of zinc compounds are (1) Interferon is sub-31
Since it is regulated to do. The present invention will be specifically explained below with reference to Examples. Example 1 Recombinant colon, 1°C, coli HB 1 D 1
(pK'r'', 3-8) in LJ3 medium (1% Bacto I
・Rinton, 0.5% NaQI, 05% yeast extract, 0
．． 1% glucose) - An overnight culture was grown in 1t Ni 9 medium containing 1% casamino acids and 1% glucose.
3%, iLP○4.0.6% Na 2 HP
O,,01%N1-1. , CI, 0.05%N
aOI, 1mM Mg5O, 0.09mM Ca
O12) and cultured in a 26 tB mini jar. 6
Aerated agitation culture was carried out at 0°C so as not to limit dissolved oxygen, and the pH was adjusted to 65 with aqueous ammonia. 0D55o
-When it reaches 10 - 20 μg of indole acrylic acid
/me was added to induce interferon production, and on the other hand, zinc chloride 50μg /m/! was added and culture was continued. At 25 hours, the interferon titer of the mucilage without zinc chloride was 120,000/ml, while that of the mucilage with zinc chloride added was 60,000 TJ/ml, a 6-fold improvement in titer. Figure 1 shows the progress of the culture. Example 2 12, 4M294 to coli (1)IgT3-8)
The same culture as in Example 1 was performed using the following. In the case of no addition of zinc chloride, a titer of 110,000 (J/me) was obtained; in the case of 1 addition, a titer of 230,000 (J/me) was obtained. coliH
, I3101 (pKM4) was similarly cultured. 680,000 U/me when zinc chloride is not added. In the case of addition, a titer of 900,000 J/ml was obtained.
1], then l 2 y5 and l ,” 1it(・,
In the case of addition (l'(285,000 [-]/・〃ii titer is expected':l:):F"i-f Melo-0, Huh(uExample 5 1.:, cool lI[rJ 1 Q 1 (pI
M4) To 7-'1-1 and subchloride, α'+'l(l
μ red / r++ hair, 4Itei ('Kitsui Naku'
:,: (61 months old) Then 1;・" Feeding 71, 13 people, 97 total, 18 rules and richness, its low culture 5 rows 1! 1 is height h1F 3 cases 1 (
Same as above, Goto et al., 1. If','JIko-,25
th”4 frontage is the Office, Hua (Long-1 Lu)
55) 5 rJ/mel, 1, 7J
l (lc J, $9, 170,) J L17'
ml' (, j) One song is called and puko. ,1,2,1. i "shii kari 6 E, c-ol i MM 294 (pr<Ma
) Executed using '5r 1g1)! ;! lI;)
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5 Nora 137y) 5 t/C ri J, ri j 6 kashi' /
ml titer 7hiko i+, I' E:) :i and
/ζ 5, Example 7 ■・) White + l i HI3101 (pI (to 44)
Table 1 shows an example in which the following additive effect was added to zinc chloride, 11'I acid ((6sulfuric monoacid [11L lead)].Culture method (・11, I'l GOI i
01 (pK of L B) 7/1
Instigation 1 Chu, Otsu'runi---su 1
N irises M 9 soil 81ya・n・1plant(,1′,
1 SI 1″ζ-9, SI] 'IC in flask middle gyrus,
Culture 1-1 (Monday) 9. o = 1 F,] t, at the time of the test - (', (7)' - lubucrinoic acid 20
zig/me and each facility [and development (11 compounds j
-and-)t-', and one;1'l-addition IL;me, two. zo ヮtsu) -11-4-1 sound Yoi 庖 j zo ni (...su 5 115H'i,,l L-1,10
Time (・Kotsui-J T I" N titer to 6 + 11 constant [-7・7 Ko・Bi I', 1 a/・-ri's IF N titer (U / OD6., o) + ( 1:, when the compound is converted to υfi (-yo, in all cases (42;'1
',・,Cold Power II CQ io:]2- Ratio of F-sound 7
Fortune-telling - Hikarere/v. Below 1. Simple outline of the blank drawing I-j

Claims

[Scope of Claims] (]) A method for producing an interferon-like polypeptide, which comprises adding a zinc compound to the medium in culturing a recombinant in which an interferon structural gene has been cloned. (2) The method for producing an interferon-like polypeptide according to claim (1), wherein the interferon-like polypeptide is a polypeptide similar to interferon derived from fibrotic cells. (3) The method for producing an interferon-like polypeptide according to claim (1), wherein the zinc compound is subsalt chloride, zinc sulfate, zinc acetate. (4) Addition amount of zinc compound is 1 μg/m6 to 10 μg/m
The method for producing interferon-like lipopeptide according to claim (1), wherein the interferon-like lipopeptide is me.