JPS59135884A - 成長ホルモンを産生する哺乳動物由来セルライン及びこれを製造するためのベクタ− - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、成長ホルモン（Ｇｌｌ＞の本質的特刊を右り
るホルモンを合成及び分泌し得る高等ｔ（核生物、特に
吐乳動物の細胞の新規で安定なしルラインに係る。 本発明は更に、吐乳動物の成長ホルモン特にヒ１〜成長
ホルモン（ｈＧＨ）の特性を右づるタンパクを」一ドリ
る配列を含むベクターに係る。このタンパクは高等真核
生物特に吐乳動物の細胞中て５Ｆ．規可能Ｃある。従＊
この種のタンパクは合成りることができなかったもので
ある。 脳下垂体ひ合成される成長ホルモン（ＩＩＯＩ＋＞は小
児の成長に必要ひある。ヒｌ−に於いＣはヒ１〜ホルモ
ンだりが活性であり、これは現在、小人症の治療のため
に使用されＣいる。ホルモンは死体の脳下垂体ｈｒ　＋
う抽出される。このため供給源が少なく、治療十能求さ
れる叩を満たすことはぐきない。また、火傷，骨折，胃
潰瘍の治療の如き別の用）♂の確認及び開発らできない
。このホルモンの一次構造は以前から知られＣいるが（
Ｃ．Ｈ。 Ｌｉ　　、Ｊ．Ｓ．Ｄｉｘｏｎ及びＤ　、　　Ｃ　ｈｕ
ｎｇ　（　＋９７３）△ｒｃｂ，［３ｉｏｃｌ＋ｅｍ．
　１３　ｉｏｐｌ＋ｙｓ，　１５！ｊ，　９５−１１０
　）　、類似ホルモンが存（Ｕ４ることも考えられる（
Ｕ．、Ｊ。 Ｌ　ｅｗｉｓ等（１９７８）　、　　Ｊ　、　　［３　
ｉｏｌ，ｃｂｃｍ，、　２５３。 ２６７９−２６８７　＞。 ヒ１ー成艮ホルモンは、Ｎ１１２．末端に２６個のアミ
ノ酸延長部を含むプレ小ルしンどし（脳１・７（＋体前
葉の細胞内で合成される（Ｗ．　Ｇ．　ＲＯＳｋａｍ，
Ｆ　。 Ｒ　　ｏｕｇｃｏｎ，　　　１９７９，　　　Ｎ　　Ｕ
Ｃ＋，　　Δ　ａｉｄｓ　　　　Ｒｅｓ，　　　７，　
　　３０５−３２（１）。１９１個のノ７ミノ酸から成
る環状活ｆ１ホル［ンが分泌されるとき前記の延長部が
除去される。 ヒ１へ成長ホルモン遺伝子のり［」一ニングに遺伝子工
学の技術が応用され（’　ｄ３リ（ｃｌｏｎａｇｅ　ｄ
ｕ　ｃＤＮＡ　：Ｗ．　Ｇ．　Ｒｏｓｋａｍ，Ｆ．　Ｒ
ｏｕｇｅｏｎ，既出；Ｄ。 ■．　Ｇｏｃｄｄｅｌ等（　１９７９）　Ｎ　ａｔｕｒ
ｅ　２０１，　５４４−５４８　：Ｊ　、　Δ　、　　
Ｍａｒｔｉａｌ　等　（　　＋９７９）　　Ｐ　　ｒｏ
ｃ．Ｎ　　ａｔｌ　、Δｃａｄ　。 ３ｃｉ．　（ノＳ△　７６，　４２９４−４２９８）　
、大腸菌［−、ＣＯｌｉ中−Ｃブを現］！シむへくり［
」一ンＣＩ）ＮΔを操作リる。 ＱＯＯｄｍａｌｌのチームは細菌由来配列を含むハイブ
リッドタンパクの合成を記載し（いる（、ノ．△。 Ｍａｒｔｉａｌ等（１９７９）既出）　。Ｇｅｎｅｎｔ
ｅｃｈのチームは天然タンパクに比較してト」加メヂＡ
ニンをターミナルＮ１−１□末端に含むメヂΔニン−　
ｈＧｌｌの合成を記載しくいる（　１）　、　Ｖ　、　
Ｇ　ｏｃｄｄｅｌ等（１！１７９）既出）。１（］加ｊ
′ミノ酸は、天然ポルしンの」−ド迫伝了のりＬ端（、
開始」トン（ΔＩ−Ｇ　）を挿入した結束前られる３、
明らかに、長１！１１臨床ｉ１（駒によ−〕（のみ、メ
ブＡ−ン−ｈＧＩＩが天然小ルＬンに比◆☆しくθｒま
しくない特性を右しくいないことが（ｉ１ｆ認（゛き、
場合にＪ、−）（は、何人かの学とが表明したような危
惧をｉｉ’ｊ入りることを確認（〕得る。史（こ、「、
ｃｏｌｉ抽出物からのメヂＡ−ン−ＩＩＧＩＩの精製は
脳１・重ｆホからのｌ＋Ｇ１−１の精製よりら明らかに
ｔｌｌしいこと、特にｌ　９ｆｔ　Ｌ　＜ない副作用の
原因と＜、る細菌由来？’ｊ染物の除去が勤しいことが
判明しＩＣ８ｈＧ　Ｉｔを産生ｕしむへく動物細胞を変
性４る万ｄ１は確かにりＣ′にＪｕｌ　案され−Ｃいる
。例えは、Ｐａｖｌａｋｉｓ等は（１９１３１，Ｐ　ｒ
ｏｃ、Ｎ　ａ目、Ａ　Ｃａ（１，３Ｃｉ。 米国、　７８．７３９８＞　、５Ｖ４０７ａシー９ｃ７
）制御”Ｆ　＋（１配置した　ｈＧｌｌの染色体逍伝丁
を使用し）８解リイクルの際にタンパクを片１１さｔｌ
ｌこ。しがしノ乍らこの溶解リイクルに伴つく細胞の溶
解とウィルス粒子の産１１−とが牛しる。従′）（この
Ｊ、−）４１タンパク産牛１ｊ法は当然、話学的見地か
ら、１′Ｉ容（さるちの（゛はない。 また、ｆミジン−−−１−ノー１！を合成Ｃさないとい
う初明欠陥を石りるマウスの線紐飼細胞（口（″細胞）
を、成長ポルＬシ４１−ト

【」る染１５体填伝ｒど−ぞ
のゾ［−１し−９とをＪ？んＣ゛いる組換体と、デミジ
ン−１゛ノーＬＦ（ｔｋ）ｉ肖イ云了４１≧む）パ択ン
一カーとの双プフ（ｌｉｊｌ　ｌｌｉ？に形質転換さ已
る１１−ノンス小−メーシ、１ンも開示ハれ（いる１、
形′ｆ′ｉ転換細胞は成長ポル［ン特ｆ！ｌをイｊづる
タンパクを検出司能ｈ）（合成し得ることが判明した。 ｒ’ｒ　Ｑｌｉ！は、グルー］　］］ルチ］ｌイドから
成る誘発物質の存りにＪ、っζ増加し得る　（１つ、　
　Ｍ、　　Ｒｏｂｉｎｓ　　等　（１９８２）　　、　
　ｏｅｌｆ　　２９゜６２３−６３１　）。 しｌ−ｔ−＋ウィルス１ＯＮΔを含むベクターを介しく
一うツ１〜成長ポルｔン染色体逍伝子をマウス線紺芽細
胞中に導入りる技術も既に開示され“（いる。し１−１
］ウイルスＤ　ＮＡ（，１これを取り込んだ細胞に形質
転換表現ハ“１をｆ」！うするが、この形Ｇｉ転転換用
現型より成長ポル［ン逍伝子を取り込んだり（−１−ン
の選択がｉｉＪ能になる３、シかし乍ら、成長ポルしン
）真１ムｒは固自のゾロ１シータの制御１・く発現され
（Ｊ３す、クル１．Ｊ−ｉＪルチ■Ｊイ１へによっ−Ｃ
調節され（い／ｊ（、］　、　　ｆ）　ｏｅｂｅｍｅｒ
　　等　（１９８２）　　Ｐ　　ｒｏｃ、Ｎ　　ａｎ。 Δｃａｄ、ｓｃｉ、　ＵＳＡ　２２６８−２２７２）　
、。 しかし乍ら、この上うな誘梵物質が存へしくｂＰｉＩ員
は余りに（、）少４ｆりこれらの技術を−Ｉ業生産しノ
ベル（者えるごどが（−さｋい。史に、使用細胞が腫瘍
形成性（゛ある人−め、ごのＪ、う１．１′細胞を治療
用物Ｖ（の産生に使用り−ることは初めから問題外（・
ある。 従つ（本発明の［１的は、従来技術の全（にイ・１随す
る欠点を除去Ｊること（・ある。より詳細には本発明の
ｌ」的は、吐乳動物の成長ポル−しン（（２１１）特に
ヒトＧ　ＩＩ　（ｈＧ　ｔｌ　）の本質的（１４造ど将
士りどを４ｊ”Ｊるタンパクを多用に産４１−シ得る高
簀真核牛物特に１−１ｊ乳動物の安定なレルーノインを
製造４ることである。しかもこのよう４−ルルノインは
、Ｉ−葉面に１８　Ｆｔ　ｄることが−Ｃさ、ま１．Ｘ
公衆１ｊ１１牛の１１任機関か捉示４る要ｆｌを充犀し
得る。 本発明のセルラインは、Ｉ）ｔｉミソ動物特にリールの
細胞の安定なセルラインであり、このピルラインはＤ　
Ｎ　Ａ　ｆＦＪｉ　１１ヲｒ−７シ’Ｕ　ｔ３す、該Ｄ
　Ｎ　Ａ断片は、成長小ルｔンの特性をイ１りるタンパ
クをＴ１〜１・ｊｌる第１配列をＲ／ｖ−Ｃおり、Ｆｌ
つ好ましくは、転′す゛ノ′ｊ向に関しく第１配列の直
く土浦に、成ＩＱポルしンに通出結合しＣいるジグーＪ
−ルベゾヂド庖１−１・づる第２配列をも含／υ’ＣＡ
；す、史にこのｌ）　ＮＡ１ｔｌｉ　Ｉ：は細胞のゲ、
７ノ、内【Ｊ安定的に絹Ｉノ込まれＣいるかｋは細胞内
（゛安定的（こ発現され、しかも、前記前ｊ１の発現は
、同様に前記細胞内又は前記細胞のゲノム内に安定的（
、二取り込まれた外因性ｆＬ、］　’ｉ：−タの制御Ｆ
　’ｕ”　ｉ＋しる。 以トの記載（゛は、０１１をＩ］−トづる配列の゛′拭
能能発現ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｆｏｎｃｔｉｏｎｎｅ
ｌｌｅ）　”なる用語をしく、１しは使用りる１、この
用６１口よ、該当しルラインに於りるＧｌｌ配列の発ｕ
Ｑ　Ｉｔし力が、外因ｉＩｔ　ｆ［Ｊ七−タの制御ト（
′当該レルノインの細胞の！！、〕１、中に該配列がＦ
Ｊ効（こ組み込まれて）ヱ成される５し現能力と実質的
に同様であり、しかも、この光用能力が後継世代に伝達
され１！：することを意味する。 よｋ、以下の記載に於りる゛成良小ル１ンの特性をイｊ
りるタンパクパなる用品は、該当１１ｉ　１ＦＬ動物の
脳下垂体にＪ、り産１される成長ホルモンのＦＪ界的認
識デス１〜に於い（活性を示し得る全（のタンパク又は
ポリベプＪトを意味づる。これらのＪス１−の例としく
、例えば、Ｉ〕、　Ｗ　、　Ｇ　０１ｌｔ等、　１９８
０゜Ｃａ＋＋ｃｐｒ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、４０，２４
３３及び　１　。　ｌ　ａｒａｋａ　　’Ｆｊ　。 １９８０、　　Ｊ、　　Ｃ１１１１，ａｎｄ　　　Ｌｎ
ｄｏｃｒｉ＋＋ｏ１８Ｍｅｔａｌ＋、、５１゜１０５８
により記載の条１！１でのリンパ腺ｎΦ細胞の増殖テス
ト、又はＦ）、　Ｂ　ａｃｔｚｎｅｒ　等、　１９７２
．△ｃｔａ］−］ｎｄｏｃｒｉ＋ｉｏ１ｍｎ、７０．２
３１−２３８　Ｉｔ二Ｊ、り記載の条イ′ＩＣ０）−メ
ツｌ−ＯＪ）軟骨成長（７）　ｉｎ　ｖｉｖｏ　７ス１
−１又は、Ｃ１Ｖ、　Ｋｙｌｅ　７ｊ、　＋９８２．１
）ｒｏｃ、　ｏｒ　Ｎ＋ｅ　３ｏｃｉｅ１．、ｙｌＢ　
　（−ｘ＋＞ｃｒｉｍｅ＋＋劃ａｌ　　ｌ側ｏｌｏｇｙ
　　ａ＋＋ｄＭ　ｅｄｉｃｉｎｃ、Ｎ　Ｏ。 １６９、３６Ｌ３７５ｉこＪ、り記載のメツＩへＩｌ＋
への受容固定−ｊス１〜かある。 また、パシクノルベゾチ１〜″イする川６１１は、形質
転換細胞中Ｃ合成されｒ、＝Ｇ１１か該細胞のＥをｊへ
ｄ′うし）８地中に分泌されるＩこめの該０１（の能力
ｔＪ　３４　Ｌ。 て作用しく（する仝てのペブＪＥをｐ、味づる３、ｌ＋
　０１１なる略号は、Ｌｌ＋−成長小ル（−ン及びぞの
本７ｆ的特′ｔ！１をイＪりる令でのタンパクを承り。 ｈ　０１−１と対応ジグ゛ナルペブブドとを一コードづ
る好ましい配列は、前記の２１７個のアミノ酸を含むし
１〜成艮ゾレホルモンを」−ドＪるＣＬ）ＮＡから誘導
されＣＡ３す、パシグナルペーゾＬド″は前記の２６個
のアミノ酸延長部から成る。該延長部は、縮性ホルモン
が脳下垂体の細胞から分泌されるとさに活性ポル［ンか
ら分離される１、これらのＣＤＮＡは、対応するメツレ
ンジｌ＝　−ＲＮＡの逆転与°及び（ｑられたＩ）　Ｎ
ＡからメツレＡアトと過当なポリメラーＵどの存在−１
・で二本鎖形成りることにＪ、りそれ自体公知のｙｊ法
で得ることが（゛さる。 また、染色体１．）Ｎ△配列を利用りること１〕考えら
れる。この場合には、特にＣ１）ＮＡどのハイゾリダイ
ゼーションにＪ、っ（染色体１）　Ｎ　Ａ＾１′！列を
先づ゛単離し、染色体１）　ＮＡから切除し、最後に、
後述の条イ′１トＵ”　ｌ）　ＮΔ断Ｊ１に組み込む。 使用と＼れる外因↑！１．−／”　ｌ　Ｉ　［−りは、
大然宿−Ｉ中ＣＧ］−１を−１−ドするｊ真伝ｊ′（、
二通富ｔｉＩ＋＋合し／こ゛内因ｆノド′ゾ【Ｊし一タ
どは別の異イｊるヅ１１シータ（パあり、これから誘合
されｌこメツし〕Ａ　−ｆ　ｌ・配列、例えり、Ｕ　ｅ
　ｌ　）ＮＡは後に、本弁明の′々定ヒル、ツイン中（
機能化される。該プロ七−夕は、受容細胞の起に！（あ
る種及び組織に基い（選択されるのが（Ｊ　＋’Ｊ−Ｕ
ある。 受容細胞が１ノルに由来づるとさ、ＳＶ４０ウィルス由
来の１ｍｌ　（−夕を使用りるのが右利Ｃ゛ある。この
ブ［−１Ｆ−夕についＣは、リルの細胞中（・′隣接）
胃伝ｒの中へ゛Ｉ−７を４」効に開始し１ソる能力をイ
ｊづることが知られ（いる。好ましくは該ゾＩＩ七−夕
は、ＳＶ、’ＩＱウィルスのパ早期（ｐｒｃｃｏｃｃ　
）　”ゾ「１［−夕、即ら、゛小Ｔ　”抗原（ｓｍａｌ
ｌ　丁ａｌｌｔｉ（１０１１）及びパ人−Ｆ′抗原（ｌ
ａｒｇｅ　Ｔ’　ａ旧ｉｇｅｎ）の双りの弁用を通常制
御するプロモータに相当りる。 前記プローし一夕は、形質転換細胞にＪ、るＩＩＧ　Ｉ
−１の１２１牛及び１？゛１地中への分泌に関しＣＲ＋
ニー右利な結果を与えるか、本発明はこの特定−１１−
１シータの使用に限定はされない。例えば、ＳＶ４０の
後期（ｔａｒｄｉｆ）ブ日モータの使用し可能−Ｃある
（これは、タンパ’／Ｖｌ’ｌ　、　Ｖｌ）２　及ヒＶ
ｌ）３　（Ｊ）５Ｆ、ｌａ＆ｉ１ｉ制御りる）。これら
のプロ七−夕と該ｌ［−］−Ｅ−タの人々に結合した（
中々の抗ＩＪ：ｉを−１−トする填伝了どの相幻位置を
理解４るには、ＳＶ４０ウィルスの制限ンツ／４禽照り
れはＪ、い（Ｊ　、　’Ｉ’　ｏｏｚｅ、　Ｅ　１１゜
１）　　Ｎ　　△　　　ｌ−ｕｍｏｒ　　　Ｖｉｒｕｓ
ｅｓ、　　Ｃｏ１ｄ　　Ｓ　ｐｒｉｎｇ１１ａｒｌｏ＋
ｒ　　ｌ　　ａｂｏｒａｔｏｒｙ、ｃｏｌｄ　　３ｐ＋
゛ｉｎｇ　　１ｌａｒｌ＋ｏｒ　　。 三−１−１］−り、　１９８０．　２−５〜へ）。 勿論、Ｓ　Ｖ　４０７　［−＋　Ｕ−タに代えＣ１受容
細胞内ηパ隣接配列又はｉ＋Ｉ制御制御量り１１の転写
を（１を進りる能力をイｊりることが既知ひあるか又は
今後知見されるいかなる他のタイ／のゾ［１モータをも
使用し得る。このようなゾ［１し一タを使用りるど以１
・の結果が（ｑられる。即ら、前記の隣接配列が０１１
特にｂＧ　１１を−」−ドしＵＪ５り好３Ｌ（］＜ｔ３
１同時に該ポル［ンに結合したジグ太ルべｆＪ１・を！
〕−１−ドしくいるときは、前記配列は該グＬ１シータ
と共に受容細胞のゲノムに組み込まれ及び／７又はこの
Ｊ、うに形質転換された受容細胞は実賀的な吊のＧｌｌ
を合成かつ分泌する能力を犯１１１りる。ごのＪ、・う
に冑ら１した能力は以後、同じ■１胞山来の後継（１ｉ
代に伝達７１１ｆｉｌｉ　Ｐある。 Ｏｉ＋記の如き形質転換しルラインは、本発明の１？ル
ライン（ＪよつＣ獲１５１された０Ｆ１合成１゛ｒ↑〕
１が細胞の少なくとも１０１９代に口っく順次伝達され
るとさ“安定″Ｃあると言うことができる。 史に好ましくは、前記前ｊ）はまた　１個以−１−の別
の？ｉｌｉ足配列を含む。補足配列は、−前記外回ｆ１
ゾ１−１七−タの制御ドＣ゛メツレンジｔ・−ＲＮ　Ａ
の９＝Ｊ応部分に転７１され得る少なくと６１個の部分
を含む配列（ａ）と、 −１１，１以１−のポリｉ）デニル化部位を含／ｖ　−
ｅ　ａ３つ好ましくは配列（ｉｆ）の前記部分の転写の
終了部位をも含んＣいるレフメンｌ−＜　　１１）と、
−少なくどｔ）１ｉＩ＾１のインｌ−［−］ンと前記転
７１の際の前記インｉ・ロンの切除に必東な配列とを含
む配列（Ｃ）と、 かう成る。 配列（ａ）及び、・′父は配列（１１＞　ｆＪ、転写゛
／）向に関しく第１配列と第２配列との双ｊノの上流に
存在しＣおり、またイン１へ［−１ンがあるときはイン
１〜ロンの＋ｒＡｊ　Ｌこ存召しくいる。 前記第１配列及び第２配列に対りるーインｌ−１１Ｊン
自体く配列〈Ｃ））の相ヌ・１侍置は、本質的な特ｔ／
１をイＪりるしの（゛はない。インＩ−１，１１ンは前
記第１配列と第２配列との双））のＦ流又は上流のいず
れ（二右−）でらＪ、く、又は自記列内に挿入され（い
（もよい。 種々の？ｉｌｉ　足配列（ａ＞、（ｂ）及び／叉ｋＬ（
Ｃ＞の由来は前記外因性ブ［１ｊ−一夕と同じぐもよく
又は異４ｆつ（しよい。これらの補５Ｊ！配列は特に、
０１−１を一］−１〜ｆ１７．）ＣＤＮＡ又は染色体１
）　Ｎ　Ａ　［ｉ７ｉ　）’＋【こ時宜的Ｃ゛あり冑る
。これらの？ｌＩｉ　’ｔｉ−配列は種々の起腺に由来
し１！Ｉるが、１ｌＩｆ」つの条（′（としく　、？ｉ
ｌｉ　ｉｉｉ配列が異なる由来を右りる場合、前ｈ［！
の如く形成された配列集合体が前記ポリアノ゛ニル化部
位σ〕）−流に転’；’　Ｎ’４　ｒジグノルを−Ｊ−
１ｊ　ｌる部分を含／ｖＣ（Ｘ（ｉ、ｉＬならイ１い。 史に々ｆましくは、１コ１に　１個以ｌの補’ｔＮ配列
自体が５Ｖ４０４；二由来りるか又は１　＋１６１以１
のＳＶ４０山東部分を含む場合、例えばパ小じ道伝ｒ又
は゛′人−ビ′ｊ頁伝了（使用−ゾロセータがＳ＼／４
０の♀則−］ｊ１［−への場合）に属ＪるＩ重接−１−
ド部分か一１分に短縮されるか又は中断しくおり、補だ
配列を取り込んだ細胞によ−）　’ＣＩＩ（Ｉｉ褐１形
成１）１の完全抗原が合成されないＪ、うに配慮りる。 史にり１′ましくは、？ｌｌ１ｈ＋配列は腫瘍形成性を
イ１し得ないタンパク又はベゾチドを産生し百る転写０
１能％　Ｄ　ＮＡに山来りる。この場合、例えはマウス
のα−グＤビン項伝ｆに由来り６１個以上の補足配列を
使用するのが右利−Ｃある。 勿論、場合によつＣは、配列（１〕）をボリノ７デニル
化部１１′ノのＩ・流−Ｃ１１１ム１の補足配列により
延長し得る。この補足配列は、転％ｒ７の１ｊ向（゛こ
れが山来りるＩ）　Ｎ　Ａのポリツノｊゞエル化部Ｋｌ
−１こ続い（ａ、ｉりかつ好ましくは転写終了部位を含
む配列に夕・１応りる。 好ましくは、本発明のレルライン内に安定的に取り込ま
れた（−）Ｎ△断片は、前記の如き配列（ａ）、（ｂ）
及び（Ｃ）の集合体を含む。これらの配列が１体に結合
しζ集合体が形成されたとき、この集合体を便宜十゛′
第３配列′°と相称りる。 注［１リベさは本弁明のレルノインが、）貞伝ｒ；学の
技術Ｃ′形質転換されたＩｋｌｉ乳勅物細胞へ用い（は
めつ１．、Ｔに達成Ｃさない多ＷのＧ１−１を合成しく
（Ｉること（ある。特に有利に使用されるのは、ＳＶ４
０の早期１■モータと該ブ［−１し一夕の制御１・の第
３配列どの双プラを利用ＪるＤ　ＮＡ断）’ｒ　’Ｃあ
る。この第３配列は木質的にマウスのα　グ］１ビンを
−１−ドづるｉｆｆ伝了０少なくと（９１個に山来しく
おりイン１〜１１ンとボリアアニル化部（ずｌとを含ん
Ｃａ３す、好ましくはボリアアニル化部位に転写終了部
位が続いている。４１７られた細胞は、狛（Ｊ多ωのｈ
Ｇｔｌタンパクを産生かつ分泌する能力を′ｅｊりるこ
とが判明した。 史に社用には本発明は、ゲノム【こ組み込まれた選択マ
ーカーを同時に右する１１ら記タイｆのセルラインに係
る。Ｊ、り訂胛１にはマーカーは゛′優１生マーカー″
のタイプであり、形質転換細胞に新しい酵素）＾↑ＩＩ
１Ｂ＝　’Ｊ　ｉＪる能力をノｊえ１７る。このタイプ
の好ましいマーカーは、＝１＝　！ｊンヂンーグアニン
ーホス小リボシル−１〜ランスノ」ラーじを７１−ド−
りる［）Ｎ△配列を含む、、θｒましくは１９性マ一カ
ー自体が先のブ１−１を−９どは別のゾ（Ｊし一夕のｉ
（ｉ　４＆制御小にある。ξの別のグ［１［−タは前記
の第１ブ（１モータと等しく　Ｔ　’ｂ　Ｊ、い。また
、責なる種類のものでもよい。（殺者の場合、別のゾ［
Ｊ七−夕は前δし：第１ブ１−１七−夕の抽出起源１＝
る１つＮＡとは別の天然Ｉ）　ＮＡからＩＩ７られる。 史に場合にＪ、−）（ＬＬ　、第１ゾ１−１七−夕と同
し核酸から抽出され（ｂよい。 例工ｆ、Ｊ、り７　ハクｈ　Ｇ　ｔ−１ヲＩＩ　−１”
　ｉルｒ　ＢハＳ　Ｖ２Ｏの望明ブＩ−］七−夕の制御
トにあり、マーカーは同じＳＶ４０の後期ブ］−」［−
夕の制御トにある。 好ましくは、マーカーとこれを制御！Ｉ＋　′？するブ
目−し−９とは、第１配列と第２配列とを含む（）ＮΔ
断ｌ冒こ（ｆ意に結合される対応断ハを形成りるＪ、う
に前記に定義しｌご如さ　１個以上の別の配列（ａ）。 （ｂ）苔しくは（Ｃ）又【よ別のパ第３配列″と結合さ
れる。例えは、７−カーは１５はりＳＶ／ｌｏの［Ｐ明
ブ［１し−９の制御子に配（ヴされ、転゛り可能配列は
やはり、転写後に゛小−１″抗ＩＩ；１の短縮部分を形
成する配列（イン１へロン及びポリアデニル化部位を含
む）を含んでいる。 別のｆ目上−夕の制御上Ｃ′ンー力−が１１Ｉ胞のゲノ
ムに安定に組み込まれるか又はンー力−の安定な（幾能
光睨かＩｒＦられることは、細胞にカミ規’、に’ｌｊ
　ｌ’ｌ（４５１ＪｔＪｉ　シい酵素の合成能力）か！
ｊえられるという意味（゛本弁明の利点で゛ある。これ
らの新規な乃ｆ１により、ｆｊ　Ｍ細胞の標識及び選択
をｌｊ／、ｃ　′）ことが司能Ｃある。このｊｎｎママ
ノＪ−に３Ｊ、−）　’ｉ　！１１−１される細胞は高
い成長小ル七ン１産ｆｊｌをイ１りる。このＪ、うイｊ
高いｑ−産性は同じ＜５Ｖ４ｆ１σ戸ｊ）明グ）」シー
タの制御Ｆ　（”　Ｉ−リンチン　クツ′−シー小ス・
Ｊ・すポジルートノンスノー 配列から成る）Ｉ−カーを使用りるとさに１！Ｉられる
，。 特に細胞がリル山束のとき（こ高７１：　ｉ！ｒ−（！
ｌが得ら１する。 本発明のセルツインは、ＩＩＩＩＩＮ杉成・ｌ’Ｊ：　
（、ないＩＩＩ胞に由来りるのが右利である。々ｆまし
いｌｌルラインは、＋Ｊ−　ＪＬ，　Ｕ）腎細胞、例え
ばｖｅｒｏ　　△ｌ　Ｃ　Ｃ　：　Ｃ　Ｃ１−８１タイ
プの細胞から形成されるか叉は培養♀１ｆ持が”Ｊ　（
ｉ’ａなし１・細胞か１う形成される３，史に、本発明
の条１′）１・ｃｑす）ｊｈのへフタ−により形！１転
換１１１能イ本高苦１１ｉ乳動物の腫瘍非形成性ＩＩＩ
ｌｌ　１１〜をｉｉｉ：　ＩＲ　イノる人二めには、ア
メリカン・タイ１・ノノル１（・−・ｌ　１７クシヨ」
ン（ＡＩＣＣ）発１］の菌株［」録の最新版か参考にな
る。 般的には、■・１・瘍形成ｔ）１（ｉシ癌（’ｉ　）−
（イ１い全（のセル、、７１′ンを使用しｉ：する、１
このような腫瘍非形成性を確認りる／こめに、ｌｌｊ界
保険機（潟（　Ｑ　ｒｇａ＋＋ｉＳａｄ：Ｏｉｌ　Ｍ　
Ｏｎｄｌａｌ（！　ｄｅ　ｌａ　３　ａｎｔｅ）かＩＩ
Ｉ薦−するゾ１１しスを使用し１′ノイ）〈（二４０、
１、１９リフイはメ−　トンウス（、前記し・ルライシ
の細１抱をｉ．ｌ　ＩＪ・ｌ　シ（、’　（　Ｈ　４’
．ｒねれる）。 本弁明（゛明記．Ｘ．れ）、、条（’Ｉ　＋・（これら
の細胞を形７１転換りると細胞は発癌Ｖ１には＜（らへ
い、、この（とは、同しアメ１〜を用いＣ俤認さ４’ｔ
．　４’．；る、１勿論、本発明によるレルノインの細
胞のゲノムに仲人されたＯＮ△断ハは史（こ特別４ｆ持
ｆ［をイＪし得る。これらの特１７１に関（ノー（は、
最初ｔよ成艮小ル［−ンの分泌どころかｔｌｌなる合成
ちＣ・さなか・）た高′Ｓ真核生物特に哺乳動物の細胞
を形賀転換し、これらの＠Ｉｌ胞に成長ホルモンの合成
分泌能力をうえるために使用され（！するベクターの種
々の具体例の説明に伴−）（後３ｄ；づる。 本発明のベクター、好ましくはゾンスミドの特徴は、 −８等真核生物、特に哺乳動物の細胞のグ，７１１内に
安定的に組み込まれるか父は前記細胞内−Ｃ安定的に故
（Ｊｌｆ，弁用され１′１６ゾ１１［：−夕から選択さ
れたブ（−１（−タと、 一前記−ｔ　ＩＩＩ−し−夕の制御上にあり、第１配Ｉ
１１１　Ｑｒ　Ｆｋしくは（３　Ｈタンパクを−」−ド
するｃｌつＮΔをａみかつ好ましくｉよ同前に転７ｊＪ
ｊ向に関しＣ第１配列の１白く一１冨と（ごジグ−ノー
ルべｆチドをＪ−ドする第２配列をも含むＤΔＮ断ｊ１
と、 −−　−１’　３ｊの配列、即４）、 −前記タ１因１クグ１１シータの制ｉｌｌト（゛メツｅ
ンジｔ・−Ｉ　Ｎへの対応部分（こ転ｖ７されＶｊる少
なくとも１個の部分を含む配列（　ａ）、 −　１周以Ｉ−のボ゛）　−、７’　ｆニル化部位をａ
ん（゛おり好ましくは配列（　ａ）の前記部分の転写の
終了部１１′７をｂｑんて一′いる１：！クメン１〜（
ｂ）、及び−少なくとｂ１個のイン１〜［１ンと前記Ｉ
ｌｖ，　”ｊ“の際の前記イン１ヘロンの切除ｔこ必決
な配列とを含む配列（　Ｃ）、 のうらの少イ「くと６　１個と、 を組合１．！（含むことぐある。 本発明の々ｆ．１、しいベクターは、ＩＩＧ　Ｌｌを」
−ド（る第１配列をｈづ−るベクター（゛ある。史ｔご
好」、しくは、（転写の方向に関しＣ）第１配列の一丁
前【、二組２配列が含まれｌ　ｉＪ３す、この第２配列
は前駆体ペプチドを二】−トしくいる。前駆体ベゾブト
は通常、ｈＧｌ−１が内因性プ［１七−タの制御Ｆ−ｃ
大然宿十内で合成されるど８’　ＩＩ（２　１ｉに結合
しくいるものである。 ヒ１ー由来（ないタンパク０１１例えはウシ又は霊長類
のＧ　Ｉ−１を−１−ドリーる特に好ましい／＼クター
は、史に、前記の配列（ａ）、（ｂ）及び（　Ｃ）を１
体に隼めた゛′第３配列パを含むベクター（・ある、。 このベクターの第３配列は、種々の領域の４ｔｉｉ類と
起源及び前記第１配列及び第２配列（。二λ・ｊりる各
々の配置に関しく、本弁明にＪ、る前，；Ｃ形質転換釉
１抱のゲノノ、に絹み込まれノこ１１）　ＮΔ断Ｊ１に
於い（］ｚ想されたと同様の種々の変形構成を牛し１５
する、。 ｌウスの（χ　り１１ビンの瑣仏了Ｍ　ｔｉ＋来づる″
゛第３配列゛′を使用したどきに特に４１利な結末が１
ｒ、？られる。インド１１ンと７ウスα−グ［１ヒン箇
伝子由来のポリ〈△）固定部（Ｑとを含む好ましい第ζ
３配列はＹ、　Ｎ　１ｓｂｉｏｋａ及びｌ〕、　ｌ　ｃ
ｄｃｒにＪ、つ（記載された配り１１に相当りる（　１
９７９．　Ｃｅｌ　ｌ　１８．８７５−８８２）。 好ましくは、シグプルベブブトを−１−ドする第２配列
の近位部分は／（−１七−タに捧めＣ近いぽかりか１１
−１シータに１白枯しくいることもある。このどき、第
３配列全体かＯｌｌを二１−トする前記第′１配列の下
流に配りイされ得る、１ 本発明の好ましいベクターは、リルＳＶ４０ウィルスの
早期ゾｌｊ１：一夕の制御−トに首かねに１へ成長ポル
Ｌンの（１＋駆物質（！：１−ドＪる配列全体を含むり
１１−ンＣ１）ＮＡど、識ｃｌ）ＮＡに続い−（おり１
？ｌに前記タイｊのインｌ−１１−，１ンとポリ（Ａ＞
固ｆｆ部位とを含むｌウスのα−りＩｉｉビン視伝了由
来のｌ）　ＮＡ田−１とを含んｌ：ｆ　”　’ｔｆＱ成
ｊ真伝了（ｇｏｎｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ）を含もしＣ
いる、。 Ｇ　ｌ−１ヲ：　＋　−ｌ”　Ｊ　ル’４伝ｒを含む前
記の種々ミノ）ベクターは、ｊ〜当な細胞、　Ｊ、り社
用にはｌｌ−１・指＋Ｊｌ形成刊の１％ｌｉ乳動物細胞
を形°ｉ′１転換（１イ）ｋめ（、、、使用されｔ？　
ル、　形”ｉｒ’ｉφ）、ｉ％　ＬＬ、’（れ自（Ａ公
知の条ｆ’ｌ　ｌ−Ｃ’、例えは実施例−（引用されＩ
Ｊ技術を使用しく？Ｊなわれる。例えｉＪ選択マーツノ
−，１Ｓに細胞を形質’ｌ’／、　Ｉ柴りることか（さ
かつ該細胞に新しい配本例えば１リンチン−グツ′ニン
ーホス小す１１＼シル−１ヘランスノｌ−ノーＵの合成
能力をｈえ１：する配列を含むｆ−ノスミドの存在トで
形質転換を生起リベく配慮りるならば、形質転換細胞の
標識及び）バ択がｉｉｌ能で゛ある。。 しかし乍ら、本発明の好ましいベクターの’４：ｙ　ｌ
？Ｑは、選択マーカーもまたそのＤＮＡ中に共イＪ結合
的に組み込！：　ｔｌ、　Ｔ、いることぐある。このマ
ーカーは、キリンヂンークノ′ニンーホス小リボシル−
１〜ランスノ■う＝Ｕ酵素を二１−ドするｊ頁仏子から
構成されるのか右利である。更に好ましくは、この選択
マーカーは、同様にベクター中に安定的に組み込まれ（
おりＧ　Ｈ＝］−ドｊｔｊ仏了を含む［ＩＪｉ　）；に
結合した一部［］［−タとは別σ）　Ｊ　［ｊ七−タの
支配トにある。この別のゾ［」−シータは、ホ５１明の
好ましいピルラインの記載に際しＣ元察されＩこ種々の
特１ｆ！！のいずれか１種を右し１１する。Ｉｉｉ］様
に好ましくは、選択マーカーか０１に１−ド頂伝子に結
合しｌこ配２ｉ１Ｊど回じ１．１１矧を一イーｊりる″
第３３配列″に組み込まれ（いる。Ｇ　ｌｌ−１−ド逍
仏子に結合した配列は、選択された）゛１−ｊシータが
由来りる出発天然核酸中に存在りる配列に夕・１応りる
のが４１刊である。−７−カーに結合し！ご前記第３３
配列は、種々の領域の種類ど起源及びンー力−に対りる
相対配置に関しく前記第１配列及び第２配列（二関しｃ
元察されたと同様の変化構成をｔｌじ得る。 本発明の好ましいベクターは、前記の゛況成萌伝了″と
別のｌＪｉ　Ｆ’ｉとを同時に含イ’ｉ　Ｌ／　’（−
ｄ３す、該別の断１４は、ＳＶ４０の早期プロモータと
、該ブ１１七−夕の制御ト（キリンチン−グツ７ニンー
ホス小リボシル−１〜ランスフ］■ラーＵを」−卜して
おり、“第３３配列°′と結合している逍伝了又はｃｌ
）ＮＡとを含んＣおり、該第３配列は、゛小ビ’　Ｉｉ
’ｊ原の部を−１−トするＳＶ４０山来の１つＮＡの一
部と対応ポリノ′ｆニル化部位とを含む。 前記の如きベクター系に　ｈＧｌ−１を］−ドＪる配列
か組み込」、れると、その結末としく、該配列の＠適の
見掛【ノ効率が得られる。この効率は、ベクター基を介
し−（細胞内に予め導入されたＧ　ｌ−ｌ　：、Ｉ−ト
　ｃｌ）ＮＡによつ（、形質転換された高′８１１＋Ｉ
ｉ乳ｆｈ物の細胞にｃｌ、る特（，７多６１のＩＩＧ　
ｌｌのＪ！’ｒ　７１及び分泌によって。１１′価、＞
れる。Ａ発明のベクターにＪ、つく得られる形質転換の
安定１１１−は、形質転換ＩＩ胞由来の後継ｌｊ代く少
なくとも１Ｑｌｌｊ代）【こ５ｗ−＞　−Ｕ　ｉ！？ら
れる娘細１］ｉ！ｌが１）ＩＪ記の如く獲１′ｊされた
特ｔ！［’ａ保１ｘ’ｊ　Ｌ／　ｔ、＋７る稈Ｉ扛（こ
Ｊ、っ（５１１曲される。 本発明のイ・」加面特徴は、本発明の１ｈに好まｌ、い
ベクター・の実施例、）１１１Ｌ初物４ｍ＋胞を形質転
換づるためのベクターの使用条イ′１及びし１〜又（よ
動物’ｌｌｉ　ＩＪ：ウシの０１１の合成に於い（前記
形質転換かりえる結果を承り以十の記載Ｊ、り明らかに
されるしあろう。 添１１１４図面は、こ第１らのベクタ〜・の成る種を（
１４築４るｌごめの連続スーｊツブの概略説明図Ｃある
。 泌しく：するセルラインの産′１− 出光ゾニノスミ１−はシラスミド　１ｌｓＶ４９８から
構成され（いる。該プラスミドは、パリのパスツール仙
究所（１’　ｌ　ｎｓ目ｊｕｔ　１−）ａＳｔｃｕｒ　
ｄ（！ｔ’ａｒｉｓ）のＣｏｆ　１ｅｃｔｉｏｎ　Ｎ　
ａｔｉｏｌｌａｌｅ　ｄａ　Ｃｕｌｔｕｒｃ　（ＩＣＭ
　１ｃｒＯ−Ｏｒｇａ＋＋ｉｓｍｃｓにｎ’　ｌ−２（
１（ｉとしく寄託され（いる。該ブーシスミドは、ｆｙ
ｌｕｌｌｉｇａｎ及びＢ（！ｒｇ（＋９８１　）　、　
Ｐｒｏｅ、　Ｎ　ａｔｌ、Ａ　ｃａｄ、ｓ　ｃｉ、米国
７８゜２０７２２０７６　＋、Ｌ記載ノ１＋８　Ｖ　２
（ＩＩＩＬ’Ｑ　ｇ＝　ＣＯＲｌ　及ＤＬ３　ａｍｌｌ
　Ｉ　１．Ｉ　Ｊ、る消化後３　、５９１．のボリノ１
クリルアミドグルーＣ゛単圃Ｉ　Ｌ　ｊ、−人１ｉＩ−
１とＩＣ３Ｒ３２２山来の３７！＋Ｊ、ｊ、ｊ　％を対
（１＋１＋）σ月−Ｃｏ［＜　Ｊ　−１３ａｍｌｌ　Ｉ
制限１９ｉＪｉとの組１φにＪ、っ（ｆ：ｆられたｂの
て・ある、。 グラスミド　ｌ）Ｓ　Ｖ　２（１１１１の１＊４品造費
素が添Ｕ１・１図面（・二本さｔ’Ｌ　Ｔいる。＋＋＋
’ｓ　Ｒ３２２山来の３７５１１１１のルリ限１１１ｉ
ハは（ａ）（示され〔いる。ＤＥ；　Ｖ　２（ｌｌｌｔ
　ＩＬＪｌ−較したＯ８　Ｖ　４９８０）　４　イ１．
ｔ　Ｏ８Ｖ　２（ＪＤｌ）Ｍ＆略図中に（＋１）　’（
’−小された断片か＋＋ＳＮ／　４！１８　（Ｌ１助Ｊ
ｔ（ａ）に代−）ＩこことＣある。これら２種のグラス
ミドは更にＳＶ４０の甲明プ［Ｊモータ（Ｃ）とＵ工Ｃ
０１１から抽出され＝１−サン１ン−り））ニンー小ス
ホリボシル−１−　′、ｙンスノ丁ラーうｆを−１−ド
づる′）貞１ムＴ（１，−、にＯｇｌ）１．；ｊ！伝了
）（ｄ）とを含んＣ（１３す、遺伝子（ｄ）に杭い（（
ｅ）で゛概略的（こ）ｊくされＩ、：配列が含、Ｌれ（
いる。配列（ｃ）はＳＶ４０山来（、パ小１パ抗原に対
応りるメツヒンジ！・−ＲＮΔの一部に転写され得る配
′＋１１とインｌ−１１ンとポリアテ゛ニル化部位とを
含む。 ＋１ｓＶ４９８を１ｌｉｎｔｌｌｌによ−）　ｆＴ部分
的（こ切１１１ｉ　する（　　１０１１１Ｍのトリス−
＋−＋ｃｉ！、　　Ｉ）１４７．６と７ｍ〜ｌ　（７）
Ｍ（ｌ　ＣＮ２と６０ｍＭのＮａＣρと　１００１（、
’ｌ／ｒｄのＵラチーンとを含む緩衝液中（２０＃のＩ
）　Ｎ△どξ）ユニットのｌ−１ｉｎｄ■どを３７℃で
２０分間イン−Ｖコベーｉ〜りる）。 最終的に２Ｏｎ＋ＭになるまＣ［ＤＴ△を添加しＣ反応
を停ｊ１さ［、り１１１１小ル１１とイソノ′ミルノ′
ル二１−ルどのｎ合物−ＣＤ　Ｎ　Ａを抽出し、１タノ
ー＝ル沈澱さ１！る。ごれを次に）（ａｎｖｉｌ　、１
　ｑ）　（ｊ　（ｌ　Ｉ−（イン１コベー１〜りるｆｌ
　　３＝’ｉ％のボリノ′クリルノ′ミドゲル電気泳動
にかり（［）ＮΔ断片を！＋１１ｌｌｌ＋　１６３．〈
図中の（［）Ｃ示される）　２７７９　ｈｐの断ｊ″１
を電気溶出りる。この肋ｙ１が（リ）（小すヒ１〜成艮
小ルＬンのｃＤＮＡ配列（Ｒｏｓｋａｍ及びＲｏｕｇｅ
ｏｎ、既出）ｌご結合される。配列（（１）は、Ｓｍａ
Ｔ部位Ｅ４ニリンカーく合成り　ＮＡ接合用小断ハ）　
［１ａｌｌｌｌ−Ｉ　Ｉを含ん（おり、−ｆレポルモン
を二１−ト覆る配列に先＜１するΔ１す１部位ｔこリン
カ−）−ｔｉｎｄｌを含／ｖ　’Ｃ゛いる。 この結果、シラスミドｐ３　Ｖ　４９９が得られる。 １）ＳＶ４９９をＢａｍ１ｌｌによつ”Ｃ切断し、マウ
スのα−グ［１ビンの遺伝子の遠（ｆｘ部を含む５９３
　ｌ１ｌ）の断片（ｌ＋＞　　（Ｎ　１ｓｈｉｏｋａ及
び１−ｅｄｏｒ、既出）と結合づる。断１１（１＋）は
、（ｅ）で・概略的に示された（Ｃ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、にＩ
Ｉ”　　１　７＋１７としＣ寄託されたプラスミド１１
７８ｃ　１６から抽出さ１１だ）ｍｔ＜ＮＡの前端から
メツレＡ″ｆド８０８及′Ｃｊ１４０１にイ１“！（６
りるＭｂｏ１部位の間に結合される。この挿入方向は３
ａｃｌと（ｉａ、Ｉどによる切断の後に１ｆｌｆ認され
る。 ｉＶシい方向′ｃ１φ入が？−ｊなわれ／Ｊ組換体をｐ
ＳＶ５０　（Ｉと命名りる。ｌｌ５Ｖ５００をｃｌａｉ
ど共ニーインニ１−］ｌ＼−１・し、ポリメン−Ｌ’　
Ｆ　（Ｋ　ｌｃｎｏｗ　ＩＩ片）Ｃ′処理し−（、中鎖
の形状Ｃ′得られた末端に二本鎖を形成する。り（」１
」ホルム−イソノ７ミルアルフ１−ルの混合物（抽出し
−１−タノール沈澱さ口（から、プラスミドをｌ〕ｖｕ
　Ｉ（−゛消化づる。約３５５０　ｂｐの断ハを中Ｈ１
シ、１ｌｓＶ４９８をｌ’　ｖｕ　ｌどｌ）　Ｖｌｌ　
ＩＩ　トノ（にイン４−１べ−１へし４１：１らねた約
３１００　ｌｕｐの断Ｂに結合Ｊる。得ら４またプラス
ミドを　ＴＩＳ　Ｖ　り０７ど相和１する。 ｖ　ｃ　ｒ　ｏ　１１１胞中（゛のＩ）ＳＶ５００どｌ
ｌ５Ｖり（１７どの一過性発現 １仔６０　Ｉｌｌ　Ｉｎの培養Ｉ１１に入れ／、：Ｖｅ
ｒＯ（△ｔ　ｃ　ｃ　：　ｃＣＬｌ’ｌｌ）郭１胞の１
ぐは」ンノル土ン１へ／ｌ−Ｉ′ｕルカルチャ・−に対
し、１ＯＮのｊラスミドｌ）　ＮＡを用い（１−ランス
ノＪクシ」ンを行なう。使用したＩＩ法は、１　、　　
Ｍ、　　Ｓｏｍｐａｙｒａｃ及びＫ　、　　、）　、　
　ｌ）　ａｎｌｌａ　（１９８１）のＰ　ｒｏｃ、Ｎ　
ａｌｌ、ΔＣａｄ、３Ｃｉ、米１’ｌｉｌ、　７８．７
５７５による改良Ｄ　ＩＩΔＩＥ　ｊ’−１ス１〜ラン
法ひある。、ｉ〜ランスノ丁クりョン後、２％の仔牛脂
兄血清を含む２．１１ｄの１８地１９９　（Ｊ　、　Ｆ
　、　Ｍ　ｏｒｇａｎ　’ｄ　（１９５０）Ｐｒｏｃ、
Ｓｏｃ、　［ｘｐｌｔ、　１３ｉｏｌ、Ｍａｄ、　７１
．１　）中Ｃ細胞を５目間培養４る。分泌されたｌ＋Ｇ
ｔｌの濃麿をＲ１Δ定ｍ’ｒ人（ｌ　ｎ５ｔｉｊＵｔ　
）〕ａＳｔｅｕｒ　　Ｐｒｏｄｕｅ＝・ｔｉｏ＋＋製４
ツ１〜）にＪ、７）　’ｃ　ｉｉ＋枠する１、イ・Ｊ加
ＯＮΔｐｍｏｌ当りの量を測定する（１０ＩＪ！ｌのＤ
　ＮＡは、３．６１＋ｍｏｌの　Ｉ）Ｓ　Ｖ２Ｏ３ｆ）
　Ｎ　Ａ及び　２．３＋１１１１（１１の　ｌｌ５Ｖ５
０７１）ＮＡに対応り−る）１゜ １１ＳＶ　り（１（ｌ　　　　４，３１ｔｇＩＩＧ　１
１　／’　１１１１１０１　１）　Ｎ　ＡＤＳ　　Ｖ　
　５０７　　　　　　　１０．ＯＴ＋（ｌ　　　ＩＩＧ
　　Ｈ／　　ｌ１ｍ０ｌ　　　　１つ　ＮＡ＋＋Ｉ’Ｈ
よ３２２　　　０　　＋ｕ＋　ｌ＋ＧＩＩ／ｌ＋ｍｏｌ
　　１）ＮＡ本発明のベクター【こＪ、つ−Ｃ１−ラン
スＪ１り］へされたのは細胞の一部分に過ぎｔｒいこと
を考えｔ’Ｌ　ＧＪ、、培地中ぐ産生されるｈＧｌ−ｌ
の槍はかなりσ）吊（こ４ｆる鴇である。 シラスミドｌ）Ｓ　Ｖ　！＋０７にＪ、るｖｃｒｏ細胞
のレルラインの選択 ｉｆ￥６ｃｍの１８２’Ｊ　ｌｉｔ当り約１４＋Ｘ１（
１’のｖｃｒｏ細胞を、制限酵素Ｏｖｕ　１．　”ｃ’
白線化した７ＭＩの−ｆシラスミドＤＳ　Ｖ　！ｉ０７
　’ＣＩ−ランスフＪりＩ−りる。使用しｌこ７Ｊ法は
、カルシウム沈澱法（Ｇ　ｒａｌ＋ａｍ及びＶａｌ）ｄ
ｅｒ　Ｅｂ　　（１９７３）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　５
２．４５５−４５６　＞　ｒある。ｌ−ランスノ］クシ
ョン後、ｊ）％の仔牛１生児血清を含むｊ６地１９９中
でＩｌｌ胞を３日間培養づる。 細胞を１−リプシン消化し、直径ｉｏｃｍの［■１当り
約ＩＸＨＩ”の細胞を塗抹りる。、Ｈ）％の透１１１仔
ノ１昭児血消を含む選択１１）地中で培養を継続する（
選択Ｊ８地：　　＋５０＃　／　ｔｎＱのグルタミンと
１！ｉｆｆ／ｒｄのヒポｍ−ノンチンと２μｙ／ｒｄの
アミノグＪリンと２５ＯＮ／　ｍ（！の−１−リンチン
と１０μＩＩ　／　ｍＲのｆミシンと２　！ｉ　０μ３
／　ｍＱのリハヘリンとを含むタルｌ＼ツ　を変４〕ｔ
　Ｍ　ｔ’　ｔｖｌ（ｉ）　ｕ　ｌ　ｂｃｃｃ＋＋及び
ト’　ｒｅｅｍａｎ　：　Ｖ　ｉ　ｒｏｌｏｇｙ　８（
Ｈ）５９）　、　　３９Ｇ）　）。 Ｊ（１地を週２回の割合（交換づる。３週１１ｉ１４す
、カノス円筒内ＣＩ−リゾシン潤化しく密Ｌ：：−，＋
　ｃ＋ユニー単１’ｉｌｌ　ｂ、どｒ　ｐｇ　、、、−
’　ｔｒｄ！のりバベリンを含む選択Ｊｆｔ、地中で゛
別々に１８養１゛る（これｔこｊ、す、シラスミドを取
込ｌυた細胞を含む］コロニーを選択し得る）、、次に
ンジＡイムノデス１〜によつｌ’　］　１１−−による
ヒ１へ成長ポル七ンの産生分泌をテス１へりる。 前記プ〔１セスＣいくつかの一コ［Ｊニーが得られる。 次にこれらのコ［」ニーを非選択ｊ８地に適合さＵた（
す、該ＪｊＸ地中４＋　Ｊ？ｌｉ塔りる（非選択Ｊｊ１
地：１０ΦＱ５％の透相仔牛血清を加えた１つｕｌｂｅ
ｃｃｏ変ｔ’ｌイーグル培地）。最大１■１のＩＩＧＩ
Ｉ小ルしンの分泌を小したしルラインを中部し、これを
ＶＥＩｌｌと命名する。 ヒルジインＶｌｌｌｉの１！ｉ性決定 レル−フィンＶ　Ｅ　ｌ−１”Ｉを史に訂しく検品・１
りる。Ｃのｔチルラインは多事のｌｌＧ１１を合成りる
。例えｉま−、指数増殖期には丸Ｉ　ＥＪ　Ｃ１（ｌ屑
のｈＧ　１１を分泌りる。 この間、細胞量は１７’５養曲当り　＋、２ｘ　１０　
　かＩう２．７ＸＩ（＋６に増える。非’ｙｌ’＜択Ｊ
γ１地中Ｃ゛の１ごルラインＶ［−１−１１のｈＧｌ１
５）泌は少イｆくど０１月口代の間ｆＪ安定Ｃある。 ｊＬ跨Ａ冒り見λＷ山ＪＪ（虻 ＬＩｊ生タンパクの正確％　ｆｆ質を決定覆るために、
Ｖ　Ｆ　ＩＩ　ｉ細胞を　Ｓ−メブＡニンの存白Ｉ・（
インＮ−１べ−１・りる。次に１）Ｇｌｉに対りるウリ
キの抗＋Ｉｉ＋　ｉＩ’ｊ　＠　用イＣ免り沈ｔＵｊス
ｌ−’ｇ？＋＜＋３．５ｌ）Ｓを存在さぜｉ、：２０％
アクリルアミドゲル（ｌ−ａｅｍｌｉ。 ＮａｔＵｌ’Ｏ２２７（＋９７９）　　ｆｉ８１）　Ｃ
沈澱物を分相４ると、］］二１−脳１垂体から抽出され
／ｊｈＧＩ＋と正確に同じｆ１′／首に１１１１１つの
泳動バンドが現れる。このバンドは、非亀疫つリギ廂消
による免疫沈澱後には現れない。これがまさしく成熟成
長小ルしンでありブレホルモンでないことを確認りるた
めに、１１Ｇ１１の前駆物質を二］−ドするＲ　Ｎ　Ａ
を用い（ｌＶ目１゛０翻訳に３」、り得られた産でＦ物
を対照としく使用りる。、　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ＃％物は
ゾレポルしン−（゛ある。 この結末、分泌されたポルｔンが成長ポルしンＣあり、
前駆物ＢＴないことが１′す明づる。又、補犀分析にＪ
、す、産生されたポルしンは、定量的免疫ラース１−に
於い−（、ｎ：＋電（ｃｈａｒｇｅ）　、疎水性及び作
用（ｃｏｍｐｏｒ［ｅｍｅｎｔ　）の面ζ′脳下垂体か
ら抽出された主要成熟ポルＬンと一致することが示され
（いる。 ゾノスミドｐＳＶ　！＋（１０は更に、形ＶｉΦ〕、挽
細胞のＩＩＧ１−１産生能力を高めるため（ご形質転換
効率を良くりる。Ｊ、うに改良され１５する。このにう
な結末を１！ｌるために、（ｐ［３Ｒ３２２山来の）［
０吋＜　ｉ−Ｂ　ａｍｌｌ　Ｊ’　（Ｍ　１３０−１　
）断バーをリルＳＶ４０ウーｒルスＩ）　Ｎ　Ａの１÷
ｃｏｔ’＜　−Ｉ　　ＢｃｌＪ、　（１７８Ｇ−２７０
１３）　ｌｉ／１ｊ１（置換りる。ｆ１７られたオＪｉ
シいＪラスミドをＬＩＳＶ：＋Ｌ＋ど命名する。コ（０
＋３　良ニＪ、す、（ＤＳ　Ｖ　５００　（ＪＬ　ハ（
ｒ　ｔｌしなイ）　Ｓ　Ｖ　４（Ｈ／）　Ｉｉ１期ｔ＜
　Ｎ　Ａ　ニＪＪ　’）　ルボＩＪ　（Ａ　）（＝１加
部位が、ンウスのα−りＩＩヒン頂伝ｒの４４位部に極
め（近接した一位買に（ｒ　７−ｒ！Ｊる１、　過１］
［光用ｌス１−のために、このｆ−ノスミドを用い（ｖ
ｃｒｏ■１胞の１−ランスフ１クシ・１ンを雪Ｊイ１う
と、出弁ゾノス’、　Ｆ’　（ｐｓ　Ｖ２Ｏ３）　ニ比
較シーＣＩＩＧ　Ｎ　Ｏ）分Ｗ　ＩＩは逃かに増加りる
。 を含・むノ゛ツメミドの構築及びとのは）１１を合成熱
形のウシ成長ポルしンは１ｌ個のノ′ミノ醸から成る（
　１　！Ｉｆ（ｌａｐＨａ等、　１）ｒｏｃ、Ｎ　ａｔ
ｌ、Ａ　ｃａｔｌ。 ３ｃｉ、米国、　７４（［１７７）　　２Ｃ号２−２４
３６）　、、該ポル［ンの前に２６飼のツノミノ酸から
成るジグｊ−ルベブ１トが存白りる（Ｍｉｌｌｃｒ等、
　Ｍ　、　１３　ｉｏｌ、ｃ　ｌ＋ｃ！ｍ。 ２５５　　（１９８０）　　７５２１−７５２４）。分
泌の際にジグＪルベゾブトが除去され（成；イ（１形小
ルｌ−ンが遊離される。　　ｃｌ、’、）　Ｎ　ＡはＭ
ｉｌｌｅｒ等ニＪ、っ’ｃりｌ’ｌ　−−：、／　／）
Ｃ＼れた。。 、１．１．二、欧州４Ｆｉ５′１出願公開第００　（ｉ
〆０２　（：　Ｆ　’、及び：Ｉ″；００７、’＋４４
４月Ｌ　ｉｉｊ　’ｌｌｋ　１７）ウシ成長ホ）ｌ）　
Ｕ　：／　ｋ　、’：ｌ−Ｉ”ＪルＪ１．　りｌｙ　Ａ
　’：）　Ｆ　Ｍｉ：列ヲ禽照（，１”：：１　（−と
ｂ　ｕｌ　ｆｌｌｉ　ｃある。１ウシＪ戊長ホルしンの
３頁１ムｊ′のり１．１−−ニンクと（。 れらのり１１−＝ンによっ（形Ｙ１転換された咄“ｉ’
１．動物■１胞中での前記遁伝子の光用どは、特（、−
以トのス−ｉラグＣ１１％ねれる。１ １．　１）ｌ（ｒ＜　３２２中（−゛の（１）ＮＡのり
［１−二−ング４゜２．１１）小ルしンの聞始二１１−
ンに先？１りるｌ　ｌ　＋＋　ｂ　’、ｒ部位への゛リ
ンカーｌｌ　ｉｎｄ　Ｉｌｌ　”の心入。 ３、ルノ１＼ルｔンの終了−１トンＭ続＜５ｃｒｌＴ部
イＱへの″リンカー１３　ａｍｌｌ　Ｉ　”の導入。 この結Ｔ、前後に人々Ｉｔ　１ｄ）（ｌ　ＩＩＩ部荀ε
８ａｍｌｌＩ部位どを右する連続的イ＜　１．１　Ｇ　
ｉ−１−，１１−配列が（１７られる。。 ＣのＲｉｉハを、前記のＤ　Ｌ）　Ｖ　！＋　０　（ｌ
の製造に用いｌ、二条件士（’Ｉ）ＳＶ４９８にｊ、９
人し１゛する４、１６られｌｃグラスミミド３Ｌ、１．
ｓ　Ｖ　！＋００のＩＩＧＩＩがｂＧ　ＨＰ　買Ｊ％さ
れＩこものである。得られた新しい一グラスミドの一過
ｆ１発現ｔ）ＪＬＩ、−１１１８Ｖ　！１０（ｌに関し
く前、１（シに説明（］た条イ′１１・で／１−起され
ｉ５ｖる。 新１ノいシラスミドｈ目ら　１ｌｓＶ５０７ど等価のブ
ノスミ１〜を構簗し、これを　ｌ］　Ｇ　ｉ−１を産生
り−るｖｅｒｏ細胞の選択に使用り＜）ごとか１１」能
（ある９、本光明は史に、 一本ずト明にＪ、り形質転換されｌご１ζ１１乳動物細
胞ＩＱ−Ｊ、り産生される如さ　ｈＧ　ｌ−１。 −天然１１ＧＨと共に使用され青るタイゾの薬剤ベヒク
ルと共に本発明のＩＩＧ　＋−１−を含む薬剤組成物、
及び 一前記ＩＭｌｉ乳仙物細胞により産生されるＩＩＧＩＩ
に対しｃ　ｉｎ　ｖｉｖｏ形成され得る抗体、を含む。 前記の薬剤組成物は、１ｈにｉＪ−Ｃ１４液の形状又は
注Ｑ（ｉｔ々を用時調製し得る形状を右しＣおり、入熱
抽出ポルしンど同（じ用途、特に小人症の治掠に使用さ
れ得る。前記の抗体は特に、不溶性に（・リアに固定さ
れＣから、ＩＩＧＮ含イ１混合物１）１１ら１１ＧＩＩ
を精製づるために使用される。 勿論、前記の記載からり（・に明らかな如く、木弁明は
詳細に説明した用途及び貝イホ例には少しも限定されな
い。逆に本発明は全ての変形を包含りる９１例えば、Ｓ
Ｖ４０山来のゾ］−１し一タに代え−Ｃ別の１１−１シ
〜夕、例えばｊ’　ｉ’ノウィルスの後期／１−］モー
タ、メタ１．、、Ｉ　ｆ）４ネイン１を−」−ドｊＪる
項伝了のプ１１　シータ、し１へ１−１ウイルスの１１
」シータ及び温度又は化′／・物質にＪ、−）（誘発し
く１するゾ］−」七−タを使用し得る。 「（：０旧）ｔ　ｊＱＱ１０代わりに使用され１５ノる
別のマーカーの例としこ、マウスのシし１〜１１葉酸ｊ
Ｔ元酵素を］］−１−りるマーカー、抗生物質Ｇ／１１
８を失活させるリン酸化酵素をｍｌ−１’　するマーカ
ー宿がある。 マウスのα−り【１ヒン逍伝了由来の配列の代わりに使
用され青る゛′第３配列″の別の例としＣ−は、マウス
のβ−りＩｌｌビン）口伝子由来の配列を挙げることが
（きる。 シグフルベブブトをＪ−ドするパ第２配列の別の例どじ
Ｃは、ｊ′ル１ミン及びプロラクチン又は化学合成にＪ
、り冑ら１するヌクレＡブト配列に通常結合し）（いる
ベブ升ドを一］−ドするものが挙げられる。 最後に、本文中に引用した全ての刊（Ｊ物に関しＣは、
これらの刊行物中の本発明の基盤を完全に理解づるため
の助（〕となる技術部分が本明細用中に含まれるものと
する。

【図面の簡単な説明】

図面は、本発明のベクターを構築りるスｊツブの概略説
明図Ｃある。 代理人＊−虐士今　　村　　　　元 ル フランス国９２４１０ヴイル・ダヴ レー・リュ・ドウ・マルタ４１ ＠発　明　者　ブリジット・ルネ・ミルーフランス国９
１１２０パレゾー・リ ュ・バルマンテイエ・ロゼール ＠発　明　者　モシエ・イヤニヴ フランス国７５０１５パリ・リュ・ ブロメ拓９ ヴ■発　明　者　フィリップ・ビニール・リオーザン フランス国７５０１４パリ・リュ・ ディト１３５ Ｌｆ１■発　明　者　ジャクリーヌ・ジュアノー−ガイ
ヤール フランス国７５０１３パリ・リュ・ シャルコ２１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　吐乳動物特に１ノルの好ましくは腫瘍非形成性
   細胞の安定なヒルライン（゛あっ−Ｃ１成長ホルモンの
   特性を右りるタンパクを−１−ドづるａ′１１配列を含
   んぐおりかつ好ましくは同＋＋：４　＜＝転゛７１方向
   １こ関して前記第１配列の直くト流にジグ犬ルベゾＬド
   を二］−ドする第２配列を含ん（′いるｌ）　ＮΔｌ１
   ｌｉ７ｉが、前記細胞のゲノム内に安定的に絹み込まれ
   （いるか又は前記細胞内Ｃ・安定的に発現され、前記細
   胞内又は前記用Ｉｌｌのゲノム内に同様に安定的（こ存
   右する外因１１ブ１］シータの制御ｐＨ−Ｆ　Ｃ’前記
   断ハが発現されることを特徴とするレルラーｒン。 （２）　前記Ｄ　Ｎ　Ａ　ｌ１ｌｉ　）’＋が、ヒ１へ
   成長ゾレホルモンを＝」−ドづるｃＤＮΔに相当するか
   又【よｔｌｌｌＲ１４Ｇ１ＯＮ八を含むことを特徴とす
   る特５＋［請求σ）範１ｌｌｌ第１項に記載のヒルライ
   ン。 （３）　前記ジグリルベープチ１−を二１−１こりる第
   ？配列が、対応りるヒ１へ成長１１＼ル七ンに通富結含
   しこいるシグノルベブチドを１−ドして（Ｘることを特
   徴とする特許′（請求の範囲第２　Ｊｉに記載σ）　１
   　／し０ツイン。 （４）　前記外因性ゾ１−ＩＬ−夕が、５ｖｎｏｔ＝山
   メ（しＣおり、好ましくは５Ｖ４００１％！　１１１１
   ）゛［１１ニータ（、−相当しＣいることを特徴とりる
   ’１−４ｉ訂品求σ）範囲り１１　Ｊｆ４乃金給金第３
   瑣ずれかに記載のヒル１ライン。 （５）　　前記−Ｌ）　Ｎ△断ハが史に別の補犀配列を
   一１個以上含１ｖ　Ｃ３’；　’）、前Ｃｉ３　別ｃ７
   ）　？＋１ｉ　”；Ｎ　Ｆ＋ｔ！　Ｊｌｌ　ｌ〕’ｒ、
   −前記外因性ゾＵ七−夕の制御十〇゛メツレンジｔ・−
   ＲＮ　Ａの対応部分に転写され４４する少なくとも１個
   の部分を含む配列（ａ）、 −１個以１−のポリｊ）ラニル化部位を含んぐおりかつ
   好ましくは前記配列（ａ）の前記部分の転写の終ｒ部位
   を６含んＣ゛いるレグメン１〜（ｂ）、−少なくとし　
   １個のインｌ−Ｉｌンと前記転写の際の前記イン１−］
   １ンの切除に必要な配列とを含む配ＴＪ１．１（Ｃ）、 から成るグルー／に属りることを特徴とする特許′［請
   求の範囲第１項乃至第４項のいずれかに記載のピルライ
   ン。 （６）　前記１）　ＮΔ［Ｏｉ　）１が、前記配列（ａ
   ）。 （ｂ）及び（Ｃ）の集合体をイｊする第３配列を含むこ
   とを１ｈ徴どりる特許請求の範囲第５１ｉｉに記載のピ
   ルライン。 （’７　）　　前記ポリアデニル化部旬名しくは前記イ
   ン１〜Ｉ」ン又はこれら両者が、マウスα−グ１−１ビ
   ンを−”１−ドする逍伝子に由来Ｍることを特徴とする
   特３′、請求の範囲第５項又は第６頂に記載のセルフイ
   ン。 〈Ｆ３）　　更に、優↑（ｌマーカーを−１−ドするｌ
   ）ＮΔ配列、１シ１にキ十ノーンチンーグツ１ニンーボ
   スホリボシルー１−ランスノ■ノーＵを−」−ドする逍
   伝了を含／ｖ　’（”　ａ＞す、前記優性ンー力−自体
   は、好ましくは、前記とは別のゾ【」七−タの内接制御
   トにある（ことを特徴とりる特５′［請求の範囲第１項
   乃〒第７項のいり゛れかに記載のヒルライン。 （Ｃ，、−）　）　　ｔｆ？ｊ記別のブＬ」モータと優
   性マーカーとが、同様に、１ｊＪ　晶’ｒ　ｉ；＾求の
   範囲第５　ＪＥ’ｊに記載の如き配列（ａ）　、　　（
   ＋１）　Ｋシ＜は（ｃ）ｃ７）１個以上Ｍｌｌｒ訂請求
   の範囲第６　Ｊｌｊに記載の如き第３配列に結合されＣ
   いることを特徴とする特、ｉ’ｆ品求の範囲第ε３１１
   ′通に記載のセルライン。 （１０）　　ＶｅｒＯ（Δ１　ＣＣ：　ＣＣＩ　８１＞
   タイプの細胞から誘導されることを特徴とする特、ｉ’
   ｌ請求の範囲第９項に記載のセルライン。 （１１）　　成長ホルトンの’Ｉ−！ｉ　ｔ！ｌをイ］
   −りるタンパクを産生ｕしむべく高等真核生物特に補性
   動物の細胞を形負ｌｌｌ／、換（）るＩｌ、めのゾ２ノ
   スミ１〜の如きｌ＼クタ−に於い（ ６“ＣＱ９貞核牛物、狛に吐乳動物６月１１１胞のツノ
   ツム内に安定的に組み込まれるか父は前記細胞内Ｃ゛安
   定的に１幾能弁現され得るゾＬＩ　Ｌ−夕から選択され
   る一ｆＩＪｔ−タど、 前記−プ１１シータの制御子にあり、第１配列りｒまし
   くｔ、↓Ｇ１−１タンパクを−」−ド４るＣ１−）　Ｎ
   　Ａを含みかつ好ましくは同時に転写り向に関しく前記
   第１配列の自ぐ１流にシグナルペブブ用−をＺ］−ドづ
   る第２配列をも含む１つＮＡ断片と、 −前記プＩＩＵ−夕の制御−ト４メツピンジト−１＜Ｎ
   △の対応部分に転ｂ゛され得る少なくとし１個の部分を
   含む配列（ａ）、 −１個以上のポリアデニル化部位を含んでおりかつ！ｌ
   ｌ’ましくけ配列（ａ）の前記部分の転′す゛の終ｒ部
   位をも含んＣ゛いるレグメンｌ−（＋１＞　、及び、少
   ４１＜ど（、）１個のイン１〜１１ンと１１シＩシ転′
   す゛の際の前記イシドＬＪンの切除に必並な配列とを含
   む配列＜　Ｃ＞、 のうらの少なくとし１個と、 を組合ｌ！（含むことを特徴とりるベクター。 （１２）　　前記第１配列が、ｌ＋ＧＨを二１−トｉｊ
   るメクレＪｕ１〜配列を含むことを特徴とする特ｉ′［
   請求の範囲第１１１ｊｉに記載のへフタ−。 （１３）　　前記配列（ａ＞、（ｂ）及び（Ｃ）の集合
   体を右づる°゛第３配列′”を含むことを特徴とする特
   δ′１請求の範囲第１１項又は第１２１ｇに記載のベク
   ター。 （１４）　　前記第３配列の木質部かマウスα−り１１
   ヒンｊ宜伝子に由来りることを特徴とする特ｉ′１品求
   の範囲第１３項に記載のへフタ−，。 り１５）　　萌１□（！Ｊ１ｌ　’Ｅ−タが、５Ｖ４（
   ｌに山来しζおり、好ましくはＳＶ４０の望明グ１１シ
   ータから成ることを特徴とする特Ｆｆ請求の範囲第１１
   Ｊｒ！乃〒第１４項のいずれか（Ｊ記載のベクター。 （ｉｅ）　　更にマーカー、りｆましくは、−１−リー
   ンブンーグアニンーホスｊｌ＼リボシル−１〜ノンスノ
   １−Ｔ／−げ耐水の如さ新し２い酵素？ｉｓ　＋１−を
   産生りる能力を宿主細胞内−Ｃ誘光する優性マーカーを
   倉んて゛おり、前記ンーカー自体が前記とは別の１１１
   千−夕の制御下にあることを特徴とする特許請求の？４
   ４１１ｔｌ第１１］Ｆｊ／ｉ＋〒第１５項のいり゛れか
   に記載のベクタ−０（１７）　　前記別のノロモータと
   １０性１ノーカーとか、特ｉｉ’Ｆ　ｌｉｉ’ｉ求の範
   囲第１１　］ｊｊに記載の如き配列（ａ）。 （１））名しく（、↓（Ｃ）の１１１１．ｌ以「又は特
   許請求の範囲第１３項に記載の如さ″第３配列”°ｔ・
   二結合しＣいることを特徴とする請求 載のベクター。 （１８）　　特許請求の範囲第ｉ　］（４乃１゛り目（
   １１ロのい４れかに記載のｌｌｉ乳動物レルしインのｊ
   ８八（４−Ｊ、リｊ′ＩＩられる成ｌ（ホルモンの本ｖ
   ′Ｉ的特１ノ１をイ１Ｉｌるタンパク。 （１９）　　１、’ｉ特許請求範囲第１８］ｊｊに記載
   のタンパクを薬剤ベヒクルと共に彊Ｉる薬剤組成物。 （２０）　　特ル１請求の範囲第１８項に記載のタンパ
   クに対づる抗体。