JPS59120099A - 診断テスト用プロ−ブ及びそのプロ−ブを用いて試料中に存在する酵素を調べる方法 - Google Patents

診断テスト用プロ−ブ及びそのプロ−ブを用いて試料中に存在する酵素を調べる方法

Info

Publication number
JPS59120099A
JPS59120099A JP23598683A JP23598683A JPS59120099A JP S59120099 A JPS59120099 A JP S59120099A JP 23598683 A JP23598683 A JP 23598683A JP 23598683 A JP23598683 A JP 23598683A JP S59120099 A JPS59120099 A JP S59120099A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
probe
sample
diagnostic test
reagent
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP23598683A
Other languages
English (en)
Inventor
ダ−ウエント・スウエイン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
OKUSOIDO Ltd
Original Assignee
OKUSOIDO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by OKUSOIDO Ltd filed Critical OKUSOIDO Ltd
Publication of JPS59120099A publication Critical patent/JPS59120099A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素の存在を調べるのに用いられる診断テスト
プローブに関するものである。
微生物学実験室に於て普通に行なわれている診断技術で
は選択した化学試薬を顕微鏡スライドに配置し、特定の
微生物が含まれていると推定される試料をスライドに移
し、試料と試薬の混合物を培養し、化学反応が生じるか
どうかを観察するのである。プラチナのループを用いて
試料をスライドに移し、そこで試料を試薬と混合するこ
ともできる。
この診断技術は広く用いられているが、時間が長くかか
り、かつ病原性のバクテリアが含まれている場合には潜
在的に危険性を有する。より一層簡単で且つ安全な技術
が出現すれは、それは微生物研究室に喜んで受は入れら
れることであろう。
イキリス特許第779514号、第1082459号、
第136!5001号及び第1406180号はバクテ
リアのテストに用いられるプローブ(こついて記載して
いる。これらのプローブは栄養媒体及び変色試薬をも運
ぶ。これらプローブは)\クチリアを含んでいる可能性
のある試料と接触させ、バクテリアであることを観察す
ることができるまで試料を培養するのである。
このテスト番こは何時間もかかり、普通は何日間もかか
ることの方が多い。それにひきかえ、本発明のプローブ
はバクテリアがすてに培養されている場合に用いられる
から、酵素確H忍テストはほんの何秒間か何分間で行な
うことができる。
イギリス特許第1246080号、第1361577号
は亜硝酸塩テストについて記載しており、該テストは診
断用の細片に試薬を載せて実施するものである。塩水の
管の中ではバクテリアの培養は規制されるから、その管
の中に細片をit 7tiするのである。塩水の入った
管を使用すると、多くのテストを実施しなけれはならな
いときに時間が長くかかるし、塩水か試料を薄めること
になるためテストの感度を落してしまう。更にこのテス
トは酵素のためではなく、バクテリアの代謝作用によっ
て作られる特定の無機生産物のためのものである。
従来、大量に貯えである液体試薬か或は調製したはかり
の液体試薬の何れかを用いて酵素の存在を調べるテスト
を行なっていた。その技術の1つは、培養して栄養ケル
(nutrient get )となるバクテリアのコ
ロニーに一滴の試薬を加えて、起こり得る色変化を観察
するものであるが、これはコロニーを破壊してしまう。
もう1つの技術は、一枚の紙に試薬を含浸させ、その含
浸部分にコロニーの試料を塗布するものであるか、これ
は手間がかかる上、紙をひつかいたりすると病原性のエ
ーロゾル(aerosol)が形成されることにもなる
。第3の技術は栄養媒体とカラー試薬を入れた管の中に
コロニーのループを吊るしておくものであるが、これは
遅くて時間がかかりずきる。
又、もう1つの技術は、円板状の紙に試薬を含浸させ、
培養して栄養ケルとなるコロニーの上に前記円板状の紙
を軽く押し当てるものであるか、これはコロニーを破壊
してしまう外、試薬が栄養媒体と接触することは避けら
れない。このことが診断テストに影響を及ばずことはよ
く知られていることである。
本発明の目的は試料中の酵素の存在を調べるための診断
テスト用プローブを提供するものであって、該°プロー
ブはハンドルとチップから構成されている。チップは試
料に当てるのに適当な形状に形成されており、チップに
付けた試薬を酵素と反応させることによって、試料中に
酵素が存在することを示す信号を発生させるのである。
本発明のもう1つの目的は、前記の診断テスト用プロー
ブを用い、試料中に酵素が存在することを調べる方法を
提供するものであって、試薬をつけたプローブのチップ
を試料に当て、試薬と酵素の間で反応を起こさせ、試料
中に酵素か存在することを示す信号を観察するものであ
る。
本発明(こ係る診断テスト用プローブの一芙施例として
、多孔性の不活性材料から形成したスティック(sti
ck)か挙けられ、該スティックの一端を所定の試薬溶
液中ζこ浸漬し、幾らかの試薬をスティック上(或はス
ティックの内部)に付着している。
プローブはハンドルを具えており、該ハンドルはプロー
ブの操作を目的とするものであってその形状及び大きさ
は重要ではない。プローブがスティックである場合、ス
ティックの一端をハンドルに、他端をチップに形成する
こともできる。
第1図は本発明に係る診断テスト用プO′〒ブの斜面図
を表わしており、該プローブは長さ6j Onvnのロ
ールペーパから形成されたスティックであって、該ステ
ィックはノへンドル部(10)とチ・ノブ(12)を備
えており、該チップは試薬中(こ’+ 78されたもの
である。
プローブのチップは、そこに発生するどんな信号をも明
瞭に且つ迅速に観察し得る大きさであることが望ましく
、一方小さな試料、例えは寒天ケルのプレートに載せた
小さなバクテリアのコロニーに対してもチップを正確に
配置し当てることかできるように小さいことか望ましい
。チップの直径は数ミリメートル程度、具体的には05
乃至10間であるが、断面円形でなくても可いのは勿論
である。
プローブは形状保持性があり、使用中は硬くて曲がらな
いものか望ましいか、これは必ずしもそうである必要は
ない。ゲル状或は固体の試料に対してプローブのチップ
を押し当てようとする際に特に硬いプローブであること
が望ましく、この様な場合、シート状のペーパの如き薄
いプローブでは殆んど適当てないからである。
試料としてバクテリアのコロニーが望ましく、培養され
て寒天ケルの如き栄養ゲルとなったコロニーか望ましい
。このようなコロニーの中ではバクテリアの作り出すい
かなる酵素も濃縮された形で存在するため容易に検出す
ることができるからである。本発明のテストプローブは
全部のコロニーを破壊することなく、又、培養中の栄養
ゲルに触れることなくコロニーに適用することができる
従って、診断テストに於いて栄養ゲルの影響を受けるこ
とはないので、テストの結果、更に調べたい場合、コロ
ニーをその書残しておいて次の確認テストに用いること
ができる。
プローブのチップの」−(或は内部)に付けられる試薬
は、試料中に存在することが推定された酵素と反応して
観察可能な信号を発生するものが選択される。信号とし
てカラー変化するものが都合良い。カラー変化反応をす
る多くの試薬が微生物学実験室で用いられている。例え
ば米国、ウィリアムス アンド ゥィルキンス発行のジ
ェー・エフ・マクファテン著の「メディカル バクテリ
ア確認のための生化学的テスト」に記載されている。
酵素が存在していることを示す信号かカラー変化によっ
て与えられる場合、プローブのチップのカラーとして例
えば白の如き、変化を容易に観察し得るものが可い。
このカラー変化は速やかに起こり、秒単位或はせいぜい
分単位のものである。プローブと接触させながらバクテ
リアを培養する必要性はないため試薬にはバクテリアの
栄養媒体を含まなくても可い。
酵素を用いて種々の方法にて反応せしめることもできる
。例えは、選択された試薬と反応させて直接に有色物を
作り出すこともできる。或は又、混合物質から試薬を形
成し、そのうち1つが酵素と反応することによって他の
物質にカラー変化を生じさせることもできる。下記の実
施例3に示す如く、ウレアーゼが尿素に反応してアンモ
ニアを生成し、アンモニアかI)Hを上昇させてフェノ
ールレッドを黄色から赤色に変えるのである。
プローブのチップは多孔質或は吸収性のよいものが望ま
しいが、必ずしもそうである必要性はない。小さなチッ
プに複数の毛細管があると試薬或は後の試料をチップか
ら多量に採取することができる。然し乍ら、チップが発
生信号に対して透光又必要である。プローブのチップを
形成する利料の親水/疎水性と濡れ特性とを考慮に入れ
、試行錯誤によって所望する最適な多孔性を見出すこと
はり能である。
チップは試薬(こ対しても又、試料中に存在し得るどん
な化学剤に対しても不活性であるへきである。適当な材
料としてプ′ラスチック利料が挙げられ、具体的には連
続気泡(open−cell pores )性ノブラ
スチック、紙或は厚紙を巻いたセルロースペースの製品
、及びフェルトの如きなし他繊維(matted fi
bre)製品か例示される。
本発明の診断テスト用プローブは1回使用した後、その
借処分することができるように安価に製造することがで
きる。安価な製品の適当な例として例えはキャンディ−
スティック用のロールペーパから形成されたスティック
や、ポリエチレン或〜250ミクロンの範囲内にあるも
のは市販されている。これらスティック或はロッドの端
部に所定の試薬を手で浸漬するか或はもつと複雑な方法
によって付けることができる。プローブは殺菌状態で供
給するのが望ましく、個々に包装したり或は容器に収納
しておくこともできる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例1〜3のプローブは、多孔性のポリエチレンから
形成されたロッドて、長さが約7c+n、直径約4mm
である。
実施例4及び5のプローブは、ロールペーパく(キャン
ディ ペーパ)から形成されたスティックを用いた。
実施例1 プローブは、前記ロッドの1本を用い、該ロッドの一端
部をニトロセフイン(nitrocef in) 1r
nLPのエタノール溶液2m、l中に浸漬し、乾燥させ
て形成した。次にプローブのチップを培養されて寒天ゲ
ルとなる耐ペニシリン性のバクテリアコロニーに当てた
。バクテリアの形成したベータ・ラクタマーゼ(bet
a −1actamase )がニトロセフインと反応
してプローブのチップは淡黄色から鮮赤色に変色した。
この変化は数秒で行なわれた。このようにこのプローブ
は試料中にベータ・ラクタマーゼか存在することを調べ
るのに適していた。
ニトロセフインはグラクツ・リサーチ・リミテッドが開
発した発色性のセファロスポリン(cephalosp
orin )である(コード87/3]2;3−(2,
4)ジニトロスチライルー(6R,7R)−7B (2
−チェニルアセトアミド) −ceph −3−em−
4−カルボン酸、E−異性体)。
実施例2 プローブはm−ジメチル−p−フェニレンジアミン、ン
ユウ酸塩、アスコルビン酸、及びα−ナフトールとから
成る水ベースの試薬の中にロッドの一端部を浸漬して形
成した。チトクローム オキシターゼが存在すると、プ
ローブのチ・ノブは無色から暗赤色/黒色に変色した。
このプローブはチトクロームオキシクーゼが存在するこ
とを調べるのに適していた。
実施例3 プローブはイーストのエキス、リン酸塩の緩衝剤、尿素
及びフェノールレ・ンドを含有した水性培養基の中に一
端部を浸漬して形成した。ウレアーゼが存在すると、プ
ローブのチ・ノブは黄色から赤色に変色した。このプロ
ーブはウレアーゼが存在することを調べるのに適してい
た。
実施例4 プローブはL−フェニルアラニンと塩化鉄から成る水ベ
ースの試薬の中にステ什ツクの一端部を浸漬して形成し
た。フェニルアラニン デアミナーゼ酵素が存在すると
、プローブのチ・ノブは無色から緑色に変色した。この
プローブはフェニルアラニン デアミナーゼ酵素が存在
することを調べるのに適していた。
実施例5 プローブはオルニチン、0.004m−フタル酸カリウ
ム(potassium acid phthalat
e)の緩衝剤、ピリドキサル燐酸及びブロモフェノール
レッドから成る水ベースの試薬の中にスティックの一端
部を浸漬して形成した。オルニチン脱炭酸酵素が存在す
ると、プローブのチップは黄色からローズレッド色に変
色した。このプローブはオルニチン脱炭酸酵素が存在す
ることを調べるのに適していた。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明の診断テスト用プローフの斜面図である
。 (101・・・ハンドル部   t121・・チップ茅
1図

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 ■ 試料中に酵素が存在することを調べる診断テスト用
    プローブであって、該プローブはハンドル部とチップと
    から構成され、該チップは試料に当てることのできる形
    状に形成されて試薬を載せる手段となし、試薬と酵素が
    反応することによって試料中に酵素が存在することを示
    す信号を発生することを特徴とする診断テスト用プロー
    フ。 ■ プローブはセルロースペースの材料から作られてス
    ティック状に形成されており、一端部は試薬を載せる手
    段を構成している特許請求の範囲第1項に記載の診断テ
    スト用プローブ。 ■ スティックは紙を巻いて形成したものである特許請
    求の範囲第2項に記載の診断テスト用プローブ。 ■ プローブは多孔性の合成プラスチック材料から作ら
    れてロッド状に形成されており、一端部は試薬を載せる
    手段を構成している特許請求の範囲第1項に記載の診断
    テスト用プローブ。 ■ 試薬は、試料中に存在すると推定された酵素と反応
    してカラー変化を生じることのできるものが選択される
    特許請求の範囲第1項乃至第4項の何れかに記載の診断
    テスト用プローブ。 ■ プローブは形状保持性があり、使用中堅くて殆んど
    曲がらないものである特許請求の範囲第1項乃至第5項
    の何れかに記載の診断テスト用プローブ。 ■ チップの直径は0.5mm乃至10mmである特許
    請求の範囲第1項乃至第6項の何れかに記載の診断テス
    ト用プローブ。 ■ 診断テスト用プローブを用いて試料中に酵素が存在
    することを調べる方法であって、試薬を付けたプローブ
    のチップを試料に当て、試薬と試料の間に反応を生じさ
    せ、試料中に酵素が存在するこ・とを示す信号を観察す
    ることから構成されることを特徴とするプローブを用い
    て試料、、1中(こ存在する酵素を調べる方法。 ■ 試料は培養されて栄養ゲルとなるバクテリアのコロ
    ニーである特許請求の範囲第8項に記載の方法。 [相] バクテリアの種類を決める方法であって、種を
    決めるべきバクテリアのコロニーを栄養ゲルに培養し、
    ハンドルとチップから成る診断テスト用プローブであっ
    て該プローブのチップには酵素と反応してカラー変化か
    生じる試薬が付けられたものを$1+#il、、試薬と
    酵素との間に反応を起こさせ、その結果束じるカラー変
    化を観察し、そのカラー変化によってバクテリアの種類
    を決める方法。
JP23598683A 1982-12-14 1983-12-13 診断テスト用プロ−ブ及びそのプロ−ブを用いて試料中に存在する酵素を調べる方法 Pending JPS59120099A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8235550 1982-12-14
GB8235550 1982-12-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS59120099A true JPS59120099A (ja) 1984-07-11

Family

ID=10534955

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP23598683A Pending JPS59120099A (ja) 1982-12-14 1983-12-13 診断テスト用プロ−ブ及びそのプロ−ブを用いて試料中に存在する酵素を調べる方法

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0112077A1 (ja)
JP (1) JPS59120099A (ja)
CA (1) CA1215616A (ja)
ES (1) ES283487Y (ja)
FI (1) FI834542A (ja)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0304871A3 (en) * 1987-08-25 1990-01-17 Dentsply Management Corp. Dental diagnostic device and method
EP0811845B1 (en) * 1996-06-07 2003-09-03 Oxoid Limited Devices and kits for testing serum and the like
DE69724515T2 (de) * 1996-06-07 2004-04-01 Oxoid Ltd., Basingstoke Vorrichtung und Testsatz zum Test von Serum und dergleichen
AU679883B1 (en) * 1996-07-15 1997-07-10 Centre For Digestive Diseases Pty Ltd Test strip for detecting gastric problems based on presence of urease
US6649360B2 (en) 2001-10-02 2003-11-18 Thomas Julius Borody Test strip for detecting gastric problems based on the presence of urease
CN108779485A (zh) 2015-11-27 2018-11-09 Infagen(香港)有限公司 用于检测脲酶的试剂盒

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3122480A (en) * 1961-05-25 1964-02-25 Warner Lambert Pharmaceutical Diagnostic preparation for detection of pseudomonas
US3547780A (en) * 1968-03-13 1970-12-15 Frank A Finnerty Jr Simplified accurate method of detecting bacteriuria
US3691018A (en) * 1970-10-28 1972-09-12 Warner Lambert Co Diagnostic method for periodontal disease
DE2136880A1 (de) * 1971-07-23 1973-02-01 Radola Bertold J Dr Gepufferte filterpapiere fuer den enzymnachweis
US3926732A (en) * 1973-02-16 1975-12-16 Alfa Laval Ab Method for assaying catalase in milk and other liquids
US3891507A (en) * 1974-05-30 1975-06-24 American Cyanamid Co Organ function test cards
DE2914487A1 (de) * 1979-04-10 1980-10-30 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und mittel zur entfernung von ascorbinsaeure aus waessrigen fluessigkeiten

Also Published As

Publication number Publication date
ES283487Y (es) 1986-04-01
FI834542A0 (fi) 1983-12-12
EP0112077A1 (en) 1984-06-27
CA1215616A (en) 1986-12-23
ES283487U (es) 1985-06-16
FI834542A (fi) 1984-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1044070B1 (en) Device for determination of an analyte in a solution
US4591556A (en) Apparatus and associated methods for use in microbiological, serological, immunological, clinical-chemical and similar laboratory work
US3985608A (en) Supporting element for use in microbiological, serological, immunological, clinical-chemical and similar laboratory work
US2904474A (en) Process and means for carrying out bacteriological operations
US5916802A (en) Device for measuring ATP
JP4347415B2 (ja) エンテロトキシンを産生するブドウ球菌を検するための物品および方法
JPH0815427B2 (ja) 微生物の感受性検定用装置
US4054490A (en) Method for investigating microorganisms
CA1176549A (en) Determination of antibacterial agents
JPH11510051A (ja) 複数ゾーン滅菌インジケーター
CA2337208A1 (en) Evacuated sensor device for detecting microorganisms in blood samples, and method therefor
US5550032A (en) Biological assay for microbial contamination
WO1979000045A1 (en) Method for the determination of enzymes by diffusion in a porous matrix or by electrophoresis
JPS59120099A (ja) 診断テスト用プロ−ブ及びそのプロ−ブを用いて試料中に存在する酵素を調べる方法
JP4488628B2 (ja) 接種パッドの付いたディスクアッセイ装置および使用方法
CA1045530A (en) Analytical device and method
AU630219B2 (en) Apparatus for microbiological testing
EP0576753A1 (en) Devices for carrying out a plurality of microbiological tests
US4140582A (en) Supporting element for use in microbiological, serological, immunological clinical-chemical and similar laboratory work
EP0124285A2 (en) Method and device for detecting microorganisms
US3784448A (en) Diagnostic device
AU773782B2 (en) Method for detecting micro-organisms and support used in said method
JPS5860999A (ja) 液体試料中の微生物抑制物質を検出する部材
O'toole A toluidine blue-membrane filter method for the quantitative staining of bacteria
JPH01145569A (ja) 環境分析装置