JPS5890518A - 不動態化された生物学的活性物質、親和性クロマトグラフイ及び自己免疫病の診断用及び／又は治療用薬剤 - Google Patents
不動態化された生物学的活性物質、親和性クロマトグラフイ及び自己免疫病の診断用及び／又は治療用薬剤Info
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- JPS5890518A JPS5890518A JP57196862A JP19686282A JPS5890518A JP S5890518 A JPS5890518 A JP S5890518A JP 57196862 A JP57196862 A JP 57196862A JP 19686282 A JP19686282 A JP 19686282A JP S5890518 A JPS5890518 A JP S5890518A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、不動態化された生物学的活性物質及び親和性
クロマトグラフィ（Ａｆｆｉｎｉｔ’ａｔｓ−ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） 、殊に免疫収着（Ｄｎｎｎ
ｉｎｏｓｏｒｐｔｉｏｎ ）におけるその使用及び自己
免疫病殊に筋無力症の診断及び／又は治療のために使用
すること一関する。
クロマトグラフィ（Ａｆｆｉｎｉｔ’ａｔｓ−ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） 、殊に免疫収着（Ｄｎｎｎ
ｉｎｏｓｏｒｐｔｉｏｎ ）におけるその使用及び自己
免疫病殊に筋無力症の診断及び／又は治療のために使用
すること一関する。
不溶性の固体担体物質に固定された生物学的活性物質例
えば酵素、コファクター、抗原又は抗体は、研究、工業
及び医薬の多くの使用分野で重要性が増大しでいる。殊
に、種々の構造の、かつ生物学的活性物質の化学的又は
物理的結合のために処理された表面を有する有機ポリマ
ーは、担体物質として効を奏している〔例えば西ｒイツ
特許出願公開第２４３７８７０号、同第２４３８４３６
号、米国特許第３９７０５９７号明細書、インマン（工
ｎｍａｎ ’）及びホーンビイ（Ｈｏｒｎｂｙ ）のＢ
ｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、 ｌ ２９ １９７２年２５５頁参
照〕。
えば酵素、コファクター、抗原又は抗体は、研究、工業
及び医薬の多くの使用分野で重要性が増大しでいる。殊
に、種々の構造の、かつ生物学的活性物質の化学的又は
物理的結合のために処理された表面を有する有機ポリマ
ーは、担体物質として効を奏している〔例えば西ｒイツ
特許出願公開第２４３７８７０号、同第２４３８４３６
号、米国特許第３９７０５９７号明細書、インマン（工
ｎｍａｎ ’）及びホーンビイ（Ｈｏｒｎｂｙ ）のＢ
ｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、 ｌ ２９ １９７２年２５５頁参
照〕。
本発明の目的物は、アセチルコリンレ七シタ−及びモノ
クローン抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｅ Ａｎｔｉｋ：
ｒｐｅｒ）の群から選択した不動態化された生物学的活
性物質殊に有利にホース状ポリアミｒ担体の内相体物質
としては、場合によっては一物理的又は化学的表面処理
の後に、その活性の充分な保持下に、本発明の生物学的
活性物質の充分な固定のために好適であるすべての公知
の無機及び殊に有機の担体を使用することができる。特
に、この場合天然又は合成のプラスチック、ビオポリマ
ー（Ｂｉｏｐｏｌｙｍθｒ）又は他の有機物質を基礎と
、する担体（ここでは活性基が存在するか又は、容易に
得ることができ、これは、できるだけ親水性の基又は中
心を有する）、例えばポリアミｌ、’１１セルロース、
セルロース誘導体又ハ他の多糖類、ホリアクリルアミｒ
等が好適である。
クローン抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｅ Ａｎｔｉｋ：
ｒｐｅｒ）の群から選択した不動態化された生物学的活
性物質殊に有利にホース状ポリアミｒ担体の内相体物質
としては、場合によっては一物理的又は化学的表面処理
の後に、その活性の充分な保持下に、本発明の生物学的
活性物質の充分な固定のために好適であるすべての公知
の無機及び殊に有機の担体を使用することができる。特
に、この場合天然又は合成のプラスチック、ビオポリマ
ー（Ｂｉｏｐｏｌｙｍθｒ）又は他の有機物質を基礎と
、する担体（ここでは活性基が存在するか又は、容易に
得ることができ、これは、できるだけ親水性の基又は中
心を有する）、例えばポリアミｌ、’１１セルロース、
セルロース誘導体又ハ他の多糖類、ホリアクリルアミｒ
等が好適である。
担体の形は殊に使用目的により決まり、例えば粉末、顆
粒、膜、網、シート又は他の形状で殊に診断及び治療の
用途に特に好適であることが立ｉされているホースとし
て存在し得る。天然又は合成の中空繊維系であってもよ
いホース状担体に、生物学的活性物質が殊にその内側に
存在している。
粒、膜、網、シート又は他の形状で殊に診断及び治療の
用途に特に好適であることが立ｉされているホースとし
て存在し得る。天然又は合成の中空繊維系であってもよ
いホース状担体に、生物学的活性物質が殊にその内側に
存在している。
ここで、特定の用途にとって、半透性中空繊維を使用す
るのが有利でありうる。 ゛本発明により、担体
材料として、有利にその結合性を拡大、するために生物
学的活性リガンｒに対して活性化されているポリアミｒ
例えばナイロン−６、ナイロン−６、Ｉ Ｏ又バー１−
イｏ ｙ−６６を使用することができる。その結合能
増大は、公知の方法で例えば加水分解（アミＰ橋の部分
的鹸化）及び場合によってはジ１続く、側鎖を形成する
試薬例えばアルデヒＰ及びイソニトリルとの反応により
、又は硫酸ジメチル、トリエチルオキソニウムテトラフ
ルオルぎレート又は他のアルキル化剤を用いる０−アル
キル化によって行なうことができる（例えば西Ｐイツ特
許出願公開第２４３７８７０号、米国特許第３Ｇ１７０
５９７号明細書、Ｐ、ｖ＊Ｓｕｎｄａｒａｍ等による０
１ｉｎ、Ｏｈｅｍ、 ２４ １９７８年２３４頁参照）
。
るのが有利でありうる。 ゛本発明により、担体
材料として、有利にその結合性を拡大、するために生物
学的活性リガンｒに対して活性化されているポリアミｒ
例えばナイロン−６、ナイロン−６、Ｉ Ｏ又バー１−
イｏ ｙ−６６を使用することができる。その結合能
増大は、公知の方法で例えば加水分解（アミＰ橋の部分
的鹸化）及び場合によってはジ１続く、側鎖を形成する
試薬例えばアルデヒＰ及びイソニトリルとの反応により
、又は硫酸ジメチル、トリエチルオキソニウムテトラフ
ルオルぎレート又は他のアルキル化剤を用いる０−アル
キル化によって行なうことができる（例えば西Ｐイツ特
許出願公開第２４３７８７０号、米国特許第３Ｇ１７０
５９７号明細書、Ｐ、ｖ＊Ｓｕｎｄａｒａｍ等による０
１ｉｎ、Ｏｈｅｍ、 ２４ １９７８年２３４頁参照）
。
生物学的活性物質としての本発明により使用されるアセ
チルコリンレセゾターは、例えばトルペｒ−マルモラタ
（Ｔｏｒｐｅｄｏ ｍａｒｍｏｒａｔａ ）から単離す
ることのできる膜蛋白質である〔Ｒ■ｃｈｔｅ１等によ
′７：ＪＪ、Ｂｉｏ１．Ｏｈｅｍ、 ｌ ｌ ９巻（１
９８１年）、２１５〜２２３頁参照〕。これは精製した
形で使用され〔精製法は、メリック（Ｍａｅｌｉｃｋｅ
）等によるＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈｉｓｉｏｌｏ
ｇｙ 、 ＴｈｅＮｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ Ｉ、
１４（１９７７年）４９３〜５１９頁、Ｊ、Ｂｉｏｌ、
Ｏｈｅｍ、 ２５２ （１９７７年）４８１１〜４８３
０頁参照〕、この際下位単位（５ｕｂｕｎｉｔｓ ）も
使用できる。
チルコリンレセゾターは、例えばトルペｒ−マルモラタ
（Ｔｏｒｐｅｄｏ ｍａｒｍｏｒａｔａ ）から単離す
ることのできる膜蛋白質である〔Ｒ■ｃｈｔｅ１等によ
′７：ＪＪ、Ｂｉｏ１．Ｏｈｅｍ、 ｌ ｌ ９巻（１
９８１年）、２１５〜２２３頁参照〕。これは精製した
形で使用され〔精製法は、メリック（Ｍａｅｌｉｃｋｅ
）等によるＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈｉｓｉｏｌｏ
ｇｙ 、 ＴｈｅＮｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ Ｉ、
１４（１９７７年）４９３〜５１９頁、Ｊ、Ｂｉｏｌ、
Ｏｈｅｍ、 ２５２ （１９７７年）４８１１〜４８３
０頁参照〕、この際下位単位（５ｕｂｕｎｉｔｓ ）も
使用できる。
本発明により使用されるモノクローン抗体は、単一特異
性の抗体例えば免疫化ウサギの血液中に現われる抗体に
対して得られる抗イディオタイプ−抗体（Ａｎｔｉｉ４
１ｏｔｙｐ−Ａｕｔｉｋ；ｒｐｅｒ ）である。
性の抗体例えば免疫化ウサギの血液中に現われる抗体に
対して得られる抗イディオタイプ−抗体（Ａｎｔｉｉ４
１ｏｔｙｐ−Ａｕｔｉｋ；ｒｐｅｒ ）である。
本発明による系は、親和性クロマトグラフィ殊に免疫収
着て使用できる。従って、例、え＆ず担体特質としての
ナイロン上で不動態化されたアセチルコリンレセゾター
又はその下位単位（５ｕｂｕｎｉｔｓ ）が、レセプタ
ー結合蛋白質、神経毒又は抗体を精製するための親和性
クロマトグラフィにおける吸着剤として非常に良好に好
適であることが判明した。この場合、殊にマトリックス
への非共有吸着、レセプターの結合特性の不安定性及び
変化などの欠点をさけることができる。
着て使用できる。従って、例、え＆ず担体特質としての
ナイロン上で不動態化されたアセチルコリンレセゾター
又はその下位単位（５ｕｂｕｎｉｔｓ ）が、レセプタ
ー結合蛋白質、神経毒又は抗体を精製するための親和性
クロマトグラフィにおける吸着剤として非常に良好に好
適であることが判明した。この場合、殊にマトリックス
への非共有吸着、レセプターの結合特性の不安定性及び
変化などの欠点をさけることができる。
その使用に関して特に好適な本発明による系は、担体と
しての活性ポリアミド−（ナイロン）−ホースに生物学
的活性物質が結合しているものである。ホースの内径は
広範囲に変動可能であり、これは例えばＯ，ｌ ｃｍで
ある。この際、活性化は、有利に、塩酸例えば３．５モ
ルの塩酸ヲ用い、７０℃で７分間のインキュベーション
時間の間の部分的加水分解及びグ１続く冷水又は緩衝液
を用いる数時間の注意深い洗浄により行なう（Ｓｕｎ４
ａｒａｍ及びＨｏｒｎｂｙ 、 ＩＰＩＣＢＳ Ｌｅｔ
ｔ、Ｉ ０１９７０年、３２５〜３２７頁、ｓｕｎａａ
ｒａｍのＢｉｏａｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ 工ｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＥｎｚｙ
ｍｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ 、 Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ１９７７
年３１７〜３４年貢１７〜３４０頁いて、活性担体への
生物学的活性物質の結合は、有利に、二官能性試薬の使
用下に、殊にグルタールアルデヒＰを用いるか又は第１
に、Ｌ−エチ＃−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル
）−カルＩジイミｒ−塩酸（ＩＣＤＡＣ）を用いて、例
えばゴーｒン（Ｇｏｒｄｏｎ ）等によるＵｌｔｒａｓ
ｔｒｕｃｔ。
しての活性ポリアミド−（ナイロン）−ホースに生物学
的活性物質が結合しているものである。ホースの内径は
広範囲に変動可能であり、これは例えばＯ，ｌ ｃｍで
ある。この際、活性化は、有利に、塩酸例えば３．５モ
ルの塩酸ヲ用い、７０℃で７分間のインキュベーション
時間の間の部分的加水分解及びグ１続く冷水又は緩衝液
を用いる数時間の注意深い洗浄により行なう（Ｓｕｎ４
ａｒａｍ及びＨｏｒｎｂｙ 、 ＩＰＩＣＢＳ Ｌｅｔ
ｔ、Ｉ ０１９７０年、３２５〜３２７頁、ｓｕｎａａ
ｒａｍのＢｉｏａｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ 工ｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＥｎｚｙ
ｍｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ 、 Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ１９７７
年３１７〜３４年貢１７〜３４０頁いて、活性担体への
生物学的活性物質の結合は、有利に、二官能性試薬の使
用下に、殊にグルタールアルデヒＰを用いるか又は第１
に、Ｌ−エチ＃−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル
）−カルＩジイミｒ−塩酸（ＩＣＤＡＣ）を用いて、例
えばゴーｒン（Ｇｏｒｄｏｎ ）等によるＵｌｔｒａｓ
ｔｒｕｃｔ。
Ｒ１３Ｂ、 ４７ １９７４年２８５〜２９５頁に記載
の方法で行なう。
の方法で行なう。
不動態化された生物学的活性物質の利用性は、殊に担体
への結合の際及びクロマトグラフィでの数回の使用の際
のそΩ生物特異性特性の保持により決まる。本発明で使
用された生物学的活性物質におけるこの特性殊にアセチ
ルコリンレセプターの毒素結合特性を示し、生物学的活
性物質がグルタールアルデヒＰ殊にＥＤＡＯが活性ナイ
ロンホースに結合している有利な公知系を使用する際に
は、特に充分に保持されることが判明した。生物特異性
は、この系の長い使用及び貯蔵の後にも得られる。アセ
チルコリンレセプターナイロン親和性ボースは、例えば
、湿った状態で、数を月にわたりその生物特異活性１−
１１−り失なうことなしに貯蔵することができる。
への結合の際及びクロマトグラフィでの数回の使用の際
のそΩ生物特異性特性の保持により決まる。本発明で使
用された生物学的活性物質におけるこの特性殊にアセチ
ルコリンレセプターの毒素結合特性を示し、生物学的活
性物質がグルタールアルデヒＰ殊にＥＤＡＯが活性ナイ
ロンホースに結合している有利な公知系を使用する際に
は、特に充分に保持されることが判明した。生物特異性
は、この系の長い使用及び貯蔵の後にも得られる。アセ
チルコリンレセプターナイロン親和性ボースは、例えば
、湿った状態で、数を月にわたりその生物特異活性１−
１１−り失なうことなしに貯蔵することができる。
この系の他の利点は、担体結合生物学的活性物質の高密
度、その安定性及びその良好かつ無菌の貯蔵可能性及び
再使用性である。この系は、可溶化された膜蛋白質の親
和性クロマトグラフィにとって特に好適であることが判
明した。
度、その安定性及びその良好かつ無菌の貯蔵可能性及び
再使用性である。この系は、可溶化された膜蛋白質の親
和性クロマトグラフィにとって特に好適であることが判
明した。
それというのも、この蛋白質は、他のマトリックス系と
比べて、それにより僅かに変質されるか又はその特性が
変えられるからである。これらは、培養液、血清及び他
の液体中の抗体力価の測定及び例えばアレルギー、中毒
の際の浄化等のためにも好適である。担体表面に結合し
た生物学的活性物質の高い包装密度及びこのポースの小
容量に基づき、この系は、免疫収着の際に高い濃度増加
作用をし、抗体力価の非常に敏感な測定を可能とする。
比べて、それにより僅かに変質されるか又はその特性が
変えられるからである。これらは、培養液、血清及び他
の液体中の抗体力価の測定及び例えばアレルギー、中毒
の際の浄化等のためにも好適である。担体表面に結合し
た生物学的活性物質の高い包装密度及びこのポースの小
容量に基づき、この系は、免疫収着の際に高い濃度増加
作用をし、抗体力価の非常に敏感な測定を可能とする。
本発明により不動態化された生物活性物質、殊に生物学
的活性物質が゛活性のナイロンホースに結合している前
記の有利な系の特別ガ利点は、自己免疫病殊に筋無力症
の診断及び／又は治療に封子るその意想外に良好な特性
である。
的活性物質が゛活性のナイロンホースに結合している前
記の有利な系の特別ガ利点は、自己免疫病殊に筋無力症
の診断及び／又は治療に封子るその意想外に良好な特性
である。
筋無力症は自己免疫病である。筋無力症患者においては
、同じ神経刺激における低い筋肉作動電圧の特徴を示す
神経筋閉塞を示す。この閉塞は、コリンエステラーゼ遮
断剤により部分的に廃除することができる。筋無力症は
、端板の障害により起こる。端板におけるこの直接的作
用と共に、筋無力症には胸腺の変化も典型的である。こ
のことは、患者の臀で典型的に現われ、硬化した中枢を
有し、患者のイ。では胸腺の腫瘤が認められる。これら
の大抵の場合に、胸腺摘除はこの病気の症候群を著るし
く改良する０胸腺はＴ、ＩＪン・ぞ細胞の機能発揮に寄
与し、腫れた胸腺の硬化した中心は通例Ｂ −ＩＪンパ
細胞を含有するので、従来から、免疫系の障害がこの病
気の原因として考えられていた。１９６０年代の中頃に
、筋無力症患者の約半数で、血清中に筋膜の抗原成分と
反応する蛋白質体が詔められることが明らかになった。
、同じ神経刺激における低い筋肉作動電圧の特徴を示す
神経筋閉塞を示す。この閉塞は、コリンエステラーゼ遮
断剤により部分的に廃除することができる。筋無力症は
、端板の障害により起こる。端板におけるこの直接的作
用と共に、筋無力症には胸腺の変化も典型的である。こ
のことは、患者の臀で典型的に現われ、硬化した中枢を
有し、患者のイ。では胸腺の腫瘤が認められる。これら
の大抵の場合に、胸腺摘除はこの病気の症候群を著るし
く改良する０胸腺はＴ、ＩＪン・ぞ細胞の機能発揮に寄
与し、腫れた胸腺の硬化した中心は通例Ｂ −ＩＪンパ
細胞を含有するので、従来から、免疫系の障害がこの病
気の原因として考えられていた。１９６０年代の中頃に
、筋無力症患者の約半数で、血清中に筋膜の抗原成分と
反応する蛋白質体が詔められることが明らかになった。
しがしながら、筋細胞のコリン作動性刺激に対するこの
グロブリンの直接的作用は示すことができなかった。
グロブリンの直接的作用は示すことができなかった。
精製されたアセチルコリンレセプター製剤を用いると、
全ての筋無力症患者の少なくとも７５％の血清中のグ四
プリンは精製レセプターと反応することが明らかになっ
た。
全ての筋無力症患者の少なくとも７５％の血清中のグ四
プリンは精製レセプターと反応することが明らかになっ
た。
筋無力症患者の血清中の抗レセプター抗体の神経筋張力
に対する直接的作用は従来示されていないが、精製され
たレセプター蛋白質を用いる免疫化による動物における
実験的神経筋閉塞を得ることができる。実験的筋無力症
は、受動的にリンパ節の細胞によって及び部分的には血
清によっても伝達することができる。これは胸腺摘除し
た動物中では現われず、従って筋無力症はＴ−細胞に関
係する病気である。
に対する直接的作用は従来示されていないが、精製され
たレセプター蛋白質を用いる免疫化による動物における
実験的神経筋閉塞を得ることができる。実験的筋無力症
は、受動的にリンパ節の細胞によって及び部分的には血
清によっても伝達することができる。これは胸腺摘除し
た動物中では現われず、従って筋無力症はＴ−細胞に関
係する病気である。
筋無力症は、患者の血液中のアセチルコリンレセプター
に対する抗体の直接検出により診断することができる。
に対する抗体の直接検出により診断することができる。
しかしながら、この診断は、アセチルコリンレセプター
が通例非常に敏感な蛋白質であり、直ちに送ったり取り
扱らたりできないので、少数の病院で実施可能であるだ
けである。更に、この方法は、その技術が劣悪な検出限
界を有するので、迅速診断には不適当である。特別な問
題は、筋無力症患者の血清中の抗しセゾター免疫力価が
病気の重症度に対して明白に比例しないことにもある。
が通例非常に敏感な蛋白質であり、直ちに送ったり取り
扱らたりできないので、少数の病院で実施可能であるだ
けである。更に、この方法は、その技術が劣悪な検出限
界を有するので、迅速診断には不適当である。特別な問
題は、筋無力症患者の血清中の抗しセゾター免疫力価が
病気の重症度に対して明白に比例しないことにもある。
従って、限られた特異性作用をするレセプターに向けら
れた抗体のポピユレーションのみが病源作用をすると考
えられていた。最も屡々用いられる治療法は、体個有の
免疫系の調整における実質的な処置ではあるが、なお胸
腺摘除術である。
れた抗体のポピユレーションのみが病源作用をすると考
えられていた。最も屡々用いられる治療法は、体個有の
免疫系の調整における実質的な処置ではあるが、なお胸
腺摘除術である。
本発明による系を用いると、従来の診断法及び治療法の
前記欠点を克服することができる。
前記欠点を克服することができる。
その高い安定性及び貯蔵性に基づき、本発明の系はいつ
でもどこでも使用可能である。これは、迅速診断のため
にも好適である。更に、これを用いて、病気の重症度も
狭い許容誤差範囲内でも測定できる。
でもどこでも使用可能である。これは、迅速診断のため
にも好適である。更に、これを用いて、病気の重症度も
狭い許容誤差範囲内でも測定できる。
従って、本発明により不動態化された生物学的活性物質
を自己免−疫病殊に筋無力症の診断及び／又は治療に使
用することも本発明の目的である。
を自己免−疫病殊に筋無力症の診断及び／又は治療に使
用することも本発明の目的である。
治療能力の立証のために、アセチルコリンレセプター免
疫化され、これにより実験的に筋無力症にされたウサギ
の血液を、次の例で示すように、ナイロンホース上で不
動態化されたアセチルコリンレセプター系中に適す。筋
無力症の典型的症候群は、こうして、長時間抑制するこ
とができる。これと共に、アセチルコリンレセプターに
対する低い抗一体力価と筋無力症の症候群の抑制との間
の明確な関係をも示すこともできる。
疫化され、これにより実験的に筋無力症にされたウサギ
の血液を、次の例で示すように、ナイロンホース上で不
動態化されたアセチルコリンレセプター系中に適す。筋
無力症の典型的症候群は、こうして、長時間抑制するこ
とができる。これと共に、アセチルコリンレセプターに
対する低い抗一体力価と筋無力症の症候群の抑制との間
の明確な関係をも示すこともできる。
もう１つの実験で、免疫化されたウサギの血液中に現わ
れる抗体に対して抗イディオタイジー抗体を得た。その
選択により、病気の症状に関与している相応するオリジ
ナル−抗体を、特異的に血清から濾取した。このモノク
ローン抗体を、次の例で活性化されたナイロンホース上
で不動態化した。この系に実験筋無力症ウサギの血液を
通すことにより、長時間にわ庭る筋無力症の典型的症候
群を抑制することができる。
れる抗体に対して抗イディオタイジー抗体を得た。その
選択により、病気の症状に関与している相応するオリジ
ナル−抗体を、特異的に血清から濾取した。このモノク
ローン抗体を、次の例で活性化されたナイロンホース上
で不動態化した。この系に実験筋無力症ウサギの血液を
通すことにより、長時間にわ庭る筋無力症の典型的症候
群を抑制することができる。
前記の５つの方法はヒトでの使用に好適である次の実施
例につき本発明を説明するが、本発明はこれのみに限定
されない。
例につき本発明を説明するが、本発明はこれのみに限定
されない。
例り
内径０．１ ｃｍのナイロンホースを３．５モルノ塩酸
を用い、７０℃、７分間で部分的に加水分解し、その後
、緩衝液（ｐＨ＝６）で数回洗浄する。次に１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−カルＩジイ
ミｙ塩酸塩の水溶液（１００ｍモル、１０ｍモル塩酸で
ｐＨ＝５に調節）をホースに導びく。２時間後に、５分
間水で洗浄し、次いで、可溶化されたアセチ四ツリンレ
セプターを含有する冷酢酸塩緩衝液（又は同じｐＨ値を
有する水）を２４時間その中に導通する。これに引続き
、ホースを０．３モル塩化寸トリウム水及び水で洗浄し
、緩衝液を充填し、１０で保持する。この方法の有利な
実施形では、このナイロンホースを棒に巻きつけ、溶液
を０．２ ｍｌ／−の速度でその中に通す。
を用い、７０℃、７分間で部分的に加水分解し、その後
、緩衝液（ｐＨ＝６）で数回洗浄する。次に１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−カルＩジイ
ミｙ塩酸塩の水溶液（１００ｍモル、１０ｍモル塩酸で
ｐＨ＝５に調節）をホースに導びく。２時間後に、５分
間水で洗浄し、次いで、可溶化されたアセチ四ツリンレ
セプターを含有する冷酢酸塩緩衝液（又は同じｐＨ値を
有する水）を２４時間その中に導通する。これに引続き
、ホースを０．３モル塩化寸トリウム水及び水で洗浄し
、緩衝液を充填し、１０で保持する。この方法の有利な
実施形では、このナイロンホースを棒に巻きつけ、溶液
を０．２ ｍｌ／−の速度でその中に通す。
担体結合アセチルコリンレセッターの量は、レセプター
溶液の含分測定により、潅流の前と後に測定した。担体
上の有効なレセプター溶液２５ は、 Ｉ−標識されたトキシンを用いて測定した。
溶液の含分測定により、潅流の前と後に測定した。担体
上の有効なレセプター溶液２５ は、 Ｉ−標識されたトキシンを用いて測定した。
ロンホースｌ ｃｍ ）は１３７であった。
α−フィロトキシン（Ｎθｕｒｏｔｏｘｉｎ ） Ｉｃ
関して、この系の結合キ・ヤ、ｏシティ（トラッピング
２５ キャパシティ： ｔｒａｐｐｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ
）を １−標識されたα−フィロトキシンの使用下
に測定した。これは、３６ＸＩＯモル／（ｍであった。
関して、この系の結合キ・ヤ、ｏシティ（トラッピング
２５ キャパシティ： ｔｒａｐｐｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ
）を １−標識されたα−フィロトキシンの使用下
に測定した。これは、３６ＸＩＯモル／（ｍであった。
評価のために、得られたナイロンホースを、有利にプロ
テアーゼインヒビター含有緩衝液゛（６ 例えば０．１Ｍベンズアミジン、ｌ ＯＭ ）ラシロー
ル、１ｍＭジイソゾ四ピルフルオロホスフェート）を充
填する。
テアーゼインヒビター含有緩衝液゛（６ 例えば０．１Ｍベンズアミジン、ｌ ＯＭ ）ラシロー
ル、１ｍＭジイソゾ四ピルフルオロホスフェート）を充
填する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 アセチルコリンレセゾター及びモノクローン抗体
の群から選択した不動態化された生物学的活性物質。 ２、担体物質は部分的に加水分解されたポリアミドであ
る、特許請求の範囲第１項記載の物質。 ３、生物学的活性物質が、二官能性試薬殊にグルタール
アルデヒｒ又ｕｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
−ゾルピル）−カルージイミＰ−塩酸塩により担体物質
に固定されている、特許請求の範囲第１項又は第２項に
記載の物質。 先 担体物質はホース状であり、生物学的活性物質はそ
の内側に固定されている、特許請求の範囲第１項〜第Φ
項のいずれか１項に記載の物質。 ５、担体物質は中空繊維である、特許請求の範囲第１項
〜第４項のいずれか１項に記載の物質。 ６、 アセチルコリンレセゾター及びモノクローン抗体
の群から選択した不動態化された生物学的活性物質を使
用することを特徴とする、親和性クロマトグラフィ。 ７６ 親和性クロマトグラフィは免疫酸゛着であ・る
、特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、 アセチルコリンレセッター及びモノクローン抗体
の群から選択した不動態化された生物学的活性物質より
なることを特徴とする、自己免疫病の診断用及び／又は
治療用薬剤。 ９、 自己免疫病は筋無力症である、特許請求の範囲第
８項記載の薬剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19813145007 DE3145007A1 (de) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Immobilisierte biologisch aktive substanzen und ihre verwendung |
| DE31450075 | 1981-11-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5890518A true JPS5890518A (ja) | 1983-05-30 |
Family
ID=6146264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57196862A Pending JPS5890518A (ja) | 1981-11-12 | 1982-11-11 | 不動態化された生物学的活性物質、親和性クロマトグラフイ及び自己免疫病の診断用及び／又は治療用薬剤 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0079466A3 (ja) |
| JP (1) | JPS5890518A (ja) |
| AU (1) | AU9019382A (ja) |
| DE (1) | DE3145007A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3323645A1 (de) * | 1983-07-01 | 1985-01-10 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Diagnostisches testsystem |
| US5053224A (en) * | 1983-11-07 | 1991-10-01 | Hilary Koprowski | Induction of antibody response to solid tumors with anti-idiotype antibodies |
| US4731237A (en) * | 1983-11-07 | 1988-03-15 | The Wistar Institute | Immune response to virus induced by anti-idiotype antibodies |
| SE446229B (sv) * | 1984-01-25 | 1986-08-18 | Syn Tek Ab | Sett och anordning for detektering av en analyt i ett prov som bringas att passera en yta till vilken bundits ett emne med specifik affinitet till analyten |
| EP0155224A3 (en) * | 1984-03-15 | 1987-05-06 | CHROMAGENICS, Inc. | Solid-borne complex bearing chromagen responsive functionality for antibody, antigen, receptor, or ligand detection |
| ZA851879B (en) * | 1984-03-22 | 1985-11-27 | Genetic Diagnostic Corp | Automated immunoassay |
| FR2568585B1 (fr) * | 1984-08-06 | 1988-08-12 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles cellules hybrides secretant des anticorps anti-idiotypiques, nouveaux anticorps monoclonaux secretes par lesdites cellules hybrides, leur preparation et leur application |
| JPS6463599A (en) * | 1987-05-01 | 1989-03-09 | Xoma Corp | Purification of immunoglobulin by selective anti-idiotype bond |
| DE19850429A1 (de) * | 1998-10-27 | 2000-05-04 | Andre Schrattenholz | Fragmente |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56128722A (en) * | 1980-03-14 | 1981-10-08 | Terumo Corp | Removal of antiacetylcholinereceptor antibody and device therefor |
-
1981
- 1981-11-12 DE DE19813145007 patent/DE3145007A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-10-15 EP EP82109566A patent/EP0079466A3/de not_active Withdrawn
- 1982-11-05 AU AU90193/82A patent/AU9019382A/en not_active Abandoned
- 1982-11-11 JP JP57196862A patent/JPS5890518A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0079466A2 (de) | 1983-05-25 |
| AU9019382A (en) | 1983-05-19 |
| DE3145007A1 (de) | 1983-05-19 |
| EP0079466A3 (de) | 1984-04-11 |
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