JPS5874696A - アデノシン三リン酸の安定化方法 - Google Patents
アデノシン三リン酸の安定化方法Info
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- JPS5874696A JPS5874696A JP17379781A JP17379781A JPS5874696A JP S5874696 A JPS5874696 A JP S5874696A JP 17379781 A JP17379781 A JP 17379781A JP 17379781 A JP17379781 A JP 17379781A JP S5874696 A JPS5874696 A JP S5874696A
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- Japan
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- atp
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- dried
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は凍結乾燥状態におけるアデノシンニリン酸（以
下ＡＴＰという）の安定化に関する。さらに詳しくはＡ
ＴＰの凍結乾燥品を製造する際、単糖類、少糖類あるい
は多糖類の充分な量をＡＴＰ溶液に添加することにより
その凍結乾燥品中のＡＴＰを安定化する方法に関する。
下ＡＴＰという）の安定化に関する。さらに詳しくはＡ
ＴＰの凍結乾燥品を製造する際、単糖類、少糖類あるい
は多糖類の充分な量をＡＴＰ溶液に添加することにより
その凍結乾燥品中のＡＴＰを安定化する方法に関する。
ＡＴＰは生体のエネルギーの伝達体として多くの生化学
反応に重要な役割を演じている。
反応に重要な役割を演じている。
臨床検査の分野においてもＡＴＰはキナーゼ系酵素、リ
ン酸転移酵素等と組合されて種々の生体内成分の測定を
可能ならしめている。
ン酸転移酵素等と組合されて種々の生体内成分の測定を
可能ならしめている。
しかじＡＴＰは安定性Ｋｆｌｌｌｌ＠がありそれが測定
に影響を及ぼすことも少くない。ことにＡＴＰをアデノ
シンニリン酸（以下ＡＤＰという）に変え、そのＡＤＰ
を測定する反応系においてはＡＴＰの自然分解で生ずる
ＡＤＰが測定誤差等の原因となることは明かで試薬とし
てのＡＴＰの安定化はこれらの反応系では必須の要件と
なる。たとえばＡＴＰの分解によるＡＤＰによって試薬
ブランク値が非常に高くなると測定範囲が極端に制限さ
れサンプルによっては測定不能となる。
に影響を及ぼすことも少くない。ことにＡＴＰをアデノ
シンニリン酸（以下ＡＤＰという）に変え、そのＡＤＰ
を測定する反応系においてはＡＴＰの自然分解で生ずる
ＡＤＰが測定誤差等の原因となることは明かで試薬とし
てのＡＴＰの安定化はこれらの反応系では必須の要件と
なる。たとえばＡＴＰの分解によるＡＤＰによって試薬
ブランク値が非常に高くなると測定範囲が極端に制限さ
れサンプルによっては測定不能となる。
本発明者はＡＴＰ特に凍結乾燥状態におけるＡＴＰの安
定化について種々研究した結果単糖類、少糖類あるいは
多糖類を安定化剤として添加して凍結乾燥したＡＴＰは
極めて安定で長期保存に耐えることを発見し本発明を完
成した。
定化について種々研究した結果単糖類、少糖類あるいは
多糖類を安定化剤として添加して凍結乾燥したＡＴＰは
極めて安定で長期保存に耐えることを発見し本発明を完
成した。
本発明に使用する糖類にはブドウ糖、粗糖、乳糖、麦芽
糖、トレノ・ロース、ソラノース、ラフィノース、メレ
チドース、デキスリン、イヌリン、フィコール−４００
（ファルマーシア社製品）、等があり、これらの一種あ
るいは二種以上を組合せて用いることができる。
糖、トレノ・ロース、ソラノース、ラフィノース、メレ
チドース、デキスリン、イヌリン、フィコール−４００
（ファルマーシア社製品）、等があり、これらの一種あ
るいは二種以上を組合せて用いることができる。
たｙブドウ糖などの単糖類の場合は賦形能力が小さいの
で他の糖と併用する方が凍結乾燥品の外観をよくする上
から好ましい。
で他の糖と併用する方が凍結乾燥品の外観をよくする上
から好ましい。
本発明の安定化剤としての糖類の使用量は濃度３チ以上
であり、好ましくは５−以上であるが５慢あれば充分で
ある。
であり、好ましくは５−以上であるが５慢あれば充分で
ある。
４糖を例にと抄糖の製電および溶液のｐＨと安定化との
関係を試験した結果は第１図及び第２図の通９である。
関係を試験した結果は第１図及び第２図の通９である。
試験例１：
試料として３７℃で１チ月間保存した凍結乾燥品（以下
凍乾品という）を用い公知の反−リン酸＋ＡＤＰ Ｄ−グルコノ−δ−ラクトン−６−リン酸＋ＮＡＤＰＨ
ＫよりＮＡＤＰＨの増加を波長３４０ｎｍにおける吸光
度で測定しＡＴＰの葉を求めた。
凍乾品という）を用い公知の反−リン酸＋ＡＤＰ Ｄ−グルコノ−δ−ラクトン−６−リン酸＋ＮＡＤＰＨ
ＫよりＮＡＤＰＨの増加を波長３４０ｎｍにおける吸光
度で測定しＡＴＰの葉を求めた。
第１図は安定化剤としての糖濃度（凍結乾燥原液中のチ
）とＡＴＰの残存度（＠の関係を表している。ここで残
存度とは凍乾品の製造直後のＡＴＰ含有量に対する残存
ＡＴＰ量の１００分比を表わす。
）とＡＴＰの残存度（＠の関係を表している。ここで残
存度とは凍乾品の製造直後のＡＴＰ含有量に対する残存
ＡＴＰ量の１００分比を表わす。
この図から折、糖の添加によりＡＴＰの残存量は増加し
祈糖濃度５−以上では殆ど一定となることが明かである
。
祈糖濃度５−以上では殆ど一定となることが明かである
。
第２図は凍結乾燥原液（以下原液という）のｐＨの変化
と蕪糖（５チ）添加の有無によるＡＴＰの残存度侠）の
変化を表している。との図からＡＴＰは無添加の場合原
液の、Ｈの影響を受けｐＨ３のとき鍛も安定といえるが
影糖の添加により試験した全ての、Ｈ域に対して著しく
安定度を増加するので結果とじてｐＨの影響は無視でき
ることを示している。
と蕪糖（５チ）添加の有無によるＡＴＰの残存度侠）の
変化を表している。との図からＡＴＰは無添加の場合原
液の、Ｈの影響を受けｐＨ３のとき鍛も安定といえるが
影糖の添加により試験した全ての、Ｈ域に対して著しく
安定度を増加するので結果とじてｐＨの影響は無視でき
ることを示している。
次に実施例により本発明をさらに詳しく説明する。
実施例１ 各種糖のＡＴＰＫ対する安定化効果：
（１）試料
１）ＡＴＰ含有０．０４ＭＢＥ８緩衝液：ＡＴＰ 、２
Ｎａ、３Ｈｓ Ｏ１４４ｍｆＮ、Ｎ−ビス−（２−ヒド
ロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸
４２．７ｍｆ以上を水に溶解し水酸化す
） ＩＪウムでＰ）１７．０に調整し全体を５−とする
。
Ｎａ、３Ｈｓ Ｏ１４４ｍｆＮ、Ｎ−ビス−（２−ヒド
ロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸
４２．７ｍｆ以上を水に溶解し水酸化す
） ＩＪウムでＰ）１７．０に調整し全体を５−とする
。
ＩＩ） 糖水溶液（１０種）
＃、棚、乳糖、麦芽糖、ツレノ・ロース、ツラノース、
ラフィノース、メレチト ース、イヌリン、フィコール−４００、デキストラン（
５０，０００）、各５００ｑを水５−に溶解する。
ラフィノース、メレチト ース、イヌリン、フィコール−４００、デキストラン（
５０，０００）、各５００ｑを水５−に溶解する。
１−５−と謔）液夫々５−を混合し１０種の原液を造り
これを凍結乾燥して１０種の凍乾品を得る。これら凍乾
品および比較のための無添加の凍乾品を３７℃で１チ月
間放置したものを試料とする。
これを凍結乾燥して１０種の凍乾品を得る。これら凍乾
品および比較のための無添加の凍乾品を３７℃で１チ月
間放置したものを試料とする。
（匂試験操作
試料を夫々一定量とり原液の１０倍希釈になるよう０．
１ Ｍ ）リス緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解する。
１ Ｍ ）リス緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解する。
この溶液を用い試験例１に記載の試験法によりＡＴＰの
量を測定し凍結乾燥直後のＡＴＰ量を１００としてその
残存度を求める。その結果を表１に示す。
量を測定し凍結乾燥直後のＡＴＰ量を１００としてその
残存度を求める。その結果を表１に示す。
この表から本発明の安定剤の効果は明かである。
実施例２ 血清中の遊離脂肪酸測定試薬に適用した場
合の効果： （１）試薬 １）トリス緩衝液 トリスヒドロキシメチルアミツメタン １２１ｔパ
ラトルエンスルホン酸 ２０．Ｏｆ塩
化マグネシウム ４．０６Ｆト
リトンＸ−１０００，１６Ｆ アジ化ナトリウム １．Ｏｆ
を蒸留水に溶解し希塩酸でＰＨ７，５に調整し蒸留水で
全量を１，０００ｄにする。
合の効果： （１）試薬 １）トリス緩衝液 トリスヒドロキシメチルアミツメタン １２１ｔパ
ラトルエンスルホン酸 ２０．Ｏｆ塩
化マグネシウム ４．０６Ｆト
リトンＸ−１０００，１６Ｆ アジ化ナトリウム １．Ｏｆ
を蒸留水に溶解し希塩酸でＰＨ７，５に調整し蒸留水で
全量を１，０００ｄにする。
ＩＩ） 反応試液
アシルコエンザイムエーシンシターゼ（ＡＣ８）１２０
Ｕミオキナーゼ（ＭＫ） １．６０
０Ｕピルビン酸キナーゼ（ＰＫ） １００
Ｕ乳酸脱水素、酵素（ＬＤＨ） ９００
ＵコエンザイムＡ （ＣｏＡ）
４５ ”ＦＮＡＤＨ９（７１ 以上を１）のトリス緩衝液３００−に溶解し、Ｈを７．
５に調整する。
Ｕミオキナーゼ（ＭＫ） １．６０
０Ｕピルビン酸キナーゼ（ＰＫ） １００
Ｕ乳酸脱水素、酵素（ＬＤＨ） ９００
ＵコエンザイムＡ （ＣｏＡ）
４５ ”ＦＮＡＤＨ９（７１ 以上を１）のトリス緩衝液３００−に溶解し、Ｈを７．
５に調整する。
謝）ＡＴＰ凍乾品
緩衝液の種類１．Ｈ１安定剤の種類およびその有無の異
なる表２の夫々の緩衝液にＡＴＰを濃度が０．０２３８
Ｍ （１４，４ｆ／ｌ ）になるように溶解しその１−
を凍結乾燥してＡＴＰの凍乾品とする。
なる表２の夫々の緩衝液にＡＴＰを濃度が０．０２３８
Ｍ （１４，４ｆ／ｌ ）になるように溶解しその１−
を凍結乾燥してＡＴＰの凍乾品とする。
（２）試験方法
１）遊離脂肪酸（以下ＮＥＦＡという）の測定原理
Ｒ，Ｃ０ＯＨ＋ＡＴＰ＋ＣｏＡ ＡＣ８Ｒ，Ｃ０−−ｍ
−−→ −Ｃｏ Ａ十ＡＭＰ十Ｐ Ｐ Ｉ ＡＭＰ＋ＡＴＰ−Ｍ”−→２ＡＤＰ ＡＤＰ＋ＰＥＰ−Ａ”−→ピルビン酸＋ＡＴＰピルビン
酸＋ＮＡｐＨユλ翫乳酸＋ＮＡＤＮＡＤＨの３４０．ｆ
ｆｌにおける吸光度の減少から遊離脂肪酸を定量する。
−−→ −Ｃｏ Ａ十ＡＭＰ十Ｐ Ｐ Ｉ ＡＭＰ＋ＡＴＰ−Ｍ”−→２ＡＤＰ ＡＤＰ＋ＰＥＰ−Ａ”−→ピルビン酸＋ＡＴＰピルビン
酸＋ＮＡｐＨユλ翫乳酸＋ＮＡＤＮＡＤＨの３４０．ｆ
ｆｌにおける吸光度の減少から遊離脂肪酸を定量する。
注） ＡＭＰ：アデノシンーリン酸表 ２
ＰＰｉ：ピロリン酸
舖） 操作
ＡＴＰの凍乾品を反応試液２ｏ−に溶
解しその２−をとりこれにＮＥＦＡ標準液（２０００ｊ
”Ｑ”）０．０５ｍを加ｔ３７℃、５分間反応後３４０
ｎｍにおける吸光度を測定する。同時に試薬ブランク としてＮＥＦＡ標準液の替りに水を加え同様に操作して
吸光度を測定する。
”Ｑ”）０．０５ｍを加ｔ３７℃、５分間反応後３４０
ｎｍにおける吸光度を測定する。同時に試薬ブランク としてＮＥＦＡ標準液の替りに水を加え同様に操作して
吸光度を測定する。
ＡＴＰの凍乾品はそれぞれ製造直後と３７℃、９日間保
存したものについて試験をし九。
存したものについて試験をし九。
（３）結果
試験の結果は表３の通りであるう
表−３
試薬ブランク＠）は、ＡＴＰ凍乾品製造直後のものＫつ
いて行なった試薬ブランクの吸光度に対する保存品の試
薬ブランクの吸光度の１００分比である。この試薬ブラ
ンク（＠の低いことは前述のＮＥＦＡ測定原理からＡＤ
Ｐの増加によるＮＡＤＨの減少が起ったもので、ひいて
は凍乾品中のＡＴＰの分解ｐｃよるものと考えられる。
いて行なった試薬ブランクの吸光度に対する保存品の試
薬ブランクの吸光度の１００分比である。この試薬ブラ
ンク（＠の低いことは前述のＮＥＦＡ測定原理からＡＤ
Ｐの増加によるＮＡＤＨの減少が起ったもので、ひいて
は凍乾品中のＡＴＰの分解ｐｃよるものと考えられる。
凍乾品査号４．５．７．８．１０１１１の試薬プラン久
（チ）が高いのは安定剤の添加によってＡＴＰの分解が
殆ど無かったことを示している。
（チ）が高いのは安定剤の添加によってＡＴＰの分解が
殆ど無かったことを示している。
ＮＥＦＡ２０００μＥｑ／４％）はＡＴＰ凍乾品のそれ
ぞれについて製造直後と保存後に？ｒなったＮＥＦＡ標
準品の測定結果で製造直後のＮＥＦＡの値に対する保存
後のＮＥＦＡ Ｏ値の１００分比である。
ぞれについて製造直後と保存後に？ｒなったＮＥＦＡ標
準品の測定結果で製造直後のＮＥＦＡの値に対する保存
後のＮＥＦＡ Ｏ値の１００分比である。
この表からＮＥＦＡの測定値についても安定剤を添加し
たＡＴＰ凍乾品を用いれば試薬の経時的変化がなく常に
安定した測定ができることが明かで゛ある。また試薬ブ
ランク←）とＮＥＦＡ２０００μＥ ｑ ／ＩＩ吟との
値の賢動を比較検討すればＡＴＰの分解で生ずるＡＤＰ
によって反応液中のＮＡＤＨが消費されるとＮＥＦＡ測
定の範囲が狭くな抄また感度が低下することがよくわか
る。この観点からＡＴＰ凍乾品の安定化はＮＥＦ Ａ測
定試薬の安定化に寄与するだけでなく測定範囲および感
度の維持に極めて有効である。
たＡＴＰ凍乾品を用いれば試薬の経時的変化がなく常に
安定した測定ができることが明かで゛ある。また試薬ブ
ランク←）とＮＥＦＡ２０００μＥ ｑ ／ＩＩ吟との
値の賢動を比較検討すればＡＴＰの分解で生ずるＡＤＰ
によって反応液中のＮＡＤＨが消費されるとＮＥＦＡ測
定の範囲が狭くな抄また感度が低下することがよくわか
る。この観点からＡＴＰ凍乾品の安定化はＮＥＦ Ａ測
定試薬の安定化に寄与するだけでなく測定範囲および感
度の維持に極めて有効である。
また本発明は上述の反応系に限らすＡＴＰの凍乾品を用
いる反応系例えばヘキソキナーゼを使用するグルコース
の測定あるいはグリセロールキナーゼを使用するトリグ
リセライドの測定にも適用でき有用である。
いる反応系例えばヘキソキナーゼを使用するグルコース
の測定あるいはグリセロールキナーゼを使用するトリグ
リセライドの測定にも適用でき有用である。
第１図は糖濃度とＡＴＰ残存度との関係を表わし、第２
図はＡＴＰ凍結乾燥原液の、■と農、糖添加の有無によ
るＡＴＰ残存度との関係を表わす。 第１図 第２図 Ｈ
図はＡＴＰ凍結乾燥原液の、■と農、糖添加の有無によ
るＡＴＰ残存度との関係を表わす。 第１図 第２図 Ｈ
Claims (1)
- アデノシンニリン酸を含む溶液に単糖類、少糖類、ある
いは多糖類を添加した後凍結乾燥することを特徴とする
凍結乾燥状態におけるアデノシンニリン酸の安定化方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17379781A JPS5874696A (ja) | 1981-10-30 | 1981-10-30 | アデノシン三リン酸の安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17379781A JPS5874696A (ja) | 1981-10-30 | 1981-10-30 | アデノシン三リン酸の安定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5874696A true JPS5874696A (ja) | 1983-05-06 |
Family
ID=15967330
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17379781A Pending JPS5874696A (ja) | 1981-10-30 | 1981-10-30 | アデノシン三リン酸の安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5874696A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0415567A2 (en) * | 1989-07-31 | 1991-03-06 | Quadrant Bioresources Limited | Composition and method for stabilising organic compounds |
| US6130208A (en) * | 1997-07-11 | 2000-10-10 | Astrazeneca Uk Limited | Formulation containing a nucleotide analogue |
| WO2003035673A1 (en) | 2001-10-22 | 2003-05-01 | Dompe S.P.A. | Supercritical fluids processing: preparation of protein microparticles and their stabilisation |
| JPWO2006038647A1 (ja) * | 2004-10-05 | 2008-05-15 | 旭化成ファーマ株式会社 | 補酵素の安定化方法およびその組成物 |
| JP2013234124A (ja) * | 2011-04-28 | 2013-11-21 | Kowa Co | 安定化方法 |
| EP3124028A4 (en) * | 2014-03-25 | 2018-01-24 | National University Corporation Kagawa University | Malaria transmission prevention agent having rare sugar as effective component thereof and malarial parasite growth regulating agent |
-
1981
- 1981-10-30 JP JP17379781A patent/JPS5874696A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0415567A2 (en) * | 1989-07-31 | 1991-03-06 | Quadrant Bioresources Limited | Composition and method for stabilising organic compounds |
| EP0415567A3 (en) * | 1989-07-31 | 1991-08-21 | Quadrant Bioresources Limited | Composition and method for stabilising organic compounds |
| US6130208A (en) * | 1997-07-11 | 2000-10-10 | Astrazeneca Uk Limited | Formulation containing a nucleotide analogue |
| JP2001509512A (ja) * | 1997-07-11 | 2001-07-24 | アストラ・フアーマシユウテイカルズ・リミテツド | 新規な製剤 |
| KR100786654B1 (ko) * | 1997-07-11 | 2007-12-21 | 아스트라제네카 유케이 리미티드 | 신규 제제 |
| WO2003035673A1 (en) | 2001-10-22 | 2003-05-01 | Dompe S.P.A. | Supercritical fluids processing: preparation of protein microparticles and their stabilisation |
| JPWO2006038647A1 (ja) * | 2004-10-05 | 2008-05-15 | 旭化成ファーマ株式会社 | 補酵素の安定化方法およびその組成物 |
| JP4986281B2 (ja) * | 2004-10-05 | 2012-07-25 | 旭化成ファーマ株式会社 | 補酵素の安定化方法およびその組成物 |
| JP2013234124A (ja) * | 2011-04-28 | 2013-11-21 | Kowa Co | 安定化方法 |
| EP3124028A4 (en) * | 2014-03-25 | 2018-01-24 | National University Corporation Kagawa University | Malaria transmission prevention agent having rare sugar as effective component thereof and malarial parasite growth regulating agent |
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