JPS5851892A - 粗エラスタ−ゼの製造方法 - Google Patents
粗エラスタ−ゼの製造方法Info
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- JPS5851892A JPS5851892A JP14938881A JP14938881A JPS5851892A JP S5851892 A JPS5851892 A JP S5851892A JP 14938881 A JP14938881 A JP 14938881A JP 14938881 A JP14938881 A JP 14938881A JP S5851892 A JPS5851892 A JP S5851892A
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- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B26—HAND CUTTING TOOLS; CUTTING; SEVERING
- B26B—HAND-HELD CUTTING TOOLS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- B26B19/00—Clippers or shavers operating with a plurality of cutting edges, e.g. hair clippers, dry shavers
- B26B19/02—Clippers or shavers operating with a plurality of cutting edges, e.g. hair clippers, dry shavers of the reciprocating-cutter type
- B26B19/04—Cutting heads therefor; Cutters therefor; Securing equipment thereof
- B26B19/044—Manufacture and assembly of cutter blocks
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- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はブタ膵臓に活性化処理を施して得られルエラス
ターゼ含有溶液から粗エラスターゼを製造する方法に関
する。
ターゼ含有溶液から粗エラスターゼを製造する方法に関
する。
エラスターゼは咄乳動物の膵臓ではエラスターゼ前駆物
質として存在するので２例えばブタ膵臓よりエラスター
ゼを製造するには１通常はエラスターゼ前駆物質を活性
化してエラスターゼにｆ化させた後、抽出をおこなって
いる。活性化は細切した生膵臓を加温して自己消化をお
こなわしめることによっても達成されるが、 １ｌｉｉ
乳動物の十二指腸またはその抽出液の添加、トリプシン
またはトリプシン含有物１例えばパンクレアチン等の添
加。
質として存在するので２例えばブタ膵臓よりエラスター
ゼを製造するには１通常はエラスターゼ前駆物質を活性
化してエラスターゼにｆ化させた後、抽出をおこなって
いる。活性化は細切した生膵臓を加温して自己消化をお
こなわしめることによっても達成されるが、 １ｌｉｉ
乳動物の十二指腸またはその抽出液の添加、トリプシン
またはトリプシン含有物１例えばパンクレアチン等の添
加。
エタノール添加、アセトン添加、イソプロピルアルコー
ル添加等の添加処理によっても可能である。
ル添加等の添加処理によっても可能である。
さて次にかくのごとく活性化したエラスターゼを活性化
処理後の溶液から抽出するためには、従来から一般にま
ず当該溶液に酢酸緩衝液のごとき水溶液を加えて濾過し
、澄明な溶液を得て９次に硫安塩析をおこなうというご
とき工程がおこなわれて来た。この従来技術において肝
要な点はエラスターゼの析出のためには塩析操作をおこ
なわなければならないということ並びに当該塩析操作を
可能にするために、抽出液を濾過してあらかじめ非常に
澄明な溶液にしておくことが必須の条件であるというこ
とである。−例を示せば後記効果例１の対照試料の製造
方法に記載されるごとく、活性化後、酢酸緩衝液で処理
し、ここに大量の濾過助剤を加えて濾過し、あらかじめ
非常に澄明な溶液としてから１次に硫安を加えて４５チ
飽和とし塩析せしめるというごときである。しかしなが
らそもそも膵臓は大量の脂肪を含む臓器であるから。
処理後の溶液から抽出するためには、従来から一般にま
ず当該溶液に酢酸緩衝液のごとき水溶液を加えて濾過し
、澄明な溶液を得て９次に硫安塩析をおこなうというご
とき工程がおこなわれて来た。この従来技術において肝
要な点はエラスターゼの析出のためには塩析操作をおこ
なわなければならないということ並びに当該塩析操作を
可能にするために、抽出液を濾過してあらかじめ非常に
澄明な溶液にしておくことが必須の条件であるというこ
とである。−例を示せば後記効果例１の対照試料の製造
方法に記載されるごとく、活性化後、酢酸緩衝液で処理
し、ここに大量の濾過助剤を加えて濾過し、あらかじめ
非常に澄明な溶液としてから１次に硫安を加えて４５チ
飽和とし塩析せしめるというごときである。しかしなが
らそもそも膵臓は大量の脂肪を含む臓器であるから。
上記の澄明な溶液を得る操作自体が大変に困難な操作で
あり、量産規模にははなはだ不適合なのである。さらに
加えて致命的なことに、当該塩析操作における回収率が
きわめて低く、活性化されたエラスターゼに対してせい
ぜい６０〜７０％程度のものが回収されるにすぎず、多
量の残余エラスターゼは抽出不能のまま廃棄される結果
となっているのが現状である。かくのごとく、従来方法
は未だ工業的に満足すべき方法として完成されていない
のである。
あり、量産規模にははなはだ不適合なのである。さらに
加えて致命的なことに、当該塩析操作における回収率が
きわめて低く、活性化されたエラスターゼに対してせい
ぜい６０〜７０％程度のものが回収されるにすぎず、多
量の残余エラスターゼは抽出不能のまま廃棄される結果
となっているのが現状である。かくのごとく、従来方法
は未だ工業的に満足すべき方法として完成されていない
のである。
かかる実情にかんがみ２本発明者は困難な澄明化操作や
繁雑な塩析操作のごとき諸操作を伴なうことなく、もっ
ばら単純簡便なる化学操作によってのみエラスターゼを
高い回収率で収得することのできる方法について鋭意検
討をおこなった。その結果、活性化処理後、エラスター
ゼ含有液に特定量の水可溶性有機溶媒を加えてエラスタ
ーゼを沈澱せしめることによって所期の目的が達成され
ることを見出し２本発明を完成するに至った。
繁雑な塩析操作のごとき諸操作を伴なうことなく、もっ
ばら単純簡便なる化学操作によってのみエラスターゼを
高い回収率で収得することのできる方法について鋭意検
討をおこなった。その結果、活性化処理後、エラスター
ゼ含有液に特定量の水可溶性有機溶媒を加えてエラスタ
ーゼを沈澱せしめることによって所期の目的が達成され
ることを見出し２本発明を完成するに至った。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明の原料であるブタ膵臓とはブタ膵臓そのものはも
ちろん、ブタ膵臓からインシーリンを抽出した残渣、ブ
タ膵臓からカリクレインを抽出した残渣あるいは脱脂膵
臓などブタ膵臓由来の原料をすべて含むものである。こ
れらの原料は活性化処理によってすべてエラスターゼ含
有溶液を与えることができるのである。
ちろん、ブタ膵臓からインシーリンを抽出した残渣、ブ
タ膵臓からカリクレインを抽出した残渣あるいは脱脂膵
臓などブタ膵臓由来の原料をすべて含むものである。こ
れらの原料は活性化処理によってすべてエラスターゼ含
有溶液を与えることができるのである。
活性化処理にあたり、膵臓は肉挽き機にかけあるいは凍
結粉砕するなどしてできるだけ細分しておくことが好ま
しい。しかし細切せずに、直接に活性化することも可能
ではある。活性化処理には従来から自己消化処理、酵素
処理、有機溶媒処理などが知られており、具体的には、
加温による自己消化処理のほか、哺乳動物の十二指腸ま
たはその抽出液の添加、トリプシン添加、パンクレアチ
ン添加、エタノール添加、アセトン添加、イングロビル
アルコール添加等がある。本発明における活性化処理に
はこれら従来公知の方法をそのまま準用すればよく２例
えば、特開昭５２−６１２８７公報に記載される方法、
すなわち、ブタの生膵臓にブタの十二指腸を加え、
ｐｌ（７〜７．５において放置する処理を好便におこな
うことができる。１なふ）有機溶媒添加によって活性化
する場合には、後の沈澱操作において使用する溶媒と同
一の溶媒を使用するのが好ましい。
結粉砕するなどしてできるだけ細分しておくことが好ま
しい。しかし細切せずに、直接に活性化することも可能
ではある。活性化処理には従来から自己消化処理、酵素
処理、有機溶媒処理などが知られており、具体的には、
加温による自己消化処理のほか、哺乳動物の十二指腸ま
たはその抽出液の添加、トリプシン添加、パンクレアチ
ン添加、エタノール添加、アセトン添加、イングロビル
アルコール添加等がある。本発明における活性化処理に
はこれら従来公知の方法をそのまま準用すればよく２例
えば、特開昭５２−６１２８７公報に記載される方法、
すなわち、ブタの生膵臓にブタの十二指腸を加え、
ｐｌ（７〜７．５において放置する処理を好便におこな
うことができる。１なふ）有機溶媒添加によって活性化
する場合には、後の沈澱操作において使用する溶媒と同
一の溶媒を使用するのが好ましい。
なおまた、細切原料または活性化処理後の処理物に適当
量の水または薄い塩溶液を加えて懸濁し。
量の水または薄い塩溶液を加えて懸濁し。
所望により１過助剤を加えて粗い繊維性物質をあらかじ
め除去する操作をおこなうことができる。
め除去する操作をおこなうことができる。
この除去操作をしておくと、引続いておこなわれるエラ
スターゼの沈澱操作をいっそう容易におこなうことがで
きる。この場合において水または薄い塩溶液の量は粗い
繊維性物質を除去するために必要な程度の量で十分であ
り、原料または処理物の０．５〜２倍容程度でよい。ま
た濾過助剤は繊維性物質の凝集を促進するために加えら
れ、ケイソウ土がもっとも適している。しかしながら、
当該除去操作は本発明において特に必須となる操作では
なく、従って本発明を限定するものではない。
スターゼの沈澱操作をいっそう容易におこなうことがで
きる。この場合において水または薄い塩溶液の量は粗い
繊維性物質を除去するために必要な程度の量で十分であ
り、原料または処理物の０．５〜２倍容程度でよい。ま
た濾過助剤は繊維性物質の凝集を促進するために加えら
れ、ケイソウ土がもっとも適している。しかしながら、
当該除去操作は本発明において特に必須となる操作では
なく、従って本発明を限定するものではない。
また活性化処理後、直ちに適当な有機溶媒を加えて脱脂
する操作をおこなうことができるが、当該脱脂操作も本
発明において特に必須となる操作ではなく２本発明を限
定するものではない。
する操作をおこなうことができるが、当該脱脂操作も本
発明において特に必須となる操作ではなく２本発明を限
定するものではない。
本発明において使用される水可溶性有機溶媒とは水と任
意の割合において透明に混和し得る有機溶媒な百い、具
体的にはアセトン、エタノール。
意の割合において透明に混和し得る有機溶媒な百い、具
体的にはアセトン、エタノール。
インプロピルアルコール等であり、特にアセトンは好ま
しい例である。
しい例である。
水可溶性有機溶媒の添加濃度は、後記実験例に示される
ごとく添加後の溶液に対して３０〜８０独チの範囲にあ
ることが望ましい。すなわち２本発明は活性化後におけ
るエラスターゼ含有溶液に本発明に係る水可溶性有機溶
媒を添加してエラスターゼを沈澱せしめるものであるが
、添加後の溶液に対して当該水可溶性有機溶媒の濃度が
３０Ｖ／ｙ％以下の場合にはエラスターゼの沈澱が見ら
れず。
ごとく添加後の溶液に対して３０〜８０独チの範囲にあ
ることが望ましい。すなわち２本発明は活性化後におけ
るエラスターゼ含有溶液に本発明に係る水可溶性有機溶
媒を添加してエラスターゼを沈澱せしめるものであるが
、添加後の溶液に対して当該水可溶性有機溶媒の濃度が
３０Ｖ／ｙ％以下の場合にはエラスターゼの沈澱が見ら
れず。
沈澱に必要な所要量に至っていない。また濃度が８１個
４以上である場合にはエラスターゼ含有溶液からエラス
ターゼと共に当該溶液中に共存する夾雑タンパク質やベ
プタイドまでも沈澱するようになり、エラスターゼ純度
がいちじるしく低下する結果となる。かくして、水可溶
性有機溶媒の濃度は３０〜８０Ｖ／Ｖ％の範囲であるこ
とが必要であり、特に５０〜７０Ｖ／Ｖ％が好ましい。
４以上である場合にはエラスターゼ含有溶液からエラス
ターゼと共に当該溶液中に共存する夾雑タンパク質やベ
プタイドまでも沈澱するようになり、エラスターゼ純度
がいちじるしく低下する結果となる。かくして、水可溶
性有機溶媒の濃度は３０〜８０Ｖ／Ｖ％の範囲であるこ
とが必要であり、特に５０〜７０Ｖ／Ｖ％が好ましい。
沈澱方法には特別の限定はないが、水可溶性有機溶媒を
加えて所定の濃度に調整し１例えば１時間攪拌すれば、
エラスターゼ含有沈澱物が沈澱するので、これを１取す
ればよい。また、当該沈澱物は再び水に溶解させ、一旦
ハイフロスーパーセル（ケイソウ土）のごとき濾過助剤
を加えて濾過し、エラスターゼ含有溶液を得て、再度水
可溶性有機溶媒を加え、加えた後の溶液に対し当該水可
溶性有機溶媒の濃度が３０〜８０Ｖ／Ｖ％の範囲となる
ように調整して再沈澱せしめることができる。
加えて所定の濃度に調整し１例えば１時間攪拌すれば、
エラスターゼ含有沈澱物が沈澱するので、これを１取す
ればよい。また、当該沈澱物は再び水に溶解させ、一旦
ハイフロスーパーセル（ケイソウ土）のごとき濾過助剤
を加えて濾過し、エラスターゼ含有溶液を得て、再度水
可溶性有機溶媒を加え、加えた後の溶液に対し当該水可
溶性有機溶媒の濃度が３０〜８０Ｖ／Ｖ％の範囲となる
ように調整して再沈澱せしめることができる。
従って本発明はエラスターゼ含有溶液に対する繰返しの
沈澱処理操作を含むものである。
沈澱処理操作を含むものである。
次に本発明方法によって得られるエラスターゼ沈澱物は
本発明に係４水可溶性有機溶媒で数回洗浄し、真空乾燥
すれば乾燥物として収得することができる。
本発明に係４水可溶性有機溶媒で数回洗浄し、真空乾燥
すれば乾燥物として収得することができる。
また１本発明方法によって得られる粗エラスターゼは適
当なる精製法によりさらに高純度化することができる。
当なる精製法によりさらに高純度化することができる。
例えば、特公昭５０−２１５５７公報に記載される方法
、すなわち１本発明方法を実施した後に得られる乾燥物
をｐＨ５〜１０の水溶液に溶解し、５〜５０’Ｃに１時
間以上放置し、塩析し、さらに適宜精製して凍結乾燥す
る方法を実施すればさらに高純度化される。当該精製操
作は高純度エラスターゼが特に要求される場合におこな
われる操作であり１本発明により得られる粗エラスター
ゼによっても使用目的が十分に満足され得るような場合
には必要のない操作となる。従って。
、すなわち１本発明方法を実施した後に得られる乾燥物
をｐＨ５〜１０の水溶液に溶解し、５〜５０’Ｃに１時
間以上放置し、塩析し、さらに適宜精製して凍結乾燥す
る方法を実施すればさらに高純度化される。当該精製操
作は高純度エラスターゼが特に要求される場合におこな
われる操作であり１本発明により得られる粗エラスター
ゼによっても使用目的が十分に満足され得るような場合
には必要のない操作となる。従って。
本発明は当該精製操作によって限定されるものではない
。
。
以下に記載する効果例および実験例をもって本発明をさ
らに詳細に説明する。
らに詳細に説明する。
効果例１
試 料
（１）検体試料（本発明方法の例）
実施例１によって得られた乾燥物を検体試料とした。
（２）対照試料（従来方法の例）
ブタの膵臓１ ｋｇをミンチし、２００ｄの水と７ｇの
パンクレアチンを加え、さらに５ｄの４０％水酸化ナト
リウム水溶液を加えて激９−．−Ｍへ しく攪拌した後、１７℃に２時間放置して活性化した。
パンクレアチンを加え、さらに５ｄの４０％水酸化ナト
リウム水溶液を加えて激９−．−Ｍへ しく攪拌した後、１７℃に２時間放置して活性化した。
次いで３１の０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐ）（４，Ｂ ）を
加え４時間攪拌後−夜放ｔ１シ。
加え４時間攪拌後−夜放ｔ１シ。
この液に３００ｇの七ライトを加えて攪拌した後沢過し
た。ｆ過残渣についてはさらに２１の酢酸緩衝液（ｐＨ
４，８）を加えて抽出をおこない濾過した。ｆ液を合し
く４．５１）硫安を加えて４５饅飽和とし、塩析を行な
った。
た。ｆ過残渣についてはさらに２１の酢酸緩衝液（ｐＨ
４，８）を加えて抽出をおこない濾過した。ｆ液を合し
く４．５１）硫安を加えて４５饅飽和とし、塩析を行な
った。
得られた沈澱物を１取し、真空乾燥し、得られた乾燥物
を対照試料とした。
を対照試料とした。
方法および結果
検体試料および対照試料についてサクシニルトリアラニ
ンパラニトロアニリドを基質としてエラスターゼ活性を
測定した。結果を表１に示す。
ンパラニトロアニリドを基質としてエラスターゼ活性を
測定した。結果を表１に示す。
１０−
表１より本発明方法は従来方法に比して高い収量を単純
簡便な化学操作によって与えるものであることが判明す
る。、 効果例２ 試 料 （１）検体試料（本発明方法の例） 実施例１において粗ｒ過して得られたｆ液（２）対照試
料（従来方法の例） 方法および結果 効果例１におけると同様に測定した。結果を表２に示す
。
簡便な化学操作によって与えるものであることが判明す
る。、 効果例２ 試 料 （１）検体試料（本発明方法の例） 実施例１において粗ｒ過して得られたｆ液（２）対照試
料（従来方法の例） 方法および結果 効果例１におけると同様に測定した。結果を表２に示す
。
表２より抽出の段階においてすでに本発明方法は従来方
法に比して高い収量を与えるものであることが判明する
。
法に比して高い収量を与えるものであることが判明する
。
実験例１
ミンチしたブタの膵臓２．４ユに２．４／の水と１７ｇ
のパンクレアチンを加え、さらに１２ｒｒＬｌの４０％
水酸化ナトリウム水溶液を加えて攪拌し。
のパンクレアチンを加え、さらに１２ｒｒＬｌの４０％
水酸化ナトリウム水溶液を加えて攪拌し。
２５℃で２時間放置して活性化した。次いで４０ｇのハ
イフロス−パーセルな加えて粗沢過した。
イフロス−パーセルな加えて粗沢過した。
このｒ液を４００ｒＩＬｌづつ分取し、アセトン濃度が
０．２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０Ｖｈチ
となるようにアセトンを加えた。２５℃で１時間放置し
た後、沈澱物をＰ取した。沈澱物はさらにそれぞれ沈澱
時におけると同一の濃度のアセトン水溶液に懸濁し、再
び沈澱物をｆ取した。
０．２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０Ｖｈチ
となるようにアセトンを加えた。２５℃で１時間放置し
た後、沈澱物をＰ取した。沈澱物はさらにそれぞれ沈澱
時におけると同一の濃度のアセトン水溶液に懸濁し、再
び沈澱物をｆ取した。
各沈澱物につきサクシニルトリアラニンノくラニトロア
ニリドを基質としてエラスターゼ活性を測定しｆ液中の
エラスターゼ活性との比より沈澱物へのエラスターゼの
回収率を求メタ。
ニリドを基質としてエラスターゼ活性を測定しｆ液中の
エラスターゼ活性との比より沈澱物へのエラスターゼの
回収率を求メタ。
結 果
結果を表２に示す。表２よりブタ膵臓に活性化処理を施
して得られるエラスターゼ含有水溶液からエラスターゼ
を沈澱せしめるのにおいて、エラスターゼの沈澱はアセ
トン濃度が３０〜４０ Ｖ／Ｖ％であるときから始まり
、６０シ〜チにおいてほぼ完全に終結することが判明す
る。
して得られるエラスターゼ含有水溶液からエラスターゼ
を沈澱せしめるのにおいて、エラスターゼの沈澱はアセ
トン濃度が３０〜４０ Ｖ／Ｖ％であるときから始まり
、６０シ〜チにおいてほぼ完全に終結することが判明す
る。
なお、８０Ｖ／／Ｖ％以上においては、エラスターゼの
外に、多葉の夾雑タンパク質やペプタイド性物質までも
沈澱を開始するようになるので好ましくない。
外に、多葉の夾雑タンパク質やペプタイド性物質までも
沈澱を開始するようになるので好ましくない。
以下に記載する実施例をもって本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
実施例１
ブタの膵臓１ ｋｇをミンチし、２００ｒｎｌの水と７
ｇのパンクレアチンを加え、さらに５ ｍｌの４０％水
酸化ナトリウム水溶液を加えて激しく攪拌した後、１７
°Ｃに２時間放置して活性化した。これにアセトンを加
えて７０■／ｖ％とし１時間攪拌しもアセトン層を除き
、沈澱物に１．２１の水を加えて２時間攪拌し２次いで
１０ｇの７１イフロスーパーセルを加え、粗沢過した。
ｇのパンクレアチンを加え、さらに５ ｍｌの４０％水
酸化ナトリウム水溶液を加えて激しく攪拌した後、１７
°Ｃに２時間放置して活性化した。これにアセトンを加
えて７０■／ｖ％とし１時間攪拌しもアセトン層を除き
、沈澱物に１．２１の水を加えて２時間攪拌し２次いで
１０ｇの７１イフロスーパーセルを加え、粗沢過した。
ｒ液１，８１を得て、これにアセトンを加えて６０ Ｖ
／Ｖ％とし、生じた沈澱物を沢取した。沈澱物はさらに
１，５１のアセトンで３回洗浄し、真空乾燥し、乾燥物
を得た。収得量１０５Ｌ活性１．１１単位／ダ。
／Ｖ％とし、生じた沈澱物を沢取した。沈澱物はさらに
１，５１のアセトンで３回洗浄し、真空乾燥し、乾燥物
を得た。収得量１０５Ｌ活性１．１１単位／ダ。
実施例２
ブタの膵臓１０ｋｌｉｌをミンチし、１０１の水と７Ｊ
９のパンクレアチンを加え、さらに５０−の４０％水酸
化すｌ−ＩＪウム水溶液を加えて攪拌した後、３５℃で
２時間放置して活性化した。次いでアセトンを加えて３
０ Ｖ／Ｖ％にした後、１００ｇのハイフロス−パーセ
ルを加えて粗沢過した。粗濾過液にアセトンを加えて６
０Ｖ／Ｖ％にし、生じた沈澱物を沢取した。沈澱物はさ
らに１．５１のアセトンで３回洗い、真空乾燥し、乾燥
物１．２ ｋｇを得た。活性０４９３単位／ｍ９゜ なお、ここに得られた乾燥物を必要により以下のごとく
さらに精製した。乾燥物１．２ ｋｇに１２１の０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を加え、１時間攪拌し、
２０℃で２０時間放置した。次いで７００ｇのハイフロ
ス−パーセルを加えて濾過した。ｆ液に硫安を加え４０
％飽和にて塩析し、塩析物を沢取した。得られた塩析物
３７０ｇを３．７１の０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０
）に溶解し、濾過して清澄液とした後、３日間攪拌して
エラスターゼ結晶を得た。分取した結晶は脱塩の後、凍
結乾燥し。
９のパンクレアチンを加え、さらに５０−の４０％水酸
化すｌ−ＩＪウム水溶液を加えて攪拌した後、３５℃で
２時間放置して活性化した。次いでアセトンを加えて３
０ Ｖ／Ｖ％にした後、１００ｇのハイフロス−パーセ
ルを加えて粗沢過した。粗濾過液にアセトンを加えて６
０Ｖ／Ｖ％にし、生じた沈澱物を沢取した。沈澱物はさ
らに１．５１のアセトンで３回洗い、真空乾燥し、乾燥
物１．２ ｋｇを得た。活性０４９３単位／ｍ９゜ なお、ここに得られた乾燥物を必要により以下のごとく
さらに精製した。乾燥物１．２ ｋｇに１２１の０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を加え、１時間攪拌し、
２０℃で２０時間放置した。次いで７００ｇのハイフロ
ス−パーセルを加えて濾過した。ｆ液に硫安を加え４０
％飽和にて塩析し、塩析物を沢取した。得られた塩析物
３７０ｇを３．７１の０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０
）に溶解し、濾過して清澄液とした後、３日間攪拌して
エラスターゼ結晶を得た。分取した結晶は脱塩の後、凍
結乾燥し。
乾燥物３５ｇを得た。エラスチン分解活性１６５単位／
ｍ９゜ 実施例３ ブタの膵臓１．０に９をミンチし、４１の５０Ｖ、／’
ｙ％アセトン水を加え、１０℃に１６時間放置して活性
化した。次いでアセトンを加えて７０Ｖ／Ｖ％とし、１
時間攪拌した。アセトン層を除き、沈澱物１２ｋｇを得
た。この沈澱物に１３１の水を加えて２時間攪拌し１次
いで１００ｇのノ・インＯスーパーセルな加えて粗沢過
した。粗濾過液にアセトンを加えて７０ｖ／ｖ％にし、
生じた沈澱をＰ取した。
ｍ９゜ 実施例３ ブタの膵臓１．０に９をミンチし、４１の５０Ｖ、／’
ｙ％アセトン水を加え、１０℃に１６時間放置して活性
化した。次いでアセトンを加えて７０Ｖ／Ｖ％とし、１
時間攪拌した。アセトン層を除き、沈澱物１２ｋｇを得
た。この沈澱物に１３１の水を加えて２時間攪拌し１次
いで１００ｇのノ・インＯスーパーセルな加えて粗沢過
した。粗濾過液にアセトンを加えて７０ｖ／ｖ％にし、
生じた沈澱をＰ取した。
沈澱物はさらに１５１のアセトンで３回洗った後。
真空乾燥シフ、乾燥物１．１．５ｋｇを得た。活性０９
７単位／〜０なお、必要によりここに得られた乾燥物］
、、 ２ ｋｙについて実施例２の精製操作において記
載したと同様の精製操作をおこない、エラスターゼ結晶
の凍結乾燥物３３ｇを得た。エラスチン分解活性１７５
単位／Ｔｎ９゜ 実施例４ ブタの膵臓１０ｋｇをミンチし、４１の５０ｖＡ％エタ
ノール水を加え、１０℃に２日間放置して活性化した。
７単位／〜０なお、必要によりここに得られた乾燥物］
、、 ２ ｋｙについて実施例２の精製操作において記
載したと同様の精製操作をおこない、エラスターゼ結晶
の凍結乾燥物３３ｇを得た。エラスチン分解活性１７５
単位／Ｔｎ９゜ 実施例４ ブタの膵臓１０ｋｇをミンチし、４１の５０ｖＡ％エタ
ノール水を加え、１０℃に２日間放置して活性化した。
次いで８ノの水と５１のエタノールを加え、さらに２０
０ｇのハイフロス−パーセルラ加えて粗濾過した。粗沢
過液にエタノールを加え１５− て６０ Ｖ／Ｖ％にし、生じた沈澱物をｆ取した。沈澱
物はさらに５１の６０ ｖ／ｖ％エタノール水に懸濁し
て再びＰ取した後、１５１のアセトンで３回洗った。次
いで真空乾燥し、乾燥物１ ｋｇを得た。
０ｇのハイフロス−パーセルラ加えて粗濾過した。粗沢
過液にエタノールを加え１５− て６０ Ｖ／Ｖ％にし、生じた沈澱物をｆ取した。沈澱
物はさらに５１の６０ ｖ／ｖ％エタノール水に懸濁し
て再びＰ取した後、１５１のアセトンで３回洗った。次
いで真空乾燥し、乾燥物１ ｋｇを得た。
活性１１２単位／ｍ９゜なお、ここに得られた乾燥物を
必要により以下のごとくさらに精製した。乾燥物１ゆに
１０１の０．１Ｍリン酸二水素カリウム液を加え、３５
℃で２時間攪拌した。次いで５００ｇのハイフロス−パ
ーセルを加えて濾過した。ｆ液に硫安を加えて４５％飽
和にし、塩析し、塩析物をｒ取した。得られた塩析物３
５０．＠を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解し
、濾過して清澄液を得た後、３日間攪拌してエラスター
ゼ結晶を得た。結晶は分取した後、脱塩し、凍結乾燥し
た。
必要により以下のごとくさらに精製した。乾燥物１ゆに
１０１の０．１Ｍリン酸二水素カリウム液を加え、３５
℃で２時間攪拌した。次いで５００ｇのハイフロス−パ
ーセルを加えて濾過した。ｆ液に硫安を加えて４５％飽
和にし、塩析し、塩析物をｒ取した。得られた塩析物３
５０．＠を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解し
、濾過して清澄液を得た後、３日間攪拌してエラスター
ゼ結晶を得た。結晶は分取した後、脱塩し、凍結乾燥し
た。
乾燥物３３ｇ、エラスチン分解活性１６８単位／■。
実施例５
ブタの膵臓１０ｋｇをミンチし、２１の水と７０Ｉのパ
ンクレアチンを加えて激しく攪拌した後。
ンクレアチンを加えて激しく攪拌した後。
３５℃に４時間放置して活性化した。次いでイン１７−
１６−
プロピルアルコールを加えて８０ Ｖ／Ｖ％とし、１時
間攪拌後、インプロピルアルコール層を除き。
間攪拌後、インプロピルアルコール層を除き。
沈澱物１２ゆを得た。沈澱物に１３１の水を加えて２時
間攪拌し２次いで１００ｇのハイフロス−パーセルな加
え粗沢過した。ｆ液にイソプロピルアルコールを加えて
７０ Ｖ／Ｖ％とし、生じた沈澱物をｆ取した。沈澱物
をさらに１５１のインプロピルアルコールで２回洗った
後、真空乾燥し、乾燥物１．２ ｋｇを得た。活性１．
０２単位／ｍｙ。
間攪拌し２次いで１００ｇのハイフロス−パーセルな加
え粗沢過した。ｆ液にイソプロピルアルコールを加えて
７０ Ｖ／Ｖ％とし、生じた沈澱物をｆ取した。沈澱物
をさらに１５１のインプロピルアルコールで２回洗った
後、真空乾燥し、乾燥物１．２ ｋｇを得た。活性１．
０２単位／ｍｙ。
なお、必要によりここに得られた乾燥物１．２ ｋｇに
ついて実施例２の精製操作において記載したと同様の精
製操作をおこない、エラスターゼ結晶の凍結乾燥物３４
．９を得た。エラスチン分解活性１７０単位／〜。
ついて実施例２の精製操作において記載したと同様の精
製操作をおこない、エラスターゼ結晶の凍結乾燥物３４
．９を得た。エラスチン分解活性１７０単位／〜。
実施例６
ブタの膵臓１０睦を粗く砕いた後、２１の水と７０９の
パンクレアチンを加え攪拌し、２５℃で６時間放置して
活性化した。次いでミンチし、さらに水１０１と２００
ｇのハイフロス−パーセルを加えて粗沢過した。Ｐ液に
アセトンを加えて１８− ８０Ｖ／Ｖ％にした後、アセトン層を除き、沈澱物を集
めた。沈澱物はさらに２０ｇの７０Ｖ／Ｖ％アセトン水
に懸濁した後沢取した。沈殿物重量（温体）３．ｓｋｇ
、活性０．３４単位／ｍｙ。
パンクレアチンを加え攪拌し、２５℃で６時間放置して
活性化した。次いでミンチし、さらに水１０１と２００
ｇのハイフロス−パーセルを加えて粗沢過した。Ｐ液に
アセトンを加えて１８− ８０Ｖ／Ｖ％にした後、アセトン層を除き、沈澱物を集
めた。沈澱物はさらに２０ｇの７０Ｖ／Ｖ％アセトン水
に懸濁した後沢取した。沈殿物重量（温体）３．ｓｋｇ
、活性０．３４単位／ｍｙ。
なお、ここに得られた沈澱物を必要により以下のごとく
さらに精製した。沈澱物３．５ ｋｇに１４１の０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を加え、さらに２Ｎ水酸
化ナトリウム水溶液でｐＨを７０に調整した後、２０°
Ｇで２０時間放置した。次いで７００Ｉのハイフロス−
パーセルを加えて沢過した。、Ｐ液に硫安を加え、４０
％飽和にして塩析した。沢取して得た塩析物３４０Ｉを
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した後、濾過
した。得られた清澄液を３日間攪拌してエラスターゼ結
晶を得た。
さらに精製した。沈澱物３．５ ｋｇに１４１の０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を加え、さらに２Ｎ水酸
化ナトリウム水溶液でｐＨを７０に調整した後、２０°
Ｇで２０時間放置した。次いで７００Ｉのハイフロス−
パーセルを加えて沢過した。、Ｐ液に硫安を加え、４０
％飽和にして塩析した。沢取して得た塩析物３４０Ｉを
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した後、濾過
した。得られた清澄液を３日間攪拌してエラスターゼ結
晶を得た。
結晶を遠心分離によって集めた後、脱塩し、凍結乾燥し
、乾燥物３４ｇを得た。エラスチン分解活性１７８単位
／Ｉｎ９゜ 特許出願人 工−ザイ株式会社 １９−
、乾燥物３４ｇを得た。エラスチン分解活性１７８単位
／Ｉｎ９゜ 特許出願人 工−ザイ株式会社 １９−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） ブタ膵臓に活性化処理を施して得られるエラ
スターゼ含有溶液からエラスターゼを沈澱せしめるにあ
たり、水可溶性有機溶媒を加え、当該水可溶性有機溶媒
の濃度が加えた後の溶液に対し３０〜８０Ｖ／Ｖ％の範
囲にあるようにすることを特徴とするエラスターゼの製
造方法（２）水可溶性有機溶媒がアセトン、エタノール
。 イソプロピルアルコールのいずれかである特許請求の範
囲第１項記載のエラスターゼの製造方法 （３）活性化処理が自己消化処理、哺乳動物の十二指腸
またはその抽出液の添加、トリプシン添加、パンクレア
チン添加、エタノール添加、アセトン添加、イソプロピ
ルアルコール添加のいずれかである特許請求の範囲第１
項捷たは第２項記載のエラスターゼの製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14938881A JPS5851892A (ja) | 1981-09-24 | 1981-09-24 | 粗エラスタ−ゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14938881A JPS5851892A (ja) | 1981-09-24 | 1981-09-24 | 粗エラスタ−ゼの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5851892A true JPS5851892A (ja) | 1983-03-26 |
| JPH0127718B2 JPH0127718B2 (ja) | 1989-05-30 |
Family
ID=15474031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14938881A Granted JPS5851892A (ja) | 1981-09-24 | 1981-09-24 | 粗エラスタ−ゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5851892A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4948517A (ja) * | 1972-05-05 | 1974-05-10 | ||
| JPS5346919A (en) * | 1976-10-06 | 1978-04-27 | Snam Progetti | Method of manufacturing alphaa oxyester |
-
1981
- 1981-09-24 JP JP14938881A patent/JPS5851892A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4948517A (ja) * | 1972-05-05 | 1974-05-10 | ||
| JPS5346919A (en) * | 1976-10-06 | 1978-04-27 | Snam Progetti | Method of manufacturing alphaa oxyester |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0127718B2 (ja) | 1989-05-30 |
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