JPS5849236B2 - 醗酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製法 - Google Patents
醗酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製法Info
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- JPS5849236B2 JPS5849236B2 JP51010824A JP1082476A JPS5849236B2 JP S5849236 B2 JPS5849236 B2 JP S5849236B2 JP 51010824 A JP51010824 A JP 51010824A JP 1082476 A JP1082476 A JP 1082476A JP S5849236 B2 JPS5849236 B2 JP S5849236B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/42—Cobalamins, i.e. vitamin B12, LLD factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/32—Processes using, or culture media containing, lower alkanols, i.e. C1 to C6
-
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新菌種を包含して、アースロバクター属に属
するビタミンＢ１生産菌を用いて、改善？れた生産量で
ビタミンＢ］２を生産、取得できる醗酵法によるビタミ
ンＢ１２の製法に関する。
するビタミンＢ１生産菌を用いて、改善？れた生産量で
ビタミンＢ］２を生産、取得できる醗酵法によるビタミ
ンＢ１２の製法に関する。
更に詳しくは、入手容易で且つ供給量の安定した特定の
化合物を炭素源として含有する培地を用い培養操作上も
有利に且つ安価に、向上した生産量でビタミンＢ１２を
生産、取得できる醗酵法によるビタミンＢ１２の製法に
関し、とくに、アース口バクター属に属するビタミンＢ
１２生産菌を、炭素数２〜３のアルコール及びケトンよ
りなる群からえらばれた化合物の少なくとも一種を含む
培地で培養して得られた培養物からビタミンＢ１２を採
取することを特徴とする醗酵法ビタミンＢ１２の製法に
関する。
化合物を炭素源として含有する培地を用い培養操作上も
有利に且つ安価に、向上した生産量でビタミンＢ１２を
生産、取得できる醗酵法によるビタミンＢ１２の製法に
関し、とくに、アース口バクター属に属するビタミンＢ
１２生産菌を、炭素数２〜３のアルコール及びケトンよ
りなる群からえらばれた化合物の少なくとも一種を含む
培地で培養して得られた培養物からビタミンＢ１２を採
取することを特徴とする醗酵法ビタミンＢ１２の製法に
関する。
従来、ビタミンＢ１生産菌として、プロピオニバクテリ
ウム属、バチルス属、コリネバクテリウム属、アースロ
バクター属、ロドプソイドモナス属、プソイドモナス属
、プロタミノバクター属、ストレプトミセス属、ロドス
ピリナム属、アクチノミセス属、セレノモナスルミナン
チウム属及びノカルジア属に属するビタミンＢ２生産菌
の存在が知られている。
ウム属、バチルス属、コリネバクテリウム属、アースロ
バクター属、ロドプソイドモナス属、プソイドモナス属
、プロタミノバクター属、ストレプトミセス属、ロドス
ピリナム属、アクチノミセス属、セレノモナスルミナン
チウム属及びノカルジア属に属するビタミンＢ２生産菌
の存在が知られている。
これらのビタミンＢ１２生産菌中、糖質を炭素源として
ビタミンＢ２を生産する微生物以外に、炭化水素を炭素
源としてビタミンＢ１を生産する微生物として、コリネ
バクテリウム属、アース口バクター属、プソイドモナス
属及びノカルジア属に属するビタミンＢ１生産菌の存在
が知られている。
ビタミンＢ２を生産する微生物以外に、炭化水素を炭素
源としてビタミンＢ１を生産する微生物として、コリネ
バクテリウム属、アース口バクター属、プソイドモナス
属及びノカルジア属に属するビタミンＢ１生産菌の存在
が知られている。
また、Ｃ１アルコールであるメタノールを炭素源として
ビタミンＢ１を生産するプソイドモナス属及びプロタミ
ノバクター属に属するビタミンＢ１生産菌の存在が報告
されている。
ビタミンＢ１を生産するプソイドモナス属及びプロタミ
ノバクター属に属するビタミンＢ１生産菌の存在が報告
されている。
しかしながら、本発明方法で利用するアースロバクター
属に属するビタミンＢ１生産菌を包含して、従来公知の
ビタミンＢ１生産菌によるビタミンＢ１２の生産に、Ｃ
２〜Ｃ３のアルコール及びケトンよりなる群からえらば
れた化合物を炭素源とした培地を用いる報告は、全く知
られていない。
属に属するビタミンＢ１生産菌を包含して、従来公知の
ビタミンＢ１生産菌によるビタミンＢ１２の生産に、Ｃ
２〜Ｃ３のアルコール及びケトンよりなる群からえらば
れた化合物を炭素源とした培地を用いる報告は、全く知
られていない。
？酵法ビタミンＢ１生産において、糖質は最も広く且つ
普通に利用されてきた炭素源であるが、天然源材料であ
るために価格、供給量などの点で安定性が悪く、工業的
な醗酵法ビタミンＢ１２生産には適当な材料と云い難い
。
普通に利用されてきた炭素源であるが、天然源材料であ
るために価格、供給量などの点で安定性が悪く、工業的
な醗酵法ビタミンＢ１２生産には適当な材料と云い難い
。
これに対して、石油化学製品として、入手容易で且つ安
価であり、安定した供給量で提供されるアルコール類、
ケトン類などを炭素源とすることは工業的実施に著るし
く有利である。
価であり、安定した供給量で提供されるアルコール類、
ケトン類などを炭素源とすることは工業的実施に著るし
く有利である。
しかしながら、水と混和し難い乃至水不溶性の炭化水素
類を炭素源として利用することは、培養液からのビタミ
ンＢ１２含有菌体の分離が、残存する該炭化水素類のた
めに著るしく困難である欠陥がある。
類を炭素源として利用することは、培養液からのビタミ
ンＢ１２含有菌体の分離が、残存する該炭化水素類のた
めに著るしく困難である欠陥がある。
また、水溶性のメタノールを炭素源として利用する場合
には、上記菌体分離に際して生ずるトラブルは回避でき
るが、低沸点であるメタノールが、好気性培養たとえば
通気培養中に揮散する量が多く、培養操作上、不都合で
あるという欠陥を伴う。
には、上記菌体分離に際して生ずるトラブルは回避でき
るが、低沸点であるメタノールが、好気性培養たとえば
通気培養中に揮散する量が多く、培養操作上、不都合で
あるという欠陥を伴う。
本発明者等は、このような従来法の不利益乃至欠陥を克
服し得る醗酵法ビタミンＢ１２の製法を開発すべく研究
を進めた。
服し得る醗酵法ビタミンＢ１２の製法を開発すべく研究
を進めた。
その結果、後に詳記するアースロバクター属に属する新
菌種アース口バクター・ヒアリナスの分離採取に成功し
た。
菌種アース口バクター・ヒアリナスの分離採取に成功し
た。
更にこのアースロバクター属に属するビタミンＢ１生産
菌は、例えば石油化学工業製品として容易且つ安定した
供給量で且つ又安価に入手でき、水混和性で且つ通気培
養中に揮散して失われることも少ない炭素数２〜３のア
ルコール及びケトンよりなる群からえらばれた化合物の
少なくとも一種を炭素源として含む培地で有利に培養で
きること、及び高い生産量でビタミンＢ１を生産する能
力を有することを発見した。
菌は、例えば石油化学工業製品として容易且つ安定した
供給量で且つ又安価に入手でき、水混和性で且つ通気培
養中に揮散して失われることも少ない炭素数２〜３のア
ルコール及びケトンよりなる群からえらばれた化合物の
少なくとも一種を炭素源として含む培地で有利に培養で
きること、及び高い生産量でビタミンＢ１を生産する能
力を有することを発見した。
更に、上記新菌種のほかに、アースロバクター属に属す
るビタミンＢ１２生産菌においても、炭素数２〜３のア
ルコール及びケトンよりなる群からえらばれた化合物の
少なくとも一種を炭素源として利用することにより、同
様な利益が達成できることがわかった。
るビタミンＢ１２生産菌においても、炭素数２〜３のア
ルコール及びケトンよりなる群からえらばれた化合物の
少なくとも一種を炭素源として利用することにより、同
様な利益が達成できることがわかった。
従って、本発明の目的は、アース口バクター属に属する
ビタミンＢ１２生産菌を利用して、工業的に有利にビタ
ミンＢ１を生産、取得する醗酵法ビタミンＢ１の製法を
提供するにある。
ビタミンＢ１２生産菌を利用して、工業的に有利にビタ
ミンＢ１を生産、取得する醗酵法ビタミンＢ１の製法を
提供するにある。
本発明の他の目的は、醗酵法ビタミンＢ１の生産に利用
するアースロバクター属に属するビタミ？Ｂ１２生産新
菌種の存在を明らかにし、この技術分野を一層豊富にす
るにある。
するアースロバクター属に属するビタミ？Ｂ１２生産新
菌種の存在を明らかにし、この技術分野を一層豊富にす
るにある。
本発明の上記目的及び更に多くの他の目的及び利点は、
以下の記載から一層明らかとなるであろう。
以下の記載から一層明らかとなるであろう。
本発明方法で用いるアース口バクター属に属するビタミ
ンＢ１生産菌としては、公知菌たとえば、アースロバク
ター・シムプレツクス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉ
ｍｐｌｅｘ） （ ＡＴＣＣ ６ ９ ４ ６ ）、ア
ースロバクタ−１ンメセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｔｕｍｅｓｃｅｎｓ）［”ＩＦＯ１２９６０］、ア
ース口バクター・グロビホルミス（ Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）（ＡＴＣＣ８０１
０）などのほかに、本発明者等により分離採取された新
菌種アースロバクター・ヒアリナス（ Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｈｙａｌ ｉｎｕｓ） （微工研菌寄受託
番号第３１２５号〕が利用できる。
ンＢ１生産菌としては、公知菌たとえば、アースロバク
ター・シムプレツクス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉ
ｍｐｌｅｘ） （ ＡＴＣＣ ６ ９ ４ ６ ）、ア
ースロバクタ−１ンメセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｔｕｍｅｓｃｅｎｓ）［”ＩＦＯ１２９６０］、ア
ース口バクター・グロビホルミス（ Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）（ＡＴＣＣ８０１
０）などのほかに、本発明者等により分離採取された新
菌種アースロバクター・ヒアリナス（ Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｈｙａｌ ｉｎｕｓ） （微工研菌寄受託
番号第３１２５号〕が利用できる。
上記アースロバクター・ヒアリナスは、以下に記載する
菌学的性質を有し、゛バージース．マニュアル．オブ．
デイタミネテイヴ．バクテリオロジー″第７版の記載と
対比すると該当する菌種が見当らないので、アース口バ
クター属に属する新菌種と同定され、アースロバクター
・ヒアリナスと命名された。
菌学的性質を有し、゛バージース．マニュアル．オブ．
デイタミネテイヴ．バクテリオロジー″第７版の記載と
対比すると該当する菌種が見当らないので、アース口バ
クター属に属する新菌種と同定され、アースロバクター
・ヒアリナスと命名された。
アースロバクター・ヒアリナス
■．形態的性質：
菌形； 培養前期には長桿菌を示し彎曲し大きさは０．
８Ｘ４〜５ミクロンでＶ字状を示すものがあり、後期に
は１．２×１．５ミクロンの短桿菌に変化する。
８Ｘ４〜５ミクロンでＶ字状を示すものがあり、後期に
は１．２×１．５ミクロンの短桿菌に変化する。
運動性； なし。
クラム染色； 陽性または陰性。
胞子形成； なし。
２，培養的性質：
肉汁寒天平板培養； 周縁がぎざぎざ状、中心凸状、透
明、湿光。
明、湿光。
肉汁寒天斜面培養； 生育不良、糸状、透明、湿光。
肉汁液体培養； 混濁。
３．生理的性質：
生育温度； ２５〜３５°Ｃ
生育ｐＨ： ６〜９。
酸素要求； 通性嫌気性。
ゼラチンの液化； 行わない。
リトマスミルク； わずかにアルカリに変りゆつくりペ
プトン化する。
プトン化する。
インドール； 発生しない。
硫化水素； 発生する。
硝酸塩還元； 行わない。
脱窒反応； 陰性
メチルレッド試験と■−ｐ反応； 陰性
色素の生或； 鉄塩の少ない培地で酸素の供給を制限し
て培養すると赤い色素が生或さ れる。
て培養すると赤い色素が生或さ れる。
カタラーゼ； 生成しない。
ウレアーゼ； 生成する。
抗酸性； 陰性。
殿粉の分解； 行わない。
無機窒素源の利用； 硝酸塩もアンモニウム塩も陽性
オキシダーゼ； 陰性
０−Ｆテスト； Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクト ース、Ｄ−ガラクトース、マルトース、 シュクロース、ラクトース、トレハロー ス、Ｄ−マンニット、イノシット、クリ セリン、殿粉から酸化も発酵も行わない。
Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクト ース、Ｄ−ガラクトース、マルトース、 シュクロース、ラクトース、トレハロー ス、Ｄ−マンニット、イノシット、クリ セリン、殿粉から酸化も発酵も行わない。
アスパラギン； 分解しない。
くえん酸； 分解しない。
本発明によれば上述の如きアースロバクター属に属する
ビタミンＢ１２生産菌を培地に培養し得られた培養物か
ら直接もしくは間接にビタミンＢ１２を採取することが
できる。
ビタミンＢ１２生産菌を培地に培養し得られた培養物か
ら直接もしくは間接にビタミンＢ１２を採取することが
できる。
本発明によれば上記培地としては炭素源、窒素源、無機
塩類、消泡剤などを含有する培地が利用できる。
塩類、消泡剤などを含有する培地が利用できる。
本発明方法においては、炭素源として、炭素数２〜３の
アルコール及びケトンからなる群よりえらばれた化合物
の少なくとも一種を培地に含有せしめる。
アルコール及びケトンからなる群よりえらばれた化合物
の少なくとも一種を培地に含有せしめる。
このような炭素源の好ましい例としては、エチルアルコ
ール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、エチレン
グリコール、プロピレングリコール、グリセリン、アセ
トン等をあげることができる。
ール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、エチレン
グリコール、プロピレングリコール、グリセリン、アセ
トン等をあげることができる。
本発明においてはこれらと共に、他の炭素源たとえばノ
ルマルパラフィン、糖類、油脂類等を併用することがで
きる。
ルマルパラフィン、糖類、油脂類等を併用することがで
きる。
このような併用によって、屡々、生産量の一層の向上が
期待される。
期待される。
培地に含有せしめる窒素源としては、例えばコーンスチ
ープリカー、酵母エキス、ペプトン、魚？す、植物たん
白、大豆かす、サングロス（サングロス社製品；モルト
ウイスキー廃液の乾燥粉末）、アンモニウム塩類、硝酸
塩類、尿素等があげられる。
ープリカー、酵母エキス、ペプトン、魚？す、植物たん
白、大豆かす、サングロス（サングロス社製品；モルト
ウイスキー廃液の乾燥粉末）、アンモニウム塩類、硝酸
塩類、尿素等があげられる。
さらに無機塩類としてはたとえばコバルト塩類、リン酸
塩類、マグネシウム塩類、マンガン塩類、亜鉛塩類、カ
ルシウム塩類、モリブデン塩類、銅塩類などをあげるこ
とができる。
塩類、マグネシウム塩類、マンガン塩類、亜鉛塩類、カ
ルシウム塩類、モリブデン塩類、銅塩類などをあげるこ
とができる。
培地中にマンガン塩類の存在しないことがビタミンＢ１
の生産に好都合な場合にはマンガン塩類の添加を省略で
きる。
の生産に好都合な場合にはマンガン塩類の添加を省略で
きる。
更に、培地に５，６−ジメチルベンゾイミダゾールの如
きビタミンＢ１２前駆体をビタミンＢ１２生産促進物質
として添加することができる。
きビタミンＢ１２前駆体をビタミンＢ１２生産促進物質
として添加することができる。
培地組成は適宜に変更でき、所望成分を培養中に適当に
追加添加して培養を行うこともできる。
追加添加して培養を行うこともできる。
たとえば、炭素源は指数増殖期に増殖速度が低下するこ
とがないように、微量遂次添加することができる。
とがないように、微量遂次添加することができる。
さらに、ビタミンＢ１生産期にも、ビタミンＢ１２の生
産が維持されるように微量遂次添加することができる。
産が維持されるように微量遂次添加することができる。
培養は振とうもしくは通気撹拌などの好気条件下に行う
。
。
培養温度としては一般に２０〜４０°Ｃ程度の温度が利
用され、ｐＨ約４〜９．５程度の条件が採用できる。
用され、ｐＨ約４〜９．５程度の条件が採用できる。
培養日数は通常２〜８日程度がよく、他の培養条件の変
更に応じて適当に変えることができる。
更に応じて適当に変えることができる。
本発明方法の実施に際し、培養物からのビタミンＢ１２
の採取は、従来法におけると同様に行うことができる。
の採取は、従来法におけると同様に行うことができる。
ビタミンＢ１２は主として菌体内に蓄積するので、例え
ば培養物をまず遠心分離して菌体を得る。
ば培養物をまず遠心分離して菌体を得る。
シアン型ビタミンＢ１として培養物から分離するときは
、菌体にシアンイオンを加えて硫酸等の酸でｐＨ５に調
整し煮沸することにより抽出できる。
、菌体にシアンイオンを加えて硫酸等の酸でｐＨ５に調
整し煮沸することにより抽出できる。
補酵素型ビタミンＢ１２（５，６ジメチルベンゾイミタ
ソールコバミドコエンザイム）、およびヒドロキシ型ビ
タミンＢ１２として培養物から分離するときは、常法に
従い、菌体を暗所でメタノール、エタノール、アセトン
、ピリジン等の溶剤を用いて抽出することができる。
ソールコバミドコエンザイム）、およびヒドロキシ型ビ
タミンＢ１２として培養物から分離するときは、常法に
従い、菌体を暗所でメタノール、エタノール、アセトン
、ピリジン等の溶剤を用いて抽出することができる。
培養物から抽出されたビタミンＢ１の精製は、フェノー
ル抽出手段、活性炭による吸着手段、イオン交換樹脂、
セルロース等を用いたカラムクロマトグラフイ一手段な
どを適宜に組合わせて行うことができる。
ル抽出手段、活性炭による吸着手段、イオン交換樹脂、
セルロース等を用いたカラムクロマトグラフイ一手段な
どを適宜に組合わせて行うことができる。
？下に実施例をあげて、本願発明をさらに具体的に説明
する。
する。
実施例 １
アース口バクター・ヒアリナス〔微工研菌寄受託番号第
３１２５号〕をイオン交換純水１７あたり、ｉ−プロパ
ノール１０ｍｌ，ペプトン３ｇ、酵母エキス１ｇ、ＮＨ
４ＮＯ３３ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０ １．５．Ｆ
， ＫＨ２ＰＯ４０．４スＭｇＳＯ，ｋ７Ｈ２０ ０．
５，ｐＳＦ ｅｓＯ４ ＊ ’７Ｉ｛２ｏ １ ０ｍｇ
、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０ １０７７２ｐ、ＭｎＳＯ４・
４Ｈ２０１０■、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０ １０７７１ｐ
、Ｃｏ（ＮＯ３）２ ５”＆、ＣｕＳＯ４５Ｈ２０５
０μｇ１ＭＯ０３１０μｇ， ＣａＣＯ３ ５ｇを含有
する殺菌した培地１０ｍｌを収容した内径２０間の試験
管に植菌して３０℃で５日間振とう培養した。
３１２５号〕をイオン交換純水１７あたり、ｉ−プロパ
ノール１０ｍｌ，ペプトン３ｇ、酵母エキス１ｇ、ＮＨ
４ＮＯ３３ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０ １．５．Ｆ
， ＫＨ２ＰＯ４０．４スＭｇＳＯ，ｋ７Ｈ２０ ０．
５，ｐＳＦ ｅｓＯ４ ＊ ’７Ｉ｛２ｏ １ ０ｍｇ
、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０ １０７７２ｐ、ＭｎＳＯ４・
４Ｈ２０１０■、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０ １０７７１ｐ
、Ｃｏ（ＮＯ３）２ ５”＆、ＣｕＳＯ４５Ｈ２０５
０μｇ１ＭＯ０３１０μｇ， ＣａＣＯ３ ５ｇを含有
する殺菌した培地１０ｍｌを収容した内径２０間の試験
管に植菌して３０℃で５日間振とう培養した。
培養液中のビタミンＢ１の生成濃度は２００μｇ／Ｉｔ
であった。
であった。
実施例 ２
実施例１においてＭｎ塩を除いた培地を用いるほかは実
施例１と同様に実施した場合のビタミンＢ１の生戒濃度
は３５０μｇ／ｌであった。
施例１と同様に実施した場合のビタミンＢ１の生戒濃度
は３５０μｇ／ｌであった。
実施例 ３
実施例２においてｉ−プロパロールの代りに、種々の炭
素源を用いるほかは実施例２と同様に実施した場合のビ
タミンＢ１生成濃度と菌体濃度を表１に示した。
素源を用いるほかは実施例２と同様に実施した場合のビ
タミンＢ１生成濃度と菌体濃度を表１に示した。
？施例 ４
実施例２においてペプトンの代りにサングロス（サング
ロス社製、モルトウイスキー廃液の乾燥粉末）３．０ｇ
を含有する培地を用いるほかは実施例２と同様に実施し
た場合のビタミンＢ１２の生成濃度は４２０μｇ／Ａで
あった。
ロス社製、モルトウイスキー廃液の乾燥粉末）３．０ｇ
を含有する培地を用いるほかは実施例２と同様に実施し
た場合のビタミンＢ１２の生成濃度は４２０μｇ／Ａで
あった。
実施例 ５
前記のアースロバクター・ヒアリナスをｉ−プロパノー
ル１ ０ ｍｌｓペフトン：ｌ，酵母エキス１ ｇ，
ＮＨ４ＮＯ３３．？， Ｎａ２ＨＰ０４−１２Ｈ２０
１．５ｇ％ＫＨ２Ｐ０， ０．４ｇ、ＭｇＳ０４・
７Ｈ２０ ０．５ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ １０■、
ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０ １０■、ＣＯ（ＮＯ３）２ ５
■ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０ ５０μｇＭＯ０３ １０μｇ
％ＣａＣＯ３ ５ｇを含有する殺菌した培地１００ｍｌ
を収容した５００ｍＡ容三角フラスコ３本に植菌して３
０℃で２日間振とう培養した培養液を種母とした。
ル１ ０ ｍｌｓペフトン：ｌ，酵母エキス１ ｇ，
ＮＨ４ＮＯ３３．？， Ｎａ２ＨＰ０４−１２Ｈ２０
１．５ｇ％ＫＨ２Ｐ０， ０．４ｇ、ＭｇＳ０４・
７Ｈ２０ ０．５ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ １０■、
ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０ １０■、ＣＯ（ＮＯ３）２ ５
■ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０ ５０μｇＭＯ０３ １０μｇ
％ＣａＣＯ３ ５ｇを含有する殺菌した培地１００ｍｌ
を収容した５００ｍＡ容三角フラスコ３本に植菌して３
０℃で２日間振とう培養した培養液を種母とした。
ｉ−プロパノール１０ｒｒＬｌ、ペプトン３．Ｆ，酵母
エキス１ｇ１コーンスチーフリ力−９ｍｌ，ＮＨ４ＮＯ
３ １２ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０ １．５スＫＨ
，２Ｐ０４１．９．９，ＭｇＳ０４７Ｈ２０ ０．５．
９，ＦｅＳ０４−７Ｈ２０ １０弔ＺｎＳ０４・７Ｈ
２０ １０■、Ｃ ｏ （ ＮＯ ３ ）２ ５■、
ＣｕＳ０４５Ｈ２０ ５０μｇｓ Ｍｏｂ３、１０μｇ
１ＣａＣＯ３ ６ｇ、消泡剤０． ５ ｍｌ，イオン交
換純水１ｌの組成からなる培地５ｌを１０７醗酵槽に調
製し殺菌后、先の種母３００Ｍを植菌し、３２℃、６０
０ｒｐｍの撹拌、２．５１Ｊ／ｍｉｎの無菌空気の通気
を行いながら６０時間培養した。
エキス１ｇ１コーンスチーフリ力−９ｍｌ，ＮＨ４ＮＯ
３ １２ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０ １．５スＫＨ
，２Ｐ０４１．９．９，ＭｇＳ０４７Ｈ２０ ０．５．
９，ＦｅＳ０４−７Ｈ２０ １０弔ＺｎＳ０４・７Ｈ
２０ １０■、Ｃ ｏ （ ＮＯ ３ ）２ ５■、
ＣｕＳ０４５Ｈ２０ ５０μｇｓ Ｍｏｂ３、１０μｇ
１ＣａＣＯ３ ６ｇ、消泡剤０． ５ ｍｌ，イオン交
換純水１ｌの組成からなる培地５ｌを１０７醗酵槽に調
製し殺菌后、先の種母３００Ｍを植菌し、３２℃、６０
０ｒｐｍの撹拌、２．５１Ｊ／ｍｉｎの無菌空気の通気
を行いながら６０時間培養した。
醗酵経過中、指数増殖期には培養液中のｉ−プロパノー
ルが３． ０ ｍｌ／ ７３ 濃ｇを越えないように添
加しながら３０時間増殖を行わせた。
ルが３． ０ ｍｌ／ ７３ 濃ｇを越えないように添
加しながら３０時間増殖を行わせた。
それ以后ビタミンＢ１の生産期には培養液のｐＨを７〜
８に保つようにｉ−プロパノールの添加量を加減するこ
とによってＢ１の生産を維持させたところ、ビタミンＢ
１２の生成濃度は１，１００μｇ／ｄに達した。
８に保つようにｉ−プロパノールの添加量を加減するこ
とによってＢ１の生産を維持させたところ、ビタミンＢ
１２の生成濃度は１，１００μｇ／ｄに達した。
ｉ−プロパノールの消費量は培養液１ｌあたり３３ｍｌ
であった。
であった。
実施例 ６
前記のアースロバクター・ヒアリナスをイオン交換純水
１ｌあたり、ｉ−プロパノール１０ｍ４，ノルマルパラ
フィン１０１ｒＬｌ、ペプトン３ｇ１サングロス（サン
グロス社製、モルトウイスキー廃液の乾燥粉末）３ｇ、
ＮＨ４ＮＯ３ ３．９，Ｎａ２ＨＰＯ４−１２Ｈ２０
１．５ｇ、ＫＨ２Ｐ０， ０．４，９，ＭｇＳＯ，
７Ｈ２０ ０．５夙ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ １０７１
１、ＺｎＳＯ４・？Ｈ，０ １０■、Ｃ ｏ （ Ｎ
Ｏ ｓ ）２ ５■、ＣｕＳＯ４、・５Ｈ２０ ５０
μｇ１ＭＯ０３ １０μｇを含有する殺菌した培地１０
ｍｌを収容した内径２０ｍｍの試験管に植菌して３０℃
で５日間振とう培養した。
１ｌあたり、ｉ−プロパノール１０ｍ４，ノルマルパラ
フィン１０１ｒＬｌ、ペプトン３ｇ１サングロス（サン
グロス社製、モルトウイスキー廃液の乾燥粉末）３ｇ、
ＮＨ４ＮＯ３ ３．９，Ｎａ２ＨＰＯ４−１２Ｈ２０
１．５ｇ、ＫＨ２Ｐ０， ０．４，９，ＭｇＳＯ，
７Ｈ２０ ０．５夙ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ １０７１
１、ＺｎＳＯ４・？Ｈ，０ １０■、Ｃ ｏ （ Ｎ
Ｏ ｓ ）２ ５■、ＣｕＳＯ４、・５Ｈ２０ ５０
μｇ１ＭＯ０３ １０μｇを含有する殺菌した培地１０
ｍｌを収容した内径２０ｍｍの試験管に植菌して３０℃
で５日間振とう培養した。
培養中のビタミンＢ１２の生産濃度は１２４０μｇ／Ｉ
）テあった。
）テあった。
ｉ−プロパノール１０ｒｎｌを加えない培地で同様に５
日間培養したときの培養液中のビタミンＢ１２の生成濃
度は２８０μｇ／ｌであった。
日間培養したときの培養液中のビタミンＢ１２の生成濃
度は２８０μｇ／ｌであった。
実施例 ７
実施例３においてアースロバクター・ヒアリナスの代り
にアースロバクター・シムプレツクスＡＴＣＣ６９４６
を用いるほかは実施例３と同様に実施した場合のビタミ
ンＢ１生成濃度と菌体濃度を表２に示した。
にアースロバクター・シムプレツクスＡＴＣＣ６９４６
を用いるほかは実施例３と同様に実施した場合のビタミ
ンＢ１生成濃度と菌体濃度を表２に示した。
？上の実施例中、培養液中のビタミンＢ１の定量は、希
釈した培養液にシアン化カリウムを入れｐＨ５に調製し
たのち１５分間煮沸しシアノコバラミンに変えてから、
ラクトバチルスライヒマニＡＴＣＣ７８３０を用いる微
生物定量法によった。
釈した培養液にシアン化カリウムを入れｐＨ５に調製し
たのち１５分間煮沸しシアノコバラミンに変えてから、
ラクトバチルスライヒマニＡＴＣＣ７８３０を用いる微
生物定量法によった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ アースロバクター属に属するビタミンＢ１２生産菌
を、炭素数２〜３のアルコール及びケトンよりなる群か
らえらばれた化合物の少なくとも一種を含む培地で培養
して得られた培養物からビタミンＢ１２を採取すること
を特徴とするビタミンＢ１２の製法。 ２ 該ビタミンＢ１２生産菌が、アースロバクター・ヒ
アリナス（ Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｈｙａｌｉｎ
ｕｓ）である特許請求の範囲１記載の製法。 ３ 該ビタミンＢ１２生産菌が、アースロバクター・シ
ムプレツクス（ Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｙｍ
ｐｌｅｘ）である特許請求の範囲１記載の製法。 ４ 該化合物が、エチルアルコール、ｎ−７’ロパノー
ル、ｉｓｏ−プロパノール、エチレングリコール、プロ
ピレングリコール、グリセリン及びアセトンよりなる群
からえらばれた化合物である特許請求の範囲１記載の製
法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51010824A JPS5849236B2 (ja) | 1976-02-05 | 1976-02-05 | 醗酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製法 |
| US05/763,539 US4119492A (en) | 1976-02-05 | 1977-01-28 | Process for fermentatively producing vitamin B12 |
| DE19772704070 DE2704070A1 (de) | 1976-02-05 | 1977-02-01 | Verfahren zur herstellung von vitamin b tief 12 |
| GB4269/77A GB1521456A (en) | 1976-02-05 | 1977-02-02 | Process for fermentatively producing vitamin b12 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51010824A JPS5849236B2 (ja) | 1976-02-05 | 1976-02-05 | 醗酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5294498A JPS5294498A (en) | 1977-08-09 |
| JPS5849236B2 true JPS5849236B2 (ja) | 1983-11-02 |
Family
ID=11761097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51010824A Expired JPS5849236B2 (ja) | 1976-02-05 | 1976-02-05 | 醗酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4119492A (ja) |
| JP (1) | JPS5849236B2 (ja) |
| DE (1) | DE2704070A1 (ja) |
| GB (1) | GB1521456A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5937076B2 (ja) * | 1977-05-26 | 1984-09-07 | 日石三菱株式会社 | 醗酵法ビタミンｂ↓１↓２の製法 |
| US4430429A (en) | 1981-07-23 | 1984-02-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of vitamin B12 -activity substances |
| HU188954B (en) * | 1983-09-16 | 1986-05-28 | Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar,Hu | Process for production of new inoculum suitable for anaerobic fermentation of b under 12 coensime |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3021262A (en) * | 1958-12-11 | 1962-02-13 | Olin Mathieson | Preparation of cobalamins |
| US3062723A (en) * | 1960-08-03 | 1962-11-06 | Olin Mathieson | Process for producing vitamin b12 |
-
1976
- 1976-02-05 JP JP51010824A patent/JPS5849236B2/ja not_active Expired
-
1977
- 1977-01-28 US US05/763,539 patent/US4119492A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-02-01 DE DE19772704070 patent/DE2704070A1/de not_active Withdrawn
- 1977-02-02 GB GB4269/77A patent/GB1521456A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4119492A (en) | 1978-10-10 |
| JPS5294498A (en) | 1977-08-09 |
| DE2704070A1 (de) | 1977-08-18 |
| GB1521456A (en) | 1978-08-16 |
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