JPS5823784A - 哺乳動物細胞用培地 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は哺乳動物細胞用培地の血清濃度はもちろんのこ
と、血清アルブミ７の濃度をも顕著に低下させ、あるい
はなくすことができるものである。

哺乳動物細胞用培地は、従来牛胎児血清とか仔牛血清の
ような哺乳動物血清を添加する必要があるとされてきた
。しかしながら、これらの血清は一般に高価であること
、入手が容易でないこと、ｐット差が大きいことなどか
ら代替技術の開発が検討され、ヒトおよびウシ血清アル
ブミンを添加すれば他の血清成分を添加せずとも、細胞
が血清培地に匹敵する速度で増殖することが最近見出さ
れた。ところが、この血清アルブミンも大量に添加する
必要があるため、依然として高価であること、持重こ細
胞を培養してインターフェロン、抗体等の生理活性物質
を取得する場合に血清アルブミンとこれらの生理活性物
質との分離精製が問題になること、血清アルブミンには
血清と同様ロフト差がかなりあり、事前に検定の必要が
あること、等の問題点がこの血清アルブミンを含有する
培地にあった。

本発明者らはこれらの問題点を解決すべく種々検討の結
果、構成脂肪酸が不飽和脂肪酸であるリン脂質と、マン
ノースまたはガラクトースを培地に添加することによっ
て、血清はもちろんのこと血清アルブミンもほとんど添
加しなくても血清培地に匹敵する速度で細胞を増殖させ
うろことを見出し、この培地は前記の問題点を解決しう
るものであることを知って、これに基づいて本発明を完
成したものである。

すなわち本発明は、構成脂肪酸が不飽和脂肪酸−（−、
？＋るリン脂質と、マンノースまたはガラクトースとを
含有せしめたことを特徴とする哺乳動物細胞用培地Ｐこ
関するものである。

本発明の培地はまず不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とするリ
ン脂質を含んでいることが必要である。

リン脂質には、ホスファチジルフリン、ホスファチジル
エタノールアミン、ホスファチレルイノシトール、ホス
ファチジルセリン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエ
リン、カルシオリピン等を含む。不飽和脂肪酸の例とし
ては、オレイン酸、リノール酸、リルイン酸、アラキド
ン酸、エルシン酸、およびネルボン酸を挙げることがで
きる。

このような不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とするリン脂質の
例として、ホスファチジルフリンジリルオイル、ホスフ
ァチジルエタノールアミンジオレオイル、ホスファチジ
ルコリンジオレオイル、ホスファチジルコリンモノオレ
イルモノリルイイル、ホスファチジルコリンモノリルオ
イルモノステアリルなどを挙げることができる。このよ
うなリン脂質は合成で得られたものであると、天然界か
ら、抽出されたものであるとを問わず適用できることは
いうまでもない。また、純粋である必要モナく、例えば
大豆レシチン、卵黄レシチン、コーンレシチン、綿実油
レシチン、ナタネレシチン、合成レシチンのようなもの
であってもよい。このようなリン脂質の゛構成脂肪酸は
一方が不飽和脂肪酸であれば、他方は飽和脂肪酸であっ
てもよい。

しかしながら、リン脂質全体として構成脂肪酸の５０チ
以上が不飽和脂肪酸でなければならない。

本発明の培地ｔこおける前記リン脂質の含有量としては
０．５〜５μｆ／ＩＩ＋／程度が適当である。

本発明の培地は次に少なくともマンノースかガラクトー
スのうちいずれか一方を含んでいることが必要である。

この２つの糖を両方含んでいてもよいことはいうまでも
ない。濃度としてはα、２ん２ｔ／ｅ程度が適当である
。

他の培地成分としては、インシュリンとかヒトトランス
フェリンの如き細胞増殖因子およびヒボキサンチン、チ
ミジン、デオキシアデノシン、デオキシシチジンの如き
核酸前駆体を含み、更に、β−グリセロリン酸・ニナト
リウムの如きｐＨ緩衝剤、グルコースの如き糖源、アミ
ノ酸、ビタミン類、無機塩および通常の細胞増殖用の血
清培地に含まれるその他の栄養源を併用することが必要
である。

細胞増殖因子の濃度としては１〜１ｏ０ｍｇ７１程度、
そして核酸前駆体の濃度は０．０１〜５０ｍｙ／ｅ程度
が適当である。細胞増殖因子および核酸前駆体はいずれ
も培養する細胞の種類ｅこ応して１種又は２種以上を適
宜組合せて用いる。

糖源としては通常グルコースが用いられ、濃度としては
０，５〜１０ｆ／ｅ程度がよい。そのほか、ピルビン酸
などを適宜加える。アミノ酸は蛋白質構成成分アミノ酸
であって、例えば、アラニン、アルギニン、グルタミン
、シスチン、スレオニン、リシン：バリン、フェニルア
ラニンの如キモのである。血清培地においては、必須ア
ミノ酸を中心として添加しているが本発明の培地におい
ては必須アミノ酸のみでなく非必須アミノ酸も巾広く添
加するのがよい。全アミノ酸の濃度としては０．５〜５
２／ｅ程度がよい。アミノ酸の組成としては、通常の血
清用培地を参考にしてこれｔこ新たなアミノ酸を補充し
ていくのがよい。ビタミン類にはアスコルビン酸、リボ
フラビン、チアミン塩酸塩、パントテン酸カルシウム、
ニコチン酸アミド、ピリドキサール塩酸塩、１−イノシ
トール、葉酸、ＶＢ、、、　　ビオチンなど、そして無
機塩としては塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化力ル
ンウム、硫酸マグネンウム、リン酸二水素ナトリウム、
硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、亜セレン酸ナトリウムなどを例
として挙げることができる。これらビタミン類と無機塩
は通常の血清用培地を参考にしてこれしこ適宜添加して
いくのがよい。その他、重酒石酸コリン、グルタチオン
、プトレンン二塩酸塩などの代謝中間体や、重曹、β−
グリセロリン酸二ナトリウム、Ｎ−２−ヒドロキシエチ
ルピペラジン−Ｎ−２−エタンスルホン酸などのパンフ
ァーを適宜添加する。

培地組成の決定に参考とすべき基礎培地の例としては、
ダルベツコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ’Ｍ
ｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）、　ＲＰ
ＭＩ−１６４０培地、イーグル基礎培地（Ｅａｇｌｅ／
　Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅ：５ｅ−ｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕ
ｍ）、Ｈａｍ　　Ｆ−１２培地などを挙げることができ
る。

従来の培地では大量の哺乳動物血清の添加が必須である
とされ、そうでない場合には大量の哺乳動物血清アルブ
ミンの添加が必須であったが、本発明の培地においては
これらの添加量を極めて少量にすることができる。例え
ば、哺乳動物血清アルブミンを添加する場合ｔこはｏ、
ｏ　ｏ　ｓ〜０．０５％程度で充分である。また、これ
らを全く添加しなくとも細胞をかなり生育させることが
できる。

培地の調製方法としては、要はすべての培地成分を所定
の濃度になるように添加溶解すればよく、各培地成分の
添加順序は問わない。その場合、リン脂質は水に対する
溶解度が低いので、予めエタノール等に溶解してから添
加するのがよい。すべての培地成分を溶解した後は、濾
過等ンこよって滅菌してから培地として用いる。

本発明の培地で培養しうる動物細胞は特１こ限定される
ものではなく、リンパ球系細胞、繊維芽細胞、上皮性細
胞、これらのトランスフオーム細胞、ガン細胞等に広く
適用できる。このような細胞の例として、Ｅｐｓｔｅｉ
ｎ　−Ｂａｒｒ　Ｖｉｒｕｓ　（Ｅ　Ｂ　Ｖ　）でトラ
ンスフオームしたヒトリンパ芽球様細胞ＵＭＣＬ１同Ｃ
５１８０Ｙ　、ヒトバーキットリンパ腫由来のナマルバ
細胞、マウスリンパ球由来のハイプリドーマであるｓｐ
ｒ細胞、ヒト繊維芽細胞ＨＥＬ１同ＩＭＲ−９０、ヒト
ガン由来上皮性細胞ＨｅＬａ−Ｓ８、同１（ｅｐ　−２
、同ＫＢ、ヒト初代リンパ球、ラット吉田肉腫細胞、ハ
ムスター繊維芽細胞ＢＨＫ−２１、マウス繊維芽細胞３
Ｔ３、マウスリンパ腫瘍細胞ＹＡＣ−１などを挙げるこ
とができる。

この培地を用いて動物細胞を培養する方法は一般に血清
培地を用いて培養する従来の方法に準じて行なえばよい
が、例えば培養タンクに本発明の培地を入れて細胞を１
０４〜１０６セル／１１／程度加え、Ｃ０２を４〜６容
量チ含む空気を通気しつつ３５〜３７ｒで培養すればよ
い。繊維芽細胞を培養する場合には５〜ｌＯ容量チ程度
の低酸素濃度にするのがよい。

本発明の培地は細胞増殖用のみならず細胞を培養してイ
ンターフェロン、リンフ才力イン、抗体などの各種有用
物質を産生させる場合ｔこも適用できることはいうまで
もない。

本発明の培地社、高価で大量１こ入手することが難しく
かつ一ソト差の大きい、牛胎児血清とか仔牛血清の如き
血清とか血清アルブミンの使用量を大巾１こ低下させる
ことができる。そして、これらの−ノド差の影響も少な
いところから、本発明の培地は細胞の大量培養とか細胞
培養によるインターフェロンとかリンフ才力イノなどの
有用物質）大量生産に極めて適するものである。また、
高価な血清とか血清アルブミンの量を節減したことによ
って細胞とかその培養生産物を安価に製造することがで
きる。

特に、培養生産物が蛋白の場合には、従来の培地におい
ては血清アルブミンその他の血清中の各種蛋白質との分
離や高価なヒト血清アルブミンを大量に使用するという
大きな問題であったが、本発明の培地１こおいてはこの
ような問題点もない。

また、本発明の培地は、特にインター７エロ／、抗体な
どの糖蛋白を分泌する細胞に対して有効である。

尚、以下の実施例およびＵＭＣＬ細胞製造例１こおける
細胞数の測定は、ＵＭＣＬ細胞およびＲＰＭＩ　１７８
８細胞についてはトリバンプルー染色法によって、に−
５６２細胞１こついてはエオシン染色法１こよって、そ
してＨｅｐ−２細胞はセル・細胞自動カウンター法によ
って行なった。

インターフェロンの活性は、ヒト羊膜由来のＦＬ細胞と
Ｖ　Ｓ　Ｖ　（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ　５ｔｏｒｎａｔｉ
ｔｉｓ　Ｖｉｒｕｓ）を用いる細胞変性抑制法（飯塚雅
彦ら、最近医学、２９巻、６６０頁（１９７４））で測
定した。

また、免疫グロブリンは培養液を濃縮した後、拡散沈降
法で測定した。

ＵＭＣＬ細胞製造例 新生児より切りはなされた腰帯より約２０ｙｎｌの血液
を無菌的にヘパリン採血し、すみやかｅこフィコール・
アイソパックを用いる比重遠心法でリンパ球区分を分画
した。このリンパ球区分に３倍量のＥａｇｌｅ　Ｍ　Ｅ
Ｍ　（Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉ
ｕｍ）　　培地（日本製薬■製）を加えて遠心分離し、
上清液を棄却する洗浄を３回繰返した後、１０　ｖ／ｖ
　％のウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（日
本製薬■製）に洗浄したす７７球細胞を有核細胞密度と
して３Ｘ１０’個／　ｓｅ　ｔこなるように添加して浮
遊させた。このリンパ球浮遊液ｔこＢ−９５−８細胞で
増殖させたＥＢＶをｓ　ｘ　１ｏ’　ＴＤｓｏ／罰にな
るよう１こ加え、３７Ｃで２時間培養した後遠心分離１
こよって細胞を集め、Ｅａｇｌｅ　ＭＥＭ培地を添加し
て遠心分離し上清液を棄却する洗浄を３回繰返した。洗
浄した細胞をＩ　Ｏｖ／ｖ　％のウシ胎児血清ヲ含ｔｒ
ＲＰＭＩ　−１６４０培地ｉｎ　３　Ｘ　１０’個／　
ｍｅになるように植込み、３６〜３７　ｒ、　５　ｖ／
ｖ％ＣＯ，の条件で培養を行った。培養は１．５ケ月間
続け、その間５日毎に、　　１０　ｖ／ｖ％ウソ胎児血
清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地を等量ずつ加えるか、
あるいはこの培地と半量の培地交換を行うのいずれかを
行った。

屓帯血３例について、このような処理を行い、各細胞の
トランスフオーム後についてＩＦの自発各産生量を測定
した結果を下表に示す。尚、この産生量は、各々の細胞
を１０　ｖ／ｖ　’４のウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−
１６４０培地１こ５　Ｘ　１０５個／＋Ｉ＋／になるよ
うに植込み、５　ｖ／ｖ％Ｃｏ、、　３７　ｃの条件下
で５日間培養した後、培養上清液の活性を測定して得ら
れたものである。

Ｉ　Ｆ活性ｘ　１０”　Ｕ／ｍｌ ＵＭＣＬ−１２，５ リンパ球 １／　　　−３４，５ 実施例１ 塩化ナトリウム　　　　　　　　６４０　（ＬＯ１１９
／ｅ塩化カリウム　　　　　　　　　　４００．０　　
／／塩化カルシウム（無水）　　　　　　２００．Ｏｔ
ｔ硫酸マグネシウム（無水）　　　　　　９７．７　　
ｔｔゾリン二水素ナトリウム（２水和物）　　　　１２
５．Ｏ／／硝酸第二鉄（９水和物）０．１■／ｅ ブドウ糖　　　　　　　　　　　　　１０００．０　　
／／ピルビン酸ナトリウム　　　　　　１１０．０／／
Ｌ−アルギニン塩酸塩　　　　　　８４．ＯＩＩＬ−シ
スチンニ塩酸塩　　　　　　　６２．６　　／／グリシ
ン　　　　　　　　　　　　　３０．０　　ＩＩＬ−グ
ルタミン　　　　　　　　　　５８４．ＯｔｔＬ−ヒス
チジン塩酸塩（ｌ水和物）　　　　　　４２，０ｔｔＬ
−インロイシン　　　　　　　　１０４，８／／Ｌ−ロ
イシン　　　　　　　　　　１０４．８／／Ｌ−リジン
塩酸塩　　　　　　　　１４６．２／／Ｌ−メチオニ７
　　　　　　　　　３０．０　　ＩＩＬ−フェニルアラ
ニン　　　　　　　６６、ＯｔｔＬ−セリン　　　　　
　　　　　　４２．０ｔｔＬ−スレオニン　　　　　　
　　　　９５．２　　ｔｔＬ−トリプトファン　　　　
　　　　１６．０／／Ｌ−チロシンニナトリウム　　　
　　　８９．５　　ＩＩＬ−バリン　　　　　　　　　
　　９３．６　　ｎ重酒石酸コリン　　　　　　　　　
　７．２〃葉　　　酸　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　４．Ｏ〃ニコチン酸アミド　　　　　　　　　
　４．ＯｅＩｇ／　１パントテン酸カルシウム　　　　
　　４．０〃ピリドキサール塩酸塩　　　　　　　４．
０〃リボフラビン　　　　　　　　　　　０．４〃チア
ミン塩酸塩　　　　　　　　　　　４．Ｑ　　／／１−
イノシトール　　　　　　　　　　７．２〃フエ／−ル
レツド　　　　　　　　　　５．Ｏ〃上記の如き組成を
有するダルベツコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ
ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）　
ｌこ下記の如き成分を添加して溶解し、Ｒ５６−１培地
を得た。

インシュリン　　　　　　　　　　ｌｏ　　　ｍｇ／ｌ
ヒトトランスフェリン　　　　　　５ ヒボキサンチン　　　　　　　　　４ チミジン　　　　　　　　　　　　　０．７〃デオキシ
シチジン　　　　　　　　０．０　：３　　／／デオキ
シアデノシン　　　　　　　１．０〃６．８−ジヒドロ
キシプリン　　　　　０．３〃グルコース　　　　　　
　　　１０００　　　　〃マンノー不　　　　　　　　
　　５００ガラクトース　　　　　　　　　ｓ　ｏ　ｏ
　　　ｖｎ９／　ｅＬ−アラニン　　　　　　　　　２
０〃Ｌ−アスパラギン（］水和物）５６ Ｌ−アスパラギン酸　　　　　　２０ Ｌ−システィン塩酸塩（ｌ水和物）４０Ｌ−グルタミン
酸　　　　　　　　２゜Ｌ−プロリン　　　　　　　　
　　２０　　　〃アスコルビン酸　　　　　　　　１０ ビオチン　　　　　　　　　　　　０．２〃ホリニン酸
　　　　　　　　　　　０．０１　　ｔｔｖＢＩ’　　
　　　　　　　　　　　　　０．１　　　／／Ｆｅ５０
．　”　７Ｈ２００，８ｎ Ｚｎ５Ｏ４ｓ７Ｈ，Ｏ’　　　　　０．０２　　／／Ｎ
　ａ、　Ｓ　ｅ　０３　　　　　　　　　　　０．００
４　　〃Ｃａ　ＣＩ　２　　　　　　　　　　　１　＋
１　（１〃グルタチオン　　　　　　　　　　１．Ｏ〃
プトレシンニ塩酸塩　　　　　　　０．１〃β−グリセ
ロリン酸二ナトリウム　　　１５００重　　　曹　　　
　　　　　　　　　　　１３００このＲ５６−１培地１
３０．０１　％のヒト血清アルブミンを添加して９つに
分割し、それぞれｔこ下記の各リン脂質成分を所定の５
０倍濃度に溶解したエタノール溶液を培地の１１５０容
量添加してメンブレンフィルターで濾過滅菌した。添加
した各リン脂質成分と所定濃度を下表に示す。

ＰＣＬ　　　ホスファチジルコリンシリルオイル　　　
３ＰＣＯホスファチジルコリンジオレオイル　　　　３
ＰＣ８オスファチジルコリンジステアロイル　　　３Ｐ
ＥＯホスファチジルエタノールアミンジオ　　　ルオイ
ル ＰＥＳ　　　　ホスファチジルエタノールアミンシス　
　　ｌテアロイル Ｓ　　大豆レシチン　　　　３ Ｈ８水添大豆レシチン　　　　　　３ オレオイル このようｔこして調製した各培地にいずれもＵＭＣＬ−
３細胞を５　Ｘ　１０５セル／　ｍｅになるようＶこ添
加してＣｏ１を５容量チ含む空気を通気しつつ３７ｒで
５日間培養した。

培養液の細胞濃度およびインターフェロンの産生量を測
定した結果を第１図に示す。図中、斜線の棒グラフは細
胞濃度を、そして内棒グラフはインターフェロンの産生
量を表わしている。

対照例として、ＲＰＭＩ−１６４０培地ｅこ牛胎児血清
（ＦＢＳ）をｌＯ容量チ加えた場合について同様に培養
して得られた結果を第１図右端に示す。

実施例２ 実施例１と同様にして調製したＲ５６−１培地１こ、ヒ
ト血清アルブミンのかわりに牛血清フルブミンを０．０
５　％の濃度になるようンこ添加して３つ１３分割し、
リン脂質としてホスファチジルコリンシリルオイル（Ｐ
ＣＬ）３ｎｇ／ｌ！およびホスファチジルエタノールア
ミンジオレオイル（ＰＥＯ）１ｍｇ　／　ｌを添加した
培地、ホスファチジルコリンジステアロイル（ＰＣ８）
３■／ｅおよびホスファチジルエタノールアミンジステ
アロイル（ＰＥＳ）１■／ｅを添加した培地およびりン
脂宜を添加しなかった培地（Ｎｏｎｅ　）にいずれもに
−５６２細胞を２Ｘ］、０’セル／Ｎ／？こなるよう、
ｔこ添加してｃｏ。

を５容量チ含む空気を通気しつつ３７Ｃで５日間培養し
た。

培養液の細胞濃度を測定した結果を第２図に示す。

対照側として、ＲＰＭＩ−１６４０培地Ｖこ牛胎児血清
を１０容量チ加えた場合について同様に培養して得られ
た結果を第２図右端に示す。

実施例３ ＭＥＭ培地　　　　　　　　　９４０　ｏ　　＊ｇ／　
ｅ（Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕ
ｍ　、日本製薬■製）Ｌ−アスパラギン酸　　　　　　
　１３．３　　／／Ｌ−グルタミン　　　　　　　　　
２９２　　　ｌｌグリシン　　　　　　　　　　　　　
７，５　　舅ｙ／ｅＬ−グルタミン酸　　　　　　　　
　０−１５ｔｔＬ−プロリン　　　　　　　　　　　　
３．５〃Ｌ−セリン　　　　　　　　　　　１０．５　
　／／ホリニン酸　　　　　　　　　０．００００５　
　／／３　、３’、　５−トリヨード−Ｌ−チロニ：／
　　　０．０００２　　　ｔｔマウス−ＥＧＦ　　　　
　　　　　　　Ｏ，０１／／ヒトトランスフェリン　　
　　　　ｌ　Ｑ　　　／／インシュリン　　　　　　　
　　　　１　　〃ＶＢ”　　　　　　　　　　　　　　
　　０．０２　　／／ビオチン　　　　　　　　　　　
　　０．０２　　／／プトレシンニ塩酸塩　　　　　　
　０．０２　　／／ピルビン酸ナトリウム　　　　　　
１１０　　　／／塩化コリン　　　　　　　　　　　１
６　　〃チミジン　　　　　　　　　　　　、０．０７
／／ヒボキサンチン　　　　　　　　　　０．２４　　
／／ＣｕＳＯ４−５）１．　ＯＯ，０００００２５／／
ＦｅＳＯ４ａ　７Ｈ２００，８ｔｔ ＭｎＳＯ，’−７Ｈ，００，０００００２４／／（ＮＨ
４）６　Ｍｏ７０２４　・Ｒ２００，００１２ＮｉＣＩ
、　１１６Ｈ，ＯＯ，００００１２ｍｇ／ｅＮＨ４ＶＯ
３０，００００５８／Ｉ Ｈ，Ｓｅａ、　　　　　　　　　　　　　　　０．００
０３９　　　　ｔｔＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジ
ン−Ｎ−２−エタンスルホン酸　　　　　　　　　３３
００　　　ノｌＮａＯＨ３００＃ ＮａＨＣＯ３１４００。

上記のような組成を有するＲ’ＩＴＣ８０−７培地に０
．０５％のヒト血清アルブミンおよびヒト血漿から分離
されたｌＯ■／ｅのファイプロネクチンを添加した培地
を用いて実施例２と同様にリン脂質を添加し、ヒト咽頭
ガン由来細胞Ｈｅｐ’−２を培養して得られた各培養液
につい・て細胞数を測定した結果を第３図に示す。

対照例として、ＭＥＭ培地に仔牛血清をｌＯ容量チ加え
た場合について同様に培養して得られた結果を第３図左
端に示す。

実施例４ Ｒ５６−１培地のうちガラクトースとマンノースの分を
下表の如く変え、更Ｖこいずれもボスファチジルコリン
ジリルオイル３ｍｇ　／　ｅおよびホスファチジルエタ
ノールアミンジオレオイル１ｍｇ／ｌを加えて各種の培
地を調製した。

糖　　　　　　　　　　　　　　　濃　　　度−〇■／
ｅ グルコース　　　　　　　　　１０００／／フコース　
　　　　　　　　１０００　　／／ガラクトース　　　
　　　　１０００／／マンノース　　　　　　　　１０
００　　／／ガラクトース　　　　　　　各５００　〃
”＋マンノース これらの各培地にいずれもＵＭＣＬ−３細胞を実施例１
と同様に添加して培養した結果を第４図に示す。

対照例として、ＲＰＭＩ−１６４０培地に牛胎児血清を
ｌＯ容量係加えた場合ｔこついて同様に培養して得られ
た結果を第４図右端に示す。

実施例５ 実施例４と同様にして培地を調製し、この各培地にいず
れもＲＰＭＩ−１７８８細胞を実施例１と同様に添加し
て培養した結果を第５図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は各種リン脂質を添加した培地にＵＭＣＬ細胞を
培養して、細胞数とインターフェロン産生量を測定した
結果を示すものである。 第２図はに一５６２細胞をそして第３図はＨｅｐ−２細
胞を、いずれも各種リン脂質を添加した培地に培養して
細胞数を測定した結果をそれぞれ示すものである。第４
図および第５図は糖の影響を調べた結果を示すものであ
り、第４図はＵＭＣＬ細胞を、そして第５図はＲＰＭＩ
　−１７８８細胞を、いずれも各種の糖を添加した培地
に培養して得られた培養液の細胞数を表わしている。 尚、図中斜線の棒グラフは細胞数を、そして白い棒グラ
フはインターフェロン又は免疫グロプリンの産生量をそ
れぞれ表わしている。 特許出願人　味の素株式会社 １図 第２図 ＋ＰＥＳ＋ＰＥＯ４１０’／、Ｃ５

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 構成脂肪酸が不飽和脂肪酸であるリン脂質と、マンノー
   スまたはガラクトースとを含有せしめたことを特徴とす
   る哺乳動物細胞用培地。