JPS5823782A - 感染性−キユアドＨｒプラスミド−担持微生物含有組成物およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は植物の栽培の分野、特にニンジンに対する病原
性を有しないＨｒグラスミド−担持微生物の使用方法に
関する。

種子発芽を改良する従来のタイプについては米国特許第
ｇｓｓｇ５グア号および２１１９０８８８号明細書に記
載されている。種子を微生物、特にリゾビウム属（ｙｅ
ｎｕｓｓ　Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）　ｆ）微生物テ処理す
ることは知らｎている０このタイプの従来技術について
社米国特許第１８１８０５７号、８１６８７９６号、８
４９９７４８号、１１４１８６４８６号、４１４９８６
９号および４１６１δ９フ号明細書に記載されている０
史に、米国特許第６７４７６５号には微生物で処理した
種子について記載されており、結節形成（ｎｏａｕｉｅ
ｆ□ｒｍａｔｉｏｎ）が種子を土壌に埋めた後に非常に
早く形成すること、およびその種子を埋め九８フおよび
８８列において迅速に発芽することが記載されている。

更に、米国特許第４０７７７９δ号明細書にはインデア
ン　トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）　、）ウモロコシ（ｏ
ｏｒｎ）　、ジャガイモおよびトｗ）１７）ｇＱｌｋあ
る種の作物の種子を窒素固定土壊微生物を含有する生化
学材料で処理して、発芽を早めかつ着しく良い収穫を得
ることが記載さｎているｏｆた、「ケ２カル　アンド　
エンジニャーイング　ニュース４１９８０年８月８日、
＄９Ｉ３１９ｊｊには大豆種子を窒素固定バクテリアで
処理することが記載さｎている◇ 艮に、キ為ウリおよび砂糖大根の表面にアクロバクテリ
ウム　リゾゲネス（ム（ｒｏｂ＆ｏｔ６ｒｉｕｌｌｒｈ
ｉｚｏｇｅｎｅａ　）の細胞懸濁物を散布してキュウリ
および砂糖大根の発芽を刺激することが知らｎている。

このタイプの従来技術について祉「フォリアｉ　ｐ　ｏ
　ヒ＃　０　シカ（ｌＦＯｂｉａ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｉｏａ）　Ｊ　２１（δ）：２１δ（１９７６）に
記載さｎている。この文献でＦｉ微生物をビシラム　デ
バリリアニウム薗類（ｆ’ｕｎｇｕｓ　Ｐｙｔｈｉｕｍ
　ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）　（Ｄ菌糸の表面力ら分層し
ている０筐た。この方法に祉種子を７オマ　ビｆｉ　ｘ
　（Ｐｈｏｍａ　ｂｅｔａｓ）　＠　”Ｃ’同時に人工
的ニ汚染する場合に砂糖大根種子の表面を黒板病を予防
する１、リゾゲネスｍ胞の懸濁物で処理すること〃Ｊ記
載されている〇 最後に、感染性−キエアドＨｒグラスミドー担持微生物
（土ｎｆｅｏｔｉｖｉｔｙ−ｃｕｒｅｄ　Ｈｒ　ｐｌａ
ｍｉｄ−ｂｅａｒｉｎｇａ＋ｉｏｒｏｏｒ（ａｕｉｓｍ
）は知らｒｔ、ティル。コノ従来技術ニついては％　−
Ｌ／　（ＭＯＯｒｅ）　、つ７　ｖ　ｙ　（ｗａｒｒｅ
ｎ）　＞　Ｊ：びストロベル（８ｔｒｏｂｅｌ）氏によ
り「プラス建ド」ｇ：ａｘｙ〜６！６（１９７Ｇ）に記
載されている０この微生物は実際上Ｈｒ　７ラスイピを
含有するム、リゾゲネ゛スム、を臭化エチジウム（ｅｔ
ｈｉｄｉｕｍｂｒｏｍｌａｅ　）で処理して作らｎてい
る。この微生物はニンジンに対する病原性を有していな
い０この文献６Ｉ：は根の誘発にム、リゾゲネスム、の
潜在使用できることが第６２５頁の８節に暗示されてい
る。

根の誘発は病原性のム、リゾゲネスム、の潜在使用によ
るものであり、発芽の誘発または根の伸長、苗条の伸長
および根の発育を増大にする如き生長促進作用から区別
さｎている。

しかし、こ【らの従来技術は選定さｎた感染性−キュア
ドＨｒプラスミドー担持微生物で処理した種子からなる
農業用組成物を得るのに十分でない。

更に、上述する従来技術では、種子を選定さｎた感染性
−キエアドＨｒ　７ラスｉドー担持微生惣で処理スルコ
トニヨリ発芽種子（ｇｅｒｍｉｎ＆ｔｉｎｇ　５ｅｅｄ
）の根の伸長、苗条の伸長ま九社根の発達を高める方法
を達成することができない０また、上述する従来技術で
轄種子を選定された感染性−キエアドＨｒグ２ス々ドー
担持＊゛生物で処理することを゛含むケンタラキイー・
ブルーグツｘ　（Ｋｅｎｔｕｏｋｙｂｌｕｅｇｒａｓｓ
＋）種子の発芽を誘発する方法を達成することができな
いし、また植物の種子をまく時期に普通より低い±ＩＩ
ｍ度で植物生長を促進する方法を達成することができな
い。＠に、、％また上述する従来技術ではマメ科植物に
おいて結節形成（ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ）、根果団（ｒ
ｏｏｔｍａｓｓ）および苗条集団（ｓ＋ｈｏｏｔ　ｍａ
ｓｓ）を増大する接種剤（ｉｎｏｏｕｌａｎｔ）リゾビ
クム微生物および選定さｆ′した感染性−キ二アトＨｒ
グラスミドー担持微生物を含有する接種剤、並びにこの
接種剤で処理した適当な種子を含有する農業用組成物を
得ることはできない〇 発明の説明 本発明の１つの目的は選定さｎ＋感染性−キュアドＨｒ
　７ラスミドー担持微生物で処理した種子からなる農業
用組成物を提供することである□本発明の他の目的＃′
ｉ種子を選定された感染性−キュアドｆｉｒ　７ラスミ
ドー担持微生物で処理することにより発芽種子の機の伸
長、＋Ｗ条の伸長また社根の生長を高める方法を提供す
ることである。

本発明の他の目的は種子を選定された感染性−キエアド
Ｈｒ　７ラス電ドー担持微生物で処理して種子の発芽を
一発する方法を提供することであるＯ本発明の他の目的
轄植物の種子をまく時期に通常必要とさｎ、６ｕｉｈ度
より低い±ＩＫ一度で植物の生長を促進する方法を提供
することであるＯ本発明の他の目的はマメ科植物におい
て結節形成、根集団および苗条集団を増大にする接種剤
およびリゾビクム微生物および選定さｎた感染性−キュ
アドＨｒ７Ｆスミドー担持微生物な含有する接種剤を提
供することであるＯ また、本発明の他の目的は上記接種剤で処理した適当な
種子を含有する農業用組成物を提供することである。

上述する本発明の目的を満足するために、広い概念にお
いて本発明はニンジンに対する病原性を有しない感染性
−キュアドＨｒグラスミドー担持１生物を得ることであ
り、　（ａ：Ｊム、リゾゲネスム、ムＴＯＣ８１？１１
Ｇに比較した場合に発芽トウモロコシ種子において根を
着しく長く誘発する特徴を有する微生物タイプおよび（
ロ）ム、リゾゲネスム、ムＴＯＯ８１７９８に比較した
場合にケンタラキー・ブル・−グラス種子の発芽誘発を
著しく高めることに特徴を有する微生物タイプからなる
群から選定することである。

本発明の丈に他の目的はニンジンに対する病原性を有し
ない感染性−キュアドＨｒ　７ラスミドー担持微生物を
含み、かつ（〜ム、リゾゲネスム、ムＴＯＯ８１７９９
に比較した場合に発芽トウモロコシ種子における根の長
さを着しく誘発する特徴を有する微生物タイプおよびΦ
）ム、リゾゲネスム、五ＴＯ０１１１７９８に比較した
場合にケンタラキー−プルーグラス種子の発芽を著しく
誘発することに特徴を有する微生物タイプからなる群か
ら選定した材料の組成物で処理し九野菜または穀類の種
子からなる農業用組成物を提供する。

種子としては１例えばエントウ豆、大豆、イネ。

ケンタラキー・プルーグラスの如睡イネ科植物（ｇｒａ
ａｓ）％　レッド　ウシノゲグサφグラス（ｒｅａｒｅ
ｓｃｕｅ　ｇｒａｓｓ）　、秋まきライムギまたは一年
生ライムギ、トウモロコシ、ピントビーン（ｐｉｎｔｏ
　ｂｅａｎ）およびグリンビーンを含むビーズ（ｂｅａ
ｎｓ）　、小麦Ｈｙｔハネｗｙ　すｙ、　ｙりング小麦
（ｌｉａｗａｎａ　ｓｐｒｉｎｇ　ｗｈｅａｔλ大麦例
えばサヘト大麦（ｓｈａｂｅｔ　ｂａｒｌｅｙ）　、ソ
ルガＡ　（ｓｏｒｇｈｕｍ）　、　（ネ、ワタ、ブロッ
コリー、フル７アルフア、オートムギ、ヒマワリ、キャ
ベツ。

トマト、スイカおよびレタスを挙げることができる０ 本発明の他の観点において社、選定さｎた感染性−キエ
アドＨｒ　７ラスミドー担持微生物で処理し九工ンドク
豆、大豆およびケンタッキーｅブルー・グラスの如きイ
ネ科植物およびイネからなる群から選択した野菜または
穀類の種子を含む農業用組成物を提供することである０
微生物燻ム、リゾゲネスム、ム’ｌ’ｏｏ　８１）９８
に比較した場合にニンジンに対する病原性を有しなく、
かつケンタラキー・プルーグラス種子の発芽を看しく誘
発することに特徴を有する〇 他の例においては１組成物は選定された感染性−キュア
ドＨｒプツスミドー担持微生物で処理し九エントウ豆、
大豆、トウモロコシ、ピント−ビーンの如きピースおよ
びイネからなる群から１選択する野菜または穀類の種子
を含む。微生物はム、リゾゲネスム、ムＴＯＯ８１７９
９に比較した場合にニンジンに対する病原性を有しなく
、かつ発芽トウモロコシ種子における根の長さを着しく
誘発することに特徴を有する０ 本発明の第８の観点においては、農業用として利用する
方法を提供することであるＯこの１例において発芽種子
の根の伸長を高める方法を提供することである０この方
法においてはエントウ豆。

小麦、大麦、トウモロコシ、ノルガムおよび大豆からな
る群から選択する野菜まｆｃは穀類の種子を根の伸長を
増大させる分量のニンジンに対する病原性を有しない選
定された感染性−キュアドＨｒ　７ラスミドー担持微生
物で処理する。微生物は（１）ム。

リゾゲネスム、ムＴｏ０８１７９９　ｉ％：比較した場
合に発芽トウモロコシ種子において根の長さを看しく誘
発するのに特徴を有する第１ｇ）微生物タイプ。

また瞠（８）ム、リゾゲネスム、ムＴＯＯ８１？　９８
に比較した場合にケンタラキー・ブルーグラス種子の発
芽を著しく誘発するのに特徴を有する第２の微生物タイ
１である。しかし、ツルガムの種子の場合には、ｌｌ生
物社第１の微生物タイプである。

本発明のこの観点における他の例において社、野菜ま九
は穀類の発芽種子の根の生長を高める方法を提供する◎
この方法は大豆、イネ、ビーン、小麦、トウモロコシ、
エントウ豆およびツルガムからなる群から選択する種子
を根の生長を高める分量のニンジンに対する病原性を有
しない選定された感染性−キエアドＨｒプラスミドー担
持微生物で処理する工程を含んでいる。かかる微生物社
第１の微生物タイプまたは第８の微生物タイプである。

しかし、ノルガム檀子の場合には、微生物は第１の微生
物タイプである。

本発明のこの観点における他の例では、野菜または穀類
の発芽種子の信条の伸長を増大する方法な得ることであ
る。この方法社ワタ、ビーフ、イネ、エントウ豆、小麦
、大麦、トウモロコシ、ライグラスおよびブロッコリー
からなる群から選択する種子を苗条の伸長を増大にする
分量のニンジンに対する病原性を有しない選定された感
染性−キュアトＨｒ　７ラスミドー担持微生物で処理す
ること管含み、かかる微生物は第１の微生物タイプま九
は第２の微生物タイプである。しかし、種子がトウモロ
コシまたはレイグラスの場合には微生物は第１の微生物
タイプである。

本発明の第８の観点においては、ケンタラキー・プルー
グラス種子の如きイネ科植物の発芽を誘発する方法を得
ることである。この方法は種子の発芽を誘発する分量の
ニンジンに対する病原性を有しない、かつ第３の微生物
タイプの選定さｎ＋感染性−キュアドＨｒグラスミドー
担持微生物で処理することを含む。

本発明の第４の観点においては植物の種子をまく時期に
おいて普通より低い土ＩＩ龜度で植物生長を促進する方
法を得ることである。この方法は大豆またはトウモロコ
シの如き種子をニンジンに対する病原性を有しない、か
つ第２の微生物タイプの選定さｎた感染性−キュアドＨ
ｒ７９スミドー担持微生物で処理する工程を含む〇 本発明の史に他の観点においては、マメ科植物における
結節形成、根楽団および苗条集団を増大にする接種剤を
得ることである０接檜剤は（御選択さｎ′ｆｉ−マメ科
植物の結節形成を誘発しうるリゾビウム属の微生物およ
びΦ）ニンジンに対する病原性を有しない、かつ第１の
微生物タイ１または第２の微生物タイプの選定さｎ＋感
染性−キュアドＨｒグラスミドー担持微生物を含有する
０リゾビウム微生物と１２スミドー担持微生物との相対
的割合は、植物の種子を結節形成を増大させる分量の接
種剤で処理することによりマメ科植物の結節形成を増大
にするようにする〇 ま九、本発明においては接種剤およびマメ科植物の種子
を含有する農業用組成物【得ることである０この場合、
接種剤のりゾビウム微生物が結節形成を誘発することが
できる。接種剤は結節形成を増大する分量で存在させる
〇 発明を実施する最適な例 上述するように本発明は選定され九感染性−キュアドＨ
ｒ　７ツスミドー担持置生物を含有する組成物および鉄
組成物を用いる方法に関する。この目的の九めに、感染
性−キュアドＨｒグラスミドー担持微生物はニンジンに
対する病原性を有していなく、この丸めに根の買主を誘
発する能力に欠けている。好ましい例においては、Ｗｌ
生物はム、リゾゲネスム、微生物である。理解しやすく
するためにＨｒグラスミドが実際１生ずるＡ、リゾゲネ
スム、微生物について説明することにする。

広い意味で云えば、感染性−キュアトＨｒ　７ラスζド
ー担持微生物は第１の微生物タイプまたは第２の微生物
タイプからなる。この「第１の微生物タイプ」とは、例
えばム、リゾゲネスＡ、ムＴＯＣ８１フ９９に比較した
場合に発芽トウモロコシ種子における苗条の長さを着し
く誘発することに特徴を有する微生物を意味する。この
タイプとしてはム、リゾゲネスム、ムＴｏＣ８１７９８
により例ボされるが、この点についてはこの微生物タイ
プの他の特性を定める後述する例によって説明する。上
述する「第２の微生物タイプ」とは１例えばム、リゾゲ
ネスム、ムＴｏｏ　８１７９８に比較した場合にケンタ
ラキー９プルーグラス種子の発芽を著しく増大にするこ
とに特徴を有する微生物を意味する０このタイプとして
はＡ、リゾゲネスム、ムＴＯＯａｌフ９９により例示さ
れるが、この点についてはこの微生物タイプの他の特性
を定める後述する例によって説明する。

本発明の目的のために、第１の微生物タイプの場合に、
表５に示すデータを得るのに用いると同じ実験をム、リ
ゾゲネスム、ムＴ００δｌフ９９種に比較することによ
り著しく高められた苗条長さの特性を示すのに用いる。

本発明の目的のために、第２の微生物タイプの場合に１
表１Ｏにボすデータを得るのに用いると同じ実験をム、
リゾゲネスム。

ムＴＯＣｔ　８１フタ８種に比較することによりケンタ
ラキー・プルーグラス種子の誘発を着しく高める特性を
示すのに用いる。

本発明において用いる好ましい橿（ｓｐｅｃｉｅｓ）は
ム、リゾゲネスム、ムＴｏｏ　８１　？　９８およびム
、リゾゲネスム、ムＴｏｏ　８１７９９である。こｎら
の好ましい種の培養はアメリカン・タイ１１１カルチヤ
ー・ｊｌｚクション（ムｍａｒｉｏａｎ　Ｔｙｐｅ　０
ｕｌｔｕｒｅ　Ｑｏｌｌｅｏｔｉｏｎ）に寄託し、寄託
番号はこれらの種にそｎ−ｔｎ付与さｎ九番号である０
いずｎの場合においても、寄託は８γＯ，Ｆ、Ｒ１１，
１４の下で許可を受ける以外は上記寄託瞼を発表するの
に特許が発行さｎるまで拘束さｎる０特許発行後、寄託
さした培養物の有用性における制＠Ｆｉ取除かｎる。寄
託物は寄託日から８０年間保管され、従って培養物は特
許の発行後一般に永久的に入手できるようにする〇ム、
リゾゲネスム、ムＴｏｏ　８１７９８およびム、リゾゲ
ネスム４Ａ’ｌ”００８１７９９はム、リゾゲネスム。

野生菌株を臭化エチジウムによりリン（Ｌｉｎ）および
カド（Ｈａｄｏ）氏、［Ｃａｎ、　ＪｏＭｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、Ｊ　ｇ　８　：１６！１４〜１５６１（１９７？
）に記載された手段によって処理することによって得た
。ム、リゾゲネスム、微生物社自然に感染さｎて生ずる
毛根症候＃　（ｎａｔｕｒＩｉｌｌｙ　１ｎｆ８０ｔｅ
ｄ　ｒｏｓｅ　ｅｘｈｉｂｉｔｊｎｇ　ｂａｉｒｙｒｏ
ａｔ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ）　カらｐｒ、ピータ−アーク
氏（Ｄｒ、　Ｐｅｚｅｒ　Ａｒｋ）　（カリフォルニア
大学）により元来分離さｎた土壌−抑制微生物である。

野生菌株は知らｎ、入手でき、上述するモーレ、ワーレ
ンおよびストロベル氏による文献「プラスミド」□の第
６１８頁に記載さｎている。野生菌株は毛根症候群とし
て知られているエンジンの根の発育を誘発し、エンジン
に対する病原性である。ニンジンディスク（ｒｏｏｔ　
ｄｉｓｋｓ）をその１００個の細胞のように少なく接種
する場合に、根の買主が２週間内に生ずる０この微生物
はマメ科およびキク科を含む多くの植物科における根の
買主を生じ、このために広い宿主域を有している◎この
病原性の結果として、農業用としての目的には野生菌株
を用いることは望ましくない。

好ましい種社約１００ミクロモル量の臭化エチジウムを
後述する養素を含有する寒天培養基に導入し、野生菌株
の細胞を寒天表面に置いて作った。

約６日後、聚落を上述したモーレ、ワーレンおよびスト
ロペル氏による文献の第６１８員に記載されているニン
ジンディスク分析手段によってニンジンディスクにおけ
る根の買主を誘発する能力を調べるために試験した。こ
ｎらの微生物は根形成を誘発できないことを確め、更に
根の伸長、苗条の伸長１＋は根の生長（０１生（ｌａｔ
ｅｒａｌｓ）の数、−′番長い側根の長さ、および／−
１友は不定根長さ）の如き生長促進作用、および種子発
芽（生長（ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ）　）を増大する能力に
ついて評価した。

このタイプの試験について＃ｉ後述する例において詳細
に説明する０この方法によりム、リゾゲネスム、ムＴｏ
ｏ　８１フ９８およびム、リゾゲネスム、ムＴ００８１
７９　Ｇ　ヲＩ！［１１１シ、　５［Ｌｌｏ　好ｔ　シ
イｍｈ。

特にニンジンにおける根の買主を誘発する能力を示さな
いようにニンジンに対する病原性を有しないことに特徴
を有する。

表１および２にはＨｚスラスミドが上述する生長促進活
性を制御することを示している。このプラスミド社ム、
リゾゲネスム、野生菌株の根の買主−感染性に関連する
０このために、　Ｈｒプラスミドは生長促進活性および
感染性を制御する０更に、　Ｈｒプラスずド社発３Ｆｉ
ｅ発を制御し、植物の種子をまく時期において普通より
低い土壌温度で植物生長を促進し、適当なりゾビウム微
生物と組合せる場合にマメ科植物の結節形成、根集団お
よび苗条集団を相剰的に高める作用をする０ Ｈｒ１ラスミドはム、トウメ７アシエンス（ム、　ｔｕ
ｍｅｆａｏｉ６ｎ８）　ｔたはム、ラジオバクター（ム
、　ｒａａｉｏｂａｃｔｅｒ）　ｃは実際上見出さｎな
かった０表１に示すように、ム、リゾゲネスム、野生菌
株でま九は好ましい種のいずｎかで処理した種子は未処
理種子（対照）と比較した場合に著しい生長作用を示す
のに対して、ム、トウメファシエンスまたはム、ラジオ
バクターで処理した種子は全体からみて著しい生長作用
は示していない０表２に示すように、　Ｈｒプラスミド
を含有するム、ラジオノ（フタ−相互接合個体（ｔｒａ
ｎ８００ｎｊｕｇＪＬｎｔ）で処理した種子は概して著
しい生長作用を現わすＯこのために。

これらのデータはＨｒプラス電ドが生長促進活性に関連
することを示しているＯ 上述する臭化エチジウム処理の結果、本発明において使
用する感染性−キエアドＨｒ　７ラスミドー担持微生物
の場合には、感染性遺伝子をＨｒプツスミドからキュア
した０ム、ラジオノ（フタ−相互接合個体は知らｎてい
る技術を用いる生体内交配により作り、その結果Ｈｒ１
ラスミドがこの微生物に生ずる０従って、　Ｈｒグラス
ミドはＡ、リゾゲネスム。

以外の微生物に生ずること、および生成する微生物が臭
化エチジウムで処理して感染性遺伝子をＨｒプラス電ド
からキエアでき、かつ上述する第１の微生物タイプまた
は第２の微生物タイプの感染性−キエアドＨｒプラスミ
ドを有する微生物を生成することができる０上述するよ
うに、こｎらの微生物タイ１社それぞｎム、リゾゲネス
ム、ムＴＯＯＪ１１７９８およびム、リゾゲネスＡ４ム
Ｔｏｏ　８１７９９で示すごとができ、後述する説明お
よび例により評価されるようにこｎらの種は感染性−キ
ュアドＨｒグラスミドの組成において互いに相違してい
る。そｎ故、本発明はム、リゾゲネスＡ、ムＴＯＯ８１
テ９８における感染性−キュアドＨｒ　７ラスミドまた
はム、リゾグネスム、ムＴＯＯ８ｔフ９９における感染
性−キュアドＨｒ　７ラス電ドに等価に作用する感染性
−キュアドＨｒプラスζドを含有する任意の微生物を包
含する。

臭化エチジウムも理の結果として、本発明による微生物
において見出さｎる感染性−キュアドＨｒ’プラスミド
の生長促進活性がム、リゾゲネスム１において見出さｒ
るような自然に生ずるＨｒ　７ラスミドの生長促進活性
と比較して著しく高いという予期しない事実を見出した
。後述する例に示すように、高められる・特有の生長作
用社トウモロコシ、エントウ豆または大豆の如き種類の
種子により変化し、ｔた微生物が第１のまたは第２の微
生物タイプによって変化する。小麦、特にネワナス１リ
ング小麦の如きある種の種子においては、顕著な増加が
観察さｒていない。しかし、後述する例に示すように顕
著に増大することが観察さｎるこｎらのある種子におい
て、ム、リゾゲネスム、で処理しない同じ種子（例にお
いて対照物）と比較して第１のおよび／ｌたは第８の微
生物タイ１は看しい生長作用を有する驚くべき事実を見
出し九〇秋まき小麦の如き種子のある他の種においては
、このタイプの著しい生長作用が観察できなかった〇ム
、リゾゲネスム、微生物１１１１当り次の養素：０．６
ｇのｕｍｐ０４　、　ｌ　０９のｗｙ＝　）−に％　２
０のＬ−グルタオン醗塩、０．２ｇのＮａ０ｊ　、　　
０．ｊｌ　９　（７）ＭｇＳＯ，および８．０ｇの酵母
工中スを含有する媒質上で容易に培養できる０これらの
養嵩を含有する寒天ル−トは、こＣらの含有する溶液の
ｐＨを７．０に調整し、１５ｇ／ｊの寒天をかかるＩ）
Ｈ−調整溶湾と混合し、生成混合物を加熱し、この熱液
体をペトリ皿に注いで作る。グレート上でま九は液体培
地で生長したム、リゾゲネスム、の細胞はグレートから
ペーストとして％または液体培地から遠心作用により採
集し、冷凍し、次いで凍結乾燥で乾燥する。凍結乾燥し
九細胞は新しく採果し九細胞と同じレベルに生物学的活
性と保有している。

本発明の農業用組成物の１例においては、微生物処理し
た種子としてエントウ豆、大豆、イネ科植４ＩＩｙｔ九
はイネの種子を用いた０特に、好ましいイネ科植物はケ
ンタッキー〇プルーグラス檜子（ボア　プラテンシｘ　
（ｐｏａ　ｐｒａｔｅｎｓｉｇ）　）である。

この例において、感染性−キュアドＨｒプラスミドー担
持微生物社第２の微生物タイプである。エントウ豆、大
豆またはイネの場合に、著しく高めらｎ′ｆｉｃ生長促
進作用はム、リゾゲネスム、野生菌株で処理した同じ種
子と比較して極めて着しかった。

これらの作用は開墾の場合に種子をレグメ（ｘａｇｕｍ
ｅ　）とする場合に農業的に有利である。好ましい種は
ム、リゾゲネスム４ＡＴＯＯ８１テ９９である。種子の
選択に影響さｎるが、生長促進作用は信条長さを増大に
し、および／ま九は側根の発育を増大にする。イネ科植
物、特にケンタラキー・プルーグラスの場合には、看し
い高めらｎた発芽がム、リゾゲネスム、野生菌株で処理
した同じ種子に比較して観察された。

本発明の組成物の他の例においては、微生物処理した種
子をエントウ豆、大豆、トウモロコシ、ビーンまたけイ
ネにし、感染性−キュアドＨｒグラスミドー担持微生物
を第１の微生物タイプにする。

特に、好ましい結果はピントビーンにおいて得られた。

いずれの場合においても、著しい優れた生長促進作用は
ム、リゾゲネスム、野生薗株で処理した同じ種子と比較
した場合に観察さｆ’Ｌ　′ｆｉ−ｏこｎらの作用Ｆｓ
１種子をレグメとする場合にＨＩＢする際・に農業的に
有利である。好ましい棟はム、リゾゲネスム、ムＴｏｏ
　８１７９８である０種子選択によって、この組成物の
発芽種子は根生長の増大（側生の数、最長側根の長さお
よび／ま九は不定根長さ）および／または苗条長さの増
大により特徴を有する０後で示す表から理解でき、しか
も上述するように著しく優れた作用はエントウ豆、大豆
またはイネを各微生物タイプ、特にそｎぞｎの好ましい
種で処理する場合に得らｎる〇 上述する農業用組成物および後述する方法において１選
択さｎ曳種子を農業的有効量の本発明の感染性−キエア
ドＨｒグラスミドー担持微生物で処理する０好ましくは
１種子の処理は種子を微生物の細胞で被覆することによ
って達成することができる。

ム、リゾゲネスム、の場合には、微生物を上述する培地
において常温付近で約８日間にわ九り生長させ１種子を
粘液生長（ｓｌｉｍｙ　ｇｒｏｗｔｈ）に生ずる微生物
と直接に接触させることによって種子に微生物を容易に
被覆することができる０或いは、を九凍結乾燥細胸を用
いることができ、この場合にはかかる細胞を水中で新し
い細胞生長におけると同様のコンシスチンシイ（ペース
ト）に還元しくｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｎｇ）、次い
でこのペーストを種子と接触することによって種子に微
生物を被覆することができる０凍結乾燥細胞は新しく採
集する細胞と同じレベルの生物学的活性を保有している
。これらの処理は後述する例に用いて説明する。

一般に、上述する被覆処理は微生物被覆種子を乾燥する
必要があることから満足ではない。なぜならば、イネは
還元さｒｔ、喪凍結乾燥細胞のペーストで処理するため
である。一般に、有利に用いらｎる被覆方法はカオリン
また社ベントナイトの如き粘着性促進添加剤を微生蕾の
凍結乾燥細胞に混合し１次いでこの混合物を種子に接触
させるようにする＠カオリンを添加剤として用いる場合
にｈ約８部のカオリンを約１部の細胞と混合するのが特
に適当である（重量□／重量）０或いは、また種子を初
めに粘着性促進添加剤と接触させ１次いで陣結乾燥細胞
と接触させる◎ 種子を細菌細胞と接触させて、または細胞および粘着性
促進添加剤の混合物と接触させることによって被覆する
場合には、樵子当りの細胞の数は種子の大きさ、および
細胞および添加剤の相対酌量の如きファクターにより影
譬さｎる０種子をム。

リゾゲネスム、細胞と単に接触する場合には、約１０’
〜１Ｇ　　個の細胞が大豆種子のような比較的大きい種
子に被覆さｎ、約ｌＯ〜ｌＯ個の細胞がイネ科植物の種
子のような比較的に小さい種子に被覆される。必要に応
じて、被覆処理において「カプタン（Ｏａｐｔａｎ）”
Ｉの如き殺菌剤を添加することができる。各微生物タイ
プは「カプタン」の如き殺菌剤と相溶することができる
ことを実験で確めた０他の相溶性添加謂を核種処理に用
いることができる。

本発明の第２の観点においては、農業用として用いるこ
とのできる方法を達成することができる０こｎらの方法
社種子を農業的有効量の第１のまたは第３の微生物タイ
プの感染性−キエアドＨｒプラスミドー担持微生物で処
理する工程を含んでいｂ本発明のこの観点においては、
種子の処理は種子を微生物の細胞と接触させることによ
って達成することが好ましい。この点において、本発明
における微生物を種子に被覆する手段を本発明における
農業的に用いる方法を達成するのに同様に用いることが
できる。

本発明の農業的に用いる方法の１例においては、本発明
における微生物の農業的有効量を、特に根の伸長を増大
にする量にすることにより発芽種子の根の伸長を増大に
することができる。４１子としてはエントウ豆、小麦、
大麦、トウモロコシ、ツルガム１＋は大豆を用いるｏし
かし１種子がツルガムの場合には、Ｗｌ、生物を第１の
微生物タイプにする０ネワナスプリング小麦およびサベ
ト大麦の種子の場合にはこｎら第１および第３の微生物
タイプを用いる。いずｎの場合においても、看しく増大
した根の伸長がム、リゾゲネスム、微生物でも理しない
同じ種子（例における対照種子）と比較して着しく増大
することが観察されたＯ増大した根の伸長の１つの利益
は植愉が土壌にすみやかに定着するのを促進することで
ある。

他の例においては１本発明における微生物の農業的有効
量を、特に根の生長を増大にする分量にすることにより
発芽する種子の根の生長を増大にすることである。着し
い根の生長は側根の数の増加、最長側根の長さの増大、
および／または不定根長さの増大することに特徴を有す
る。種子としては１例えば大豆、イネ、レーン、エント
ウ豆、小麦ｔ＋はツルガムとする。ピントビーンおよび
ネワナス１リング小麦には１例えば第１および第２の微
生物タイプを用いる。しかし、ツルガム種子の場合には
微生物を第１微生物タイグにする。

いずｎの場合においても、看しく優ｎた根の生長はム、
リゾゲネスム、微生物で処理しない同じ種子（対照種子
）と比較して観察さｎた。種子を大豆ま九はエントウ豆
とする場合には、第２の微生物タイプが好ましく１種子
をピントビーンまたはトウモロコシとする場合には第・
ｌの微生物タイプが好ましい０優ｒｔ九根の生長は植物
が土壌にすみやかに定着するために農業的に有利である
〇更に、他の例においては本発明における微生物の農業
的有効量を、特に苗条の伸長を増大にする分量にするこ
とにより発芽する種子のＩＱの伸長を高めることである
。種子としては、例えばワタ、ビーン、イネ、エントウ
豆、小麦、大麦、トウモロコシ、レイグラスまたはブロ
ッコリーである０しかし１種子をトウモロコシまたはラ
イムギとする場合には微生物を第１の微生物タイプにす
る。

ピントビーン、ネワナスグリング小麦、サベト大麦およ
び秋まきライムギの場合には第１および第２の微生物タ
イプにする。い′ずｎの場合においても、看しく優ｎた
苗条の伸長がム、リゾゲネスム。

微生物で処理しない同じ種子（対照種子）と比較して観
察さした。イネの種子の場合には、第１の微生物タイプ
が好ましく、大麦の種子の場合には第２の微生物タイプ
が好ましい０優−ｒＬ九菌条の伸長は１例えばビーンズ
の場合には苗条およびトップｘ　（ｔｏｐｓ）がすみや
かに発達し、開花（ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ）を早めるため
に収穫時期を短縮できる。また、苗条の伸長は、苗条を
非常にすみやかに水レベル上に伸ばし、このために腐敗
を減少するからイネの場合に有利である〇 本発明の第８の観点においては、１例としてケンタラキ
ー・プルーグラスを用いるイネ科植物の種子の発芽を誘
発する方法を達成することである０この方法＆：祉種子
を農業的有効量、特に発芽誘発量の上述する第２の微生
物タイプで処理することを含む。著しく優ｒＬ九発芽を
ム・・、リゾゲネスＡ４野生菌株で処理した種子と比較
して観察した０好ましい種はム、リゾゲネスＡ、ムＴｏ
ｏ　８１７９９である。

種子の処理は種子に微生物を被覆することによって達成
するのが好ましい０この場合において、本発明において
微生物を種子に被覆する上述する手段を用いることがで
きる０ 本発明の第４の観点においては、植物の種子をまく時期
における普通の温度より低い土壌温度で植物の生長を促
進する方法を達成することであるＯこの方法は１例えば
約ｇ　１．ｌ’ｃ　（７０’Ｆ　）より、むしろ約１４
．４℃（５８″Ｆ）の±ｗ＆温度で早まきすることので
きる利益があるＯこの方法はトウモロコシまたは大豆種
子を農業的有効量、特に植物生長促進量の第２の微生物
タイプの微生物で処理することを包含する。着しく優ｎ
−＋根および苗条の伸長をム、リゾゲネスム、微生物で
処理しない同じ種子と比較して観察した。ｆた。看しい
伸長の増大が野生菌株と比較して観察さｒた。好ましい
種はム、リゾゲネスム、ムＴｏｏ　ｌ　１７９９であり
、処理は種子を微生物で被覆することにより好ましく達
成することができる。この場合１本発明により微生物を
種子に被覆する上述する手段を用いることができる〇 処理した種子＃ｉまく前に常温付近で少なくともト４日
間にわたり潜伏することができる０ま九、検子ｒｔ微生
物で処理する場合には常１付近で適当に行うことができ
る。

凪に、本発明の他の観点においては、マメ科植物におけ
る結節形成、根系団および苗条集団についての接種剤を
得ることである。ｗＳ剤は（〜選択さｎたマメ科植物に
おける結節形成を誘発することができるリゾビウム属の
微生物、および（ｂ）第１また社第２の微生物タイ１の
感染性−キュアドＨｒグラスオドー担持？Ｉｋ生物を含
有する。着しく優ｎた結節形成１，１！集団および苗条
集団はＲ，ジャポ；キウム（Ｒ，ＪａｐＯｎ土ｏｕｍ　
）のみで処理した場合と比較して野生菌株により観察で
き、このために第１および第２の微生物、タイ１に対し
て達成できること空わかる◎接種剤におけるリゾビウム
微生物と第１または第８の微生物タイプとの相対的な割
合は。

結節形成【増大させる分量の接種剤で植物の種子を処理
することによってマメ科植物の結節形成を増大にするよ
うな割合にするＯａ！種剤におけるリゾビウム微生物お
よび第１または第２の微生物タイプの全量の少なくとも
約１％をり、ゾビウム微生物にするのが適当である。２
種類の微生物を殆んど等量で接種剤に存在するのが有利
である。マメ科植物を大豆植物とする場合には、リゾビ
ウム微生物をリゾビウムジャボニキウムにする。

また、本発明においては、かかる接種剤のりゾビクム微
生物が結節形成を誘発することのできる上記接種剤およ
びマメ科植物の種子を含む農業用組成物を得ることがで
きる。種子は農業的に有効な、特に結節形成を増大にす
る分量の接種剤で処理する。種子の処理は１種子を接種
剤の細胞で被覆することによって達成するのが好ましい
。上述する任意の被覆手段を用いることができる。しか
し、これらの被覆手段は１種子’ｔ−Ｈｒ７ラスミドー
担持微生物の細胞と接触させる前に、リゾビウム微生ｌ
＃Ｉｔ−感染性−キュアトＨｒプラスミド−担持微生物
と混合することにおいて変性することができる。被覆手
段の１例においては、種子をリゾビウム微生物およびＨ
ｒ　７ラスミドー担持微生物の混合物の細胞を含有する
微粉砕したピー）　（ｉ）ｅａｔ）と接触することから
なる。この方法鉱上述する＋段と任意に置き替えて用い
ることができる。各種子に被覆する細胞の数は上述する
７アクタ゛−に影譬さｎる〇 次に１本発明を例について説明するが１本発明の範８け
これにより制御限されるものではない。

例　　ｌ ｌＯ〜ｉＢ１ｇのエントウ豆の種子を５優次亜埴素酸ナ
トリウム中で５分間前処理し１次いでム、リゾゲネスム
、微生物について上述した被覆手段によってム、リゾゲ
ネスムロ野生菌株の１ＩＩＩ胞で被覆した新しい細胞ｔ
たは還元した凍結乾燥細胞を用いた。

被覆細胞を、水がもはや鋼製背色アンカ一種子発芽プロ
ッタの表面にし九九らなくなるまで十分に本で湿らせ九
かかるプロッタにただちに置き、こｎを気密グラスチッ
ク製ボックス（１５ｃｌｌＩＸ１５Ｃ寓×８（ｍ）内に
入ｎ九。このボックスを７日間にわたり２５℃で潜伏さ
せ１次いで発芽種子の応答を調べた。

次いで、この処理はＡ、リゾゲネスＡ４ムＴＯＯ８１７
９９の細胸、ム、トゥメ７アシェンスの細胞およびム、
ラジオバクターあ細胞を野生菌株の細胞の代りに用いて
行った。丈に、種子を任意の微生物で処理しない対照試
験を行った〇 各試験において１０−１５個の種子て、８回試験し、各
試験結果を平均値で表わした。こｎらの結果を表１ｈ−
示す◇ 例　　２ 野生菌株の細胞を用いるよりむしろＨｒプラスミドを含
有するム、ラジオバクター相互接合個体の細胞を用いて
Ｍｌの処理を行い、ま念対照試験を行った。こｎらの試
験結果は１Ｏ−１５Ｈの種子を用いて８回繰返し行って
評価し、こｒしらの結果を表８〜９および１１〜１４に
示す。

例　　８ 本例においてはム、リゾゲネスムロ野生菌株の細胞、ム
、リゾゲネスＡ４ムＴＯＯ８１フ９８の細胞、Ａ、リゾ
ゲネスム、　ｕａａ　ｓ　ｉ　？　ｅ　ｅ　ノｍ胞ｅｍ
イ、かつエントウ豆の代りに大豆種子を用いる以外は例
１の処理を行い、また対照試験を行い、これらの試験結
果を表８に示すＯｆ走、表には側生の数および最長側根
の長さを示す。

潜伏期間を７日の代りに８日にする以外は上述する例１
の処理に従って行い、根の長さについての試験結果を表
８に示す。

表　　１ 秦　差はｌ優しベルで有意である。

同じ欄に・示す数値社共通する統計的有意なグループで
ある。

表　　２ ※　同じ欄に示す数値は共通する統計的有意なグルー１
である◎ １　差はｌＯ−レベルで有意である。

婁　差は５慢レベルで有意である。

例　　番 本例においてはサベト大麦種子を大豆と置き換え、潜伏
期間を７日の代りに６日にする以外は上記例８の処理を
繰返し行い、この結果を表４に示すＯ 例　　５ 本例においてはトウモロコシ種子を大麦と置き換え、潜
伏期間を６日の代りに６日にする以外は上記何番の処理
を繰返し行った。この結果を表６に示す。

例　　６ 本例においてはイネ種子を大麦と置き換え、潜伏期間を
６日の代りに８日にする以外は上記何重を繰返し行い、
結果を表６に示す。

例　　テ ネワナスプリング小麦種子を大麦と置き換え。

潜伏期間を６日の代りに８日にする以外は側番を繰返し
行い、この結果を表７にボす。

例　　８ 本例においては、秋まきライムギ檀子を大麦と筐き換え
、＃伏期間を６日の代りに４日にする以外は何番の処理
を繰返し行い、仁の結果を表８に示す。

例　　９ 本例においては、ツルガム種子を大麦と置き換え、潜伏
期間を５日の代りに６日にする以外は例４の処理を繰返
し行い、その結果を表９１１：ボす。

表　　８ ※　同じ欄に示す数値は共通する統計的有意なグループ
である。

１８日後の結果。差は５ｓレベルで有意である〇露　７
日後の結果。差はｌチレペルで有意である。

表　　４ ※　同じ欄に示す数値は共通する統計的有意なグループ
である。

１　Ｍはｌ−レベルで有意である。

ｓ　差は５４レベルで有意である。

表　　８ ※　同じ欄に示す数値社共通する統計的有意なグループ
である。

Ｉ　　ＡＴＯＯ８１り９８は対照試験と比較してｌＯチ
レベルで統計的に優ｎていた。

例１Ｏ 本例においてはケンタラキー・プルーグラス種子を大麦
と置き換え、この種子を次亜塩素酸ナトリウムで前処理
せず、潜伏期間を５日の代りに４日にし、およびボック
ス当り１０〜１５＠ｆ）ｇ子の代りに１００個の種子を
用いる以外は例会の処理を繰返し行ったｏ　Ａ、リゾゲ
ネスム、微生物で処理した各種子を１０〜１０個の細菌
細胞で液種した０表１０に示す結果を得九。各数値は各
１００個の種子で８回繰返し行った試験の平均で示した
０表から明らかなように、ムＴｏｏ　８１７９９微生物
はムＴｏｏ　８１７９８微生物より発芽誘発が着しく大
きく、かつ野生１株けムＴｏｏ　８１７９８　ＩＩ生物
により生ずる発芽誘発にほぼ等しいことがわかるＯ １九１表からケンタラキー−プルーグラス種子の腐敗が
本発明における感染性−キュアドＨｒ　７ラスミドー担
持微生物でおよびム、リゾグネスム、野生菌株で処理し
九種子の場合に看しく減少することがわかる。一般に、
腐敗は殺菌剤を用いて防止する。

例１１ 本例においては、ワタ種子を大麦と置き換えおよび潜伏
期間を５日の代りに４日にする以外は例会の処理を繰返
し行い１表１１にボす結果を得た例１２ 本例においては、潜伏期間を噛日の代りに７日毫　差は
ｌ優しベルで有意である。

同じ欄に示す数値は共通する統計的有意なグループであ
る。

表１２ 秦　差は５−レベルで有意である。

同じ欄に示す数値は共通Ｔる統計的有義なグループであ
る。

例１８ 本例においては、とントビーン種子を大麦と置き換え、
潜伏期間な６日の代りに７日にする以外は何番の処理を
繰返し行い、その結果を表１８に示す。

例１４ 本例においては、ブロッコリ一種子を大麦と置き換え、
ｌ伏期間を６日の代りに８日にする以外は例４の処理を
繰返し行い、その結果を表１４に示す。

例１５ 大豆種子を例１に記載するようにム、リゾゲネスム、野
生菌株の細胞で処理した。各処理した種子をパーライト
の７．６　ｇ　ｅｌｌＸ　１０，１６　ｅｌｌＸ　５，
０８　Ｃ１ｍ（８’Ｘ　４’Ｘ　２’　）カラムの表面
に置いた。種子を月、水および金曜日ごとに６００−の
中間強さのボーク２ン）’溶液（Ｈｏａｇｌａｎｄｇ　
５ｏｌｕｔｉｏｎ）（ホークランドおよびアルノン、ユ
ニバーシテイ　オプカリフォルニア、アグリカルチエア
ル　イクペリメント　ステーション　サーキユラＡａ４
？。

１ｏｓｓ）−全窒素源で水まきし九ｏ８１子発芽梶Ｒ，
ジャポエキウム懸濁物を各発芽種子の近くのパーライト
表面に注いだ０種子当りのＲ，ジャポニキウムの全数祉
約１０８個であった。植物をｓ８〜２５℃に保ち、自然
光を温室条件下で用い念。６週間後、植物を取除き、表
１５に示す結果を得九〇各数値は１０本の植物について
の平均で示しているＯ 対照試験を行うために、この処理をム、リゾゲネスム、
野生菌株で処理しない大豆種子について行つ九。また、
この結果は表１５に１０本の植物についての平均で示し
ている。

表１８ ※　差は５−レベルで有意である〇 同じ欄に示１＊値は共通する統計的有意なグループであ
る０ ※　差は５ルベルで有意型である。同じ欄にボす数値は
共通する統計的有意なグループであるＯ ネワナス１リング小麦および大麦（ついての試験結果の
場合には、７日の潜伏期間後に観察した場合に上記６表
に示す有意差は表わ【なかった。

しかし、種子の種類について上記６表に示す有意差の存
在は重要であることが予想さＣる。秋まき小麦種子を大
麦種子で置き換え、潜伏期間を７日にする以外は例４の
処理を行った場合には、有意差が観察できなかった。

適用性 本発明は農業に有利であり、かつ種子をレグメとする場
合には開墾に有利である種子の発芽において優ｒｔた生
長促進作用を得ることができる０更に、本発明は発芽誘
発により芝地（ｌａｗｎｓ）および芝の植え付け（ｓｏ
ｄｓ）を達成することができ、かつレグメ（１ｅｇｕｍ
ａｓ）における窒素固定、根集団、苗条集団および結節
集団を増大にすることができｂ第１頁の続き ０発　明　者　ジエス・エム・ジャイネスアメリカ合衆
国モンタナ州５９７１ ７ボゼマン・シュリア・マーチ ン・ドライブ１１１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　ニンジンに対する病原性を有しない、かつ（〜ム、
   リゾゲネスＡ４ムＴｏｏ　８１７９９に比較し九場合に
   発芽トウモロコシ種子の苗条長さを着しく高めるように
   誘発することに特徴を有する微生物タイプおよび（ｂ）
   Ａ、リゾゲネスＡ。 ムＴｏｏ　８１７９８に比較した場合にケンタラキー・
   プルーグラス種子の発芽誘発を著しく高めることに特徴
   を有する微生物タイプからなる群から選定し九感染性−
   キュアドＨｒプラスミド−担持倣生惣を含むことを特徴
   とする感染性−キエアドＨｒ１−）スミドー担持倣生物
   含有組成物。 亀　前記微生物をＡ、リゾゲネスム、とじた特許請求の
   範囲第１項記載の感染性−キュアドＨｒプラスミドー担
   持倣生物含有組成物。 ＆　前記微生物タイプをム、リゾゲネスＡ、ムＴｏ。 δ１７９８とした特許請求の範囲第２項記載の感染性−
   キュアドＨｒ　７ラスきドー担持微生物含有組成物。 表　前記微生物タイプをム、リゾゲネスＡ１ムＴｏｃ８
   １７９９とした特許請求の範囲第２項記載の感染性−キ
   ュアドＨｒプラスミドー担持倣生物含有組成物。 瓢　農業的有効量の前記感染性−キュアドＨｒグラスン
   ド担持微生物で処理した野菜または穀類の種子を含む特
   許請求の範囲第１項記載の感染性−キュアドＨｒプラス
   ミドー担特徴生物含有組成物。 ａ　前記種子を前記感染性−キエアドｉｆｒ　７ラスオ
   ド組成物で被覆した特許請求の範囲第６項記載の感染性
   −キエアドＨｒ　７ラスミド一担持微生物含有組成物◎ Ｉ　前記種子を前記微生物の凍結乾燥細胞および粘着性
   促進剤の混合物で処理した特許請求の範囲第６項記載の
   感染性−キエアドＨｒプラスミドー担特徴生物含有組成
   物。 ＆　前記種子をエントウ豆、大豆、イネ、ケンタラキー
   ・プルーグラス、トウモロコシ、ピントビーン、小麦、
   大麦、ンルガム、ライグラス、ワタ、グａツコリー、ア
   ルファル７ムウシノゲグサグラス、オートムギ、ヒマワ
   リ。 キャベツ、トマト、スイカ、レタスおよびグリンピース
   からなる群から選択した特許請求の範囲第す項記載の感
   染性−キュアドＨｒ　７ラスずドー担持微生−含有組成
   物。 １　ニンジンに対する病原性を有しない、かつ（〜ム、
   リゾグネスム６ムＴＯＯ３１７９９に比較した場合に発
   芽トウモロコシ種子の醒条長さを著しく高めるように誘
   発することに特徴を有する第１の微生物タイプおよび（
   ｂ）ム、リゾゲネスム、ムＴｏ０８１７９８に比較した
   場合にケンタラキー・プルーグラス種子の発芽誘発を着
   しく高めることに特徴を有する＃！２の微生物タイ１か
   らなる群から選定した感染性−キエアドＨｒプラスミド
   ー担持嶺生物を含む、発芽種子の根および苗条の伸長を
   高め、種子の発芽を早め、普通必要とさｎるより低い±
   ＩＫ一度で植物生長を促進し％または結節形成、根集団
   および苗条集団を高める農業用組成物Ｏ１ａ　　前記微
   生物をム、リゾゲネスム、とじた特許請求の範囲第９項
   記載の農業用組成物。 ＩＬ　　前記第１の微生物タイプをム、リゾゲネスム、
   ムＴ００８１７９８とした特許請求の範囲第１θ項記載
   の農業用組成物Ｏ １龜　前記第２の微生物タイプをム、リゾゲネスム、ム
   ＴＯＧ　８１７９９とし九特許請求の範囲第１Ｏ項記載
   の農業用組成物。 ｌ＆　ニンジンに対する病原性な有しない、かつム、リ
   ゾゲネスム、ムＴｏｏ　８１７９８に比較した場合にケ
   ンタラキー・プルーグラス種子の発芽誘発を著しく高め
   る特徴を有する前記感染性−キュアドＨｒグツス５ドー
   担持倣生物で処理し次エントウ豆、大豆、イネ科植物お
   よびイネからなる群から選択した種子を含む特許請求の
   範囲第９項記載の農業用組成物０１表　前記微生物をム
   、リゾゲネスム、とじた特許請求の範囲第１８項記載の
   農業用組成物。 １１　１［微生物をム、リゾゲネスム、ムＴＯＯ８１’
   １９９とした特許請求の範囲第１８項記載の農業用組成
   物。 １区　エンジンに対する病原性を有しない、かつム、リ
   ゾゲネスム、ムＴ（３０８１７９９に比較し九場合に発
   芽トウモロコシ種子の苗条長さを著しく高める特徴を有
   する前記感染性−Ｉ？ｘアトＨｒプラスζドー担持担持
   物生物理したエントウ豆、大豆、トウモロコシ、ビーン
   およびイネからなる群から選択し九種子を含む特許請求
   の範囲第９項記載の農業用組成物。 Ｉｔ　　ｆＩａ記微生物をム、リゾゲネスム、とじた特
   許請求の範囲第１６項記載の農業用組成物Ｏ１１＃記倣
   生物をム、リゾゲネスＡ４ムＴｏｏ　２１１〕９８とし
   た特許請求の範囲第１７項記載の農業用組成物。 １１Ｌ　　エントウ豆、小麦、大麦、トウモロコシ。 ノルガムおよび大豆からなる群から選択した種子を根の
   伸長を高める量のニンジンに対する病原性を有しない、
   かつ（〜ム、リゾゲネスム、ムＴｏｏ　８１　？　９９
   に比較した場合に発芽トウモロコシ種子の信条長さｔ’
   着しく高めるように誘発することに特徴を有する第１の
   微生物タイプおよびΦ）ム、リゾゲネスム、ムＴ００８
   １７９８に比較した場合にケンタラキー・プルーグラス
   種子の発芽誘発を著しく高めることに特徴を有する第３
   の微生物タイプからなる群から選定した感染性−キュア
   ドＨｒプラスミドー担持砿生物で処理し、前記種子をツ
   ルガムとする場合に前記微生物を前記第１の微生物タイ
   プとすることを特徴とする発芽種子の根の伸長を高める
   方法。 Ｓａ　　前記微生物をム、リゾゲネスム、とじた特許請
   求の範囲第１９項記載の発芽種子の根の伸長を高める方
   法０ れ　前記第１の微生物タイプをム、リゾゲネスム、ムチ
   ００８１７９８とし九特許請求のｌｌＩ＃Ｍ第ｇｏ項記
   鎮の発芽種子の根の伸長を高める方法Ｏ Ｓｌ　前記第２の微生物タイプをＡ、リゾゲネスム、ム
   ＴＯＯ８１？　９９とした特許請求の範囲第８０項記載
   の発芽種子＋７）根の伸義を高める方法０ １＆　前記種子をエントウ豆、ネワナスプリング小麦、
   サベト大麦、ワタ、ツルガムおよび大豆からなる群から
   選択し九特許請求の範囲第１９項記載の発芽種子の根の
   伸長を高める方法。 ｓ４　　大豆、イネ、ビーン、エントウ豆、小麦。 トウモロコシおよびツルガムからなる群から選択し九種
   子を根の生長を高める量のニンジンに対する病原性を有
   しない、かつ（へム、リゾゲネスム、ムＴＯＯＪｌ　ｌ
   　？　９９に比較した場合に発芽トウモロコシ種子の苗
   条長さを著しく高めるように誘発することに特徴を有す
   る第１の微生物タイツおよび（ｂ）ム、リゾゲネスＡ。 ム’ｌ’ｏｏ　８１１９８に比較した場合にケンタラキ
   ー−プルーグラス種子の発芽誘発を看しく高めるごとに
   特徴を有する第２の微生物タイプからなる群から選定し
   た感染性−キュアドＨｒプラスミドー担持微生物で処理
   し、前記種子をノルガムとする場合に、前記微生物を前
   記第１の微生物タイプとすることを特徴とする発芽種子
   の根の生長を高める方法。 ■４　　前記微生物をム、リゾゲネスム、とする特許請
   求の範囲第ｇ４項記載の発芽種子の根の生長を高める方
   法。 Ｓａ　　前記微生物を前記第３の微生物タイプとＵ前記
   種子を大豆またはエントウ豆とする特許請求の範囲第２
   ４項記載の発芽種子の根の生長を高める方法。 Ｓｔ　　前記微生物を前記第１の微生物タイプとＵ前記
   種子をピントビーンｔたはトウモロコシとする特許請求
   の範囲第１４項記載の発芽種子の根の生長を高める方法
   ◎ Ｓｌ　　前記第１の微生物タイプをム、リゾゲネスム、
   ムＴｏｏ　８１７９８とする特許請求の範匣第８５項記
   載の発芽種子の根の生長を高める方法。 Ｓｔ　　前記第２の微生物タイ１をム、リゾゲネスム、
   ムＴｏｏ　８１フ９９とする特許請求の範囲第ａｍ項記
   載の発芽種子の根の生長を高める方法Ｏ Ｓａ　　前記種子を大豆、イネ、ピントビーン、エント
   ウ豆、ネワナスプリング小麦、トウモロコシおよびツル
   ガムからなる群から選択する特Ｉ／！ｐ請求の範囲第２
   ４項記載の発芽種子の根の生長を高める方法。 ａＬ　　ワタ、ビーン、イネ、エントウ豆、小麦、大麦
   、トウモロコシ、ライ・グラスおよびブロッコリーから
   なる群から選択した種子を苗条の伸長を高める量のニン
   ジンに対する病原性を有しない、かつ（匈ム、リゾゲネ
   スム、五Ｔ００８１７９９に比較した場合に発芽トウモ
   ロコシ種子の苗条長さを著しく高めるように誘発するこ
   とに特徴を有する第１の微生物タイプおよび中）ム、リ
   ゾゲネスム、ムＴＯＯ８１フ９８に比較し九場合にケン
   タラキー拳ブルーグラス種子の発芽誘発を著しく高める
   ことに特徴を有する第２の微生物タイプからなる群から
   選定した感染性−キエアドＨｒプラスミドー担持微生物
   で処理し、前記種子なトウモロコシまた蝶秋まきライム
   ギとする場合に、前記微生物を前記第１の微生物タイプ
   とすることを特徴とする発芽種子の苗条の伸長を高める
   方法〇８龜　前記微生物をム、リゾゲネスム１とする特
   許請求の範囲第８１項記載の発芽種子の苗条の伸長を高
   める方法Ｏ ８＆　前記微生物を前記第１？微生物タイプとし。 前記種子を特徴とする特許請求の範囲第Ｊ５１項記載の
   発芽種子の苗条の伸長を高める方法。 畠４　前記微生物を前記第８の微生物タイプとし、前記
   種子をサベト大麦とする特許請求の範囲第８１項記載の
   発芽種子の苗条の伸長を高める方法。 ＄１　前記第１の微生物タイプをム、リゾゲネスム、ム
   ＴＯＯ８１フ９８とする特許請求の範囲第８ｊ！項記載
   の発芽種子の苗条の伸長を高める・　　方法。 ■　前記第２の微生物タイプをム、リゾゲネスＡ、ＡＴ
   ＯＯＢ１１９ｆｌとＴる特＃！Ｆ＃ｗ求のｍｓ第８３項
   記載の発芽種子の苗条の伸長を高める方法Ｏ ８′ｔ、＃紀檀子をピントビーン、イネ、エントウ豆、
   ネヮナスプリング小麦、サベト大麦、トウモロコシ、秋
   ｔ＠ライムギおよびブロッコリーからなる群から選択す
   る特許請求の範囲第８１項記載の発芽種子の苗条の伸長
   を高める方法。　　　　′ ８Ｉ！Ｌ　　イネ科植物種子を発芽誘発量のニンジンに
   対する病原性を有しない、かっＡ、リゾグネスム、ムＴ
   ＯＯ８１７９８に比較した場合にケンタラキー・プルー
   グラス種子の発芽誘発を著しく高める特徴を有する感染
   性−キエアドＨｒ７ラス電ドー担持微生物でも理するこ
   とｔＷ徽とするイネ科植物種子の発芽１を誘発する方法
   。 ａ１ｇＢ記微生物をム、リゾゲネスＡ、とすル待胛縛求
   の範囲第８８項記載のイネ科植物種子の発芽を誘発する
   方法。 ４ＣＬｎ記ＷＩｋ生ｆｊｌＪヲ１．’）　ソｌ’＊スＡ
   、　ＡＴＯＯ８１７９９とする特許請求の範囲第８９項
   記載のイネ科植物種子の発芽を誘発する方法。 峠　前記種子をケンタラキー拳プルーグラス種子とする
   特許請求の範囲１１４０項記載のイネ科植物種子の発芽
   を誘発する方法。 ４１　　植物の種子をまく場合に通常必要とされるより
   低い土１ｓｍ度で植物生長を促進する方法において、大
   豆またはトウモロコシからなる一群から選択した種子を
   ニンジンに対する病原性を有しない、かつム、リゾゲネ
   スム、ムＴＯ０８１７９８に比較した場合にケンタラキ
   ー・プルーグラス種子の発芽誘発を著しく高める特＃ｋ
   ｔ−有する感染性−命エアトｉｌｒグッスミドー担持嶽
   ゛生物で処理することを特徴とする低い土＊＠度で植物
   生長を促進する方法〇軸　処理した種子を童欠前に常温
   付近で少なくとも約１〜１日間にわ九りかかる種子を潜
   伏する工程を含む特許請求の範囲第４２項記載の低い土
   壌１度で植物生長を促進する方法。゛４４＃記微生物な
   ム、リゾゲネスム、とする特許請求の範１！ｆｉｌ１４
   ８項記載の低い土壌温度で植物生長を促進する方法。 ４Ｌ　　前記微生物なム、リゾゲネスム、ムＴｏｏ　８
   １７９９とＴ６特許請求の１ｉｉｓ第４４項記載の低い
   土１１Ｍ度で植物生長を促進する方法。 Ａｌｌ　　（ａ）選択さｎ九ｉメ科懺物の結節形成を誘
   発することのできるリゾビウム属の微生物、およびニン
   ジンに対する病原性を有しない、か”）　（１）ム、リ
   ゾゲネスム、ムＴｏ０８１７９９に、比較した場合に発
   芽トウモロコシ種子の苗条長さを著しく高めるよつに誘
   発することに特徴を有する第１の微生物タイプおよび（
   １）ム、リゾゲネスＡ４ムＴｏｏ　８１フ９８に比較し
   た場合にケンタラキー−プルーグラス種子の発芽誘発を
   著しく高めることに特徴を有する第８の微生物タイプか
   、らなる群から選定した感染性−キエアドＨｒｆツスξ
   ドー担持微生物を含み；前記リゾビウム微生物および前
   記プラスミド−担持微生物の相対的割合を、結節形成【
   高め□る量でかかる植物の種子を処理することによって
   植物の結節形成を高めるような割合にしたことを特徴と
   するマメ科植物の結節形成、根集団および苗条集団を高
   める接種剤０番ｉ　＃記植物を大豆植物とし、リゾビウ
   ム微生物をリゾビウムジャポニキウムとし次特許請求の
   範囲第４６項記載のマメ科植物の結節形成、根集団およ
   び苗条集団を高める！！！樵剤。 ４＆　前記プラスミド−担持微生物をム、リゾゲネスム
   番とした特許請求の範囲第４６項記載のマメ科植物の結
   節形成、根集団および苗条集団を高める接種剤。 ４東　前記第１の微生物タイ１をム、リゾゲネスム、ム
   ＴＯＯ８１７９８とした特許請求の範囲第４８項記載の
   マメ科植物の結節形成、根集団および苗条集団を高める
   接種剤Ｏ ｓａ＃記第２の微生物タイ１ｔ−ム、リゾゲネスム。 ムＴＯＯ８１？　９９とし九特許請求の範囲第４８項記
   載のマメ科植物の結節形成、根集団および苗条集団を高
   めるａ！櫨剤Ｏ ＩＬ　　（Ｉ！ＱＪ！択されたマメ科植物の結節形成を
   誘発するりゾビウム属の微生物、および（ｂ）　ニンジ
   ンに対する病原性を有しない、かつ（１）ム、リゾゲネ
   スム、ムＴＯＯ８１７９９に比較した場合に発芽トウモ
   ロコシ種子の苗条長さを着しく高めるように誘発するこ
   とに特徴を有する第１の微生物タイ１シよび（ｓ）ｊリ
   ゾゲネスム。 ＡＴｏｏ　８１７９８に比較した場合にケンタラキー拳
   プルーグラス種子の発芽誘発を着しく高めることに特徴
   を有する第２の微生物タイプからなる群から選定した感
   染性−キュアドＨｒ１ツスミドー担持微生物を含み、前
   記リゾビウム微生物および前記グラスミド−担持微生物
   の相対的割合を植物の結節形成を高めるような割合で含
   有し、前記リゾビウム微生物が結節形成を誘発しつる結
   節形成、根系団および苗条集団を高める接種剤で処理し
   た適当なマメ科植物の種子を含む農業用組成物◎ｉ亀　
   前記プラスミド−担持微生物をム、リゾゲネスム、とじ
   た＃＃請求の範１！ｌｊｆ！５１項記載の農業用組成物
   Ｏ ｉ＆　前記第１の微生物タイプをム、リゾゲネスＡ、ム
   Ｔｏｏ　８１　？　９８とした特許請求の範囲第５８項
   記載の農業用組成物。 ｉ４　　前記第２の微生物タイプをム、リゾゲネスＡ４
   ムＴｏｏ　８１７９９とし九特許請求の範囲第５２項記
   載の農業用組成物。 墨１　前記種子を前記微生物で被覆した特許請求の範囲
   第１１ｔたは１８項記載の１＆栗用組成物Ｏ ｉ＆　前記種子を前記微生物で被覆する特許請求の範囲
   第１９項記載の発芽種子の根の伸長を高める方法。　　
   　　　゛ ＳＶ　　＠記種子を前記微生物で被覆する特許請求の範
   囲第８４項記載の発芽種子の根の生長を高める方法。 ５ｌｌＬｆｌａ記種子を前記微生物で被覆する特許請求
   の範囲第δ１項記載の発芽種子の苗条の伸長を高める方
   法。 ｉｔ　　前記種子を前記微生物で被覆する特許請求の範
   囲第８８項記載のイネ科植物種子の発芽を誘発する方法
   。 ６ａ　　前記種子を前記微生物で被覆する特許請求の範
   囲第４ｓ項記載の低い±Ｉ１１温度で植物生長を促進す
   る方法。 ６Ｌ　　前記種子を前記接種剤で被覆した特＃？！請求
   の範囲第５１項記載の農業用組成物。