JPS58219198A - 新規なオリゴヌクレオチド、その製造方法およびインタ−フエロン作用の媒介物質としての用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 禾発明は、新規なオリゴヌクレオチド、その製造方法及
びこのオリゴヌクレオチドの、インターフェロン作用の
媒介物質としての適用に係る。

インターフェロンが、特に抗ウィルス作用を特徴とする
一群の同族タンパク質であることは公知である。

インターフェロンの抗ウィルス作用が特異的なタンパク
質の合成によって媒介されることが既に知見されている
。これらタンパク質に対する特殊アッセイによってその
うちの２種の作用が同定され、これら２種のタンパク質
はどちらも酵素であった（ＢＡＧＬＩＯＮＩ　Ｃ１，１
９７９。

Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｅｎｚｙｍａ
ｔｉｃ　ａｃｔｌｖｉｔｌｅａａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒ
ｏｌｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｌｖｌｒａｌ　５ｔａｔｅ、　
Ｃｅ１ｌ　１７゜２５５−６４）。

これらの酵素の一方は、オリゴヌクレオチドポリメラー
ゼである。このオリゴヌクレオチドポリメラーゼはＡＴ
Ｐから、２′→５′ホスフオジ工ステル結合によって連
鎖された（ｌｉｎｋｅｄ）アデノシン短鎖を生成しくＫ
ＥＲＲＩ、Ｍ、　ａｎｄ　ＢＲＯＷＮ　Ｒ，Ｅ、。

１９７８　、　ｐｐｐＡ２’ｐ５’Ａ２’ｐ５　’Ａ　
：　Ａｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｓｙｎｔｈｅａｉｓ　ａｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｗｉｔ
ｈ　ａｎ　ｅｎｚ）＋ｍｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ
　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｃｅｌｌａ
、　ＰＮＡＳ　７５゜２５６−６０）、これらのアデノ
シン短鎖は２／−５／オリゴアデニレートと呼ばれてい
る。これら２′、５′オリゴアデニレートの一つが、次
式によって宍わされ得る： 上記化合物は、表示の如＜　２７−５７ホスフオジ工ス
テル結合によって互いに連鎖された数個のアデノシン基
（アデニン＋リボース）を含む短鎖によって構成され、
且つこの短鎖中末端アデノシンのアデニン核の　５′位
は数個（上記に示した２′→５′オリゴアデニレートで
は３個以内）のホスフェート基と連鎖されている。上記
した２′→５′オリゴアデニレートが完全に脱ホスホリ
ル化され、即ち末端アデノシンのアデニン核の５′位と
連鎖されたホスフェート基が数個のホスフェート基から
遊離して生じる化合物を“（２′→５’）ｈｓコア′°
と呼び、これは６リボアデニリル（２′→５′）リボア
デニリル（２′→５′）リボアデノシンコア′°の略称
である。

本明細省中、″２／−５７オリゴアデニレート″′とい
う表現は、部分的に脱ボスホリル化されたものも、ある
いは完全に脱ホスホリル化されたもの即ち（２′→５’
）Ａ、コアも包含すると解されたい。

これら２／−５′オリゴアデニレートの発見によって、
特にインターフェロン処理された細胞にも未処理細胞に
も同様に存在するエンドリボヌクレアーゼの活性化及び
タンパク質合成の抑制においてインターフェロン作用の
媒介物質として重要な役割を担うと見做される新しい生
物学的に活性なオリゴヌクレオチドが浮かび上って来た
。

しかし、これらのアデニレートの２′→５′ホスホジ工
ステル結合は２′−ホスホジェステラーゼ酵素によって
急速に開裂される（前述のＢＡＧＬＩＯＮＩ　Ｃ６参照
）。

エンドリボヌクレアーゼ及び２′−ホスホジェステラー
ゼは何れも、インターフェロン処理された細胞内にも未
処理細胞内にもほぼ同量存在する。

細胞がインターフェロンで処理されると、エンドリボヌ
クレアーゼをｇ識（ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ）　Ｌかつウィ
ルスのレプリカ構造（ｖｉｒａｌ　ｒｅｐｌｉｃａｔｕ
ｉｅ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ）インターフェロンが培地か
ら除去されると、２／−５７オリゴヌクレオチドボリメ
ラーゼ活性は減衰し、細胞はその抗ウイルス状態を喪失
する。

インターフェロンによって訪発されるタンパク質合成は
一時的なものであり、従って組織培養中に保持された細
胞はこれらタンパク質を高レベルで維持し得ない。

インターフェロン処理された細胞内に鋳導された２／−
５１オリゴアデニレートに比べて活性の高い２／−５／
オリゴアデニレートの同族体を合成するための研究がな
されてきた（ＢＡＧＬＩＯＮＩ　Ｃ０ｅｔ　ａｔ、、　
１９８１．　Ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆ　（２′−５’）　
ｏｌｉｇｏ　（Ａ）。

１ｉｈｄｏｎｕｃｌｅａａｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　
ａｎｄ　１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ　
ａｙｎｔｈｅｇｉａ　　ｉｎ　　１ｎｔａｃｔ　　ｃｅ
ｌｌａ、Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉａｔｒｙ、　Ｖｏｌ、　２５６．
　ｎ’　７゜ｐ、３　２５３−３　２５７）。

合成された同族体のうちの大部分がりボアデノシン単位
を修飾して合成され、あるいは残りがアラピノアデノシ
ンを使用して合成されている。

数個のりボアデノシンまたはアラビノアデノシンを含む
鎖によって構成された２／−５／アデニレートの同族体
の酵素の安定性に関するこれまでの結果から、エンドヌ
クレアーゼの活性化及びタンパク質合成の抑制のために
構造を幾つか限定することが必要となった。

リボアデノシン単位を含む２／−５′アゾニレ−２／−
５／アデニレートの幾つかの同族体は（タンパク質合成
の抑制に関し）インターフェロンによって紡導されるも
のと同一の効果をもたらし得るという結論は単なる仮説
にすぎない。

本出願人は今回新規なオリゴヌクレオチドを見いい。２
゜オ＋）ｔｙ＜残”オケ１．ゆ、イ□−。

エロン様活住を有する天然の　２７−５７オリゴアデニ
レート及びその公知の同族体と構造上異なシ、よシ長時
間生物学的循性を維持し、２′−ホスホジェステラーゼ
による分解（ｄｅｇｒａｄａｔ　ｉｏｎ　）に対して耐
性及びよシ高度の保睦性を有する。

（以下余白） 従って本発明は、エンドリボヌクレアーゼによって認識
され得る、即ちエンドリボヌクレアーゼ−と共に活性な
コンプレックス金生成し得る新規なオリゴヌクレオチド
を提供することを目的とする。

゛また本発明は、２′−ホスホジェステラーゼによる分
解に対してよシ耐性である新規なオリゴヌクレオチドの
提供を目的とする。

更に本発明は、生物学的活性の持続期間がより長い、イ
ンターフェロン様活性を有する新規なオリゴヌクレオチ
ドを提供することもに的とする。

これらの目的は本発明による新規なオリゴヌクレオチド
によって達成され、このオリゴヌクレオチドはｎ個（こ
こでｎは１より大である）の同一のまたは異なるヌクレ
オシド単位を含む鎖から成り、上記ヌクレオシド単位の
内の少なくとも１個はキシロアデノシンによって構成さ
れており、これらのヌクレオシド単位は少なくとも１個
のリン原子を含む連鎖基（ｌ　ｉ　ｎｋｉｎｇ　ｇｒｏ
ｕｐ　）から成る２喝Ｉ結合によって連鎖されている。

ヌクレオシド単位とは、プリン塩基またはピリミジン塩
基と連鎖されたペントースによって構成される化合物を
指し、この化合物でペントースはピランあるいはフラン
の形態であり得る。以下。

本明細−中式はペントースをフランの形態で表わすが、
ペントースが次式で表わされるピラン形態であるオリゴ
ヌクレオチドも本発明の範囲に包含される： キシロアデノシンはアテニンと連鎖されたキシロースに
よって構成される化合物を指し、次式で表わされる： ここでキシロースはフラン形態であるが、ピラン形態で
もあり得、ｎたＡはアデニンを表わす。

本発明の範囲内ＶＣおいて、アデニンは次の式で表わさ
れる分子を指す： 以下の記載において、本発明によるオリゴヌクレオチド
におけるその位置に従ってキシロアデノシンが次のよう
なラジカルを示し、このラジカルによりＸ＼２／→５′
結合によって連鎖された〃なる意味が規定されるという
ことが強制されるであろう。

キシロアデノシンがオリゴヌクレオチドの、以後１帖−
の”ヌクレオシド単位Ｌ位と呼ばれる末端基に含−まれ
る揚台、このキシロアデノシンは次式で表々つされるラ
ジカルの形感であり得る：上記した式は、（キシロアデ
ノシンが本発明オリゴヌクレオチドの第一のヌクレオシ
ド単位である場合）キシロアデノシンの２１ヒドロキシ
基の酸素原子が少なくとも１個のリン原子を含む結合に
加わることを意味しており、前記結合は、第二のヌクレ
オシド単位の５′位のヒドロキシ基の酸素と連鎖されて
いる。

キシロアデノシンが当該オリゴヌクレオチドの反対端部
に、即ちオリゴヌクレオチドのＩｔ後の〃ヌクレオシド
単位に含まれる場合、このキシロアデノシンは通常次式
の形態のラジカルである：Ｈ と記した式は、（キシロアデノシンが本発明オリゴヌク
レオチドの最後のヌクレオシド単位である場合）キシロ
アデノシンの５′ヒドロキシ基の酸＊原子が少なくとも
１個のリン原子を含む結合に加わることを意味しており
、前記結合は、最後から二番目のヌクレオシド単位の２
′ヒドロキシ基の酸素と連鎖されている。

キシロアデノシンがオリゴヌクレオチドのＭ　−の単位
でも最後の単位でもない時は、このキシロアデノシンは
次式のラジカルを示す： 上記式は、キシロアデノシンの５′ヒドロキシ基の酸素
原子が、本発明オリゴヌクレオチドにおけ−るヌクレオ
シト単位の２′ヒドロキシ基が酸化された少なくとも１
個のリン原子を含む結合に加わシ、且つキシロアデノシ
ンの２１ヒドロキシ基の酸素原子が本発明オリゴヌクレ
オチドにおけるヌクレオシド単位の５′ヒドロキシ基が
酸化された、少なくとも１個のリン原子を富む結合に加
わることを意味している。

本発明のオリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシド単
位の数は、得られるオリゴヌクレオチドが生理学的に許
容し得る液体ビヒクル中に溶解し得る限シにおいて、限
定されない。しかしながらこの数は、こめ数の増加に伴
う合成の困！１１１６＆と。

活性の増加度の兼合いによって事実と制限され得る。ヌ
クレオシト単位の数は１本発明のオリゴヌクレオチドの
分子量が好ましくは８００乃至３５００の範囲内に包含
されるように選択され得る。。

本発明によるオリゴヌクレオチドの好−ましいグループ
において、ｎの値が１０を超えず、好ましくは７゛また
は８である。

、ｎの値が３３゛またＬ４であるオリゴヌクレオチドが
特に好゛ましい。

本発明のオリゴヌクレオチドにおいて、第一のヌクレオ
シド単位及び／またはＭ後のヌクレオシド単位は１個ま
たは複数個のホスフェート基と連鎖され得る。

本発明によるオリゴヌクレオチドはｈ第−ｔＤヌクレオ
シド単位が１個または複数個のホスフェート基と連鎖さ
れているのが好−ましい。

これらのホスフェート基の数は、好ましくは１〜３個で
ある。

これらのホスフェート基は１個または複数個のメチレン
基によって、好゛ましくけ１〜３個のメチレン基によっ
て分割され得る。

本発明によるオリゴヌクレオチドにおいて５Ｍ−のヌク
レオシド単位が次のホスフェート基と連鎖されているの
が好“ましい： ここでＲ’＋　Ｒ’　ｌ　Ｒ＃’は、それぞれ水素原子
、炭素数１〜４のアルキル基特にメチル基、シアノ、ア
リールまたはアリールスルα・ニル基にょ９１位が置侯
されたメチル基、ハロ多パン原子′またはニトロ基によ
り１ｄ挨又は未置換のアリール基、或いはトリハログノ
エナル基を表わス、。

本発明によるオリゴヌクレオチドにおいて、２個のヌク
レオシド単ｔを連鎖する、少なくとも１個のリン原子を
含む２′→５′結合はホスホジエステル結合、ホスホト
リエステル結合、またはアルキルホスフォネート結合で
ある。

本発明のオリゴヌクレオチドにおいて隣接する２個のヌ
クレオシド単位を連鎖する２′→５′ホスホジ工ステル
結合は１次のように表わされ得る（下記並びに後出の結
合の例に関連して示された核（ｎｕｃｌｅｉ）の一部が
対応するヌクレオシドに属していることは自明である）
： 本発明のオリゴヌクレオチドにおいてｇ接する２個のヌ
クレオシド単位を連鎖する２′→５′ボスホトリ工ステ
ル結合は、次のように表わされ得る：ここで１１．は１
〜４個の炭素原子を壱するアルキル基、特にメチル基シ
アノ、アリール又はアリールスルホニル基でβ位が置換
されたメチル基、ハロゲン原子またはニトロ基で置換ま
たは未置換のアリール基、トリ・・ロケノエチル基を表
わす。

本発明によるオリゴヌクレオチドにおいて隣接する２個
のヌクレオシド単位を連鎖する２′→５′ホスボネ一ト
結合は１次のように表わされ得る：ここ′ｃＲ１は１〜
４個の炭素原子を有するアルキル、特にメチル基を表わ
す。　　　　゛ 本発明による好ましいヌクレオチドは、アデニンから誘
導されたｎ個の同一または異なるヌクレオシド単位から
成り、これらヌクレオシド単位の内の１個はキシロアテ
ノシンによって構成される。

本発明による別の好ましいヌクレオチドは、アデニンか
ら誘導されたｎ個の同一または異なるヌクレオシド単位
から成シ、これらのヌクレオシド単位の内の１個はキシ
ロアテノシンによって構成されておシ、アデニンから誘
導された該ヌクレオシド単位が２’−５’ホスホジ工ス
テル結合まタハホスホトリエステル結合に加わっている
。

本発明による他のオリゴヌクレオチドにおいて、最後の
ヌクレオシド単位はアデニンから誘導された２′−デオ
キシヌクレオシド単位またはアデニンから誘導された３
′−デオキシヌクレオシド単位“またはアラーニンから
ｖ！導された２’、３’−デオキシヌクレオシド残基で
ある。

本発明によるオリゴヌクレオチドにおいて％最後のヌク
レオシド単位は次の中から選択されるのが好ましい： ２′−デオキ／リボフラノシルーアデニン、２′−デオ
キシキシロフラノシル−アデニン、・２’　、　３’−
デオキシリボフラノシル−アデニン、２′−デオキシリ
ボピラノシル−アデニン、２′−デオキシキシロピラノ
シル−アデニン、２’、３’−デオキシリボピラノシル
−アデニン。

本発明によるオリゴヌクレオチドにおいて、少なくとも
１個のヌクレオシド単位の３′ヒドロキシ基が、１〜ｌ
Ｏ個の炭素原子を有するアルキルによってアルギル化さ
れ、好ましくはメチル化されているのが好ましい。

本発明ＶＣよる化合物で社、１個のヌクレオシド単位が
キシロアデノシンであシ、アデニンから誘導される他の
（ｎ−１）個のヌクレオシド単位が次の中から選択され
るのが更に好ましい：−リボアテノシン、 一アラビノアデノシン、 一キシロアデノシン、 一すキソアテノシン。

１段で述べた１更に好ましい〃化合物の中で特に好まし
い化合物は、少なくとも１個のヌクレオシド単位の３′
ヒト四キシ基が、１〜１０個の炭素原子を有するアルキ
ルによってアルキル化され、好ましくはメチル化されて
いる。

梃に別の好ましい化合物において、少なくとも１個のヌ
クレオシド単位は次の中から選択されるニー−３′−デ
オキシリボアデノシン、 −３′−デオキシアラビノアデノシン。

本発明化合物において、本発明による好ましいオリゴヌ
クレオチドは次式で表わされる１個のＤ−β−キシロフ
ラノシル−９−アデニンを含み、：残りの（ｎ−１）個
のアデニンから誘導されるヌクレオシド単位は次の中か
ら選択される：リボフラノシルーアデニン、 アラビノフラノンルーアデニン、 キシロフラノシル−アデニン、 リキソフラノシル−アデニン、 リボフラノシル−アデニン、 アラビノピラノシル−アデニン、 キシロピラノンルーアテニン、 リキソピラノシル−アデニン、 ３′−デオキシリボフラノシルーアデニン、３′−デオ
キシアラビノフラムシルーアデニン、３′−デオキシリ
ボピラノシル−アデニン、３′−デオキシアラビノピラ
ノシル−アデニン。

本発明による別のオリゴヌクレオチドでは、少なくとも
１個のヌクレオ７オ単位がキシロビラノシルーアテニン
でおり、残りの（ｎ−１）個のアデニンから誘導される
ヌクレオシド単位は次の中から選択される： リボフラノシル−アデニン、 アラビノフラノシル−アデニン、 キシロフラノシル−アデニン、 リボフラノシル−アデニン。

リボピラノシル−アデニン アラビノビラ、ノシルーアデニン。

キシロピラノシル−アデニン、 リキソピラノシル−アデニン、 ３′−デオキシリボフラノシル−アデニン３′−チオキ
シアラビノフラノ−／ルーアテニン、３′−デオキンリ
ボビラノシルーアデニン、３′−デオキシアラビノピラ
ノシル−アデニン。

（以下余白） 、″ 本発明が、前記の少くとも一個のキシロビランノンルア
デニンを含み且つ他の（ｎ−１）個のヌクレオシド単位
がいずれもアデニンから誘導されたヌクレオシド単位以
外のもの、特に前述の好ましい化合物に関して規定され
たヌクレオシド単位以外のもの、でもあり得るオリゴヌ
クレオチドにも係ることは明白である。

一般的に云えば、本発明は対応する特定のヌクレオシド
を０■能な限り組合せた、前述の好ま（２い化合物に関
して規定された幾つかの特徴を壱する化合物にも係る。

例えば、 一最終ヌクレオシド牟位が前述の好ましいイ帳合物中で
より特定的に規定されたヌクレオシド単位に該当し、 一個のヌクレオシド単位が前述の好ましい化合物に関す
る説明の中でょシ特定的に規定されたヌクレオシド単位
のいずれかに該当する、オリゴヌクレオチドを好ましい
化合物として追加することも可能である。

特に好ましい本発明のオリゴヌクレオチドは式　・Ｈ 〔式中、Ａはアデニン又は前記定義に従うアデニン訪専
体を表わす〕で示されるオリゴヌクレオチドである。以
後これをキシロアデニリル（２→５′）キシロアデニリ
ル（２’→５′）キシロアデノシンとして表わす、） 本発明は父、前記オリゴヌクレオチドを適切な塩基類と
反応さぜることに゛よシ得られる塩類、特にＩ・リエチ
ルアンモニウムの如き第四、アンモニウム塩及びすトリ
ウム塩の如き無機塩にも係る。

本発明のより一般的に好ましい化合物は、ド記ｑシ　・ の般式により表わされ得る。

〔式中、 ジオシト基の何れでも良く、 ｐは（ｎ−２）、ただし１１は前記と同義であり。

Ｘは前記瓜、水素或いはモノ又はポリフォスフェートで
あり、 ｙはＲ，と同−又は異なると定義さ７また■ち、水素或
いはモノ又はポリポスフェート基であり、ｂ＆ｓｅはプ
リン−、ピリミジン塩基好゛ましくはアデニンを意味し
、 Ｒ５は同−又は異なり、オシド基、デオキシ−オシド基
、Ｒ３，Ｒ，又は水素を表わす〕。また１式中オキンド
基は対応する３′−デオキシ基或いはヌクレオチドの最
後の部分の場合には２１−デオキシ基又Ｖｉ２’、３’
−デオギシ基により置換され得１式中のヌクレオシド単
位の少なくとも一つがキシロアデノシン又はデオキソ−
キシロアデノシン単位から成ることに注意されたい、 また前記式中、ホスホジエステル、ホスホトリエステル
またはアルキルホスフォネート結合を他のホスフェート
結合又は連鎖に置換しても良い。

本発明は更に、本発明のオリゴヌクレオチドの製法、特
に、いずれもが同相又は液相内で実施され得る３柚類の
異なる化学合成法による製法に係る。１′１（も一般的
な方法は液相中で実施される方法である。

ヒｔｊ１２３補類の方法の主要な特徴について、以下説
明する。

ホスホジエステル法 第１合成法による本発明の製法は、１個又は数個の キシロース、リキソース、チオキシー３′ｆリボース、
デオキシ−３／／アラビノースの何れかのオシド基とリ
ボース、アラビノース、キシＩＪ−ス、リキソース、デ
オキシ−３′〃リボース、デオキシ−３’ｆアラビノー
ス、デオキシ−２′チリポース、デオキシ−２ｔ、ｐキ
シロース、デオキシ−２’１３’＋リボースの（ｉｌれ
かの最終ヌクレオシド基から成るヌクレオシド又はヌク
レオチドを出発＠料とし、活性化剤の存在下で第１化合
物と第２化合物とを反応させる方法である。

該製法では、 一前記第１化合物が、構造■ Ｒ８００ル。

のヌクレオチド単位又は対応する３′−デオキシ単位（
式中、５′炭素がン、−基に連鎖されており、２′ヒド
ロキシ基が保護基Ｒ２により保護されてお・す、且つ３
′ヒドロキシル基が存在する場合はこ、ｔｔが保護基Ｒ
３により保護されている）から成り。

一前記第２化合物が、構造■ オキシ４１位（式中、５′ヒドロキシ基が保護基Ｒ６に
より保護されており、３′ヒトｌ：ｌ−？シル基が存在
する場合１、これが保護基Ｒ８によシ保護されている） から成り、 一前記活性剤が第１化合物のヌクレオチド単位ののフォ
スフェート基を第２化自物のヌクレオシド４１　位の２
１−ヒドロキシル基と結合させて。

を有する第３化合物を生成すべく作用する活性剤より選
択されてδす、核第３化合物を予め鳥又はＲ，レベルで
選択的に親株−した後、−第１の場合（レベルＲ１で親
株−）、′ｍ造■− を有するヌクレオチド単位又は対応する３′−デオキシ
単位（式中、２′表素がｐｏ４−基に連鎖されており、
５′炭素が保護基Ｒ８により保護されており、且つ３′
ヒドロキシ基が存在する場合はこれが保護基Ｒ８により
保護されている）から成る第４化合物と第３化合物を活
性化剤即ち該第４化合物のヌクレオチド単位■の７オス
７エート基を第３化金物のヌクレオチド単位の５′　ヒ
ドロキシ基と縮合させて構造■−■−■ ■ を有する化合物を生成すべく作用する活性剤類゛よシ選
択された活性剤の存在下で、更に反応させるか、 −又は、第２の場合（レベルＢ、で親株映）、前記第１
化合物と同一であるかもしくは構造■Ｉ Ｒ，ＯＯＲ。

の別個の（ｄｉｓｔｉｎｃｔ）ヌクレオチド単位から成
る第５化合物と第３化合物を反応させて構造■−■−■
■ を有する化合物を生成するかのいずれかであり、少くと
も１つの ００− がギシロアデノシンである四鎗体もしくはそれ以上のオ
リゴマーを得たい場合には前記ステップを繰返してもよ
い。

例えば、三量体を生成すべく、前述した製法の一部を更
に繰返せば、 又は； ６ ■ Ｒ，００Ｒ。

■ で示される三量体が得られる。

本発明によるオリゴヌクレオチドの製法には前記製法以
外に、一種類のヌクレオチドもしくはヌクレオシドを予
め生成したオリゴマーと反応させるか、又は予め生成し
たオリゴマーを別の予め生成したオリゴマーと反応させ
る方法がある。

（以下余白） 前述した保護基鳥及びＲ１はベース活性基（ｂａａ。

１ａｂｉｌｅ　ｇｒｏｕｐ　　）でめ９．特に炭素数２
〜４０アシル基好ましくはアセチル基又はベンゾイル基
を表わす。

鳥はアシド活基（ａｃｉｄｏ　１ａｂｉｌｅ　ｇｒｏｕ
ｐ　）であり、特にモノメトキシトリチルの如きトリチ
ル銹導体を表わす。

活性化剤は、了り−ルスルホニルクロリド類の中から選
択されるのが好ましく、特に好ましくはメシチレン　ク
ロリドでるる。

別ノ方法としてのホスホジエステル法Ｕ、（５’炭素で
はなく）２′炭素上にＰＯ４−′″基を有する構造■の
ヌクレオチド単位から成る第１化合物を構造■のヌクレ
オシド単位から成る第２化合物とを前記と同様にして反
応させる方法で６って、この場合５′ヒドロキシ基がヌ
クレオチド単位■のフォスフェート基と縮合する。これ
を図式化すると次のようになる。

■ 例えば、ホスホジエステル法は、Ｐ、　Ｔ、ＧＩｕ私Ｍ
　ａｎｄＨｌＧ、ＫＨＯＲＡＮＡ、　　Ｊ、Ａｎ、　Ｃ
ｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１９５８．　　Ｌｏ。

６２１２　　に記載された如〈実施され得る。

ホスホトリエステル法 本発明による第２の製法では、ボスポジエステル法に関
して説明した方法のいずれを使用してもよいが、ＰＯ４
−基は １ Ｏ−Ｐ−ｏ基 ■ Ｒ に代えられる。

従って、本発明の第２製法では前述のオシド基のいずれ
かを表わす１つ又は数個の ヌクレオシドもしくはヌクレオチドを出発材料とし、活
性剤の存在下で第１化合物を第２化合物に反応させる。

該製法では、 一前記第１化合物が構造■ Ｒ，００Ｒ。

のヌクレオチド単位又はその対応するデオキシ−３′単
位のいずれかから成り、式中５′炭素がＰ　０４Ｒ”’
基に連鎖しており、２′ヒドロキシ基が保護基Ｒ２によ
シ保護されておシ、３′ヒドロキシル基が存在する場合
はこれが保護基Ｒ，により保護されており、 一前記第２化合物が構造■ ■ のヌクレオシド＊ＪｆＬ又は対応デオキシ−３′単位の
いずれかを有していて、５′ヒドロキシ基が保護基Ｒ３
で保映されておシ、３′ヒドロキシル基が存在する場合
はこれが保護基Ｒ，で保護されており、 前記活性化剤が第１化合物のヌクレオチド単位■のホス
フェート基を第２化合物のヌクレオシド単位の　２′−
ヒドロキシ基と縮合させて構造■ を有する第３化合物■−■を生成させるべく作用する活
性化剤より選択されておシ、該第３化合物を、Ｒ３もし
くはＲ，レベルで予め選択的に脱保護した後、第１の場
合（レベルＲ５で脱係ＩＩ）構造■を有するヌクレオチ
ド単位もしくは対応するデオキシ−３′単位を有し、式
中２′炭素がＰＯ，Ｒ−基に連鎖されており、５′炭素
が保護基Ｒ１１で保護されておシ、且つ３′ヒドロキシ
ル基が存在する場合はこれが保護基Ｒ５で保護されてい
る第４化合物と共に活性化剤、即ち該第４化合物のヌク
レオチド単位■のホスフェート基を第３化合物のヌクレ
オチド単位の５′ヒドロキシ基と縮合させて構造■−■
−■ ■ を有する化合物を生成すべく作用する活性化剤よシ選択
された活性化剤、の存在下で更に反応させるか、 −又は、第２の場合（Ｒ，レベルで脱係＠）前記第１化
合物と同一の、もしくは構造■Ｒ，ＯＯＲ。

の別個のヌクレオチド単位を有する第５化合物と反応さ
せて、構造■−■−■ 一部　　〇− がキシロアデノシンである四量体又はそれ以上のオリゴ
マーを生成したい場合は、前記工程を更に繰返せばよい
。

例えば、三量体を生成するために前記工程の一部と繰返
すと、 ■ 又は、 Ｒ，ＯＯＲ。

■ で示される四量体が得られる。

本発明によるオリゴヌクレオチドの別の製法としては、
成るヌクレオチドもしくはヌクレオシドを予め形成され
たオリゴマーと反応させるか又は予め生成されたオリゴ
マーを別の予め生成したオリゴマーと反応させる方法が
ある。

前記保護基に関しては、Ｒ２及びＲ，がベース活性基で
あシ、特に２乃至４の炭素原子を有するアシル基、好ま
しくはアセチル基又はベンゾイル基を表わす。

Ｒ６はアシド活性基であυ、特にモノメトキシトリチル
の如きトリチル誘導体を表わす。

活性化剤は、窒素含有複索環のアリールスルホン酸塩よ
シ選択されているのが好ましい。

該アリール基はｌ乃至３の炭素原子を有するアルキル基
、特にメチルもしくはイソプロピルで置換又は未１ｄ換
のアリール基であり、前記複素環は特にニトロ基で置換
されたイミダゾール、トリアゾール、テトラゾールよシ
選択されたものである。

ＰＯ，Ｒ−基中のＲは１乃至４の炭素原子を有するアル
キル基、特にメチル基、ベータ位置でシアン、アリール
もしくはアリールスルホニル基によ多置換されているエ
チル基、ハロゲン原子もしくはニトロ基によ多置換又は
未置換のアリール基、トリハロゲノエチル基を表わす。

ホスホトリエステル法は、（５′炭素ではなく）２′炭
素上にＰＯ，Ｒ−基を有する構造■のヌクレオチド単位
から成る第１化合物と構造■のヌクレオシド単位から成
る第２化合物とを前記製法と同様の方法で反応させるこ
とによっても実施さ゛れ得、この場合は５′ヒドロキシ
基がヌクレオチド単位■のホスフェート基と縮合される
。

これを図式で示すと次のようになる。

■ 該ホスホトリエステル法は例えばＡ、ＭｏＭＩＣＩ（Ｅ
ＬＳＯＮ及びＡ　、Ｒ，ＴＯＤＤ　、　”　Ｊ、、　Ｃ
ｂｅｍ、　ｓｏｃ、”、１９５５．２６３２並びにに、
ＩＴＡＫＵＲＡ他、”Ｃａｎ、Ｊ、Ｃｈａｍ、”、１９
７３、−り、３６４９に従って実施することも可能であ
る。

ホスホトリエステル法の利点はトリエステル結合が非イ
オン性であり、そのため合成過程で得られる中間化合物
がより容易に単離・精製されることにある。これに反し
、ホスホジエステル法ではホスホジエステル結合がイオ
ン性であり、従来の有機溶剤に中間化合物が不溶性であ
るため、化学的抽出・精製法を使用する該中間物の単離
・精製はより困難でおる。加えて、親核性ホスホジエス
テル官能基の中間フラグメントが存在するため、活性化
剤の存在下で活性化した後、鎖が破断する可能性もある
。

（以下余白） 亜燐酸塩法 本発明による第３の製法は、前述のオシド基を表わす１
個又は数個の を有するヌクレオシドもしくはヌクレオチドを出発材料
とし、活性化剤を使用せずに第１化合物と第２化合物と
を反応させる方法である。

該製法では、 一前記ＩＪ１化合物が構造■ ３００ １）　　　ＣＡ Ｒ を有するヌクレオチド単位、もしくは対応するデオキシ
−３′単位のいずれかから成り、式中、５′炭素がＰ（
ｈＲｃＪ基に連鎖されており且つ３′ヒドロキシ基が存
在する場合はこれが保護基Ｒ３で保護されており。

一第２化合物が構造■ Ｒ１，Ｏｏ４ 全有するヌクレオシド単位もしくは対応するデオキシー
：つ′単位のいずれかから成り、２′ヒドロギシ基が保
護基Ｒ２で保映されており且つ、３′ヒドロキシ基が存
在する場合はこれが保護基Ｒ３で保護されており、これ
ら両化合物を反応させることによって構造 Ｒ３００Ｒ２ を有する第３化合物■−■を生成し１次いで該化合物■
−■を酸化させることｙｃより構造ＲＩＯＯＲＢ を有する第４化合物■を生成する。但し、少くとも１つ
の ００− はキシロアデノシンでなければならない。

前記化合物■及び化合物■の反応はピリジンの如き溶剤
の存在下で′）！：施される。

化合物■−■を酸化させて化合物■を生成する場合には
、Ｉ２もしくは過酸化物誘導体の如き酸化剤、特に過安
息香酸を使用する。

この場合、Ｉｌｌ／Ｈ！０／ＴＨＦを使用するとより有
利に酸化を実施することができる。

前記・１呆−基に関しては。

−Ｒ２及びＲ３がペース活性基、特に１乃至４の炭素原
子を有するアシル基、好ましくはアセチル基もしくはベ
ンゾイル基を表わし。

Ｒａがアンド活性基、特にモノメトキシトリチルの如き
トリチル酵導体を表わす。

Ｐ（ｈＲｃｊのＲは、オクトクロロフェニルの如きハロ
ゲン原子で置換されたアリール基を表わす。

該亜燐酸塩法は例えば、Ｒ，Ｌ、ＬＥＴＳＩＮＧＥＲ曲
。

Ｊ、ＡｍｅｒＣｈｅｒｎ、　Ｓｏｃ、、　”１９７５．
９７．３２７８に従って実施することも可能である。

本発明のオリゴヌクレオチドの好ましい製法は適切な保
護基を使用したホスホトリエステル法である。この場合
オリゴヌクレオチド合成における副反応を回避すべく、
所望のインターヌクレオチド結合の形成に使用される官
能基以外の親核性官能基を全て保映しなければならない
。

本発明がより良く理解されるよう以下実施例を挙げて説
明する。但し本発明は該実施例に限定されるものではな
い。

該実施例はキシロつ′デニリル（２′→５′）−キシロ
アデノシン（２′→５′）キシロアデノシンの合成に係
る。

次式。

リ　　　　　　ＯＨ で示されるトリエチルアンモニウム塩の形状の（２′＝
５′）インターヌクレオチド結合を有するβ−Ｄ゛キク
ロノラノシルーアデニンの三量体は次の製法もしくはこ
れと類似の方法で生成され得る。

以後使”′用される略字の意味は次の通りである。

Ｈ８ １−＋ ３０二Ｐ　−ＯＨＮ（Ｃ，Ｈ藝）１ 〔式中、ｍＭＴｒはアンド活性基、Ｒ３はペース活性基
、である〕 で示される化合物を次式２ で示される化合物と反応させる。

得られた化合物は次式製 −３ で示される。次に、該化合物２３０５′ヒドロキシ官能
基を親株握すると、式２４ ２４　　　　　　　　°ＢＺ で示される化合物を生成する。該化合物２４を式眠の化
合物と反応させると式２８ ＢＺ で示される化合物が生成され、これを更に式２９の化合
物に変換−ｒる。

で示される化合物より生成され得る。これは、オルト−
クロロフェニルホスホロジ−Ｃトリアソール−］、　２
．４．−イブ）を例えばトリエチルアミン水浴液で更に
処理されたアセトニ）　ＩＪシル−リジン混合物中で反
応させて得られる。

式ス で示される化合物は、式１ で示される化合物より生成され得る。次いで１式１の化
合物を例えばピリジン中の無水安息香酸などによりベン
ゾイル化することにより式２０で示される化合物を生成
し、更に式Ｉの化合物を例えばクーロホルム−メタノー
ル混合物中のｐ−トルエンスルホン酸などにより処理し
て式２の化合物に変換する。

キシロアデノシン（２′→５′）キシロアデノシン（２
／→５′）キシロアデノシンの実際の合成には、１　　
　０ｆ−１ で示される化合物を使用する。

式（１）で示される化合物の製法 出発材料は式５ で示されるジーＯ−ペンゾリル−３，５−０−４ソ　プ
ロピリデン−１，２α−Ｄ−キシロフラノースであるが
、これはＤ−キシロースから簡単に式１４で示される化
合物は１式１で示される所望の化合物を合成する場合の
出発材料である。

第一ステップとして化合物１４の遊離２′−ヒドキシ基
を従来の方法に従い第３ブチルジメチルシリル基により
保護する。（Ｋ、に、０ＧＩＬＶＩＥ及びり、Ｊ、ＩＷ
ＡＣＨＡ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　”、
　　１９７３゜３１７　）（Ｋ、に、０ＧＩＬＶＩＥ、
Ａ、Ｌ、ＳＣＨＩＦＭＡＮ及びＣ，Ｌ、　ＰＥＮＮＹ、
　”Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　”　１９７９゜５７
．２２３０　）。

このようにして得られた化合物１４の訪導体１５を脱ベ
ンゾイル化すると、式１６の〇−第３ブチルジメチルシ
リルー２′β−Ｄ−キシロフラノシル−９アデニンが得
られる。その収率は約４１％である。

次のステップで、化合物１６の第一アルコール官能基を
モノメトキシトリチル化により特異的に保護すると、化
合物１７が得られる。

これに続くステップで、アデニンの環外アミン官能基と
キシロースの３′−ヒドロキシトラペンジイル基により
同時に保護する。

ピリジン中の無水安息香酸により前記化合物１７をベン
ゾイル化すると（Ｊ、　Ｆ、　Ｍ、　ｄｏ　ＲＯＡＩＪ
他、Ｒａｃｌ、　Ｔｒａｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ｐａ）’ａ
−１３ａｓ、　１９７９．９８．５３７）複素環上にベ
ンゾイル基を有する紡導体１８が得られる。

最終ステップでは、該化合物１８をテトラプチルアンモ
ニウムフルオリドにより迅速且つ選択的に脱シリル化す
ると、式ｌの所望の化合物を得ることが出来る（Ｋ、に
、０ＧＩＬＶＩＥ及びり、　Ｊ。

ＩＷＡＣＨＡ、　”Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ
、　”、　１９７３．３１７　）（Ｋ、に、０ＧＩＬＶ
ＩＥ、Ａ、Ｌ、ＳＣｆ（ＩＦＭＡＮ及びＣ０Ｌ、　ＰＥ
ＮＮＹ、　”Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　”、　１９
７９．５７．２２３０　）。

前記の反応は次の如く図式化される。

化合物上から武生で示される化合物を得ることが出来る
。

第１ステツプは、化合物１をピリジン中で無水安息香酸
によりベンゾイル化することにより完全に保護され良化
合物２０を生成するスデツプである。該化合物２０はβ
−キシロフラノシル−アデニン１３からも合成すること
ができる。

しかしながら、化合物１３ｆ：化合物２０に変換するた
めには、第１ヒドロキシの選択的モノメトキシ）　ＩＪ
チル化に次いで残りの官能基のベンゾイル化を実施しな
ければならない。

化会物派を２％ｐ−）ルエンスルホン酸のクロロホルム
−メタノール混合溶液で処理すると該化合物のモノメト
キシトリチル基が脱ブロックされ（）ｌ、　ＴＡＫＡＫ
Ｕ他、Ｊ。Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　”、　１９８０年、
４５．３　３４７）、所望の化合物２が得られる。

これを図式化すると次のようになる。

ＢＺ ＢＺ ス ホリル化ステップが必蒙とされる。第１ステツプでハ化
合物１より２１−ホスホジエスデル誘導体を合成し１編
２ステツプではこのホスポジエステル中間化合物を活性
化剤の存在下で化合物２（又は中間で得られた二量体）
の５′−ヒドロキシ官能基に対して反応させる。

２／−アリールホスフェ−１導体２２の合成インターヌ
クレオチド　ホスフェート（１ｎｔｅｒ　−ｎｕａｌｅ
ｏｔｉｄｉｃ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　）を保護する場合
はオルト−クロロフェニル基を使用すると有利である（
Ｗ、Ｔ、ＭＡＲＫＩＥＷＩＣＺ他、Ｎｕｃｌｅｌａ　Ａ
ｃ１ｄｓＲｅａ、　”、シンポジウムシリーズ第７号、
１９８０゜１１５及びＣ，Ｂ、　ＲｇｇｓＥ他、Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、”、１９７８，２７２７）
。

インターヌクレオチド結合（１ｎｔｅｒｎｕｃｌａｏｔ
ｌｄｉｃ　ｂｏｎｄ　）は、保護基の妨引注及びフォス
フェートの反応性が相俟って生じる。この場合、クロロ
フェニル基はβ−シアノエチル及びトリクロロ−２、２
，２−エチルなどの如くこれまで使用されてきた他の電
気陰性度がより小さい基より有利（ｓｕ−ｐｅｒｉｏｒ
　）であることが認められた。

更に、インターヌクレオチドホスフェートの最終的脱保
護に対して、オキシメートイオンにより鎖が裂かれるこ
とがないので、前記オキシメートイオンが効率良く選択
的に使用されることが確認された（Ｃ，Ｂ、ＲＥＥＳＥ
他、　”Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ″。

１９７８．２７２７）。

従って化合物１を、アセトニトリル−ピリジン混合物中
でｉｎ　５ｌｔｕ生成される、過剰蓋の式２１％式％： Ｒｅｓ、　ｓ、　１９８０．８．２０３９　）と反応さ
せ、水性トリエチルアミンで処理すると、□化合物２２
が得られる。該化合物をクロロホルムで抽出しペトロラ
タム中に沈澱させると、極めて高収率でトリエチルアン
モニウム塩として単離される。この反応は次の如く図式
される。

完全に保朦された二量体２８の合成 ホスホジエステルヌクレオシドＵを化合物ｌ又は二量体
化合物１１の５′−ヒドロキシ基に対して反応させる場
合は、安定性及び効率の点から、メシチレンスルボニル
−１−二）ｏ−３−）！Ｊ７ゾールー１．２．４（以後
ＭＳＮＴと略称する）を活性化剤として使用すると有利
である。

化合物り及び１（２２より多少過剰量の）のピリジン溶
液を２．９ｅｑのＭＳＮＴにより室温で２０分間処理す
る。

次いで該反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液中に
注入し、クロロホルム抽出する。

このようにして得られたモノホスフエートジヌクレオシ
）’２３ｅ、２ＳＰ−）ルエンスルホン酸のＣＨＣＩｓ
　／ＣＨ３０Ｈ混合溶液で直接処理すると、脱トリナル
化された二量体且」が得られる。

更に中和、抽出、シリカカラムでの精製処ｊ」後。

ペトロラタム中に沈澱させると化合物主に対して７０嗟
の収率で該二重体が単離される。

遊離５１−ヒドロキシ基を有する二量体化合物旦及びホ
スホジエスプル２２を最終的に反応させ適当な処理を施
こし、次いでシリカカラムによるクロマトグラフ処理し
ペトロラタム中に沈澱させると、完全にブロックされた
三社体２８が白色粉末の形状で単離する。収率は７５％
である。この反応を図式で示すと次のようになる。

（以下余白） ＭＳＮ’ｌ”はメ／ナレンスルホニルー１−ニトロ−３
−トリアゾール−１，２，４を表わす。

完全に保護された三量体の脱ブロッキング及び精製 以下に示されるように、ベンゾイル基及びオルトクロロ
フェニル基を同時に脱保護すると２個のインターヌクレ
オチド結合の移動が起こり得るが、これは絶対に回避さ
れなければならない現象である。

（Ｃ，Ｂ、　Ｒｅａｓｅ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、
　１９７８＋　３４．３１４３　）結合　２’＋　５’
　　　　　結合　２’＋　３’２個のインターヌクレオ
チド結合を移動させずに化合物２８を得るために１次の
ステップを以下の手順で実施する。

第１ステツプでは、ホスフェート基を保睦している０−
クロロフェニル基を除去するために、完全に保護された
三量体２８をテトラメチルグアニジウムのＰ−ニトロペ
ンズアルドギシメートによシ処理する（Ｃ，Ｂ、ＲＥＥ
ＳＥ他、　’　Ｔａｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｆｆ！。

１９７８、２７２７及びＳ　、Ｓ　、　ＪＯＮＮＳ他”
ｌ’ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ’。

１９８０、赴、　　３０７５）。

この反応は以下の如く図式化される。

注：　Ｔｌｖｌ’；はテトラメチルグアニジニウムを表
わす。

第２ステツプでは、〇−及びＮ−ベンゾイル基を加水分
解すべくアンモニア水溶液（２０％）を冷加す乙。温ｊ
（は約４０Ｃ１反応時間は約２０時間である。７ 第３ステツプでは、メトキシトリチルを除去すべく、前
記化合物を８０慢酢酸媒質内に、約２５Ｃで約４時間放
置する。

第４ステツプでは、抽出を実施した後Ｓ　ｅｐｈａｄｅ
ｘＤＥＡＥ−２５カラムでのクロマトグラフ処理して化
合物１旦をトリエチルアンモニウム塩の形状で８０−以
上の収率で得る。

以上の４ステツプは次の如く図式化される。

次に本発明による化合物２９の製造法の一例を示すが、
これは何ら限定的なものではない。

総体的な指標は、特に規定されない限シ前述のものと同
一である。

特定されるべき追加の指標は次のとおりであるニーリン
ＮＭＲスペクトルはＢＲＵＣ肚Ｒ詐８０として市販され
ている型の、３２　、３７　ＭＨｚで動作する分光計に
記録され、外部基準として用いられたオルトリン酸に関
する化学シフトは６１ｐｐｍとして表わされる。

−Ｈ，Ｐ、Ｌ、Ｃ，システムはウォーターズ部材（Ｗａ
ｔｅｒｊｍａｔｅｒｉａｌ　）、ＮｌｌちＵ６にインジ
ェクター、６０００人及びＭ−４５ポンプ、Ｍ７２０プ
ログラマ、４４０〜２５４　ｎｍＵＶデデクタ、Ｒ−４
０１屈折針デテクタ及びＭ−７３０コンピユーターレコ
ーダから成る。

一キシロアデニルー（２′→５１）キシロアデノシンー
（２′−＋５’）−キシロアデノシン及びこのトリマー
の酵素゛分解物の分光光度計純度コントロールは薄層ク
ロマトグラフィー（以下ｃｅｎｔと記す）によって、次
いで分析カラムＷａｔｅｒａμ瀕ｎｄａｐａｃｋＣ１８
（３０ＣＩＬ）でのＨＰＬＣ分析によって行なわれた；
浴離液勾配は溶液Ａ（２’Ａアセ）＝トリル）及び溶液
Ｂ（アセトニトリル１２ｍ）から形成され、これらの各
溶液はＧ、Ｄ、ＭｃＦＡＲ−Ｌ＆Ｎ１）　ａｎｄＰ、Ｍ
、ＢＯＲＥＲ＋’Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ｊａｉｄｓ　Ｒａａ
、。

１９７９　Ｊ、１０６７に従って、Ｐ）１５．９０師酸
アンモニウム１チ水溶液中で製造された；流ｊｉ　３　
ｍｌ／Ｊｎｎに関し溶層は、２優のアセトニトリル（純
粋人）から７％のアセトニトリル（Ａ５０チ／ｎ５ｏｓ
）に至る直線勾配に従って１５分間行なわれ、更に７１
トニトリル１２≠のレベルで５分間行なわれた；注入に
関して保持時間が与えられる。

一仔牛の牌臓ホスホジェステラーゼ（ｚｍｙを燐酸アン
モニウム溶７代に線間したもので、　ＰＨ’：：６）が
Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｌｍ　（ＲＦＡ）
によって与えられた。

酢酸（２６０１１１６）と無水酢酸（６４ｒａＪ）とか
ら成り、４９．５＆の化合物５を含む（Ｂ、Ｒ，ＢＡＫ
ＥＲｃｔ　Ｒ、ｔ　、　５Ｃｆ（Ａ［ＪＢ　＋　Ｊ　、
Ａｒｎｅｒ　、ｃ′ｈａｍ、Ｓ　Ｌ）Ｃ１ｌ　１９５５
＃　７７１５９００　）氷冷浴液に、濃硫酸２．２ｍｌ
をマグネチックスターラーで４ｆｔ拌しながら滴下して
（３０分間）付加する。得られた混合物を室温で１２時
間攪拌し、次いで７００ｂＪの氷水へ注入し、Ｍ後にク
ロロホルム３００ｍ１によって３回抽出する。有機相を
壕ず水で、次に５−の炭酸す）　ＩＪウム溶液で、最後
に再び水で洗油する（名洗浄に関し、それぞｔＬ　ｌ　
５０　〃Ｌｅで３回ずつ）。クロロホルム溶液ｔ［酸ナ
トリウムで乾燥し、１−して減圧下ｅζ蒸発させる。残
渣を５００１１１４！のエタノール９５に、再び溶解し
て、獣炭で処理する；１遇し、減圧下に蒸発させ、更に
続いてトルエン（１００ｘ／で３回）及び四塩化炭素（
ｌｏｏｙで２回）と共蒸発させた後、薄黄色シロップの
形態のアノマー化合物１１が収量５４１９８％）で得ら
れ、これは縮合反応に直接使用されるほど十分純粋であ
る：　ＣＱｍｇＲｔ　＝０．２　ｉ　（溶離液はエーテ
ル−シクロヘキサン＝１−１　、Ｖ／ｖ）ＮＭＲ（ジュ
ーチリウムクロロホルム）δＰＰ”　：　６−２８　（
ｌＩ＊　Ｉｆ（＋Ｈ１β）５．５５（ｄ、　ＩＨ，Ｈ−
１０Ｌ’、Ｊｌ、２＝４．５Ｈｚ　）。

１１−αアノマーをエタノール中に析出させる；Ｆ＝１
０８〜１０９Ｃ０ 元素分析 ＣｕＨｕＯｓ（４４２，４１）に関する計算値：Ｃ，６
２，４４：Ｈ，５，０１ 同上検出値： Ｃ，６２、３７：Ｈ，５，０２ 浴液２０，２７１Ｗ（９００ｘ／の無水アセトニトリル
中に化合物１１を４５．８ミリモル）に、６．０５ＪＪ
（４６ミリモル）のアデニンを付加する。得られり同一
溶媒３０ｏＩＩＩｌ中の懸濁液１０．５ｍｌの四塩化錫
を加える。３０分後光全に溌んだ反応混合物を、乾燥し
た場所に１５時間攪拌下に放置する；次いで体積２１０
ｍ１Ｋまで濃縮し、炭酸水素ナトリウム２６．６．ｌ／
及び水９０１Ｒ１を連続して加える。炭酸ガスが完全に
消失したら混合物を減圧下に蒸発させ、得られたゴム質
を３００　ｒｔｒｌの沸騰クロロホルムで３回抽出する
；有機相を溜め、硫酸ナトリウムで乾燥し、ｆ：Ｉ過し
て減圧下に蒸発させ、このようにしてゴム質を得る。カ
ラムクロマトグラフィー（溶離液はジクロルメタン−メ
タノール：９．６−０．４Ｖ／Ｖ）によシ、化合物１２
を収量１６．５　＃（７（１）で収集し得、この化合物
はエーテル中に析出する；　ｃｃｍ、Ｒｆ　＝０．３１
　（溶離液はジクロロメｆｉンーメタ／−ル：　９，３
〜０．７Ｖ／Ｖ）Ｆ＝１０８〜０ＯＣ０ 元素分析 Ｃｕａ　Ｈａｓ　Ｎ！Ｉ　Ｏｔ　（５１７，４８）に関
する計算値：ｃ。

６０．３４　ｉ　Ｈ、４，４８ｉ　Ｎ　、　１３．５４
同上検出値：　Ｃ、６０，３５ｉ　Ｈ，４，４２ｉ　Ｎ
、　１２．９３．８１１の化合物１２をＩＮナトリウム
メチラートメタノール溶液３０ｒｔｒｌに溶解する。室
温で１時間攪拌した後、化合物を乾燥条件下に蒸発させ
、水１５（１＋＋／に再び溶解して樹脂１）ｏｗ６ス５
０（ピリジニウム形りによって急速に中和する；ｆ遇し
、安息香酸メチルのエーテルで抽出した後、水相を真空
下に蒸発させる；メタノールを再び付加すると、水％分
子を伴って化合物１３が析出する；この化合物は収ｉｔ
：　１．５８９　（７８％）で得られる。

この化合物１３の物理学的特性は、この過程の最初の部
分で得られたβ−Ｄ−キシロフラノシルー９　アデニン
のものとあらゆる点で同一である。

ジー０−ベンゾイル−３’、５’　　β−Ｄ−キシロフ
２．８２１ｄの水利ヒドラジｙ（５８，０モＡ／、　３
６ｑ、）を１６８ｍ／の酢酸−ピリジン混合物：１−４
Ｖ／Ｖにおける１（１（１９，３ミリモル、１　ｅｑ、
）の化合物１２の溶液に付加する。

室温で２０時間攪拌後アセトン４７ｒｎｔを加え、２時
間攪拌を続ける。その後混合物を減圧下に濃縮し、３０
０ｍ１のクロロホルムに再び溶解するａ得られ九クロロ
ホルム溶液をまず水で、次に炭酸水素す）　ＩＪウムの
飽和溶液で、更に再び水で洗浄する（各洗浄に関し、　
１５０ｍ１で２回ずつ）。

有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して蒸発乾燥さ
せる：トルエンーエタノール：４−１゜ｖ／ｖとの３回
の共蒸発の後、橙黄色の泡８．３６Ｆを得る。カラムク
ロマトグラフィー（溶離液はジクロルメタン−メタノー
ル：　９．７−０．３　、　ｖ／ｖ　）によって、化合
物１４が収量７．５４　Ｆ　（８２％）において得られ
る。

この化合物１４はイソプロピルエーテル中ニ沈殿し得る
；　ｃＣｍ、　Ｒｆ　＝０．２８　（溶離液はクロロポ
ルム−メタノール：９−１．ｖ／ｖ）；Ｆ：９４〜１６
５℃（分解）。

元素分析 Ｃ，、Ｈ□Ｎｓ　Ｏａ　（４７５，４５）に関する計算
値：Ｃ、６０，６３；　Ｈ、４，４５ｉ　Ｎ　、　１４
．７３同上検出値：Ｃ，６０，４１；　Ｈ，４，６８；
Ｎ　、　１４．２７アデ二ン１５ 無水ジメチルホルムアミド１８ｄ中に、６ｔ（１２，６
ミリモル％　ｌｅｑ、）の化合物１４．２．０６　ｔ（
３０２ミリモル、２．４ｅｑ、）のイミダゾール及び２
．２９　ｒ　（１５，２ミリモル、１．２　ｅｑ、　）
の塩化ｔａｒｔ　−プチルジメナルシリルをここに挙げ
た願に連続して溶解する。室温で７時間攪拌後、との浴
液を１００ｍ／の氷水へ注入し、　１００ｍ／のジクロ
ルメタンで３回抽出する：有機相を集め、硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、１遇して減圧下に蒸発させる。生成された
油を４０℃で真空下（約１０　　ｍｍ　Ｈり）に６時間
抽出し、ジメチルホルムアミドの大半量を除去する。得
られたゴム質にカラムクロマトグラフィー（溶離液はジ
クロルメタン−メタノール：９，９−０．１　、　ｖ／
ｖ　、）を施すことにより、化合物１５が収量５．５ａ
ｒ（７８％）において収集される；この化合物はエーテ
ル−石油エーテル混合物中に析出する；ｃａｍｅｌえｆ
＝０．５５　（溶離液はクロロホルム−エタノール：　
９−１　、　ｖ／ｖ　）　ｉ　Ｆ＝１７０〜１７１℃。

元素分析 Ｃ１゜Ｈｓｓ　Ｎ、　ｏａ　ｓｔ　（５８９，７１）に
関する計算値二Ｃ，６１，１（１；　Ｈ，５，９８；　
Ｎ、　１１．９８；　Ｓｔ　、　４．７６同上検出値：
　Ｃ、６１，３６；　Ｈ，５，７９ｉ　Ｎ、　１１．７
０：Ｓｉ、４．７ ４．５　ｔ　（７）化合物１５を２’１ｍｌのＩＮナト
リウムメチラートメタノール溶液に溶解する；混合物を
室温で３０分間攪拌し、次いで減圧下に蒸発させ。

５０ｄの水に再び溶解して樹脂Ｄｏｗｅｘ５０（ピリジ
ニウ゛ム形態）によシ急速に中和する。濾過及び蒸発後
残渣を１ＱＩｊのエタノール１（）Ｏと２夏共蒸発させ
てから、カラムクロマトグラフィーによって分析する（
溶離液はジクロルメタン−メタノール：９．２−０．８
．ｖ／ｖ）；化合物１６を収量２．１８ｆ（７５ｑｂ）
において得る；この化合物はエーテル中に析出する；　
ｃ　ｃ　ｍ　＊　Ｒｆ　−０−１５（ｍ　Ｍ液はクロロ
ホルム／メタノール：９．１．ｖ／ｖ）；Ｆ：１２７〜
１２９℃。

元素分析 Ｃ１０Ｈ２７Ｎｓ　０４　Ｓｔ　（３８１，５１）に関
する計算値：Ｃ，５０，３７ｉ　Ｈ，７，１４ｉ　Ｎ、
　１Ｂ、３６ｉ　Ｓｉ、７．３６同上検出値：　Ｃ，５
０，０２；　Ｈ，？、２０　；　Ｎ、　１８．１０　；
Ｓｌ、７．１ ７．７５　Ｆ　（２０，３ミリモル、　　１　ｅｑ、）
の化合物１６及び８．１７　ｆ　（２６，５ミリモル、
１．３　ｅｑ、）の塩化モノメトキシトリチルを無水ピ
リジン２８０ｄ中に含有する溶液を、暗く乾燥した場所
で２０時間攪拌する。氷水１３０ｍ１を付加後、反応混
合物を２００ｄのクロロポルムで２回抽出する：有機相
を硫酸すトリウムで乾燥し、ｆ過し、減圧下に蒸発させ
る；残渣を５０　ｗｒｌのトルエンで３回蒸発させてか
ら、カラムクロマトグラフィー＜ｍ離液はジクロルメタ
ン−メタノール−トリエチルアミン：９．７−０．２−
　ｏ、　１＋　■／ｖ）によって分かする。化合物１７
を、９．８７　？　（７４％）の収量で得る；この化合
物はエーテル及び石油エーテルの混合物中に析出する；
ｃａｍ　、　Ｒｆ　＝０．３４　（溶離液はメタノール
−ジクロルメタン：　９．４−０．６　）　ｉ　Ｆ　：
　１０３℃。

元素分析 Ｃ，、Ｈ４ｓ　Ｎ、　Ｓｔ　（６５３，８３）に関する
計算値：Ｃ，６６，１３：Ｈ，６，６３；　Ｎ、　１０
．７１ｉ　Ｓｔ　、　４．３０同上検出値：　Ｃ，６５
，９５；　Ｈ，６，４６；　Ｎ、１０．４０ｉＳｉ、４
．１ ９．０６　ｆ　（１３，９ミリモル、１　ｅｑ、）の化
合物１７．０．９０　？　（７，３７ミリモ／Ｌ／、　
０．５３　ｅｑ−）の４−■。

Σ−ジメチルアミノピリジン及び６．９２　ｆ　（３０
，６ミリモＡＺ　２，２１１１（１，）無水安息香酸を
無水ピリジン２００１ｎｌ中に含有する溶液を１２時間
還流する。冷却し、減圧下に蒸発させた後、残渣を５０
０ｍ／のクロロホルムに溶解する；得られた溶液を炭酸
水素ナトリウムの飽和溶液及び水で連続して洗浄する（
各洗浄に関し、３００ｄで２回）。有機相を硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、ｒ過して減圧下に蒸発させる。カラムク
ロマトグラフィー（ｆｆｊｉｌｌ！液はクロロホルム’
−酢酸エチル−トリエチルアミン：９．７５−０．２−
０．０５　、　Ｖ／Ｖ　）の後、泡の形態の化合物１８
を収！９．７１　？　（８１％　）において得るｉ　０
　Ｃｍ　ｉ　Ｒｆ　ａＯ，３５（溶離液はクロロホルム
−酢酸エチル：９−Ｘ。

ｖ／ｖ）　；　Ｆ　：　７７〜７９℃。

ニン１ ８．４ｔの化合物１８を、フッ化テトラブチルアンモニ
ウムの０．５Ｎテトラヒドロフラン溶液４８ｍ１中に溶
解する；室温で４時間攪拌後溶液を減圧下に蒸発させ、
残渣にカラムクロマトグラフィー（溶離液はジクロロメ
タン−メタノール−トリエチルアミ７　：　９．８−０
．１５−０．０５１　ｖ／ｖ　）を施す；化合物１を６
．１９　Ｆ　（８５チ）の収量で得る。この化合物は、
四塩化炭素及びジインプロピルエーテルの混食物中に沈
澱する；　ｃＣｍ　、　Ｒｆ　：　０．２３　（溶離液
はジクロロメタン−メタノール：　９．６−０．４　。

ｖ／ｖ　）　ｉ　Ｆ　：　１３５〜１４０℃（分解）。

元素分析 Ｃ４４Ｈｓ７Ｎｓ　Ｏｔ　、　１／３　ＣＣｅ＊　、１
／３　Ｃ４１（１００に関する計算値：　Ｃ、６６，７
９；　Ｈ、５，０４；Ｎ、　８．４０同上検出ｆＫ　：
　Ｃ、６６，４８；　Ｈ，５，００ｉ　Ｎ、　８．５２
方法人 ２．９６　Ｆ　（３，９６ミリモル、ｌｅｑ、）の化合
物１．０．１１　？　（１）、９ミリモル、０．２３ｅ
ｑ、）の４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノビリジン及び０．
９４　ｔ　（４，２ミリモル、　１．０６ｅｑ、　）の
無水安息香酸を無水ピリジン４０ｄ中に含有する溶液を
１２時間還流する。次いで反応混合物を、１８の合成に
おけるものと同じ過程に従って処理する。カラムクロマ
トグラフイー（溶離液はジクロルメタン−メタノール：
９．８８−０．１２　、　ｖ／ｖ　）の後、次の段階に
直接使用されるほど十分純粋である化合物２０を収量２
．８７ｆ（８５％）において得る；　ｃｃｍ＋Ｒｆ＝０
．３６　　（溶離液はジクロルメタン−メタノール：　
９．８−０．２ｖ／ｖ　）。

次に２．８７ｆの化合物２０’ｉ２％のパラトルエンス
ルポン酸を含んだクロロホルム−メタノール混合物ニア
〜３　、　ｖ／ｖ　２　ｇ　ｗｔｌ中に溶解する。得ら
れた溶液を室温で１時間３０分攪拌し、次いでクロロホ
ルム２００ｍ／で希釈する。炭酸水素ナトリウムの５％
溶液及び水（各々１５０ｍ）で連続して洗浄した後、ク
ロロホルム相を硫酸ナトリウムによって乾燥し、Ｆｌ遇
して減圧下に蒸発させる。カラムクロマトグラフィー（
溶離液はジクロルメタン−メタノール：　９−８−０−
２　＊　Ｖ／ｖ　）によって化合物２が収量１．２５　
ｆ　（２０に関しては６４％；１に関しては５５％）に
おいて得られる。化合物２はエタノール中に析出する；
　ｃａｍ　、　Ｒｆ　＝０．２８　（溶離液はジクロル
メタン−メタノール：、　９．６−０．４　。

ｖ／ｖ）　ｉＦ：　１３ｉ　〜１３５℃。

元素分析 Ｃ，、Ｈ□Ｎ１１０７．　Ｈ，０（５９７，５７）に関
する計算値：　Ｃ、６２，３０ｉ　Ｈ，４，５５；Ｎ　
、　１１．７２同上検出値：　Ｃ、６２，５１；　Ｈ，
４，５７；　Ｎ、　１１．７１方法Ｂ １、Ｏｆ　（３，６ミリモル、Ｉｅｑ、）の化合物１３
を無水エタノール５０１に溶解する。結晶水を除去する
ために、得られた溶液を減圧下に蒸発させ、次いで無水
エタノール及び無水ピリジンと連続的に共蒸発させる（
どちらの場合も５０ｗ１で２回）。

次に＋７０ｔｎｌのジメチルホルムアミド−ピリジン混
合物：　１−１　、　ｖ／ｖ及び１．４２　Ｆ　（４，
６＜リモル、１．３ｅｑ、　）の塩化モノメトキシトリ
チルを加える。

暗く、乾燥した場所で３６時間攪拌した後１反応　　　
　　　　　１混合物を１７の合成におけるものと同じ過
程に従つて処理する。カラムでのクロマトグラフィー（
溶離液はジクロルメタン−メタノール−トリエチルアミ
ン：　９．４−０．５−０．１１　ｖ／ｖ　）によシ、
〇−モノメトキシトリチルー５′−β−Ｄ−キシロフラ
ノシル−９アデニン１９を１．３８　ｆ　（７１優）の
収量で得る；この化合物１９社酢酸エチル及びシクロヘ
キサンの混合物中に析出する；　ｅａｒｎ、Ｒｆ−０，
２６（溶離液はジクロルメタン−メタノール−トリエチ
ルアミ７　：　８．９−１−０．１１　ｖ／ｖ　）　；
Ｆ：１２９〜１３１℃。

次ｆ（，１，３８ｔ　（２，６ミリモル、ｌｅｑ、）の
化合物１９を無水ピリジン２０ｗ１Ｋ溶解する；この溶
液へ、０．２２　ｆ　（１，８ミリモル、０．７　ｅｑ
、　）の４−上、Σ−ジメチルアミノピリジン及び１．
８２９　（８，０ミリモル、３．１　ｅｑ、　）の安息
香酸を加える。反応混合物を１２時間還流してから、化
合物１Ｂの合成におけるものと同じ過程に従って処理す
る。カラムでの精製後、ｐ−モノメトキシトリチル−５
’Ｎ　。

Ω−トリベンゾイル−６、２’　、　３’β−Ｐ−キシ
ロフラノシルアデニン２０を収量１．８３ｔ　（８３％
　）　において得る。

この化合物２０の所望のシントン（５ｙｎｔｈｏｎ　）
２への転換は、方法人に述べたものと同様の過程に従っ
て実施され得る。

０−クロロフェニルホスホロジー（）！Ｊアソールー１
，２．４（）”）の溶ｉ’［［（Ｗ、Ｔ、　　ＭＡＲＫ
ＩＥＷＩＣＺ。

Ｅ、　ＢＩＡＬＡ　、　Ｒ，Ｗ、　ＡＤＡＭＩ　ＡＫ　
、　Ｋ、　ＧｆｔＺＥＳＫＯＷＩＡＫ。

Ｒ，ＫＩＥＲＺＥＫ、Ａ、ＫＲＡ８ＺＥＷＳＫＩ、Ｊ、
５ＴＡＷＩ−ＮＳＫＩ　　ａｎｄ　ＷＩＥＲＷＩＯＲＯ
ＷＳＫＩ、ＮｕｅｌｅｉｃＡｃｉｄｓ　Ｒａｎ、、　Ｓ
ｙｍｐｏｓｉｕｍ　５ｅｒｉｅｓ　ｎ”Ｌ］９８０＋１
１５）−（Ｊ、Ｂ、ＣＨＡＴＴＯＰＡＤＨＹＡＹＡ　＆
　Ｃ，Ｂ。

ＲＥＥＳＥ＋　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、
　１９７Ｌ　５０５９　）を、ｏ−クロロフェニルホス
ホロジクロリタード１．６７　ｆ　（６，８ミリモル）
のトリアゾール１，２．４１．２０　ｆ　（１７，７ミ
リモル）及びトリエチルアミン１．３８　Ｆ　（１３，
６ミリモル）から出発して１３．６ｉｊの無水アセトニ
トリル中においてｉｎ　ａｉｔｕ製造する。

室温で１５分間攪拌後、　　２．１　？　（２，８ミリ
モル）の化合物１の無水ピリジン１３．５１１ノ中の溶
液を付加して２０分間攪拌を続ける：次に１．７１　？
　（１６，９ミリモル）のトリエチルアミン及び０．８
ｉＪ（４３，９ミリモル）の水の、ピリジン５．４Ｒ１
における溶液を加え、１５分間攪拌する。反応混合物を
炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液３５０ｔｎｔへ注入し
、クロロホルムで抽出する（８０ゴで４回）。溜まった
クロロホルム相を炭酸水素す）　ＩＪウムの飽和水溶液
で（１５（ｌｌで２回）、史に水で（２００ｍｌで２回
）洗浄する。有機相を硫酸す）　ＩＪウムで乾燥し、濾
過し、減圧下に蒸発させ、最少量のクロロホルムに再び
溶ル罰し、更にトルエンと３回共蒸発させる。

得られた泡を１５ｍのクロロホルムに再溶解し、高速攪
拌下に石油エーテル４５０ｔｘｌへ滴下させる。

沈澱物の形態で化合物２２が得られ、この化合物は沈澱
後ドライヤーによって乾燥される＝２２の収量は２．８
ｒ（９６％）に達する；　ｃｃｍ、　Ｒｆ　＝　０（溶
離液はクロロホルム−メタノール：　９．６−０．４　
。

ｖ／ｖ　）　；　０．３７　（溶離液はクロロボルム−
メタノール：８−２．Ｖ／Ｖ）。

１．６９　（１，５４ミ？モル）の燐酸ジエステル２２
及ヒ０．７６１　（１，３１ミリモル）のシントン２を
含むピリジンの無水浴液（７，５１ｔｊ）に、１．１２
　ｆ　（３，９ミリモル）のメシチレンスルホニル−１
ニトロ−３トリアゾール−１，２，４を付加する（　Ｓ
、　Ｓ。

ＪＯＮＥＳ、Ｂ、ＲＡＹＮＥＲ，Ｃ，Ｂ、ＲＥＥＳＥ、
Ａ、ＵＢＡ−８ＡＷＡ　＆　Ｍ、　ＵＢＡＳＡＷＡ、　
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　１９８０゜３６、３０７５
　）、溶液を室温で２０分間攪拌する−次いで炭酸水素
す）　ＩＪウムの飽和水溶液１．５ｍｌを加え、１５分
間攪拌を続ける。この攪拌時間の最後に混合物を１５０
ｍ／のＮａＨＣＯｓ飽和水溶液へ注入し、生成物をクロ
ロホルムで抽出する（５０ｍ／で４回）。溜まった有機
相を水で洗浄しく　１３０　ａｔで１回）、硫酸す）　
ＩＪウムで乾燥し、ｆ過して減圧下に蒸発させる。残渣
を、ピリジンの最終痕跡を除去するべくＩ・ルエンで３
回共蒸発させる。

との組成物に薄層クロマトグラフィー（ｃａｍ）を施す
ことで（溶離液はクロロホルム−メタノール：　９．６
−０．４　、　ｖ／ｖ　）、このようにして得られた（
　Ｒｆ　：　０．５７　）、総体的に保護されたダイマ
ー２３が次の段階に直接使用されるほど十分に純粋であ
ることが判明する。

この残ｆｆｉを更に、２％のパヅトルエンスルホン酸を
含む％２６＋ａＪのクロロホルム−メタノール混合物＝
７−３．ｖ／ｖに溶解する。得られた溶液を室温で６０
分間攪拌してからＮａＨＣＯｓ飽飽和水溶液１２０ｍへ
注入し、生成物をクロロホルムで抽出する（６０Ｔｎｌ
で４回）。有機相を溜め、水で洗浄しく　１００ｍ／で
１回）、硫酸ナトリウムで乾燥し、１遇して減圧下に蒸
発させる。カラムでのクロマトグラフィー（溶離液はク
ロロホルム−メタノール：　９．７−０．３　、　ｖ／
ｖ）によって、脱トリチル化されたダイマー２４を得る
。このダイマーは、石油エーテル中での沈澱により白い
粉末の形態で単離し。

その収量は１．１０ｒ（２に関し７０俤）である；ｃａ
ｍ　＋　Ｒｆ　：　０．２４及び０．１７：二つのジア
ステレオマー（溶Ｍｉはクロロホルム−メタノール＝９
．６−０．４　、　ｖ／ｖ　）　；　３１　Ｐ　−ＮＭ
Ｒ（ジューチリウムクロロホルム）、δｐｐｍ　：　−
８，０６及び−８，２３゜完全に保護され九二燐酸トリ
ヌクレオンド　２８０．８１１０．７８ミリモル）の燐
酸ジエステル２２及び０．ｉ３６＃（０，７０ミリモル
）の脱トリチル化されたダイマー２４を含む無水ピリジ
ン溶液（５ｍｌ）に、０．５７ｇ（１，９６ミリモル）
のＭＳＮＴを付加する。

溶液を室温で２０分間攪拌する；次にＮａＨＣＯ，飽和
水溶液１　ｍｌを加え、１５分間攪拌を続ける。この攪
拌時間の最後に混合物を８０ｍ１のＮａＨＣＯ，飽和水
溶液へ注入し、１５分間攪拌を続ける。この攪拌時間の
最後に混合物を８０ｍ１のＮａ　ＨＣＯｎ飽和水溶液へ
注入し、生成物をクロロホルムで抽出する（４０ｍｌで
４回）。溜”まった有機相を水で洗浄しく６０ｍＪで１
回）、硫酸ナトリウムによって乾燥し、濾過して減圧下
に蒸発させる。残渣をトルエンと３回共蒸発させてから
、カラムでのクロマトグラフィー（溶離液はクロロホル
ム−メタノール：９．８５−０．１５　、　ｖ／ｖ　）
を施す；当該画分を溜め、減圧下に蒸発させる；このよ
うにして得られたトリマー２８は、白い粉末の形態で石
油エーテル中に沈澱する；収量は１．３１２４に関し８
６チ）である；　ｃｃｍ、Ｒｆ：０．４２；０．３７；
０．３３及び０．２８：四つのジアステレオマー（溶離
液はクロロホルム−メタノール：　９．６−０．４　、
　Ｖ／Ｖ）　；”　Ｐ　−ＮＭＲ（シューチリウムクロ
ロホルム）、δｐｐｍ：　−８，００；　−８，０６：
　　−８，１７；　−８，５１゜２５〜（１１，６Ｘ１
０＝ミリモル）の総体的に保護されたトリマー２８，６
６．４１’１ｆ（０，４ミリモル）のニトロ−４９ｙ−
ペンザルドキシム及び４（３，ｌ＊ｙ（０，４ｉリモル
）のＮ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−テトラメチル−１，１，３，３グ
アニジンの、水−ジオキサン混合物（ｌ／１、ｖ／ｖ　
：　０．８”　）中テノ溶液を、室温テ５時間攪拌する
。この攪拌時間の最後に２：１ｖ（０，２ミリモル）の
Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−テトラメチル−１，１，３゜３グアニ
ジンを加え、溶液を更に１６時間攪拌する。

減圧下に蒸発させた後、４ｍｌの濃縮アンモニア７（２
０％）を得られたゴム質に付加し、生成された溶液を密
封された管内に２０時間、４０℃において保持する。

次にこの溶液を蒸発乾燥させる；残渣を水と２回共蒸発
させた後、８０チ酢酸水溶液５１１１中に溶解する。こ
のように生成された溶液を室温で４時間攪拌し、次いで
クロロホルムによって（１’ｌ　ｍｅで８回）、更にエ
チルエーテルによって（１２ｍＪで４回）連続して洗浄
する。

水相を減圧下に蒸発させてから、水と共蒸発させて中和
する。

精　製 上記のようにして得られた残渣に、ＤＥＡｈ３−８ｅｐ
ｈａｄｅｘ　Ａ　−２５（ｆ（Ｃｏｔ−型）のカラム（
１，５Ｘ１５ｃＴｎ）でのクロマトグラフィーを施す。

溶離は炭酸水素トリエチルアンモニウム水惟緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）を用いて、２Ｘ１０−８Ｍ〜０．５Ｍの直線
勾配に従って行なう。６ゴの両分を収集する；この、ト
リマー２９を含む画分を溜め、減圧下に蒸発させ、水と
５回共蒸発させてから凍結乾燥する。所望のトリマー２
９が、８２チの収率で得られる。

純度コントロール ｃａｍ、　Ｒｆ＝　０．２８　（ｌ離液はＩＮ酢酸アン
モニウム−エタノール：２−８、ｖ／ｖ　）　；　ｏ、
ａ　ｓ　（ｌ離液はイソプロパノ−ルー波縞アンモニア
７−水ニア−２−１。

ｖ／ｖ）　；　０．４０　（ｉ’！！離液はイソプロパ
ノ−ルー濃縮アンモニア７−水：　７−１−２　ｓ　ｖ
／ｖ　）。

ＨＰＬＣ保持時間：１３．８分。

トリマー２９（３単位Ａｓ１４）の、水２５μｔにおけ
る溶液に、２０μｔの混合物（２３０μｔの水、６０　
ｐｌ　（Ｄ　Ｔｗｅｅｎ　８０．０．１１ｖＩのＥＤＴ
Ａ５０μｔ。

１ＭのソーダによってｐＨ６，１に還元されたＫＨ，Ｐ
Ｏ，のモル溶液６０μｔ、そして更に水８０μｔを混合
して製造される）と、牌臓種ホスホジェステラーゼの市
販溶液３μｔとを付加する。得られた溶液を３７℃で１
６時間インキュベートし、その後２分間８０℃にまで加
熱する。分解組成物のＩ−Ｉ　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析はトリマ
ー２９に対応する唯一のピークのみを示す。

製法 従来の方法で末端ヌクレオシド単位の少くとも一つが１
個以上のホスフェート基（即ち″第一の′。

ヌクレオシド単位の５′炭素原子がホスフェート基に連
鎖されている及び／又は゛′最後の′″ヌクレオシド単
位２′炭素原子がボスフェート基に連鎖している）、例
えば３個のホスフェート基に連鎖されている本発明のオ
リゴヌクレオチドを製造することが可能である。例えば
”第一〇″基が前記の如く、５′炭素上に１乃至３個の
ホスフェート基を含む本発明のオリゴヌクレオチドを製
造スるために下記の方法Ａ又はＢを用いることができる
。

方法Ａ 式１ （ の化合物の場合、５′モノメトキシトリチル基を例えば
クロロホルム−、メタノール混合物中の２％ｐ−）ルエ
ンスルホン酸で除去すると、式３０ の化合物が得られる。

次ＩＣ２，２，２−）ＩＪジクロロチル−ホスホロモル
ホリノクロリデートを、１−メチルイミダソールの存在
下で化合物３０に反応させると、 式３１ の化合物が得られる。

化合物３１は活性（１１ａｂｌｅ　）であるので、前記
の反応の最終縮合段階に使用される。

本発明によるオリゴヌクレオチドを得るために用するの
が有利である。この場合、第一のヌクレオシド単位の５
′炭素原子は式 ％式％ ト基と連鎖され、十分に保護されている。

以下の説明中、６十分に保護され九′”なる表現は、最
後のヌクレオシド単位の任意の３′ヒドロキシ基と、任
意の２′ヒドロキシ基、プリン又はピリミジン塩基の環
外アミノ官能機は全て、前記の如く、ベース活性（ｂａ
ａｕ　１ａｂｉｌａ　）保譲基、好ましくれベンゾイル
基によって保護され、インターヌクレオシド結合のすべ
てのヒドロキシ基は例えばオルトクロロフェニル基によ
って保咥されていることを意味する。

次いで、前記オリゴヌクレオチドを活性化されたｚｎの
存在下で、ピリジン中の２．４．６−ドリイソプロピル
ーベンゼンスルホン酸と反応させると、オリゴヌクレオ
チドが生じる。この場合５′位ノ２．２．２−）リクロ
ロエチルーモルホリノホスフェート基は −Ｊ１ Ｏｆ（ に変換されている。

これらオリゴヌクレオチドは更に、−加安分解に次いで
酸処理して対応する５′モノホスフ工−ト十分に保護さ
れた”オリゴヌクレオチドに変換し、−ジメチルホルム
アミド中のトリブチルアンモニウムとの反応によシ対応
する５′ジホス７工−ド十分に保護された”オリゴヌク
レオチドに変換し、−ジメチルホルムアミド中のビス−
トリブチルアンモニウムジホスフェートとの反応により
対応する　５′トリポスフエート°゛完全に保護された
゛°オリゴヌクレオチドに変換する。

このようにして得られたそれぞれの５′モノホスフエー
ト、５′ジホスフエート、５’位トＩＪホスフェート”
十分に保護された”オリゴヌクレオチドを、次いで例え
ば化合物２８の脱保護の際に説明した方法と類似の方法
で、例えばテトラメテルクアニジニウムのｐ−ニトロベ
ンズアルドキシメートを用いて（最後のヌクレオシド単
位の任意の３′ヒドロキシ基、任意の２′ヒドロキシ基
、塩基のアミン官能基、インターヌクレオシド結合のヒ
ドロキシ基に関して脱保護した後アンモニア水で処理す
る。

例えば、Ｊ、Ａ、Ｊ、ＤＥＮ　ＨＡＲＴＯＧ％Ｒ，Ａ、
ＷＩＪＮＡＮＤＳ及びＪ、Ｈ，ＶＡＮ　ＢＯＯＭ着　Ｊ
、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　、　１９８１　。

４Ｌ　２２４２−２２５−１．　”Ｃｈｅｍｉｃａｌ　
５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆｐ　−ｐ　−ｐ　　Ａ２’ｐ
５’Ａ２’ｐ５’Ａ　、　ａｎ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｉｎｄｕｃｅｄ　１ｎｈｌｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｐｒｏｔ
ｅｉｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄｓｏｍｅ　ｆｕｎ
ｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｏｇ＋１に、記載され丸方法
を用いることができる。

方法Ｂ ５′ヒドロキシルがアシド活性（ａｃｉｄｏ　１ａｂｉ
ｌｅ）保繰基、例えばモノメトキシトリチル基によって
保護されておシ、最後の７クレオンド単位の任意の３′
ヒドロキシ基、任意の２′位ヒドロキシ基、塩基のアミ
ン官能基が全て、塩基活性保饅基、特にミンゾイル基で
保役されており、インターヌクレオシド結合のすべての
ヒドロキシ基が、例えばオルトクロロフ・エニル基で保
護されている本発明のオリゴヌクレオチドを出発材料と
して、モノメトキシトリチル基を例えば２０％ｐ−）ル
エンスルホン酸によｐ除去する。

このようにして得られたオリゴヌクレオチドを一式（Ｃ
Ｃｔ、−Ｃ山）ｔ　−ｐｃｔ のビス＝（２，２，２−）リクロロエチル）ポスホロク
ロリジト（ｐｈｏａｐｂｏｒｏｃｈｌｏｒｉｄｉｔｅ）
に反応させて第一のヌクレオシド単位の５′炭素原子が
（ｃｃｔｓ　−ｃａｓ）ｓ　−ｐ　”−ｏ基に連鎖され
たヌクレオチドが得られる。次いで、 上記基のリンを例えばエーテル及び水性ＮａＨＣＯｎを
使用して■、酸化すると、第一のヌクレオシド単位の５
′炭素原子が（ＣＣ４−ＣＨりｌ　　Ｐ　　Ｏ基１ に連鎖されているオリゴヌクレオチドが得られる。

上記の如きリン原子に連鎖されたトリクロロエチル基を
次に、ジメチルホルムアミド−アセチルアセトンの混合
物中で例えば活性化されたＺｎ／Ｃｕにより除去する。

得られたオリゴヌクレオチドは第一のヌクレオシド単位
の５′炭素原子は一つのホスフェート基に連鎖されて上
記に定義した如く°“十分に保護されている。″ 例えば、Ｊ、　ＩＭＡＩ及び　Ｐ、Ｆ、　ＴＯＲＲＥＮ
ＣＥ　。

”　Ｂｉｇ　−（２，２，２−ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔ
ｈｙｌ）　ｐｈｏａｐｈｏｒｏｃｈ−１ｏｒｉｄｉｔｅ
　ａａ　ｒｅａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｈｏａｐ
ｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆ　ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｌｄｅｔ＊、Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　５’　ｐ
ｈｏｓ−ｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ　２’、　５’ｏｌｉｇ
ｏａｄｅｎｙｌａｔｅ”、　Ｊ、Ｏｒｇ。

Ｃｈｅｍ、、　１９８１．４６．４０１５−４　０２１
に記載された方法を用い得る。

次いで、オリゴヌクレオチドのすべての保護基を例えば
前記した通シ除去し、得られた　５′モノホスフエート
オリゴヌクレオチドを夫々モノホスフェート又はピロホ
スフェート陰イオンとイミダゾリデートとの反応によっ
て対応する５′ジホスフエ、−ト及び５’）リボスフエ
ートに転化する。

前記の如き°′最後の″ヌクレオシド基が２′炭素原子
上に１乃至３ホスフエート基を含んでいる本発明のオリ
ゴヌクレオチドを製造するために、方法（Ａ又紘Ｂ）を
用いることが可能である。この場合最後のヌクレオチド
単位の２／炭素原子が第一のヌクレオシド単位の５′炭
素原子に対する方法と類似の方法で適当に作用を受ける
。

末端ヌクレオシド単位の少くとも一つが１個又は数個の
ホスフェ−１・基に連鎖されているオリゴヌクレオチド
を得るためにはポリホスフェート連鎖に関与する末端ヌ
クレオシド単位として保護基を適当に選択する限り、上
記のいかなる末端ヌクレオシド単位でも使用し得る。

式２９で示される三量体の純度を以下の方法で調べる。

一薄層クロマトグラフィ（以後ｃａｍと略称する） 一高圧液体りロマトクラフイ（ＨＰＬ）−酵素消化（ｅ
ｎｚｙｍａｔｉｃ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）このオリゴヌ
クレオチドは仔牛牌臓のホスホジェステラーゼに対し完
全な耐性を示すことが判明している。

三量体２９の物理化学的特性は、光学的特性の測定及び
ＮＭＲスペクトルの分析によって調べられる。

光学的特性 天然の（ｎａｔｕｒａｌ）　ｌ−（２’　−＋　５’　
）Ａ、核」を測定した。

該核は、２／、　ｓ／オリゴアデニレート合成酵素源と
してインターフェロンαで処理されたＨＥＬＡ細胞のホ
モジネートを使用しＡＴＰから酵素的ルートで生成した
（Ｊ、　ＭＡＲＴＩ　、　Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ　ｄ
ｅＢｉｏｃｂｉｍｉｅ　ｄｅ８Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、　Ｕ
、　Ｓ、Ｔ、Ｌ、）。

ｐＨ８，４で酵素加水分解を行なった後、各三量体の減
色性（ｈｙｐｏｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ　）及び１値を測
定した。

キシロ、リボヌクレオシド及びヌクレオチドの最大１と
しては、１５４００　（λｍａｘ　：　２５９ｎｍ）の
値を使用した。

この測定の結果を次表に示す。

これら三量体の成分に対するＵＶ吸収スペクトルの淡色
性及び淡色性は塩基が鎖沿いに積重されていることから
説明され得る。

（以下余白） ＮＭＲスペクトルの分析 化合物１主の試料をＤＯＷＥＸとして市販されている陽
イオン（Ｎａ”）交換樹脂で処理することによって、対
応するナトリウム塩に変換し、次いでＰＨを７．４にし
た後り、Ｏで３回凍結乾燥処理した。内部り、Ｏロック
を使用し、且つ濃度４．５ｍＭでり、０溶液中で、５０
０ＭＨｚに於けるプロトンのＮＭＲスペクトルｔ−４２
°Ｃで記録した。

内部標準として試料に塩化テトラメチルアンモニウムの
塩化物（ＴＭＡ　（Ｊｌ）を微量添加した（トリメチル
シリル−３−プロパンスルホン酸ナトリウム塩ＴＭＡＣ
７！は３．１８　ｐｐｍで認められる）。

キシロアデニリル（２／→５／）キシロアデニリル（２
／→５リキシロアデノシンのナトリウム塩のＮＭＲスペ
クトルは、添附図面に図示した通りである。

プロトンの、塩化テトラメチルアンモニウムに関する化
学シフト並びにカップリング定数の値を次の表に示す。

この分析によって、合成されたトリマーの化学的構造及
び純度が確認される。

昔シグナルの重なりのために、厳密な測定は不可能でお
る。

■芳香族性プロトン）Ｉ−２及びＨ−８は、その緩和時
間（Ｔθによって区別した。

Ａｐ−、−ｐＡｐ−、−ＰＡ−の意味は次のとお９であ
る： Ｈ 本発明の特許請求の範囲により、すべての同等な最終化
合物（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ｆｌｎａｌ　ｃｏｎｐｏ
ｕｎｄ　）並びに前記同等化合物を作るための方法がカ
バーされ、また方法に関する特許請求の範囲により前記
最終化合物を最終的に得るために用いられるべき対応す
る適尚な同等の出発化合物を使用、する対応する代替方
法がカバーされることが理解されよう。

上記の１同郷な最終化合物ｌなる表現抹、特許請求の範
囲に記載の最終化合物の分子を当業者によシ容易に確認
し得る程度に僅かに化学的に修飾した化合物をも包含す
る。しかし乍ら前記の如く分子を化学的に修飾しても、
未修飾分子の本質的なインターフェロン様性質が実質的
に変化せず。

エンドリボヌクレアーゼが未修飾分子を確認し及び前記
分子と共に活性な錯体を作シ得ることが検知される如く
、長時間に亘る活性期間及び／又は２′−ホスホジェス
テラーゼによる分解に対する優れた耐性は不変でめつ九
。

当業者によって変更可能な実施例中、単に例としてキシ
ロース（又はデオキシキシロース）残基、−又は他のオ
シド（ｏｓｉｄｌｃ　）残基。

−特に数種の化合物中のアデニン残基の一部分又は全部
を１−デアザゲニン。３−デアザデニン又は７−ゾアザ
デニン残基の如きデアザデニｙ　（ｄｅａｚａｄｅｎｉ
ｎｅ　）残基に置換したもの、又社−前記アデニン残基
（又はデアザデニン残基）中の異なる位置の窒素原子を
介してアデニン残基（又はデアザデニン残基）のオシド
基のいくつか又はすべてに連鎖しているもの、又れ−例
えば１乃至５炭素原子を含む低級アルキル、フェニル又
はベンジルにより前記アデニン又ｔｔデアザデニン残基
の遊離アミノ基上で限定的に置換され喪もの、 と結びついた塩基を挙げている。

本発明は更に、上記オリゴヌクレオチドが塩基、特に無
機又は有機塩基と共に形成し得る塩にも係る。無機塩基
の塩の中では、ナトリウム塩及びカリウム塩が好ましい
。有機塩の中でれ、アミン、アルキルアミン又はアリー
ルアミンの塩、特にジエチルアミン、ピペラジンの如き
第二アミン、又はトリエチルアミン、ピリジン、メチル
ビペラジン、等々の如き第三アミンの塩が好ましい。こ
れらの塩の中で、生理的に貯容し得る塩が好ましい。

前記塩は凍結乾燥され得る。

本発明の化合物は最も価値のある生物学的特性、特にイ
ンターフェロン様特性、特に抗ウィルス活性を有する。

これら化合物は％ＤＮＡ合成、特に細胞内のウィルス複
製を阻害し、及び／又はウィルスｍＲＮＡｔ減成し、従
ってタンパク質、特にナノモル濃度でウィルスによって
感染させられた細胞中のウィルスタイ、ノ、＜り質の生
合成を阻害し得る。

前記化合物は安定であり、哺乳動物臓器、特に仔つシ牌
臓の２／、５／−ホスホジェステラーゼの存在下で加水
分解を完全に阻止する。前記化合物は、Ｃｒｏｔａｌｕ
ａ　４ｕｒｉａａｕｇ　ｔｅｒｒｉｆｉｃｕｓとして公
知のへび毒に由来する化合物と同等の強いホスホジェス
テラーゼに対す耐性を示す。

実際、本発明によるオリゴマーは天然２′→５′オリゴ
−アゾ五レートよりも最後に言及した酵素の存在下で一
層ゆっくりと加水分解される。

特にキシロアデニリル（２′→５′）キシロアデニリル
（２′→５′）キシロアデノシンは天然リボアデニリル
（２′→５′）リボアデニリル（２′→５つりボアデノ
ジシの％の割合で（ａｔ　ａ　ｒａｔｅ　ｆｏｕｒ’ｔ
ｉｍｅａｌ＠ｓｓ　）上記ホスホジェステラーゼによっ
て加水分解される。

オリゴヌクレオチドは、特に１曝謹基を除去後は、その
公知の用途、特に生物学的用途において価値らるインタ
ーフェロン代用品で、Ｓる。

ＡｔＪ　Ｍｅオリゴヌクレオチドは容易に且つ何回でも
極めて高純度で製造されるため、生物学的試薬、特にイ
ンターフェロン化合物又は他のインターフェロン様物質
又はこのような化合物又は物質を含有する組成物の細胞
培養における生物学的定性及び定量アッセイにおける比
較標準として使用し得る。

これらのアッセイは例えｄ細胞培養におけるウィルス複
製を阻害し得るオリゴヌクレオチドの能力をテストする
仁と又は下記刊行物中に言及されている如き関連の活性
をテストすることを目的としている。

これらアッセイは、また２／、５／−ホスホジェステラ
ーゼの存在下での減成に関し、仁れらの基質の化学的修
飾の結果としての該酵素用基質に対する耐性の増大度及
び／又は前記化学的に修飾され九基質の通常はインター
フェロンによって媒介され且つウィルスＤＮＡ合成及び
ウィルスタンパク質合成の阻害するエンドリボヌクレア
ーセを細胞中で活性化する能力の増大度をテストする丸
めの規準又は標準として使用され得る。

本発明の化合物が比較標準として有用でめる好ましいア
ッセイ方法に関しては、下記刊行物を参照されたい。

Ｋｎｉｇｈｔ　Ｍ、　ａｔ　ａｌ　（１９８０）　、　
’Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｓ　ｒａｄｉｏ−ｂｉｎｄｉｎ
ｇ　ａｎｄ　ＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　２−５
　Ａ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔａｄｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
　ｆｒｏｍ　１ｎｔａｃｔ　ｃｅｌ１ｇ’　、　Ｎａｔ
ｕｒｅ　２８８　：１８９−１９２　； Ｈｏｖａｎｅａａｉａｎ　Ａ、Ｇ、　ａｔ　ａｌ　（１
９７９）　、　’　Ｉｎｃｒ＠ａｓｅｄｎｕｃｌｅａｓ
ｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｃｅｌｌｓ　ｔｒｅａｔ
ｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｐｇ２’ｐ５’　Ａ２’　ｐ５’　
Ａ’、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　ａｃｔ、
　ＵＳＡ。

ｖｏｌ、　７６、　Ｎｏ、　７．　ｐｐ、　３２６１−
３２６５．　Ｊｕｌｙ　１９７９　；Ｈｏｖａｎｅａｇ
ｉａｎ　ａｔ　ａｌ、　’Ａｎｔｉｃｅｌｌｕｌａｒ　
ａｎｄ　ＡｎｔｉｖｉｒａｌＥｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐ
ｐｐＡ（２’　ｐ５’Ａ）ｎ　’　、　ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ　１０１　。

ｐｐ、　８１−９０　（１９８０）　；Ｋｉｍｃｈｉ　
ａｔ　ａｌ、’Ａｎｔｉ−ｍｉ、＄ｏｇｅｎｉａ　Ｆ’
ｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−Ｉｎｄｕ
ｃｅｄ　（２’−５’　）Ｏｌｉｇｏ（ａｄｅｎｙｌａ
ｔ＊）ａｎｄ　Ｇｒｏｗｔｈ−Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｖａｒ
ｉａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｅｓｔｈａｔ　５ｙ
ｎｔｈｅｓｉｚｅ　’　、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃ
ｈｅｓｎ、　１１４゜５−１０　（１９８１）、ＦＥＢ
８１９８１　；Ｂａｇｌｉｏｎｉ　Ｃ，ａｔ　ａｌ、　
’Ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆ（２’−５’）Ｏｌｉｇｏ（Ａ
）　Ｅｎｄｏｎｕｃｌａａｓａ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
　ａｎｄ　Ｉｎｈｉ−ｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｏ
ｉｎ　８ｙｎｔｈｅａｉａ　ｉｎ　Ｉｎｔａｃｔ　Ｃｅ
１１ｇ“。

Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
　Ｃｈｅｍｉａｔｒｙ、　　ｖｏｌ。

２５６、　Ｎｏ、　７．　ｌ５ａｕｅ　ｏｆ　Ａｐｒｉ
ｌ　１０．　　ｐｐ、　３２５３−３２５７．１９８１
゜ 最後に、本明細書中の引用刊行物中に開示された主題は
全て、特に、先行技術からすでに公知であり且つ本発明
の非本質部分を実施するための技術を完全に理解すぺ〈
付加的に記載した主題と共に、本明細書中に挿入したこ
とを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

添附図面は、本発明化合物のＮＭＲスペクトルを示す図
である。 ζ嘩人弁理士宮　出　広　豊 第１頁の続き ■出　願　人　ジル・ジョゼフ・マリ・ゴスラン フランス国３４モンペリエ・リュ ・ポール・ランボー・レジダン ス５バルク・デザルソーーバ・ エフ１（番地なし） 手続補正書 昭和５７Ｑニア　　月ノ／１１ 特許庁長官　　若　杉　和　夫　　　殿１、事件の表示
　昭和５７年　特願第７５０５２号２、　発明の名称　
　新規なオリゴヌクレオチド、その製造方法およびイン
ターフェロン作用の媒介物質としての用途３、補正をす
る者 事件との関係　　特許出願人 氏　名　　ジャンールイ・アンバク （ほか１名） ４、　　代　理　　人　　　東京都新宿区新宿１「目１
番１４号　１１１１１１ビル（郵便番号１６０）　’＋
ｉｌ：話（０３）　３５４−８．６２３番目　　発 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象　明細書、図＋１１（°゛季（１に８、
補正の内容 （１）　　第５７頁以降の正式明細書を別紙の通シ補充
する。（内容変更なし） （２１正式図面を別紙の通り補充する。 （３）　　委任状及び同訳文各２通を別紙の通シ補充す
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　１ｍ次ｎ個の同−若しくは異なるヌクレオシ
   ド単位を含む鎖から成るオリゴヌクレオチドであって、
   前記ｎが１より多く好ましくは１０未満であり、前記ヌ
   クレオシド単位の少なくとも一つはＸゾロアデノ７ノか
   ら構成され、且つ、これらヌクレオシド単位が少なくと
   も１個のリン原子全会む連鎖基から成る２′→５′結合
   により連鎖されることを特徴とするオリゴヌクレオチド
   。 （２）　　第１のヌクレオシド単位および／または最終
   のヌクレオシド単位がホスフェート基、好ましくは１〜
   ３個のホスフェート基により連鎖され、前記ホスフェー
   ト基が１〜３個のメチレン基により任意に分割されるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載のオリゴヌ
   クレオチド。 （３）　　少なくとも１個のリン原子を含む連鎖基から
   成る２′→５′結合がホスホジエステル結合、ホシ〜 スホトリエステル結合またはアルキルホスチ１ネート結
   合であることを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第
   ２項に記載のオリゴヌクレオチド。 （４）　　全てのヌクレオシド単位がアデニンから誘導
   されることを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第３
   項のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。 （５）　　全てのヌクレオシド単位がアデニンから誘導
   され、少なくとも１個のリン原子を含む連鎖基から成る
   ２′→５′結合がホスホジエステル結合、ホスホトリエ
   ステル結合またはアルキルホスホネート結合であること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれ
   かに記載のオリゴヌクレオチド。 （８）１個が式 ％式％ であり、残（ｎ　−１）りのアデニンから誘導されるヌ
   クレオシド単位が リボフランツシル−アデニン。 アラピノフランツシルーアデニン。 キシロフラｊノシルーアデニン。 リキソフランツシル−アデニン。 リボピランノシルーアデニン。 アラビノビラｒノシルーアデニン。 キシロピラにノシルーアデニン。 リキソビランノシルーアデニン。 デオキシ−３′−リボフラｌノシルーアデ二ン。 デオキシ−３′−アラピノフラノノシルーアデニン デオキシ−３′−リボピラｊノシルーアデニン及び デオキシ−３′−アラビノピラＩノシルーアデニン から成る群から選択されることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項乃至第５項のいずれかに記載のオリゴヌクレ
   オチド。 （７）式 又はその第４級アンモニウム塩、時にトリエチルアンモ
   ニウム塩又はナトリウム塩の如き無機塩で表わされるこ
   とを特徴とする特許−求の範囲第１項乃至第６項のいず
   れかに記載のオリゴヌクレオチド。 （８）１個又は数個の デオキシ−３′−リボース、デオキシ−３′−アラビノ
   ースの何れかのオシド基とリボース、アラビノース、キ
   シロース、リキソース、デオキシー３′−リボース、デ
   オキシ−３′−アラビノース。 デオキシ−２′−リボース、デオキシ−２７−キシロー
   ス、デオキシ−２７，３／−リボースの何れかの最終ヌ
   クレオシド基から成るヌクレオシド又はヌクレオチドを
   出発物質とし、第１の化合物を活性化剤の存在下で第２
   の化合物と反応させることがら成る特許請求の範囲第１
   項乃至第７項のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドの
   製造方法であって、第１の化合物が構造■のヌクレオチ
   ド単位又は対応するデオキシ−３′率位（式中、５′炭
   素がＰＯｆｆ−基に連鎖され、２′ヒドロキシ基は保護
   基Ｒ２により保護され且つ任意の３′ヒドロキシ基は保
   護基Ｒ３により保護されている）から成り、第２の化合
   物は構造■Ｒ，ＯＯＨ のヌクレオシド単位又は対応するチオキン−３′単位（
   式中、５′ヒドロキシ基は保峰基鳥により保護され巨つ
   任意の３′ヒドロキシ基は保護基島により保護されてい
   る）から成ね、前記活性化剤は、前記第１化合吻のヌク
   レオチド単位■のホスフェート基を第２化合物のヌクレ
   オシド単位の２′ヒドロキシ基と縮合させて構造■−■
   埠ρ　　Ｕ− の第３の化合物を得ることがで籾る活性化剤であり、第
   ３の化合物をＲ６又はＲ８のレベルで予め選択的に脱保
   護した後筒１の場合（Ｒ，レベルでの脱保護後の場合）
   は第３化合物全病造■〇− のヌクレオチド単位又は対応するデオキシ−３′単位（
   式中、２′炭素はＰｏＪ−基に連鎖され、５′炭素は保
   岐基Ｒ６により保護され、且つ任意の３′ヒドロキシ基
   は保護基Ｒ１により保護されている）から成る第４の化
   合物と、前記第４化合物のヌクレオチド単位■のホスフ
   ェート基と第３化合物のヌクレオチド単位の５′ヒドロ
   キ７基を縮合させて構造■−■−■ ■ の化合物を得ることができる活性化剤の存在下で反応さ
   せるか、或いは第２の場合（島レベル１°“の脱保護後
   の場合＞Ｆｉ第３化合吻を第１化合物と同−又は構造■ の別のヌクレオチド単位から成る第５の化合物と反応さ
   せて ■ の化合物を得ることを特徴とするオリゴヌクレオチドの
   製造方法。 （’ｌ）　　ＰＯ；−がＰＯ，Ｉ’Ｌ−（式中、Ｒは炭
   素数１〜４のアルキル基、特にメチル基、シアノ、アリ
   ールまたはアリールスルホニル基によりβ位が置換され
   たエチル基、ハロゲン原子または一トロ基により置換ま
   たは未置換のアリール基或いはトリハロゲノエチル基を
   表わす）に置換されることｔ−特徴とする特許請求の範
   囲第８項に記載の方法。 Ｒ３Ｒ２及び任意のも基はペース活性基であり且つ特に
   炭素数１〜４のアシル基好筐しくはアセチル基又はベン
   ゾイル基を表わし、Ｒ３はアシド活性基であり〆且つ特
   にモノメトキシトリチルの如きトリチル１１ｖ４体を表
   わすことを特徴とする特許請求の範囲第８項又は第９項
   に記載の方法。 ０１）　　活性化剤がアリールスルホニルクロリドの中
   から選択され、特にメシチレンクロリドであること全特
   徴とする特許請求の範囲第８項に記載の方法。 θ′４　　活性化剤が窒素含有へテロサイクルのアリー
   ルスルホネートから選択され、前記アリール基が炭素１
   〜３のアルキル基特にメチル又はイソプロピル基により
   置換又は未置換のアリール基であり、前記へテロサイク
   ルが特に音素原子によりｍｓされたイシダゾール、トリ
   アゾールまたはテトラゾールであることを特徴とする特
   許請求の範囲第９項に記載の方法。 ０３　　キシロアデノシンが式 （式中、Ｂｚはベンゾイル基、１ｎＭＴｒｏはモノメト
   キシトリチル基を表わす）の化合物の形状のオリゴヌク
   レオチドが、 １）Ｄ−キシロースを式 の化合物に変換させ、次いでアセ）　ＩＪシスして式 （式中、ＯＡｃはＯＨ，０００？表わす）の化合物を生
   成する工程、 ２）式旦の化合物を四塩化錫の存仕下でア七ト二トリル
   中でアデニンと縮合させて、式見 （式中、人はアデニンを表わす）の化合物を生成する工
   程、 ３）式ユの化合物ｋＡ択的に脱アセチル化、例えば酢酸
   とピリジンの混合物中でヒドラジンと反応させて、式ユ ニ１ の化合＊を生成する工程、。 ４）式−リ、の化合物をジメチルホルムアミド中のｔｃ
   ｒｔ−イ今ブチルジメチルシリル゛クロリド金用いて、
   式 （式中、ＯＴＢＯＭＳは ＯＨ８ ■ ０−８ｉ　−０（ＯＨｍ）ａ ０Ｈ。 を表わす）の化合物に変換させる工程、５）式−■の化
   合物を式、胚− の化合物に変換させる工程、 保護して、式、■ ＴＢＯＭＳ の化合物を生成する工程、 えばピリジン中の無水安息香酸との作用により保護して
   、式且 の化合物を生成する工程と、 ８）弐坦の化合物全選択的に脱シリル化して式１の化合
   物全生成する工程、 から得られることに％徴とする特許請求の範囲第８項乃
   至第１２項のいずれかに記載の方法。 ０４）式 の塩の形状の特許請求の範囲第７項に記載のオリゴヌク
   レオチドが、式２２ の化合物を式２ の化合物に反応させて式坦 の化合物を生成し、次いで式二の化合物を式亘の化合物
   と反応させて代印 の化合物を生成し、更に前記式旦の化合＠を式二 の化合物に変換させることにより得られることを特徴と
   する特ｆｆＨ＊求の範囲第８項乃至第１３項のいずれか
   にｄピ献の方法。 の化合物音アセトニトリルーピリジン混合物中テｏ−ク
   ロロフェニル−ホスホロジー（ｌアゾール−１，２，４
   −イブ）と作用させ、更に水性トリエチルアミンで処理
   して得られることを特徴とする特許請求の範囲第１４項
   に記載の方法。 Ｈ の化合物？ベンゾイル化、例えばピリジン中で無水安息
   香酸と反応させて式２゜ の化合物を生成し、次いで生成された式２ｏの化合物を
   例えばクロロポルム−メタノール混合物中でｐ　−）　
   ＩＪエンスルポン酸で処理して式２の化合物に変換する
   ことにより得られることを特徴とする特許請求の範囲第
   １４項又Ｆｉ第１５項に記載の方法。 （以丁余白）