JPS58141782A - 細胞及び組織培養用血清 - Google Patents
細胞及び組織培養用血清Info
- Publication number
- JPS58141782A JPS58141782A JP57024160A JP2416082A JPS58141782A JP S58141782 A JPS58141782 A JP S58141782A JP 57024160 A JP57024160 A JP 57024160A JP 2416082 A JP2416082 A JP 2416082A JP S58141782 A JPS58141782 A JP S58141782A
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- Japan
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- serum
- ceruloplasmin
- cell
- warm
- tissue culture
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はセルロプラスミン投与人以外の温血動物から採
取した細胞及び組織培養用血清に関する。
取した細胞及び組織培養用血清に関する。
セルロプラスミンは血漿蛋白の一つで、銅結合蛋白（糖
分８．０％）である。その分子量は１３４，０００〜１
５１，０００であり、分子中に８個の銅原子を含有し、
特徴的青色を呈する物質である。
分８．０％）である。その分子量は１３４，０００〜１
５１，０００であり、分子中に８個の銅原子を含有し、
特徴的青色を呈する物質である。
セルロブラスミンの生理的意義としては銅及び鉄代謝の
調節・や血漿中の抗酸化剤としての作用等が明らかにさ
れている。
調節・や血漿中の抗酸化剤としての作用等が明らかにさ
れている。
セルロプラスミンの収得法は公知であシ、例えばヒト血
清画分のコーンＶｌ−１ペーストからエタノール分画法
及びイオン交換クロマトグラフィーにて高純度に精製さ
れる。
清画分のコーンＶｌ−１ペーストからエタノール分画法
及びイオン交換クロマトグラフィーにて高純度に精製さ
れる。
本発明者等は人以外の温血動物にセルロプラスミンを投
与し、その動物から採取した血清が各種細胞及び組織の
培養においてその培養環境を改善し、従来この目的で汎
用されている牛脂児血清に匹敵若しくはそれ以上の増殖
効果を有することを見出し、本発明を完成した。
与し、その動物から採取した血清が各種細胞及び組織の
培養においてその培養環境を改善し、従来この目的で汎
用されている牛脂児血清に匹敵若しくはそれ以上の増殖
効果を有することを見出し、本発明を完成した。
現在、細胞及び組織培養において牛脂児血清が必須の因
子としてその培養基に添加されている。
子としてその培養基に添加されている。
しかしながら牛脂児血清は必ずしも安価でなく、畜産上
の問題もちシ、これを大量に入手するには困難な状態に
ある。
の問題もちシ、これを大量に入手するには困難な状態に
ある。
しかるに本発明者等はこれに代りうるものとして、更に
はこれ以上のものを見出すべく鋭意研究の結果、セルロ
プラスミン投与人以外の温血動物の血清がこの様な効果
を発揮することを初めて見出したものであシ、従って本
発明が産業的見地からも極めて意義深いものである。
はこれ以上のものを見出すべく鋭意研究の結果、セルロ
プラスミン投与人以外の温血動物の血清がこの様な効果
を発揮することを初めて見出したものであシ、従って本
発明が産業的見地からも極めて意義深いものである。
以下に本発明に係る血清の調製法について述べる。
セルロプラスミンが投与される動物としては、家兎、ラ
ット、家禽の様な温血ン」・動物、また大量採取を目的
として、羊、牛、馬の様な温血大動物が挙げられるが、
家兎や羊が望ましい。
ット、家禽の様な温血ン」・動物、また大量採取を目的
として、羊、牛、馬の様な温血大動物が挙げられるが、
家兎や羊が望ましい。
セルロプラスミンの１回投与量は動物の体重１Ｋｇ当り
０．１〜１０ｆｎｇが適当であるが、投与量が少ないと
きは投与期間を延長すればよい。投与経路は筋注、皮下
、腹腔内投与でも可能であるが、静脈内投与が望ましい
。その投与期間は１回の投与量と関係する。例えば、家
兎に対してセルロプラスミンを体重Ｉ Ｋｙ当り１■を
静脈内投与するときには、１日１回、１週間の反復投与
により充分目的を達することができる。
０．１〜１０ｆｎｇが適当であるが、投与量が少ないと
きは投与期間を延長すればよい。投与経路は筋注、皮下
、腹腔内投与でも可能であるが、静脈内投与が望ましい
。その投与期間は１回の投与量と関係する。例えば、家
兎に対してセルロプラスミンを体重Ｉ Ｋｙ当り１■を
静脈内投与するときには、１日１回、１週間の反復投与
により充分目的を達することができる。
この様にセルロプラスミン投与された動物から血液を採
取し、常法により血清を分離し、本発明の血清製品とさ
れるが、長期保存のために、必要に応じ公知の保存剤を
添加すると共に凍結保存または凍結乾燥するのが望まし
い。
取し、常法により血清を分離し、本発明の血清製品とさ
れるが、長期保存のために、必要に応じ公知の保存剤を
添加すると共に凍結保存または凍結乾燥するのが望まし
い。
本発明に係る血清は牛脂児血清の代替物となるのである
が、牛脂児血清と併用することも可能であることが以下
に述べる効果からも明らかであろう。
が、牛脂児血清と併用することも可能であることが以下
に述べる効果からも明らかであろう。
次に本発明に係る血清の効果について述べる。
（１） マウス骨髄細胞培養における効果培養条件：
マツコイ５Ａ培地（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、 Ｕ、Ｓ、ん）
中に２０％牛脂児血清、１０％ＣＳＦ （コロニー形成
刺戟因子）、０．３％寒天及びマウス骨髄有核細胞をＩ
Ｘ １０５個／−濃度に添加し、炭酸ガス培養器にて
７日間培養した。
マツコイ５Ａ培地（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、 Ｕ、Ｓ、ん）
中に２０％牛脂児血清、１０％ＣＳＦ （コロニー形成
刺戟因子）、０．３％寒天及びマウス骨髄有核細胞をＩ
Ｘ １０５個／−濃度に添加し、炭酸ガス培養器にて
７日間培養した。
上記標準的培養条件では、顆粒球系幹細胞は分化増殖し
、５０個以上の細胞からなるコロニーを形成し、通常こ
のコロニーの形成数はｌ×１０５個の骨髄有核細胞当り
２００個前後である。
、５０個以上の細胞からなるコロニーを形成し、通常こ
のコロニーの形成数はｌ×１０５個の骨髄有核細胞当り
２００個前後である。
上記標準的培養基中に製造例１で得たセルロプラスミン
投与家兎血清を５チ及び１０ｑ６濃度に添加した場合の
コロニー形成数はそれぞれ２６０個及び３２０個と有意
に増加した。
投与家兎血清を５チ及び１０ｑ６濃度に添加した場合の
コロニー形成数はそれぞれ２６０個及び３２０個と有意
に増加した。
一方上記標準的培養基中の牛脂児血清を製造例１で得た
セルロプラスミン投与家兎血清と置換し、同一条件下で
培養した結果、旺盛な細胞分化増殖がすすみ、牛胎児血
清２０％添加例に匹敵する増殖効果が約７％添加によっ
てもたらされた。
セルロプラスミン投与家兎血清と置換し、同一条件下で
培養した結果、旺盛な細胞分化増殖がすすみ、牛胎児血
清２０％添加例に匹敵する増殖効果が約７％添加によっ
てもたらされた。
尚、上記標準的培養基から牛脂児血清を除去した培養基
中では、Ｃ５Ｆが存在するにも拘らずコロニーの形成は
全く認められなかった。
中では、Ｃ５Ｆが存在するにも拘らずコロニーの形成は
全く認められなかった。
（２） マウス結合組織由来線維芽株細胞（マウスＬ
細胞）培養における効果 培養条件：マウスＬ細胞（２，４Ｘ １０’個／−）を
酵母抽出物とラクトアルブミン氷解物を含むアール培地
に１０％牛脂児血清を添加して浮遊培養した。７日間の
培養後にはマウスＬ細胞は２．６×１０’個／ｍｅと約
１００倍に増゛殖した。
細胞）培養における効果 培養条件：マウスＬ細胞（２，４Ｘ １０’個／−）を
酵母抽出物とラクトアルブミン氷解物を含むアール培地
に１０％牛脂児血清を添加して浮遊培養した。７日間の
培養後にはマウスＬ細胞は２．６×１０’個／ｍｅと約
１００倍に増゛殖した。
上記培養基中に製造例２で得たセルロプラスミン投与羊
血清を１％濃度に添加した場合、５日目でマウスＬ細胞
は約１００倍に増殖し、７日目には約８７０倍に増殖し
た。
血清を１％濃度に添加した場合、５日目でマウスＬ細胞
は約１００倍に増殖し、７日目には約８７０倍に増殖し
た。
一方、上記の培養基中の牛脂児血清を製造例２で得たセ
ルロプラスミン投与家兎血清と置換し、同一条件下で培
養した結果、牛脂児血清の添加例よりもむしろ良好な増
殖結果（約１２０倍に増殖）を得た。また細胞の生存率
（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ）は牛胎児血清添加例では９１
％であったが、セルロプラスミン投与羊血清添加例では
９７〜９８チと有意に上昇した。
ルロプラスミン投与家兎血清と置換し、同一条件下で培
養した結果、牛脂児血清の添加例よりもむしろ良好な増
殖結果（約１２０倍に増殖）を得た。また細胞の生存率
（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ）は牛胎児血清添加例では９１
％であったが、セルロプラスミン投与羊血清添加例では
９７〜９８チと有意に上昇した。
上記と同様の効果が動物の個体差に関係なく見られた。
このことからセルロプラスミン投与された動物では、各
種細胞の増殖を促進させる因子が産生されることが判る
。また、該血清中には細胞増殖を抑える因子が含まれて
いないことも判る。
種細胞の増殖を促進させる因子が産生されることが判る
。また、該血清中には細胞増殖を抑える因子が含まれて
いないことも判る。
以下に本発明に係る血清の製造例を示す。
製造例１゜
セルロプラスミンを生理食塩液にて０．２チ濃度に希釈
し、除菌濾過したのち家兎（体重２ Ｋｙ ）の耳静脈
よシ１日１回、１−ずつ１０日間に亘り連日投与した。
し、除菌濾過したのち家兎（体重２ Ｋｙ ）の耳静脈
よシ１日１回、１−ずつ１０日間に亘り連日投与した。
第１２日月にその家兎を無麻酔下に固定し、頚動脈より
全採血゛した。−夜装置したのち、分離した血清を滅菌
遠心管にとり遠心分離することにより血球成分を完全に
除去し血清を得た。
全採血゛した。−夜装置したのち、分離した血清を滅菌
遠心管にとり遠心分離することにより血球成分を完全に
除去し血清を得た。
直ちに除菌沢過し、滅菌瓶中に分注し密栓シールの上凍
結保存した。本製品を凍結保存した場合、２年以上の長
期に亘り安定である。また細菌汚染に留意すれば２〜１
０°Ｃの保存条件下では数ケ月安定である。
結保存した。本製品を凍結保存した場合、２年以上の長
期に亘り安定である。また細菌汚染に留意すれば２〜１
０°Ｃの保存条件下では数ケ月安定である。
製造例２゜
羊（体重３５ Ｋｙ ’）に対し、セルロプラスミン１
回当り０．５■／Ｋｇの投与量にて頚静脈より１日１回
、２週間に亘り連日投与し、頚動脈より採血し、細胞及
び組織培養において増殖促進効果を有する血清を得た。
回当り０．５■／Ｋｇの投与量にて頚静脈より１日１回
、２週間に亘り連日投与し、頚動脈より採血し、細胞及
び組織培養において増殖促進効果を有する血清を得た。
特許出願人 清 水 盈 行・
Claims (1)
- セルロプラスミン投与人以外の温血動物から採取した細
胞及び組織培養用血清。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57024160A JPS604712B2 (ja) | 1982-02-16 | 1982-02-16 | 細胞及び組織培養用血清 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57024160A JPS604712B2 (ja) | 1982-02-16 | 1982-02-16 | 細胞及び組織培養用血清 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58141782A true JPS58141782A (ja) | 1983-08-23 |
| JPS604712B2 JPS604712B2 (ja) | 1985-02-06 |
Family
ID=12130579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57024160A Expired JPS604712B2 (ja) | 1982-02-16 | 1982-02-16 | 細胞及び組織培養用血清 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS604712B2 (ja) |
-
1982
- 1982-02-16 JP JP57024160A patent/JPS604712B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS604712B2 (ja) | 1985-02-06 |
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