JPS5813158B2 - ペプチドの製造方法 - Google Patents
ペプチドの製造方法Info
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- JPS5813158B2 JPS5813158B2 JP51100189A JP10018976A JPS5813158B2 JP S5813158 B2 JPS5813158 B2 JP S5813158B2 JP 51100189 A JP51100189 A JP 51100189A JP 10018976 A JP10018976 A JP 10018976A JP S5813158 B2 JPS5813158 B2 JP S5813158B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はペプチドの製造方法に関し、特に酵素を触媒と
するペプチドの合成方法に関する。
するペプチドの合成方法に関する。
従来のペプチドを合成する代表的な方法としてはカルボ
キシル活性法に基づくアジド法、混合酸無水物法、カル
ボジイミド法、活性エステル法、酸塩化物法を挙げるこ
とができる。
キシル活性法に基づくアジド法、混合酸無水物法、カル
ボジイミド法、活性エステル法、酸塩化物法を挙げるこ
とができる。
しかし、これらの従来法ではカルボキシル末端アミノ酸
残基におけるラセミ化および副反応の生起、温度制御、
溶媒の選択をはじめアミン保護基およびカルボキシル保
護基の性質、アミノ酸側鎖の官能基に及ぼす影響等を考
慮しなければならず工業的には種々の問題かある。
残基におけるラセミ化および副反応の生起、温度制御、
溶媒の選択をはじめアミン保護基およびカルボキシル保
護基の性質、アミノ酸側鎖の官能基に及ぼす影響等を考
慮しなければならず工業的には種々の問題かある。
フラグメント縮合法はペプチド合成反応をフラグメント
ごとに分割でき不慮の失敗による損失を最小限にくいと
めることができるばかりでなく工業的には有利な点が多
い。
ごとに分割でき不慮の失敗による損失を最小限にくいと
めることができるばかりでなく工業的には有利な点が多
い。
しかし、フラグメント縮合法ではラセミ化を起こす可能
性のない唯一のアミノ酸であるグリシンがカルボキシル
末端に在る場合はよいが、それ以外のアミノ酸の場合に
はラセミ化の生起が避けられないという重大な欠点を有
するものである。
性のない唯一のアミノ酸であるグリシンがカルボキシル
末端に在る場合はよいが、それ以外のアミノ酸の場合に
はラセミ化の生起が避けられないという重大な欠点を有
するものである。
ペプチドの製造においてラセミ化を避けることは最も重
要な問題であり、反応中にラセミ化が起った場合には生
成物を不純にし、不必要な異性体の除去を要し工業的に
は不利となる。
要な問題であり、反応中にラセミ化が起った場合には生
成物を不純にし、不必要な異性体の除去を要し工業的に
は不利となる。
前述のペプチド結合形成に関する従来法のうち、アジド
法はラセミ化を起こしにくい唯一の方法である点で利用
価値が高いが他の方法に比較して操作が煩雑であり、ヒ
ドラジド生成工程において副反応が生起し、そのため収
率では必ずしも優れているとはいえない。
法はラセミ化を起こしにくい唯一の方法である点で利用
価値が高いが他の方法に比較して操作が煩雑であり、ヒ
ドラジド生成工程において副反応が生起し、そのため収
率では必ずしも優れているとはいえない。
前述の純有機化学的方法とは別にパパインおよびキモト
リプシンによるペプチド結合の生成が報告されている。
リプシンによるペプチド結合の生成が報告されている。
（たとえばＪ．Ｓ．Ｆｒｕｔｏｎ“Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”Ｖｏｌ５
，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．ＮｅｗＹｏ
ｒｋＮ．Ｙ．１９４９） この方法を反応式で示すと次ぎのとおりである。
ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”Ｖｏｌ５
，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．ＮｅｗＹｏ
ｒｋＮ．Ｙ．１９４９） この方法を反応式で示すと次ぎのとおりである。
前記（１）〜（３）の従来法において共通している事項
は（■）のいわゆるアミン成分の末端に結合しているフ
エニルアミノ基は容易に脱離しえない基であり、一旦形
成したペプチドから脱離するには激しい条件下での加水
分解が要求され、結局ペプチド鎖の開裂が生起するとい
う重大な欠陥があり、したがって、これらの方法をペプ
チド合成に利用することは不可能と考えられていた。
は（■）のいわゆるアミン成分の末端に結合しているフ
エニルアミノ基は容易に脱離しえない基であり、一旦形
成したペプチドから脱離するには激しい条件下での加水
分解が要求され、結局ペプチド鎖の開裂が生起するとい
う重大な欠陥があり、したがって、これらの方法をペプ
チド合成に利用することは不可能と考えられていた。
また、（４）の方法はトランスアミデーションおよびト
ランスペブチデーションという副反応を伴い、実用的で
ないことが報告されている。
ランスペブチデーションという副反応を伴い、実用的で
ないことが報告されている。
〔たとえばＲ．Ｂ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ等；Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ，１８５，６２９（１９５０）およびＪ．Ｓ
．Ｆｒｕｔｏｎ等；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０４，
８９１（１９５３）〕 すなわち（４）の方法ではアミン成分の末端に結合して
いる酸アミド体の第１級アミン基がパパインによるアミ
ダーゼ作用を促進させるものである。
．Ｃｈｅｍ，１８５，６２９（１９５０）およびＪ．Ｓ
．Ｆｒｕｔｏｎ等；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０４，
８９１（１９５３）〕 すなわち（４）の方法ではアミン成分の末端に結合して
いる酸アミド体の第１級アミン基がパパインによるアミ
ダーゼ作用を促進させるものである。
したがって前記の方法は、いずれもアミン成分の末端カ
ルボキシル基の保護基がアニリドまたは第１級アミドの
結合を形成する場合においてパパインまたはキモトリプ
シンがペプチド結合形成の触媒作用を有することを示す
学術的意義を有するに止り、オリゴペプチド、ポリペプ
チドの合成に対する可能性を示すものではなかった。
ルボキシル基の保護基がアニリドまたは第１級アミドの
結合を形成する場合においてパパインまたはキモトリプ
シンがペプチド結合形成の触媒作用を有することを示す
学術的意義を有するに止り、オリゴペプチド、ポリペプ
チドの合成に対する可能性を示すものではなかった。
本発明はこのような現状に鑑みてなされたものであり、
その目的は所望のオリゴペプチドまたはポリペプチドを
簡単な操作で高純度かつ高収率で製造する方法を提供す
ることである。
その目的は所望のオリゴペプチドまたはポリペプチドを
簡単な操作で高純度かつ高収率で製造する方法を提供す
ることである。
すなわち本発明は、セリンプロテイナーゼに属する酵素
の存在下に一般式Ｘ−Ａ−ＯＨ（式中Ｘは末端アミン基
の保護基であり、Ａはアミノ酸残基またはペプチド残基
である）で示されるＮ末端に保護基を有するアミノ酸ま
たはペプチドと一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ（式中Ｙは第３級アル
コキシ基、置換または非置換ベンジルオキシ基、置換ま
たは非置換ベンジルアミノ基、置換または非置換ベンズ
ヒドリルオキシ基および置換または非置換ベンズヒドリ
ルアミン基よりなる群から選ばれた末端カルボキシル基
の保護基であり、ＢはＡと同一のまたは異なるアミノ酸
残基またはペプチド残基である）で示されるＣ末端に保
護基を有するアミノ酸またはペプチドとを緩衝液の不在
下に塩基又は塩基及び酸を添加して水性溶液中セリンプ
ロテイナーゼが酵素活性を示すｐＨを維持して反応させ
ることを特徴とする一般式Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ（式中Ｘ，Ａ
，Ｂ，Ｙは前記定義と同一である）で示されるペプチド
の製造方法である。
の存在下に一般式Ｘ−Ａ−ＯＨ（式中Ｘは末端アミン基
の保護基であり、Ａはアミノ酸残基またはペプチド残基
である）で示されるＮ末端に保護基を有するアミノ酸ま
たはペプチドと一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ（式中Ｙは第３級アル
コキシ基、置換または非置換ベンジルオキシ基、置換ま
たは非置換ベンジルアミノ基、置換または非置換ベンズ
ヒドリルオキシ基および置換または非置換ベンズヒドリ
ルアミン基よりなる群から選ばれた末端カルボキシル基
の保護基であり、ＢはＡと同一のまたは異なるアミノ酸
残基またはペプチド残基である）で示されるＣ末端に保
護基を有するアミノ酸またはペプチドとを緩衝液の不在
下に塩基又は塩基及び酸を添加して水性溶液中セリンプ
ロテイナーゼが酵素活性を示すｐＨを維持して反応させ
ることを特徴とする一般式Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ（式中Ｘ，Ａ
，Ｂ，Ｙは前記定義と同一である）で示されるペプチド
の製造方法である。
本発明について概説すると、本発明で使用されるセリン
プロテイナーゼ（Ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
）に属する酵素としてはズブチリシン（Ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓｉｎ）、アスベルギウス・アルカリ・プロテイナーゼ
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅ）、エラスターゼ（Ｅｌａｓｔａｓｅ）
、α−リテックプロテイナーゼ（α−Ｌｙｔｉｃ ｐｒ
ｏｔｅｉｎａｓｅ）およびキモトリプシン（Ｃｈｙｍｏ
ｔｒｙｐｓ ｉｎ）が例示される。
プロテイナーゼ（Ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
）に属する酵素としてはズブチリシン（Ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓｉｎ）、アスベルギウス・アルカリ・プロテイナーゼ
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅ）、エラスターゼ（Ｅｌａｓｔａｓｅ）
、α−リテックプロテイナーゼ（α−Ｌｙｔｉｃ ｐｒ
ｏｔｅｉｎａｓｅ）およびキモトリプシン（Ｃｈｙｍｏ
ｔｒｙｐｓ ｉｎ）が例示される。
これらの酵素はインシュリンＢ鎖の加水分解について検
討されＬｅｕ（１５）−Ｔｙｒ（１６）およびＴｙｒ（
１６）−Ｌｅｕ（１７）に対して高い活性が報告され、
またアシルアミノ酸エステルに対してもエステラーゼ活
性を示している。
討されＬｅｕ（１５）−Ｔｙｒ（１６）およびＴｙｒ（
１６）−Ｌｅｕ（１７）に対して高い活性が報告され、
またアシルアミノ酸エステルに対してもエステラーゼ活
性を示している。
Ｂ．Ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびその近縁菌より生産される
サブチリシンにはＣｏｒｓｂｅｒｙ，Ｎｃｖａ．ＢＰＮ
’′のタイプがあり、その放線菌、カビ等より単離され
たアルカリプロテイナーゼが知られている。
サブチリシンにはＣｏｒｓｂｅｒｙ，Ｎｃｖａ．ＢＰＮ
’′のタイプがあり、その放線菌、カビ等より単離され
たアルカリプロテイナーゼが知られている。
出発物質として使用される一般式Ｘ−Ａ−ＯＨ（式中Ｘ
は末端アミノ基の保護基であり、Ａはアミノ酸残基また
はペプチド残基である）で示されるアミノ酸またはペプ
チドは前記（１）〜（４）の既知方法に示される（１）
に相当する化合物であり、本明細書では以下この化合物
を酸成分という。
は末端アミノ基の保護基であり、Ａはアミノ酸残基また
はペプチド残基である）で示されるアミノ酸またはペプ
チドは前記（１）〜（４）の既知方法に示される（１）
に相当する化合物であり、本明細書では以下この化合物
を酸成分という。
酸成分においてＡはアミノ酸およびそのペプチドの残基
を意味し、アミノ酸としてはペプチド合成の分野で使用
されるグリシン、アラニン、バリンノルバリン、ロイシ
ン、イソロイシン、ノルロイシンのようなモノアミノモ
ノカルボン酸、セリン、スレオニン、ホモセリンのよう
なオキシアミノ酸、メチオニン、側鎖官能基の保護され
たシスチン又はシステインのようなイオウを含むアミノ
酸、側鎖カルボキシル基の保護されたアスパラギン酸又
はグルタミン酸のようなモノアミノジカルボン酸、（側
鎖アミン基の保護された）オルニチン、リジン又はアル
ギニンのようなジアミノモノカルボン酸などの脂肪族ア
ミノ酸並にフエニルアラニン、チロシンのような芳香族
核またはヒスチジン、トリプトファンのような複素環を
もつアミノ酸が例示され、本明細書ではこの分野で通常
使用される略号により表示され、ペプチドについても同
様である。
を意味し、アミノ酸としてはペプチド合成の分野で使用
されるグリシン、アラニン、バリンノルバリン、ロイシ
ン、イソロイシン、ノルロイシンのようなモノアミノモ
ノカルボン酸、セリン、スレオニン、ホモセリンのよう
なオキシアミノ酸、メチオニン、側鎖官能基の保護され
たシスチン又はシステインのようなイオウを含むアミノ
酸、側鎖カルボキシル基の保護されたアスパラギン酸又
はグルタミン酸のようなモノアミノジカルボン酸、（側
鎖アミン基の保護された）オルニチン、リジン又はアル
ギニンのようなジアミノモノカルボン酸などの脂肪族ア
ミノ酸並にフエニルアラニン、チロシンのような芳香族
核またはヒスチジン、トリプトファンのような複素環を
もつアミノ酸が例示され、本明細書ではこの分野で通常
使用される略号により表示され、ペプチドについても同
様である。
カルボキシ成分の遊離末端アミン基に対する保護基とし
ては第３級アルコシカルボニル、たとえば第３級プチル
オキシカルボニル（Ｂｏｃ−）、第３級アミルオキシカ
ルボニル（ｔ−Ａｏｃ−）など置換または非置換ベンジ
ルオキシカルボニル、たとえばベンジルオキシカルボニ
ル（ｚ−）、Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（
ＰＭＺ−）、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボ
ニル〔Ｚ（ＯＭｅ）２−〕、２， ４，６−トリメチル
ベンジルオキシカルボニル（ＴＭＺ−）、Ｐ−フエニル
アゾベンジルオキシカルボニル（ＰＺ−）、Ｐ−トルエ
ンスルホニル（Ｔｏｓ−）、ｏ−ニトロフェニルスルフ
エニル（Ｎｐｓ−）などが代表的な例として挙げられる
。
ては第３級アルコシカルボニル、たとえば第３級プチル
オキシカルボニル（Ｂｏｃ−）、第３級アミルオキシカ
ルボニル（ｔ−Ａｏｃ−）など置換または非置換ベンジ
ルオキシカルボニル、たとえばベンジルオキシカルボニ
ル（ｚ−）、Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（
ＰＭＺ−）、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボ
ニル〔Ｚ（ＯＭｅ）２−〕、２， ４，６−トリメチル
ベンジルオキシカルボニル（ＴＭＺ−）、Ｐ−フエニル
アゾベンジルオキシカルボニル（ＰＺ−）、Ｐ−トルエ
ンスルホニル（Ｔｏｓ−）、ｏ−ニトロフェニルスルフ
エニル（Ｎｐｓ−）などが代表的な例として挙げられる
。
酸成分は遊離酸として反応系に添加されるが反応系のｐ
Ｈ条件において電離しうる塩として添加されてもよい。
Ｈ条件において電離しうる塩として添加されてもよい。
一方の出発物質として使用される一般式Ｈ−Ｂ−Ｙで示
されるアミノ酸またはペプチドは前記（１）〜（４）の
既知方法で示される（■）の化合物に相当する化合物で
あり、本明細書では以下アミン成分といい、ＢはＡと同
一のまたは異なるアミノ酸またはペプチドの残基を示す
。
されるアミノ酸またはペプチドは前記（１）〜（４）の
既知方法で示される（■）の化合物に相当する化合物で
あり、本明細書では以下アミン成分といい、ＢはＡと同
一のまたは異なるアミノ酸またはペプチドの残基を示す
。
アミン成分におけるカルボキシル基の保護基としては第
３級アルコキシ基、たとえば第３級ブトキシ（−ＯＢｕ
−ｔ）、置換または非置換ベンジルオキシ基たとえばベ
ンジルオキシ（ＯＢｚｌ）、置換または非置換ベンズヒ
ドリルオキシ基たとえばベンズヒドリルオキシ（−ＯＢ
ｈ）、置換または非置換ベンジルアミン基たとえば２−
４−ジメトキシベンジルアミノ（−ＮＨＤＭＢ）、置換
または非置換ベンズヒドリルアミノ基たとえばベンズヒ
ドリルアミノ（−ＮＨＢｈ）等を用いる。
３級アルコキシ基、たとえば第３級ブトキシ（−ＯＢｕ
−ｔ）、置換または非置換ベンジルオキシ基たとえばベ
ンジルオキシ（ＯＢｚｌ）、置換または非置換ベンズヒ
ドリルオキシ基たとえばベンズヒドリルオキシ（−ＯＢ
ｈ）、置換または非置換ベンジルアミン基たとえば２−
４−ジメトキシベンジルアミノ（−ＮＨＤＭＢ）、置換
または非置換ベンズヒドリルアミノ基たとえばベンズヒ
ドリルアミノ（−ＮＨＢｈ）等を用いる。
これらのアミン成分のカルボキシル末端の保護基は本発
明で用いる酵素すなわちセリンプロテイナーゼに属する
酵素のエステラーゼ作用を受けないものであることを要
する。
明で用いる酵素すなわちセリンプロテイナーゼに属する
酵素のエステラーゼ作用を受けないものであることを要
する。
本発明で用いる酸成分及びアミン成分はすでに述べたこ
とから明らかなようにアミノ酸又はペプチド残基の側鎖
に官能基のある場合を含むものである。
とから明らかなようにアミノ酸又はペプチド残基の側鎖
に官能基のある場合を含むものである。
この場合これらの官能基を保護するのが望ましいことが
多く、その保護基としては、ω−アミノ基（Ｎω）の保
護にはＮω−ベンジルオキシカルボニル（Ｎω−Ｚ）、
ｔ−ブトキシカルボニル（Ｎω−Ｂｏｃ）及びトシル（
Ｎω−Ｔｏｃ）などを、アルギニンのＮ−グアニジン基
（ＮＧ）の保護にはニトロ基のほかＮＧ−ベンジルオキ
シカルボニル（ＮＧ−Ｚ）およびＮＧ，ＮＧ−ジベンジ
ルオキシカルボニル（ＮＧ−Ｚ−Ｚ）などを、イミダゾ
ール核（Ｎｉｍ）の保護にはＮｉｍ−ベンジル（Ｎｉｍ
−Ｂｚｌ）及びトシル（Ｎｉｍ−Ｔｏｓ）などを、ω−
カルボキシル基の保護にはω−ベンジルオキシ（−ＯＢ
ｚｌ）などを、またオキシアミノ酸の水酸基が保護され
る必要のある場合には脂肪族、芳香族アミノ酸の別なく
、ｏ−エーテル型、たとえばｏ−ベンジル基（ＯＢｚｌ
）などを使用することができ、システインのメルカプト
基のＳ−保護基としてはＳ−ベンジル基（ＳＢｚｌ）な
どが使用できる。
多く、その保護基としては、ω−アミノ基（Ｎω）の保
護にはＮω−ベンジルオキシカルボニル（Ｎω−Ｚ）、
ｔ−ブトキシカルボニル（Ｎω−Ｂｏｃ）及びトシル（
Ｎω−Ｔｏｃ）などを、アルギニンのＮ−グアニジン基
（ＮＧ）の保護にはニトロ基のほかＮＧ−ベンジルオキ
シカルボニル（ＮＧ−Ｚ）およびＮＧ，ＮＧ−ジベンジ
ルオキシカルボニル（ＮＧ−Ｚ−Ｚ）などを、イミダゾ
ール核（Ｎｉｍ）の保護にはＮｉｍ−ベンジル（Ｎｉｍ
−Ｂｚｌ）及びトシル（Ｎｉｍ−Ｔｏｓ）などを、ω−
カルボキシル基の保護にはω−ベンジルオキシ（−ＯＢ
ｚｌ）などを、またオキシアミノ酸の水酸基が保護され
る必要のある場合には脂肪族、芳香族アミノ酸の別なく
、ｏ−エーテル型、たとえばｏ−ベンジル基（ＯＢｚｌ
）などを使用することができ、システインのメルカプト
基のＳ−保護基としてはＳ−ベンジル基（ＳＢｚｌ）な
どが使用できる。
本明細書でいう保護基は少なくとも導入された基が反応
に際して安定であることおよび生成物から容易に脱離で
き、その脱離の際に副反応を生起しないことの条件を満
すことが必要である。
に際して安定であることおよび生成物から容易に脱離で
き、その脱離の際に副反応を生起しないことの条件を満
すことが必要である。
出発物質のカルボキシ成分およびアミン成分は前記の保
護基を有するほか、アミン成分のＮα−アミン基は遊離
の場合は勿論、塩酸塩、臭化水素酸塩、しゆう酸塩、Ｐ
−トルエンスルホン酸塩および酢酸塩などの無機または
有機酸塩の形態のいずれのものを使用してもよい。
護基を有するほか、アミン成分のＮα−アミン基は遊離
の場合は勿論、塩酸塩、臭化水素酸塩、しゆう酸塩、Ｐ
−トルエンスルホン酸塩および酢酸塩などの無機または
有機酸塩の形態のいずれのものを使用してもよい。
本発明においてペプチド結合を生成する脱水縮合反応は
水性溶液中、本発明で用いる酵素が酵素活性を示すｐＨ
の範囲で実施することが必要である。
水性溶液中、本発明で用いる酵素が酵素活性を示すｐＨ
の範囲で実施することが必要である。
この範囲はほぼｐＨ７乃至９程度の範囲である。
本発明において、反応溶液のｐＨをこの範囲に維持する
ために、緩衝液を使用することなく、塩基又は塩基及び
酸を反応溶液に添加する。
ために、緩衝液を使用することなく、塩基又は塩基及び
酸を反応溶液に添加する。
具体的には、反応装置に反応溶液のｐＨを検出する手段
と塩基及び酸を供給する手段とを設け、検出した反応溶
液のｐＨに応じて、これに調節された量の塩基を供給し
、ｐＨが９程度を超えた場合には酸を供給する。
と塩基及び酸を供給する手段とを設け、検出した反応溶
液のｐＨに応じて、これに調節された量の塩基を供給し
、ｐＨが９程度を超えた場合には酸を供給する。
出発物質は一般にアミン成分１モルに対して酸成分０．
８〜２モル好ましくは１〜１．５モルの割合で用いるこ
れらの出発物質が水性溶媒に溶け難い場合にはメタノー
ル、エタノールのようなアルコール、ジメチルホルムア
ミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスル
ホキシド等の溶媒を加えてその溶解性を改善することが
できる。
８〜２モル好ましくは１〜１．５モルの割合で用いるこ
れらの出発物質が水性溶媒に溶け難い場合にはメタノー
ル、エタノールのようなアルコール、ジメチルホルムア
ミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスル
ホキシド等の溶媒を加えてその溶解性を改善することが
できる。
この場合その添加量は本発明の酵素反応を阻害しない程
度に止める必要があり、通常水１重量部に対して溶媒１
重量部以下を用いる。
度に止める必要があり、通常水１重量部に対して溶媒１
重量部以下を用いる。
本発明の反応は水性溶媒中で進行し、反応生成物が相対
的にこれに対する溶解度の小さくなる系であることが必
要で、好ましくは反応生成物が難溶または不溶となる系
である。
的にこれに対する溶解度の小さくなる系であることが必
要で、好ましくは反応生成物が難溶または不溶となる系
である。
反応に要する酵素量はアミン成分１ｍｍｏｌに対して１
０〜５００ｍｇ、望ましくは１００〜４００ｍｇである
。
０〜５００ｍｇ、望ましくは１００〜４００ｍｇである
。
反応温度は酵素活性を維持する観点から一般に２０〜５
５℃である。
５℃である。
前記の条件で反応を実施することにより、反応は円滑に
進行し通常１〜２４時間で完結する。
進行し通常１〜２４時間で完結する。
生成物は反応系外に析出するので容易に単離することが
できる。
できる。
次に本発明を実施例について説明するが、本発明はこれ
によりなんら限定されるものではない。
によりなんら限定されるものではない。
実施例 １
Ｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＨ ３９８．５ｍｇ（１ｍ ｍ
ｏｌ）及びＨ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ３２０．４ｍ
ｇ（１ｍ ｍｏｌ）をフラスコ中で水１０ｍｌに懸濁し
た。
ｏｌ）及びＨ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ３２０．４ｍ
ｇ（１ｍ ｍｏｌ）をフラスコ中で水１０ｍｌに懸濁し
た。
これにｐＨメーターのガラス電極を挿入し、水酸化ナト
リウム水溶液（１／１０規定）を滴下してｐＨを７．５
〜８．０に調節しながら、ナガーゼ１５０ｍｇを添加し
、フラスコを振盪して固形分を溶解させた。
リウム水溶液（１／１０規定）を滴下してｐＨを７．５
〜８．０に調節しながら、ナガーゼ１５０ｍｇを添加し
、フラスコを振盪して固形分を溶解させた。
これを３８℃で２０時間振盪して反応させた。
この間ガラス電極ｐＨメーターにより反応液のｐＨを測
定し、水酸化ナトリウム水溶液（１／１０規定）を添加
して反応液のｐＨを７．５〜８に保持した。
定し、水酸化ナトリウム水溶液（１／１０規定）を添加
して反応液のｐＨを７．５〜８に保持した。
析出した結晶を濾別し、水、希塩酸（１規定）、水、ア
ンモニア水（７％）及び水で順次洗浄後乾燥した。
ンモニア水（７％）及び水で順次洗浄後乾燥した。
これを酢酸エチル−石油エーテルより再結晶し、ｍ．ｐ
．１３０〜１４５℃を有するＺ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｈ
ｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ１９０ｍｇを得た。
．１３０〜１４５℃を有するＺ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｈ
ｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ１９０ｍｇを得た。
収率２７．１％。実施例 ２
Ｚ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＯＨ ４７１．５ｍｇ（１ｍ ｍ
ｏｌ）及びＨ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ ３２０．４
ｍｇをフラスコ中で水１０ｍｌに懸濁した。
ｏｌ）及びＨ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＢｕｔ ３２０．４
ｍｇをフラスコ中で水１０ｍｌに懸濁した。
これにｐＨメーターのガラス電極を挿入し、水酸化ナト
リウム水溶液（１／１０規定）を滴下して、ｐＨを７．
５〜８．０に調節しながらナガーゼ１５０ｍｇを添加し
、フラスコを振盪して固形分を溶解させた。
リウム水溶液（１／１０規定）を滴下して、ｐＨを７．
５〜８．０に調節しながらナガーゼ１５０ｍｇを添加し
、フラスコを振盪して固形分を溶解させた。
これを３８℃で２０時間振盪して反応させた。
この間にガラス電極ｐＨメーターにより反応液のｐＨを
測定し、希塩酸（１／１０規定）を添加して反応液のｐ
Ｈを７．５〜８に保持した。
測定し、希塩酸（１／１０規定）を添加して反応液のｐ
Ｈを７．５〜８に保持した。
析出した結晶を濾別し、水、希塩酸（１規定）、水、ア
ンモニア水（７％）及び水で順次洗浄後乾燥した。
ンモニア水（７％）及び水で順次洗浄後乾燥した。
これを酢酸エチル−石油エーテルより再結晶し、ｍ．ｐ
．１５５℃を有するＺ−Ｐｈｅ−Ｔｖｒ−Ｐｈｅ−Ｖａ
ｌ−ＯＢｕｔ ２３０ｍｇを得た。
．１５５℃を有するＺ−Ｐｈｅ−Ｔｖｒ−Ｐｈｅ−Ｖａ
ｌ−ＯＢｕｔ ２３０ｍｇを得た。
収率３０％。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ セリンプロテイナーゼに属する酵素の存在下に一般
式Ｘ−Ａ−ＯＨ（式中Ｘは末端アミノ基の保護基であり
、Ａはアミノ酸残基またはペプチド残基である）で示さ
れるＮ末端に保護基を有するアミノ酸またはペプチドと
一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ（式中Ｙは第３級アルコキシ基、置換
または非置換ベンジルオキシ基、置換または非置換ペン
ジルアミノ基、置換または非置換ベンズヒドリルオキシ
基および置換または非置換ベンズヒドリルアミノ基より
なる群から選ばれた末端カルポキシル基の保護基であり
、ＢはＡと同一のまたは異なるアミノ酸残基またはペプ
チド残基である）で示されるＣ末端に保護基を有するア
ミノ酸またはペプチドとを緩衝液の不在下に塩基又は塩
基及び酸を添加して水性溶液中セリンプロテイナーゼが
酵素活性を示すｐＨを維持して反応させることを特徴と
する一般式Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ（式中Ｘ，Ａ，Ｂ，Ｙは前記
定義と同一である）で示されるペプチドの製造方法。 ２ 反応をｐＨ７〜９で行う特許請求の範囲第１項記載
の製造方法。 ３ セリンプロテイナーゼがズブチリシン、アスペルギ
ウス・アルカリ・プロテイナーゼ、エラスターゼ、α−
リテツクプロテイナーゼ、キモトリプシンまたはこれら
の混合物である特許請求の範囲第１項または第２項記載
の製造方法。 ４ アミノ酸残基またはペプチド残基を示すＡ及びＢが
それぞれ同一の又は異なる、脂肪族のモノアミノモノカ
ルボン酸、オキシアミノ酸、イオウを含むアミノ酸、モ
ノアミノジカルボン酸若しくはジアミノモノカルボン酸
の残基、芳香環を有するアミノ酸の残基、複素環を有す
るアミノ酸の残基またはこれらのアミノ酸残基からなる
オリゴ若しくはポリペプチド残基である特許請求の範囲
第１項乃至第３項のいずれかの項記載の製造方法。 ５ 脂肪族モノアミノモノカルボシ酸がグリシン、アラ
ニン、バリン、ノルバリン、ロイシン、イソロイシン又
はノルロイシンであり、脂肪族オキシアミ／′酸がセリ
ン、スレオニン又はホモセリンであり、脂肪族のイオウ
を含むアミノ酸がメチオニン、側鎖官能基の保護された
シスチン又はシステインであり、脂肪族モノアミノジカ
ルボン酸が側鎖カルボキシル基の保護されたアスパラギ
ン酸又はグルタミン酸であり、脂肪族ジアミノモノカル
ボン酸が（側鎖アミン基の保護された）オルニチン、リ
ジンまたはアルギニンであり、芳香環を有するアミノ酸
がフエニルアラニン又はチロシンであり、かつ複素環を
有するアミノ酸がヒスチジン又はトリプトファンである
特許請求の範囲第４項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51100189A JPS5813158B2 (ja) | 1976-08-24 | 1976-08-24 | ペプチドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51100189A JPS5813158B2 (ja) | 1976-08-24 | 1976-08-24 | ペプチドの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5326394A JPS5326394A (en) | 1978-03-11 |
| JPS5813158B2 true JPS5813158B2 (ja) | 1983-03-11 |
Family
ID=14267344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51100189A Expired JPS5813158B2 (ja) | 1976-08-24 | 1976-08-24 | ペプチドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5813158B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS646123Y2 (ja) * | 1983-04-28 | 1989-02-16 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6027519B2 (ja) * | 1977-11-02 | 1985-06-29 | 塩野義製薬株式会社 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5725200A (en) * | 1980-07-19 | 1982-02-09 | Sanyo Electric Co Ltd | Generater |
-
1976
- 1976-08-24 JP JP51100189A patent/JPS5813158B2/ja not_active Expired
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5725200A (en) * | 1980-07-19 | 1982-02-09 | Sanyo Electric Co Ltd | Generater |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS646123Y2 (ja) * | 1983-04-28 | 1989-02-16 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5326394A (en) | 1978-03-11 |
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