JPS58129970A - アデノシン三リン酸変換用装置 - Google Patents

アデノシン三リン酸変換用装置

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JPS58129970A
JPS58129970A JP57010338A JP1033882A JPS58129970A JP S58129970 A JPS58129970 A JP S58129970A JP 57010338 A JP57010338 A JP 57010338A JP 1033882 A JP1033882 A JP 1033882A JP S58129970 A JPS58129970 A JP S58129970A
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enzyme
adenosine
converting
reactor
phosphate
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JP57010338A
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Kazutomo Imahori
今堀 和友
Tatsuo Iwasaki
岩崎 立夫
Hiroshi Nakajima
宏 中島
Hitoshi Kondo
仁司 近藤
Isao Tomioka
富岡 功
Masaru Kashima
鹿島 勝
Toshihiko Tsukamoto
塚本 敏彦
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Unitika Ltd
RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
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Unitika Ltd
RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
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    • C12P13/04Alpha- or beta- amino acids
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発F!8はアデノシン−リン酸(以下AMPと略す)
又はアデノシンニリン酸(以下ADPと略す)をアデノ
シンニリン酸(以下ATPと略す)に   1変換する
ための装置に関するものでおる。さらにくわしくいえば
9本発−は#素反応を利用してAMP又はADPtAT
Pに効率よく、かつ連続的に変換するための装置に関す
るものである。
ATPは、従来、動物の組織から抽出するか。
又社微生物を利用した発酵法等によりバッチ式で製造さ
n、王に医薬品等に使用さnて来たが、生産効率がわる
いこと、純度がわるいためさらに複雑な精製ニー程全必
要とすることなどの理由により非常に高価なものであっ
た。
近年、生体内で行なわれているのと同様の生合成を生体
外で工業的に行なおうとする。いわゆるバイオリアクタ
ーが研究されているが、それに採用されようとしている
生化学反応の中には、ATPをエネルギー源として使用
するものが多い。この際ATP#’;を生化学反応のエ
ネルギー源として餉き、AMP又はADPに変化する。
したがってAMP又はADP’kATPに安価に変換す
ることができf’LFi、高価なATPを使いすてにす
る必要がなくなり、バイオリアクターが経隣的により有
利なものとなる。しかし従来技術ではATPk安価かつ
高純度に変換することは困難であり、この点かバイオリ
アクターを実用化する上で一つの障害にもなっており、
ATPt−安価かつ扁純度に変換する新技術が熱望され
ていた。本発明の装置はこのような要望を十分に満すも
のでおる。又9本発明の装置に供給する原料でわるAM
P又はADPは上記バイオリアクターと無関係に、全く
別の製造法でつくらnたものでも勿論よい。
以下本発明の具体例を図面によって説明する。
第1図は本発明の一実施態様の基本的構成會示す歓略図
でめる。本装置はAMPをADPに変換するための酵素
及びADPをATPに変換するための酵素を保持した酵
菓反応益1.AMP供給源2゜AMPをADPに変換す
るためのリン酸供与体供給源3.ADPをATPに変換
するためのリン酸供与体供給源4.AMP及び上記各リ
ン酸供与体をそjLぞれ各供給源2.3.4.から、そ
扛そn制御さnた流量で酵素反応器1の一端より供給し
て#木反応を起さしめ、他端より反応ai連続的に流出
せしめるごとく配置・接続した可変菫送液装&5゜5’
、5”、酵素反応器1から流出する反応液中のアテノシ
ン三リン酸1.アテノシンニリン酸、アテノシンーリン
#kを自動的に分析するように配置・接続した反応液自
動採収装置6ならびに分析装置7゜上記分析装置17よ
り受信したデータ信号とめらかじめ入力さnた設定値信
号にもとつき必要な演算を行ない、上記酵素反応器1に
2けるアデノシン三すン#変換率又は該反応器出口VC
おけるアテノシン三すン酸濃度全ろらかじめ設足さ扛た
値に維持するために、上Hピ可変蓋送液装置5 、5’
、 5“の少くとも一つのi普を゛制御するよう配置・
接続したtlI算・制御装置8.酵素反応器lより流出
する反応液を回収するための回収装置9より構成される
酵素反応器1は本発明の目的に沿うものならとのような
ものでもよいが、たとえは該当する#素を水不溶性担体
にたとえば化学結仕法、吸着法。
包括法等で固定化した。いわゆる固定化酵素を光てんし
たカラムが使用てれる。このほかに、たとえば反応原料
や浴媒9反応生成物は通過させるが#索は通過させない
ような適当な大きさの細孔を有する膜で反応器の人口と
出口全仕切ったものでもよい。酵素反応器1の中に保持
される#1ill:AMPをADPに変換させるもの、
及びADPをATPKt換させるもの、各1mでおる。
ここに保持さする#素の極類に対応して、リン酸供与体
供給源3,4.のリン酸供与体がf史される。これらの
酵素〜リン酸供与体の組合せは本発明の目的に沿うもの
ならどのようなものでもよいが、AMPをADPに変換
する反応用の酵素としてアセテ−トキナーゼ(以下Ad
Kと略す)、リン酸供与体としてA T P 、又AD
PをATPに変換する反応用の酸素としてアセテートキ
ナーゼ(以下AKと略す)、リン酸供与体としてアセナ
ルリン酸を使うことができる。この場合、供給源3には
ATPを、又供給源4にはアセチルリフF1kを入れる
ことになる。
とくに好熱性細菌であるバチルスステアロサーモフィラ
ス(工用喧桂包り坦4甲用!朋曵曲U期、)より採取し
たAdK、AK#i長期間使用しても、その酸素活性が
失なわれにくいので本発明の目的によく合致する。AD
PをATPに変換する#素及びりン酸供与体として上記
以外の公知の組合せ、たとえばホリリン酸キナーゼとポ
リリン酸、フレア6テンキナーゼとクレアチンリン酸、
カルバメートキナーゼとカルバミルリン酸などを用いて
もよい。AMP供給源としては通常、適当な濃度のAM
P水溶液を保持した容器でよいが、場合によってはAM
Pを連続的に産出する他のプロセスと直接連結して本よ
い。たとえばATP ’にエネルギー源として消費し、
AMPを生成するバイオリアクターのを収容した容器の
形をとる。酵素反応器1の中の酵素の一つがAdKの場
合、リン酸供与体供給源3にaATP溶液を入れること
になる。このATPとしては、たとえば本発明のATP
変換用装置を用いることによって得らnるATPの一部
を使用してもよい。
リン酸供与体供給源4も通常はリン酸供与体溶液を収容
した容器でおる。たとえば対応する酵素がアセテートキ
ナーゼの場合、この容器にアセチルリン酸溶液を入れれ
ばよい。アセチルリン酸溶液は室温で長期間おくと分解
しやすいので低温(たとえば5°C以下)に維持する手
段を付加することが望ましい。可変量送液装置5.5’
、5″としては。
外部からの制御信号によシ送液流量をかえうるものなら
どのようなものでもよいが、たとえばパルスモータ−で
駆動される定量ポンプ等が利用できる。5.5.5は必
ずしも独立したポンプである必要はなく、供給源2.3
.4中の液をそれぞれ制御した流量で送液することので
きるものならどのようなものでもよい。このような目的
として利用できる実施態様の例を第2図に示す。第2図
において供給源2.3.4の中の液は、それぞn自動調
節弁10゜10.10を経てポンプ11により反応器l
(第2図には図示せず)へ送液される。また、ポンプ1
1の送液流量を外部信号で制御すると同時に自動調節弁
10、 IO’、 10の開度を制御することによシ、
弁10゜10.10を流nる流量が制御される。又、 
10. IO’。
10″としては、たとえば電磁弁でもよいが、その場合
は、短い時間の間に開閉をくりかえさせ、かつ開状態に
ある時間と閉状態にある時間の比を変えるよう制御すn
ばよい。このように実施態様の変形は種々考えられるが
、要するに供給源2.3.4の液をそれぞn制御さ九た
流量で反応器1へ送液できるものならどのようなもので
もよい。
次に酵素反応器1から流出する反応液の自動分析の為に
は高速液体クロマトグラフ装置を用いるのが最もよい。
この装置は一つのサンプルを測定するのに数分〜数十分
かかるので9間けつ的な工程情報しかえられない欠点は
あるが、ATP、ADP 、AMPの定量分析としては
最も精度が良い。
又1本発明装置においては数分〜数十分に一回のデータ
で十分でも十分コントロールできる。反応液自動採取装
置としては、たとえば市販の高速液体クロマトグラフ装
置用オートブンブンーでもよく1反応器lより出てくる
ラインに接続して使用される。分析装置7からの信号は
演算・制御装置8に送られ、ここでATP 、ADP 
、AMPの濃度が算出され、あらかじめ設定されたAT
P濃度。
又はATP変換率を維持するよう、上記可変量送液装置
5 、5’、 5”の少くとも一つの流量を制御する信
号が送られる。演算・制御装置8としては、たとえばマ
イクロコンピュータが使用される。ATP変換率を指標
に制御する場合、ATP変換率を算出するに必要な他の
データ、たとえば各反応原等 料の濃度奉は、これらが一定でおればあらがじめマイク
ロコンピュータにインプットしておくことができる。こ
nらが変動する場合には、(第1図には示してないが)
反応器lの入口にも自動採取装置を設置し、この部分か
らもサンプルを採取して分析し、その結果を利用するこ
とができる。回収装置9は反応器1より流出する反応液
を回収するものであり、この液のATP@度又はATP
変換率は十分コントロールさn次ものでめシ、夾實上は
とんど100%ATPに変換されているといってよい。
但しATPのほかにリン酸供4体の加水分解物か含ま扛
ている。酵素がAdKとAKでろ    する場合9反
応器1の中での反応り次の式のようになる。
アデニレートキナーゼ (1)  AMP + A’l”P  −一−−−−−
−−−→2ADPアセテートキナーゼ (2)  2ADP +2アセチルリン酸2ATP+2
酢酸 したがって、ここでは酢酸がATPとともに反応液の中
に含まれることになる。酢酸の存在が支障のない用途に
は回収装置9に回収した反応液をそのまま、又は適宜濃
度を調節して使用できる。酢酸を除去する必要のある場
合には適当な手段、たとえばイオン交換樹脂や活性炭等
を利用した分離精製を行なったのち使用すnばよい。
本発明装置のAMP供給源2により供給されるAMPは
純粋なものでおる必要はな(、ADPやATPとの混合
物であってもよいし9反応器1における酵素反応を妨害
する作用のない物質を含んでいてもよい。前出反応式(
1) 、 (2)から容易に理解されるように送液装置
5 、5’、 5″の流量を適当に制御することにより
、最終的に全てのAMP、ADPはATPに変換するこ
とができる。さらにAMPが全く含まnず、ADPのみ
、又はADPとATPの混合物でおってもよい。即ちA
DPlr:ATPに変換する装置としても使用できる。
又ADP’1i−ATPに変換する目的にのみ使用する
場合には9以上に説明した本発明装置の構成を次のよう
に変更した装置で十分であり、このほうが紅済的にも有
利である。その変更点とは第1図において、(a)酵素
反応器1 k、rADP t ATPに変換する酵素を
保持した酵素反応器」に変更する。(b)AMP供給源
2をADP供給源に変更する。
(c)AMP’kADPに変換するためのリン酸供与体
供給源3を除去する。の3点である。その他の構成は第
1図にもとづき前述したのと全く同じである。
本発明によJ、ATPがAMP又はAI)Pから効率的
かつ連続的に変換さnうるようになった。
しかもATP変換率を長期間にわたり実質上100%に
維持することができる。又本発明装置でATPに変換さ
れる出発物質としては純粋なAMPである必要はなく 
、AMPKADP 、ATPの加わった混合物でもよく
、又ADP、又はAI)PとATPの混合物でもよい、
という点は工業的に採用する場合、非常に有利な点であ
る。
本発明により純度の高い(実質上1(JO%)ATPが
連続的かつ安価にAMP又はADPから変換できるよう
になった訳で、バイオリアクター用エネルキー源として
、又従来布の主用途であった医薬品として今後ますます
多用さnるようになると考えられる。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明の一実施態様の基本的構成を示す概略図
、第2図は第1図の可変量送液装置の部分についての他
の実施態様を示す概略図である。 1、酵素反応器、     2.AMP供給源3.4.
リン酸供与体供給源、   5.5.’5.11  送
液装置IL7.分析装置、8.演算・制御装置代理人 
児 玉 雄 三

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)(イ)アデノシン−リン酸をアゾンシンニリン酸
    に変換するための酵素及びアゾンシンニリン酸をアゾン
    シンニリン酸に変換するための酵素を保持した酸素反応
    器、(ロ)アデノシン−リン酸供給源。 (/9アテノシンーリン酸をアデノシンニリン酸に変換
    するためのリン酸供与体供給源、に)アデノシンニリン
    酸をアゾンシンニリン酸に変換するためのリン酸供与体
    供給源、(ホ)アデノシン−リン酸及び上記各リン酸供
    与体を上記各供給源(ロ)(/→に)から。 それぞれ制御芒扛た流量で上記酵素反応器の一端より供
    給して酵素反応を起さしめ、他端より反応液を連続して
    流出せしめるごとく配置・接続した可変量送液装置、(
    へ)上記酵素反応器から流出する反応液中のアデノシン
    ミリン酸。アデノシンニリン酸、アテノシンーリンai
    ’i自動的に分析するよう配置・接続した反応液自動採
    堆装置ならびに分析装置、(ト)上記分析装置より受信
    したテータ信号とあらかじめ入力された設定値信号にも
    とづき必要な演at行々い、上記酵素反応ムにおけるア
    ゾンシンニリン酸変換率又は該反応器出口におけるアゾ
    ンシンニリン酸濃度をあらがじめ設定された設定値に維
    持するために、上記可変量送液装置の少くとも一つの流
    itを制御するよう配置・接続した演算・制御装置、(
    ト)上記酵素反応器よシ流出する反応液を回収するため
    の回収装置よシなることを特徴とするアゾンシンニリン
    酸変換用装置。
  2. (2)アゾンシンニリン酸をアゾンシンニリン酸に変換
    するための酵素、リン酸供与体がそn−Pnアセテート
    キナーゼ、アセチルリン酸であり、アデノシン−リンa
    tアデノシンニリン酸に変換するための酵素、リン酸供
    与体がそれぞれアーテニレートキナーセ、アテノシン三
    すン緻である特許請求の範囲第1項記載の装置。
  3. (3)酵素反応器が水不溶性担体に固定化した酵素を充
    てんしたカラムである特許請求の範囲第1g4記載の装
    置。
  4. (4)分析装置が高速液体クロマトグラフ装置である特
    許請求の範囲第1項記載の装置。
  5. (5)(イ)アデノシンニリン酸をアデノシンニリン酸
    に変換するための酵素を保持した酵素反応器、(ロ)ア
    デノシンニリン酸供給源、(/慢アデノシンニリン酸を
    7デノシン三リン酸に変換するためのリン酸供与体供給
    源、に)アデノシンニリン酸及び上記リン酸供与体を上
    記各供給源(ロ)e9から、それぞn制御さnた流量で
    上記酵素反応器の一端より供給して酵素反応を起さし゛
    め、他端より反応′wit一連続して流出せしめるごと
    く配置・接続した可変量送液装置、(ホ)上記酵素反応
    器から流出する反応液中のアデノシンミリン酸。アゾン
    シンニリン酸、アデノシン−リン酸を自動的に分析する
    よう配置・接続した反応液自動採取装置ならびに分析装
    置、(へ)上記分析装置より受信したデータ信号とあら
    かじめ入力された設定値信号にもとつき必要な演3!會
    行ない、上記酵素反応器におけるアデノシンニリン酸変
    換率又は該反応器出口におけるアデノシンニリン酸濃度
    t−あらかじめ設電された設定値に維持するために、上
    記可変量送液装置の少くとも一つの流量を制御するよう
    配置・接続した演算・制御装置、(ト)上記酵素反応器
    より流出する反応液を回収するための回収装置よシなる
    こと全特徴とするアデノシンニリン酸変換用装置。
  6. (6)アデノシンニリン酸をアデノシンニリン酸に変換
    す′るための酵素、リン酸供与体がそれぞれアセテート
    キナーゼ、アセチルリン酸である特許請求の範囲第5項
    記載の装置。
  7. (7)酵素反応器が水浸性担体に固定した酵素を光てん
    したカラムである特許請求の範囲第5項記載の装置。
  8. (8)分析装置が高速液体クロマトグラフ装置である特
    許請求の範囲第5項記載の装置。
JP57010338A 1982-01-26 1982-01-26 アデノシン三リン酸変換用装置 Pending JPS58129970A (ja)

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DE8383300361T DE3368682D1 (en) 1982-01-26 1983-01-25 Process for producing physiologically active substance by multienzyme process and apparatus for the same
EP19830300361 EP0084975B1 (en) 1982-01-26 1983-01-25 Process for producing physiologically active substance by multienzyme process and apparatus for the same
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US06/461,309 US4554253A (en) 1982-01-26 1983-01-26 Apparatus for synthesizing adenosine-5'-triphosphate
CA000420275A CA1194827A (en) 1982-01-26 1983-01-26 Apparatus for converting into adenosine-5'- triphosphate

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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