JPS58105051A - 二次元電気泳動分離像の定量化法 - Google Patents
二次元電気泳動分離像の定量化法Info
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- JPS58105051A JPS58105051A JP56203726A JP20372681A JPS58105051A JP S58105051 A JPS58105051 A JP S58105051A JP 56203726 A JP56203726 A JP 56203726A JP 20372681 A JP20372681 A JP 20372681A JP S58105051 A JPS58105051 A JP S58105051A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
- G01N27/44721—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血液などの体液の分析法に係り、特に、体液中
に含ま扛る諸種蛋白質の多成分同時分析に好適な二次元
電気泳動分析法に関するものである。
に含ま扛る諸種蛋白質の多成分同時分析に好適な二次元
電気泳動分析法に関するものである。
従来、血液蛋白質の多成分同時分析法として用いられて
いるポリアクリルアミドゲルを支持体とする二次元電気
泳動分析法において、分離蛋白質の定量は、ゲル中の蛋
白質全染色して、染色蛋白質スポットの光学的濃淡信号
全光電子増倍管で検知し、この画像情ｌ１４ｉ全電算磯
で解析することによシ行なわｎている（９藤、「生体の
科学」第３１巻、４４３頁、１９８０年、医学書院）。
いるポリアクリルアミドゲルを支持体とする二次元電気
泳動分析法において、分離蛋白質の定量は、ゲル中の蛋
白質全染色して、染色蛋白質スポットの光学的濃淡信号
全光電子増倍管で検知し、この画像情ｌ１４ｉ全電算磯
で解析することによシ行なわｎている（９藤、「生体の
科学」第３１巻、４４３頁、１９８０年、医学書院）。
しかしながら、二次元泳動法で分離される蛋白質は多棟
にわたり、その血液中での含有量についても多量のもの
から微量のものまで各種ある。したがって、分離蛋白質
スポラトラ染色して得られる二次元泳動像上の全面に濃
いスポットからりすいスポット迄多様なスポットが分布
する。このような泳動像上の各スポット中の蛋白質全高
速に定量するためには、泳動像を電子的にスキャンする
ＴＶカメラを用いる方法が、像を機械的にスキャンする
光電子増倍管を用いる方法よシ優れている。しかしなが
ら、ＴＶカメラは定量できる光学濃度の範囲がせまく、
高濃度の蛋白質スボツ）ｆ定量できないという大きな欠
点を有している。
にわたり、その血液中での含有量についても多量のもの
から微量のものまで各種ある。したがって、分離蛋白質
スポラトラ染色して得られる二次元泳動像上の全面に濃
いスポットからりすいスポット迄多様なスポットが分布
する。このような泳動像上の各スポット中の蛋白質全高
速に定量するためには、泳動像を電子的にスキャンする
ＴＶカメラを用いる方法が、像を機械的にスキャンする
光電子増倍管を用いる方法よシ優れている。しかしなが
ら、ＴＶカメラは定量できる光学濃度の範囲がせまく、
高濃度の蛋白質スボツ）ｆ定量できないという大きな欠
点を有している。
本発明の目的は、このようなＴＶカメラの欠点全克服し
、広い濃度範囲の分離蛋白質全正確に、かつ、高速に定
量する方法を提供することにある。
、広い濃度範囲の分離蛋白質全正確に、かつ、高速に定
量する方法を提供することにある。
本発明の原理は、一般に分離蛋白質スポットの染色濃度
は時間的に増大するという事実に立脚する。すなわち、
多量蛋白質は短時間の呈色反応後に定量し、ｅ１蛋白質
は比軟的長時間の呈や反応後に短音する。これによれば
、ＴＶカメラなどの光検出器の比例応答域（ダイナミッ
クレンチ）において各種濃度の蛋白質全正確に定量でき
る。
は時間的に増大するという事実に立脚する。すなわち、
多量蛋白質は短時間の呈色反応後に定量し、ｅ１蛋白質
は比軟的長時間の呈や反応後に短音する。これによれば
、ＴＶカメラなどの光検出器の比例応答域（ダイナミッ
クレンチ）において各種濃度の蛋白質全正確に定量でき
る。
本発明が実用上効果をあられｊためには、蛋白スポット
の染色法が高速、かつ、高感度であることが望まｎる。
の染色法が高速、かつ、高感度であることが望まｎる。
このための染色法としては、ヘミンを蛋白質に吸着させ
そのペルオキシダーゼ活性に基づいて染色する方法、分
離蛋白質が酵素そのものである場合、その酵素活性に基
づく染色法、さらに、鍜を蛋白質に吸着させる染色法、
などが望ましい。
そのペルオキシダーゼ活性に基づいて染色する方法、分
離蛋白質が酵素そのものである場合、その酵素活性に基
づく染色法、さらに、鍜を蛋白質に吸着させる染色法、
などが望ましい。
以下、本発明の一実施例を第１１￥１によシ説明する。
まず、常法により、血液蛋白質（血清１０μを金利用）
盆、−矢元目金等′区点分離、二次元目全分子童分離と
する二次元電気泳動法により、平板状のポリアクリルア
ミドゲル中に分離する（泳動分離装置１）。次に、この
ゲルを、ヘミンを含むバッファー水溶液（トリスヒドロ
キシルアミン。
盆、−矢元目金等′区点分離、二次元目全分子童分離と
する二次元電気泳動法により、平板状のポリアクリルア
ミドゲル中に分離する（泳動分離装置１）。次に、この
ゲルを、ヘミンを含むバッファー水溶液（トリスヒドロ
キシルアミン。
グリシン、メタノール、エチレンジアミン４酢酸。
塩化アンモンを含む）に浸す。次に、このゲルをヘミン
を含まないバッファー水溶液（リン酸、メタノール、エ
チレンジアミン４酢酸、塩化アンモンを含む）に浸す（
以上、染色前処理槽２で行なう）。次に、このゲル葡３
，３’−ジアミノベンチジンを含むバッファー水溶液（
リン酸、メタノール、エチレンジアミン４酢酸、塩化ア
ンモンを含む）に浸し、つづいて、この水溶液に過酸化
水音添加し分離蛋白スポットの発色全行なう（以上、発
色槽３で行なう）。
を含まないバッファー水溶液（リン酸、メタノール、エ
チレンジアミン４酢酸、塩化アンモンを含む）に浸す（
以上、染色前処理槽２で行なう）。次に、このゲル葡３
，３’−ジアミノベンチジンを含むバッファー水溶液（
リン酸、メタノール、エチレンジアミン４酢酸、塩化ア
ンモンを含む）に浸し、つづいて、この水溶液に過酸化
水音添加し分離蛋白スポットの発色全行なう（以上、発
色槽３で行なう）。
過酸化水素の添加直後から、ゲル内の蛋白質スポットは
発色（かっ色）し始めるが、このゲル全一定時ｌ１Ｊｌ
’ｔｌ後に画像読取器（Ｔ Ｖカメラ）４内に取シ出し
、泳動分離像の光学的濃淡情報を画像解析装置６で解析
し、比較的多量蛋白成分全定量する。定量は、あらかじ
め、発色囲始１１時間後に作成しておいた検量線（成分
蛋白濃度と光学濃度、吸光匿との相関図）を用いて行な
う。１時間後の画像読取シを終えたゲルは発色槽３に戻
し、発色反応を継続する。次に、一定の時間間隔を置い
て、発色ｔｌ、１時間後に同様にして画像読取装置４内
にゲルを取り出し、わらかじめ１６時間後に作成してお
いた検を線を用いて比軟的少量成分を誤差なく正確に定
量する。
発色（かっ色）し始めるが、このゲル全一定時ｌ１Ｊｌ
’ｔｌ後に画像読取器（Ｔ Ｖカメラ）４内に取シ出し
、泳動分離像の光学的濃淡情報を画像解析装置６で解析
し、比較的多量蛋白成分全定量する。定量は、あらかじ
め、発色囲始１１時間後に作成しておいた検量線（成分
蛋白濃度と光学濃度、吸光匿との相関図）を用いて行な
う。１時間後の画像読取シを終えたゲルは発色槽３に戻
し、発色反応を継続する。次に、一定の時間間隔を置い
て、発色ｔｌ、１時間後に同様にして画像読取装置４内
にゲルを取り出し、わらかじめ１６時間後に作成してお
いた検を線を用いて比軟的少量成分を誤差なく正確に定
量する。
このような操作を繰り返すことにより、広範囲の濃度範
囲の成分蛋白質（約１００棟）を、ＴＶカメラの比例応
答域において正確に定量することができた。’ｌ＋”１
などの計測時刻は、あらかじめタイマー５に設定してお
けば定量は自動的に行なうことができる。
囲の成分蛋白質（約１００棟）を、ＴＶカメラの比例応
答域において正確に定量することができた。’ｌ＋”１
などの計測時刻は、あらかじめタイマー５に設定してお
けば定量は自動的に行なうことができる。
上記１説明の通シ、第１図の矢印は、電気激動分離用支
持体（ポリアクリルアミドゲルなど）の移動方向を示す
。
持体（ポリアクリルアミドゲルなど）の移動方向を示す
。
以上、本発明によれば、多数蛋白成分の混合物である血
液蛋白質を、１微量成分から多量成分迄正確に定量でき
るので、血液蛋白質の分析に端づくうとして一日検出伝
（朱色法λを尚愚腿几すると多量成分の染色濃度が尚く
なり、観測さｎる光学濃度が蛋白＃度に相関しなくなる
というジレンマを本発明は初めて解決した。
液蛋白質を、１微量成分から多量成分迄正確に定量でき
るので、血液蛋白質の分析に端づくうとして一日検出伝
（朱色法λを尚愚腿几すると多量成分の染色濃度が尚く
なり、観測さｎる光学濃度が蛋白＃度に相関しなくなる
というジレンマを本発明は初めて解決した。
本発明に用いる画像読取器はＴＶカメラに限らず、いわ
ゆる−次元のアレイプロセッサーでも良い。要点は、泳
動分離後の蛋白質を含む支持体の染色時間を変えて、同
一支持体につき、２回以上画像情報を解析することによ
シ、定量可能な蛋白質の濃度範囲を拡張することにめる
。一般に、分離蛋白質の染色強度（光学濃度）は蛋白質
濃度が低い領域の方が蛋白質濃度に良く比例する。従っ
て、多量成分全比較的短時間で、染色強度の低い間に定
量する本発明の方法は、画像読取り器が光電子増倍管の
場合でも有効になる。
ゆる−次元のアレイプロセッサーでも良い。要点は、泳
動分離後の蛋白質を含む支持体の染色時間を変えて、同
一支持体につき、２回以上画像情報を解析することによ
シ、定量可能な蛋白質の濃度範囲を拡張することにめる
。一般に、分離蛋白質の染色強度（光学濃度）は蛋白質
濃度が低い領域の方が蛋白質濃度に良く比例する。従っ
て、多量成分全比較的短時間で、染色強度の低い間に定
量する本発明の方法は、画像読取り器が光電子増倍管の
場合でも有効になる。
第１図は、本発明の方法全実施するための装置のブロッ
クダイヤグラムを示す図である。 １・・・泳動分離装置、２・・・染色前処理槽、３・・
・発色槽、４・・・画像読取器、５・・・タイマー、６
・・・画像解析装置。
クダイヤグラムを示す図である。 １・・・泳動分離装置、２・・・染色前処理槽、３・・
・発色槽、４・・・画像読取器、５・・・タイマー、６
・・・画像解析装置。
Claims (1)
- １、二次元電気泳動法によシ、支持体中に分離された蛋
白質全染色して定量する方法において、染色時間間隔を
置いて、少なくとも２回以上、同一支持体の光学的濃淡
信号を画像読取シ器を経由して画像解析装置に送り、画
像処理を行うこと全特徴とする二次元電気泳動分離像の
定量化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56203726A JPS58105051A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 二次元電気泳動分離像の定量化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56203726A JPS58105051A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 二次元電気泳動分離像の定量化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58105051A true JPS58105051A (ja) | 1983-06-22 |
Family
ID=16478830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56203726A Pending JPS58105051A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 二次元電気泳動分離像の定量化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58105051A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6212837A (ja) * | 1985-05-29 | 1987-01-21 | アストロカム・リミテッド | 電気泳動の結果を分析する方法及び装置 |
-
1981
- 1981-12-18 JP JP56203726A patent/JPS58105051A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6212837A (ja) * | 1985-05-29 | 1987-01-21 | アストロカム・リミテッド | 電気泳動の結果を分析する方法及び装置 |
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