JPH1175834A - 固定化リパーゼの再活性化方法 - Google Patents
固定化リパーゼの再活性化方法Info
- Publication number
- JPH1175834A JPH1175834A JP25095997A JP25095997A JPH1175834A JP H1175834 A JPH1175834 A JP H1175834A JP 25095997 A JP25095997 A JP 25095997A JP 25095997 A JP25095997 A JP 25095997A JP H1175834 A JPH1175834 A JP H1175834A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- weight
- lipase
- immobilized lipase
- parts
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 エステル交換反応に用いた固定化リパーゼの
再活性化、特に副生物が極力生じないように水分含量を
低くした油脂を基質とするエステル交換反応に用いた固
定化リパーゼの再活性化に適用しても、該固定化リパー
ゼの再活性化を効率よく行うことができ、且つ工業的規
模で該再活性化処理が行いやすい、固定化リパーゼの再
活性化方法の提供。 【解決手段】 エステル交換反応に用いて活性が低下し
た固定化リパーゼを、非極性溶剤と極性溶剤とリン脂質
とからなる処理液で処理する。
再活性化、特に副生物が極力生じないように水分含量を
低くした油脂を基質とするエステル交換反応に用いた固
定化リパーゼの再活性化に適用しても、該固定化リパー
ゼの再活性化を効率よく行うことができ、且つ工業的規
模で該再活性化処理が行いやすい、固定化リパーゼの再
活性化方法の提供。 【解決手段】 エステル交換反応に用いて活性が低下し
た固定化リパーゼを、非極性溶剤と極性溶剤とリン脂質
とからなる処理液で処理する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エステル交換反応
に用いて活性が低下した固定化リパーゼの再活性化方法
に関するものである。
に用いて活性が低下した固定化リパーゼの再活性化方法
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】油脂類のエステル交換は、工業的には水
酸化ナトリウムやソジウムメチラートを用いた化学的エ
ステル交換が広く行われている。しかし、化学的エステ
ル交換では、大量の強アルカリの廃水が生成し、廃水処
理が問題となっている。近年、化学的エステル交換に代
わる技術としてリパーゼを用いたエステル交換技術の研
究が盛んに行われている。リパーゼを用いたエステル交
換では廃水の問題が解消され、反応温度も低くできるこ
とから、環境にやさしい技術といえる。しかし、リパー
ゼを用いたエステル交換は、一部で工業化も試みられて
いるものの、リパーゼのコストが高いことから、実用化
が困難な状況にある。リパーゼコストを下げる試みとし
て、単位酵素あたりの油脂処理量を向上させることが種
々検討されている。また、エステル交換反応に使用して
活性の低下したリパーゼを再生して繰り返し利用しよう
とする提案も数多くなされている。
酸化ナトリウムやソジウムメチラートを用いた化学的エ
ステル交換が広く行われている。しかし、化学的エステ
ル交換では、大量の強アルカリの廃水が生成し、廃水処
理が問題となっている。近年、化学的エステル交換に代
わる技術としてリパーゼを用いたエステル交換技術の研
究が盛んに行われている。リパーゼを用いたエステル交
換では廃水の問題が解消され、反応温度も低くできるこ
とから、環境にやさしい技術といえる。しかし、リパー
ゼを用いたエステル交換は、一部で工業化も試みられて
いるものの、リパーゼのコストが高いことから、実用化
が困難な状況にある。リパーゼコストを下げる試みとし
て、単位酵素あたりの油脂処理量を向上させることが種
々検討されている。また、エステル交換反応に使用して
活性の低下したリパーゼを再生して繰り返し利用しよう
とする提案も数多くなされている。
【０００３】例えば、特開昭６１−１４９０８４号公報
には、リパーゼを水あるいは低級アルコールを用いて湿
潤処理することによりリパーゼを再活性化する方法が記
載されている。また、特開平５−１３７５７４号公報に
は、固定化リパーゼを非極性溶剤及び極性溶剤で処理す
ることにより固定化リパーゼを再活性化する方法が記載
されている。
には、リパーゼを水あるいは低級アルコールを用いて湿
潤処理することによりリパーゼを再活性化する方法が記
載されている。また、特開平５−１３７５７４号公報に
は、固定化リパーゼを非極性溶剤及び極性溶剤で処理す
ることにより固定化リパーゼを再活性化する方法が記載
されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし、特開昭６１−
１４９０８４号公報に記載の方法は、複雑な操作が必要
であるため、手間がかかり、工業的には困難である。ま
た、特開平５−１３７５７４号公報に記載の方法は、水
分含量の少ない基質のエステル交換反応に用いた固定化
リパーゼの再活性化に適用すると、再活性化の程度が低
いという欠点を有するものである。
１４９０８４号公報に記載の方法は、複雑な操作が必要
であるため、手間がかかり、工業的には困難である。ま
た、特開平５−１３７５７４号公報に記載の方法は、水
分含量の少ない基質のエステル交換反応に用いた固定化
リパーゼの再活性化に適用すると、再活性化の程度が低
いという欠点を有するものである。
【０００５】従って、本発明の目的は、エステル交換反
応に用いた固定化リパーゼの再活性化、特に副生物が極
力生じないように水分含量を低くした油脂を基質とする
エステル交換反応に用いた固定化リパーゼの再活性化に
適用しても、該固定化リパーゼの再活性化を効率よく行
うことができ、且つ工業的規模で該再活性化処理が行い
やすい、固定化リパーゼの再活性化方法を提供すること
にある。
応に用いた固定化リパーゼの再活性化、特に副生物が極
力生じないように水分含量を低くした油脂を基質とする
エステル交換反応に用いた固定化リパーゼの再活性化に
適用しても、該固定化リパーゼの再活性化を効率よく行
うことができ、且つ工業的規模で該再活性化処理が行い
やすい、固定化リパーゼの再活性化方法を提供すること
にある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、エステル交換
反応に用いて活性が低下した固定化リパーゼを、非極性
溶剤と極性溶剤とリン脂質とからなる処理液で処理する
ことを特徴とする固定化リパーゼの再活性化方法を提供
することにより、上記目的を達成したものである。
反応に用いて活性が低下した固定化リパーゼを、非極性
溶剤と極性溶剤とリン脂質とからなる処理液で処理する
ことを特徴とする固定化リパーゼの再活性化方法を提供
することにより、上記目的を達成したものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下に本発明の固定化リパーゼの
再活性化方法について詳述する。本発明におけるエステ
ル交換反応とは、油脂と油脂とのエステル交換反応、油
脂と脂肪酸とのエステル交換反応、及び油脂と脂肪酸エ
ステルとのエステル交換反応が挙げられる。斯るエステ
ル交換反応に用いられる油脂としては、大豆油、なたね
油、米油、コーン油、綿実油、パーム油、パーム核油、
ヤシ油、カカオ脂、サル脂、魚油、ラード、牛脂、乳脂
等の動植物油脂及びこれらの分別油、硬化油やトリラウ
リン、トリオレイン、トリパルミチン等の合成油脂等が
ある。脂肪酸としては、ステアリン酸、パルミチン酸、
ラウリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リ
ノール酸、リノレン酸等がある。脂肪酸エステルとして
は、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノー
ル酸等の脂肪酸と、メタノール、エタノール、ブタノー
ルやプロパノールとを反応させることにより得られも
の、例えばステアリン酸エチル、パルミチン酸メチル、
オレイン酸ブチル、リノール酸プロピル等がある。
再活性化方法について詳述する。本発明におけるエステ
ル交換反応とは、油脂と油脂とのエステル交換反応、油
脂と脂肪酸とのエステル交換反応、及び油脂と脂肪酸エ
ステルとのエステル交換反応が挙げられる。斯るエステ
ル交換反応に用いられる油脂としては、大豆油、なたね
油、米油、コーン油、綿実油、パーム油、パーム核油、
ヤシ油、カカオ脂、サル脂、魚油、ラード、牛脂、乳脂
等の動植物油脂及びこれらの分別油、硬化油やトリラウ
リン、トリオレイン、トリパルミチン等の合成油脂等が
ある。脂肪酸としては、ステアリン酸、パルミチン酸、
ラウリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リ
ノール酸、リノレン酸等がある。脂肪酸エステルとして
は、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノー
ル酸等の脂肪酸と、メタノール、エタノール、ブタノー
ルやプロパノールとを反応させることにより得られも
の、例えばステアリン酸エチル、パルミチン酸メチル、
オレイン酸ブチル、リノール酸プロピル等がある。
【０００８】本発明の再活性化の対象とされる固定化リ
パーゼに用いられるリパーゼとしては、特に制限はな
く、植物種子、ブタ膵臓、微生物、カビ、酵母等に由来
するものが挙げられ、また位置特異性リパーゼでも位置
特異性のないリパーゼのどちらでもよい。また、該リパ
ーゼを固定化する固定化担体としては、イオン交換樹
脂、セラミック、ケイソウ土、セライト、キチン、キト
サン、活性炭、シリカゲル等が挙げられる。
パーゼに用いられるリパーゼとしては、特に制限はな
く、植物種子、ブタ膵臓、微生物、カビ、酵母等に由来
するものが挙げられ、また位置特異性リパーゼでも位置
特異性のないリパーゼのどちらでもよい。また、該リパ
ーゼを固定化する固定化担体としては、イオン交換樹
脂、セラミック、ケイソウ土、セライト、キチン、キト
サン、活性炭、シリカゲル等が挙げられる。
【０００９】本発明で用いられる処理液に含有される非
極性溶剤としては、石油エーテル、ジエチルエーテル、
ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、イソオクタン、酢酸エ
チル等の中から１種または２種以上を用いることがで
き、その中ではヘキサンが好ましい。また、上記処理液
に含有される極性溶剤としては、メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ブタノール、アセトン、メチルエチ
ルケトン等の中から１種または２種以上を用いることが
でき、その中ではエタノール及び／またはアセトンが好
ましい。また、上記処理液に含有されるリン脂質として
は、卵黄レシチン及び／または大豆レシチン等が挙げら
れるが、コスト及び効果を考慮すると大豆レシチンが好
ましい。
極性溶剤としては、石油エーテル、ジエチルエーテル、
ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、イソオクタン、酢酸エ
チル等の中から１種または２種以上を用いることがで
き、その中ではヘキサンが好ましい。また、上記処理液
に含有される極性溶剤としては、メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ブタノール、アセトン、メチルエチ
ルケトン等の中から１種または２種以上を用いることが
でき、その中ではエタノール及び／またはアセトンが好
ましい。また、上記処理液に含有されるリン脂質として
は、卵黄レシチン及び／または大豆レシチン等が挙げら
れるが、コスト及び効果を考慮すると大豆レシチンが好
ましい。
【００１０】本発明で用いられる処理液中の上記非極性
溶剤と上記極性溶剤と上記リン脂質との比率は、非極性
溶剤１００重量部に対して、極性溶剤が好ましくは０．
１〜２０重量部、より好ましくは０．２〜１５重量部、
特に好ましくは０．２〜７重量部であり、リン脂質が好
ましくは０．５〜１０重量部、より好ましくは２〜１０
重量部、特に好ましくは２〜６重量部である。極性溶剤
が０．１重量部より少ないとリン脂質がうまく分散しな
いことがあり、２０重量部より多いとリパーゼの再活性
化を阻害することがある。また、リン脂質が０．５重量
部より少ないとリパーゼの再活性化を十分に行えないこ
とがあり、１０重量部より多いとリン脂質がうまく分散
しないことがある。なお、大豆レシチンには一般に３０
〜５０重量％の大豆油が含まれており、リン脂質として
大豆レシチンを使用する場合は、大豆油を除いた重量が
リン脂質の重量に相当する。
溶剤と上記極性溶剤と上記リン脂質との比率は、非極性
溶剤１００重量部に対して、極性溶剤が好ましくは０．
１〜２０重量部、より好ましくは０．２〜１５重量部、
特に好ましくは０．２〜７重量部であり、リン脂質が好
ましくは０．５〜１０重量部、より好ましくは２〜１０
重量部、特に好ましくは２〜６重量部である。極性溶剤
が０．１重量部より少ないとリン脂質がうまく分散しな
いことがあり、２０重量部より多いとリパーゼの再活性
化を阻害することがある。また、リン脂質が０．５重量
部より少ないとリパーゼの再活性化を十分に行えないこ
とがあり、１０重量部より多いとリン脂質がうまく分散
しないことがある。なお、大豆レシチンには一般に３０
〜５０重量％の大豆油が含まれており、リン脂質として
大豆レシチンを使用する場合は、大豆油を除いた重量が
リン脂質の重量に相当する。
【００１１】特に、極性溶剤としてエタノールを用いる
場合は、非極性溶剤１００重量部に対して、エタノール
を好ましくは０．１〜１０重量部、より好ましくは０．
２〜５重量部、特に好ましくは０．２〜２重量部用いる
とよい。エタノールが０．１重量部よりも少ないとリン
脂質がうまく分散しないことがあり、１０重量部よりも
多いとリパーゼの再活性化を阻害することがある。ま
た、極性溶剤としてアセトンを用いる場合は、非極性溶
剤１００重量部に対して、アセトンを好ましくは１〜２
０重量部、より好ましくは３〜１５重量部、特に好まし
くは３〜７重量部用いるとよい。アセトンが１重量部よ
りも少ないとリン脂質がうまく分散しないことがあり、
２０重量部よりも多いとリパーゼの再活性化を阻害する
ことがある。
場合は、非極性溶剤１００重量部に対して、エタノール
を好ましくは０．１〜１０重量部、より好ましくは０．
２〜５重量部、特に好ましくは０．２〜２重量部用いる
とよい。エタノールが０．１重量部よりも少ないとリン
脂質がうまく分散しないことがあり、１０重量部よりも
多いとリパーゼの再活性化を阻害することがある。ま
た、極性溶剤としてアセトンを用いる場合は、非極性溶
剤１００重量部に対して、アセトンを好ましくは１〜２
０重量部、より好ましくは３〜１５重量部、特に好まし
くは３〜７重量部用いるとよい。アセトンが１重量部よ
りも少ないとリン脂質がうまく分散しないことがあり、
２０重量部よりも多いとリパーゼの再活性化を阻害する
ことがある。
【００１２】固定化リパーゼを上記処理液で処理する方
法としては、固定化リパーゼに上記処理液を混合・攪拌
後、ろ過して残査を乾燥させるバッチ法と、固定化リパ
ーゼを充填したカラムに上記処理液を通し、固定化リパ
ーゼを乾燥させるカラム法が挙げられ、いずれの方法で
も良い。バッチ法の場合、処理液と固定化リパーゼの比
率は、処理液中の非極性溶剤１００重量部に対して、固
定化リパーゼ１００重量部以下が良く、処理効率を考慮
すると固定化リパーゼ２０〜１００重量部が好ましい。
カラム法の場合ではカラムの形状、処理液の配合、流速
等によって固定化リパーゼと処理液の比率は変化する
が、非極性溶剤１００重量部に対して固定化リパーゼ１
〜５０重量部が好ましい。再活性化に使用した処理液
は、繰り返し使用することもできる。
法としては、固定化リパーゼに上記処理液を混合・攪拌
後、ろ過して残査を乾燥させるバッチ法と、固定化リパ
ーゼを充填したカラムに上記処理液を通し、固定化リパ
ーゼを乾燥させるカラム法が挙げられ、いずれの方法で
も良い。バッチ法の場合、処理液と固定化リパーゼの比
率は、処理液中の非極性溶剤１００重量部に対して、固
定化リパーゼ１００重量部以下が良く、処理効率を考慮
すると固定化リパーゼ２０〜１００重量部が好ましい。
カラム法の場合ではカラムの形状、処理液の配合、流速
等によって固定化リパーゼと処理液の比率は変化する
が、非極性溶剤１００重量部に対して固定化リパーゼ１
〜５０重量部が好ましい。再活性化に使用した処理液
は、繰り返し使用することもできる。
【００１３】
【実施例】以下、実施例を比較例と共に挙げて、本発明
を更に詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例に
制限されるものではない。
を更に詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例に
制限されるものではない。
【００１４】実施例１ ノボノルディスク社製の固定化リパーゼ（リポザイムＩ
Ｍ）２０ｇを空カラムに充填して３０℃に保温し、これ
に綿実油（水分量１００ｐｐｍ）を２０ｇ／ｈの流速で
通液してエステル交換反応を行った。反応３０日目のリ
パーゼ活性を調べたところ、初期活性の１８％に低下し
ていた。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼを
抜き出し、その内の５ｇに、ヘキサン５ｇ、エタノール
０．０２ｇ及び大豆油を４０％含有している大豆ペース
トレシチン０．４ｇ（リン脂質として０．２４ｇ）から
なる処理液を加え、室温で1 日間、再活性化処理を行っ
たところ、リパーゼ活性は初期活性の６１％まで回復し
た。なお、リパーゼ活性の測定は、トリミリスチン１０
重量部とトリオレイン９０重量部を混合し、固定化リパ
ーゼを対油１重量％添加して、反応温度５５℃、振とう
数１２０ストローク／ｍｉｎ、振幅２．５ｃｍ、反応時
間１時間でエステル交換反応を行い、トリミリスチンの
減少速度からリパーゼ活性を求める方法により行った。
以降、単にリパーゼ活性と記した場合は本方法によるも
のとする。
Ｍ）２０ｇを空カラムに充填して３０℃に保温し、これ
に綿実油（水分量１００ｐｐｍ）を２０ｇ／ｈの流速で
通液してエステル交換反応を行った。反応３０日目のリ
パーゼ活性を調べたところ、初期活性の１８％に低下し
ていた。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼを
抜き出し、その内の５ｇに、ヘキサン５ｇ、エタノール
０．０２ｇ及び大豆油を４０％含有している大豆ペース
トレシチン０．４ｇ（リン脂質として０．２４ｇ）から
なる処理液を加え、室温で1 日間、再活性化処理を行っ
たところ、リパーゼ活性は初期活性の６１％まで回復し
た。なお、リパーゼ活性の測定は、トリミリスチン１０
重量部とトリオレイン９０重量部を混合し、固定化リパ
ーゼを対油１重量％添加して、反応温度５５℃、振とう
数１２０ストローク／ｍｉｎ、振幅２．５ｃｍ、反応時
間１時間でエステル交換反応を行い、トリミリスチンの
減少速度からリパーゼ活性を求める方法により行った。
以降、単にリパーゼ活性と記した場合は本方法によるも
のとする。
【００１５】比較例１ 実施例１のエステル交換反応３０日目の固定化リパーゼ
５ｇに、実施例１の処理液から大豆ペーストレシチンを
除いた配合の処理液、すなわちヘキサン５ｇ及びエタノ
ール０．０２ｇからなる処理液を加えた他は、実施例１
と同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化リ
パーゼは、リパーゼ活性が初期活性の２９％までしか回
復しなかった。
５ｇに、実施例１の処理液から大豆ペーストレシチンを
除いた配合の処理液、すなわちヘキサン５ｇ及びエタノ
ール０．０２ｇからなる処理液を加えた他は、実施例１
と同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化リ
パーゼは、リパーゼ活性が初期活性の２９％までしか回
復しなかった。
【００１６】比較例２ 実施例１のエステル交換反応３０日目の固定化リパーゼ
５ｇに、実施例１の処理液からエタノールを除いた配合
の処理液、すなわちヘキサン５ｇ及び大豆油を４０％含
有している大豆ペーストレシチン０．４ｇ（リン脂質と
して０．２４ｇ）からなる処理液を加えた他は、実施例
１と同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化
リパーゼは、リパーゼ活性が初期活性の２４％までしか
回復しなかった。
５ｇに、実施例１の処理液からエタノールを除いた配合
の処理液、すなわちヘキサン５ｇ及び大豆油を４０％含
有している大豆ペーストレシチン０．４ｇ（リン脂質と
して０．２４ｇ）からなる処理液を加えた他は、実施例
１と同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化
リパーゼは、リパーゼ活性が初期活性の２４％までしか
回復しなかった。
【００１７】実施例２ 名糖産業（株）製の固定化リパーゼ（リパーゼＰＬＣ）
３ｋｇを空カラムに充填して５５℃に保温し、これにパ
ーム油（水分量８０ｐｐｍ）を７５０ｇ／ｈの流速で通
液してエステル交換反応を行った。反応１２日目のリパ
ーゼ活性を調べたところ、初期活性の７％に低下してい
た。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼを抜き
出して３等分し、それぞれを空カラムに再充填した。そ
のうちの１つにヘキサン１００重量部、アセトン５重量
部及び大豆油を４０％含有している大豆ペーストレシチ
ン１重量部（リン脂質として０．６重量部）からなる処
理液を２５０ｇ／ｈの流速で合計５ｋｇを通液した。通
液後、カラムから固定化リパーゼを抜き出し、室温で乾
燥してからリパーゼ活性を測定したところ、リパーゼ活
性は初期活性の４５％まで回復した。
３ｋｇを空カラムに充填して５５℃に保温し、これにパ
ーム油（水分量８０ｐｐｍ）を７５０ｇ／ｈの流速で通
液してエステル交換反応を行った。反応１２日目のリパ
ーゼ活性を調べたところ、初期活性の７％に低下してい
た。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼを抜き
出して３等分し、それぞれを空カラムに再充填した。そ
のうちの１つにヘキサン１００重量部、アセトン５重量
部及び大豆油を４０％含有している大豆ペーストレシチ
ン１重量部（リン脂質として０．６重量部）からなる処
理液を２５０ｇ／ｈの流速で合計５ｋｇを通液した。通
液後、カラムから固定化リパーゼを抜き出し、室温で乾
燥してからリパーゼ活性を測定したところ、リパーゼ活
性は初期活性の４５％まで回復した。
【００１８】比較例３ 実施例２のエステル交換反応１２日目の固定化リパーゼ
を再充填したカラムの１つに、実施例２の処理液から大
豆ペーストレシチンを除いた配合の処理液、すなわちヘ
キサン１００重量部及びアセトン５重量部からなる処理
液を通液した他は、実施例２と同様の方法で再活性化処
理した。処理された固定化リパーゼは、リパーゼ活性が
初期活性の１１％までしか回復しなかった。
を再充填したカラムの１つに、実施例２の処理液から大
豆ペーストレシチンを除いた配合の処理液、すなわちヘ
キサン１００重量部及びアセトン５重量部からなる処理
液を通液した他は、実施例２と同様の方法で再活性化処
理した。処理された固定化リパーゼは、リパーゼ活性が
初期活性の１１％までしか回復しなかった。
【００１９】比較例４ 実施例２のエステル交換反応１２日目の固定化リパーゼ
を再充填したカラムの１つに、実施例２の処理液からア
セトンを除いた配合の処理液、すなわちヘキサン１００
重量部及び大豆油を４０％含有している大豆ペーストレ
シチン１重量部（リン脂質として０．６重量部）からな
る処理液を通液した他は、実施例２と同様の方法で再活
性化処理した。処理された固定化リパーゼは、リパーゼ
活性が初期活性の１２％までしか回復しなかった。
を再充填したカラムの１つに、実施例２の処理液からア
セトンを除いた配合の処理液、すなわちヘキサン１００
重量部及び大豆油を４０％含有している大豆ペーストレ
シチン１重量部（リン脂質として０．６重量部）からな
る処理液を通液した他は、実施例２と同様の方法で再活
性化処理した。処理された固定化リパーゼは、リパーゼ
活性が初期活性の１２％までしか回復しなかった。
【００２０】実施例３ ナタネ部分水添油（融点３６℃）１００重量部と大豆油
１００重量部の混合油（水分量１１０ｐｐｍ）７００ｋ
ｇにノボノルディスク社製の固定化リパーゼ（ノボザイ
ム４３５）３５ｋｇを添加し、反応温度５０℃、攪拌羽
根の回転数１２ｒｐｍにより４８時間、エステル交換反
応を行った。反応後、反応液をろ過し、固定化リパーゼ
を分別し、この固定化リパーゼを使用して同様の反応を
さらに２回繰り返した。反応後の固定化リパーゼのリパ
ーゼ活性を調べたところ、初期活性の４０％に低下して
いた。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼ１０
ｋｇをヘキサン１００重量部、アセトン５重量部及び大
豆油を４０％含有している大豆ペーストレシチン１５重
量部（リン脂質として９重量部）からなる処理液１０ｋ
ｇに加え、処理温度４０℃、攪拌羽根の回転数８ｒｐｍ
により１６時間、再活性化処理を行ったところ、リパー
ゼ活性は初期活性の８９％まで回復した。
１００重量部の混合油（水分量１１０ｐｐｍ）７００ｋ
ｇにノボノルディスク社製の固定化リパーゼ（ノボザイ
ム４３５）３５ｋｇを添加し、反応温度５０℃、攪拌羽
根の回転数１２ｒｐｍにより４８時間、エステル交換反
応を行った。反応後、反応液をろ過し、固定化リパーゼ
を分別し、この固定化リパーゼを使用して同様の反応を
さらに２回繰り返した。反応後の固定化リパーゼのリパ
ーゼ活性を調べたところ、初期活性の４０％に低下して
いた。このリパーゼ活性の低下した固定化リパーゼ１０
ｋｇをヘキサン１００重量部、アセトン５重量部及び大
豆油を４０％含有している大豆ペーストレシチン１５重
量部（リン脂質として９重量部）からなる処理液１０ｋ
ｇに加え、処理温度４０℃、攪拌羽根の回転数８ｒｐｍ
により１６時間、再活性化処理を行ったところ、リパー
ゼ活性は初期活性の８９％まで回復した。
【００２１】比較例５ 実施例３のエステル交換反応後の固定化リパーゼを、実
施例３の処理液から大豆ペーストレシチンを除いた配合
の処理液、すなわちヘキサン１００重量部及びアセトン
５重量部からなる処理液に加えた他は、実施例３と同様
の方法で再活性化処理した。処理された固定化リパーゼ
は、リパーゼ活性が初期活性の５４％までしか回復しな
かった。
施例３の処理液から大豆ペーストレシチンを除いた配合
の処理液、すなわちヘキサン１００重量部及びアセトン
５重量部からなる処理液に加えた他は、実施例３と同様
の方法で再活性化処理した。処理された固定化リパーゼ
は、リパーゼ活性が初期活性の５４％までしか回復しな
かった。
【００２２】比較例６ 実施例３のエステル交換反応後の固定化リパーゼを、実
施例３の処理液からアセトンを除いた配合の処理液、す
なわちヘキサン１００重量部及び大豆油を４０％含有し
ている大豆ペーストレシチン１５重量部（リン脂質とし
て９重量部）からなる処理液に加えた他は、実施例３と
同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化リパ
ーゼは、リパーゼ活性が初期活性の５７％までしか回復
しなかった。
施例３の処理液からアセトンを除いた配合の処理液、す
なわちヘキサン１００重量部及び大豆油を４０％含有し
ている大豆ペーストレシチン１５重量部（リン脂質とし
て９重量部）からなる処理液に加えた他は、実施例３と
同様の方法で再活性化処理した。処理された固定化リパ
ーゼは、リパーゼ活性が初期活性の５７％までしか回復
しなかった。
【００２３】
【発明の効果】本発明の固定化リパーゼの再活性化方法
によれば、エステル交換反応に用いた固定化リパーゼの
再活性化、特に副生物が極力生じないように水分含量を
低くした油脂を基質とするエステル交換反応に用いた固
定化リパーゼの再活性化に適用しても、該固定化リパー
ゼの再活性化を効率よく行うことができ、且つ工業的規
模で該再活性化処理が行いやすい。
によれば、エステル交換反応に用いた固定化リパーゼの
再活性化、特に副生物が極力生じないように水分含量を
低くした油脂を基質とするエステル交換反応に用いた固
定化リパーゼの再活性化に適用しても、該固定化リパー
ゼの再活性化を効率よく行うことができ、且つ工業的規
模で該再活性化処理が行いやすい。
Claims (2)
- 【請求項１】 エステル交換反応に用いて活性が低下し
た固定化リパーゼを、非極性溶剤と極性溶剤とリン脂質
とからなる処理液で処理することを特徴とする固定化リ
パーゼの再活性化方法。 - 【請求項２】 上記処理液が、非極性溶剤１００重量部
に対して、極性溶剤０．１〜２０重量部及びリン脂質
０．５〜１０重量部を含有するものである請求項１記載
の固定化リパーゼの再活性化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25095997A JPH1175834A (ja) | 1997-09-16 | 1997-09-16 | 固定化リパーゼの再活性化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25095997A JPH1175834A (ja) | 1997-09-16 | 1997-09-16 | 固定化リパーゼの再活性化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1175834A true JPH1175834A (ja) | 1999-03-23 |
Family
ID=17215567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25095997A Pending JPH1175834A (ja) | 1997-09-16 | 1997-09-16 | 固定化リパーゼの再活性化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1175834A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7001749B2 (en) | 2002-09-06 | 2006-02-21 | Kao Corporation | Regenerating method of immobilized enzyme |
| JP2013039109A (ja) * | 2011-08-19 | 2013-02-28 | Nisshin Oillio Group Ltd | リパーゼ活性の回復方法 |
-
1997
- 1997-09-16 JP JP25095997A patent/JPH1175834A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7001749B2 (en) | 2002-09-06 | 2006-02-21 | Kao Corporation | Regenerating method of immobilized enzyme |
| JP2013039109A (ja) * | 2011-08-19 | 2013-02-28 | Nisshin Oillio Group Ltd | リパーゼ活性の回復方法 |
| WO2013027697A1 (ja) * | 2011-08-19 | 2013-02-28 | 日清オイリオグループ株式会社 | リパーゼ活性の回復方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gunawan et al. | Study on response surface methodology (RSM) of lipase-catalyzed synthesis of palm-based wax ester | |
| EP0093602B1 (en) | Interesterification with a lipase enzyme as an interesterification catalyst | |
| EP1879988B1 (en) | Method for producing fats or oils | |
| EP2118277B1 (en) | Immobilized interfacial enzymes of improved and stabilized activity | |
| EP0126416B1 (en) | Reaction method for transesterifying fats and oils | |
| Bloomer et al. | Triglyceride Interesterification by Lipases: 2. Reaction parameters for the reduction of trisaturated impurities and diglycerides in batch reactions | |
| KR100774281B1 (ko) | 불용성 기질에 고정된 계면활성제-리파아제 복합물 | |
| US20080057552A1 (en) | Processes for Producing Fats or Oils and Compositions Comprising the Fats or Oils | |
| EP1651058A2 (en) | Method for producing fats or oils | |
| JP2009045033A (ja) | 食用油脂の製造方法 | |
| EP1008647B1 (en) | A process for preparing an immobilized enzyme | |
| Osório et al. | Lipase‐catalysed interesterification of palm stearin with soybean oil in a continuous fluidised‐bed reactor | |
| US5177013A (en) | Preparation of an immobilized lipase having a low water content without drying | |
| WO1991006661A1 (en) | Lipase-catalyzed in situ generation of mono- and di-glycerides | |
| GB2188057A (en) | Transesterification of fats and oils | |
| JPH0543354B2 (ja) | ||
| JPH1175834A (ja) | 固定化リパーゼの再活性化方法 | |
| CN106811455A (zh) | 固定化酶及其制备方法 | |
| Wang et al. | Effect of lipid oxidation products on the transesterification activity of an immobilized lipase | |
| JPS62287A (ja) | 酵素による油脂の精製法 | |
| JPS59213390A (ja) | 固定化酵素及びその製造方法 | |
| JP6990076B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
| JPH0327199B2 (ja) | ||
| JPH05137574A (ja) | 固定化リパーゼの再活性化法 | |
| JP2676470B2 (ja) | 固定化リパーゼ、その製造方法及び該リパーゼを用いた油脂類のエステル交換方法 |