JPH11507813A

JPH11507813A - ヒトアミン受容体

Info

Publication number: JPH11507813A
Application number: JP9500375A
Authority: JP
Inventors: リ，イ; ルーベン，スティーブン・エム
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Current assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 1995-06-06
Filing date: 1995-06-06
Publication date: 1999-07-13

Abstract

(57)【要約】ヒトアミン受容体ポリペプチドおよびそのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）および組換え技術によりそのようなポリペプチドを製造する方法を開示する。また、そのようなポリペプチドに結合して活性化するおよび結合して阻害する化合物を検出する方法および本発明のヒトアミン受容体の過少発現および過剰発現に関連した疾患を治療する化合物の使用も提供する。また、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異および該ポリペプチドの可溶性形態のレベルの変化を検出する方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトアミン受容体本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドおよびそのようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにそのようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造にも関する。より詳しくは、本発明のポリペプチドは７回膜貫通型受容体であり、推定的にヒトアミン受容体として同定されているものである。本発明はまた、そのようなポリペプチドの作用を阻害することに関する。多くの医学的に重要な生物学的プロセスが、例えばｃＡＭＰ（レフコゥイッツ（Ｌefkowitz）、Ｎature、３５１：３５３−３５４（１９９１））などのＧ− タンパク質および／または第２メッセンジャーに関するシグナルトランスダクション経路に関するタンパク質によって媒介されていることはよく確立されている。本明細書のこれらのタンパク質はＧ−タンパク質またはＰＰＧタンパク質を有する経路に関与するタンパク質をいう。これらのタンパク質の例にはアドレナリン作用性薬剤およびドーパミンに関するＧＰＣ受容体（コビルカ（Ｋobilka，Ｂ．Ｋ.）ら、ＰＮＡＳ、８４：４６−５０（１９８７）；コビルカら、Ｓcience 、２３８：６５０−６５６（１９８７）；バンゾウ（Ｂunzow，Ｊ．Ｒ.）ら、Ｎ ature、３３６：７８３−７８７（１９８８））、Ｇ−タンパク質自身、エフェクタータンパク質、例えば、ホスホリパーゼＣ、アデニルシクラーゼおよびホスホジエステラーゼおよびアクチュエータータンパク質（actuator proteins）、例えば、プロテインキナーゼＡおよびプロテインキナーゼＣ（シモン（Ｓimon，Ｍ．Ｉ.）ら、Ｓcience、２５２：８０２−８（１９９１））が含まれる。例えば、シグナルトランスダクションの一形態において、ホルモン結合の効果は酵素、アデニル酸シクラーゼの細胞内部での活性化である。ホルモンによる酵素の活性化はヌクレオチドＧＴＰの存在に依存し、ついでＧＴＰはまた、ホルモン結合に影響を及ぼす。Ｇ−タンパク質はホルモン受容体をアデニル酸シクラーゼに結合する。Ｇ−タンパク質はホルモン受容体によって活性化されるとＧＴＰを結合したＧＤＰに交換することを示している。ついで、ＧＴＰ−運搬形態は活性化したアデニレートシクラーゼに結合する。ＧＴＰからＧＤＰへの加水分解はＧ−タンパク質自身によって触媒化され、その基本の不活性形態Ｇ−タンパク質へと戻す。従って、Ｇ−タンパク質は受容体からのシグナルをエフェクター送る中間体としておよびシグナルの持続時間をコントロールする時計としての２つの役割として機能する。Ｇ−タンパク質結合型受容体の膜タンパク質遺伝子スーパーファミリーは推定の７回膜貫通ドメインを有するものとして特徴付けられている。該ドメインは細胞外または細胞質ループによって結合した膜貫通α−ヘリックスを代表すると信じられている。Ｇ−タンパク質結合受容体には広範囲の生物学的に活性のある受容体、ホルモン、ウイルス、増殖因子および神経受容体などを含む。Ｇ−タンパク質結合型受容体は多様な酵素、イオンチャンネルおよびトランスポーターにヘテロトリマーＧ−タンパク質により細胞内的に結合することができる（例えば、ジョンソン（Ｊohnson）ら、Ｅmdc.，Ｒev.、１０：３１７−３３１（１９８９）参照）。異なるＧ−タンパク質α−サブユニットは、好ましくは細胞中の多様な生物学的機能を調節するための特定のエフェクターを刺激する。Ｇ−タンパク質結合型受容体の細胞室の残基は、Ｇ−タンパク質結合型受容体の幾つかを結合したＧ−タンパク質の調節のための重要なメカニズムである。Ｇ− タンパク質結合受容体は哺乳動物宿主内の多数の部位において見いだされる。本発明のヒトアミン受容体はＧ−タンパク質結合型受容体である。知覚神経機能および運動神経機能は神経伝達によって行われる。神経伝達とは、シナプス前ニューロンと呼ばれる１つのニューロンからシナプス後ニューロンと呼ばれるもう１つのニューロンへむかってシナプス間隙を横切る、神経インパルスの伝導である。シナプス間隙を横切る神経インパルス伝達には、神経伝達物質の分泌が伴う。該神経伝達物質はシナプス前ニューロンにおいて小胞に封入されて、シナプス間隙に放出され、シナプス後ニューロンにあるその受容体を見つける。神経インパルスの伝達は通常は一時的である。シナプス伝達の不可欠な特性は、神経伝達物質放出に続く迅速な作用の終了である。カテコールアミン、セロトニンおよびある種のアミノ酸（例えばγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルタミン酸およびグリシンなど）を含む多くの神経伝達物質の場合、シナプス作用の迅速な終了はシナプス前末端および周辺の神経膠細胞への神経伝達物質の取り込みによって達成される。この迅速な神経伝達物質の再蓄積は、シナプス前末端による再取り込みの結果である。シナプス前末端では、再取り込みのための種々の分子構造が、コリンや生物起源のアミン（ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリン、セロトニンおよびヒスタミンなどの低分子量神経伝達物質）といった神経伝達物質に対して高い特異性を持つ。これらの分子装置は、トランスポーターと呼ばれる受容体である。これらのトランスポーターは神経伝達物質をシナプス間隙からシナプス前ニューロンの細胞膜を逆に横切ってシナプス前末端の細胞質内へ動かすことによって、これらの物質の機能を終了させる。神経伝達物質の取り込みの阻害または刺激は、内因性神経伝達物質の作用を調節する手段を提供する。神経伝達物質は運動障害、精神分裂病、薬物嗜癖、不安、偏頭痛、てんかん、ミオクローヌス、痙性麻痺、筋痙攣、精神分裂病、認識障害、抑鬱症状、パーキンソン病およびアルツハイマー病などを含む多数の病理生理学および治療に関する。該トランスポーターによる神経伝達物質の再取り込みは、ナトリウム依存性でありうる。例えばＧＡＢＡトランスポーターは、最近記されたナトリウム依存性神経伝達物質トランスポーター遺伝子ファミリーのメンバーである。これらのトランスポーターは細胞外部位、膜貫通部位および細胞内部位を持つ膜貫通型受容体錯体である。ナトリウム依存性神経伝達物質トランスポータータンパク質の全ファミリーの膜貫通ドメインにおいてはかなりの程度のホモロジーが存在し、同一のアミノ酸を有する区間がかなりあるが、これらのドメインにつながっている細胞内ループおよび細胞外ループにおいて認められるホモロジーははるかに低い。特に細胞外ループは、各トランスポーターに独特であるように思われる。この領域は基質特異性および／またはインヒビター特異性に寄与するあろう。本発明のポリペプチドは推定的にアミン受容体として同定されている。本同定はラットアミン受容体へのアミノ酸配列ホモロジーの結果なされている。本発明の一つの態様により、新規な成熟受容体ポリペプチドならびに生物学的に活性であり、診断上または治療上有用なそのフラグメント、アナログおよび誘導体を提供する。本発明の受容体ポリペプチドはヒト起源のものである。本発明の別の態様により、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを含め、本発明の受容体ポリペプチドをコードする単離された核酸分子、さらにはまた、そのアンチセンスアナログ、ならびに生物学的に活性であって、診断上または治療上有用なそのフラグメントを提供する。本発明のさらなる態様により、該ポリペプチドの発現および連続回収を促進するような条件下で、本発明の受容体ポリペプチドをコードする核酸配列を含む組換え原核生物および／または真核生物宿主細胞を培養することを含む、組換え技術によるそのような受容体ポリペプチドの製造方法を提供する。本発明のさらに別の態様により、そのような受容体ポリペプチドに対する抗体を提供する。本発明の他の態様により、本発明の受容体ポリペプチドに結合し該ポリペプチドの活性化を活性化または阻害する化合物のスクリーニングの方法を提供する。本発明のさらに別の態様により、本発明のアミノ受容体の過少発現から引き起こされる異常な状態の予防および／または処置のために本発明の受容体ポリペプチドに結合し、活性化する、宿主に化合物を投与する方法を提供する。本発明の他の態様により、該ポリペプチドの過少発現または受容体ポリペプチドに対するリガンドの過少発現に関する状態を治療するため、遺伝子治療を介して本発明の受容体ポリペプチドを投与する方法を提供する。本発明のさらに別の態様により、本発明のアミン受容体の発現から引き起こされる状態の予防および／または治療のため、本発明の受容体ポリペプチドに結合し、該ポリペプチドの活性化を阻害する化合物を投与する方法を提供する。本発明のさらに別の態様により、本発明のポリヌクレオチドの配列に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さの核酸分子を含む核酸プローブを提供する。本発明のさらに別の態様により、そのようなポリペプチドをコードする核酸配列中の変異に関する疾患を検出する診断アッセイおよび該受容体ポリペプチドの可溶性形態のレベルの変化を検出する診断アッセイを提供する。本発明のさらに別の態様により、科学的研究、ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの製造に関連したイン・ビトロでの目的のためにそのような受容体ポリペプチドまたはそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを利用する方法を提供する。本発明のこれらの態様および他の態様は、本明細書中の教示から当業者に明らかであろう。以下の図面は、本発明の態様を説明するものであって、請求の範囲により包含される本発明の範囲を限定しようとするものではない。図１は、本発明のヒトアミン受容体のｃＤＮＡ配列および対応する推定アミノ酸配列を示している。アミノ酸に関する標準的な１文字略号を使用する。シークエンシングは３７３自動化ＤＮＡシークエンサー（３７３Ａutomated ＤＮＡ s equencer）（アプライド・バイオシステムズ、インク（Ａpplied Ｂiosystems, Ｉnc.）を用いて行った。図２は、アミントランスポーターまたは本発明（最上段）およびマウスβ−１アドレナリン受容体（最下段）の間のアミノ酸ホモロジーアラインメントを示す。図３は、アミントランスポーターまたは本発明（最上段）およびヒトドーパミンＤ２受容体（最下段）の間のアミノ酸ホモロジーアラインメントを示す。本発明のアミン受容体は哺乳動物細胞中に存在するアミン神経伝達物質の１またはいずれかの再取り込みの責任を負ってよい。そのようなアミントランスポーターの例には、これらに限るものではないが、ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリン、セロトニンおよびヒスタミンおよびＧＡＢＡ、グリシン、グルタミン酸が含まれる他のアミノ神経伝達物質が含まれる。本発明の一つの態様により、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有する成熟ポリペプチド、または１９９５年６月１日にＡＴＣＣ受託番号第号として寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドをコードする、単離された核酸(ポリヌクレオチド)を提供する。本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはヒト単球において見いだされてよい。本発明のポリヌクレオチドはヒトゲノムライブラリーにおいて発見された。該ポリヌクレオチドはＧ−タンパク質結合受容体ファミリーに構造上関連する。該ポリヌクレオチドは３３７アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。該タンパク質は３３０アミノ酸にわたってマウスβ−１アドレナリン受容体に３２.０９９％の同一性および５５.８６４％の類似性を有して最も高いホモロジーを示す。該タンパク質はまた、３１２アミノ酸にわたって、ヒトドーパミンＤ₂受容体に３２％の同一性および５８.３３３％の類似性を有してホモロジーを示す。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形で、またはＤＮＡの形であり得、このＤＮＡには、cＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡが含まれる。該ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得、また一本鎖であるなら、コーディング鎖または非コーディング(アンチーセンス)鎖であり得る。成熟ポリペプチドをコードするコーディング配列は、図１（配列番号：１）に示すコーディング配列または寄託されたクローンのコーディング配列と同じであってよく、あるいは遺伝コードの重複または縮重の結果として、図１（配列番号：１）のＤＮＡまたは寄託されたcＤＮＡと同じ成熟ポリペプチドをコードする異なったコーディング配列であってもよい。図１（配列番号：２）の成熟ポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドには、以下のものが含まれ得る：成熟ポリペプチドのコーディング配列のみ；成熟ポリペプチドのコーディング配列および付加的コーディング配列；成熟ポリペプチドのコーディング配列(また場合により、付加的コーディング配列)、および成熟ポリペプチドのコーディング配列のイントロンまたは非コーディング配列５'および／または３' といったような非コーディング配列。従って、「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という用語は、ポリペプチドのコーディング配列のみが含まれるポリヌクレオチド、さらにはまた、付加的コーディングおよび／または非コーディング配列が含まれるポリヌクレオチドを包含する。本発明はさらに、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体をコードする、上記のポリヌクレオチドの変異体に関する。ポリヌクレオチドの変異体は、ポリヌクレオチドの天然に存在するアレル変異体またはポリヌクレオチドの天然には存在しない変異体であり得る。従って、本発明には、図１（配列番号：２）に示すのと同じ成熟ポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、さらにはまた、そのようなポリヌクレオチドの変異体が含まれ、これらの変異体は、図１（配列番号：２）のポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログをコードする。そのようなヌクレオチド変異体には、欠失変異体、置換変異体並びに付加および挿入変異体が含まれる。先に示したように、該ポリヌクレオチドは、図１（配列番号：１）に示すコーディング配列の天然に存在するアレル変異体または寄託されたクローンのコーディング配列の天然に存在するアレル変異体であるコーディング配列を有し得る。当該技術分野で知られているように、アレル変異体は、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの置換、欠失または付加を有し得る別の形のポリヌクレオチド配列であり、これは、コードされるポリペプチドの機能を実質的には変えない。該ポリヌクレオチドはまた、本発明の完全長のポリペプチドのＴＭおよび細胞内ドメインから開裂されているポリペプチドの細胞外部位であるアミン受容体ポリペプチドの可溶性形態をコードしてもよい。本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドの精製を可能とするマーカー配列にイン・フレームで融合したコーディング配列も有し得る。細菌宿主の場合には、そのマーカー配列は、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を提供するための、pＱＥ−９ベクターにより与えられるヘキサ−ヒスチジンタグ(tag)であってよく、または、哺乳動物宿主、例えば、ＣＯＳ−７細胞を使用する場合には、そのマーカー配列は、赤血球凝集素(ＨＡ)タグであってよい。ＨＡタグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質から得られるエピトープに対応する(ウィルソン（Ｗilson,Ｉ.)ら、Ｃell、３７：７６７(１９８４）)。本発明の全長の遺伝子のフラグメントは、全長のｃＤＮＡおよび該遺伝子に高い類似性を有するかまたは同様の生物学的活性を有する他のｃＤＮＡを単離するためのcＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションプローブとして使用してよい。このタイプのプローブは、好ましくは少なくとも３０塩基を有し、例えば、５０またはそれより多くの塩基を含んでいてよい。該プローブはまた、全長の転写物およびゲノムクローンまたは調節領域およびプロモーター領域、エクソンおよびイントロンを含む完全な遺伝子を含むクローンに対応するcＤＮＡクローンを同定するのに使用してよい。スクリーニングの例には、オリゴヌクレオチドプローブを合成するための公知のＤＮＡ配列を使用することによって該遺伝子のコーディング領域を単離することを含む。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識したオリゴヌクレオチドはヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはmＲＮＡのライブラリーをスクリーニングして該プローブがライブラリーのどのメンバーにハイブリダイズするのかを決定するのに使用する。本発明はさらに、配列間に少なくとも７０％、また好ましくは少なくとも９０％およびより好ましくは少なくとも９５％の同一性がある場合に、上記の配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本発明は特に、ストリンジェント条件下、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書中で使用する場合、「ストリンジェント条件」という用語は、配列間に少なくとも９５％、また好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にのみ、ハイブリダイゼーションが起こるであろうことを意味する。好ましい態様では、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドは、図１（配列番号：１）のcＤＮＡもしくは寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能もしくは活性を保持する、すなわち、ポリペプチドが、例えば、第２メッセンジャー応答を引き起こすことによって膜結合アミン受容体として機能しないとしても、該受容体のリガンドに結合することができる能力をを保持することによって可溶性アミン受容体として機能するポリペプチドをコードする。かわりに、該ポリペプチドは本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズし、および該ポリヌクレオチドに上記に示すように同一性を有し、活性は保有しているかまたはいない少なくとも２０塩基、好ましくは３０塩基およびより好ましくは少なくとも５０塩基を有する。そのようなポリペプチドは配列番号：１のポリヌクレオチド、例えば該ポリヌクレオチドの回収のためのプローブとして、または診断プローブまたはＰＣＲプライマーとして使用してよい。従って、本発明は配列番号：２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、およびより好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチドならびにそのフラグメント（該フラグメントは少なくとも３０塩基および好ましくは少なくとも５０塩基を有する）およびそのようなポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドに関する。本明細書中でいう寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条件の下に保持されるであろう。これらの寄託は、単に当業者への便宜として与えられるものであって、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ．§１１２下に要求されることを承認するものではない。寄託された物質中に含まれるポリヌクレオチドの配列、さらにはまた、それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書の一部を構成して、本明細書中の配列のいずれかの記載と矛盾する際には該寄託された物質中の配列が優先する。寄託された物質を製造し、使用し、または販売するには、実施許諾が要求され得、またそのような実施許諾は、ここでは付与されない。本発明はさらに、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有する、または寄託されたcＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有するヒトアミン受容体ポリペプチド、さらにはまた、そのようなポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体に関する。図１（配列番号：２）のポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチドを示す場合、「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」という用語は、そのようなポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能もしくは活性を保持する、すなわち、アミン受容体として機能するかまたは、たとえ該ポリペプチドが例えば該受容体の可溶性形態などＧ−タンパク質結合受容体として機能しないとしても該受容体のリガンドに結合する能力を有するポリペプチドを意味する。本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチド、好ましくは組換えポリペプチドであってよい。図１（配列番号：２）のポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログは、（ｉ）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が同型または非同型アミノ酸残基(好ましくは、同型アミノ酸残基)で置換されており、またそのような置換アミノ酸残基が遺伝コードによりコードされるものであってもよく、またはコードされたものでなくてもよいもの、（ii）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基に置換基が含まれるもの、または（iii）成熟ポリペプチドが、該ポリペプチドの半減期を増加させる化合物(例えば、ポリエチレングリコール)のような、他の化合物と融合しているもの、または（iv）成熟ポリペプチドの精製に使用される付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融合しているもの（v）該ポリペプチドのフラグメントが可溶性であり、すなわち膜結合ではないが膜結合受容体に対するリガンドを結合するものであり得る。そのようなフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、単離された形で提供されるのが好ましく、好ましくは、均一となるまで精製される。本発明のポリペプチドは配列番号：２のポリペプチドならびに配列番号：２のポリペプチドに少なくとも７０％の類似性（好ましくは少なくとも７０％の同一性）およびより好ましくは少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）およびさらになおより一層好ましくは９５％の類似性（さらになお好ましくは、少なくとも９５％の同一性）を有する配列番号：２のポリペプチドを含み、また、そのようなポリペプチドの部分をも含み、そのようなポリペプチドの部分は一般的には少なくとも３０アミノ酸およびより好ましくは少なくとも５０アミノ酸を含む。当該技術分野において知られているように、２つのポリペプチドの間の「類似性」は、１つのポリペプチドのアミノ酸配列およびその保存されたアミノ酸置換基を第２のポリペプチドの配列に対して比較することにより決定される。本発明のポリペプチドのフラグメントまたは一部は、ペプチド合成による対応する完全長のポリペプチドを調製するのに使用してよい；それゆえ、該フラグメントは完全長ポリペプチドを産生するための中間体として使用されてよい。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントまたは一部は、本発明の完全長ポリヌクレオチドを合成するために使用してよい。「遺伝子」なる語は、ポリペプチド鎖を産生することに関するＤＮＡセグンメントを意味する：コーディング領域の前および後に続く領域（リーダーおよびトレーラー）ならびに個々のコーディングセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。「単離された」という用語は、物質がその元の環境(例えば、それが天然に存在するなら、天然の環境)から除去されていることを意味する。例えば、生存動物中にある天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、天然の系における共存物質のいくつかまたは全てから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの一部となり得、および／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の部分となり得、またそのようなベクターまたは組成物はその天然の環境の一部ではないという点で、なお単離されている。本発明のポリペプチドは配列番号：２のポリペプチドならびに配列番号：２のポリペプチドに少なくとも７０％の類似性（好ましくは少なくとも７０％の同一性）およびより好ましくは少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）およびさらになおより一層好ましくは９５％の類似性（さらになお好ましくは、少なくとも９５％の同一性）を有する配列番号：２のポリペプチドを含み、また、そのようなポリペプチドの部分をも含み、そのようなポリペプチドの部分は一般的には少なくとも３０アミノ酸およびより好ましくは少なくとも５０アミノ酸を含む。当該技術分野において知られているように、２つのポリペプチドの間の「類似性」は、１つのポリペプチドのアミノ酸配列およびその保存されたアミノ酸置換基を第２のポリペプチドの配列に対して比較することにより決定される。本発明のポリペプチドのフラグメントまたは一部は、ペプチド合成による対応する完全長のポリペプチドを調製するのに使用してよい；それゆえ、該フラグメントは完全長ポリペプチドを産生するための中間体として使用されてよい。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントまたは一部は、本発明の完全長ポリヌクレオチドを合成するために使用してよい。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドが含まれるベクター、本発明のベクターで遺伝的に操作された宿主細胞、および本発明のポリペプチドの組換え技術による製造にも関する。宿主細胞は、例えば、クローニングベクターまたは発現ベクターであり得る本発明のベクターで遺伝的に操作される（トランスデュースされ、または形質転換され、またはトランスフェクトされる）。該ベクターは、例えば、プラスミド、ウイルス粒子、ファージ等の形であり得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化し、トランスフォーマントを選択し、または本発明の遺伝子を増幅するのに適するよう改変された従来の栄養培地で培養することができる。温度、ｐＨ等といったような培養条件は、発現用に選択された宿主細胞で先に使用した培養条件であって、当業者に明らかであろう。本発明のポリヌクレオチドは、ポリペプチドを組換え技術により製造するのに使用することができる。従って、例えば、該ポリヌクレオチドを、ポリペプチドを発現するための様々な発現ベクターのいずれか１つに含ませることができる。そのようなベクターには、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０の誘導体；細菌プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡとの組合せから得られるベクター；ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病といったようなウイルスＤＮＡが含まれる。しかし、他のいずれのベクターも、それが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。適当なＤＮＡ配列を様々な方法によりベクターに挿入することができる。一般には、ＤＮＡ配列を当業界で公知の方法により適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入する。そのような方法および他の方法は、当業者の範囲内であると思われる。発現ベクターのＤＮＡ配列は、適当な発現制御配列（プロモーター）に作動可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を行う。そのようなプロモーターの代表例として、以下のものが挙げられる：ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、大腸菌(Ｅ．coli) 、lacまたはtrp、ファージラムダＰ_Lプロモーター、および原核もしくは真核細胞またはそれらのウイルスでの遺伝子の発現を制御することが知られている他のプロモーター。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写終結区も含む。該ベクターはまた、発現を増幅するのに適当な配列も含み得る。さらに、発現ベクターは、真核細胞培養の場合にはジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性といったような、または大腸菌ではテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性といったような、形質転換された宿主細胞の選択のための表現型特性を与えるために、１つまたはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子を含むのが好ましい。上記のような適当なＤＮＡ配列、さらにはまた、適当なプロモーターまたは制御配列を含むベクターを、適当な宿主を形質転換するために使用して、その宿主がタンパク質を発現するのを可能にすることができる。適当な宿主の代表例として、以下のものが挙げられる：大腸菌、ストレプトマイセス（Ｓtreptomyces）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓalmonella typhi murium）といったような細菌細胞；酵母のような真菌細胞；Ｄrosophila Ｓ２およびＳpodoptera Ｓｆ９といったような昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢow esメラノーマといったような動物細胞；アデノウイルス；植物細胞等。適当な宿主の選択は、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。とりわけ、本発明にはまた、先に広く記載した配列を１つまたはそれ以上含む組換え構築物も含まれる。その構築物は、本発明の配列が順または逆方向で挿入されている、プラスミドまたはウイルスベクターといったようなベクターを含む。この実施態様の好ましい態様では、該構築物はさらに、例えば、該配列に作動可能に結合したプロモーターを含め、制御配列を含む。適当なベクターおよびプロモーターが多数、当業者に知られており、市販されている。以下のベクターを例として挙げる。細菌用：pＱＥ７０、pＱＥ６０、pＱＥ−９（キアゲン（Ｑiag en））、pＢＳ、pＤ１０、ファージスクリプト（phagescript）、psiＸ１７４、 pbluescript ＳＫ、pbsks、pＮＨ８Ａ、pＮＨ１６ａ、pＮＨ１８Ａ、pＮＨ４６Ａ（ストラタジーン（Ｓtratagene））；pＴＲＣ９９ａ、pＫＫ２２３−３、pＫＫ２３３−３、pＤＲ５４０、pＲＩＴ５（ファルマシア（Ｐharmacia））。真核生物用：pＷＬＮＥＯ、pＳＶ２ＣＡＴ、pＯＧ４４、pＸＴ１、pＳＧ（ストラタジーン）、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳＧ、pＳＶＬ（ファルマシア）。しかし、他のいずれのプラスミドまたはベクターも、それらが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。プロモーター領域は、ＣＡＴ（クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたは選択可能なマーカーを有する他のベクターを用いて、いずれかの所望の遺伝子から選択することができる。２つの適当なベクターは、ＰＫＫ２３２ −８およびＰＣＭ７である。個々に名付けられた細菌プロモーターには、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gpt、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびtrpが含まれる。真核プロモーターには、ＣＭＶ即時初期（immediate early）、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来のＬＴＲ、およびマウスのメタロチオネイン−Ｉが含まれる。適当なベクターおよびプロモーターの選択は、十分、当業者のレベルの範囲内である。さらなる態様では、本発明は、上記の構築物を含む宿主細胞に関する。その宿主細胞は、哺乳動物細胞のような高等真核細胞、酵母細胞のような下等真核細胞であり得て、または該宿主細胞は、細菌細胞のような原核細胞であり得る。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクションまたはエレクトロポレーションにより行うことができる。（デイビス（Ｄavis，Ｌ.）、ディブナー（Ｄibner，Ｍ.）、バッティー（Ｂattey，Ｉ.）、ベーシック・メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｂasic Ｍethods in Ｍolecular Ｂiology）（１９８６））。宿主細胞中の構築物を通常の方法で使用して、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を製造することができる。あるいはまた、本発明のポリペプチドは、従来のペプチド合成装置により合成的に製造することができる。成熟タンパク質は、適当なプロモーターの制御下、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞中で発現させることができる。そのようなタンパク質を、本発明のＤＮＡ構築物から得られるＲＮＡを用いて製造するために、無細胞翻訳系もまた使用することができる。原核および真核生物宿主で使用するのに適当なクローニングおよび発現ベクターは、サンブルック（Ｓambrook）ら、モレキュラー・クローニング（Ｍolecular Ｃloning）：ア・ラボラトリー・マニュアル（ＡＬaboratory Ｍanual）、第２版、コールド・スプリング・ハーバー（Ｃold Ｓp ring Ｈarbor）、ニューヨーク、（１９８９）により記載されており、この開示は、本明細書の一部を構成する。本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの高等真核生物による転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増加する。エンハンサーは、プロモーターに作用してその転写を増加させる、通常、約１０〜３００bpの、ＤＮＡのシス作用性要素である。例には、bp １００〜２７０の、複製起点の後期側にあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが含まれる。通例、組換え発現ベクターには、複製起点、および宿主細胞の形質転換を可能にする選択可能なマーカー、例えば、大腸菌のアンピシリン耐性遺伝子およびサッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．cerevisiae）ＴＲＰ１遺伝子、並びに下流の構造配列の転写を行わせるために高度に発現される遺伝子から得られるプロモーターが含まれるであろう。そのようなプロモーターは、とりわけ、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）のような解糖系酵素、α−因子、酸性ホスファターゼ、または熱ショックタンパク質などをコードするオペロンから得ることができる。ヘテロロガス構造配列は、翻訳開始および終結配列と共に、適当な相（phas e）で構築される。場合により、そのヘテロロガス配列は、所望の特性、例えば、発現された組換え産物の安定化または精製の簡易化を与えるＮ−末端同定ペプチドが含まれる融合タンパク質をコードすることができる。細菌で使用するのに有用な発現ベクターは、所望のタンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を、適当な翻訳開始および終結シグナルと共に、機能的なプロモーターを有する作動可能なリーディング相に挿入することにより構築される。そのベクターは、ベクターの維持を確実なものとするために、また所望により、宿主内での増幅を与えるために、１つまたはそれ以上の表現型の選択可能なマーカーおよび複製起点を含むであろう。形質転換に適当な原核宿主には、大腸菌、バシラス・サチリス（Ｂacillus subtilis）、サルモネラ・ティフィムリウム、ならびにシュードモナス（Ｐseudomonas）属、ストレプトマイセス属、およびスタフィロコッカス（Ｓtaphylococcus）属の範囲内の様々な種が含まれるが、他のものもまた、選択物質として使用することができる。代表的であるが、非限定的な例として、細菌で使用するのに有用なベクターは、よく知られたクローニングベクター pＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝要素を含む市販のプラスミドから得られる、選択可能なマーカーおよび細菌の複製起点を含み得る。そのような市販のベクターには、例えば、pＫＫ２２３−３（ファルマシア・ファイン・ケミカルズ（Ｐharmacia Ｆine Ｃhemical s）、ウプサラ（Ｕppsala）、スウェーデン）およびＧＥＭ１（プロメガ・バイオテク（Ｐromega Ｂiotec）、マディソン、ウィスコンシン、米国）が含まれる。これらのpＢＲ３２２「骨核」部分を適当なプロモーターおよび発現されるべき構造配列と組み合わせる。適当な宿主株を形質転換して、その宿主株を適当な細胞密度まで増殖させた後、選択されたプロモーターを適当な方法（例えば、温度シフトまたは化学誘導）により誘導して、細胞をさらなる期間培養する。細胞を、典型的には、遠心分離により収集し、物理的または化学的方法により破壊して、その結果得られた粗製の抽出物を更なる精製のために保持する。タンパク質の発現に使用される微生物細胞は、凍結−解凍サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含め、いずれの便利な方法によっても破壊でき、そのような方法は、当業者に周知である。組換えタンパク質を発現させるために、様々な哺乳動物細胞培養系もまた使用することができる。哺乳動物発現系の例には、ガルツマン（Ｇluzman）、Ｃell 、２３：１７５（１９８１）により記載されている、サルの腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系、および適合可能なベクターを発現させることができる他の細胞系、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨeＬaおよびＢＨＫ細胞系が含まれる。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、またいずれかの必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および５’に隣接する非転写配列もまた含むであろう。ＳＶ４０のスプライシングから得られるＤＮＡ配列、およびポリアデニル化部位を使用して、必要とされる非転写遺伝要素を与えることができる。ヒトアミン受容体ポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈降、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーが含まれる方法により、組換え細胞培養物から回収して、精製することができる。必要に応じて、タンパク質の再生工程を、成熟タンパク質の立体配置を完成するのに使用することができる。最後に、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を最終精製工程に使用することができる。本発明のポリペプチドは、天然に精製された産物、もしくは化学合成法の産物であり得るか、または原核もしくは真核宿主から（例えば、培養物中の細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞によって）組換え技術により製造することができる。組換え製造方法で使用する宿主により、本発明のポリペプチドは、グリコシル化され得るか、またはグルコシル化され得ない。本発明のポリペプチドにはまた、最初のメチオニンアミノ酸残基が含まれ得る。全長のヒトアミントランスポーター遺伝子のフラグメントは、全長の遺伝子および該遺伝子に高い類似性を有するかまたは同様の生物学的活性を有する他の遺伝子を単離するためのcＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションプローブとして使用してよい。このタイプのプローブは、少なくとも２０塩基、好ましくは少なくとも３０塩基、最も好ましくは少なくとも５０またはそれより多くの塩基を含んでいてよい。該プローブはまた、全長の転写物およびゲノムクローンまたは調節領域およびプロモーター領域、エクソンおよびイントロンを含む完全なヒトアミントランスポーター遺伝子を含むクローンに対応するcＤＮＡを同定するのに使用してよい。スクリーニングの例には、オリゴヌクレオチドプローブを合成するため公知のＤＮＡ配列を使用することによって、ヒトアミントランスポーター遺伝子のコーディング領域を単離することを含む。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識したオリゴヌクレオチドはヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはmＲＮＡのライブラリーをスクリーニングして該プローブがライブラリーのどのメンバーにハイブリダイズするのかを決定するのに使用する。本発明は、本発明のヒトアミン受容体によって輸送されるアミン神経伝達物質を決定する方法を提供する。これらの神経伝達物質を同定するアッセイの一例では、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼをコードする組換えワクシニアウイルスＶＴＦ− ７株に哺乳動物細胞を感染させた後、ベクター（例えばpＢＳＳＫII（−））を使用して、リポソーム媒介トランスフェクション法で、本発明のアミン受容体遺伝子に感染させる。等量のベクターのみを用いて、対照トランスフェクションをも行なう。アッセイは、トランスフェクションの８時間後に、改良クレブス-リンゲル-ＨＥＰＥＳ緩衝液中で行なう。ついで、細胞を［³Ｈ］神経伝達物質（例えばＧＡＢＡ、ドーパミン、セロトニンなど）と共に培養する。細胞を氷上に置くことによって取り込みを停止させる。細胞を１％ＳＤＳ中で可溶化し、蓄積した放射能の量を液体シンチレーションカウンティングで決定する。各アッセイについてpＢＳＳＫIIによる対照トランスフェクションを用いてバックグラウンドを測定し、特定のアミン神経伝達物質について決定したシグナルからその値を差し引くことによって、有意な量が取り込まれていたら、その特定の神経伝達物質が本発明のヒトアミン受容体によって取り込まれることが確定される。本発明は、アミン受容体をコードするｍＲＮＡの存在を検出することによる、細胞表面における本発明のアミン受容体の発現を検出する方法をも提供する。この方法では、当該技術分野においてよく知られた方法で細胞から総ｍＲＮＡを得て、そのようにして得られたｍＲＮＡを、少なくとも１０ヌクレオチドからなり、かつ、本発明のヒトアミン受容体をコードする核酸分子の配列内に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることのできる核酸プローブと、ハイブリダイズ条件下に接触させ、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出し、それによってその細胞によるアミン受容体の発現を検出する。ｍＲＮＡ分子などの標的核酸分子に対するプローブのハイブリダイゼーションには、当該技術分野において公知の技術を使用する。しかし、本発明の一態様では、溶解した細胞から沈殿によって核酸を抽出し、ｍＲＮＡ分子のポリＡテールを結合するカラムを用いて、その抽出物からｍＲＮＡを単離する。次に、ニトロセルロース膜上でそのｍＲＮＡを、放射能で標識したプローブにさらす。この際、プローブは相補的なｍＲＮＡ配列にハイブリダイズすることによって、その相補的ｍＲＮＡ配列を標識する。結合はオートラジオグラフィーまたはシンチレーションカウンティングによって検出できる。しかし、これらの段階を行なう他の方法も当業者には良く知られている。別法として、ヒトアミン受容体に対する抗体を、該トランスポーターに該抗体が結合し、かつ、細胞表面におけるその受容体の存在を検出することのできる条件下に使用してもよい。そのような方法は、ある所定の細胞がアミン受容体の発現に欠陥を持つか否かを決定するために使用してよい。検出法としては、抗体に結合した蛍光マーカーが挙げられる。本発明は、ヒトアミン受容体に特異的に結合しうることが知られていない化合物が、ヒトアミン受容体に特異的に結合できるか否かを決定する方法であって、哺乳動物細胞での発現に適合させたプラスミド（このプラスミドは細胞表面に該アミン受容体を発現させるＤＮＡをも含有する）を含む哺乳動物細胞を、アミン受容体に結合することがわかっているリガンドの結合が可能な条件下に、上記化合物と接触させ、該哺乳動物アミン受容体に結合した化合物の存在を検出することからなり、結合した化合物が存在すれば、該化合物がヒトアミン受容体に特異的に結合できることが示されるという方法をも提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは研究試薬およびヒトの疾患の治療剤および診断薬の発見のための道具として使用してよい。本発明のアミン受容体は本発明の受容体ポリペプチドの活性化を活性化する（アゴニスト）または活性化を阻害する（アンタゴニスト）化合物をスクリーニングする工程において使用してよい。概して、そのようなスクリーニング手段は本発明の受容体ポリペプチドをその表面に発現する適切な細胞を提供することに関する。そのような細胞は哺乳動物、酵母、ショウジョウバエまたは大腸菌からの細胞を含む。特に、本発明の受容体をコードするポリヌクレオチドは細胞をトランスフェクションし、それによって該アミン受容体を発現する。ついで、該発現された受容体を試験化合物と接触させ、結合、機能的な応答の刺激または阻害を観察する。そのようなスクリーニングの手法の一つは本発明のアミン受容体を発現するためトランスフェクションする黒色素胞の使用に関する。そのようなスクリーニング技術は１９９２年２月６日に発行されたＰＣＴＷＯ９２／０１８１０において記載されている。従って、例えば、そのようなアッセイを該受容体をコードする黒色素胞を受容体リガンドおよびスクリーニングすべき化合物の両方と接触させることによって本発明の受容体ポリペプチドの活性化を阻害する化合物のスクリーニングのために使用してよい。該リガンドによって産生されたシグナルの阻害は該化合物が該受容体に対する潜在的なアンタゴニストである、すなわち該受容体の活性化を抑制することを示している。該スクリーニングはそのような細胞とスクリーニングされるべき化合物を接触させることによって該受容体を活性化する化合物を決定するおよび、そのような化合物がシグナルを産生する、すなわち該受容体を活性化するか否かを決定するために使用してよい。他のスクリーニング技術には、例えば、Ｓcience、Ｖolume ２４６、１８１− ２９６（１９８９年１０月）に記載されているように受容体の活性化によって引き起こされる細胞外ｐＨの変化を測定する系において、該アミン受容体を発現する細胞（例えば、トランスフェクションされたＣＨＯ細胞）の使用を含む。例えば、化合物は本発明の受容体ポリペプチドを発現する細胞に接触し、ついで第二メッセンジャー応答、例えばシグナルトランスダクションまたはｐＨの変化などが該可能性のある化合物が該受容体を活性化するかまたは阻害するかを決定するため測定してよい。他のそのようなスクリーニング技術は該アミン受容体をコードするＲＮＡをツメガエル（Ｘenopus）の卵母細胞に導入して該受容体を位置時的に発現させることに関する。ついで、該受容体卵母細胞を該受容体リガンドおよびスクリーニングすべき化合物に接触させ、該受容体の活性化を阻害すると考えられている化合物のスクリーニングの場合においてカルシウムシグナルの抑制または活性化の検出を行ってよい。他のスクリーニング技術には、該受容体がホスホリパーゼＣまたはＤに結合した該アミン受容体を発現することに関する。そのような細胞の代表的な例として、内皮細胞、平滑筋細胞、胎児腎臓細胞などが挙げられる。該スクリーニング上記のようにホスホリパーゼ第二シグナルからの受容体の活性化または活性化の阻害を検出することによって行われてよい。他の方法は、その表面に受容体を有する細胞に対する標識されたリガンドの結合の阻害を決定することによって、本発明のアンタゴニスト受容体ポリペプチドの活性化を抑制する化合物のスクリーニングに関する。そのような方法は真核生物細胞を該細胞がその表面に該受容体を発現するようなアミン受容体をコードするＤＮＡとトランスフェクションすることおよび該細胞を公知のリガンドの標識された形態の存在下の化合物と接触させることに関する。該リガンドは例えば、放射能などで標識することができる。標識された該受容体に結合したリガンドの量は、例えば該受容体の放射能を測定することによって測定する。該化合物が該受容体に結合する標識されたリガンドの量の減少によって決定されるなら、該受容体に対する標識されたリガンドの結合は阻害される。アミン受容体は哺乳動物宿主においていたるところに存在しており、多くの病理学を含む多くの生物学的機能に責任を負っている。従って、一方でアミン受容体を刺激する化合物および薬剤を見いだし、他方でアミン受容体の機能を抑制することができる化合物および薬剤を見いだすことは望ましい。本発明のアミン受容体に結合し抑制する化合物の例には抗体、場合によっては該アミン受容体に結合し、該アミン受容体の活性が保存されるような第二メッセンジャー応答を引き出してはいないオリゴペプチドを含む。抗体には抗体の抗原結合部位に一般的に関する独特の決定要因を認識する抗イディオタイプ抗体を含む。他の例には該アミン受容体のリガンドに密接に関連しているタンパク質、すなわちリガンドのフラグンメントであって生物学的機能は喪失しており、該アミン受容体に結合する場合には、何の応答も引き出さないタンパク質を含む。アンチセンス技術の利用によって調製されたアンチセンス構築物は、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡによって（この方法は両方とも、ポリヌクレオチドのＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく）ことによって遺伝子発現を制御するために使用してよい。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド配列の５'コーディング部位を使用して、長さ約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、転写に関与する遺伝子領域に対して相補的であるよう設計し（三重らせん−リー（Ｌee）ら、Ｎucl.Ａcids Ｒes.、６：３０７３（１９７９）；クーニー（Ｃooney）ら、Ｓcience、２４１：４５６（１９８８）；およびダーバン（Ｄervan）ら、Ｓcience、２５１：１３６０（１９９１）を参照）、そのことによって、転写およびアミン受容体の産生を妨げる。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、イン・ビボにおいてmＲＮＡにハイブリダイズして、mＲＮＡ分子のアミン受容体への翻訳をブロックする(アンチセンス−オカノ(Ｏkano) 、Ｊ.Ｎeurochem.、５６：５６０（１９９１）；オリゴデオキシヌクレオチズ・アズ・アンチセンス・インヒビターズ・オブ・ジーン・エクスプレッション（Ｏ ligodeoxynucleotides as Ａntisense Ｉnhibitors of Ｇene Ｅxpression）、ＣＲＣプレス（ＣＲＣＰress）、ボカ・レイトン（Ｂoca Ｒaton）、フロリダ（１９８８））。上記のオリゴヌクレオチドをまた、細胞に送り込むことから、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをイン・ビボにおいて発現させて、アミン受容体の産生を阻害することができる。該アミン受容体に結合する小分子は、例えば、小ペプチドまたはペプチド様分子などの通常の生物学的活性が妨害されているようにリガンドに接近できないようにして、本発明の受容体ポリペプチドの活性化を阻害すためにも使用してよい。該アミン受容体の可溶性形態、例えば受容体のフラグメントなどは、本発明の受容体ポリペプチドに該リガンドを結合し膜結合アミン受容体と相互作用することからリガンドを妨害することによって該受容体を活性化することを抑制するのに使用してよい。本発明は、さらに本発明のアミン受容体の発現に関する異常な状態を処置する方法を提供し、被験体に上記の阻害性化合物をヒトアミン受容体が該受容体に特異的に結合することができるように結合するのに有効な量で製薬学的に許容し得る担体とともに投与し、その投与には、ヒトアミン受容体に特異的に結合しうることが知られていない化合物が、ヒトアミン受容体に特異的に結合できるか否かを決定する方法であって、哺乳類細胞での発現に適合させたプラスミド（このプラスミドは細胞表面にアミン受容体を発現させるＤＮＡをも含有する）を含む哺乳類細胞を、アミン受容体に結合することがわかっているリガンドの結合が可能な条件下に、上記化合物と接触させ、その哺乳類アミン受容体に結合した化合物の存在を検出することからなり、結合した化合物が存在すれば、その化合物がヒトアミン受容体に特異的に結合できることが示されるという方法をも提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは研究試薬およびヒトの疾患の治療剤および診断薬の発見のための道具として使用してよい。本発明のアミン受容体は本発明の受容体ポリペプチドの活性化を活性化する（アゴニスト）または活性化を阻害する（アンタゴニスト）化合物をスクリーニングする工程において使用してよい。概して、そのようなスクリーニング手段は本発明の受容体ポリペプチドをその表面に発現する適切な細胞を提供することに関する。そのような細胞は哺乳動物、酵母、ショウジョウバエまたは大腸菌からの細胞を含む。特に、本発明の受容体をコードするポリヌクレオチドは細胞をトランスフェクションし、それによって該アミン受容体を発現する。本発明はまた、本発明の医薬組成物の成分を１つまたはそれ以上充填した、１つまたはそれ以上の容器を含む医薬品パックまたはキットも提供する。そのような容器に関連して、製薬学的または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定された形の通知を付してもよく、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の、該当局による承認を表わす。さらに、該医薬組成物は、他の治療化合物と共に使用することができる。該医薬組成物は、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または皮内経路といったような、便利な方法で投与することができる。該医薬組成物は、具体的な徴候を治療および／または予防するのに有効な量で投与される。一般に、それらは、少なくとも約１０μg／kg（体重）の量で投与され、たいていの場合、それらは、１日当たり約８mg／kg（体重）を超えない量で投与されるであろう。ほとんどの場合、投与経路および症状等を考慮に入れて、投薬量は、毎日約１０μg／kg〜約１mg／kg（体重）である。ポリペプチドであるヒトアミン受容体およびアゴニストおよびアンタゴニスト化合物はまた、「遺伝子治療」と呼ばれることが多い、そのようなポリペプチドのイン・ビボにおける発現により、本発明に従って使用してよい。従って、例えば、患者由来の細胞を、エクス・ビボにおいてポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）で操作した後、操作した細胞を該ペプチドで処置すべき患者に与える。そのような方法は、当該技術分野でよく知られている。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子の使用によって、細胞を当該技術分野でよく知られた方法により操作することができる。同様に、例えば、当該技術分野で公知の方法により、ポリペプチドのイン・ビボにおける発現のために、細胞をイン・ビボにおいて操作することができる。当該技術分野において知られているように、細胞をイン・ビボにおいて操作してポリペプチドをイン・ビボにおいて発現させるために、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を製造するためのプロデューサー細胞を患者に投与することができる。そのような方法により本発明のポリペプチドを投与するためのこれらの方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明らかであろう。例えば、細胞を操作するための発現ビヒクルは、レトロウイルス以外のもの、例えば、適当な運搬ビヒクルと組み合わせた後、細胞をイン・ビボにおいて操作するために使用することができるアデノウイルスであってもよい。前記レトロウイルスプラスミドベクターが由来するレトロウイルスは、以下に限られるものではないが、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、レトロウイルス、例えば、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖肉腫ウイルスおよび乳癌ウイルスを含む。１つの態様において、レトロウイルスプラスミドベクターは、モロニーマウス白血病ウイルスから得られる。該ベクターは１つまたはそれ以上のプロモーターを含む。使用されてよい適切なプロモーターには、以下に限られるものではないが、レトロウイルスＬＴＲ；ＳＶ４０プロモーター；およびミラー(Ｍiller)ら、Ｂiotechniques、Ｖol.７、Ｎo.９、９８０−９９０（１９８９）に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、またはその他のプロモーター（例えば、以下に限るものではないが、ヒストン、pol IIIおよびβ−アクチンプロモーターを含む真核生物細胞のプロモーターなどの細胞プロモーター）が含まれる。使用されてよい他のウイルスプロモーターは、以下に限るものではないが、アデノウイルスプロモーター、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーターおよびＢ１９パルボウイルスプロモーターを含む。適切なプロモーターの選択は、本明細書中の教示から当業者には明らかであろう。本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は適切なプロモーターの調節下にある。使用されてよい適切なプロモーターには、以下に限られるものではないが、アデノウイルス主要後期プロモーター（major late promoter）などのアデノウイルスプロモーター；またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターなどの異種プロモーター；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター；ＭＭＴプロモーター、メタロチオネインプロモーターなどの誘導可能なプロモーター；熱ショックプロモーター；アルブミンプロモーター；ＡpoＡＩプロモーター；ヒトグロブリンプロモーター；単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーターなどのウイルスチミジンキナーゼプロモーター；レトロウイルスＬＴＲｓ（上記の修飾したレトロウイルスＬＴＲｓを含む）；β−アクチンプロモーター；およびヒト成長ホルモンプロモーターが含まれる。該プロモーターはまた、該ポリペプチドをコードする遺伝子を調節する本来のプロモーターであってよい。レトロウイルスプラスミドベクターはプロデューサー細胞株を形成するためパッケージング細胞株をトランスデュースするのに使用してよい。トランスフェクションしてよいパッケージング細胞の例には、以下に限るものではないが、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７、ψ−２、ψ−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ψＣＲＥ、ψＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ細胞株が含まれ（ミラー、Ｈuman Ｇene Ｔherapy、Ｖol.１、５ −１４頁（１９９０）に記載）（参照のため本明細書に内容を引用する）。該ベクターは当該技術分野において公知の方法によりパッケージング細胞をトランスデュースする。このような方法には、以下に限るものではないが、エレクトロポレーション、リポソームの使用、ＣａＰＯ₄沈降が含まれる。１つの別法として、該レトロウイルスプラスミドベクターはリポソーム中にカプセル化して入れられてよく、または脂質と結合され、ついで宿主に投与されてよい。該プロデューサー細胞株は該ポリペプチドをコードする核酸配列を含む感染性レトロウイルスベクター粒子を産生する。このようなレトロウイルスベクター粒子はイン・ビトロであれイン・ビボであれ、真核生物細胞をトランスデュースするため使用してよい。トランスデュースした真核生物細胞は該ポリペプチドをコードする核酸配列を発現するであろう。トランスデュースされてよい真核生物細胞には、以下に限られるものではないが、胎児幹細胞、胎児癌細胞、ならびに造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞および気管支上皮細胞が含まれる。本発明はまた、該ヒトアミン受容体遺伝子における変異の存在に関連した疾患または疾患の罹患し易さを検出するための診断アッセイの一部として、該ヒトアミン受容体遺伝子を使用することにも関する。そのような疾患はヒトアミン受容体の過少発現に関連する。ヒトアミン受容体遺伝子における変異を有する個体を、多様な技術によってＤＮＡレベルで検出してよい。診断用の核酸は、患者の細胞から、例えば、血液、尿、唾液、組織生検および剖検資料などから得られる。ゲノムＤＮＡを直接検出に使用してもよいし、分析前にＰＣＲ（サイキ（Ｓaiki）ら、Ｎature、３２４：１６３−１６６（１９８６））により酵素的に増幅してもよい。同様の目的のため、ＲＮＡまたはcＤＮＡもまた使用してよい。一例として、本発明のヒトアミン受容体タンパク質をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーは、ヒトアミン受容体の変異を同定し分析するのに使用することができる。例えば、欠失および挿入は、通常の遺伝子型に比較して増幅した産物の大きさにおける変化によって検出することができる。点突然変異は、増幅したＤＮＡを放射性標識したヒトアミン受容体ＲＮＡまたは、別法として放射性標識したヒトアミン受容体アンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイズさせることによって同定することができる。完全にマッチした配列はＲＮアーゼＡ消化または融点における相違によってミスマッチの二本鎖から区別することができる。ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝的検査は、変性剤を使用するかまたは使用しないゲルにおけるＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動度における変化の検出によって行われる。小さな配列の欠失および挿入は高分離（high resolution）ゲル電気泳動によって可視化することができる。異なる配列のＤＮＡフラグメントは、別々のＤＮＡフラグメントが、その特異的な融点または部分的な融点に従って別個の位置でゲルにて減速される変性ホルムアミド濃度勾配ゲル上で区別してよい（例えば、マイヤーズ（Ｍyers）ら、Ｓcience、２３０：１２４２(１９８５)）。特定の位置での配列の変化はまた、ＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的開裂方法（例えばコットン（Ｃotton）ら、ＰＮＡＳ、ＵＳＡ、８５：４３９７− ４４０１（１９８５））などのヌクレアーゼ保護アッセイによって明らかにされてよい。従って、特異的なＤＮＡ配列の検出は、ハイブリダイゼーション、ＲＮアーゼ保護、化学的開裂、直接ＤＮＡシークエンシングまたは制限酵素の使用（例えば、制限フラグメント長多型（ＲＦＬＰ））およびゲノムＤＮＡのサザンブロットなどの方法により行われてよい。より一層従来のゲル電気泳動およびＤＮＡシークエンシングに加えて、イン・サイチュ分析によっても検出されてよい。本発明はまた、該アミン受容体の過少発現に関連した疾患の診断に使用してよい多様な組織における本発明のアミン受容体ポリペプチドの可溶性形態のレベルの変化を検出するための診断アッセイにも関する。宿主由来のサンプル中の可溶性の受容体ポリペプチドのレベルを検出するために使用したアッセイは当業者によく知られており、かつラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロットアッセイおよび好ましくはＥＬＩＳＡアッセイなどを含む。ＥＬＩＳＡアッセイは最初に本発明のアミン受容体ポリペプチドの抗原に特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを含む。さらに、リポーター抗体は該モノクローナル抗体に対して調製される。リポーター抗体には放射能、蛍光、または本例においては西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素などの検出可能な試薬を結合させる。サンプルを宿主から除去し、例えばサンプル中の該タンパク質をサンプル中で結合させるポリスチレン皿などの固相支持体上でインキュベートする。該皿上の任意の遊離のタンパク質結合部位を、ついでウシ血清アルブミンのような非特異的なタンパク質とインキュベートすることによって覆う。次に、モノクローナル抗体を皿の中でインキュベートすると、その間にポリスチレン皿に結合した任意のアミン受容体タンパク質にモノクローナル抗体が結合する。全ての未結合モノクローナル抗体をバッファーで洗い流す。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したリポーター抗体を皿に入れると、アミン受容体タンパク質に結合した任意のモノクローナル抗体にリポーター抗体が結合する。結合していないリポーター抗体を洗い流す。ついでぺルオキシダーゼ基質を皿に加え、ついで所定の時間での発色量を標準曲線に対して比較すると、患者のサンプルの所定量において存在するアミン受容体タンパク質の量が測定される。本発明の配列はまた、染色体同定にも有益である。該配列を個々のヒト染色体上の特定の位置に対して特異的に標的化して、ハイブリダイズさせることができる。そのうえ、現在、染色体上の特定の部位を同定する必要がある。実際の配列データ（反復多型性）に基づいた染色体マーキング試薬は、現在、染色体位置をマークするのにはほとんど利用できない。本発明によるＤＮＡの染色体へのマッピングは、それらの配列を疾患関連遺伝子と関係づける重要な第一段階である。簡単に言えば、cＤＮＡからのＰＣＲプライマー（好ましくは、１５−２５bp ）を調製することにより、配列を染色体にマッピングすることができる。３'未翻訳領域のコンピューター分析を使用して、ゲノムＤＮＡ中の１を越えるエクソンにまたがらないプライマーを迅速に選択することから、増幅過程を複雑なものとする。ついで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに使用する。プライマーに対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが、増幅されたフラグメントを与えるであろう。体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定のＤＮＡを特定の染色体に帰属させるための迅速な方法である。同じオリゴヌクレオチドプライマーを用いての本発明を利用して、サブローカリゼーションは、特異的な染色体または大きいゲノムクローンのプール由来のフラグメントのパネルを用いる類似の方法で達成することができる。その染色体へマッピングするのに同様に利用することができる他のマッピング方法には、イン・サイチュハイブリダイゼーション、標識化フロー−ソーティッド（flow-sorted）染色体を用いてのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレクションが含まれる。ｃＤＮＡクローンの中期染色体スプレッド（spread）への蛍光イン・サイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を利用して、正確な染色体位置を一工程で与えることができる。この技術は、５０または６０塩基という短いｃＤＮＡで利用することができる。この技術の概説には、ベルマ（Ｖerma）ら、ヒューマン・クロモソームズ（Ｈuman Ｃhromosomes）：ア・マニュアル・オブ・ベーシック・テクニクス（a Ｍanual of Ｂasic Ｔechniques）、パガモン・プレス（Ｐerg amon Ｐress）、ニューヨーク（１９８８）を参照。ある配列が正確な染色体位置に一度マッピングされると、染色体上の配列の物理的位置を遺伝マップデータと関連付けることができる。そのようなデータは、例えば、マックジック（Ｖ．ＭcＫusick）、メンデリアン・インヘリタンス・イン・マン（Ｍendelian Ｉnheritance in Ｍan）（ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティー・ウェルチ・メディカル・ライブラリー（Ｊohns Ｈopkins Ｕni versity Ｗelch Ｍedical Ｌibrary）を介してオンラインで利用できる）に見出される。ついで、同じ染色体領域にマップされている遺伝子と疾患との間の関係を連鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝（coinheritance））によって確認する。次に、罹患した個体と罹患していない個体との間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する必要がある。変異が、罹患した個体のいくつかまたは全てにおいて認められるが、いずれの正常な個体においても認められないなら、その変異は疾患の原因となるものであるらしい。現在の物理的マッピングおよび遺伝的マッピング技術の解析から、疾患と関連する染色体領域に正確に局在化したｃＤＮＡは、５０〜５００の原因である可能性がある遺伝子の１つとなり得るであろう。（これは、１メガベースのマッピング分析および２０kb当り１つの遺伝子を仮定する）。ポリペプチド、それらのフラグメントもしくは他の誘導体、もしくはそれらのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免疫原として使用して、それらに対する抗体を製造することができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。本発明にはまた、キメラ、単鎖、およびヒト化抗体、さらにはまた、Ｆabフラグメント、またはＦab発現ライブラリーの生成物も含まれる。当該技術分野で公知の様々な方法を、そのような抗体およびフラグメントの製造に使用することができる。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して生成される抗体は、ポリペプチドを動物に直接注入することにより、またはポリペプチドを動物、好ましくはヒトでない動物に投与することにより得ることができる。ついで、そのようにして得られた抗体は、そのポリペプチド自体に結合するであろう。この方法では、ポリペプチドのフラグメントのみをコードする配列さえも、完全な天然のポリペプチドを結合する抗体を製造するのに使用することができる。ついで、そのような抗体を使用して、そのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離することができる。モノクローナル抗体を調製するには、連続的な細胞系培養により産生される抗体を与える任意の技術を使用することができる。例には、ハイブリドーマ法（コーラー(Ｋohler)およびミルシュタイン（Ｍilstein）、１９７５、Ｎature、２５６：４９５−４９７）、トリオーマ（trioma）法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（コズボール（Ｋozbor）ら、１９８３、Ｉmmunology Ｔoday ４：７２）、およびヒトモノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法（コール（Ｃole）ら、１９８５、モノクローナル・アンチボディーズ・アンド・キャンサー・セラピー（Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy）、アラン・アール・リス、インク（Ａlan Ｒ．Ｌiss，Ｉnc.）、７７−９６頁において）が含まれる。単鎖抗体の産生に関して記載されている技術（米国特許第４,９４６,７７８号）は、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対する単鎖抗体を製造するのに適合し得る。また、トランスジェニックマウスは本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化した抗体を発現させるために使用してよい。本発明をさらに、以下の実施例に関して記載する；しかしながら、本発明は、そのような実施例に限定されないことを理解すべきである。部または量は全て、特にことわらない限り、重量単位である。以下の実施例の理解を容易にするために、幾つかの頻繁に出てくる方法および／または用語を記載する。「プラスミド」は、前置きする小文字のｐおよび／または続けて大文字および／または数字により示す。本明細書中の出発プラスミドは、市販されているか、限定されない基盤の下に公に入手可能であるか、または公開された方法により入手可能なプラスミドから構築できる。さらに、記載したプラスミドと同等のプラスミドは、当該技術分野で公知であって、当業者に明らかであろう。ＤＮＡの「消化」は、ＤＮＡのある配列にのみ作用する制限酵素でＤＮＡを触媒開裂することを示す。本明細書中で使用する様々な制限酵素は市販されており、それらの反応条件、補因子および他の必要条件は、当業者に知られているように使用した。分析目的には、典型的に、緩衝溶液約２０μl中、１μgのプラスミドまたはＤＮＡフラグメントを約２単位の酵素と共に使用する。プラスミド構築のためのＤＮＡフラグメントを単離する目的には、より多量の容積中、一般にＤＮＡ５〜５０μgを２０〜２５０単位の酵素で消化する。特定の制限酵素に適当な緩衝液および基質量は、製造者により指定されている。３７℃で約１時間のインキュベーション時間が通常利用されるが、供給者の指示に従って変えてもよい。消化後、その反応物をポリアクリルアミド上で直接電気泳動して、所望のフラグメントを単離する。開裂したフラグメントのサイズ分離は、ゲッデル（Ｇoeddel，Ｄ.）ら、Ｎucl eic Ａcids Ｒes.、８：４０５７（１９８０）により記載されている８％ポリアクリルアミドゲルを用いて行う。「オリゴヌクレオチド」は、化学的に合成することができる、一本鎖ポリデオキシヌクレオチド、または２つの相補的なポリデオキシヌクレオチド鎖を示す。そのような合成オリゴヌクレオチドは５’リン酸を有さないことから、キナーゼの存在下、ＡＴＰとともにリン酸を加えることなしには、別のオリゴヌクレオチドにライゲーションしないであろう。合成オリゴヌクレオチドは、脱リン酸化されていないフラグメントにライゲーションするであろう。「ライゲーション」は、２つの二本鎖核酸フラグメントの間にホスホジエステル結合を形成する過程をいう（マニアチス（Ｍaniatis，Ｔ.）ら、同上、１４６頁）。特にことわらない限り、ライゲーションは、ライゲートさせるべきＤＮＡフラグメントのほぼ等モル量の０．５μg当り１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ（「リガーゼ」）と共に、既知の緩衝液および条件を用いて成し遂げることができる。特にことわらない限り、形質転換は、グラハム（Ｇraham，Ｆ.）およびファン・デル・エブ（Ｖan der Ｅb，Ａ.）、Ｖirology、５２：４５６−４５７（１９７３）の方法に記載されているようにして行った。実施例１ヒトアミン受容体の細菌発現および精製最初に、ヒトアミン受容体をコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ受託番号第号を、プロセシングしたアミン受容体核酸配列の５'および３'末端配列（シグナルペプチド配列を含まない）に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを利用して増幅する。アミン受容体遺伝子に対応する別のヌクレオチドをそれぞれ５'および３'配列に加える。５'オリゴヌクレオチドプライマーは、配列を有し、Ｅco ＲＩ制限酵素部位を含み、続いて、プロセシングタンパク質の推定末端アミノ酸から開始する１８ヌクレオチドのヒトアミン受容体コーディング配列を含む。３'配列はは、Ｈind III部位に相補的な配列を含み、続いて、該ヒトアミン受容体遺伝子の１８ヌクレオチドを含む。その制限酵素部位は、細菌発現ベクター pＱＥ−９（キアゲン、インク（Ｑiagen，Ｉnc.）、チャッツワース（Ｃhatsworth）、カリフォルニア）の制限酵素部位に一致する。pＱＥ−９は、抗生物質耐性(Ａmp^r) 、細菌の複製起点(ori)、ＩＰＴＧ−調節可能なプロモーター／オペレーター(Ｐ／Ｏ)、リボソーム結合部位(ＲＢＳ)、６−Ｈisタグおよび制限酵素部位をコードする。ついでpＱＥ−９をＨind IIIおよびＥco ＲＩで消化する。増幅した配列をｐＱＥ−９にライゲーションし、ヒスチジンタグをコードする配列およびＲＳＢとともにイン・フレームで挿入する。ついでそのライゲーション混合物を使用して、例えば、Ｍ１５／rep４（キアゲン、インク）である大腸菌株をサンブルック（Ｓambrook，Ｊ.）ら、モレキュラー・クローニング（Ｍolecular Ｃlonin g）：ア・ラボラトリー・マニュアル（ＡＬaboratory Ｍanual）、コールド・スプリング・ラボラトリー・プレス(Ｃold Ｓpring Ｌaboratory Ｐress)、（１９８９）に記載された方法によって形質転換した。Ｍ１５／rep４はプラスミドp ＲＥＰ４の多重コピーを含み、これは、lacＩリプレッサーを発現して、またカナマイシン耐性(Ｋan^r)も与える。トランスフォーマントを、それらが、ＬＢプレートで増殖する能力により同定しついでアンピシリン／カナマイシン耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを制限分析により単離し確認する。所望の構築物を含むクローンを、Ａmp（１００μg／ml）およびＫan（２５μg／ml）の両方を補った、ＬＢ培地中での液体培養で一晩増殖させた（Ｏ／Ｎ）。そのＯ／Ｎ培養物を使用して、大きな培養物に１：１００〜１：２５０の割合で播種する。細胞が、０.４〜０.６の間の光学密度６００(Ｏ.Ｄ.⁶⁰⁰)まで増殖させる。ついで、ＩＰＴＧ(「イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド」)を、最終濃度が１mＭとなるまで加えた。ＩＰＴＧは、lacＩリプレッサーを不活性化し、Ｐ／Ｏをクリアリングし、遺伝子発現を増加させることにより誘導する。細胞をさらに３−４時間増殖する。ついで、細胞を遠心分離により収集した。細胞ペレットをカオトロピック剤である６モルのグアニジンＨＣl中で可溶化した。清澄後、この溶液から６−Ｈisタグを含むタンパク質による強固な結合を可能にする条件下、ニッケルキレートカラムでのクロマトグラフィーにより、可溶化したタンパク質を精製する（ホチュリ（Ｈochuli，Ｅ.）ら、Ｊ．Ｃhromatography ４１１：１７７−１８４（１９８４））。ヒトアミン受容体タンパク質をpＨ５.０の６モルのグアニジンＨＣｌのカラムから溶出し、３モルのグアニジンＨＣl、１００mＭのリン酸ナトリウム、１０ミリモルのグルタチオン（還元型）および２ミリモルのグルタチオン（酸化型）に合わせた。この溶液で１２時間インキュベートした後、該タンパク質を１０ミリモルのリン酸ナトリウムで透析した。実施例２バキュロウイルス発現システムを用いてのヒトアミン受容体のクローニングおよび発現完全長ヒトアミン受容体タンパク質をコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ受託番号第号を、該遺伝子の５'および３'配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを利用して増幅する。５'プライマーは、配列：を有し、該配列はＢam ＨＩ制限酵素部位、続いて、ヒトアミン受容体遺伝子の最初の１８ヌクレオチドのちょうど後の真核生物細胞中の翻訳開始の有効なシグナルに類似した４ヌクレオチドを含む（コザック（Ｋozak，Ｍ.）、Ｊ．Ｍol．Ｂiol.、１９６：９４７−９５０（１９８７））。３'プライマーは、配列を有し、制限エンドヌクレアーゼＢam ＨＩの開裂部位およびヒトアミン受容体遺伝子の３'未翻訳配列に相補的な１８ヌクレオチドを含む。増幅された配列を、市販されており、利用できるキット（「ジーンクリーン（Ｇeneclean）」、ＢＩＯ１０１Ｉnc.、ラ・ホラ（Ｌa Ｊola）、カリフォルニア）を用いて、１％アガロースゲルから単離する。次に、そのフラグメントをエンドヌクレアーゼＢ amＨＩで消化した後、１％アガロースゲル上で精製した。このフラグメントをＦ２と命名する。ベクターｐＲＧ１（ｐＶＬ９４１ベクターを改良したもの、後述）をバキュロウイルス発現系を用いてヒトアミン受容体タンパク質の発現のために使用する（概説には、サマーズ（Ｓummers，Ｍ.Ｄ.）およびスミス（Ｓmith，Ｇ.Ｅ.）１９８７、Ａ manual of methods for baculovirus vectors and insct cell cultur e procedures，Ｔexas Ａgricultural Ｅxperimental Ｓtation Ｂulletin Ｎo.１５５５を参照）。この発現ベクターはオートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（Ａutographa californica nuclear polyhedrosis virus）(ＡcＭＮＰＶ)の強力なポリヒドリン（polyhedrin）プロモーターとそれに続く制限エンドヌクレアーゼＢamＨＩの認識部位を含む。効率の良いポリアデニル化のために、シミアンウイルス（ＳＶ）４０のポリアデニル化部位を使用する。組換えウイルスの選択を簡単にするため、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子がポリヒドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルに先行するポリヒドリンプロモーターと同じ方向に挿入される。該ポリヒドリン配列の両端には、同時にトランスフェクションされる野生型ウイルスＤＮＡの細胞媒介の同種の組換えに関するウイルスの配列が隣接する。ｐＲＧ１の代わりに、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１（ラッコウ（Ｌuckow，Ｖ．Ａ.）およびサマーズ、Ｖirology，１７９：３１−３９）などといった他の多くのバキュロウイルスベクターを使用することができる。該プラスミドを制限酵素Ｂam ＨＩで消化した後、ウシ腸ホスファターゼを用いて当該技術分野において公知の手法で脱リン酸化する。ついでそのＤＮＡを市販されており、利用できるキット(「ジーンクリーン」ＢＩＯ１０１Ｉnc.、ラ・ホラ、カリフォルニア）を用いて１％アガロースゲルから単離する。このベクターＤＮＡをＶ２と命名する。フラグメントＦ２および脱リン酸化プラスミドＶ２をＴ４ＤＮＡリガーゼでライゲーションする。ついで大腸菌ＨＢ１０１細胞を形質転換し、ヒトアミン受容体遺伝子を持つプラスミド（ｐＢac−ヒトアミン受容体）を含む細菌を酵素Ｂ amＨＩを用いて同定する。クローニングされたフラグメントをＤＮＡシークエンシングを用いて確認する。リポフェクション法(フェルグナー（Ｆelgner）ら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci ．ＵＳＡ、８４：７４１３−７４１７（１９８７）)を利用して、プラスミドpＢ ac結腸特異的遺伝子５μgを市販の線形化バキュロウイルス(「ＢaculoＧold^TM バキュロウイルスＤＮＡ」、ファーミンゲン（Ｐharmingen）、サン・ディエゴ（Ｓan Ｄiego）、カリフォルニア)１.０μgと共に同時トランスフェクションする。ＢaculoＧold^TM ウイルスＤＮＡ１μgおよびプラスミド pＢac結腸特異的遺伝子５μgを、無血清グレイス(Ｇrace's)培地(ライフ・テクノロジーズ・インク（Ｌife Ｔechnologies Ｉnc.）、ゲイザーズバーグ（Ｇaithersburg）、メリーランド)５０μlを含むマイクロタイタープレートの無菌ウェル中で混合する。その後、リポフェクチン(Ｌipofectin)１０μlとグレイス培地９０μlを加え、混合して、室温で１５分間インキュベートする。ついで、トランスフェクション混合物を、無血清グレイス培地１mlを含む、３５mmの組織培養プレートに播種したＳf９昆虫細胞(ＡＴＣＣＣＲＬ１７１１)に滴加する。そのプレートを前後に揺り動かして、新たに加えた溶液を混合する。ついで、そのプレートを２７℃ で５時間インキュベートする。５時間後、そのトランスフェクション溶液をプレートから除去して、１０％ウシ胎児血清を補ったグレイス昆虫培地１mlを加える。そのプレートをインキュベーターに戻して、２７℃で４日間培養し続ける。４日後、上清を集めて、サマーズおよびスミス(上記)により記載されたようにして、プラークアッセイを行う。変法として、「Ｂlue Ｇal」(ライフ・テクノロジーズ・インク、ゲイザーズバーグ)を含むアガロースゲルを使用したが、このことにより、青色に染色されたプラークを容易に単離することが可能となる。 (「プラークアッセイ」の詳細な記述はまた、昆虫細胞培養に関する利用者のガイド、およびライフ・テクノロジーズ・インク、ゲイザーズバーグにより配布されたバキュロウイルス学、９−１０頁にも見出すことができる)。４日後、連続希釈のウイルスを細胞に加えて、青色に染色されたプラークをエッペンドルフピペットの先端で採取する。ついで、組換えウイルスを含む寒天を、グレイス培地２００μlを含むエッペンドルフチューブ内で再懸濁させる。その寒天を短時間の遠心分離により除去して、組換えバキュロウイルスを含む上清を、３５mmの皿に播種したＳf９細胞を感染させるのに使用する。４日後、これらの培養皿の上清を収集した後、４℃で保存する。Ｓf９細胞を、１０％熱不活性化ＦＢＳを補ったグレイス培地で増殖させる。その細胞に、感染多重度(ＭＯＩ)２で組換えバキュロウイルスＶ−結腸特異的遺伝子を感染させる。６時間後、その培地を除去して、メチオニンおよびシステインを含まないＳＦ９００ II 培地(ライフ・テクノロジーズ・インク、ゲイザーズバーグ)に替える。４２時間後、５μＣiの³⁵Ｓ−メチオニンおよび５μＣi の³⁵Ｓシステイン５μＣi(アマシャム(Ａmersham))を加える。該細胞をさらに１６時間インキュベートして、遠心して回収し、ついでＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーによって該標識したタンパク質を可視化する。実施例３ＣＯＳ細胞における組換えヒトアミン受容体の発現プラスミド、ヒトアミン受容体ＨＡの発現は、1) ＳＶ４０複製起点、2) アンピシリン耐性遺伝子、3) 大腸菌複製起点、4) ＣＭＶプロモーターとそれに続くポリリンカー領域、ＳＶ４０イントロンおよびポリアデニル化部位を含有するベクターpcＤＮＡＩ／Ａmp（インビトロゲン（Ｉnvitrogen））から得る。全ヒトアミン受容体前駆体と、その３'末端にイン・フレームで融合したＨＡタグとをコードするＤＮＡフラグメントを、ベクターのポリリンカー領域にクローニングする。したがって、その組換えタンパク質の発現はＣＭＶプロモーターに制御される。ＨＡタグは、既に記述されたインフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに相当する（ウィルソン（Ｉ.Ｗilson）ら、Ｃell、３７：７６７（１９８４））。標的タンパク質にＨＡタグを注入することにより、ＨＡエピトープを認識する抗体で組換えタンパク質を容易に検出できるようになる。プラスミド構築法は次の通りである。ヒトアミン受容体をコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ受託番号第号を、次の２つのプライマーを用いるＰＣＲで構築する。５'プライマーは、ＨindIII部位と、それに続く、開始コドンから始まるヒトアミン受容体コーディング配列の18ヌクレオチドとを含有する；３'配列は、ＸhoI部位に相補的な配列、翻訳停止コドン、ＨＡタグおよびヒトアミン受容体コーディング配列の最後の１８ヌクレオチド（停止コドンを除く）を含有する。したがって、ＰＣＲ産物は、Ｈind III部位、ヒトアミン受容体コーディング領域、それに続く、イン・フレームで融合したＨＡタグ、ＨＡタグに続く翻訳終結停止コドンおよびＨind III部位を含有する。そのＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントとベクターpcＤＮＡＩ／ＡmpをＨind IIIおよびＸhoＩ制限酵素で消化し、ライゲーションする。そのライゲーション混合物で大菌ＳＵＲＥ株（ストラタジーン・クローニング・システムズ（Ｓtratagene Ｃloning Ｓystems）、ラ・ホラ、カリフォルニア）を形質転換し、その形質転換培養をアンピシリン培地プレートで培養して、耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡをトランスフォーマントから単離し、制限分析によって正しい断片の存在を調べる。この組換えアミン受容体を発現させるため、ＤＥＡＥ−デキストラン法（サンブルック、フリッチュ（Ｅ.Ｆritsch）、マニアチス（Ｔ．Ｍaniatis）、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ラボラトリー・プレス（Ｃold Ｓpring Ｌaboratory Ｐress）（１９８９））によって、ＣＯＳ細胞を発現ベクターでトランスフェクションする。ヒトアミン受容体ＨＡタンパク質の発現は、放射線標識と免疫沈降法（ハーロウ（Ｅ．Ｈarlow）、レーン（Ｄ．Ｌane）、アンチボディーズ（Ａntibodies）：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（１９８８））によって検出する。トランスフェクションの２日後に、細胞を³⁵Ｓ−システインで８時間標識する。次に、培養培地を集め、細胞を界面活性剤（ＲＩＰＡ緩衝液（１５０mＭＮaＣl、１％ＮＰ−４０、０.１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、０. ５％ＤＯＣ、５０mＭＴris、pＨ７.５）で溶解する（ウィルソン（Ｗilson，Ｉ .）ら、同上、３７：７６７（１９８４））。細胞溶解液と培養培地の両方をＨＡ特異的モノクローナル抗体で沈殿させる。沈殿したタンパク質を１５％ＳＤＳ −ＰＡＧＥゲルで分析する。実施例４ヒト組織におけるヒトアミン受容体の発現パターンヒト組織におけるヒトアミン受容体の発現レベルを調べるために、ノーザンブロット分析を行なう。総細胞ＲＮＡ試料をＲＮＡzol^TM Ｂシステム（バイオテックス・ラボラトリーズ・インク（Ｂiotecx Ｌaboratories，Ｉnc.）、ヒューストン、テキサス）で単離する。各ヒト組織から単離した約１０μgの総ＲＮＡを１％アガロースゲルで分離し、ナイロンフィルターにブロットする（サンブルック、フリッチュ、マニアチス、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ラボラトリー・プレス（１９８９））。標識反応は、５０ngのＤＮＡフラグメントを用いて、ストラタジーン・プライム（Ｐrime）-イット（It）キットに従って行なう。標識されたＤＮＡをセレクト（Ｓelect）-Ｇ-５０カラム（５プライム−３プライム、インク（５Ｐrime-３Ｐ rime Ｉnc.）、ブールダー、コロラド）で精製する。次に、フィルターを、０. ５ＭＮaＰＯ₄、pＨ７.４および７％ＳＤＳ中、６５℃で終夜、放射能標識した完全長ヒトアミン受容体遺伝子１,０００,０００cpm/mlと、ハイブリダイズさせる。０.５×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳを用いて室温で2回、６０℃で2回洗浄した後、増幅スクリーンを用いて、フィルターを−７０℃で終夜、露出する。実施例５遺伝子治療を介する発現線維芽細胞を皮膚生検により被験体より得る。得られた組織を組織培養培地中に置き、ついで小片に分ける。その組織の小塊を組織培養フラスコの湿った表面に置く（各フラスコ当たり約１０個の塊を置く）。該フラスコの上下をひっくり返し、固く閉め、室温にて一晩放置する。室温で２４時間後、該フラスコを逆さにし、ついで組織の塊はフラスコの底に固定したままにし、ついで、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む新鮮培地（例えば、ハムＦ１２培地（Ｈam's Ｆ１２ media））を添加する。ついでこれを３７℃で約１週間インキュベートする。このとき、新鮮培地を添加し引き続き数日毎に変える。さらに２週間の後、培養液中に線維芽細胞の単層が現れる。その単層をトリプシン処理しついでさらに大きなフラスコに合わせて調整する。モロニーマウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列によりフランキングされたｐＭＶ−７（キルシュメイエル（Ｋirschmeier，Ｐ．Ｔ.）ら、ＤＮＡ、７：２１９−２５（１９８８））をＥco ＲＩおよびＨind IIIで消化し、続いて仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。線形ベクターをアガロースゲル上で分画化し、ガラスビーズを使用して精製する。本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡをそれぞれ５'端および３'端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅する。５'プライマーはＥco ＲＩ部位を含み３'プライマーはＨind III部位を含む。モロニーマウス肉腫ウイルスの線形骨格およびＥco ＲＩおよびＨind IIIフラグメントの等量をＴ４ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に添加する。得られた混合物を２つのフラグメントのライゲーションに適した条件下で維持する。ライゲーション混合物を細菌ＨＢ１０１を形質転換するのに使用し、ついで該菌をベクターが所望の適切に挿入された遺伝子を有することを確認するためカナマイシン含有寒天上に播種する。両栄養性のｐＡ３１７またはＧp+am１２パッケージング細胞を、１０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するダルベッコ改変イーグル培地（Ｄulbecco's Ｍodified Ｅagles Ｍedium）（ＤＭＥＭ）中で全面密度になるまで組織培養にて増殖させる。該遺伝子を有するＭＳＶベクターをついで培地に添加し、パッケージング細胞を該ベクターでトランスデュースする。今度はパッケージング細胞は、該遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（パッケージング細胞を以後、プロデューサー細胞という）。新鮮培地をトランスデュースしたプロデューサー細胞に添加し、引き続き培地を１０cmプレート全面のプロデューサー細胞から回収する。感染性ウイルス粒子を含む使用し尽くした培地をミリポアフィルターで濾過して分離したプロデューサー細胞を除去し、ついでこの培地を線維芽細胞を感染させるのに使用する。培地を線維芽細胞のサブ全面プレートから除去し、プロデューサー細胞からの培地とすばやく取り替える。この培地を除去し、新鮮培地で置き換える。ウイルス力価が高い場合、本質的にすべての線維芽細胞が感染し、選択は一切必要ないであろう。力価が非常に低い場合は、neoまたはhisなどの選択可能なマーカーを有するレトロウイルスベクターを使用する必要がある。操作された線維芽細胞を、単独またはサイトデックス・３・ミクロキャリア・ビーズ（cytodex ３ microcarrier beads）上全面に増殖した後に、宿主に注入する。該線維芽細胞はタンパク質産物を産生する。先の教示から見て、本発明の多数の変更および変化が可能であることから、追記する請求の範囲内で、詳しく記載した以外に、本発明を行うことができる。

【手続補正書】【提出日】１９９７年１２月１５日【補正内容】（１）請求の範囲を別紙のとおり補正する。（２）明細書の第５頁下から２行〜最下行、第３３頁１１行〜１２行、第３５頁５行〜６行および第３８頁下から６行にある「ＡＴＣＣ受託番号第号」を『ＡＴＣＣ受託番号第９７１８１号』と補正する。請求の範囲１．（ａ）図１に示すポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｂ）ＡＴＣＣ受託番号第９７１８１号に含まれるＤＮＡにより発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができ、少なくとも７０％一致するポリヌクレオチド；および（ｄ）ポリヌクレオチド（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチドフラグメントよりなる群から選択されるメンバーを含む単離したポリヌクレオチド。２．図１のポリペプチドをコードする請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．ＡＴＣＣ受託番号第９７１８１号に含まれるＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードする請求項１に記載のポリヌクレオチド。４．請求項１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。５．請求項４に記載のベクターで遺伝的に操作した宿主細胞。６．請求項５に記載の宿主細胞から該ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを発現することからなる、ポリペプチドの製造方法。７．請求項４に記載のベクターで細胞を遺伝的に操作することからなる、ポリペプチドを発現することができる細胞の製造方法。８．（ｉ）図１の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドおよびそのフラグメント、アナログおよび誘導体、および（ii）ＡＴＣＣ受託番号第９７１８１号のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドおよびそのフラグメント、アナログおよび誘導体よりなる群から選択されるポリペプチド。９．該ポリペプチドが図１の推定アミノ酸配列を有する請求項８に記載のポリペプチド。１０．請求項８に記載のポリペプチドに対する抗体。１１．請求項８に記載のポリペプチドを活性化する化合物。１２．請求項８に記載のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。１３．受容体を活性化する必要がある患者の治療方法であって、請求項１１に記載の化合物の治療上有効な量を該患者に投与することを含む方法。１４．受容体を阻害する必要がある患者の治療方法であって、請求項１２に記載の化合物の治療上有効な量を該患者に投与することを含む方法。１５．化合物がポリペプチドであって、該アゴニストをコードするＤＮＡを該患者に与えて、該アゴニストをイン・ビボで発現させることによって該化合物の治療上有効な量を投与する、請求項１３に記載の方法。１６．化合物がポリペプチドであって、該アンタゴニストをコードするＤＮＡを該患者に与えて、該アンタゴニストをイン・ビボで発現させることによって該化合物の治療上有効な量を投与する、請求項１４に記載の方法。１７．請求項８に記載のポリペプチドに結合し、活性化する化合物を同定する方法であって、化合物を該ポリペプチドへ結合することができるのに十分な条件下で接触する該ポリペプチドに結合することに応じて検出可能なシグナルを提供することができる第２要素と関連する請求項８のポリペプチドを表面に発現する細胞と接触させ；ついで該第２要素によって産生されたシグナルを検出することによって該ポリペプチドが結合できる化合物を同定することを含む方法。１８．請求項８に記載のポリペプチドに結合し活性化を阻害する化合物を同定する方法であって、該受容体ポリペプチドに結合すると知られている分析的に検出可能なリガンドおよび化合物をその表面に該ポリペプチドに結合することができるような条件下で該ポリペプチドに化合物を結合させることに応じて検出可能なシグナルを与えることができる第２要素に関連する該ポリペプチドを発現する宿主細胞に接触させ；ついで該リガンドと該ポリペプチドの相互作用から産生されたシグナルの不在の検出によって該ポリペプチドにリガンドが結合するか否かを決定することを含む方法。１９．請求項８に記載のポリペプチドの過少発現に関連した疾患または疾患の罹患し易さを患者において診断する方法であって、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異または患者由来のサンプル中のポリペプチドの量を決定することを含む方法。２０．宿主由来のサンプル中の請求項８に記載のポリペプチドの可溶性形態の存在を分析することを含む診断方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｑ 1/02 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＥＤ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ルーベン，スティーブン・エムアメリカ合衆国20832メリーランド州オールニ、ヘリティッジ・ヒルズ・ドライブ 18528番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）図１に示すポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｂ）ＡＴＣＣ受託番号第号に含まれるＤＮＡにより発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができ、少なくとも７０％一致するポリヌクレオチド；および（ｄ）ポリヌクレオチド（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチドフラグメントよりなる群から選択されるメンバーを含む単離したポリヌクレオチド。２．図１のポリペプチドをコードする請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．ＡＴＣＣ受託番号第号に含まれるＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードする請求項１に記載のポリヌクレオチド。４．請求項１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。５．請求項４に記載のベクターで遺伝的に操作した宿主細胞。６．請求項５に記載の宿主細胞から該ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを発現することからなる、ポリペプチドの製造方法。７．請求項４に記載のベクターで細胞を遺伝的に操作することからなる、ポリペプチドを発現することができる細胞の製造方法。８．（ｉ）図１の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドおよびそのフラグメント、アナログおよび誘導体、および（ii）ＡＴＣＣ受託番号第号のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドおよびそのフラグメント、アナログおよび誘導体よりなる群から選択されるポリペプチド。９．該ポリペプチドが図１の推定アミノ酸配列を有する請求項８に記載のポリペプチド。１０．請求項８に記載のポリペプチドに対する抗体。１１．請求項８に記載のポリペプチドを活性化する化合物。１２．請求項８に記載のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。１３．受容体を活性化する必要がある患者の治療方法であって、請求項１１に記載の化合物の治療上有効な量を該患者に投与することを含む方法。１４．受容体を阻害する必要がある患者の治療方法であって、請求項１２に記載の化合物の治療上有効な量を該患者に投与することを含む方法。１５．化合物がポリペプチドであって、該アゴニストをコードするＤＮＡを該患者に与えて、該アゴニストをイン・ビボで発現させることによって該化合物の治療上有効な量を投与する、請求項１３に記載の方法。１６．化合物がポリペプチドであって、該アンタゴニストをコードするＤＮＡを該患者に与えて、該アンタゴニストをイン・ビボで発現させることによって該化合物の治療上有効な量を投与する、請求項１４に記載の方法。１７．請求項８に記載のポリペプチドに結合し、活性化する化合物を同定する方法であって、化合物を該ポリペプチドへ結合することができるのに十分な条件下で接触する該ポリペプチドに結合することに応じて検出可能なシグナルを提供することができる第２要素と関連する請求項８のポリペプチドを表面に発現する細胞と接触させ；ついで該第２要素によって産生されたシグナルを検出することによって該ポリペプチドが結合できる化合物を同定することを含む方法。１８．請求項８に記載のポリペプチドに結合し活性化を阻害する化合物を同定する方法であって、該受容体ポリペプチドに結合すると知られている分析的に検出可能なリガンドおよび化合物をその表面に該ポリペプチドに結合することができるような条件下で該ポリペプチドに化合物を結合させることに応じて検出可能なシグナルを与えることができる第２要素に関連する該ポリペプチドを発現する宿主細胞に接触させ；ついで該リガンドと該ポリペプチドの相互作用から産生されたシグナルの不在の検出によって該ポリペプチドにリガンドが結合するか否かを決定することを含む方法。１９．請求項８に記載のポリペプチドの過少発現に関連した疾患または疾患の罹患し易さを患者において診断する方法であって、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異または患者由来のサンプル中のポリペプチドの量を決定することを含む方法。２０．宿主由来のサンプル中の請求項８に記載のポリペプチドの可溶性形態の存在を分析することを含む診断方法。