JPH11504313A

JPH11504313A - 新規な医薬組成物

Info

Publication number: JPH11504313A
Application number: JP8524187A
Authority: JP
Inventors: カールソン，ニルス−エーリク・アーンデルス; ヘルスリヨーヴ，ベンクト・イヨーラン; ルンドクヴイスト，カール・ステフアン; ニルソン，ニルス・イヨーラン・グンナー
Original assignee: アストラ・アクチエボラーグ
Priority date: 1995-02-06
Filing date: 1996-02-02
Publication date: 1999-04-20
Also published as: WO1996024354A1; CA2211464A1; US6117857A; FI973229A; NZ301405A; IL116912A0; FI973229A0; AU4681996A; ZA96525B; EP0810865A1; AU713229B2; AR002029A1; KR19980701957A; NO973610L; NO973610D0

Abstract

(57)【要約】本発明は、ガラクトリピドおよび極性溶剤と混合されたホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択された抗ウイルス化合物からなる医薬組成物に関するものである。この医薬組成物は、局所的または非経口的投与によって、ヒトを包含する哺乳動物におけるヘルペスウイルス感染の予防処置および／または治療処置に使用することができる。本発明は、また該予防または治療処置用医薬を製造するための医薬組成物の使用に関するものである。

Description

【発明の詳細な説明】新規な医薬組成物発明の分野本発明は、局処的、また非経口的投与に適したホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択された抗ウイルス化合物を含有する医薬組成物に関するものである。組成物は、またヘルペスウイルスおよび抗ウイルス化合物が作用する他のウイルスにより引き起こされる感染の予防処置および治療処置に使用することができる。発明の背景ヒトにおけるヘルペスウイルス感染は、６種の既知のヒトのヘルペスウイルスによって誘発され得る。もっとも普通のものは、単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状ヘルペスウイルスである。または多くの動物のヘルペスウイルスが存在する。単純ヘルペスウイルスは、２種の血清、１型(HSV-1)および２型(HSV-2)に分けることができる。これらの臨床的発現は、良性の自己限定性の口腔および顔面(o ral-facial)および性器感染から脳炎および全身新生児感染のような生命を脅かす可能性のある状態までの範囲に及ぶ。口腔および顔面のHSV感染は、主にHSV-1によって引き起こされる。小児期における初感染後、ウイルスは、個人の一生涯の間知覚神経細胞、もっともしばしば三叉神経節中に潜伏する。その後、ウイルスは、異なった時期に再活性化される。神経細胞における再活性化後、ウイルスは、神経を経て皮膚に移送されその後、普通単純ヘルペスとして知られている再発性の口腔および顔面のHSV感染を発現する。患者の約半数は、発疹の部位における痛み、熱傷またはかゆみのような前駆症状を経験する。この状態は、一般に急速な自己限定性でありそして典型的な症状は、はじめの症状の発現から約10日間で治癒する。口唇におけるウイルス複製が早期にはじまりそして最大のウイルス増殖が再発の開始後24時間で達成される。それから、ウイルス濃度は、劇的に減少しそして典型的な患者においては、開始後70〜80時間でウイルスを単離することができない。性器HSV感染の臨床的発現は、若干の重要な点を除いては、口腔および顔面の感染と同様である。性器HSV感染は、もっともしばしばHSV-2によって起こりそして初感染後、ウイルスは、潜伏的に知覚または自律神経節に感染する。再活性化は、性器上または性器付近のヘルペス感染の特徴である局所的な再発性病変を生ずる。水痘帯状ヘルペスウイルス(VZV)も、また、ヘルペスウイルスグループの１種である。初感染は、水痘を引き起こすことが知られている。HSVと同様に、VZVは、初感染後潜伏しそしてHSVと同様に、一生の間に帯状疱疹として再活性化され得る。帯状疱疹は、普通、皮膚の発疹および激しい急性疼痛を生ずる。患者の30 ％において、疼痛は持続され発疹が取り除かれた後数週間または数ケ月つづく。サイトメガロウイルス（CMV）、エプスタイン−バールウイルス(EBV)およびヒトヘルペスウイルス６(HHV-6)もヒトのヘルペスウイルスであることは既に知られている。正常な宿主における初CMV感染は、普通症状を随伴しないが、時としてCMV単核症の症状が現れる。血液中においては、CMVは主に多形核白血球中に存在するが、CMVは単球および時にはＴリンパ球中に未だ確認されない形態で潜伏することもある。大部分のヒトのEBV感染は、口腔咽頭上皮においてはじまる。初感染の初期の過程において、EBVはＢリンパ球に感染する。EBVは普通Ｂリンパ球において豊富に複製しないが、その代わりに潜伏感染を確立する。 HIVは、レトロウイルスでありこのウイルスは、CD4細胞マーカーを有するリンパ球に感染して破壊し、進行性の免疫不全を引き起こす。ホスカーネットは、HI Vの逆転写酵素を阻害し、試験管内においてHIVの複製に対して抗ウイルス活性を示す。ヒトのヘルペスウイルスに対して活性である多数の抗ウイルス剤が存在する。しかしながら、これまで、免疫応答性を有する患者における再発性ヘルペスウイルス感染の治療においては、限定された臨床的成功が得られているにすぎない。ホスホノギ酸のトリナトリウム塩の六水和物（ホスホノギ酸ナトリウム六水和物）であるホスカーネットは、ヘルペスウイルスおよびＢ型肝炎ウイルスにおけるウイルスDNAポリメラーゼのおよびレトロウイルスにおけるウイルスの逆転写酵素の直接的阻害によって作用する、広い抗ウイルススペクトルを有する公知の抗ウイルス剤である。ホスカーネットは、AIDS患者におけるCMV網膜症およびアシクロビル抵抗性HSV感染の全身的、すなわち静脈内処置の臨床的使用に認可されている。該処置の副作用は、腎機能損傷ならびに生命を脅かす状態の処置においては許容されるけれども、免疫応答性を有する患者における良性の自己限定性の再発性HSV感染の処置においては殆ど許容されない他の症状である。アシクロビル（ACV）、９−〔（２−ヒドロキシエトキシ）メチル〕グアニンは、種々なヘルペスウイルス感染の処置に使用されている主な抗ウイルス薬剤である。それは、局処的、経口的または静脈内的製剤として投与することができるが、局所的製剤の効力は低い。アシクロビル治療は、非常にわずかの副作用を伴っている。バラシクロビルまたはＬ−バリルアシクロビルは、アシクロビルのプロドラッグである。抗ヘルペスウイルス剤であるペンシクロビル、９−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルブト−１− イル）−グアニンは、アシクロビルの活性スペクトルと同様なヒトのヘルペスウイルスに対する活性スペクトルを有している。ペンシクロビルの６−デオキシ誘導体であるファムシクロビルは、体中において、酸化的代謝によってペンシクロビルに変換される。グアノシン類似体アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルのようなヌクレオシド類似体は、ホスカーネットよりもより狭い抗ウイルススペクトルを有しそして主として、HSV-1およびHSV-2およびVZVウイルスに対して作用を示す。これらの化合物は、ホスカーネットのようにウイルスDN Aポリメラーゼに対して直接作用しないが、ウイルスおよび細胞の酵素によって３回燐酸化され、ウイルスポリメラーゼの阻害が達成される。非経口的投与のような他の投与方法もまた可能であるけれども、これらは、主として、経口的組成物として投与される。非経口的投与によるヘルペスウイルス感染の処置における若干の問題は、投与回数および投与量が多いことおよび循環における抗ウイルス化合物の半減期が短いことである。ヘルペス感染が皮膚または粘膜に限定されいる場合は、局所治療が有利である。これは、活性物質に対する身体の露出を減少しウイルスが複製される皮膚の部位における高い局所濃度を達成することのできる高い薬剤濃度を可能にする。ホスカーネットは、試験管内においてすべてのヒトのヘルペスウイルスに対して条件にかなった活性を有するけれども、免疫応答性を有する患者における再発性の単純ヘルペスウイルス感染に対して局所的に適用されたホスカーネットの試験は、並の程度の成功を満たすにすぎない。このような処置による病変の治癒時間は、約１日短縮される。該試験において、ホスカーネットは、普通のクリーム処方で適用された。３％処方におけるホスカーネットの局所投与は、性器領域における粘膜または皮膚を刺激し、医薬処置を苦痛なものにすることが知られている。それ故に、本発明の一つの目的は、強力な抗ウイルス作用のほかに、誘発する組織刺激が非常に低いホスカーネットの組成物を見出すことである。再発性皮膚ウイルス疾患に対するヌクレオシド類似体アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルの臨床的効果は、ホスカーネットによる場合のように、限定される。局所処置の場合、治癒時間は約１日減少されるにすぎない。それ故に、本発明の他の目的は、実質的に治癒時間を減少するホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択された抗ウイルス化合物の組成物を見出すことである。従来の技術 WO 89／05152は、リポソームに封入された抗ウイルス化合物ホスホノホルメートを含有するリポソーム組成物を記載している。該リポソームの懸濁液は、ヘルペスウイルスおよびHIV感染の処置において非経口的に投与され、この投与方法は抗ウイルスの治療的効果を強化する。ホスホノホルメートならびにホスホノアセテートは、リポソーム−封入形態で投与された場合に、数倍高い細胞内抗ウイルス活性を示すということが発見された。リポソームは、種々な燐脂質から製造された。 Jocham，U.E.，Pharmazeutische Zeitung，Nr．33，13 August 1992， 28-34頁は、AIDS患者における眼のヘルペス感染を非観血的治療するためのホスカーネット−リポソームの可能な使用を記載している。該患者は、現在、抗ウイルスの強力な刺激作用のために全身的に処置されている。また、リポソーム担体中における活性物質による皮膚の局所処置は、皮膚の角質層を経る活性物質の浸透を促進し該活性物質を局所的に増強することが述べられている。 Schreier H等、Journal of Controlled Release 30（1994）1-15頁は、リポソームおよびニオソームに封入された物質の皮膚および経皮的ドラッグデリバリーの検討を記載している。リポソームおよびニオソームは、特に薬剤移送を調節する能力のために種々な皮膚的に活性な化合物に対する有用な投与形態であり、非毒性の浸透強化剤として役立つものであるという結論を下している。またセラミド、すなわち、スフィンゴリピドから製造されたリポソームは、燐脂質から製造されたリポソームよりも、皮膚に対する浸透においてより有効であるということが報告されている。皮膚ウイルス感染、特に単純ヘルペスウイルス感染の処置を改善する手段として、皮膚脂質、すなわち、主としてセラミドおよびコレステロールでリポソーム的に処方されたインターフェロン−αの沈着が評価され深部皮膚層にデリバリーされることが示されている。抗ウイルス物質のリポソーム処方を使用することによって、抗ウイルス活性を保持しながらの投与量減少、半減期の増加および毒性の減少ような多数の利点を得ることができる。例えばBakker-Woudenberg，I等，Scand．J．Infect．Dis．S uppl．74: 54-57，1991は、CMV−感染された肺線維芽細胞におけるCMVに対するリポソームに封入されたホスカーネットの抗ウイルス作用は増大されるということを報告している。しかしながら、上記文献におけるようにリポソームを使用した場合においては、例えば活性物質を封入する能力が限定されるという不利点がある。また、十分に高いホスカーネットの濃度を有する組成物を得ることは難しい。他の問題は、安定性に関する。リポソーム処方は、常に漏洩する。これは、リポソーム処方は、凍結乾燥しそして次いで使用前に再構成しなければならないことを意味する。 Spruance，S.L．“粘膜皮膚ヘルペスウイルス感染の局所的治療”，Internati onal Antiviral News，1994，June 2，pp.86-87は、正常な宿主における再発生口唇ヘルペスに対する有効な局所処置の研究は最適以下の薬剤処方および早期治療介入の必要性の不十分な認識によって妨げられたことを報告している。ポリプロピレングリコールを含有する水性クリーム中におけるアシクロビルの処方は、口唇ヘルペスの処置に対するアシクロビルの認可を受けているが、報告された結果は矛盾している。局所的に適用された抗ウイルス化合物は、患者が新しい症状を初めて認識した直後に無傷の損傷されない角質層に浸透することができるように、能動的な浸透強化性処方を必要とする。能動的な強化剤の使用は、皮膚を損傷し、刺激およびしばしば接触アレルギーまたは他の感染を引き起こす。 WO 94／05258は、皮膚浸透性を改善するアシクロビルの水中油エマルジョンを説明している。この処方は、グリセロールホルマルおよび多価アルコールからなる有機溶剤の存在によって特徴づけられる。グリセロールホルマルは化合物の溶解性を高めるので、該エマルジョンは溶解したアシクロビルの増加した量を含有することができる。しかしながら、局所処方における有機溶剤の使用には不利点がある。再発性ヘルペス感染の有効な局所処置を提供するために、解決されるべき第一の問題は、十分な量の活性物質を角質層へ急速に浸透させることである。第二の問題は、ヘルペスウイルスの複製が行われる適当な部位、すなわち、生体表皮中の活性物質の蓄積を行うことである。使用される処方は、さらに、皮膚に対して非刺激性でありそして物理的に安定でなければならない。ホスカーネット分子の非常な極性特性および皮膚および粘膜に適用したときのその潜在的な刺激性のために、これはホスカーネットを使用して達成することは困難である。現在、ホスカーネットまたは抗ウイルスヌクレオシド類似体を局所投与するための有効な且つ害のない処方はない。発明の概要驚くべきことには、上述した問題は、ガラクトリピドおよび極性溶剤と混合されたホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択された抗ウイルス化合物からなる本発明の医薬組成物によって克服することができるということが見出された。好ましい医薬組成物は、ガラクトリピドおよび極性溶剤と混合されたホスカーネットの治療的に有効な量からなる。医薬組成物は、二重鎖二層形成極性ガラクトリピドおよび極性溶剤によって形成されたゲルまたは他の構造、例えばリポソーム中に分散、溶解または封入された抗ウイルス化合物を含有する。このような組成物は、刺激性でなく、皮膚に急速に浸透し、生体表皮中における抗ウイルス化合物の蓄積を改善し、活性物質の高い濃度を維持し、化学的および物理的に安定である。賦形剤を添加することなく、粘稠な処方を得ることができる。本発明の組成物に使用されるガラクトリピドは、局所的に投与した場合、生体表皮へ抗ウイルス化合物を部位へ直接に送達し、それによって副作用が最も少なく、疾患の部位での薬剤濃度が最高となりおよび非経口投与する場合、投与をより容易にする改善された効果が得られる。本明細書および請求の範囲において使用されるホスカーネットは、ホスホノギ酸のトリナトリウム塩の六水和物のほかに、また、水和形態または非水和形態のホスホノギ酸の他の医薬的に許容し得る塩、エステルまたは他の誘導体を意味する。アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルは、化合物それ自体のほかに、また、その医薬的に許容し得る塩、エステルまたは他の誘導体を含む。また、他の抗ウイルス化合物も、同じ担体、すなわちガラクトリピドおよび極性溶剤によって医薬組成物中に処方し得ることは明らかである。本発明の組成物中のガラクトリピドは、少なくとも50％のジガラクトシルジアシルグリセロールおよび残りの他の極性脂質からなる。好ましい組成物においては、ダラクトリピド物質は、ジガラクトシルジアシルグリセロール約70〜80％および他の極性脂質約20〜30％からなる。他の好ましい組成物においては、ガラクトリピド物質は、100％までのジガラクトシルジアシルグリセロールからなる。ガラクトースを基にした２つの型のアシルグリセロール、すなわち、モノガラクトシルジアシルグリセロールおよびジガラクトシルジアシルグリセロールが非常に普通である。普通使用される略号は、それぞれ、MGDGおよびDGDGである。ジガラクトシルジアシルグリセロールは、一般式によって説明することができる。上記式において、R₁およびR₂は、相互に独立して、10〜22個の炭素原子および０〜３個の二重結合の飽和または不飽和の脂肪酸残基または水素でありそしてR₃ はヒドロキシルまたはスルホネート基である。脂肪酸残基R₁およびR₂の好ましい例としては、天然に存在する脂肪アシル基、例えば飽和酸パルミチン酸（C₁₅H₃₁CO；16：０）およびステアリン酸(C₁₇H₃₅CO ；18：０)からの残基、モノ不飽和酸オレイン酸（C₁₇H₃₃CO；18：１）からの残基およびポリ不飽和酸リノール酸（C₁₇H₃₁CO；18：２）およびリノレン酸（C₁₇H₂₉ CO；18：３）からの残基をあげることができる。脂肪酸残基は、また、いわゆるエストリドである、ヒドロキシル基がさらに脂肪酸によりエステル化されたグリセロール部分に結合したヒドロキシ酸を包含する。ガラクトリピド物質中の成分の特定の割合は、DGDGの含量が少なくとも50％である限り、本発明に重要ではない。しかしながら、多くの適用において、最大の利点は、もっとも重要な二層形成成分であるDGDGの高い含量によって実現される。ガラクトリピド物質は、殆どすべての種類の植物物質から抽出することができる。好ましい植物物質は、穀類例えば小麦、ライ麦、オート麦、とうもろこし、米、きびおよびごまの種子および仁である。ひき割りオート麦ならびに小麦のグルテンは、高い脂質濃度を有しておりそれ故に、製法に使用するのに有利である。もし使用できる場合は、ガラクトリピド物質のジガラクトシルジアシルグリセロールは、また合成源のものであってもよい。植物源からの小規模でのガラクトリピド、特にDGDGの単離は、公知でありそして文献に報告されている。典型的には、クロロホルム、メタノールおよびアセトンを含有する溶剤系を使用して薄層プレートまたはシリカカラム上で、植物脂質エキスのmg〜ｇの量が分離される。ガラクトリピドは、慣用の抽出および吸着または置換クロマトグラフィーによって、工業的規模で植物から得ることができる。粗製の植物抽出物を、静止相として吸着剤を含有するクロマトグラフィーカラム上に負荷し、非極性脂質を極性および非極性溶剤の混合物で溶離しそして主としてDGDGを含有するガラクトリピド物質フラクションを、より極性の溶剤混合物で溶離する。本発明に使用されるガラクトリピドに対する水またはグリセロールのような他の極性溶剤の添加は、しばしば二層構造と称せられる層状の脂質−水構造を形成する。本発明の極性脂質は、多量の水または水溶液または他の極性溶剤を取り込む、すなわち膨潤することができる。ガラクトリピドの特に良好な固有の膨潤性のために、洗浄剤または有機溶剤のような水以外の他の化合物の存在なく驚く程容易にリポソーム分散系を形成することができる。リポソームを製造する方法は、単に、ガラクトリピドに過剰の水または極性液体を加え、膨潤しおだやかに振盪または撹拌することからなる。多層小包からなる得られた分散系、すなわちリポソームは、凝集およびその後の沈降に対して非常に安定である。ガラクトリピドの一部である他の極性脂質は、種々な糖脂質および燐脂質、例えばMGDGおよびホスファチジルコリンの混合物である。組成は、ガラクトリピドの製造に使用した出発物質および方法に依存する。極性溶剤は、水および水溶液、例えば緩衝液および生理学的食塩水、または何れかの他の慣用の溶剤、例えばエタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコフロール、メチルピロリドン、トランスクトールである。しかしながら、水が好ましい溶剤である。本発明の医薬組成物は、また、製薬上に許容し得るそして製剤の成分と相溶性の種々な添加剤または賦形剤を含有することができる。このような添加剤の例として、濃化剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、芳香剤、風味剤ならびに他の活性物質、例えばビタミンＡ酸をあげることができる。医薬組成物は、抗ウイルス化合物および任意の添加剤を水のような極性溶剤に溶解し、ガラクトリピドを加え、混合物を均質な組成物が得られるまで撹拌または振盪する工程からなる方法によって製造することができる。水を極性溶剤として使用する場合は、溶解は、おだやかな加温によって容易にされる。本発明の医薬組成物は、感染部位への局所的または非経口的適用によって、ヒトを包含する哺乳動物の特に皮膚、粘膜または眼におけるHSV-1、HVS-2およびVZ Vのヘルペルウイルス感染を予防放置および治療処置するのに適している。これらの組成物は、また、CMV感染の種々な発現、例えば網膜炎、脳炎、大腸炎および肺炎の予防または治療にも適している。CMV感染の場合においては、静脈内注入を包含する非経口的方法による投与が好ましい。さらに、初期リンパ腫のようなEBV感染の臨床的発現も、また、静脈内投与によって予防または治療される。すべてのヘルペルウイルス感染ならびに抗ウイルス化合物、すなわちホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルまたはファムシクロビルが作用する他のウイルス、他はえばHIVおよびHBVによる感染は、静脈内投与によってそして粘膜皮膚病変の場合においては局所投与によって、本発明の組成物で処置することができる。 Kaposi肉腫、例えばKSは、局所生長および最終の転移によって特徴づけられる多病巣性、多クローン性の増殖性新生物である。新しいヒトのヘルペルウイルスが最近、KS病変において検出されそして原因剤であるとして提案されている。臨床試験において、若干の患者は、ホスカーネットによる静脈内処置に応答した。皮膚KS病変は、局所適用によって適当に処置することができ、特に非皮膚KS病変に対しては非経口的投与方法が好ましい。医薬組成物は、局所的に、すなわち、主に、無傷皮膚に経皮で、眼に眼科適用でそしてまた粘膜表面に口腔内適用で、経腸でおよび経膣で投与することができる。特に、処置の臨界面積は、無傷の皮膚が性尿器系および消化管に隣接するところである。局所組成物は、ローション、クリーム、軟膏またはゲルであり、これらは、プラスター、ステッキまたはペンに配合することができる。組成物は、また皮下的、病変内的、筋肉内的、眼内的または静脈内的注入のための溶液またはエマルジョンのような非経口的投与の製剤として処方することもできる。非経口的投与用の組成物の特別な利点は、必要とされる容量の減少、少ない頻度の投与、ウイルス複製の部位における薬剤の高い濃度および減少された毒性を包含する。本発明の医薬組成物の成分は、％(w/w)で、次の通りであることができる。 (a) ホスカーネット 0.1〜10％ (b) ガラクトリピド１〜70％ (c) 極性溶剤および任意の添加剤 30〜98.9％皮膚に適用するのに適した好ましい局所組成物は、％(w/w)で、 (a) ホスカーネット１〜５％ (b) ガラクトリピド 20〜40％および (c) 水 55〜79％を含有することができる。このようなホスカーネット処方の局所適用は、組織刺激の程度を非常に減少する。局所投与の他の利点は、ウイルス皮膚疾患を、標準静脈内処置におけるよりも非常に低い全身露出で処置することができるということである。例えば、典型的には、普通のHSV再発は、５％のホスカーネットクリームを使用した場合に約５mgのホスカーネットを含有する局所クリーム処方約100mgで治療されると推定される。５％までの局所的に適用された利点のホスカーネット、つまり一回の適用当たり0.25mgに相当する量が全身循環に入るだろうという以前の研究がある。これは、標準静脈内ホスカーネット処置においては一日当たり約10ｇの投与量が許可されていることと比較されてしかるべきであろう。抗ウイルス化合物の処方の局所投与は、同時に活性化合物の全身分布を減少しながら、ウイルス複製の部位、すなわち生体表皮への活性物質の改善されたデリバリーをもたらす。本発明の医薬組成物の局所投与の作用は、良好な薬理学的効果を与える。非経口的投与に適した好ましい組成物は、％w/wで、 (a) ホスカーネット１〜５％ (b) ガラクトリピド１〜10％ (c) 水 85〜98％を含有することができる。ヒトを包含する哺乳動物における皮膚、粘膜または眼のヘルペルウイルス感染の予防的および／または治療処置の方法は、本発明の医薬組成物の治療的に有効な量を局所的または非経口的投与することからなる。再発性感染の治療的局所処置は、前駆症状の最初の発現からはじめて少なくとも３〜４日間ウイルス複製中行うのが好ましい。全体のエピソード中、２時間ごとにまたは自由に処方を適用することが有利である。病変も同じ方法で治療しなければならない。定期的な再発性疾患を有する患者においては予防的処置として利用できる。この場合、処方は、はじめの症状が発現する前に、再発が予期される筒所に適用する。CMV、EBV、HIVおよびHBVのような非−皮膚ウイルス感染に対しては、非経口的投与による予防または治療は、ウイルス再活性化のはじめの徴候において行いそして再活性化の危険が残る限り、少なくとも数週間つづけなければならない。本発明の医薬組成物は、また、外観を改善するために化粧組成物として使用することもできる。医薬処方医薬処方は、次のようにして製造した。処方においては、次の成分を使用した： −ホスカーネット、すなわち、ホスホノギ酸のトリナトリウム塩の六水和物（スエーデンのAstra ABから）； −DGDG 70％およびMGDGおよび燐脂質を包含する他の極性脂質30％の脂質組成を有するオート小麦粒からのガラクトリピド。メチルエステルとしてGCによって測定された脂肪酸残基組成は、21％のＣ_16:0（パルミテート）、３％のＣ_18:3（リノレネート）および５％の他の脂肪酸からの残基である。(スエーデンのScoti a Lipid Teknik ABによって製造された）。 −アシクロビル、９−〔（２−ヒドロキシエトキシ）メタル〕グアニン、H₂O 含量１モル当たり0.5モル(USAのSigma Chemicalからのアシクログアノシン)。処方において、％は％w/wである。処方１局所投与のための抗ウイルス処方成分％ホスカーネット 3.0 ガラクトリピド 40.0 水 100.0にする量ホスカーネットを温水に溶解した。ガラクトリピドを粉末として添加した後、混合物を、それが均質となりそして高度に粘稠になるまで、渦巻撹拌と撹拌を交互に行った。処方２局所投与のための抗ウイルス処方成分％ホスカーネット 3.0 ガラクトリピド 40.0 グリセロール 5.0 水 100.0にする量初めに水にグリセロール加える点を除いて、処方１と同じ方法で種々の成分を混合した。良好な粘稠度を得るために、グリセロールを処方に加えた。処方３局所投与のための抗ウイルス処方成分％アシクロビル 2.3 ガラクトリピド 28.6 水 100.0にする量眼投与用の以下の抗ウイルスの処方４および５を、処方１と同じ方法で製造した。処方４成分％ホスカーネット 2.4 ガラクトリピド 20.0 水 100.0にする量処方５成分％ホスカーネット 2.4 ガラクトリピド 30.0 水 100.0にする量処方６非経口的投与のための抗ウイルス処方成分％ホスカーネット 2.0 ガラクトリピド 5.0 水 100.0にする量ホスカーネットの水溶液を、乾燥したガラクトリピド粉末に加え、これを３時間膨潤させた。遊離のホスカーネットを透析によって除去しそしてリポソームの分散液を必要になるまで凍結乾燥した。処方７非経口的投与のための抗ウイルス処方成分％ホスカーネット 2.4 ガラクトリピド 10 水 100にする量ガラクトリピドの薄いフィルムを、ガラス壁上で蒸発した。ホスカーネットの水溶液を、この脂質フィルムに加えた。処方を凍結乾燥しそして使用前に再構成した。さらにコレステロールを含有する処方８を、同じ方法で製造した。処方８非経口的投与のための抗ウイルス処方成分％ホスカーネット 2.4 ガラクトリピド 10 コレステロール 1.75 水 100にする量ガラクトリピドから形成されたリポソームおよび他の二層構造は、燐脂質からの相当する構造に比較して、多数の利点を有している。ガラクトリピドは、燐脂質よりもより多くの水を取り込みそしてガラクトリピドは、また燐脂質よりも加水分解に対してより抵抗性である、すなわち、ガラクトリピド処方は、化学的により安定である。水膨潤性および熱安定性は、次の試験によって証明される。水膨潤性を証明する比較処方大豆からのホスファチジルコリンである燐脂質中の2.4％のホスカーネットを処方しそして上記処方４および５におけると大体同じ粘度を得るためには、それぞれ燐脂質約30および40％を使用することが必要であった。これは、ガラクトリピドが燐脂質よりより多くの量の水を取り込むことおよびガラクトリピドからのゲルがより粘稠であることを示す。ガラクトリピドゲルと同じ粘度の燐脂質ゲルを得るためには、かなり多量の燐脂質を使用しなければならない。これは、水の使用量はより少なくてすむということを意味し、次いでこのことは、処方に溶解させる抗ウイルス化合物の量がより少なくてすむことを意味する。リポソームの熱安定性以下の方法で、リポソーム、すなわち多層小包を製造しそして熱処理中の物理的および化学的安定性に関して確認した。脱イオン化および脱ガスした水をガラクトリピド物質に加えて、1.9％（w/w）の脂質の最終濃度を得た。この試料を、室温で12時間平衡化し次いで３分間高剪断混合に付した。粗いリポソーム分散液を６サイクル500バールで均質化した(Mini-Lab 8.30Hホモゲナイザー、Rannie， Denmark)。これは、僅かに、不透明なそして低粘度の製剤を与える。それから、試料を、標準バッチオートクレーブを使用して121℃で20分オートクレーブ処理した。オートクレーブ処理はリポソームの物理的安定性に影響を与えないという結論が容易にでた。つまり熱処理後の凝集そしてその結果としての沈降を観察することはできなかったのである。さらに、熱処理前後のクロマトグラムの相違がなかったので、HPLCを使用したオートクレーブ処理した試料の脂質分析から化学的安定性が影響されないということが分かった。これは、ガラクトリピドが加水分解的に安定であるということおよび熱処理中に生ずる遊離脂質酸のような有毒な副生成物が形成されないということを意味する。他の利点は、ガラクトリピドのリポソームは、最終的に滅菌化することができ、その結果、普通リポソームに対して使用される無菌の製造を避けることができるということである。さらに、相当する燐脂質構造に比較したガラクトリピドリポソームの他の利点は、寒冷保護剤として加えられる糖なしに凍結乾燥できるリポソームの特性にある。燐脂質リポソームを凍結乾燥する場合は、膜の破壊を防ぐために例えばスクロースまたはトレハロースを加えることが必要である。生物学的試験試験１．試験管内における皮膚浸透角質層に浸透し、角質層下の皮膚層に蓄積するホスカーネットの性質に対する処方の影響を評価するために、豚からの無傷皮膚を使用する試験管内モデルを開発した。実験モデルおよび結果は以下に記載する通りである。新らたに屠殺した豚からの皮膚を使用した。下にある組織を外科用メスで注意深く除去し、次いで皮膚を0.9％ NaClで洗浄、乾燥した。最後に皮膚のパッチをホイルに包み、−28℃で凍結保存した。拡散容器は、供与体および受容体部分からなるガラスの容器である。皮膚は、これらの２つの区画室の間におき、金属クランプで固定した。処方と接触させる供与体区画室の表面積は3.14cm²、容量は約２mlであった。受容体区画室は、28 〜29mlの容量を有し、試料採取を容易にする連結管および実験中温度を調節するジャケットを具備している。豚の皮膚を解凍し、乾燥しそして適当な大きさに切断した。その後、皮膚パッチを拡散容器に取り付けた。受容体区画室に0.9％ NaCl溶液を充填しそして皮膚の裏面と受容体区画室中の溶液との間の気泡を除去するように注意を払った。溶液は、磁気回転棒で連続的に撹拌しそして37℃に保持した。 ¹⁴Ｃ−ホスカーネットの３種の異なる３％処方、すなわち、上述した処方１に相当する処方Ａ以外に、ホスカーネットのほかにガラクトリピドの代わりに同じ量の燐脂質、主にスフインゴミエリンおよび水を含有する処方Ｂ、およびホスカーネットのほかに種々の強化剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ステアリン酸エステル、プロピレングリコールおよびグリセロールを含有する普通のクリーム基剤である処方Ｃを試験した。これらの異なる処方を、異なる皮膚パッチの表皮表面に50〜100mgの量で適用した。処方の放射能を、それぞれの実験のはじめに測定した。３時間後に、皮膚パッチを拡散容器から除去しそして試料をそれぞれの受容体区画室から採取した。これらの試料をシンチレーションバイアルに入れそしてシンチレーションスペクトロメトリーによって検査した。皮膚パッチを板上に取り付けそして接着テープの片を使用して皮膚を裸にする。残留する皮膚パッチをミクロトームで薄切りにして薄いシートにし、深部皮膚層に浸透する薬剤の量を検査した。シートを、Soluene 350と一緒にシンチレーションバイアルに入れて一夜溶解する。その後、シンチレーションカクテルを加え、試料をシンチレーションスペクトロメトリーによって検査した。各皮膚パッチに使用時のホスカーネット濃度をそれぞれの局所処方について、角質層、角質層下の皮膚層および受容体区画室において測定した。結果は、以下の表に示される通りである。これは、ホスカーネットの部位−直接投与のための慣用の局所処方に比較して本発明による処方が改善されていることを示す。上記試験から、ホスカーネットの皮膚分布は、使用した処方によって異なるということを結論づけることができる。慣用の処方Ｃとガラクトリピド処方Ａとの間の比較は、特に重要である。浸透実験の開始から３時間後には、同様な量のホスカーネットが処方ＡおよびＣから角質層に浸透する。しかしながら、処方Ａを使用した場合は、皮膚へのホスカーネットの相対的に急速な浸透の後に、ヘルペスウイルスの複製が行われる位置である生体表皮に相当する領域である角質下の皮膚層中に薬剤が顕著に蓄積する。また、燐脂質処方Ｂでは、角質層を通るホスカーネットの浸透は緩慢であることが示された。試験２．生体内におけるHSV-1感染に対する使用モルモットにおける皮膚ヘルペスウイルス感染に対する本発明による局所処方の治療的作用を、生体内試験で試験した。実験モデルおよび結果は、以下に記載する通りである。ヘルペスウイルスHSV-1菌株C42を、結膜炎患者から単離しそしてベビー−ハムスター腎細胞に10回通過させた。ヘルペスウイルス力価を、アフリカミドリサル腎細胞（AGMK）に対するプラク検査によって測定した。プラク−減少検査において試験した場合、使用した菌株は、調査した阻害剤に感受性であった。体重400〜500ｇのDunkin-Hartleyモルモットを、実験に使用した。飼料および飲料水を自由に与えた。モルモットの背を、麻酔下で引っ張り、そり、脱毛し、洗浄しそして乾燥した。毛のない面積を４区画に分割しそしてそれぞれの面積の中央に10⁶PFU／mlの力価のHSV-1 20mgを適用した。このウイルスは、種痘装置を使用して麻酔下で接種した。おりに入れる前に、麻酔睡眠中の動物を30℃で２時間保持した。それぞれの動物上の２つの面積を、試験１で記載したように、それぞれ２つのホスカーネット処方ＡおよびＣで局処的に治療した。それぞれの動物上の残りの２箇所は、比較対照として使用した。それぞれの処方50μlをミクロピペットで適用しそれぞれの感染部位上に拡張させそして乾燥する。１つの処方当たり５匹のモルモットを使用した。モルモット皮膚上のスコアーは、感染後48時間後、すなわち３日目に開始して評価した。異なる処方の作用を定量化するために、次のスコアー系を使用した。接種した皮膚の外観スコアー紅斑様および僅かに浮腫様 0.5 紅斑および１個または２個の小さな小胞１紅斑および多数の小さな小胞２多数の大きな小胞(密に合体している場合) ３乾燥した小胞、大きなかさぶた III 約50％に減少したかさぶた II 約10％の残留したかさぶたＩ感染しないまたは治癒した面積、かさぶた０または小胞がない接種跡または感染跡は残っていてもよい HSVによるモルモットの接種後、接種箇所を毎日１回症状についてスコアーした。小胞の発現中のスコアーはアラビア数字によって与えそして小胞が乾燥しかさぶたになりはじめたときに、スコアーをローマ数字に変える。スコアーはいずれも盲験によって得られた。表２の累積スコアーは、感染の経過中のすべてのアラビアおよびローマスコアー数字を加え、日数により除すことによって得た。得られた結果は、処方Ａならびに処方Ｃが、両方、ヘルペスウイルス感染に対して有意に有効であることを示す。試験３．生体内における皮膚刺激本発明のガラクトリピドの皮膚毒性を評価するために、次の試験を遂行した。ガラクトリピド(スウェーデンのScotia LipidTeknik ABによってオート麦から製造された)を、注射用水と混合して10％ゲルを得た。これを、１匹の動物当たり0.5mlの投与レベルで、６匹のニュージランドの白色雄ウサギの無傷の皮膚に適用しそして半閉塞包帯下で４時間保持した。包帯を除去した後、１、24、48および72時間紅斑および浮腫に対する皮膚検査を遂行した。それから、24、48および72時間における皮膚病変の評価から平均値を計算した。結果は、以下の表３に示す通りである。この試練から、ガラクトリピドゲルの適用は、いかなる目立った刺激も誘発しないということを結論づけることができる。本発明の医薬組成物は、患者の皮膚のヘルペスウイルス感染した面積に投与することができる。この方法で適用した場合、本発明の医薬組成物は、ヘルペス感染により起こる病変を予防し、病変の発現が始まっている場合はヘルペスウイルスによって起こる病変を最小にしそして急速に治癒する。試験４．リポソームホスカーネットの抗ウイルス作用リポソームを、処方７および８によって構成した。リポソームは、周囲のホスカーネット−含有培地から精製しなかったそしてそれ故に、リポソームによる抗ウイルス作用は、細胞培養検査によって過小評価される。単純ヘルペスウイルス１型に対するリポソームの抗ウイルス作用は、以前に公表されている方法（Abele，G等，Antiviral Chemistry & Chemotherapy（1991）2(3)， 163-169）の若干変形された方法を使用して試験した。融合性のヒトの肺線維芽( HL)細胞を、37℃で１時間HSV-1(菌株R39)で感染した。ウイルス接種物を除去しそして培地中のホスカーネット−負荷リポソーム、空のリポソームまたはホスカーネットの種々な希釈液を加えた。24時間後に細胞をトライトンX100の添加によって溶解し、凍結−解凍サイクルにうけしめそして細胞溶解産物を、HSV-1−特異的ELISAにおいてウイルス複製について試験した。１：500のウイルス希釈および24時間の培養時間において得られた結果は、以下の表４に記載される。結果は、50％阻止濃度（IC₅₀）は、遊離ホスカーネットと比較して、リポソームを使用して２〜４倍低下されたことを示す。製剤中のホスカーネットの全量の 25〜50％のみが実際にリポソーム中に封入されるので、結果は、リポソームそれ自体による抗ウイルス活性は、結果により示されるよりも４〜５倍高い範囲にあるはずであることを示す。試験５．リポソームホスカーネットの細胞毒性リポソームを、上記の処方７によって製造そしてその細胞毒性作用を、以前に説明されているように(Palmer S等，Aids Research and Human Retroviruses，V ol．11，No．10，1995による方法の若干変形した方法)、ヒトの末梢血液単核細胞（PBMC）を使用して試験した。PBMCを、培地中で薬剤と一緒に72時間培養しそして細胞生長を、自動細胞カウンターにおいて測定した。10000μM以上においては、リポソームそれ自体が細胞カウンティングを妨げる。結果は、以下の表５に示す通りである。驚くべきことには、ホスカーネットを含有するガラクトリピドリポソーム製剤は、PBMCにおいて、遊離ホスカーネットよりも２〜３倍低い細胞生長に対する阻害(２〜３倍高い細胞生長阻止濃度CIC₅₀)を有するということが見出された。上述したように本発明のリポソーム製剤は、またリポソーム的に封入されたホスカーネットのほかに遊離のホスカーネットを含有するので、この効果はさらに高いはずである。ホスカーネットのキレート化副作用は、ガラクトリピドの添加によって妨げることができまたはリポソーム製剤の徐放作用は、ホスカーネットの最高細胞内濃度を減少しそしてその結果毒性作用を減少することができるということを推測することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ )，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ルンドクヴイスト，カール・ステフアンスウエーデン国エス−127 37 シエールホルメン．アスプセトラヴエイエン２ (72)発明者ニルソン，ニルス・イヨーラン・グンナースウエーデン国エス−114 27 ストツクホルム．ヴアルハツラヴエイエン80

Claims

【特許請求の範囲】１．ガラクトリピドおよび極性溶剤と混合されたホスカーネット、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビルおよびファムシクロビルからなる群から選択された抗ウイルス化合物からなる医薬組成物。２．ガラクトリピドおよび極性溶剤と混合されたホスカーネットの治療的に有効な量を含有する請求項１記載の組成物。３．ガラクトリピドが、少なくとも50％のジガラクトシルジアシルグリセロールおよび残りの他の極性脂質からなる請求項１または２記載の医薬組成物。４．ガラクトリピドが、ジガラクトシルジアシルグリセロール約70〜80％および他の極性脂質約20〜30％からなる請求項１〜３の何れかの項記載の医薬組成物。５．ガラクトリピドが100％までのジガラクトシルジアシルグリセロールからなる請求項１〜４の何れかの項記載の医薬組成物。６．(a) ホスカーネット 0.1〜10％ (b) ガラクトリピド１〜70％ (c) 極性溶剤および任意の添加剤 30〜98.9％からなる請求項１〜５の何れかの項記載の医薬組成物。７．(a) ホスカーネット１〜５％ (b) ガラクトリピド 20〜40％ (c) 水 55〜79％からなる請求項１〜６の何れかの項記載の医薬組成物。８．(a) ホスカーネット１〜５％ (b) ガラクトリピド１〜10％ (c) 水 85〜98％からなる請求項１〜６の何れかの項記載の医薬組成物。９．局所投与用の請求項１〜７の何れかの項記載の医薬組成物。 10．非経口的投与用の請求項１〜６または８の何れかの項記載の医薬組成物。 11．ヘルペスウイルス感染の予防処置および／または治療処置用の請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物。 12．再発性ヘルペスウイルス感染の治療処置用の請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物。 13．HIVまたはHBVの予防処置および／または治療処置用の請求項１〜６または８の何れかの項記載の医薬組成物。 14．抗ウイルス化合物および任意の添加剤を極性溶剤に溶解し、ガラクトリピドを加え、そして混合物を、均質な組成物が得られるまで、撹拌または振盪する工程を特徴とする請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物を製造する方法。 15．請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物の治療的に有効な投与量を局所的にまたは非経口的に投与することからなるヒトを包含する哺乳動物における皮膚、粘膜または眼のヘルペスウイルス感染を予防処置および／または治療処置する方法。 16．請求項１〜６または８の何れかの項記載の医薬組成物の治療的に有効な投与量を非経口的に投与することからなるヒトを包含する哺乳動物における非−皮膚ヘルペスウイルスHIVまたはHBV感染を予防処置および／または治療処置する方法。 17．請求項15または16による再発性ヘルペスウイルスの治療的処置方法。 18．ヒトを包含する哺乳動物におけるヘルペスウイルス感染予防処置および／または治療処置用医薬を製造するための請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物の使用。 19．再発性ヘルペスウイルス感染の治療処置用医薬を製造するための請求項１〜８の何れかの項記載の医薬組成物の使用。