JPH11501283A

JPH11501283A - Ｉ型インターフェロンに対する中和活性を有する、インターフェロンレセプターに対するモノクローナル抗体を含んでなる医薬組成物

Info

Publication number: JPH11501283A
Application number: JP7509002A
Authority: JP
Inventors: ジェー．トーベイ，ミッシェル; ジャコーベニズリ，エリク
Original assignee: ラボラトワールウーロペアンドゥバイオテクノロジソシエテアノニム
Priority date: 1993-09-17
Filing date: 1994-09-16
Publication date: 1999-02-02
Also published as: WO1995007716A1; CA2171955A1; AU7782894A; EP0725654A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒトインターフェロンのクラスＩレセプター(IFN−Ｒ)に対して向けられたモノクローナル抗体の精製調製物を含んでなり、そして下記の性質：ヒト IFN−Ｒの細胞外ドメインを認識する、およびヒトＩ型IFN の生物学的性質に対する中和能力を有する、を有する、免疫調節因子として使用するための医薬組成物に関する。本発明は、さらに、診断のためのそれらの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】Ｉ型インターフェロンに対する中和活性を有する、インターフェロンレセプターに対するモノクローナル抗体を含んでなる医薬組成物インターフェロン(IFN)は、広い範囲の生物学的活性を示しそして脊椎動物細胞における抗ウイルス状態を誘導する能力により特徴づけられる、１群の分泌されたタンパク質を構成する（I．GresserおよびM．G．Tovey，Biochem．Biophys ．Acta 516 : 231，1978）。IFN の３つのクラスが存在する：アルファ（α）、ベータ（β）およびガンマ。IFNαおよび IFNβはまとめてＩ型インターフェロンとして知られている。天然のＩ型ヒトインターフェロンは、高度の構造的相同性をもつ独特の遺伝子によりコードされる16またはそれ以上の関係するタンパク質を含んでなる（Weis smann およびWeber，Prog．Nucl．Acid. Res．Mol．Biol. 33 : 251，1986）。ヒト IFNαの遺伝子座は２つのサブファミリーを含んでなる。第１のサブファミリーは、14の非アレル遺伝子（non allelic gene）および少なくとも80％の相同性を有する４つの偽遺伝子(pseudo yene)から成る。第２のサブファミリー、 αＩＩおよびオメガ（ω）は、５つの偽遺伝子および、IFNα遺伝子と70％の相同性を示す１つの機能的遺伝子を含有する(Weissmann およびWeber，1986)。 IFNαのサブタイプは異なる特異的活性を有するが、同一の生物学的スペクトルもち(Streuli et al．PNAS-USA 78 : 2848，1981)そしていくつかの細胞のレセプターを有する（Agnet M．et al.，“Interferon 5”，I．Gresser編、ｐ．１−22，Academic Press，London 1983）。インターフェロンβ(IFNβ)は、IFNα遺伝子とほぼ50％の相同性を有する単一の遺伝子によりコードされる。インターフェロンαのサブタイプとインターフェロンβは、細胞表面上の同一レセプターに結合する。インターフェロンガンマ(IFNガンマ)は、また、単一のコピーによりコードされ、このコピーは IFNαおよび IFNβとの相同性をほとんどもたない。IFNガンマのレセプターは、αおよびβインターフェロンのレセプターと区別される。本発明の目的に対して、IFNのαおよびβクラスのレセプターを IFN−Ｒと表示する。これは天然のＩ型レセプターを表す。天然のインターフェロンαを形成するタンパク質のグループを IFNαと表示し、そしてＩ型IFN は双方の天然の I FNα，IFNω、および IFNβを表す。インターフェロンが効力のある抗ウイルス剤という事実にかかわらず、急性ウイルス疾患、例えば、上気道感染、の多数の特徴的な症状がインターフェロンアルファの過度の産生により引き起こされるということを示唆する、考慮すべき証拠が存在する。さらに、IFNアルファは実験動物においてある種の慢性ウイルス感染の病原性に寄与することが示され、そして入手可能な証拠はこれが、また、ある種のヒトウイルス疾患、例えば、慢性麻疹ウイルス性疾患、についての症例であることを示唆する。インターフェロンαは、また、効力のある免疫調節分子であり、これらの分子はポリクローナルＢ細胞を活性化し、NK細胞の細胞障害性を増強し、Ｔ細胞の機能を阻害し、そして主要な組織適合性複合体(MHC)クラスＩの発現を調節し、それらのすべては自己免疫性の誘導および移植片拒絶に関係づけられる。インターフェロンαの異常な産生は多数の自己免疫疾患、免疫不全および炎症性疾患、例えば、全身性エリテマトーデス(SLE)、Ｉ型糖尿病、乾癬、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、ベーチェット病、無形成貧血、後天性免疫不全症候群（AIDS）および重症の合併型免疫欠損に関連づけられる。全身性狠瘡を有する患者の血清の中のインターフェロンαの存在は、疾患の活性の増加の臨床的および体液性の双方の徴候と相関関係をもつ。HIV 陽性の被験者におけるインターフェロンαの産生は、また、疾患の進展を高度に予測する。特に、密接な相関関係は、また、循環する酸不安定性インターフェロンαの存在と、後天性免疫不全症候群（AIDS）を有する患者における疾患の進行との間に存在する（Mildvan D．et al．1992，The Lancet 339 : 353）。インターフェロンαの投与は、乾癬および多発性硬化症の患者において根源的な疾患を憎悪し、そして自己免疫疾患の以前の病歴をもたない患者においてSLE 様症候群を誘発することが報告された。また、インターフェロンαは正常マウスにおいて糸球体腎炎を誘発し(Gresser et al.，1976，Nature，263 : 420)、そして NZB／Ｗマウスの自発的自己免疫疾患の開始を加速すること（Adam et al., 1980，Clin．Exp．Immunol.，40 : 373）が示された。トランスジェニックマウスの膵臓におけるインターフェロンαの構成的発現は、また、インスリン依存性糖尿病の発生に導くことが示され、その発生はインターフェロンαに対する特定の抗体で動物を治療することによって妨げられる(Ste wart et al.，1993，Science，260 : 1942)。致死的に照射したマウスのインターフェロンαによる治療は、また、同種異系骨髄移植片に対する耐性を増強することが示されたが、インターフェロンαに対する抗体による治療は拒絶反応を抑制することが発見された(Affifi et al.，19 85，J．Immunol．134 : 3 739)。インターフェロンα／βに対する抗体によるラットの治療は、また、これらの動物における心臓同種異系移植片の生存を延長することが報告された(Gugen heim et al.，1992，Transplant．Int．５：460)。また、移植片対宿主病（GVHD）の過程において全身性GVHDの特徴を示すNK細胞の活性の増強と平行して、インターフェロンαは産生される。インターフェロン αはNK細胞の細胞損傷作用の主要なモジュレーターであり、そしてインターフェロンαの投与は正常マウスにおけるGVDHの腸の結果を増強することが示された(C leveland et al.，1987，Cell Immunol．110 : 120)。本発明の目的は、ヒトＩ型IFN の生物学的活性に対する新しいアンタゴニストを提供することである。これらのアンタゴニストは、Ｉ型IFN（IFNα／β）が異常に産生される症例およびこの異常な産生が病理的症状に関係づけられるとき、予防の目的を包含する療法のために使用できるであろう。このようなアンタゴニストはまた、種々の疾患の診断のために、またはこのような疾患の進展の研究のために使用できるであろう。このようなアンタゴニストを定義するために、本発明者らは、ヒトの天然のＩ型IFN が事実インターフェロン（サズスペーシス）の混合物から構成されているという事実、およびインターフェロンの異なるサブタイプのこの連合の組成物が定量的にかつ定性的に変化するという事実を考慮した。いくつかの天然のインターフェロン、例えば、ナマルワ(Namalwa)細胞により分泌されるもの（Namalwa インターフェロン）または白血球により分泌されるもの（白血球インターフェロン）、が詳細に研究されてきており（N．B．FinterおよびK．H．Fautes，Interferon ２，1980，ｐ．65−79 I．Gresser編、Academ ic Press ; K ．Cantell et al.，Interferon 1，1979，ｐ．２−25，I．Gresser編、Academic Press）、そして本発明者らはこれらを使用して天然のＩ型インターフェロンを定義した。いくつかの病理的症例、例えば、AIDS、において、いくつかの特別の性質を有するインターフェロンが記載されてきている（O．T．Preble et al.，Annls of New-York Academy of Sciences ｐ．65−75）。AIDSのような病理的症例に関係するこのインターフェロンは、前述したように、同一レセプターに結合する。本発明の１つの目的は、ヒトＩ型IFN の生物学的性質を、決定した程度に、阻害または中和すること、すなわち、α，β，ωの亜種の混合物をin vivo で中和すること、ができるＩ型IFN のアンタゴニストを提供することである。これらのアンタゴニストは免疫調節因子として薬物の組成物の中に利用することができ、そしてそれらの特定決定は、種々の病理学における存在するインターフェロンの特質の本発明者らによる同定により、そしてまた動物モデルの発生により可能とされた。本発明者らは、適当なin vivo 動物モデルを発生させ、いくつかのモノクローナル抗体がin vivo の免疫応答で、Ｉ型IFN レセプターと、種々の病理学に関して療法的に効率よい方法で、相互作用することができることを証明することができた。特に、本発明者らは、Ｉ型IFN レセプターに対して向けられたモノクローナル抗体のin vivo 投与が、ウイルスのインターフェロン、特にHIV またはHTlVレトロウイルスによるインターフェロン、と相互作用することができそして、ある場合において、それらのインターフェロンから生ずるウイルス性疾患の症状を抑制することができるか、または同種異系移植片拒絶を抑制することができるか、または移植片対宿主の疾患の作用を抑制することができる条件を定めることができた。これらの免疫調節因子は、例えば、インターフェロンの異常な産生を包含する疾患の治療に利用されるか、または他の既知の免疫調節因子または薬物、特にウイルス薬物、と同時にまたは別々に組み合わせて利用されるであろう。例えば、本発明者らは、ある場合において、Ｉ型IFN レセプターに対して向けられたモノクローナル抗体が他の治療薬と有用な相乗作用を有することができることを示した。これは、例えば、Ｉ型IFN レセプターに対するモノクローナル抗体を免疫抑制薬物、例えば、シクロスポリンＡ、に関連させるとき、当てはまるように思われる。従って、本発明者らは、免疫調節因子としての活性をもつためにＩ型IFN に対するアンタゴニストであるという性質を有する、抗体、特にモノクローナル抗体、を含んでなる組成物を定めた。これらの抗体はヒトＩ型IFN レセプターに対して向けられている。従って、本発明は、Ｉ型IFN の異常な産生に関連する症状のin vivo 処理について、免疫調節因子として使用するための、医薬組成物における精製されたモノクローナル抗体の調製物の使用に関する。これらのモノクローナル抗体は、また、診断試薬の製造のために適当である。本発明に従い免疫調節因子として使用する医薬組成物の製造に適当な特定のモノクローナル抗体は、ヒトＩ型インターフェロンレセプター（IFN−Ｒ）に対して向けられ、そして下記の性質により特徴づけられる： − それはヒト IFN−Ｒの細胞外ドメインを認識する、および − それはヒトＩ型IFN の生物学的性質に対する中和能力を有する。Ｉ型IFN の生物学的性質を中和する能力は、Ｉ型IFN の抗ウイルス活性を中和するモノクローナル抗体の能力の関数として推定することができる。このような試験はアッセイする抗体が本発明の範囲内の医薬組成物の製造のために適当であるかどうかを決定するために関係するが、Ｉ型IFN の生物学的性質はその抗ウイルス性質に限定されないことは明らかである。抗ウイルス活性のこのような試験を実施できるようにするための詳細な手順は、実施例に記載されている。試験する細胞は有利にはダウディ(Daudi)細胞であることができ、前記細胞のＩ型IFN に対してアフィニティーはよく知られている。このような試験の主要なステップは、下記のステップから成る： − ヒトＩ型IFN に対して応答性の決定された濃度のヒト細胞を、ヒトＩ型IFN と、アッセイすべきモノクローナル抗体の一定濃度の存在下で、該モノクローナル抗体とヒト細胞の IFN−Ｒとの間の、および／またはＩ型IFN とヒト細胞のIF N−Ｒとの間の、複合体の形成を可能とするために十分な時間の間インキュベートする； − インキュベートした細胞を決定されたウイルスで、決定された濃度において感染させる； − 細胞を洗浄する； − 細胞を培地の中に再懸濁させる； − ウイルスの複製を可能とするために十分な時間の間インキュベートする； − 細胞を溶解する； − ウイルスの複製を測定するか、または細胞変性効果の抑制を測定する。ヒトＩ型IFN の生物学的性質を中和する本発明のモノクローナル抗体の能力は、使用する抗体の投与量の関数として調節することができる。従って、生物学的性質の 100％の抑制、または部分的抑制を得ることができる。以上のページは、精製したとき、本発明による医薬組成物の活性成分を構成するために適当である、ヒトＩ型IFN レセプターに対して向けられた好ましいモノクローナル抗体の定義に関する。モノクローナル抗体の精製は通常の技術により実施され、そしてリムルス(Limulus)試験によるエンドトキシン含量のタンパク質決定により確認することができる。本発明の特定の態様に従い、ヒトＩ型IFN レセプターに対して向けられたモノクローナル抗体は、それらがヒト IFN−ＲへのヒトＩ型IFN の結合を阻害することができるという事実によりさらに特徴づけられる。ヒト IFN−Ｒの細胞ドメインを認識する能力を有しかつヒトＩ型IFN のそのレセプターへの結合を阻害することができるモノクローナル抗体は、下記のステップにより選択することができる： − 決定された濃度の精製されたモノクローナル抗体またはアッセイすべきモノクローナル抗体を含有するハイブリドーマ培養上澄みを、IFN−Ｒを収容できるヒト細胞と前インキュベートする； − 標識化ヒトＩ型IFN を、決定された濃度で、上の前インキュベートした培地に添加する； − ヒト細胞、モノクローナル抗体および標識化Ｉ型IFN を含有する培地を、一方においてモノクローナル抗体と他方においてＩ型 IFNとの間で平衡を起こさせるために十分な時間の間、細胞 IFN-Ｒとインキュベートする； − 細胞を洗浄する； − 結合した標識化Ｉ型IFN の量を計数することによって、ヒト細胞と標識化Ｉ型IFN との間の結合複合体の形成を決定する。本発明のモノクローナル抗体のあるものはまた、ヒトＩ型IFN の抗増殖性質を中和する能力を有する。この性質はまた、ダウディ細胞について、下記のステップを実施することによってアッセイすることができる： − ヒトＩ型IFN および決定した濃度のmAb の存在下に細胞を増殖させる； − 細胞を計数してヒトＩ型IFN の抗増殖作用の阻害を検出する。本発明の医薬組成物の製造に適当な、免疫調節活性を有するモノクローナル抗体の１つの性質は、ヒトIFN レセプターの細胞外ドメインを認識するその能力にある。モノクローナル抗体のこの性質は天然のヒトレセプターを有するヒト細胞についてアッセイすることができるが、また、原核細胞、例えば、大腸菌(E．co li)、の中の発現されるのような組換え IFN−Ｒまたは真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、例えば、CHO 細胞、の中で発現されるのような組換え IFN−Ｒの細胞外ドメインについてアッセイすることができる。このレセプターは、事実、それが原核細胞または真核細胞の中で産生されるという事実に依存して、従って、翻訳後の突然変異が起こるか、または起こらないという事実に依存して、異なる性質を表すことができる。本発明者らは、興味あることには、本発明によるモノクローナル抗体の能力を評価するための、すなわち、細胞 IFN−Ｒを認識するための、関係するアッセイを哺乳動物細胞の中で発現された組換えレセプターについて実施できることを示した。事実、このような組換えレセプターは、その認識活性に関するかぎり、細胞レセプターと同一の性質を有する。本発明の達成に有用なモノクローナル抗体は、完全なレセプター、特定のドメインまたは第３図に表されているレセプターのアミノ酸配列の特徴を示すペプチドを包含する、種々の形態のレセプターに対して得ることができる。本発明に有用なモノクローナル抗体は、例えば、可溶性の形態のレセプターに対して調製することができる。可溶性の形態の IFN−Ｒに相当する水溶性ポリペプチドは第２図に記載されている。本発明によれば、可溶性の形態の IFN-Ｒは、体の中で循環できる、ペプチドまたはポリペプチドに相当する。本発明に有用な他のモノクローナル抗体はまた、第２図に記載するようなレセプターの細胞外ドメインの中で構成されたペプチドに対して調製することができる。有利なペプチドは、例えば、アミノ酸１とアミノ酸 427との間で構成されたアミノ酸配列に相当する。本発明の他の態様によれば、抗体は１または２以上のアミノ酸の置換により修飾されたポリペプチドに対して製造することができるが、ただし IFN−Ｒの非修飾細胞外ドメインに対して向けられた抗体は修飾されたポリペプチドまたはペプチドを認識しなくてはならない。本発明による好ましいモノクローナル抗体はIgG1型のものである。前述の抗体の中で、Ｉ型IFN のそのレセプターへの結合を阻害する能力を有する抗体は、好ましくは、100μｇ／mlに等しいか、またはそれより低い、好ましくは50μｇ／mlに等しいか、またはそれより低い、有利には20μｇ／mlより低い、より好ましくはほぼ 0.5〜２μｇ／mlの範囲の濃度において、hu− IFN−Ｒを収容する細胞と共インキュベートしたとき、それがヒト細胞の IFN−ＲへのヒトＩ型IFN の結合をin vitroで阻害することにおいて特徴づけられる。モノクローナル抗体の高いアフィニティーの結合能力は、この抗体が IFN-ＲへのヒトＩ型IFN の結合活性を阻害できることを保証するために不十分であることを本発明者らは示した。それにもかかわらず、モノクローナル抗体の高いアフィニティーの結合能力は、Ｉ型IFN のその細胞レセプターへの結合を阻害する抗体の能力をさらに研究するために必要である。他のモノクローナル抗体は、それがヒトＩ型IFN に対して高度に応答性の細胞、例えば、ダウディ(Daudi)細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗増殖活性を１〜10μｇ／mlの範囲の濃度においてin vitroで中和することにおいて特徴づけられる。モノクローナル抗体の他の態様は、また、それがヒトＩ型IFN に対して低い応答性の細胞、例えば、Ly28細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗増殖活性を50〜 100 μｇ／mlの範囲の濃度においてin vitroで中和することにおいて特徴づけられる。本発明による免疫調節因子として使用するための組成物の製造に適当なモノクローナル抗体の特定のグループは、それがヒトＩ型IFN に対して高度に応答性の細胞、例えば、ダウディ細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗ウイルス活性を１〜50μｇ／ml、好ましくは１〜20μｇ／mlの範囲の濃度において、国際標準 MRC 69／19を参照して１〜1000単位の範囲のＩ型IFN の濃度について、in vitroで中和することにおいて特徴づけられる。有利には、本発明によるモノクローナル抗体は、これらの抗体がIFN ガンマのヒトレセプターに結合しないようなものである。本発明の医薬組成物のために興味ある１つの抗体は、それが第２図に表されているヒト IFN−Ｒの細胞外ドメインのアミノ酸27とアミノ酸 427との間で構成されたアミノ酸配列上のエピトープに対して向けられているようなものである。１つの特定の興味あるモノクローナル抗体は、1992年２月26日にNo．92022605 でECACC(European Collection of Animal Cell Cultures Porton Down Salisbur y，Wiltshire SP4 056，United Kingdom)に受託された64G12 と表示する抗体である。これらの抗体は慣用法により製造することができ、慣用法は、抗体が形成される抗原が IFN−Ｒの細胞外ドメインまたはこのドメインのポリペプチドまたはペプチドにより構成されるような条件下に、ペプチド抗原で前もって免疫化された動物の脾細胞と骨髄腫細胞との融合により、ハイブリドーマ細胞を製造することを包含する。ハイブリドーマはKohlerおよびMilsteinのプロトコール(Nature，1974，256 : 495-497)に従い構成される。例えば、ハイブリドーマは、前述の脾細胞と骨髄腫細胞としてNS１マウス（BalbC）HGPRT^Rとの融合から誘導される。本発明によるモノクローナル抗体を生産する第２手順は、エプスタイン−バー −ウイルスで免疫化された血液のＢ細胞と、モノクローナル抗体をそれに対して形成することを決定した IFN−Ｒの細胞外ドメインまたはその断片と前もって接触させて配置したヒトＢリンパ球との間で、融合を実施することにある。モノクローナル抗体をそれに対して形成することを決定した IFN−Ｒの細胞外ドメインまたはその断片と前もって接触させて配置したＢ細胞は、抗原と接触させたin v itro培養物により得ることができ、これらの抗原でコーティングされたＢ細胞の回収の前に１または数サイクルの刺激を実施する。本発明は、また、前述の手順により得られ、上に定義した性質を有するヒト抗体の医薬組成物における使用に関する。本発明はまた、その重鎖および／または軽鎖の変動性または相補性決定領域がヒト抗体のフレームワークおよび／または一定領域上にグラフトされていることを特徴とするモノクローナル抗体の医薬組成物における使用に関する。本発明による好ましい医薬組成物は、モノクローナル抗体の精製調製物を0.05 mg／kg体重〜約３mg／kg、好ましくは0.5mg／kg〜１mg／kg、の間の投与量を含有するものである。本発明の医薬組成物は異なる方法で投与することができ、そして特に活性成分は静脈内または筋肉内投与のために適当な医薬用ベヒクルと組み合わせることができる。特定の態様によれば、上に定義されたモノクローナル抗体は、ヒトレトロウイルス、特にヒトHIV またはHTLVレトロウイルス、による感染の疾患をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造に使用することができる。幾つかの先行する結果は、インターフェロンがAIDSの病理に関連するであろうことをすでに示しているが、これはHIV レトロウイルスによる感染の場合に存在するインターフェロンの組成物が示された最初であり、そしてこれはＩ型IFN レセプターに対するモノクローナル抗体が、感染後の免疫応答に作用することによって、AIDSに関連する疾患の治療のために有用であり得ることが示された最初である。他の例によれば、このような薬物は自己免疫疾患および炎症性疾患の治療のために使用することができる。このような疾患は、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、乾癬、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、ベーチェット病、無形成貧血、後天性免疫不全症候群（AIDS）、および重症の合併型免疫欠損を包含する。従って、上に定義した精製されたモノクローナル抗体は、同種異系移植片の拒絶をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造のために使用できるか、または移植片対宿主の疾患の症状をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造のために使用できる。急性ウイルス性疾患の症状の治療は、また、本発明の抗体を使用して実行することができる。例えば、上気道感染、慢性ウイルス感染、例えば、麻疹ウイルスによる感染、を実行することができる。本発明の組成物は、また、生物学的試料、例えば、血液または他の流体、の中のヒト可溶性Ｉ型IFN レセプターまたは細胞の存在のin vitro診断のために使用できる。試験はいくつかの技術、例えば、ELISA(第14図（２）)またはRIA、により行うことができる。他の面によれば、本発明は免疫抑制因子として使用するための医薬組成物に関し、この組成物は活性成分として、上の定義を有するモノクローナル抗体と、同時の、別々のまたは順次の使用のための組み合わされた調製物として、免疫調節活性、特に免疫抑制活性、を有する因子、例えば、シクロスポリンＡまたはFK50 6、とを含んでなることを特徴とする。特に、モノクローナル抗体は約0.05mg／k g〜３mg／kg、好ましくは0.5mg／kg〜１mg／kgの範囲の投与量で存在し、そして免疫抑制活性を有する因子、特にシクロスポリンＡ、が存在する。後述する結果は、上で定義したモノクローナル抗体を体液性免疫または細胞性免疫のためのアジュバントとして使用できることを示す。それ以上の詳細および追加の情報は、実施例の記載からおよび図面からの説明から得られるであろう。図面 − 第１図：下記の細胞への¹²⁵Ｉ標識化モノクローナル抗体34F10 および64G12 の結合： − Ａ：ダウディ細胞 − Ｂ：Ly28細胞簡単に述べると、10％ウシ胎児血清(FCS)を含有するRPMI培地の中に希釈した異なる量の標識化抗体の存在下に、10⁶細胞を４℃において２時間インキュベートした。次いで、細胞をRPMI−１％ FCSの中で４回洗浄し、そして結合した放射能について計数した。非特異的結合を 100倍過剰の寒冷抗体とのインキュベーションにより測定し、そして合計の計数から減じた。 − 第２図：ヒト IFN−Ｒの細胞外ドメインのヌクレオチドおよび対応するアミノ酸配列。原核細胞〔大腸菌(E．coli)〕または哺乳動物細胞系（Cos 細胞）の中で合成したヒトインターフェロンアルファ−ベータのレセプター（IFN−Ｒ）の組換え可溶性形態に対して、モノクローナル抗体を生成させた。これらの可溶性形態は第２図に記載するDNA 配列に基づいた。 − 第３図：ヒト IFN−Ｒのヌクレオチドおよび対応するアミノ酸配列。 − 第４〜28図：抗体の免疫調節因子の活性に関する結果。実施例実施例１：可溶性レセプターの合成大腸菌(E．coli)の中の合成５ヒスチジル残基をコードする余分の配列が終止コドンの直前に導入された、ヒト IFN−Ｒの細胞外ドメイン(アミノ酸27−427)をコードする配列を含有するD NA 断片（第２図）を、発現ベクターpKK233−２の中にクローニングした。この断片はポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により生成させ、そして生ずるプラスミドを配列決定して、シャイン−ダルガルノ（Shine-Dalgarno）配列およびレセプターをコードする適当な配列の双方のインフレームの挿入を確証した。組換えタンパク質の中に導入されたポリ−ヒスチジルテイルは、従来記載されたようにキレート化ニッケル支持体(NTAカラム)のアフィニティークロマトグラフィーによる前記タンパク質の急速な精製を可能とする（Hochuli E．et al.，B io/Technology，1988，1321-1325）。プラスミドを大腸菌（E．coli）JM105株の中に導入し、そして培地へのIPTGの添加によりタンパク質合成を誘発した（pKK233−２，tac プロモーター）。タンパク質を細菌のペレットから抽出し、そして後述するようにアフィニティークロマトグラフィーにより可溶性レセプターを均質に精製した。この手順により、還元性条件下に50kDa 付近の２バンドおよび非還元性条件下に３バンドとして移動するタンパク質が生成した。異なる手順により得られた製造の最大濃度はほぼ20μｇ／mlであった。ゲル電気泳動により検出された２つのタンパク質のＮ−末端配列は、双方のタンパク質がレセプターの期待した断片であることを示した。非グリコシル化可溶性レセプターの合成および精製：同一のPCR アプローチを使用して、われわれは、また、追加の５−ヒスチジル残基をもち、発現ベクターpXMT−３の中に挿入された、IFN−Ｒアミノ酸配列１ −427 をコードする発現ベクターを構成した。インサートの正確なヌクレオチド配列をまた決定した。生ずるプラスミドを一時的発現のためにCos7細胞の中にエレクトロポレーションにより導入し、そして後述するように組換えタンパク質をモノ−Ｑ(Pharmacia )のアフィニティークロマトグラフィーおよび引き続くイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。 Cos7 細胞からの可溶性 IFN−Ｒの精製この精製により、76kDa の製造が得られ、そのＮ−末端配列は予測したレセプター配列に相当し、リーダー配列のプロセシングにおいて多少の不均一性をもつ。実施例２：インターフェロンＩ型レセプターに対するモノクローナル抗体の産生１）モノクローナル抗体の産生大腸菌(E．coli)またはCos7細胞から精製した組換え可溶性インターフェロン( rsIFN−Ｒ)の注射により、マウスを免疫化した。最初に、Balb／Ｃマウスを完全フロインドアジュバントの中の精製タンパク質で腹腔内および皮下の両方に注射した。引き続いて、マウスを緩衝化生理食塩水の中に希釈した精製ペプチドで１回／週腹腔内注射した。10μｇの組換えタンパク質を各回に注射した。第４回の注射後、血液を集め、そして特定の血清抗体の存在を組換えレセプターに対してELISA およびウェスタンブロットにより試験した。最強のレスポンダーを合計の10μｇの抗原でブースター投与し、その抗原の半分を静脈内投与しそして半分を腹腔内投与した。２）細胞融合ブースター投与後４日に、免疫化動物からの脾細胞を集め、そしてS．Fazekas et al．（Immunol．Methods 35：１−32，1980）により記載される方法に従いN S１（マウス）（Balbc）HGPRT^R骨髄腫細胞に融合させた。簡単に述べると、５× 10⁷脾細胞を１mlのポリエチレングリコール溶液の中で３×10⁷骨髄腫細胞に融合させ、そしてHAT(ハイポキサンチン、アミノタンパク質およびチミジン)培地の中の腹膜マクロファージフィーダー上の５つの96ウェルのプレートの中に分布させた。この手順を４回反復し、ことのとき20×10⁷脾細胞が免疫化マウスから得られた。大きいコロニーが培養ウェルにおいて検出可能であるとき、特定のハイブリドーマについてのスクリーニングを実施した。スクリーニングについて、特定の抗体の存在は直接ELISA 法により決定した：ａ）ELISA プレートを、PBS の中の希釈した精製した大腸菌(E. coli)発現またはCos7細胞発現のsIFN−Ｒで、０℃において一夜コーティングした。BSA でコーティングしたプレートを使用して非特異的結合を検出した。ｂ）プレートをPBS の中の３％ BSAで37℃において１時間のインキュベーションにより飽和させた、ｃ）プレートを室温において PBS−0.05％ツイーン20で１／４に希釈したハイブリドーマ上澄みと４時間インキュベートした、ｄ）結合した抗体を２つのステップの手順により検出し、この手順はヤギ抗マウスビオチニル化免疫グロブリンとの第１インキュベーションおよび引き続くストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼ複合体とのインキュベーションを含んでなる（双方はAmershamからそして PBS−0.05％ツイーン20の中で１／1000に希釈された）。陽性の抗体を分泌するハイブリドーマを脾細胞フィーダー層上の24ウェルのプレートの中で継代し、そしてそれらの反応性を再びELISA およびウェスタンブロットにより検査した。３）天然のインターフェロンＩ型レセプターに対する反応性の同定組換えsIFN−Ｒを認識するモノクローナル抗体（mAbs）の反応性を、膜免疫蛍光により、ダウディ細胞の表面で発現される天然のクラスＩレセプターに対して試験した。簡単に述べると、５×10⁵ダウディ細胞を 100μｌの選択したハイブリドーマの培養上澄みの中で４℃において30分間インキュベートした。次いで、細胞を１％ BSAを含有するRPMI培地の中で４回洗浄し、そして希釈したFITC標識化ヤギ抗マウスＦ（ab’）₂と４℃においてさらに30分間インキュベートした。細胞を最後に洗浄後フロー・サイトメトリーにより分析した。大腸菌(E．coli) 組換えレセプターに対して生成した35の試験した抗体のうちの１つ、およびCOS 組換えレセプターに対して生成した６つの試験した抗体のうちの５つは、ダウディ細胞上の天然のレセプターを認識することが発見された。次いで、これらのハイブリドーマのクローニングを限界希釈法により実施した。これらのmAbsのアイソタイプを、アイソタイプ特異的抗体を使用するELISA 法により決定した。すべての６つのmAbsはカッパ鎖をもつIgG1であることが発見された。これらの６つのmAbsの反応性の要約を表１に記載する。モノクローナル抗体をタンパク質Ｇクロマトグラフィーにより培養上澄みから精製した。実施例３：ヒト細胞系へのインターフェロンの結合の阻害ヒト細胞へのインターフェロンの結合の阻害は次のようにしてアッセイした。 10⁶細胞を４℃においてハイブリドーマ培養上澄みまたは精製mAbsの種々の希釈物と、または培地単独と30分間前インキュベートした。¹²⁵Ｉ標識化IFN アルファ８またはアルファ２を100pM の濃度で添加し、そして４℃においてから２時間インキュベートした。これらのインキュベーションは、20mMのHEPES，pH7.4および10％のウシ胎児血清(FCS)を含有するRPMI培地の中の実施した。細胞を最後にRPMI−１％ FCSで４回洗浄し、そして計数して結合した放射能を決定した。ハイブリドーマ系統64G12 により分泌されたmAb(後にmAb64G12と命名した）は、このアッセイにおいて投与量依存的方法で細胞への標識化IFN の結合を阻害することが示された。ダウディ細胞（Burkitt リンパ腫細胞系；Klei et al.，Can cer Research，28 : 1300-1310，1968）は 0.4μｇ／mlのmAb 濃度で得られた。同一の阻害はK562細胞（慢性骨髄性白血病、LozzioおよびLozzio，Cell，45 : 3 21-334，1975）を使用して得られたが、50％の阻害はHL60細胞(前骨髄球性白血病、Collins S．J．et al.，Nature，270 : 347-349, 1977)について１１μｇ／ mlにおいてそしてLy28（Klein G．et al., Int．J．Cancer，10 : 44-57，1972 ）について60μｇ／mlにおいて得られた。 IFN の結合の50％阻害が得られるmAb 濃度の差を、同一細胞系への¹²⁵Ｉ標識化mAb64G12および34F10 の直接結合および結果のスキャッチャードプロット分析により研究した。0.1〜1.5μｇ／mlの濃度において、mAb34F10（約10nM）の高いアフィニティーの結合がすべての細胞系について見られたが、mAb64G12の高いアフィニティーの結合はダウディ細胞およびK562細胞についてのみ検出された（第１図）。実施例４：Ｉ型インターフェロンの機能の阻害精製したmAb64G12によりＩ型インターフェロンの機能の阻害は、まず、ダウディ細胞についての抗ウイルスアッセイにおいて、組換えIFN アルファ２，IFN ベータおよびIFN オメガを使用するか、またはNamalwa および白血病インターフェロンを使用して、そして組換えIFN アルファ２を使用する抗増殖アッセイにおいて、証明された。＊抗ウイルス活性ダウディ細胞についての抗ウイルスアッセイを記載されているように実施した（M．Dron およびM．G．Tovey，J．Gen．Virol．64 : 2641-2647，1983）。細胞 (0.5×10⁶／ml)をインターフェロンおよび抗体の存在下に24時間インキュベートした。次いで、１mlの中の10⁶細胞を37℃において１時間小胞性口内炎ウイルス( VSV)で感染させ、次いで３回洗浄し、培地の中に再懸濁させ、そして37℃において18時間インキュベートした。次いで、細胞を溶解し、凍結−融解し、そしてウイルスの複製をL929細胞について上澄みの滴定により測定した。Ｉ型IFN の種々のサブタイプの抗ウイルス活性の投与量依存性阻害は、精製したmAb64G12について証明された。 Wish細胞を使用する抗ウイルスアッセイのために、細胞を種々の濃度のインターフェロンとmAbsの存在下に24時間インキュベートした後、VSV で誘発した。このアッセイにおいて、mAb64G12は白血病IFN(50Ｕ／ml）、組換えIF N アルファ２（50Ｕ／ml）およびAIDS患者の血清からのインターフェロン（50， 75および 150Ｕ／ml）の抗ウイルス活性を完全にブロックすることが証明された。＊抗増殖活性抗増殖アッセイのために、ダウディ細胞を10⁵細胞／mlの濃度で96ウェルのプレートの中にインターフェロンおよび精製した阻害抗体または対照抗体の存在下に接種した。次いで、細胞を24，48および72時間後にコールターカウンターで計数し、そしてトリパンブルーの排除により生活能力について検査した。精製した mAb64G12は、インターフェロンアルファ２の抗増殖活性の投与量依存性阻害を証明した。実施例５：インターフェロンおよびAIDSの病原性Ｉ）AIDSの病原性におけるインターフェロンαの役割サイトカインを包含するコファクターは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)による感染後に、AIDSの発生（Kramer et al.，1992，Lancet，340 : 371；Vadhan et al.，1986，Cancer Res.,46 : 417）、特に免疫系の抑制、において決定的な役割を演ずることを多数の研究は示唆する。HIV により誘導されたサイトカインの中に、ウイルス感染に対する宿主の防御において重要な役割を演ずると考えられるインターフェロンが存在する。インターフェロンはin vitroのHIV の複製を制限し(Poli et al.，1989，Science，244 : 575 ; Von Sydow et al.，1991，AID S Res．and Human Retroviruses，７：437)、そして組換えインターフェロンα ２はカポージ肉腫をもつAIDS患者において抗ウイルスおよび抗腫瘍作用を発揮し (Krown et al.，1991，J．Acquired Immune Deficiency Syndromes,４：671)、インターフェロンの産生はHIV 感染個体におけるAIDSの発生を防止しない。さらに、インターフェロンαによるHIV の複製の制限はマクロファージにおける潜在的感染の発生に寄与することがある（Gendelman et al.，1990，J．Exp．Pahtol .,５：53；Gendelman et al.，1990，AIDS Res．and Human Retroviruses,６：1 045；MaceおよびGazzolo，1991，Res．Virol.，142：2）。異常な酸不安定性α インターフェロンは、CD₄＋細胞の損失およびこれらの患者における疾患の進行と相関関係をもつことが示された（Milvan et al.，1992，The Lancet，339 : 4 53）。αインターフェロンは効力のある免疫調節因子であり、これらの分子はウイルス感染細胞のMHCクラスＩ抗原の発現、MHC 制限Ｔ細胞の殺し、および非MHC 制限NK細胞の殺しを増強し、それらのすべてはHIV 感染個体において観察されるCD₄＋Ｔリンパ球の損失に寄与することがある。従って、循環するCD₄＋Ｔリンパ球の数の顕著な減少は組換えインターフェロンα２で治療したHIV 感染個体において観察された(Vento et al.，1993，The Lancet，341 : 958)。II ）AIDS患者の中に存在する内因性インターフェロンの特性決定 AIDS患者の中に存在する内因性インターフェロンを特性決定するために、高いレベルの循環するインターフェロンを有するHIV 感染患者から末梢血の白血球を分離し、標準手順を使用して、RNA を抽出し、MLV 逆転写酵素およびいずれかの単一遺伝子（表３〜５、第４図）に対して特異的な前方プライマー（２０マーの合成オリゴヌクレオチド）で逆転写した。次いで、生ずるcDNAをポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により、標準手順を使用して、合計30サイクルについて３対の特異的オリゴヌクレオチドのプライマー（表５）の１つのを使用して増幅した。次いで、IFNβおよびβの遺伝子の場合におけるようにサザンハイブリダイゼーションによるか、またはαインターフェロンの場合におけるようにT7DNA ポリメラーゼ（Sequenase, USB）を使用する直接ジデオキシ配列決定により、標準手順を使用してさらに15サイクルの非対称増幅（0.5pmol の特異的オリゴヌクレオチドのプライマーの対の一方および 50pmolの他方の対のプライマーを使用する）後に、生成物を同定した。この分析の結果により、IFNα５はHIV 感染個体からの末梢血細胞のほぼ30の試料の中の発現された主要な種であるが、IFNαｎ（主として IFNα１および IFNα２）はレトロウイルス、インフルエンザウイルス、またはサイトメガロウイルスで感染されたHIV 血清反応陰性の個体からの末梢血液細胞の中で発現される主要なインターフェロン種であることが示された（第５図）。 HIV−１で慢性的に感染したか、または感染しない前単球細胞系U937におけるインターフェロン遺伝子の発現を同一技術を使用して分析したとき、同様な結果が得られた。IFNα５は HIV−１で慢性的に感染した細胞の中で発現される主な種であることが発見されたが、IFNα１および IFNα２はニューカッスル病ウイルス(NDV)またはポリリボヌクレオチドポリＩ−ポリＣで誘発した未感染U937細胞において発現される最も豊富な種であった。これらの結果は、IFNα２を中和するモノクローナル抗体がAIDS患者の血清の中に存在するインターフェロンを中和しない理由を説明することができる（表６，７）。AIDS患者からの血清インターフェロンは IFNβまたは IFNｘにより中和されないが、ヒトリンパ球系インターフェロンに対して発生させたポリクローナル抗体により中和された（表６，７）。種々の理由で、ポリクローナル抗体はHIV 感染患者の治療的処置に使用することができない。III ）AIDS患者の血清の中に存在するインターフェロンの生物学的活性を中和するモノクローナル抗体インターフェロンαレセプターの能力の決定抗インターフェロンレセプター抗体64G12 で50μｇ／mlの濃度においてWISH細胞（ヒト羊膜細胞系）を前処理すると、AIDS患者の血清の中に存在する内因性インターフェロンの抗ウイルス活性は完全に中和された（表８）。非中和性抗体34 F10 で同一濃度においてWISH細胞を前処理すると、AIDS患者からの内因性インターフェロンの抗ウイルス活性への効果は得られなかった（表８）。IV ）後天性免疫欠損疾患の進展へのインターフェロンアンタゴニストの作用を試験するために動物モデルの確立 IFNαはAIDSの病原性においてある役割を演ずるかどうかを決定しかつこの疾患における治療薬としてインターフェロンアンタゴニストの効能を試験するために、シミアン免疫不全ウイルス(SIV)で感染したアカゲザルの使用に基づく動物モデルを発生させた。SIV はHIV とかなりのヌクレオチド配列の相同性、抗原性、および生物学的性質を共有するCD₄＋向性レンチウイルスである。アカゲザルにおけるSIV 誘発疾患は、リンパ節疾患、免疫不全、および日和見性感染により特徴づけられ、そしてヒトAIDSのきわめてすぐれた実験用モデルであると考えられる（McClure et al.，1990，AIDS : Anti-HIV Agents，Therapies and Vaccin es。 Annals NY Academy of Sciences, 616 : 287）。一次感染アカゲザルのSIV による感染に引き続いて感染後７〜14日に血清 IFNαはピークとなり、これは21日までに検出不可能なレベルに低下する（第６図）。血清 I FNαのピークは、感染後14〜15日におけるｐ27抗原血のピークより２〜３日の前、またはそれと同時に起こる（第７図）。インターフェロンαおよび27抗原血の双方のピークは、感染後21〜25日に検出可能となるウイルス抗原に対する抗体の発生の前に起こる（第８図）。SIV 感染アカゲザルにおける IFNαの産生は、検出可能なレベルの IFNγ，IL−６、または TFN−αの不存在下に起こる。後期段階の疾患 SIV で感染した12匹のアカゲザルおよび９匹の未感染の対照動物のグループを、感染後約30カ月間追跡した。30カ月の観察期間の間のいずれの時においても未感染の対照動物のいずれの血清の中にもインターフェロンは検出されなかった。 SIV 感染アカゲザルにおけるAIDS様疾患の発生の前に、血清 IFNαの第２ピークが起こり、このピークは一次感染後数カ月のCD₄＋細胞の損失に付随して発生する。インターフェロン産生のこの第２ピークは、一次感染の間に観察されるピークと異なり、数カ月の期間にわたって起こり、そして後期段階の疾患において起こるｐ27抗原血より、ある場合において数カ月だけ、先行する。３つのタイプのインターフェロンの応答が後期段階において見られる：感染後約６〜９カ月において疾患の臨床的徴候の発生および死亡の直前のピークのインターフェロンαの産生（表９、動物483，485、および495、第９図〜第11図）、感染後短期間に最初に検出可能でありそして30カ月まで持続する低いレベルのインターフェロンα の産生（表９、動物501 、および505 、第12図〜第13図）、およびSIV で感染後の全30カ月の観察期間の間の検出可能なレベルのインターフェロンαの不存在( 表９、動物475，456，457，489、および489)。インターフェロンαの産生は、従来記載されたように、ヘルペスパピオウイルスで永久分裂能化しそして８つのウイルスタンパク質(ENV，GAG，POL，NEF，VIF ，REV，TAT、およびVPX)の１つでトランスフェクションさせたオートロガスＢ細胞に対して、弱い細胞障害性Ｔ細胞の応答(CTL)を示すか、またはそれを示さない動物においてのみ、観察された(Venet et al.，1992，J．Immunol., 148 : 2899)。強いCTL 応答を示した研究した動物は、２年の観察期間の間のいずれの時においても検出可能な循環インターフェロンをもたなかった。正常のCD₄＋計数をもつが疾患の徴候をもたないSIV 感染アカゲザルの血清の中において、IFNαは検出されなかった。 HIV −１感染チンパンジーにおけるインターフェロンの応答の決定 HIV によるチンパンジーの感染はAIDS様疾患の発生に導かないが、これらの動物においてウイルスは複製することができる。HIV−１感染の数カ月の前から、H IV−１感染後20カ月まで、５頭のチンパンジーの群のインターフェロンの応答を追跡した（表10）。HIV−１感染の前または後のいずれの時においても、５頭の動物の血清の中にインターフェロンαは検出されなかった（表10）。研究した動物のいずれにおいても、CD₄＋Ｔリンパ球数の減少または臨床的疾患の他の徴候は観察されなかった。結論 HIV 感染アカゲザルの血清の中の循環インターフェロンの存在と、これらの動物における弱いCTL 応答またはその不存在、CD₄＋細胞の減少、および免疫不全疾患の臨床的徴候の発生との間に、密接な関係が観察された。従って、このシステムは人間において見られる状況に類似するように思われ、そしてインターフェロンアンタゴニストの潜在的効能をAIDS治療について試験するためのすぐれたモデルを表すように思われる。Ｖ）アカゲザルにおける抗インターフェロンαレセプターモノクローナル64G12 の毒物学および薬物速度論の研究毒性 in vitroで製造しそしてタンパク質Ｇセファローズのアフィニティークロマトグラフィーにより精製した64G12 抗体は、超遠心（100,000 ×ｇ）、およびミリポア(Millipore)膜(0.2μ)上の濾過後、無菌でありそして検出可能なエンドトキシンを含有しないことが発見された（リムルス試験）。正常の成体マウスにおいて、640μｇの64G12 抗体調製物の静脈内注射の直後、または注射後３カ月まで、毒性は検出されなかった。同様に、新生児マウスに同一抗体調製物をくも膜下に注射した。 64G12 抗体は、アカゲザルにおいて 0.5〜1.0 mg／kgの投与量における静脈内投与後、よく許容された。局在的反応は注射部位において観察されなかった。さらに、全身的反応、例えば、熱、浮腫などは抗体注射した動物のいずれにおいても観察されなかった。抗体の連続的注射もよく許容された。観察された唯一の反応は、15日における第３回の静脈内注射直後にある種の動物において見られた、わずかの顔面浮腫であった（前の注射は０、および５日であった）。抗体を筋肉内注射により投与したとき、第３および引き続く注射において、浮腫は観察されなかった。第０，５，10および15日の４回の前の静脈内注射後の日に64G12 抗体の非精製製剤を静脈内注射した後20分に、単一のサルにおいて事故（アナフィラキシーショック）が起こった。モノクローナル抗体64G12 の最低の有効投与量の薬物動態および確立ヒトインターフェロンαレセプターの細胞外ドメインを認識する抗体を捕捉する組み換え可溶性レセプターの使用に基づくELISA 試験により、静脈内注射後の動物の血清の中に存在する64G12 抗体のレベルを決定した（第１４図）。抗インターフェロンＩ型レセプター抗体を検出するELISA 簡単に述べると、COS またはCHO 細胞の中で産生されたヒトインターフェロン αレセプターの細胞外ドメイン（アミノ酸１−427）に相当する組換えタンパク質で、PBS または100mM の炭酸塩緩衝液pH9.2 の中の10〜20.0μｇ／mlの最大濃度において、ELISA プレートをコーティングした。次いで、プレートをPBS の中のウシ血清アルブミンまたは同様な物質の３％溶液で飽和させた。プレートを0. 5 〜1.0 ％のツイーン20または同様な洗浄剤を含有するPBS で洗浄し、次いで試験すべき試料または参照調製物の系統的希釈物をプレートに適用した。次いで、プレートを４℃において一夜または37℃において２時間インキュベートし、PBS/ ツイーンで洗浄し、そして37℃においてアルカリ性ホスファターゼまたはセイヨウワサビペルオキシダーゼと複合化したポリクローナル抗マウスIgG とほぼ２時間インキュベートした。ビオチン−ストレプトアビジン試験を使用することもできる（Amershamからのヒツジ抗マウスIgおよびストレプトアビジン−ビオチニル化ペルオキシダーゼ前調製複合体は適当である）。次いで、プレートをPBS/ツイーンで洗浄し、対応する基質とインキュベートし（クエン酸塩緩衝液pH5.5 の中の 0.4mg／mlの濃度のｏ−フェニレンジアミンはペルオキシダーゼに適当である；次いで、反応は通常１〜10分後に 0.5ＭのH₂SO₄の添加により停止させることができる）そして光学密度（ペルオキシダーゼ反応について405nm において）を標準手順に従い決定する。アカゲザルの血清の中の64G12 の濃度の決定のためにこのELISA の使用は、静脈内注射後のこの抗体の薬物速度論が他のマウスIgG1モノクローナル抗体について前述したものに類似することを示した（第１５図）。アカゲザルの末梢血細胞上のインターフェロンαレセプターの数およびアフィニティーの決定標準手順を使用する結合の研究（Mogensen，Uze et al.，1986，Methods Enzy mol. 119 : 267）は、正常の未処置アカゲザルの末梢血単核細胞への¹²⁵Ｉ標識化組換えヒト IFNα２の結合がヒト末梢血細胞を使用して観察されたものに類似することを示した（第16図）。スキャッチャード分析（第１７図）は、アカゲザル末梢血単核細胞がほぼ1500〜3500／細胞の２〜８×10¹⁰Ｍの範囲のkDをもつレセプターを示すことを明らかにした（第１８図）。1.0mg／kgの64G12抗インターフェロンレセプターの静脈内注射は、抗体の投与後30分に、ほぼ60μｇ／mlの血清レベルを生じ、これは動物の血液体積を考慮して期待したレベルとよく一致する。 0.5mg／kgの投与量における64G12 抗インターフェロンレセプター抗体によるアカゲザルの処置は、これらの動物の末梢血単核細胞への放射線標識化ヒトインターフェロンα２の結合を５日間まで完全に阻害することが発見された（第１９図）。処置した動物の末梢血細胞上のインターフェロンレセプターの約60〜70％は、放射線標識化 IFNα２の結合に対して第６日まで再びアクセス可能となった（第19図）。すべての引き続く試験において、0.5mg／kgの投与量を最小有効投与量として使用した。VI ）SIV 感染アカゲザルにおける疾患の初期段階への抗インターフェロンレセプター抗体64G12 の作用の決定８匹のアカゲザルの群をSIV 株251 の分子クローンの10アカゲザル感染投与量₅₀ で感染させた。２匹のアカゲザルに 0.5mg／kgの抗インターフェロンレセプター抗体64G12 を、SIV 感染の30分の前に、そして感染後５，10および15日に静脈内注射した。１匹のアカゲザルに 3.5mg／kgの雄ウシポリクローナル抗リンパ芽球インターフェロンIgG 調製物を、感染の30分の前に、そして感染後５日に静脈内注射し、そして 3.5mgの前記抗体を感染後10および15日に筋肉内注射した。他の５匹の感染動物を未処置のままに放置した。感染後14日に発生するピークレベルのｐ27抗原血における有意差は、未処置対照動物に関して処置動物のいずれにおいても観察されなかった（第20図）。感染後10日に発生するインターフェロンα産生のピークは、未処置対照SIV 感染動物において得られたピークに関して、ポリクローナル抗インターフェロン抗体で処置した動物において、かなり高かった（第２１図）。対照的に、抗インターフェロンレセプター抗体によるSIV 感染アカゲザルの処置は、これらの動物におけるインターフェロンの産生に対する有意な効果を与えなかった（第２１図）。また、64G12 抗体で処置した動物または未処置のSIV 感染対照動物におけるより、ポリクローナル抗インターフェロン抗体で処置した動物において、抗ｐ27抗体はより早くかつより大きい量で出現した（第２２図）。 SIV によるアカゲザルの感染に引き続いて、CD₄＋Ｔリンパ球の百分率の顕著な減少が感染後14〜15日に起こった。抗インターフェロンαレセプター抗体で処置した２匹の動物において、CD₄＋細胞の百分率は未処置対照動物と同様な方法において減少し、次いで急速に回復して、ポリクローナル抗インターフェロン抗体で処置した動物または未処置対照SIV 感染動物におけるより高いレベルを、両方の動物において、獲得することが発見された（第２３図）。抗インターフェロンαレセプター抗体で処置した動物におけるCD₄＋細胞の差はほぼ３週間持続した後、対照動物のそれと平行してゆっくり減少した。処置した動物のいずれにおいても、CD₈＋細胞のレベルへの有意な効果は、未処置対照動物において見られるレベルに関して観察されなかった。ポリクローナル抗インターフェロン抗体は、CD₄＋細胞またはCD₈＋細胞の数または百分率のいずれにも有意な効果をもたなかった。実施例６：アカゲザルにおける皮膚同種異系移植片の生存への抗インターフェロンαレセプター抗体の作用感作Ｔ細胞および非MHC 制限細胞の双方により生産されたサイトカインは、同種異系移植片の拒絶に導くプロセスにおいて重要な役割を演ずると考えられる。認識の初期の段階の間に生産されるインターフェロンαは、移植片の拒絶に導くプロセスの開始において決定的な役割を演ずることを多数の観察は示唆する。例えば、致死的に照射されたマウスをインターフェロンαで処置すると、また、同種異系骨髄移植片に対する耐性が増強されることが示されたが、インターフェロンαに対する抗体による処置は拒絶を抑制することが発見された(Affifi et al. ，J．Immunol．134 : 3739)。また、インターフェロンα／βに対する抗体によるラットの処置は、単独でまたはシクロスポリンＡと一緒に投与したとき、これらの動物における心臓同種異系移植片の生存を延長することが報告された(Gugen heim et al.，1992，Transplant．Int.５：460)。これらの結果は、インターフェロンαがMHC クラスＩ抗原およびNK−細胞の活性の主要なアクチベーターであり、それらの両者が同種異系移植片の拒絶において主要な役割を演ずるという事実と一致する。インターフェロンαは、また、移植片対宿主の疾患（GVHD）の発生において重要な役割を演ずることを多数の観察は示唆する。従って、インターフェロンαは、全身性GVHDの特徴を示すNK細胞の増強された活性と平行して、移植片対宿主の疾患間に生産され、そしてインターフェロンαの投与は正常のマウスにおいてGV HDの腸の結果を増強することが示された(Cleveland et al.，1987，Cell Immuno l．110 : 120)。Ｉ）混合リンパ球培養物の同種異系応答への抗インターフェロンαレセプター抗体の作用抗インターフェロンαレセプター抗体64G12 の潜在的免疫抑制活性を試験するために、混合リンパ球培養物(MLC)を変化する濃度の64G12 抗体、または非中和性対照34F10 抗体で処置した。双方の抗体は、ヒト末梢血単核細胞またはヒトリンパ芽球細胞系ダウディ(Daudi)の生活能力または増殖に対して、50μｇ／mlの濃度において96時間のインキュベーション後、作用をもたないことが以前に示された。正常のドナーからのヒト末梢血単核細胞をフィコール勾配で単離し、そして補体依存性ミクローリンパ球細胞障害性によりMHC クラスＩおよびクラスIIについて型別した。レスポンダー細胞の増殖は、ミトマイシン−Ｃで処置して非増殖性とした同種異系刺激細胞に応答する³HTdR の取り込みを測定することによって、決定した。混合リンパ球培養物を抗インターフェロンαレセプター抗体で処置すると、投与量依存的に、³HTdR の取り込みが阻害された（第24図）。³HTdR の取り込みのほぼ50％の平均阻害が、64G12 抗体で処置したMLC において20μｇ／ml の濃度において観察された（第24図）。しかしながら、³HTdR の取り込みの阻害の程度は１つのMLC から他のものついてかなり変化し（１系列の12MLC について 20〜82％、平均 50.58＋20.1％、第25図）ドナーまたはレセプターのリンパ球の MHC DR型に対する明瞭な関係は存在しなかった（表11）。50μｇ／mlまでの非中和性抗インターフェロンαレセプター抗体34F10 で処置した培養物において、³H TdR の取り込みの阻害は観察されなかった。 II）アカゲザルにおける皮膚同種異系移植片の生存への抗インターフェロンαレセプター抗体の作用 MHC クラスＩ（Rh LA−ＡおよびＢ）およびクラスII抗原(Th LA−DR)の双方において異なる、AOB 適合性の１〜３歳の雄の動物(Ma caoa Fascicularis)の間で、標準手順により、皮膚同種異系移植片を交換した。移植片を取りそして左の腸骨窩の中に移植した。動物は左において未処置であるか、または移植の１時間前におよび各々引き続く日にシクロスポリンＡ(5.0mg／ kg／日)で、または移植の１時間前におよび第５日および引き続いて第５日毎に6 4G12 抗体(5.0mg／kg／日)で（最初の２回の注射について静脈内注射により、次いで引き続いて筋肉内注射により）第85日までまたは移植片の拒絶まで処置したか、またはシクロスポリンＡおよび64G12 抗体で各物質単独で使用したときと同一投与量で処置した。移植片を拒絶の臨床的徴候（色、柔軟性など）について毎日検査し、そして移植組織を第５，10，20、および60日および拒絶の日に生検した。各生検材料は拒絶の組織学的徴候およびMHC クラスＩおよびクラスIIの抗原の発現について検査した。皮膚移植片の平均生存時間は、未処置対照動物において 7.5＋0.57日であり、そしてシクロスポリンＡ処置した動物において 9.5＋0.57日であることが発見された（表12）３。64G12 抗体で処置した動物は、未処置対照動物（Wilcox試験ｐ＜0.01）およびシクロスポリンＡで処置した動物の双方に関して、移植組織の平均生存時間を有意に増加した(14.25±0.95日)（表12）。抗インターフェロンαレセプター抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせで動物を処置すると、永久的移植片の受容が生じた（表12）。事実、移植片の拒絶は単一の動物のみにおいて第63日に観察されたが、この処置群において残る４匹の動物は完全に生活可能であり、そして第 235日において拒絶の徴候は存在しなかった（表12）。抗インターフェロンレセプター抗体を使用する処置は、無傷の皮膚−移植片を有する動物において第85日に停止した。しかしながら、すべての処置を停止した第 140日まで、これらの動物は低い投与量のシクロスポリンＡ(5.0mg／kg)で処置し続けた。この群における単一のサルは、64G12 抗体の未精製調製物の静脈内注射後、アナフィラキシーショックのために第20日に死亡した。この動物における皮膚移植片は、この時において、肉眼的または微視的な徴候または拒絶を示さなかった。抗インターフェロンレセプター抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせで処置した動物から、第60日に取った、生存する移植片の生検材料の組織学的検査は、表皮の下においてある種の毛管の回りに、稀な単核細胞のみを示した。85および 140日間抗インターフェロンレセプター抗体およびシクロスポリンＡで処置した動物から第１85日に取った皮膚生検材料は、それぞれ、正常の非移植皮膚と区別が困難である組織を明らかにした。介在性および／または毛管を通る単核細胞から本質的に成る中程度の炎症性浸潤が、試験した動物から取った生検材料の中に見られた。これは、未処置対照動物から取った生検材料の中に見られる非常に重症の病変（壊死性浮腫、多数の多核好中球をもつ顕著な炎症性浸潤）と対照的であった。シクロスポリンＡ単独で処置した動物から取った生検材料は、単核細胞および多少の多核好中球から本質的に成り、中程度の浮腫を伴う皮膚および皮下の炎症性浸潤を示した。皮膚同種異系移植片の生検材料を、また、MHC クラスＩ抗原(HLA−ABC)およびクラスII抗原(HLA−DR)の発現について検査した。未処置対照動物からの生検材料は、クラスＩおよびクラスIIの双方の抗原の顕著な発現を示した（表13）。シクロスポリンＡで処置した動物から取った生検材料におけるMHC クラスＩ抗原の発現は未処置対照動物のそれに類似したが、クラスII抗原の発現は強度が低く（表13）、これに対して抗インターフェロンレセプター抗体で処置した動物から取った生検材料において、MHC クラスＩ抗原の発現は減少したが、クラスII抗原の発現は対照動物に関して未変化に止まった（表13）。対照的に、64G12 抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせで処置した動物から取った生検材料において、MHC クラスＩおよびクラスIIの双方の抗原は未処置対照動物に関して顕著に減少した（表13）。抗インターフェロンレセプター抗体単独で、またはシクロスポリンＡと一緒に処置した動物において、リンパ球増加が観察された（表14）。このリンパ球増加は、未処置対照動物に関して、CD８＋Ｔリンパ球の百分率の増加に関連した。CD ４＋Ｔリンパ球の絶対数または百分率の差は、対照動物に関して、抗インターフェロンレセプター抗体で処置した動物において観察されなかった（表15）。赤血球または血小板細胞系において、差は観察されなかった。血液ナトリウムまたはカリウムクレアチンのレベルの差は、いずれの動物においても移植後に観察されなかった（表16）。シクロスポリンＡ（5.0mg／kg／日）と抗インターフェロンαレセプター抗体との組み合わせで処置したサルは、同一投与量のシクロスポリンＡ単独で処置した動物よりも有意に高いレベルの血清シクロスポリンＡを示した（表17）。マウス抗インターフェロンαレセプター抗体に対する検出可能なサル抗体(IgG )は、抗インターフェロンαレセプター抗体に対して特異的な感受性ELISA を使用して（第26図〜第28図）、0.5mg／kgの抗体で５日毎に（60日まで）単独またはシクロスポリンＡとの組み合わせにおいて処置した動物のいずれの血清の中にも検出されなかった（第２８図）。64G12 モノクローナル抗体の免疫不全の明らかな不存在は、この抗体で処置した動物において観察された非常に強い免疫抑制の結果であることがある。初期の皮膚移植の停止後６カ月そしてすべての処置の停止後２カ月に、それ以上の処置をしない同一ドナーからの第２皮膚移植片を動物に与えた。二次移植片は未処置対照群において 5.5±0.5 日にそして最初に抗インターフェロンαレセプター抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせで処置した動物において11.5±2.0 日に拒絶された（表18）。対照的に、最初に抗インターフェロン αレセプター抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせで処置した動物において一次移植片は無傷に止まったが、二次皮膚移植片はこれらの動物において拒絶された。これらの結果が示唆するように、移植された組織の内部または部位におけるインターフェロンαの局所的生産は、同種異系移植片の拒絶に導く初期のプロセスにおいて決定的な役割を演ずる。これらの結果が示すように、64G12 抗体によるアカゲザルの処置はこれらの動物における同種異系移植片の生存率を増加する。抗体単独で観察された効果の大きさは、今日まで記載された最も効力のある免疫抑制モノクローナル抗体の中に入ると考えることができる。従って、インターフェロンγまたはTFA に対するモノクローナル抗体は、サルにおける皮膚同種異系移植片の拒絶の防止において、 64G12 抗体より効果に劣るように思われる（Stevens et al.，1990，Transplant ation, 50 : 856）が、抗CD３抗体(Nooji et al.，1987，Eur．J．Immunol. 1 7 : 1089)は抗インターフェロンαレセプター抗体64G12 のそれに匹敵する効果を与える唯一の抗体である。抗インターフェロンαレセプター抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせによるアカゲザルの処置は、非MHC 合致動物において永久的同種異系移植片の受容を生じ、これは霊長類のモデルにおける他の免疫抑制剤の制限された効果と顕著に対照をなす。低い投与量のシクロスポリンＡと一緒に抗インターフェロンαレセプター抗体で処置した動物において観察された、非常に強い相乗的免疫抑制効果は、通常無効である投与量のシクロスポリンＡで有効な免疫抑制の達成を可能とし、従って高い投与量のシクロスポリンＡで長期間にわたって処置される患者において観察される重大な毒性を減少するであろう。さらに、抗インターフェロンαレセプター抗体の処置を停止した後、同種異系移植片の生存が維持されるという事実は、有効な免疫抑制を達成するために、制限された期間の64G12 抗体を使用する処置のみが必要であることを示唆する。同様なモードの作用が与えられると、64G12 抗体をFK506 と一緒に投与した場合、匹敵する免疫抑制効果が観察される可能性がある。これらの結果は、低い投与量のシクロスポリンＡと一緒に与えられる比較的低いレベルのインターフェロンアンタゴニストの投与により、選択的な長く続く免疫抑制を得ることができることを示し、ヒト同種異系移植片の拒絶の予防および治療のための重要な意味を有することがある。このような治療の養生法は、また、自己免疫疾患、特にインターフェロンαの異常な、または延長した産生により特徴づけられる疾患、の治療に適用可能である。 III）アカゲザルにおける移植片対宿主の疾患への抗インターフェロンαレセプター抗体の作用霊長類の放射性感受性、骨髄の組成、および骨髄の移植に対する免疫学的反応のパターンはヒトのそれらに密接に類似するので、霊長類は骨髄移植の臨床前の研究のためのほぼ最適なモデルを提供する。さらに、急性の移植片対宿主の疾患（GVHD）の変更は、無関係の非MHC 合致ドナーからの移植骨髄後にサルにおいて発生し、ヒトの状況を高度に予言することが証明された（van Bekkam，Transpla ntation Proceedings，10，105-111，1988）。若い成体の雄の動物(Macaca Fascicularis)を、照射の前に広いスペクトルの抗生物質で処置して腸を滅菌した。動物を全体投与量の８Gyで照射し、そして４時間後にMHC クラスＩ抗原(Rh LA −ＡおよびＢ)およびクラスII抗原(Th LA−DR)の双方において異なるランダムドナーからの４×10⁸／kgの同種異系骨髄細胞を移植した。動物を未処置で放置したか、または移植の30分前そして第５日そして引き続いて第５日毎に抗インターフェロンαレセプター抗体（最初の２回の静脈内注射そしてその後に筋肉内注射により）と移植の30分後にそしてその後毎日、低い投与量のシクロスポリンＡ（5.0mg／kg）とで処置した。生存する動物を、照射後最初の１カ月の間、隔離室に入れ、次いで解放した条件下に配置した。未処置の移植した動物は急性の形態のGVHDで９±1.0 日に死亡し、人間において見られるものに類似する皮膚の特徴的な組織学的病変を有した（表19）。抗インターフェロンαレセプター抗体ならびに低い投与量のシクロスポリンＡで今日まで処置した３匹の移植した動物のうちで、１匹の動物は第19日に細菌の感染から死亡し、GVHDの臨床的または組織学的徴候は存在しなかった。２匹の他の動物は移植後第93日に健康に止まった（表19）。低い投与量のシクロスポリンＡと一緒に与えられた抗インターフェロンαレセプター抗体はGVHDのための有効な治療であることを、これらの予備的結果は示唆する。霊長類において見られる急性形態のGVHDを緩和しかつこれらの動物の生存を延長することにおいて有効である薬物は非常にわずかである。事実、このモデルにおいて有益な効果は、MHC 合致ドナーからの骨髄を受け取る患者において見られる重症度の低いタイプのGVHDにおいて、対応してより大きい有益な効果を予言すると考えられる。培養物の各対について、補体依存性ミクロリンパ表毒性により、正常提供者からの末梢血単核細胞をMHC クラスＩ及びIIについてタイプ分けした。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 15/02 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＧＡ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトインターフェロンのクラスＩレセプター(IFN−Ｒ)に対して向けられたモノクローナル抗体の精製調製物を含んでなり、そして下記の性質： − ヒト IFN−Ｒの細胞外ドメインを認識する、および − ヒトＩ型IFN の生物学的性質に対する中和能力を有する、を有することを特徴とする、免疫調節因子として使用するための医薬組成物。２．モノクローナル抗体がＩ型 IFN−Ｒへのヒト病理的Ｉ型IFN の結合を阻害する能力を有することを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。３．前記モノクローナル抗体が可溶性の形態のヒト IFN−Ｒで前もって免疫化された動物からの脾細胞と骨髄腫細胞との融合により製造されたハイブリドーマ細胞から得ることができるものである、請求項１または２に記載の医薬組成物。４．前記モノクローナル抗体が可溶性の形態のヒト細胞の IFN−Ｒまたは組換え IFN−Ｒの上のエピトープを認識する、請求項１，２または３に記載の医薬組成物。５． 100μｇ／mlに等しいか、またはそれより低い、好ましくは50μｇ／mlに等しいか、またはそれより低い、有利には20μｇ／mlより低い、より好ましくはほぼ 0.5〜２μｇ／mlの範囲の濃度において、hu− IFN−Ｒを収容する細胞と共インキュベートしたとき、モノクローナル抗体がヒト細胞の IFN−ＲへのヒトＩ型IFN の結合をin vitroで阻害する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。６．モノクローナル抗体が、ヒトＩ型IFN に対して高度に応答性の細胞、例えば、ダウディ(Daudi)細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗増殖活性を１〜10μｇ／mlの範囲の濃度においてin vitroで中和する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。７．モノクローナル抗体が、ヒトＩ型IFN に対して低い応答性の細胞、例えば、Ly28細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗増殖活性を50〜100 μｇ／mlの範囲の濃度においてin vitroで中和する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。８．モノクローナル抗体がIFN ガンマのヒトレセプターに結合しない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。９．モノクローナル抗体がヒト IFN−Ｒのアミノ酸配列27〜427 の上のエピトープを認識する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。 10．モノクローナル抗体が、ヒトＩ型IFN に対して高度に応答性の細胞、例えば、ダウディ細胞、に対するこのヒトＩ型IFN の抗ウイルス活性を１〜10μｇ／ mlの範囲の濃度においてin vitroで中和する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。 11．モノクローナル抗体が、ヒトクラスＩのIFN に対して低い応答性の細胞、例えば、Ly28細胞、に対するこのヒトIFN の抗ウイルス活性を50〜100 μｇ／ml の範囲の濃度においてin vitroで中和する、請求項１〜10のいずれか一項に記載の医薬組成物。 12．免疫抑制因子として使用するための、請求項１〜11のいずれか一項に記載の医薬組成物。 13．免疫刺激因子として使用するための、請求項１〜11のいずれか一項に記載の医薬組成物。 14．モノクローナル抗体が、1992年２月26日にNo．92022605としてECACC に受託された、64G12 抗体である、請求項１〜13のいずれか一項に記載の医薬組成物。 15．モノクローナル抗体がヒト抗体であり、例えば、その重鎖および軽鎖の可変領域または相補性決定領域がヒト抗体のフレームワークまたは定常領域上にグラフトされていることを特徴とする、請求項１〜13のいずれか一項に記載の医薬組成物。 16．モノクローナル抗体がヒト抗体である、請求項１〜13のいずれか一項に記載の医薬組成物。 17．モノクローナル抗体の精製調製物を約0.05mg／kg体重〜約３mg／kgの間の投与量で使用することを特徴とする、請求項１〜16のいずれか一項に記載の医薬組成物。 18．静脈内投与に適当な医薬用ベヒクルを含んでなる、請求項１〜17のいずれか一項に記載の医薬組成物。 19．筋肉内投与に適当な医薬用ベヒクルを含んでなる、請求項１〜17のいずれか一項に記載の医薬組成物。 20．ヒトレトロウイルス、特にヒトHIV またはHTLVレトロウイルスの感染による疾患をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造のための、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の精製調製物の使用。 21．同種移植片の拒絶反応をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造のための、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の精製調製物の使用。 22．移植片対宿主病の症状をin vivo で抑制するために十分な免疫調節因子の作用を有する薬物の製造のための、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の精製調製物の使用。 23．活性成分として、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と、同時の、別々のまたは順次の使用のための組み合わされた調製物として、免疫調節活性、特に免疫抑制活性、を有する因子とを含んでなることを特徴とする、免疫抑制因子として使用するための医薬組成物。 24．免疫調節活性を有する因子がシクロスポリンＡまたはFK506であることを特徴とする、請求項23に記載の医薬組成物。 25．モノクローナル抗体が約0.05mg／kg〜３mg／kg、好ましくは 0.5mg／kg〜１mg／kgの範囲の投与量で存在し、そして免疫抑制活性を有する因子、特にシクロスポリンＡ、が少なくとも 0.1mg／kgの投与量で存在することを特徴とする、請求項19に記載の医薬組成物。 26．体液性免疫または細胞性免疫のためのアジュバントとしての、請求項１〜 16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の精製調製物の使用。 27．自己免疫疾患、特にＩ型IFN 、殊にαIFN 、の異常なまたは延長した産生により特徴づけられる疾患、の治療に適用可能な薬物の製造のための、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の精製調製物の使用。 28．殊に自己免疫疾患またはHIV 感染の場合における、生物学的試料、例えば、血液または他の生物学的流体についての、可溶性Ｉ型インターフェロンのin v itro検出のための、請求項１〜16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の調製物の使用。