JPH1143499A - New protein and its dna - Google Patents

New protein and its dna

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JPH1143499A
JPH1143499A JP9245340A JP24534097A JPH1143499A JP H1143499 A JPH1143499 A JP H1143499A JP 9245340 A JP9245340 A JP 9245340A JP 24534097 A JP24534097 A JP 24534097A JP H1143499 A JPH1143499 A JP H1143499A
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seq id
protein
amino acid
acid sequence
dna
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Haruo Onda
Kazuhiro Oogi
和宏 大儀
治夫 音田
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Takeda Chem Ind Ltd
武田薬品工業株式会社
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a new protein, comprising an ependyminlike protein, having a specific amino acid sequence and derived from a mammal, capable of manifesting physiological activities for the central nervous system, etc., and useful as a therapeutic agent, a preventing agent, etc., for Alzheimer disease, Parkinson disease, etc. SOLUTION: This new ependyminlike protein (salt) contains an amino acid sequence represented by formula I to III or substantially the same amino acid sequence as that and is derived from a mammal and is capable of manifesting physiological activities for the central nervous system, etc., such as nerve elongating actions, nerve regenerating actions, activating actions on a glial cell (neuroglial cell) and useful as a therapeutic agent or a preventing agent, etc., for Alzhermier disease, Parkinson disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, dementia, cerebellar degeneration, etc. The protein is obtained by screening a cDNA library prepared by using a poly(A)<+> RNA derived from a human placenta by hybridization with a labeled probe, integrating the resultant gene into a vector and expressing the gene in a host cell.

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞(神経膠細胞)活性化作用などの中枢神経系等に対する生理活性を示す新規タンパク質およびそれをコードするDNAに関する。 The present invention relates to the nerves extending activity and nerve regeneration action relates to a DNA for novel proteins and encoding it shows physiological activities against glial cells (glial cells) CNS like such as activating effect.

【0002】 [0002]

【従来の技術】脳における記憶の痕跡は、短期記憶の獲得と長期記憶の固定の2つのフェーズに分けることができる。 Traces of the Related Art storage in the brain can be divided into two phases fixed acquisition and long-term memory of short-term memory. 電気痙攣ショックや麻酔などは短期記憶を破壊することができるが、いったん確立された長期記憶には影響を及ぼさないことがわかっている。 Although such electro-convulsive shock or anesthesia can destroy short-term memory, it has been found to have no effect on the once established long-term memory. 一方、短期記憶とは対照的に、長期記憶の形成につながる生化学的反応および構造的変化は、例えばピューロマイシン、シクロヘキシミドのようなタンパク合成阻害剤によってブロックできることが知られている〔Flexner, JB etal. サイエンス(Science) 141, 57-59 (1963), Agranoff, B. On the other hand, in contrast to the short-term memory, biochemical reactions and structural changes lead to the formation of long-term memory, e.g. puromycin, are known to be blocked by protein synthesis inhibitors such as cycloheximide [Flexner, JB etal. Science (Science) 141, 57-59 (1963), Agranoff, B.
W. and Klinger,PD サイエンス(Science) 146, 95 W. and Klinger, PD Science (Science) 146, 95
2-953 (1964), Agranoff, BW et al.ブレイン・リサーチ(Brain Research) 1, 300-309 (1966)〕。 2-953 (1964), Agranoff, BW et al. Brain Research (Brain Research) 1, 300-309 (1966)]. そのため、20年以上前から、脳において長期記憶が形成される際に、新たなタンパク質の合成などのある特定のタンパク質の代謝が関連しているのではないかと考えられてきた。 Therefore, since more than 20 years, when the long-term memory is formed in the brain, the metabolism of a particular protein of such synthesis of new proteins has been considered that it would be associated. しかしながら、今日に至るまで新たな行動の獲得の後に代謝回転が増大するタンパク質はほんのわずかしか同定されていない〔Hyden, H and Lange, PWプロシージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. However, the protein has not been just a little identification turnover after the acquisition of a new behavior is increased until today [Hyden, H and Lange, PW professional sheathing scan of the National Academy of Saienshiizu of The USA (Proc.
Natl. Acad. Sci. USA) 65, 898-904 (1970), Shasho Natl. Acad. Sci. USA) 65, 898-904 (1970), Shasho
ua, VE サイエンス(Science) 193, 1264-1266 (197 ua, VE Science (Science) 193, 1264-1266 (197
6)〕。 6)].

【0003】そのうちの一つであるエペンディミン(ep [0003] is one of the Ependimin (ep
endymin)は、〔 3 H〕バリンと〔 14 C〕バリンの二重標識法を用いてゴールドフィッシュ(goldfish)の脳において学習の後に発現量が増大する2種類のタンパク質として報告され〔Shashoua, VE サイエンス(Science) Endymin) is reported as two proteins whose expression level is increased after the learning in the brain of [3 H] valine and [14 C] valine of double labeling method goldfish with (goldfish) [Shashoua, VE Science (Science)
193, 1264-1266 (1976)〕、初期の免疫組織学的な分布の研究〔Shashoua, VE ブレイン・リサーチ(Brain 193, 1264-1266 (1976)], the study of the initial immune histological distribution [Shashoua, VE Brain Research (Brain
Research) 122, 113-124 (1977), Benowitz, LI and Research) 122, 113-124 (1977), Benowitz, LI and
Shashoua, VE ブレイン・リサーチ(BrainResearc Shashoua, VE Brain Research (BrainResearc
h) 136, 227-242 (1977)〕でエペンディマル(ependyma h) 136, at 227-242 (1977)] Ependimaru (ependyma
l)ゾーン(脳室上皮、もしくは上衣)に多く分布することから、これらのタンパク質はそれぞれependymin l) the zone (ventricular epithelium or much from that distributed ependymal), these proteins are ependymin
β、ependymin γと名付けられた。 β, named ependymin γ. しかし、その後、これらのタンパク質は脳脊髄液中に分泌されている分泌タンパクであると考えられるようになり〔Shashoua, V. But then, these proteins become considered a secreted protein that is secreted into the cerebrospinal fluid [Shashoua, V.
E. ブレイン・リサーチ(Brain Research) 166, 349-35 E. Brain Research (Brain Research) 166, 349-35
8 (1979)、Shashoua, VE ニューロケミカル・リサーチ(Neurochem. Res.) 6, 1129-1147 (1981)〕、より詳細な免疫組織学的分布でもmesencephali 8 (1979), Shashoua, VE neuro Chemical Research (Neurochem. Res.) 6, 1129-1147 (1981)], also in a more detailed immunohistochemical distribution mesencephali
c structures(中脳域)と脳脊髄液中に高濃度のependyminが検出されている〔Schmidt, High concentrations of ependymin-c Structures and (midbrain region) into the cerebrospinal fluid have been detected [Schmidt,
R. and Lapp, H. Neurochem. Int. 10, 383-390 (198 R. and Lapp, H. Neurochem. Int. 10, 383-390 (198
7)〕。 7)]. Ependymin βとependymin γはそれぞれSDS- Ependymin β and ependymin γ each SDS-
PAGE上で35kDaと30kDaの分子量を与えることから、別々のタンパク質であると考えられたが、後に糖鎖含量の異なる、同一のアミノ酸配列を持つタンパク質であることが分かった〔Schmidt, R. and Shashou On the giving a molecular weight of 35kDa and 30kDa in PAGE, was considered to be a separate proteins, after different sugar content was found to be a protein having the same amino acid sequence [Schmidt, R. and Shashou
a, VE ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー(J. Neurochem.) 40, 652-660,(1983)〕。 a, VE Journal of Neuro-Chemistry (J. Neurochem.) 40, 652-660, (1983)]. また、これらのタンパク質は二量体を形成し、少なくとも5%の糖鎖を含んでいることが報告されている〔Shashoua, V. These proteins form dimers, it has been reported to contain at least 5% of the sugar chain [Shashoua, V.
E. Cell. Mol. Neurobiol. 5, 183-207 (1985)〕。 E. Cell. Mol. Neurobiol. 5, 183-207 (1985)].

【0004】このような発見の過程から、ependyminは学習や記憶のプロセスに関連していると考えられてきた。 [0004] from the process of such a discovery, ependymin has been considered to be related to the process of learning and memory. 例えば、抗ependymin抗体を脳室に注入しておくと記憶の統合がブロックされるほか〔Shashoua, VE プロシージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・ For example, in addition [Shashoua, VE professional sheathing vinegar of the National Academy of integration of memory and keep injecting the anti-ependymin antibody to the ventricles is blocked
オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Pro Of Saienshiizu-of-the-USA (Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA)74, 1743-1747 (1977)、Sha c. Natl. Acad. Sci. USA) 74, 1743-1747 (1977), Sha
shoua, VE and Moore,ME ブレイン・リサーチ(B shoua, VE and Moore, ME Brain Research (B
rain Research) 148, 441-449 (1978), Schmidt,R. (Ad rain Research) 148, 441-449 (1978), Schmidt, R. (Ad
v. Biosci.) 59, 213-222 (1986), Piront, ML and v. Biosci.) 59, 213-222 (1986), Piront, ML and
Schmidt, R. ブレイン・リサーチ(Brain Research) 44 Schmidt, R. Brain Research (Brain Research) 44
2, 53-62 (1988)〕、条件付け実験においてもependymin 2, 53-62 (1988)], even in conditioning experiments ependymin
の発現量とともに、その濃度が大きく影響を与えることが報告されている〔Schmidt, R. ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー(J. Neurochem.) 48, 1870-1878 With the amount of expression, its concentration has been reported to greatly influence [Schmidt, R. Journal of Neuro Chemistry (J. Neurochem.) 48, 1870-1878
(1987), Shashoua, VE and Hesse, GW ブレイン・リサーチ(Brain Research) 484, 333-339 (1989), S (1987), Shashoua, VE and Hesse, GW Brain Research (Brain Research) 484, 333-339 (1989), S
chmidt, R. et al. プログレス・イン・ブレイン・リサーチ(Progr. Brain Res.) 91, 7-12 (1992)〕。 chmidt, R. et al. Progress in Brain Research (Progr. Brain Res.) 91, 7-12 (1992)]. 近年、 recent years,
ependyminがゴールドフィッシュの視神経の再生に関与していることが発見され〔Thormodsson, FR et al. ependymin is found to be involved in the regeneration of the optic nerve of Gold Fish [Thormodsson, FR et al.
ソサイエティ・ニューロサイエンス・アブストラクト(S Society Neuroscience Abstracts (S
oc. Neurosci. Abstr.) 14, 805 (1988)〕、さらに、視神経の再生の際に合成されていることもわかり〔Schmid oc. Neurosci. Abstr.) 14, 805 (1988)], furthermore, also know that they are synthesized during optic nerve regeneration [Schmid
t, JT and Shashoua, VE ブレイン・リサーチ(B t, JT and Shashoua, VE Brain Research (B
rain Research) 446, 269-284 (1988), Thormodsson, rain Research) 446, 269-284 (1988), Thormodsson,
FRet al. エクスペリメンタル・ニューロロジー(Ex FRet al. Experimental-Neurology (Ex
p. Neurol.) 118, 275-283 (1992)〕、注目を集めることになった。 p. Neurol.) 118, 275-283 (1992)], was supposed to attract attention. もっとも最近の研究で、免疫電顕とin sit At the most recent study, immune electron microscopic and in sit
u ハイブリダイゼーションによって、ependyminsは内髄膜層(inner endomeningeal cell layer)の網状繊維芽細胞でmRNAが発現しタンパク質が合成され、ニューロンやグリア細胞では発現が見られないことが分かった。 By u hybridization, Ependymins is reticulated fibroblasts mRNA is expressed in protein synthesis Uchizuimakuso (inner endomeningeal cell layer), a neuronal or glial cells were found to show no expression. ところが、学習の後にはmRNAが存在しないニューロンやグリア細胞にタンパクが存在することから、これらの髄膜内に存在するタンパクの神経細胞やグリア細胞への取り込みが中枢神経系における可塑的適応に対して機能的に重要であるのではないかと考えられている〔Rother, S. et al. ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー(J. Neurochem.) 65, 1456-1464 (1995), Sch However, since the protein in neurons and glial cells there is no mRNA is after the learning is present, incorporation into these present in the meninges protein of neurons and glial cells to plastic adaptation in the central nervous system it is believed that functionally or not than is important Te [Rother, S. et al., journal of neuro-chemistry (J. Neurochem.) 65, 1456-1464 (1995), Sch
midt, R. et al. ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー(J. Neurochem.) 65, 1465-1471 (1995)〕。 midt, R. et al., Journal of Neuro-Chemistry (J. Neurochem.) 65, 1465-1471 (1995)].

【0005】しかしながら、これらの研究はすべてゴールドフィッシュなどの魚類を用いたものであり、ependy [0005] However, are those in which all of these studies was used for fish such as gold fish, ependy
minのcDNAもゴールドフィッシュをはじめ、ゼブラフィッシュ(zebrafish)、サケ、ニジマス、ニシン、 min of cDNA also started a gold fish, zebra fish (zebrafish), salmon, rainbow trout, herring,
コイなどの魚類のみでしかとられていない〔Koenigstor Not taken only only in fish such as carp [Koenigstor
fer, A. et al. ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー(J. Neurochem.)52, 310-312 (1989), Koenigstor fer, A. et al., Journal of Neuro-Chemistry (J. Neurochem.) 52, 310-312 (1989), Koenigstor
fer, A. ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J. Biol. Chem.) 264, 13689-13692 (1989), Ste fer, A. Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.) 264, 13689-13692 (1989), Ste
rrer, S. et al. ニューロサイエンス(Neuroscience) rrer, S. et al. Neuroscience (Neuroscience)
37, 277-284 (1990), Muller-Schmid, A. et al. ジーン(Gene) 118, 189-196 (1992), Muller-Schmid, A. e 37, 277-284 (1990), Muller-Schmid, A. et al. Gene (Gene) 118, 189-196 (1992), Muller-Schmid, A. e
t al. ジャーナル・オブ・モレキュラー・エボリューション(J.Molec. Evol.) 36, 578-585 (1993)〕。 t al., Journal of Molecular Evolution (J.Molec. Evol.) 36, 578-585 (1993)]. 哺乳類にもこのependyminに対応するタンパク質が存在することが予想され、ラットの海馬ニューロンにependymins様の免疫反応が存在するなどの〔Schmidt, R. et al. ブレイン・リサーチ(Brain Research) 386, 245-257 (19 It is expected that the protein also in mammals corresponds to this ependymin exists, such as the presence of ependymins-like immune response in rat hippocampal neurons [Schmidt, R. et al. Brain Research (Brain Research) 386, 245 -257 (19
86)〕免疫組織科学的手法を用いた多くの報告があるものの〔Fazei, MS et al. ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス(Eur. J. Neurosci.) Sup 86)] Although there are many reports using immunohistochemical scientific methods [Fazei, MS et al., European Journal of Neuroscience (Eur. J. Neurosci.) Sup
pl. 1, 90(1988), Shashoua VE et al. ブレイン・ pl. 1, 90 (1988), Shashoua VE et al. Brain
リサーチ(Brain Research) 522, 181-190 (1990), Sha Research (Brain Research) 522, 181-190 (1990), Sha
shoua VE etal. ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス・リサーチ(J. Neurosci. Res.)32, 239-244 (199 shoua VE etal., Journal of Neuroscience Research (J. Neurosci. Res.) 32, 239-244 (199
2)〕、実際にependyminに対応するタンパク質が哺乳動物に存在するのかどうか生化学的、分子生物学的に明らかにされないまま現在に至っている。 2)], has led actually biochemically whether a protein corresponding Do be present to a mammal ependymin-, currently without being in molecular biology clearly.

【0006】 [0006]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ependymin The object of the invention is to solve the present invention, ependymin
様タンパク質、その部分ペプチド、前駆体タンパク質またはそれらの塩、シグナルペプチド、該タンパク質等をコードするDNA、組換えベクター、形質転換体、該タンパク質等の製造法、該タンパク質等またはDNAを含有する医薬、該タンパク質等に対する抗体、該タンパク質等の機能を促進する化合物のスクリーニング方法/スクリーニング用キット、および該スクリーニングによって得られる化合物を提供する。 Like protein, its partial peptide, precursor protein or a salt thereof, DNA encoding a signal peptide, the protein or the like, a recombinant vector, transformant, production methods such as the protein, pharmaceutical containing the protein, etc. or DNA provides antibodies, screening methods / kit for screening compounds which promote the functions of such the protein, and the compounds obtained by the screening against the protein or the like.

【0007】 [0007]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヒト胎盤、ラット脳およびマウス脊髄由来cDNAライブラリーから、新規な塩基配列を有するcDNAをクローニングすることに成功し、それにコードされるタンパク質が中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、 Means for Solving the Problems The present inventors have found that human placenta, from rat brain and mouse spinal cord-derived cDNA library, succeeded in cloning a cDNA having a novel nucleotide sequence, protein that it is encoded nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as,
グリア細胞活性化作用などの生理活性を有するependymi ependymi having physiological activity such as glial cell activation effect
n様タンパク質であることを見いだした。 It was found to be an n-like protein. 本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに検討を重ねた結果、 The present inventors have made repeated further investigation based on these findings,
本発明を完成するに至った。 This has led to the completion of the present invention.

【0008】すなわち、本発明は、(1)哺乳動物由来のエペンディミン様タンパク質またはその塩、(2)配列番号:1、配列番号:2もしくは配列番号:3で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、(3)配列番号:1、配列番号:2もしくは配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列が、 Namely, the present invention provides (1) Ependimin like protein, or a salt derived from a mammal, (2) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence or substantially to those represented by 3 protein or its salt containing the same amino acid sequence, (3) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 3,
配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6または(および)配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を含有するアミノ酸配列である第(2)項記載のタンパク質、 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or (and) SEQ ID NO: 7 is the amino acid sequence containing the amino acid sequence represented by the (2) above, wherein the protein,
(4)配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3 (4) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3
で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列が、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3 In the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented is, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3
で表わされるアミノ酸配列と約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列である第(2)項記載のタンパク質、 Protein subsection (2), wherein the amino acid sequence with amino acid sequences about 95% or more homology represented in,
(5)神経伸長作用を有する第(2)項記載のタンパク質、(6)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、(7)配列番号:4〜 (5) protein subsection (2), further comprising a nerve-extending effect, (6) the (1) or second (2) a partial peptide, or a salt thereof of the protein according to claim, (7) SEQ ID NO: 4
配列番号:9のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列を有する第(6)項記載の部分ペプチド、 SEQ ID NO: partial peptide of the (6) above, wherein having the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO: 9,

【0009】(8)配列番号:10、配列番号:11、 [0009] (8) SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11,
配列番号:12もしくは配列番号:13で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を有する第(2)項記載のタンパク質の前駆体タンパク質またはその塩、(9)配列番号:14、配列番号:1 SEQ ID NO: 12 or SEQ ID NO: amino acid sequence or represented by 13 second (2) precursor protein or a salt thereof of the protein according to claim which carries them substantially the same amino acid sequence, (9) SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 1
5、配列番号:16もしくは配列番号:17で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドまたはその塩、(10) 5, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: signal peptide, or a salt thereof having an amino acid sequence or substantially the same amino acid sequence and those represented by 17, (10)
第(1)項または第(2)項記載のタンパク質をコードする塩基配列を有するDNAを含有するDNA、(1 DNA containing a DNA having a first (1) or second (2) a nucleotide sequence encoding a protein according to claim (1
1)配列番号:18、配列番号:19または配列番号: . 1) SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO:
20で表わされる塩基配列を有する第(10)項記載のDNA、(12)第(8)項記載の前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAを含有するDNA、 DNA of the (10) above, wherein having the base sequence represented by 20, (12) a DNA containing a DNA having a nucleotide sequence encoding the precursor protein of the (8) above, wherein,
(13)配列番号:27、配列番号:28、配列番号: (13) SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO:
29または配列番号:30で表わされる塩基配列を有する第(12)項記載のDNA、(14)第(9)項記載のシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDN 29 or SEQ ID NO: DNA of the (12) above, wherein having the base sequence represented by 30, DN having a nucleotide sequence encoding the signal peptide of the (9) above, wherein (14)
Aを含有するDNA、(15)配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33または配列番号:34で表わされる塩基配列を有する第(14)項記載のDNA、 DNA containing A, (15) SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 or SEQ ID NO: 34 first having the nucleotide sequence represented by (14) DNA according to claim,
(16)第(10)項記載のDNAを含有する組換えベクター、(17)第(16)項記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体、(18)第(17)項記載の形質転換体を培養し、第(1)項または第(2)項記載のタンパク質またはその塩を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする第(1)項または第(2) (16) A (10) a recombinant vector comprising the DNA according to claim, (17) a (16) A transformant which is transformed with the recombinant vector according to claim (18) of the first (17) above, wherein culturing the transformant, paragraph (1) or the (2) produce a protein or a salt thereof according to claim, allowed accumulation, first and collecting it (1) or second (2)
項記載のタンパク質またはその塩の製造方法、 Protein or method for producing a salt thereof to claim wherein,

【0010】(19)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる医薬、(20)アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である第(19)項記載の医薬、(21)第(10)項記載のD [0010] (19) the (1) or the (2) protein according to claim, the (6) above, wherein the partial peptide or pharmaceutical agent comprising a salt thereof, (20) Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the pharmaceutical of the (19) above, wherein a therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration, (21) D of the (10) above, wherein
NAを含有してなる医薬、(22)アルツハイマー病、 A pharmaceutical agent comprising the NA, (22) Alzheimer's disease,
パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である第(21)項記載の医薬、(23)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩に対する抗体、(24)第(1)項または第(2) Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the (21) is a therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration claim wherein the medicament (23) first (1) or subsection (2) protein according, first (6) partial peptide according to claim, the (8) above, wherein the precursor protein or antibodies against their salts, (24) the (1) or the (2)
項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴とする、第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方法、(25)機能が(i)中枢神経系における神経伸長作用またはグリア細胞活性化作用または(ii)脳における記憶形成作用である第(24)項記載のスクリーニング方法、(26)機能が神経伸長作用である第(24)項記載のスクリーニング方法、(27)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有することを特徴とする第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの Proteins claim wherein the (6), characterized by using the partial peptide or salt thereof according to claim, paragraph (1) or the (2) above, wherein the protein, the (6) above, wherein the partial peptide or method of screening a compound or its salt that promotes the function of their salts, the a storage formation action in (25) features (i) nerve decompression effect or glial cell activation action or in the central nervous system (ii) brain (24) the screening method according to claim, (26) a screening method of the (24) above, wherein function is nerve-extending activity, (27) the (1) or the (2) above, wherein the protein, the (6 ) the (1, characterized in that it contains a partial peptide or salt thereof according to claim) term or the (2) above, wherein the protein, the (6) according to claim partial peptide or their の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、(28)第(24)項記載のスクリーニング方法または第(27)項記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩、(29)第(24)項記載のスクリーニング方法または第(27)項記載のスクリーニング用キットを用いて得られる第(1)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩を含有してなる医薬、および(30)アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である第(29)項記載 Kit for screening a compound or its salt that promotes the functions, obtained using (28) the (24) The screening method according to claim or the (27) above, wherein screening kit of paragraph (1) or the (2) protein of claim, the (6) partial peptide or compound or its salt that promotes the function of their salts according to claim (29) first (24) the screening method or the (27) according to claim claim, wherein protein of the (1) above, wherein obtained using the screening kit of the (6) compounds promoting the function of the partial peptide or salt thereof according to claim or a pharmaceutically comprising a salt thereof, and (30 ) Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, a (29 a therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration) above, wherein の医薬を提供する。 To provide a pharmaceutical.

【0011】さらに、本発明は、(31)配列番号: [0011] In addition, the present invention is, (31) SEQ ID NO:
1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列が、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列に1または2個以上のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 3, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 1 in the amino acid sequence represented by 3 or 2 amino acid sequence more than five amino acids are deleted, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 amino acid sequence in which one or more amino acids in the amino acid sequence represented are added in, SEQ ID NO:
1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列である第(2)項記載のタンパク質、(32)配列番号:1で表わされるアミノ酸配列、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列のN末端にGlyが付加したアミノ酸配列、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列、または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列のN末端に配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端の7アミノ酸が付加したアミノ酸配列を有する第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence one or more amino acids in the amino acid sequence represented by is substituted with other amino acids at 3 or an amino acid sequence that is a combination thereof subsection (2) protein according, (32) SEQ ID NO: amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: amino acid sequence Gly is added to the N-terminus of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 amino acid sequence represented by or SEQ ID NO: 3 sequence to the N-terminus of the amino acid sequence represented by ID NO: 17 first (1) having an amino acid sequence 7 amino acids of C-terminal amino acid sequence has been added which is represented by term or the (2) above, wherein the protein,
(33)配列番号:14で表わされるアミノ酸配列、 (33) SEQ ID NO: 14 amino acid sequence represented by,
配列番号:15で表わされるアミノ酸配列、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列、配列番号:16 SEQ ID NO: 15 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16
で表わされるアミノ酸配列のC末端からGlyを除いたアミノ酸配列、配列番号:17で表わされるアミノ酸配列、または配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端から7アミノ酸を除いたアミノ酸配列を有する第(9)項記載のシグナルペプチド、(34)配列番号:18で表わされる塩基配列を有するDNA、配列番号:19で表わされる塩基配列を有するDNA、 Amino acid sequence except for Gly in the C-terminus of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 17, or SEQ ID NO: first with an amino acid sequence except for the 7 amino acids from the C-terminus of the amino acid sequence represented by 17 (9) a signal peptide according to claim, (34) SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence represented by 18, SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence represented by 19,
配列番号:19で表わされる塩基配列の5'末端にGG SEQ ID NO: 19 GG at the 5 'end of the nucleotide sequence represented by
Cが付加した塩基配列を有するDNA、配列番号:2 DNA having a nucleotide sequence C are added, SEQ ID NO: 2
0で表わされる塩基配列を有するDNA、または配列番号:20で表わされる塩基配列の5'末端に配列番号:34で表わされる塩基配列の3'末端の21塩基が付加した塩基配列を有するDNAである第(32)項記載のタンパク質をコードするDNA、(35)配列番号:31で表わされる塩基配列を有するDNA、配列番号:32で表わされる塩基配列を有するDNA、配列番号:33で表わされる塩基配列を有するDNA、 DNA having the nucleotide sequence represented by 0 or SEQ ID NO: 20 in 5 of the base sequence represented: a DNA having a nucleotide sequence which ends of the 21 bases added 'end in SEQ ID NO: 34 3 of the base sequence represented by' DNA encoding the protein of a first (32) above, wherein, (35) SEQ ID NO: represented by 33: DNA having the nucleotide sequence represented by 31, SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence represented by 32, SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence,
配列番号:33で表わされる塩基配列の3'末端からG SEQ ID NO: 33 G from the 3 'end of the nucleotide sequence represented by
GCを除いた塩基配列を有するDNA、配列番号:3 DNA having the nucleotide sequence, excluding GC, and SEQ ID NO: 3
4で表わされる塩基配列を有するDNA、または配列番号:34で表わされる塩基配列の3'末端から21塩基を除いた塩基配列を有するDNAである第(33)項記載のシグナルペプチドをコードするDNA、 DNA having the nucleotide sequence represented by 4 or SEQ ID NO: 34 is a DNA having the nucleotide sequence, excluding the 21 bases from the 3 'terminus of the nucleotide sequence represented by the (33) DNA encoding a signal peptide according to claim ,

【0012】(36)第(23)項記載の抗体と、第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6) [0012] (36) A (23) an antibody according to claim, paragraph (1) or the (2) protein according to claim, the (6)
項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩とを接触させることを特徴とする第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩の定量法、(39)第(2 Partial peptide of claim wherein the (8) first (1), characterized in contacting a precursor protein or a salt thereof according to claim claim or the (2) above, wherein the protein, the (6) above, wherein the partial peptide, the (8) precursor protein or determination of their salts according to claim (39) first (2
3)項記載の抗体と、被検液および標識化された第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6) 3) the antibody according to claim, the (1 a test fluid and labeled) term or the (2) above, wherein the protein, the (6)
項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩の割合を測定することを特徴とする被検液中の第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩の定量法、(38)被検液と担体上に不溶化した第(23)項記載の抗体および標識化された別の第(23)項記載の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第( Partial peptide of claim wherein the (8) and a precursor protein or a salt thereof according to claim competitively reacted, the (1) was labeled bound to the antibody section or subsection (2), wherein protein, the (6) partial peptide according to claim, the (8) first (1) of the test fluid, which comprises measuring the precursor protein or the rate of their salts according to claim claim or the (2 ) protein according to claim, the (6) above, wherein the partial peptide, the (8) precursor protein or determination of their salts according to claim, (38) the insolubilized on a test fluid and on the support (23) After simultaneously or is continuously reacting the antibody of another third (23) sections, wherein are antibodies and labeling of claim wherein the sample liquid and measuring the activity of the labeling agent on the insoluble carrier paragraph (1) or the (2) above, wherein the protein in the ( )項記載の部分ペプチド、第(8)項記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩の定量法、(39)(i)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を神経細胞または神経組織に接触させた場合と(ii)第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、 ) Partial peptide according to claim, the (8) precursor protein or determination of their salts according to claim, (39) (i) first (1) or second (2) above, wherein the protein, the (6) the partial peptide or their salts of claim wherein the case in contact with the nerve cells or nerve tissue (ii) first (1) or second (2) above, wherein the protein,
第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩および試験化合物を神経細胞または神経組織に接触させた場合における、第(1)項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を測定して、比較することを特徴とする、第(1) In the case of the first (6) partial peptide or a salt thereof and a test compound according to claim contacting the nerve cells or nerve tissue, paragraph (1) or the (2) above, wherein the protein, the (6) above, wherein partial peptide or by measuring the ability of those salts, and comparing the (1)
項または第(2)項記載のタンパク質、第(6)項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方法、 Terms or the (2) protein according to claim, method of screening a compound or its salt that promotes the function of the (6) partial peptide or salt thereof according to claim,

【0013】(40)配列番号:18、配列番号:1 [0013] (40) SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 1
9、配列番号:20で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するDNAを含有するDNA、(41)第(40)項記載のDNAを含有する組換えベクター、(42)第(4 9, SEQ ID NO: DNA containing the DNA having the nucleotide sequence and HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 20, (41) a recombinant vector containing the first (40) above, wherein the DNA, (42) Article (4
1)項記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、(43)第(42)項記載の形質転換体を培養し、 Transformants transformed with the recombinant vector 1) above, wherein the transformant of (43) first (42) above, wherein culturing,
第(40)項記載のDNAにコードされるタンパク質またはその塩を生成し、蓄積せしめることを特徴とする第(40)項記載のDNAにコードされるタンパク質またはその塩の製造法、(44)第(43)項記載の製造法で製造される、第(40)項記載のDNAにコードされるタンパク質またはその塩、(45)第(6)項記載の部分ペプチドをコードするDNAを含有するDNA、 The (40) to produce a protein or a salt thereof encoded by the DNA according to claim, first, characterized in that the allowed to accumulate (40) preparation of a protein or a salt thereof is DNA code according sections (44) is produced in the (43) the process according to claim, containing first (40) protein or a salt thereof encoded by the DNA according to claim, (45) DNA encoding the partial peptide of the (6) above, wherein DNA,
(46)配列番号:21〜配列番号:26のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列を有する第(45)項記載のDNA、(47)第(46)項記載のDNAを含有する組換えベクター、(48)第(47)項記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体、(49)第(48)項記載の形質転換体を培養し、ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする第(6)項記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、 (46) of SEQ ID NO: 21 to SEQ ID NO: 26 DNA of the (45) above, wherein having the base sequence represented by any of SEQ ID NO, (47) a recombinant containing the DNA of the (46) above, wherein vector, (48) a (47) claim transformant transformed with the recombinant vector according, (49) culturing a first (48) the transformant according to claim, generate peptide accumulation allowed, this collecting the (6) partial peptide or the preparation of a salt thereof according to claim, characterized in that,
(50)第(10)項または第(40)項記載のDNA (50) A (10) term or DNA of the (40) above, wherein
に相補的または実質的に相補的な塩基配列を有し、該D Have complementary or substantially complementary base sequence to, the D
NAの発現を促進し得る作用を有するオリゴヌクレオチドまたはその誘導体、(51)第(10)項または第(40)項記載のDNAに実質的に相補的な塩基配列が、該DNAに相補的な塩基配列の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約60%以上(好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上)の相同性を有する塩基配列である第(50)項記載のオリゴヌクレオチドまたはその誘導体、(52)第(50)項記載のオリゴヌクレオチドまたはその誘導体を含有してなる医薬、および(53)アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤の治療・予防剤である第(51)項記載の医薬を提 Oligonucleotides or their derivatives having an action capable of promoting the NA expression, (51) a (10) term or the (40) DNA substantially complementary to the nucleotide sequence according to claim is, complementary to the DNA nucleotide sequence entire nucleotide sequence or partial nucleotide sequence of about 60% or more (preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, especially preferably about 90% or more, most preferably about 95% or more) homology oligonucleotides or their derivatives of the (50) above, wherein a nucleotide sequence having, (52) a (50) a pharmaceutical comprising an oligonucleotide or a derivative thereof according to claim, and (53) Alzheimer's disease, Parkinson's disease , Hisage Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the pharmaceutical of the (51) above, wherein a therapeutic or prophylactic agent for therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration する。 To.

【0014】本発明のタンパク質としては、配列番号: [0014] Examples of the protein of the present invention, SEQ ID NO:
1で表わされるアミノ酸配列(配列番号:11または図1で表わされるアミノ酸配列の第38番目〜224番目のアミノ酸配列)、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列(配列番号:12または図2の第35番目〜224 Amino acid sequence represented by (SEQ ID NO: 11 or the 38 th to 224 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented in Figure 1), SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 2 (SEQ ID NO: 12 or FIG. 2 No. to 224 35 th
番目のアミノ酸配列)もしくは配列番号:3で表わされるアミノ酸配列(配列番号:13または図3の第38番目〜224番目のアミノ酸配列)またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質が挙げられる。 Th amino acid sequence of) or SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 3 (SEQ ID NO: 13 or the 38 th to 224 th amino acid sequence of Figure 3) or the protein comprising substantially the same amino acid sequence and the like . 本発明のタンパク質は、例えば、哺乳動物(例えば、ヒト、モルモット、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど)のあらゆる細胞(例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞(例、マクロファージ、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球)、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など)、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位(例、嗅球、扁桃核、大脳基底核、海馬、 Proteins of the present invention, for example, mammals (e.g., human, guinea pig, rat, mouse, rabbit, pig, sheep, cow, monkey, etc.) all cells (e.g., spleen cells, nerve cells, glia cells, pancreatic β cell , bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fibrocytes, myocytes, adipocytes, immune cells (e.g., macrophages, T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, osteocytes, osteoblasts, osteoclasts, mammary gland cells, hepatocytes or interstitial cells, or, progenitor cells of these cells, stem cells or cancer cells, etc.), or any tissues where such cells are present, for example, brain, various parts of the brain (e.g., olfactory bulb, amygdala, basal ganglia, hippocampus, 床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳)、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、 Floor, hypothalamus, cerebral cortex, medulla oblongata, cerebellum), spinal cord, pituitary, stomach, pancreas, kidney,
肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管(例、大腸、小腸)、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など(特に、脳や脳の各部位)に由来するタンパク質であってもよく、また、例えば、ゴールドフィッシュ、ゼブラフィッシュ、サケ、ニジマス、ニシン、コイなどの魚類などに由来するタンパク質であってもよく、さらには合成タンパク質であってもよい。 Liver, gonad, thyroid, gall bladder, bone marrow, adrenal, skin, muscle, lungs, digestive tract (e.g., colon, small intestine), blood vessel, heart, thymus, spleen, submandibular gland, peripheral blood, prostate, testis, ovary, placenta , uterus, bone, joints, etc. skeletal muscle (in particular, each site of brain and brain) may be a protein derived from, also, for example, gold fish, zebra fish, salmon, trout, herring, fish such as carp it may be a protein derived from such, or may be a synthetic protein.

【0015】配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、例えば、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と約40% [0015] SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: The amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 3, e.g., SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 amino acid sequence about 40% represented
以上、好ましくは約60%以上、より好ましくは約70 Or more, preferably about 60% or more, more preferably about 70
%以上、さらに好ましくは約80%以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。 % Or more, more preferably about 80% or more, especially preferably about 90% or more, and most preferably an amino acid sequence having about 95% homology. 本発明の配列番号: SEQ ID NO: of the present invention:
1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記した配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号:1、 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: The amino acid sequence of the protein comprising substantially the same amino acid sequence represented by 3, for example, the above-mentioned SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 having an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented SEQ ID NO: 1,
配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。 SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: like protein preferably has a protein activity substantially equivalent to the amino acid sequence represented by 3. 実質的に同質の活性としては、例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などが挙げられる。 Examples of the substantially equivalent activity, e.g., nerves extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, and the like stored form action in the brain. 実質的に同質とは、それらの活性が性質的に(例、生理化学的に、または薬理学的に)同質であることを示す。 The term substantially equivalent is used to mean that these activities nature to (in Example physiochemical, or pharmacologically) is homogeneous. したがって、神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用などの活性が同等(例、約0.01〜100倍、好ましくは約0.5〜 Therefore, nerves extending activity and nerve regeneration action, activity equivalent (eg, such as glial cell activation action, about 0.01 to 100 times, preferably from about 0.5
20倍、より好ましくは約0.5〜2倍)であることが好ましいが、これらの活性の程度や、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 20-fold, it is preferable and more preferably about 0.5 to 2-fold), and extent of these activities but quantitative factors such as molecular weight of the protein may be different. これらの活性は自体公知あるいはそれに準じる方法にしたがって測定することができる。 These activities can be measured according to known methods or their modifications.

【0016】また、本発明のタンパク質としては、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を少なくとも1つ有するタンパク質であって、前記した配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性(例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用など)を有するタンパク質なども好ましい。 [0016] As the protein of the present invention, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7 at least one having a protein the amino acid sequence represented by by SEQ ID NO described above : 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: protein activity substantially equivalent to that comprising the amino acid sequence represented by 3 (e.g., nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, such as proteins having a forming memories action) in the brain is also preferred. なお、配列番号: In addition, SEQ ID NO:
4、配列番号:5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列は、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列および配列番号:3で表わされるアミノ酸配列に共通する部分アミノ酸配列を示す〔図4〕。 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 2 and SEQ ID NO: represented by 3 shows the partial amino acid sequence common to the amino acid sequence [Figure 4]. さらに、本発明のタンパク質としては、配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を少なくとも1つ有するタンパク質であって、前記した配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性(例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用など)を有するタンパク質なども好ましい。 Furthermore, the protein of the present invention, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: the amino acid sequence represented by 7 and at least one with proteins, the sequences ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 and a protein containing the amino acid sequence represented by substantially the same activity (e.g., nerves extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, storage in the brain such as proteins having a forming action, etc.) are also preferred. なお、配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9 In addition, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9
または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列は、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列および配列番号:2 Or SEQ ID NO: 7 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: amino acid sequence and SEQ ID NO: represented by 1: 2
で表わされるアミノ酸配列に共通する部分アミノ酸配列を示す〔図5〕。 Shows a common partial amino acid sequence to the amino acid sequence represented in [5].

【0017】さらに、本発明のタンパク質としては、 [0017] In addition, as a protein of the present invention,
配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by 3 (e.g., 1
〜20個程度、好ましくは1〜9個程度、さらに好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列に1または2個以上(例えば、1〜20個程度、好ましくは1〜9個程度、 About 20, preferably about 1 to 9, more preferably several (e.g., 1-5) amino acids are deleted in), SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 in one or two or more amino acid sequence represented (e.g., about 1 to 20, preferably about 1 to 9,
さらに好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号:1、配列番号:2 More preferably several (e.g., 1-5) amino acids are added in), SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2
または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1〜20個程度、好ましくは1 Or SEQ ID NO: 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by 3 (e.g., 1 to 20 or so, preferably 1
〜9個程度、さらに好ましくは数個(例、1〜5個)) To 9 or so, more preferably several (e.g., 1-5))
のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、 The amino acid sequence of the amino acids are substituted with other amino acids,
またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質なども用いられる。 Or such a protein containing the amino acid sequence comprising a combination thereof may be used. 上記のように配列番号: SEQ ID NO: as described above:
1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列が欠失、付加または置換されている場合、その欠失、付加または置換の位置としては、特に限定されないが、例えば、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列および配列番号:3で表わされるアミノ酸配列に共通する部分アミノ酸配列以外の位置などが挙げられる。 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: Amino acid sequence deletions represented by 3, if the addition or substitution, examples of the deletion, addition or the position of substitution is not particularly limited, for example, SEQ ID NO: amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in amino acid sequence and SEQ ID NO represented: like a position other than the partial amino acid sequence common to the amino acid sequence represented by 3. 具体的には、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列の中で、配列番号:4、配列番号: Specifically, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: Among the amino acid sequence represented by 3 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:
5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列以外の位置が好ましい。 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: Preferably a position other than the amino acid sequence represented by 7. また、配列番号:1または配列番号:2で表わされるアミノ酸配列が欠失、付加または置換されている場合、その欠失、付加または置換の位置としては、特に限定されないが、例えば、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列および配列番号:2 Also, SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: If the amino acid sequence represented by deletions, are added or substituted, its deletion, as the position of the addition or substitution is not particularly limited, for example, SEQ ID NO: the amino acid sequence and SEQ ID NO: represented by 1: 2
で表わされるアミノ酸配列に共通する部分アミノ酸配列以外の位置などが挙げられる。 Such as in expressed positions other than the partial amino acid sequence common to the amino acid sequences and the like. 具体的には、配列番号: Specifically, SEQ ID NO:
1または配列番号:2で表わされるアミノ酸配列の中で、配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列以外の位置が好ましい。 1 or SEQ ID NO: in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: Preferably a position other than the amino acid sequence represented by 7. 上記したタンパク質の中でも、哺乳動物由来であり、ependymin様活性(例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用など)を有するタンパク質が好ましい。 Among the proteins described above, it is derived from a mammal, ependymin-like activity (e.g., nerves extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, such as the storage form action in the brain) proteins with are preferred.

【0018】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド標記の慣例に従って左端がN末端(アミノ末端)、右端がC末端(カルボキシル末端)である。 The protein in this specification, the N-terminus in accordance with the conventional way of describing peptides (amino terminus) and the right end is the C-terminus (carboxyl terminus). 配列番号:1で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめとする、本発明のタンパク質は、C末端が通常カルボキシル基(−COOH)またはカルボキシレート(−CO SEQ ID NO: 1, including the protein containing the amino acid sequence represented by the protein of the present invention, C-terminal, usually a carboxyl group (-COOH) or carboxylate (-CO
- )であるが、C末端がアミド(−CONH 2 )またはエステル(−COOR)であってもよい。 O -) a but, C-terminal, it may be an amide (-CONH 2) or ester (-COOR). ここでエステルにおけるRとしては、例えば、メチル、エチル、n− Here, as R in the ester, e.g., methyl, ethyl, n-
プロピル、イソプロピルもしくはn−ブチルなどのC Propyl, C, such as isopropyl or n- butyl
1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのC 3-8シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのC 6-12アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−C 1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−C -6 alkyl group, such as cyclopentyl, C 3-8 cycloalkyl groups such as cyclohexyl, for example, phenyl, C 6-12 aryl group such as α- naphthyl, for example, benzyl, phenyl, such as phenethyl -C 1-2 α- naphthyl -C such as an alkyl group or an α- naphthylmethyl
1-2アルキル基などのC 7-14アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。 1-2 other C 7-14 aralkyl group such as an alkyl group, pivaloyloxymethyl group which is generally used as an oral ester. 本発明のタンパク質がC末端以外にカルボキシル基(またはカルボキシレート)を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のタンパク質に含まれる。 When the protein of the present invention has a carboxyl group (or carboxylate) at a position other than the C-terminus, it is also included in the proteins of the present invention the carboxyl group is amidated or esterified. この場合のエステルとしては、例えば上記したC末端のエステルなどが用いられる。 The ester in this case, for example, the C-terminal esters described above are used. また、本発明のタンパク質には、 Furthermore, the protein of the present invention,
上記したタンパク質において、N末端のアミノ酸残基(例、メチオニン残基)のアミノ基が保護基(例えば、 In proteins the amino acid residues (eg, methionine residue) of the N-terminal amino group protecting group (e.g.,
ホルミル基、アセチル基などのC 1-6アルカノイルなどのC 1-6アシル基など)で保護されているもの、N端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基(例えば、−OH、−SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など)が適当な保護基(例えば、ホルミル基、アセチル基などのC 1-6アルカノイルなどのC 1-6アシル基など)で保護されているもの、分子内のアミノ酸の側鎖上のカルボキシル基がアミド(−CONH 2 )化またはエステル(−COOR)化されたもの、および/または糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。 Formyl group, those protected by C 1-6 acyl group such as C 1-6 alkanoyl such as acetyl group), which glutamyl group N-terminal region is cleaved in vivo to form pyroglutamylated intramolecular substituent on the side chain of the amino acids (e.g., -OH, -SH, amino group, imidazole group, indole group, guanidino group, etc.) C 1-6, such as a suitable protecting group (e.g., formyl group, acetyl group those protected by a C 1-6 acyl group such as an alkanoyl), those carboxyl groups on the side chain of an intramolecular amino acid amide (as -CONH 2) on or ester (-COOR), and / or sugar chains are also conjugated proteins such as glycoproteins bound.

【0019】本発明のタンパク質の具体例としては、例えば、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列(図1 [0019] Specific examples of the protein of the present invention, for example, SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 1 (Fig. 1
の第38番目〜224番目のアミノ酸配列)を有するヒト由来(より具体的には、ヒト胎盤由来)のタンパク質、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列(図2の第35番目〜224番目のアミノ酸配列)を有するラット由来(より具体的には、ラット脳由来)のタンパク質、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列のN末端にGlyが付加したアミノ酸配列(図2の第34番目〜 Of the 38 th to 224 th amino acid sequences) derived from humans with (more specifically, proteins from human placenta), SEQ ID NO: 2 amino acid sequence represented by (35th to 224 th amino acids of Figure 2 the rat (more specifically having the sequence), the protein of the rat brain-derived), SEQ ID NO: 2 amino acid sequence is Gly to the N-terminal amino acid sequences were added represented by (34th of FIG. 2 to
224番目のアミノ酸配列)を有するラット由来(より具体的には、ラット脳由来)のタンパク質、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列(図3の第38番目〜 224 amino acid sequence) derived from rats with (more specifically, the protein of rat brain-derived), SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 3 (38th of FIG. 3 to
第224番目のアミノ酸配列)を有するマウス由来(より具体的には、マウス脊髄由来)のタンパク質、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列のN末端に配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端の7アミノ酸が付加したアミノ酸配列(図3の第31番目〜第22 The mice (more specifically with the 224 amino acid sequence), the protein of the mouse from the spinal cord), SEQ ID NO: sequence at the N-terminus of the amino acid sequence represented by 3 Number: C-terminal of the amino acid sequence represented by 17 7 amino acids are added in (31 th to 22 in FIG. 3
4番目のアミノ酸配列)を有するマウス由来(より具体的には、マウス脊髄由来)のタンパク質などが用いられる。 The mice (more specifically having a 4 amino acid sequence), such as proteins of a mouse from the spinal cord) is used.

【0020】本発明のタンパク質の部分ペプチドとしては、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、本発明のタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも10個以上、好ましくは50個以上、より好ましくは100個以上のアミノ酸配列を有するペプチドであって、好ましくは、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの活性を有するペプチドなどが用いられる。 [0020] As the partial peptide of the protein of the present invention may be any one as long as the partial peptide of the protein of the present invention described above, but for example, at least 10 of the constituent amino acid sequence of the protein of the present invention or more, preferably 50 or more, a peptide having more preferably 100 or more amino acid sequences, preferably, nerves extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, memory formation in the brain such as a peptide having the activity of such effects is used. 具体的には、配列番号:4で表わされるアミノ酸配列(図4、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第41番目〜第53番目のアミノ酸配列)、配列番号:5で表わされるアミノ酸配列(図4、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第68番目〜第9 Specifically, SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 4 (FIG. 4, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 13 41 th to the 53 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO) , SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 5 (Figure 4, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 68 amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO: 13 to 9
9番目のアミノ酸配列)、配列番号:6で表わされるアミノ酸配列(図4、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第12 9 amino acid sequence), SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 6 (Fig. 4, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 13 12 amino acid sequence represented by any of SEQ ID
2番目〜第146番目のアミノ酸配列)、または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列(図4、配列番号:1 2 th to 146 th amino acid sequence), or SEQ ID NO: 7 amino acid sequence represented by (FIG. 4, SEQ ID NO: 1
1〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第195番目〜第211番目のアミノ酸配列)を有する部分ペプチドなどが用いられる。 1 through SEQ ID NO: such as 13 amino acid sequence represented by any of SEQ ID 195th ~ # 211 amino acid sequence) a partial peptide having are used.

【0021】また、配列番号:4で表わされるアミノ酸配列(図5、配列番号:11または配列番号:12で表わされるアミノ酸配列の第41番目〜第53番目のアミノ酸配列)、配列番号:8で表わされるアミノ酸配列(図5、配列番号:11または配列番号:12で表わされるアミノ酸配列の第68番目〜第106番目のアミノ酸配列)、配列番号:9で表わされるアミノ酸配列(図5、配列番号:11または配列番号:12で表わされるアミノ酸配列の第121番目〜第146番目のアミノ酸配列)、または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列(図5、配列番号:11または配列番号:12で表わされるアミノ酸配列の第195番目〜第211番目のアミノ酸配列)を有する部分ペプチドなどが用いられる。 Further, SEQ ID NO: 4 amino acid sequence represented by (FIG. 5, SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12 41 th to the 53 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by) SEQ ID NO: 8 amino acid sequence represented (Figure 5, SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12 68 th to the 106 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by) SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 9 (Fig. 5, SEQ ID NO: : 11 or SEQ ID NO: 12 # 121 th to 146 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by), or SEQ ID NO: 7 amino acid sequence represented by (FIG. 5, SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: represented by 12 such as 195th ~ # 211 amino acid sequence) a partial peptide having an amino acid sequence that is used. さらには、図5、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第41番目〜第106番目のアミノ酸配列、第121番目〜第17 Furthermore, FIG. 5, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 41 th to the 106 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 13 any sequence number, the 121 th to the 17
9番目のアミノ酸配列または第187番目〜第211番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドなども好ましい。 Such partial peptide having 9 amino acid sequence or the 187 th to the 211 th amino acid sequences are also preferred.

【0022】また、本発明の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1〜10個程度、好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が欠失し、または(および)、そのアミノ酸配列に1または2個以上(例えば、1〜10個程度、好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が付加し、または(および)、そのアミノ酸配列の1または2個以上(例えば、 [0022] In the partial peptide of the present invention, one or two or more of the amino acid sequence (e.g., about 1 to about 10, preferably a few (eg, 1-5)) deleted amino acids are deleted of , or (and), one or two or more amino acid sequence (e.g., about 1 to about 10, preferably several are (eg, 1-5)) was added amino acids, or (and) the amino acid 1 or 2 or more sequences (e.g.,
1〜10個程度、好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。 About 1 to about 10, preferably a few (eg, 1-5) amino acids) may be replaced with other amino acids. また、本発明の部分ペプチドはC末端が通常カルボキシル基(−COOH)またはカルボキシレート(−COO - In the partial peptide of the present invention is the C-terminal is normally a carboxyl group (-COOH) or carboxylate (-COO -)
であるが、前記した本発明のタンパク質のごとく、C末端がアミド(−CONH 2 )またはエステル(−COO Although, as in the protein of the present invention described above, C-terminal, the amide (-CONH 2) or ester (-COO
R)であってもよい。 It may be a R). さらに、本発明の部分ペプチドには、前記した本発明のタンパク質と同様に、N末端のアミノ酸残基(例、メチオニン残基)のアミノ基が保護基で保護されているもの、N端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、、分子内のアミノ酸の側鎖上のカルボキシル基がアミド(−CONH 2 )化またはエステル(−C Furthermore, the partial peptide of the present invention, as well as the protein of the present invention described above, which the amino acid residue (eg, methionine residue) of the N-terminal amino group of which is protected by a protecting group, N end live those glutamyl group produced by cleavage in vivo is pyroglutamylated, amino acid carboxyl group on the side chain of the ,, molecule as a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule is protected with a suitable protecting group There amide (-CONH 2) on or ester (-C
OOR)化されたもの、および/または糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。 OOR) those of, is and / or sugar also includes conjugated peptides such as glycopeptides bound. 本発明の部分ペプチドは抗体作成のための抗原として用いることができるので、必ずしも中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの活性を有する必要はない。 Since the partial peptide of the present invention can be used as an antigen for producing antibodies, necessarily have nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, the activity of forming memories action in the brain no.

【0023】本発明のタンパク質は前駆体タンパク質であってもよい。 [0023] Proteins of the present invention may be a precursor protein. 本発明の前駆体タンパク質は、例えば、 Precursor protein of the present invention, for example,
前記した本発明のタンパク質のN末端または(および) N-terminus of the protein of the present invention described above or (and)
C末端に1個または2個以上、好ましくは1〜200個程度、より好ましくは1〜100個程度のアミノ酸が結合したタンパク質である。 One or two or more C-terminal, preferably about 1 to 200, more preferably proteins bound is 1 to 100 or so amino acids. 具体的には、本発明の前駆体タンパク質としては、配列番号:10で表わされるアミノ酸配列(図1の第25番目〜224番目のアミノ酸配列)、配列番号:11で表わされるアミノ酸配列(図1 Specific examples of the precursor protein of the present invention, SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 10 (25th to 224 th amino acid sequence of Figure 1), SEQ ID NO: 11 amino acid sequence represented by (FIG. 1
の第1番目〜224番目のアミノ酸配列)、配列番号: 1st to 224 th amino acid sequence of a), SEQ ID NO:
12で表わされるアミノ酸配列(図2の第1番目〜22 Amino acid sequence represented by 12 (1st and 22 in FIG. 2
4番目のアミノ酸配列)もしくは配列番号:13で表わされるアミノ酸配列(図3の第1番目〜224番目のアミノ酸配列)と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質などが用いられる。 4 th amino acid sequence of) or SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 13 (such as a protein containing the first to 224 th amino acid sequence of) the same or substantially the same amino acid sequence of Figure 3 is used. 本発明の前駆体タンパク質は、例えば、上記した哺乳動物の細胞またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織などに由来するタンパク質であってもよく、また、例えば、ゴールドフィッシュ、ゼブラフィッシュ、サケ、ニジマス、ニシン、コイなどの魚類などに由来するタンパク質であってもよく、さらには合成タンパク質であってもよい。 Precursor protein of the present invention may be, for example, a protein such as from any tissue in which the mammalian cells or their cells are present, also, for example, gold fish, zebra fish, salmon, rainbow trout, herring may be a protein derived from such fish such as carp, or even synthetic proteins. 配列番号:10と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:10で表わされるアミノ酸配列と約4 SEQ ID NO: 10 and a substantially identical amino acid sequence, e.g., SEQ ID NO: amino acid sequence of about 4 represented by 10
0%以上、好ましくは約60%以上、より好ましくは7 0% or more, preferably about 60% or more, more preferably 7
0%以上、さらに好ましくは約80%以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 80% or more, especially preferably about 90% homology and most preferably at amino acid sequence is used with about 95% homology. 本発明の配列番号:10と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質としては、前記した配列番号:1 SEQ ID NO: of the present invention: 10 and a substantially precursor protein containing the same amino acid sequence, wherein the sequences ID NO: 1
0と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質であれば何れのものを用いてもよい。 0 and having substantially the same amino acid sequence, may be used as any as long as a protein which protein capable of producing the present invention described above. したがって、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 Therefore, quantitative factors such as molecular weight of the protein may be different.

【0024】配列番号:11と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:11で表わされるアミノ酸配列と約40%以上、好ましくは約60%以上、 [0024] SEQ ID NO: 11 as substantially the same amino acid sequence and, for example, SEQ ID NO: 11 amino acid sequence and about 40% or more, preferably about 60% or more,
より好ましくは70%以上、さらに好ましくは約80% More preferably 70% or more, more preferably about 80%
以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられる。 Above, especially preferably about 90% or more, such as most preferably amino acid sequences having about 95% homology are used. 本発明の配列番号:11と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質としては、前記した配列番号:11と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質であれば何れのものを用いてもよい。 SEQ ID NO: of the present invention: Examples 11 and substantially precursor protein containing the same amino acid sequence, wherein the sequences ID NO: 11 and having substantially the same amino acid sequence, produce the protein of the present invention described above it may be used any ones as long as protein capable. したがって、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 Therefore, quantitative factors such as molecular weight of the protein may be different. 配列番号:12と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:12で表わされるアミノ酸配列と約40%以上、好ましくは約60%以上、より好ましくは70%以上、さらに好ましくは約80%以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95 SEQ ID NO: 12 as substantially the same amino acid sequence and, for example, SEQ ID NO: 12 amino acid sequence and about 40% homology, preferably about 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably about 80%, especially preferably about 90% or more, and most preferably about 95
%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられる。 Such an amino acid sequence having a% homology are used. 本発明の配列番号:12と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質としては、前記した配列番号:12と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質であれば何れのものを用いてもよい。 SEQ ID NO: of the present invention: Examples 12 and substantially precursor protein containing the same amino acid sequence, wherein the sequences ID NO: 12 and having substantially the same amino acid sequence, produce the protein of the present invention described above it may be used any ones as long as protein capable. したがって、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 Therefore, quantitative factors such as molecular weight of the protein may be different. 配列番号:13と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:13で表わされるアミノ酸配列と約4 SEQ ID NO: 13 and a substantially identical amino acid sequence, e.g., SEQ ID NO: 13 amino acid sequence and about 4 represented by
0%以上、好ましくは約60%以上、より好ましくは7 0% or more, preferably about 60% or more, more preferably 7
0%以上、さらに好ましくは約80%以上、とりわけ好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 80% or more, especially preferably about 90% homology and most preferably at amino acid sequence is used with about 95% homology. 本発明の配列番号:13と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質としては、前記した配列番号:1 SEQ ID NO: of the present invention: 13 and a substantially precursor protein containing the same amino acid sequence, wherein the sequences ID NO: 1
3と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質であれば何れのものを用いてもよい。 3 and having substantially the same amino acid sequence, may be used as any as long as a protein which protein capable of producing the present invention described above. したがって、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 Therefore, quantitative factors such as molecular weight of the protein may be different.

【0025】また、本発明の前駆体タンパク質としては、配列番号:10〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1〜20個程度、好ましくは1〜9個程度、 Further, as the precursor protein of the present invention, SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 13 wherein one or more of the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO: (e.g., 1 to 20 or so, preferably about 1 to 9,
さらに好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号:10〜配列番号: More preferably several (e.g., 1-5) amino acids are deleted in), SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO:
13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列に1または2個以上(例えば、1〜20個程度、好ましくは1〜9個程度、さらに好ましくは数個(例、1〜5 1 or 2 or more to the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO: 13 (e.g., about 1 to 20, preferably about 1 to 9, more preferably several (e.g., 1-5
個))のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号:10〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1 Amino acids are added in pieces)), SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 13 wherein one or more of the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO: (e.g., 1
〜20個程度、好ましくは1〜9個程度、さらに好ましくは数個(例、1〜5個))のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質なども用いられる。 About 20, preferably about 1 to 9, more preferably several (e.g., 1-5) containing) amino acids are combined by an amino acid sequence, or they substituted by other amino acids protein, and the like may also be used. さらに、本発明の前駆体タンパク質はC末端が通常カルボキシル基(−COOH)またはカルボキシレート Furthermore, the precursor protein of the present invention is the C-terminal is normally a carboxyl group (-COOH) or carboxylate
(−COO - )であるが、前記した本発明のタンパク質のごとく、C末端がアミド(−CONH 2 )またはエステル(−COOR)であってもよい。 (-COO -) a but, as in the protein of the present invention described above, C-terminal, it may be an amide (-CONH 2) or ester (-COOR). さらに、本発明の前駆体タンパク質には、前記した本発明のタンパク質と同様に、N末端のアミノ酸残基(例、メチオニン残基)のアミノ基が保護基で保護されているもの、N端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、、分子内のアミノ酸の側鎖上のカルボキシル基がアミド(−CONH 2 )化またはエステル(−COOR)化されたもの、および/または糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。 Furthermore, the precursor protein of the present invention, as well as the protein of the present invention described above, which the amino acid residue (eg, methionine residue) of the N-terminal amino group of which is protected by a protecting group, N end side those glutamyl group formed is cleaved in vivo to form pyroglutamyl, carboxylation on the side chains of amino acids in ,, molecule as a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule is protected with a suitable protecting group group amide those (-CONH 2) on or ester (-COOR) of and and / or a sugar chain also includes conjugated proteins such as glycoproteins bound.

【0026】本発明の前駆体タンパク質の具体例としては、例えば、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のタンパク質のN末端に、後述する配列番号:14で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のシグナルペプチドが結合したタンパク質(すなわち、配列番号:11で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質)、配列番号:11で表わされるアミノ酸配列を有する本発明の前駆体タンパク質のN末端から、後述する配列番号:15で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のシグナルペプチドが切断されたタンパク質(すなわち、配列番号:10で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質)、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のタンパク質のN末端に、後述する配列番号:16で表わさ [0026] Specific examples of the precursor protein of the present invention, for example, SEQ ID NO: to the N-terminus of the protein of the present invention having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO described below: having the amino acid sequence represented by 14 protein signal peptide of the present invention is bonded (i.e., SEQ ID NO: protein having the amino acid sequence represented by 11), SEQ ID NO: from N-terminus of the precursor protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 11, will be described later SEQ ID NO: 15 protein signal peptide of the present invention have been cut having the amino acid sequence represented by (ie, SEQ ID NO: protein having the amino acid sequence represented by 10), SEQ ID NO: book having the amino acid sequence represented by the N-terminus of the protein of the invention, SEQ ID NO described below: represented by 16 るアミノ酸配列を有する本発明のシグナルペプチドが結合したタンパク質(すなわち、配列番号:12で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質)、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のタンパク質のN末端に、後述する配列番号:17で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のシグナルペプチドが結合したタンパク質(すなわち、 Protein, where the signal peptide of the present invention having an amino acid sequence that was bound (i.e., SEQ ID NO: protein having the amino acid sequence represented by 12), SEQ ID NO: to the N-terminus of the protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 3 , described below SEQ ID NO: protein signal peptide of the present invention is bonded with an amino acid sequence represented by 17 (i.e.,
配列番号:13で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質)などが挙げられる。 SEQ ID NO: protein having the amino acid sequence represented by 13), and the like. 本発明の前駆体タンパク質はシグナルペプチドを有しているので、本発明のタンパク質を効率よく細胞外に分泌させることができる。 Since the precursor protein of the present invention has a signal peptide, it can be secreted proteins of the present invention efficiently extracellularly. また、本発明のタンパク質を製造するための中間体として有用である。 Also useful as intermediates for the preparation of proteins of the present invention. また、本発明の前駆体タンパク質は、後述する本発明のタンパク質と同様の機能、例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性を有しており、本発明のタンパク質と同様の有用性を有している。 Also, the precursor protein of the present invention, the same functions and protein of the present invention described later, for example, nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, physiological, such as a storage form action in the brain It had activity, has the same utility and proteins of the present invention.

【0027】本発明のシグナルペプチドとしては、例えば、配列番号:14で表わされるアミノ酸配列(配列番号:11または図1の第1番目〜37番目のアミノ酸配列)、配列番号:15で表わされるアミノ酸配列(配列番号:11または図1の第1番目〜24番目のアミノ酸配列)、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列(配列番号:12または図2の第1番目〜34番目のアミノ酸配列)もしくは配列番号:17で表わされるアミノ酸配列(配列番号:13または図3の第1番目〜34番目のアミノ酸配列)と同一または実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドなどが用いられる。 [0027] As the signal peptide of the present invention, for example, SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 14 (SEQ ID NO: 11 or the 1-th to 37 th amino acid sequence of Figure 1), SEQ ID NO: amino acids represented by 15 sequence (SEQ ID NO: 11 or the first 24 amino acid sequence of Figure 1), SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 16 (SEQ ID NO: 12 or the 1-th to 34 th amino acid sequence of Figure 2) or SEQ ID NO: amino acid sequence represented by 17: etc. (SEQ ID NO: 13 or the first to 34 th amino acid sequence of Figure 3) containing the same or substantially the same amino acid sequence as the peptide is used.
本発明のシグナルペプチドは、例えば、上記した哺乳動物の細胞またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織に由来するペプチドであってもよく、また、例えば、ゴールドフィッシュ、ゼブラフィッシュ、サケ、ニジマス、 The signal peptide of the present invention may be, for example, a peptide derived from any tissue in which cells or their mammalian cells as described above is present, also, for example, gold fish, zebra fish, salmon, rainbow trout,
ニシン、コイなどの魚類などに由来するタンパク質であってもよく、さらには合成ペプチドであってもよい。 Herring may be a protein derived from such fish such as carp, or even a synthetic peptide. 配列番号:14と実質的に同一のアミノ酸配列としては、 SEQ ID NO: 14 as substantially the same amino acid sequence and,
例えば、配列番号:14で表わされるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。 For example, SEQ ID NO: 14 amino acid sequence at least about 60% homology, preferably 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90%, most preferably about 95% or more homology It shows the amino acid sequence having. 配列番号:15と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:15で表わされるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。 SEQ ID NO: 15 as substantially the same amino acid sequence and, for example, SEQ ID NO: 15 amino acid sequence at least about 60% homology, preferably 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90%, most preferably at an amino acid sequence having about 95% homology.

【0028】配列番号:16と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90% [0028] SEQ ID NO: 16 as substantially the same amino acid sequence and, for example, SEQ ID NO: 16 amino acid sequence at least about 60% homology, preferably 70% or more, more preferably about 80% or more, further preferably from about 90%
以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。 Above, most preferably at an amino acid sequence having about 95% homology. 配列番号:17と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号:17で表わされるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。 SEQ ID NO: 17 as substantially the same amino acid sequence and, for example, SEQ ID NO: 17 amino acid sequence at least about 60% homology, preferably 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90%, most preferably at an amino acid sequence having about 95% homology. 本発明のシグナルペプチドは、前記した配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16または配列番号:17で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るかぎり、いずれのペプチドであってもよく、分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 The signal peptide of the present invention, the above-mentioned SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: has an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 17, functions as a signal peptide As long as capable of exhibiting may be any peptide, quantitative factors such as molecular weight may be different. また、本発明のシグナルペプチドは、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るかぎり、上記したアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1〜6 Also, the signal peptide of the present invention, as long as capable of exhibiting the function as a signal peptide, 1 or 2 or more amino acid sequence described above (e.g., 1-6
個程度、好ましくは数個(例、1〜4個))のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、上記したアミノ酸配列に1 About individual, preferably a few (eg, 1-4) amino acids are deleted of) the amino acid sequence described above 1
または2個以上(例えば、1〜6個程度、好ましくは数個(例、1〜4個))のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、上記したアミノ酸配列中の1または2個以上(例えば、1〜6個程度、好ましくは数個(例、1〜4 Or two or more (e.g., about 1-6, preferably a few (eg, 1-4)) amino acids are added in, one or two or more amino acid sequence described above (e.g., 1 about 6, preferably a few (e.g., 1-4
個))のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などであってもよい。 Amino acids) of) may be an protein containing the amino acid sequence in combination to amino acid sequences, or their substitution with other amino acids.

【0029】さらに、本発明のシグナルペプチドはC末端が通常カルボキシル基(−COOH)またはカルボキシレート(−COO - )であるが、前記した本発明のタンパク質のごとく、C末端がアミド(−CONH 2 )またはエステル(−COOR)であってもよい。 Furthermore, the signal peptide of the present invention the C-terminus is usually a carboxyl group (-COOH) or carboxylate (-COO -) is a, as in the protein of the present invention described above, C-terminal amide (-CONH 2 ) or an ester (-COOR). 本発明のシグナルペプチドの具体例としては、例えば、配列番号:14で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド、 Specific examples of signal peptides of the present invention, for example, SEQ ID NO: peptide having the amino acid sequence represented by 14,
配列番号:15で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列のC末端からGlyを除いたアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号:17で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端から17アミノ酸を除いたアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いられる。 SEQ ID NO: peptide having the amino acid sequence represented by 15, SEQ ID NO: peptide having the 16 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: the peptide having the C-terminal of the amino acid sequence represented by 16 amino acid sequence except for Gly, sequence ID: peptide having the amino acid sequence represented by 17, SEQ ID NO: such as a peptide having an amino acid sequence, except for the 17 amino acids from the C-terminus of the amino acid sequence represented by 17 is used. 本発明のシグナルペプチドは、本発明のタンパク質をはじめ、種々の細胞外分泌タンパク質(ペプチド)を効率よく細胞外に分泌させることができる。 The signal peptide of the present invention, the protein of the present invention initially, it is possible to secrete a variety of extracellular secretory proteins (peptides) efficiently extracellularly. 本発明のタンパク質、部分ペプチド、前駆体タンパク質またはシグナルペプチドの塩としては、生理学的に許容される塩基(例、アルカリ金属)や酸(例、有機酸、無機酸)との塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 Protein of the present invention, a partial peptide, a salt of the precursor protein or a signal peptide, bases (eg, alkali metals) which are physiologically acceptable and acid (e.g., organic acids, inorganic acids) salts with is used, physiologically acceptable acid addition salts. この様な塩としては、例えば無機酸(例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸)との塩、あるいは有機酸(例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸)との塩などが用いられる。 Examples of such salts include salts with inorganic acids (e.g., hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) and salts with organic acids (e.g., acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid , tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) is used.

【0030】本発明のタンパク質、部分ペプチド、前駆体タンパク質、シグナルペプチドまたはその塩(以下、 [0030] Proteins of the present invention, the partial peptide, precursor protein, signal peptide or a salt thereof (hereinafter,
これらの製造法に関する記載において、本発明のタンパク質と略記する)は、前述した哺乳動物の細胞または組織から自体公知のタンパク質またはペプチドの精製方法によって製造することもできるし、後述するタンパク質をコードするDNAを含有する形質転換体を培養することによっても製造することができる。 In description of these manufacturing methods, referred to as the protein of the present invention), may be manufactured by purification methods known per se of a protein or peptide from the cell or tissue of the above-mentioned mammals, encodes a protein which will be described later it can also be manufactured by culturing a transformant containing the DNA. また、後述のペプチド合成法またはこれに準じて製造することもできる。 It can also be produced in accordance with the procedures for peptide synthesis or its later.
哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出を行い、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組み合わせることにより精製単離することができる。 When prepared from tissues or cells of a mammal, after tissues or cells are homogenized mammalian conducted extracted with an acid or the like, reverse phase chromatography and the extract by a combination of chromatography techniques such as ion exchange chromatography it can be purified and isolated. 本発明のタンパク質またはそのアミド体の合成には、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることができる。 In the synthesis of the protein or its amide form of the present invention can be used an ordinary commercially available protein synthesis resin. そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、4−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、4−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、PAM樹脂、 Examples of such resins include chloromethyl resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin, aminomethyl resin, 4-benzyloxybenzyl alcohol resin, 4-methylbenzhydrylamine resin, PAM resin,
4−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、4−(2',4'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル)フェノキシ樹脂、4 4-hydroxymethyl-methylphenyl acetamidomethyl resin, polyacrylamide resin, 4- (2 ', 4'-dimethoxyphenyl - hydroxymethyl) phenoxy resin, 4
−(2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocアミノエチル)フェノキシ樹脂などを挙げることができる。 - (2 ', 4'-dimethoxyphenyl--Fmoc-aminoethyl) phenoxy resins. このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質またはペプチドの配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。 Using these resins, a suitably protected amino acids the α- amino groups and side chain functional groups of the sequence of the protein or peptide of interest, in accordance with various condensation methods publicly known in the art, condensed on the resin. 反応の最後に樹脂からタンパク質を切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のタンパク質またはそれらのアミド体を取得する。 At the end of the reaction cutting the protein from the resin and at the same time, further performing an intramolecular disulfide bond-forming reaction is performed in a highly diluted solution to obtain the protein or amides thereof purposes.

【0031】上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、 [0031] For condensation of the protected amino acids described above,
タンパク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。 Although it is possible to use various activating reagents that can be used for protein synthesis, in particular, good carbodiimides. カルボジイミド類としては、DCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロリル) The carbodiimides, DCC, N, N'- diisopropylcarbodiimide, N- ethyl -N '- (3- dimethylaminopropyl)
カルボジイミドなどが用いられる。 Carbodiimide is used. これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤(例えば、HOBt, HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行ったのちに樹脂に添加することができる。 These by a racemization inhibitor for activation (e.g., HOBt, HOOBt) was carried out or added directly to the resin, the protected amino acid, along with the activation of the advance protected amino acids as a symmetric acid anhydride or HOBt ester or HOOBt ester later it can be added to the resin. 保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。 As the solvent used in the condensation with activation or resin of the protected amino acids may be chosen from solvents that are known to be usable for protein condensation reactions. 例えば、N,N−ジメチルホルムアミド、N− For example, N, N- dimethylformamide, N-
メチルピロリドン、クロロホルム、トリフルオロエタノール、ジメチルスルホキシド、DMF、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸エチル、N-メチルピロリドンあるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。 Methylpyrrolidone, chloroform, trifluoroethanol, dimethylsulfoxide, DMF, dimethyl sulfoxide, pyridine, chloroform, dioxane, methylene chloride, tetrahydrofuran, acetonitrile, ethyl acetate, etc. N- methylpyrrolidone or suitable mixtures thereof are used. 反応温度はタンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−20℃〜50℃の範囲から適宜選択される。 The reaction temperature is appropriately chosen from the range known to be applicable to protein binding reactions and is generally selected from a range of about -20 ° C. to 50 ° C.. 活性化されたアミノ酸誘導体は通常1.5〜4倍過剰で用いられる。 The activated amino acid derivatives are used generally in 1.5 to 4-fold excess. ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行うことができる。 Result of a test using ninhydrin reaction, when the condensation is insufficient it is possible to perform sufficient condensation by repeating the condensation reaction without removal of protecting groups. 反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化して、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。 When even after repeating the condensation is yet insufficient, it is possible to make and unreacted amino acids are acetylated with acetic anhydride or acetyl imidazole, it does not affect on the subsequent reaction.

【0032】原料のアミノ基の保護基としては、例えば、Z、Boc、ターシャリーペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、4−メトキシベンジルオキシカルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、2−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Fmocなどが用いられる。 [0032] As the protecting group of the amino group of raw materials, for example, Z, Boc, tertiary-pentyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, Cl-Z, Br-Z, adamantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthaloyl, formyl, 2-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc and the like. カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化(例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ターシャリーブチル、 Carboxyl groups, for example, by alkyl esterification (e.g., methyl, ethyl, propyl, butyl, tertiary butyl,
シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、2−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化)、アラルキルエステル化(例えば、ベンジルエステル、4−ニトロベンジルエステル、4−メトキシベンジルエステル、4−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化)、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ターシャリーブトキシカルボニルヒドラジド化、 Cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl, etc. linear, branched or cyclic), aralkyl esterification (e.g., benzyl ester, 4-nitrobenzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, 4-chlorobenzyl ester, benzhydryl esterification), phenacyl esterification, benzyloxycarbonyl hydrazide, t-butoxycarbonyl hydrazide,
トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。 It can be protected by trityl hydrazide. セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。 The hydroxyl group of serine, for example, can be protected by esterification or etherification. このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。 Examples of groups appropriately used for the esterification include a lower alkanoyl group such as acetyl group, an aroyl group such as benzoyl group, benzyloxycarbonyl group, and a group derived from carbonic acid such as benzyloxycarbonyl group and ethoxycarbonyl group. また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、t-ブチル基などである。 Examples of a group appropriately used for the etherification include benzyl group, tetrahydropyranyl group, and the like t- butyl group. チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Bzl、Cl 2 Examples of groups for protecting the phenolic hydroxyl group of tyrosine, for example, Bzl, Cl 2
-Bzl、2−ニトロベンジル、Br-Z、ターシャリーブチルなどが用いられる。 -Bzl, 2-nitrobenzyl, Br-Z, t-butyl are used. ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Tos、4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル、DNP、ベンジルオキシメチル、B Examples of protective groups for the imidazole of histidine, for example, Tos, 4-methoxy-2,3,6, DNP, benzyloxymethyl, B
um、Boc、Trt、Fmocなどが用いられる。 um, Boc, Trt, Fmoc and the like can be used.

【0033】原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル〔アルコール(例えば、ペンタクロロフェノール、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタルイミド、HOBt)とのエステル〕などが用いられる。 [0033] Examples of the activated carboxyl groups in the starting material include the corresponding acid anhydrides, azides, activated esters [esters with alcohols (e.g., pentachlorophenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,4 dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, p-nitrophenol, HONB, N- hydroxysuccinimide stain de, N- hydroxyphthalimide, HOBt) esters of] the like. 原料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。 Examples of the activated amino groups in the starting material, the corresponding phosphoric amides are employed. 保護基の除去(脱離)方法としては、例えば、Pd黒あるいはPd-炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。 To eliminate (split off) the protecting groups, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd- carbon, treatment with anhydrous hydrogen fluoride, methanesulfonic acid, trifluoromethanesulfonic sulfonic acid, or trifluoroacetic acid treatment and due these mixtures, diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, due piperazine; and reduction with sodium in liquid ammonia. 上記酸処理による脱離反応は、 The elimination reaction by the acid treatment described above,
一般に約−20℃〜40℃の温度で行なわれるが、酸処理においてはアニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、1,4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。 Although generally carried out at a temperature of about -20 ° C. to 40 ° C., the acid treatment anisole, phenol, thioanisole, metacresol, para-cresol, dimethylsulfide, 1,4-butane dithiol, such as 1,2-ethanedithiol the addition of a cation scavenger such as is valid. また、 Also,
ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる2,4- Used for protecting the imidazole group of histidine 2,4
ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の1,2-エタンジチオール、1,4-ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。 Dinitrophenyl group is removed by treatment with thiophenol, a formyl group used as a protecting group for indole in tryptophan above 1,2-ethanedithiol, besides by a treatment with an alkali, such as 1,4-butane dithiol, dilute sodium hydroxide solution, also dilute ammonia, etc..

【0034】原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。 [0034] Protection of functional groups that should not be involved in the reaction of the starting materials, and elimination of the protecting groups and activation of functional groups involved in the reaction may be appropriately selected from publicly known groups and publicly known means . タンパク質のアミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド(タンパク質)鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のN末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質とC末端のカルボキシル基の保護基のみを除去したタンパク質とを製造し、この両タンパク質を上記したような混合溶媒中で縮合させる。 Another method for obtaining the amides of the protein, for example, is first protected by amidation α- carboxyl group of the carboxy terminal amino acid, then extended peptide (protein) chain to a desired chain length from the amino group side said peptide only the protecting group of the N-terminus of the α- amino group carboxyl group of the protein and the C-terminal excluding only the protecting group of the chain was prepared by the the protein removal, a mixed solvent such as to both the protein and the in condensation. 縮合反応の詳細については上記と同様である。 The details of the condensation reaction are the same as described above. 縮合により得られた保護タンパク質を精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗タンパク質を得ることができる。 After purification of the protected protein obtained by condensation, all the protecting groups are eliminated by the method described above to give the desired crude protein. この粗タンパク質は既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望のタンパク質のアミド体を得ることができる。 This crude protein is purified by various known purification means to obtain the amide of the desired protein by Lyophilization of the major fraction. タンパク質のエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、タンパク質のアミド体と同様にして、所望のタンパク質のエステル体を得ることができる。 To prepare the esterified protein, for example, after an α- carboxyl group of the carboxy terminal amino acid is condensed with a desired alcohol to prepare the amino acid ester, amide of the protein are obtained analogously to the desired esterified protein be able to.

【0035】本発明の部分ペプチドは、自体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明のタンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによって製造することができる。 The partial peptide of the present invention, publicly known methods for peptide synthesis, or proteins of the present invention can be prepared by cleaving with an appropriate peptidase. ペプチドの合成法としては、例えば固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。 For the methods for peptide synthesis, for example, solid phase synthesis may be by any of liquid phase synthesis. すなわち、 That is,
本発明の部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製造することができる。 A partial peptide or amino acids and the remaining portion may constitute the partial peptide of the present invention are condensed, when the product has a protecting group may be prepared the desired peptide by leaving a protective group. 公知の縮合方法や保護基の脱離としてはたとえば、以下の〜に記載された方法が挙げられる。 The elimination of the known methods for condensation and protective group for example, include the methods described in ~ below. M. Bodanszky および MA Ondetti、ペプチド シンセシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher M. Bodanszky and MA Ondetti, peptide synthesis (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide), s, New York (1966 years) Schroeder and Luebke, The peptide (The Peptide),
Academic Press, New York (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) Academic Press, New York (1965 years) Nobuo Izumiya other, Basics and experiments of peptide synthesis, Maruzen Co., Ltd.
(1975年) 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タンパク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、塩析、透析、ゲル濾過、電気泳動、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のタンパク質を精製単離することができる。 (1975) Yajima Haruaki and Shunpei Sakakibara, Biochemistry Experimental Course 1, Chemistry IV protein, 205, (1977) Yajima Haruaki supervision, development continued pharmaceuticals 14, Peptide Synthesis, Hirokawa Shoten, after the reaction conventional purification methods such as salting out, dialysis, gel filtration, electrophoresis, can be a protein isolated and purified according to the present invention in combination of solvent extraction, distillation, column chromatography, liquid chromatography and recrystallization. 上記方法で得られるタンパク質が遊離体である場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。 How protein obtained by the above method be a free form, it can be converted into an appropriate salt by a method a publicly known method, when the protein is obtained in a salt Conversely, a publicly known method it can be converted to free form or another salt by.

【0036】本発明のタンパク質をコードするDNAとしては、前述した本発明のタンパク質をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。 [0036] As the DNA encoding the protein of the present invention may be any so long as it contains the base sequence encoding the protein of the present invention described above. また、ゲノムDNA、ゲノムDNAライブラリー、 In addition, genomic DNA, genomic DNA library,
前記した細胞・組織由来のcDNA、前記した細胞・組織由来のcDNAライブラリー、合成DNAのいずれでもよい。 The cells and tissues derived from cDNA, derived from the cells and tissues of a cDNA library, and synthetic DNA. ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。 The vector used for the library, a bacteriophage, plasmid, cosmid, may be any and phagemid. また、前記した細胞・組織よりmRNA画分を調製したものを用いて直接Reverse Tran Also, directly with those mRNA fraction prepared from the cells and tissues Reverse Tran
scriptase Polymerase Chain Reaction(以下、RT-P scriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter, RT-P
CR法と略称する)によって増幅することもできる。 May be amplified by abbreviated as CR method). 具体的には、本発明の配列番号:1で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするDNAとしては、例えば、 Specifically, SEQ ID NO: of the present invention: The DNA encoding the amino acid sequence and protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by, for example,
配列番号:18で表わされる塩基配列を含有するDN DN containing 18 nucleotide sequence represented by SEQ ID NO:
A、または配列番号:18で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性(例、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グルア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性) A, or SEQ ID NO: 18 has a base sequence and a base sequence that hybridizes under highly stringent conditions represented by SEQ ID NO: protein activity substantially equivalent to having the amino acid sequence represented by 1 (Example nerve extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, gluer cell activating activity, physiological activity such as a storage form action in the brain)
を有するタンパク質をコードする塩基配列を含有するD D containing a nucleotide sequence encoding a protein having a
NAであれば何れのものでもよい。 If NA may be of any. 配列番号:18で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:18で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is represented by 18, for example, SEQ ID NO: 18 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology.

【0037】本発明の配列番号:2で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするDNAとしては、例えば、配列番号:19で表わされる塩基配列を含有するD [0037] SEQ ID NO of the present invention: The DNA encoding a protein comprising the amino acid sequence the same or substantially the same amino acid sequence represented by, for example, SEQ ID NO: comprising the base sequence represented by 19 D
NA、または配列番号:19で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性(例、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性)を有するタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 NA, or SEQ ID NO: 19 has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by SEQ ID NO: protein having the amino acid sequence represented by substantially the same activity (e.g. nerve extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, may be of any as long as a DNA containing the base sequence encoding a protein having a physiological activity), such as a storage form action in the brain . 配列番号:19 SEQ ID NO: 19
で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:19で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 In the nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is expressed, for example, SEQ ID NO: 19 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology. 本発明の配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするDNAとしては、例えば、配列番号:20で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:20で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性(例、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性)を有するタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 SEQ ID NO: of the present invention: The DNA encoding the amino acid sequence and protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 3, e.g., SEQ ID NO: DNA containing the base sequence represented by 20 or, SEQ ID NO: have nucleotide sequence and HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 20, SEQ ID NO: protein activity substantially equivalent to having the amino acid sequence represented by 3 (eg, central nervous nerve-extending activity and nerve regeneration effect in such systems, glial cell activation action, may be of any as long as a DNA containing the base sequence encoding a protein having a physiological activity), such as a storage form action in the brain. 配列番号:20 SEQ ID NO: 20
で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:20で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence represented in, e.g., SEQ ID NO: 20 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology.

【0038】ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・ [0038] hybridization, a method known per se or a method analogous thereto, for example, Molecular
クローニング(Molecular Cloning)2nd(J. Sambrook Cloning (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989)に記載の方法などに従って行なうことができる。 etal., it can be carried out according to the method described in Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。 Further, when a commercially available library is used, it can be carried out according to the method described in the attached instructions. より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。 More preferably, it can be carried out under highly stringent conditions. ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約19〜40mM、好ましくは約19〜 The high stringent conditions, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably from about 19
20mMで、温度が約50〜70℃、好ましくは約60 20mM, the temperature is about 50-70 ° C., preferably about 60
〜65℃の条件を示す。 The conditions of ~65 ℃. 特に、ナトリウム濃度が約19 In particular, the sodium concentration is about 19
mMで温度が約65℃の場合が最も好ましい。 The most preferred temperature of about 65 ° C. in mM. より具体的には、配列番号:1で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする塩基配列を有するDNA More specifically, SEQ ID NO: DNA having a nucleotide sequence encoding a protein comprising the amino acid sequence represented by
としては、配列番号:18で表わされる塩基配列を有するDNAなどが、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:19で表わされる塩基配列を有するDNAなどが、配列番号:2で表わされるアミノ酸配列のN末端にGlyが付加したアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする塩基配列を有するD The SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 18, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence encoding a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: bases represented by 19 a DNA having the sequence, SEQ ID NO: D having a nucleotide sequence that Gly at the N-terminus of the amino acid sequence represented encoding the protein containing the amino acid sequence obtained by adding 2
NAとしては、配列番号:19で表わされる塩基配列の5'末端にGGCが付加した塩基配列を有するDNAなどが、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:20で表わされる塩基配列を有するDNAなどが、配列番号:3で表わされるアミノ酸配列のN末端に配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端の7アミノ酸が付加したアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:20で表わされる塩基配列の5'末端に配列番号:34で表わされる塩基配列の3'末端の2 The NA, SEQ ID NO: 5 'terminus of the nucleotide sequence represented by 19 a DNA having a nucleotide sequence GGC was added, SEQ ID NO: having a nucleotide sequence encoding a protein comprising the amino acid sequence represented by 3 the DNA, SEQ ID NO: is a DNA having the nucleotide sequence represented by 20, SEQ ID NO: sequence at the N-terminus of the amino acid sequence represented by 3 numbers: 7 amino acids of C-terminal amino acid sequence represented by 17 are added the DNA having a nucleotide sequence encoding a protein comprising the amino acid sequence, SEQ ID NO: 20 5 in the nucleotide sequence represented by 'sequences at their ends ID NO: 34 base sequence represented by the 3' end of the 2
1塩基が付加した塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 A DNA having a nucleotide sequence one base are added is used. また、本発明の配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を少なくとも1つ有するタンパク質をコードするDN See also SEQ ID NO: of the present invention: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7 DN encoding at least one having a protein the amino acid sequence represented by
Aとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:2 The A, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 2
2、配列番号:23または配列番号:24で表わされる塩基配列を少なくとも1つ有するDNAなどが用いられる。 2, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: including at least one having the DNA base sequence represented by 24 is used. さらに、本発明の配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を少なくとも1つ有するタンパク質をコードするDN Furthermore, SEQ ID NO: of the present invention: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 7 DN encoding at least one having a protein the amino acid sequence represented by
Aとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:2 The A, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 2
5、配列番号:26または配列番号:24で表わされる塩基配列を少なくとも1つ有するDNAなどが用いられる。 5, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: including at least one having the DNA base sequence represented by 24 is used.

【0039】本発明の部分ペプチドをコードするDNA [0039] DNA encoding the partial peptide of the present invention
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するDNAであればいかなるものであってもよい。 As it may be any so long as a DNA containing the base sequence encoding the partial peptide of the present invention described above. また、ゲノムDNA、ゲノムDNAライブラリー、前記した細胞・組織由来のcDNA、前記した細胞・組織由来のcDNAライブラリー、合成DNAのいずれでもよい。 Further, genomic DNA, genomic DNA library, the cDNA derived from the cells and tissues, the cells and tissues derived from cDNA library, and synthetic DNA. ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。 The vector used for the library, a bacteriophage, plasmid, cosmid, may be any and phagemid. また、前記した細胞・組織よりmRNA画分を調製したものを用いて直接RT- Also, directly with those mRNA fraction prepared from the cells and tissues RT-
PCR法によって増幅することもできる。 It may be amplified by PCR. 具体的には、 In particular,
本発明の部分ペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号:18、配列番号:19または配列番号:20で表わされる塩基配列を有するDNAの部分塩基配列を有するDNA、または配列番号:18、配列番号:19または配列番号:20で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のタンパク質と実質的に同質の活性(例、神経伸長作用、神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用など)を有する部分ペプチドをコードするDNAの部分塩基配列を有するD The DNA encoding the partial peptide of the present invention, e.g., SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: DNA having a partial nucleotide sequence of the DNA having the nucleotide sequence represented by 20 or SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 20, activity (e.g., nerves extending activity of the protein substantially equivalent to the present invention, the nerve D with regenerative action, glial cell activation action, such as the storage form action in the brain) partial nucleotide sequence of the DNA coding for the partial peptide having the
NAなどが用いられる。 Such as the NA is used. 配列番号:18、配列番号:1 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 1
9または配列番号:20で表わされる塩基配列とハイブリダイズするDNAとしては、例えば、配列番号:1 9 or SEQ ID NO: The base sequence that hybridizes with DNA represented by 20, for example, SEQ ID NO: 1
8、配列番号:19または配列番号:20で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90% 8, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90%
以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列を含有するDNAなどが用いられる。 Or more, most preferably a DNA containing the base sequence having about 95% homology are used.

【0040】より具体的には、本発明の配列番号:4、 [0040] More specifically, SEQ ID NO: of the present invention: 4,
配列番号:5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を含有する部分ペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:22、配列番号:23または配列番号:24で表わされる塩基配列を有するDNA、または配列番号:2 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: The 7 DNA encoding the partial peptide containing the amino acid sequence represented by, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: : DNA having the nucleotide sequence represented by 24 or SEQ ID NO: 2
1、配列番号:22、、配列番号:23または配列番号:24で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するDNA 1, SEQ ID NO: 22 ,, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence and HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 24
などが用いられる。 Such as is used. 配列番号:21、配列番号:22、 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22,
配列番号:23または配列番号:24で表わされる塩基配列とハイブリダイズするDNAとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:22、配列番号:23または配列番号:24で表わされる塩基配列と約60%以上、 SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: The base sequence that hybridizes with DNA represented by 24, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: nucleotide sequence and about represented by 24 more than 60%,
好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列を含有するDNA Preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably contains a base sequence having about 95% homology DNA
などが用いられる。 Such as is used. 具体的には、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするDNA Specifically, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7 DNA coding for the partial peptide having an amino acid sequence represented by
としては、例えば、配列番号:21、配列番号:22、 As, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22,
配列番号:23または配列番号24:で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: 24: a DNA having the nucleotide sequence represented by is used.

【0041】また、配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:25、配列番号: Further, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: The DNA encoding the partial peptide having an amino acid sequence represented by 7, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO:
26または配列番号:24で表わされる塩基配列を有するDNA、または配列番号:21、配列番号:25、 26 or SEQ ID NO: DNA having the nucleotide sequence represented by 24 or SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 25,
配列番号:26または配列番号:24で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence and HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 24 is used. 配列番号:21、配列番号:25、配列番号:26または配列番号:24で表わされる塩基配列とハイブリダイズするDNAとしては、例えば、配列番号:21、配列番号: SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: The base sequence that hybridizes with DNA represented by 24, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:
25、配列番号:26または配列番号:24で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 24 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more,
より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90 More preferably about 80% or more, more preferably about 90
%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列を含有するDNAなどが用いられる。 % Or more, most preferably a DNA containing the base sequence having about 95% homology are used. 具体的には、配列番号:4、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号:21、配列番号:25、配列番号:26または配列番号:24で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 Specifically, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: The DNA encoding the partial peptide having an amino acid sequence represented by 7, for example, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 24 is used.

【0042】さらに、図4、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第41番目〜第106番目のアミノ酸配列、第12 [0042] Further, FIG. 4, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 41 th to the 106 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 13 any of SEQ ID NO: of the 12
1番目〜第179番目のアミノ酸配列または第187番目〜第211番目のアミノ酸配列を含有する部分ペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号: First to the DNA encoding the partial peptide containing the first 179 amino acid sequence or the 187 th to the 211 th amino acid sequence, e.g., SEQ ID NO:
28〜配列番号:30のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列の第121番目〜第318番目の塩基配列、 28 to SEQ ID NO: # 121 th to 318 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by 30 any sequence number,
第360番目〜第537番目の塩基配列または第559 # 360 th to 537 th nucleotide sequence or the 559
番目〜第633番目の塩基配列、または配列番号:2 Th to the 633 th nucleotide sequence or SEQ ID NO: 2
8〜配列番号:30のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列の第121番目〜第318番目の塩基配列、第360番目〜第537番目の塩基配列または第559番目〜第633番目の塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するDNAなどが好ましい。 8 SEQ ID NO: # 121 th to 318 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by 30 any sequence number, the 360 ​​th to 537 th nucleotide sequence or the 559 th to the 633 th nucleotide sequence a DNA having a hybridizing nucleotide sequence under highly stringent conditions and is preferred. 配列番号:28〜配列番号:30のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列の第121番目〜 SEQ ID NO: 28 to SEQ ID NO: 30 # 121 th to the nucleotide sequence represented by any of SEQ ID
第318番目の塩基配列、第360番目〜第537番目の塩基配列または第559番目〜第633番目の塩基配列とハイブリダイズするDNAとしては、例えば、配列番号:28〜配列番号:30のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列の第121番目〜第318番目の塩基配列、第360番目〜第537番目の塩基配列または第559番目〜第633番目の塩基配列と約60%以上、 318 th nucleotide sequence, as the first 360 th to 537 th nucleotide sequence or the 559 th to the 633 th nucleotide sequences that hybridize to the DNA, eg, SEQ ID NO: 28 to SEQ ID NO: 30 either the 121 th to 318 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by the SEQ ID NO, the 360 ​​th to 537 th nucleotide sequence or the 559 th to the 633 th nucleotide sequence and about 60% or more,
好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列を含有するDNA Preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably contains a base sequence having about 95% homology DNA
などが用いられる。 Such as is used. ハイブリダイゼーション方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様である。 Hybridization methods and high stringent conditions are as defined above. 具体的には、図4、配列番号:11〜配列番号:13のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列の第41番目〜第106番目のアミノ酸配列、第121番目〜第17 Specifically, FIG. 4, SEQ ID NO: 11 to SEQ ID NO: 41 th to the 106 th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 13 any sequence number, the 121 th to the 17
9番目のアミノ酸配列または第187番目〜第211番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするD D encoding the partial peptide having 9 amino acid sequence or the 187 th to the 211 th amino acid sequence
NAとしては、例えば、配列番号:28〜配列番号:3 The NA, for example, SEQ ID NO: 28 to SEQ ID NO: 3
0のいずれかの配列番号で表わされる塩基配列の第12 The nucleotide sequence represented by any of SEQ ID NO 0 12
1番目〜第318番目の塩基配列、第360番目〜第5 First to 318 th nucleotide sequence, the 360-th to fifth
37番目の塩基配列または第559番目〜第633番目の塩基配列を有するDNAなどが好ましい。 Etc. Preferably DNA having a 37th nucleotide sequence or the 559 th to the 633 th nucleotide sequence.

【0043】本発明の前駆体タンパク質をコードするD D encoding the precursor protein of [0043] the present invention
NAとしては、前述した本発明の前駆体タンパク質をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。 The NA, may be any so long as it contains the base sequence encoding the precursor protein of the present invention described above. また、ゲノムDNA、ゲノムDNAライブラリー、前記した細胞・組織由来のcDNA、前記した細胞・組織由来のcDNAライブラリー、合成DN Further, genomic DNA, genomic DNA library, the cells and tissues derived from cDNA, cDNA library derived from the above-synthesized DN
Aのいずれでもよい。 It may be any of A. ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。 The vector used for the library, a bacteriophage, plasmid, cosmid, may be any and phagemid. また、前記した細胞・組織よりmRNA画分を調製したものを用いて直接RT-PCR法によって増幅することもできる。 Further, a direct amplification can be carried out by RT-PCR using those mRNA fraction prepared from the cells and tissues. 具体的には、本発明の配列番号:10で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質をコードするDNAとしては、例えば、配列番号:27で表わされる塩基配列を含有するD Specifically, SEQ ID NO: of the present invention: As the DNA encoding the precursor protein containing the amino acid sequence the same or substantially the same amino acid sequence represented by 10, for example, SEQ ID NO: bases represented by 27 D containing sequences
NA、または配列番号:27で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 NA, or SEQ ID NO: 27 has a base sequence and a base sequence that hybridizes under highly stringent conditions represented by a DNA containing the base sequence encoding a protein capable of producing the protein of the present invention described above it may be of any if. 配列番号:27で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:27で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80% SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is represented by 27, for example, SEQ ID NO: 27 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80%
以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 Or more, still more preferably about 90%, such as most preferably a nucleotide sequence having about 95% homology are used. より具体的には、配列番号:10で表わされるアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:27で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 More specifically, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence coding for the precursor protein containing the amino acid sequence represented by 10, SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 27 is used.

【0044】本発明の配列番号:11で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体タンパク質をコードするDNAとしては、 [0044] SEQ ID NO of the present invention: a DNA encoding a precursor protein having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 11,
例えば、配列番号:28で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:28で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNA For example, SEQ ID NO: 28 DNA containing the base sequence represented by or SEQ ID NO: 28 has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by the protein of the present invention described above DNA containing the nucleotide sequence encoding a protein capable of generating
であれば何れのものでもよい。 It may be of any long. 配列番号:28で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、 SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence represented by 28,
例えば、配列番号:28で表わされる塩基配列と約60 For example, SEQ ID NO: 28 nucleotide sequence represented by about 60
%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約8 % Or more, preferably about 70% or more, more preferably about 8
0%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology. より具体的には、配列番号:11で表わされるアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:28で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 More specifically, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence coding for the precursor protein containing the amino acid sequence represented by 11, SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 28 is used. 本発明の配列番号:12で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体タンパク質をコードするDNAとしては、例えば、配列番号:29で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:29で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 SEQ ID NO: of the present invention: As the DNA encoding the precursor protein having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 12, for example, SEQ ID NO: DNA containing the base sequence represented by 29, or SEQ ID NO: 29 has a base sequence and a base sequence that hybridizes under highly stringent conditions represented by, if DNA containing a nucleotide sequence encoding a protein capable of producing the protein of the present invention described above it may be of any. 配列番号:29で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:29で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95% SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is represented by 29, for example, SEQ ID NO: 29 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably about 90%, most preferably about 95%
以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 And basic sequence shown by SEQ ID NO is used. より具体的には、配列番号:12で表わされるアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:29で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 More specifically, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence coding for the precursor protein containing the amino acid sequence represented by 12, SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 29 is used.

【0045】本発明の配列番号:13で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前駆体タンパク質をコードするDNAとしては、 [0045] SEQ ID NO of the present invention: a DNA encoding a precursor protein having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 13,
例えば、配列番号:30で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:30で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、前記した本発明のタンパク質を生成し得るタンパク質をコードする塩基配列を含有するDNA For example, SEQ ID NO: DNA containing the base sequence represented by 30 or SEQ ID NO: has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by 30, a protein of the present invention described above DNA containing the nucleotide sequence encoding a protein capable of generating
であれば何れのものでもよい。 It may be of any long. 配列番号:30で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、 SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence represented by 30,
例えば、配列番号:30で表わされる塩基配列と約60 For example, SEQ ID NO: nucleotide sequence of about 60 represented by 30
%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約8 % Or more, preferably about 70% or more, more preferably about 8
0%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology. より具体的には、配列番号:13で表わされるアミノ酸配列を含有する前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:30で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 More specifically, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence coding for the precursor protein containing the amino acid sequence represented by 13, SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 30 is used. ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。 Method and the high stringent conditions for hybridization the same examples as described above.

【0046】本発明のシグナルペプチドをコードするD D encoding the signal peptide of the [0046] present invention
NAとしては、前述した本発明のシグナルペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。 The NA, may be any so long as it contains the base sequence encoding the signal peptide of the present invention described above. また、ゲノムDNA、ゲノムDNAライブラリー、前記した細胞・組織由来のcDNA、前記した細胞・組織由来のcDNAライブラリー、合成DN Further, genomic DNA, genomic DNA library, the cells and tissues derived from cDNA, cDNA library derived from the above-synthesized DN
Aのいずれでもよい。 It may be any of A. ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。 The vector used for the library, a bacteriophage, plasmid, cosmid, may be any and phagemid. また、前記した細胞・組織よりmRNA画分を調製したものを用いて直接RT-PCR法によって増幅することもできる。 Further, a direct amplification can be carried out by RT-PCR using those mRNA fraction prepared from the cells and tissues. 具体的には、本発明の配列番号:14で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするDNAとしては、例えば、配列番号:31で表わされる塩基配列を含有するD Specifically, SEQ ID NO: of the present invention: The DNA encoding the signal peptide having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 14, for example, SEQ ID NO: a nucleotide sequence represented by 31 D containing
NA、または配列番号:31で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るペプチドをコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 NA, or SEQ ID NO: 31 has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by a DNA containing the base sequence encoding a peptide capable of exhibiting the function as a signal peptide if if it may be of any. 配列番号:31で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:31で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80% SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is represented by 31, for example, SEQ ID NO: 31 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80%
以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 Or more, still more preferably about 90%, such as most preferably a nucleotide sequence having about 95% homology are used. 本発明の配列番号:14で表わされるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:31で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 SEQ ID NO: of the present invention: The DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence represented by 14, SEQ ID NO: a DNA having the nucleotide sequence represented by 31 is used.

【0047】本発明の配列番号:15で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするDNAとしては、 [0047] SEQ ID NO of the present invention: a DNA encoding a signal peptide having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 15,
例えば、配列番号:32で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:32で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るペプチドをコードする塩基配列を含有するDNA For example, SEQ ID NO: 32 DNA containing the base sequence represented by or SEQ ID NO: 32 has a base sequence HSS Trinh nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions represented by the function as a signal peptide DNA containing the nucleotide sequence encoding a peptide capable of
であれば何れのものでもよい。 It may be of any long. 配列番号:32で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、 SEQ ID NO: 32 The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence represented by,
例えば、配列番号:32で表わされる塩基配列と約60 For example, SEQ ID NO: 32 nucleotide sequence represented by about 60
%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約8 % Or more, preferably about 70% or more, more preferably about 8
0%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology. より具体的には、本発明の配列番号:15で表わされるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:3 More specifically, SEQ ID NO: of the present invention: The DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence represented by 15, SEQ ID NO: 3
2で表わされる塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 A DNA having a nucleotide sequence represented by 2 is used. 本発明の配列番号:16で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするDNAとしては、例えば、 SEQ ID NO: of the present invention: The 16 DNA coding for the signal peptide having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by, for example,
配列番号:33で表わされる塩基配列を含有するDN DN containing the base sequence represented by 33: SEQ ID NO:
A、または配列番号:33で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るペプチドをコードする塩基配列を含有するDNAであれば何れのものでもよい。 A, or SEQ ID NO: 33 has a base sequence and a base sequence that hybridizes under highly stringent conditions represented by a DNA containing the base sequence encoding a peptide capable of exhibiting the function as a signal peptide if if it may be of any. 配列番号:33で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番号:33で表わされる塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80% SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence is represented by 33, for example, SEQ ID NO: 33 are a nucleotide sequence of about 60%, preferably about 70% or more, more preferably about 80%
以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 Or more, still more preferably about 90%, such as most preferably a nucleotide sequence having about 95% homology are used. より具体的には、本発明の配列番号:16で表わされるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:33 More specifically, SEQ ID NO: of the present invention: a DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence represented by 16, SEQ ID NO: 33
で表わされる塩基配列を有するDNAなどが、配列番号:16で表わされるアミノ酸配列のC末端からGly In a DNA having a nucleotide sequence represented is, SEQ ID NO: 16 Gly from the C-terminus of the amino acid sequence represented by
を除いたアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:3 The DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence except for SEQ ID NO: 3
3で表わされる塩基配列の3'末端からGGCを除いた塩基配列を有するDNAなどが用いられる。 A DNA having a nucleotide sequence excluding the GGC 3 'terminus of the nucleotide sequence represented by 3 is used.

【0048】本発明の配列番号:17で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするDNAとしては、 [0048] SEQ ID NO of the present invention: a DNA encoding a signal peptide having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 17,
例えば、配列番号:34で表わされる塩基配列を含有するDNA、または配列番号:34で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、シグナルペプチドとしての機能を発揮し得るペプチドをコードする塩基配列を含有するDNA For example, SEQ ID NO: 34 DNA containing the base sequence represented by or SEQ ID NO: have nucleotide sequence and nucleotide sequence that hybridizes under highly stringent conditions represented by 34, function as a signal peptide DNA containing the nucleotide sequence encoding a peptide capable of
であれば何れのものでもよい。 It may be of any long. 配列番号:34で表わされる塩基配列とハイブリダイズする塩基配列としては、 SEQ ID NO: The nucleotide sequence hybridizing to the nucleotide sequence represented by 34,
例えば、配列番号:34で表わされる塩基配列と約60 For example, SEQ ID NO: 34 nucleotide sequence represented by about 60
%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約8 % Or more, preferably about 70% or more, more preferably about 8
0%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが用いられる。 0% or more, more preferably about 90% homology and most preferably at the base sequence is used with about 95% homology. より具体的には、本発明の配列番号:17で表わされるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号: More specifically, SEQ ID NO: of the present invention: a DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence represented by 17, SEQ ID NO:
34で表わされる塩基配列を有するDNAなど、配列番号:17で表わされるアミノ酸配列のC末端から7アミノ酸を除いたアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAとしては、配列番号:34で表わされる塩基配列の3'末端から21塩基を除いた塩基配列を有するDNAなどがが用いられる。 A DNA having a nucleotide sequence represented by 34, SEQ ID NO: The DNA having a nucleotide sequence encoding a signal peptide having an amino acid sequence, except for the 7 amino acids from the C-terminus of the amino acid sequence represented by 17, SEQ ID NO: 34 a DNA having a nucleotide sequence except for the 21 bases from the 3 'end of in the base sequence represented by the are used.
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。 Method and the high stringent conditions for hybridization the same examples as described above.

【0049】 [0049]

【発明の実施の形態】本発明のタンパク質、部分ペプチドまたは前駆体タンパク質(以下、本発明のタンパク質と略記する場合がある)をコードするDNAのクローニングの手段としては、(1)本発明のタンパク質をコードするDNAの部分塩基配列を有する合成DNAプライマーを用いて、PCR法によって前記DNAライブラリー等から目的とするDNAを増幅するか、または(2) DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The protein of the present invention, the partial peptide or precursor protein as a means of cloning of the DNA encoding (hereinafter sometimes referred to as the protein of the present invention), (1) the protein of the present invention using synthetic DNA primers containing a part of the base sequence of the DNA encoding either to amplify DNA of interest from the DNA library and the like by PCR, or (2)
適当なベクターに組み込んだDNAと、本発明のタンパク質の一部あるいは全領域をコードするDNA断片もしくは合成DNAを標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別すること、などが挙げられる。 It is screened with the DNA incorporated into an appropriate vector, by hybridization with that part or DNA fragment or synthetic DNA encoding the entire region of the protein of the present invention labeled, and the like. ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クローニング(Molecular Cloning)2nd(J. Sambrook e The method of hybridization, for example, Molecular Cloning (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook e
t al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989)に記載の方法などに従って行われる。 t al., is performed according to the method described in Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。 Further, when a commercially available library is used, it can be carried out according to the method described in the attached instructions. 本発明の部分ペプチドまたはシグナルペプチドをコードするDNAは、自体公知のオリゴヌクレオチドの合成法に従って、製造することもできる。 DNA encoding the partial peptide or signal peptide of the present invention, according to the synthetic methods known per se of the oligonucleotide can also be prepared. DNAの塩基配列の変換(欠失・付加・置換) Conversion of the base sequence of DNA (deletion, addition and substitution)
は、公知のキット、例えば、Mutan TM -G(宝酒造(株))、Mutan TM -K(宝酒造(株))などを用いて、G A known kit, for example, Mutan TM -G (Takara Shuzo), Mutan TM -K (Takara Shuzo) by using a, G
apped duplex法やKunkel法などの自体公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができる。 apped per se known method such as duplex method and Kunkel method or can be carried out according to methods analogous to them. クローン化された本発明のタンパク質をコードするDNA DNA encoding the protein of the invention cloned
は、目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用することができる。 It is or after digestion with a restriction enzyme it is, depending upon purpose or, if desired, can be used by or addition of a linker. 該DNAはその5'末端側に翻訳開始コドンとしてのATGを有し、また3'末端側には翻訳終止コドンとしてのTAA、TGAまたはTAGを有していてもよい。 The DNA at its 5 'have ATG as a translation initiation codon at the end side, the 3' terminus may have TAA, TGA or TAG as a translation termination codon. これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成DNAアダプターを用いて付加することもできる。 These translation initiation codon and translation termination codon may be added using an appropriate synthetic DNA adapter. 本発明のタンパク質をコードするDNAの発現ベクターは、例えば、(イ)本発明のタンパク質をコードするDNAから目的とするDNA断片を切り出し、(ロ) Expression vectors of the DNA encoding the protein of the present invention, for example, excising the desired DNA fragment from the DNA encoding the protein of the present invention (i), (ii)
該DNA断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。 It can be produced by ligating downstream of a promoter in a suitable expression vector DNA fragment.

【0050】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド(例、pBR322,pBR325,pUC12,p [0050] as a vector include plasmids derived form E. coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, p
UC13)、枯草菌由来のプラスミド(例、pUB11 UC13), plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, PUB11
0,pTP5,pC194)、酵母由来プラスミド(例、pSH19,pSH15)、λファージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス,ワクシニアウイルス,バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、p 0, pTP5, pC194), plasmids derived from yeast (eg, pSH19, pSH15), bacteriophages such as λ phage, retroviruses, vaccinia virus, other animal viruses such as baculoviruses, p
A1−11、pXT1、pRc/CMV、pRc/RS A1-11, pXT1, pRc / CMV, pRc / RS
V、pcDNAI/Neoなどが用いられる。 V, such as pcDNAI / Neo is used. 本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。 The promoter used in the present invention, for the host used for gene expression may be any suitable promoter. 例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、CAGプロモーター、SRαプロモーター、SV In the case of using animal cells as the host, CAG promoter, SR alpha promoter, SV
40プロモーター、LTRプロモーター、CMV(サイトメガロウイルス)プロモーター、HSV-TKプロモーターなどが挙げられる。 40 promoter, LTR promoter, CMV (cytomegalovirus) promoter, and the like HSV-TK promoter. これらのうち、CAGプロモーター、SRαプロモーターなどを用いるのが好ましい。 Among these, CAG promoter, to use such SRα promoter preferable. 宿主がエシェリヒア属菌である場合は、trpプロモーター、lacプロモーター、recAプロモーター、λP Lプロモーター、lppプロモーター、T7プロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である場合は、 When the host is Escherichia, trp promoter, lac promoter, recA promoter, .lambda.P L promoter, lpp promoter, T7 promoter, etc. When the host is Bacillus,
SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、pen SPO1 promoter, SPO2 promoter, pen
Pプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、PHO Such as, if the host is a yeast P promoter, PHO
5プロモーター、PGKプロモーター、GAPプロモーター、ADH1プロモーターなどが好ましい。 5 promoter, PGK promoter, GAP promoter, ADH1 promoter is preferable. 宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモーター、P1 When the host is an insect cell, polyhedrin promoter, P1
0プロモーターなどが好ましい。 Such as 0 promoter is preferable.

【0051】発現ベクターには、以上の他に、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリA付加シグナル、選択マーカー、SV40複製オリジン(以下、SV40oriと略称する場合がある)などを含有しているものを用いることができる。 [0051] The expression vector, in addition to the above, an enhancer, a splicing signal, a poly A addition signal, a selection marker, SV40 replication origin and those containing such (hereinafter sometimes abbreviated as SV40ori) it can be used. 選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素(以下、dhfr As the selection marker include dihydrofolate reductase (hereinafter, dhfr
と略称する場合がある)遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子(以下、Amp rと略称する場合がある)、ネオマイシン耐性遺伝子(以下、Neoと略称する場合がある) Sometimes abbreviated as) gene, ampicillin resistant gene (hereinafter sometimes abbreviated as Amp r), neomycin resistant gene (hereinafter sometimes abbreviated as Neo)
等が挙げられる。 Etc. The. dhfr遺伝子はメトトレキセート(MTX)耐性を、NeoはG418耐性を付与する。 dhfr gene and methotrexate (MTX) resistance, Neo confers G418 resistance.
特に、dhfr遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞CHOを用いてdhfr遺伝子を選択マーカーとして使用する場合、目的遺伝子で形質転換された細胞をチミジンを含まない培地によっても選択できる。 In particular, when used as a selection marker the dhfr gene using dhfr gene-deficient Chinese hamster cell CHO, selection can also be free medium cells transformed with the target gene thymidine. また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、タンパク質のN If necessary, a signal sequence suitable for a host, N protein
端末側に付加する。 It is added to the terminal side. 宿主がエシェリヒア属菌である場合は、phoA・シグナル配列、ompA・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、 When the host is a bacterium of the genus Escherichia, phoA signal sequence, such as ompA signal sequence, when the host is Bacillus, alpha-amylase signal sequence, subtilisin signal sequence,
宿主が酵母である場合は、MFα・シグナル配列、SU When the host is yeast, MFalpha · signal sequence, SU
C2・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、例えばインシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。 Such as C2 signal sequence, host when an animal cell, for example, insulin signal sequence, alpha-interferon signal sequence, such as an antibody molecule signal sequence can be utilized, respectively. このようにして構築された本発明のタンパク質をコードするDNAを含有するベクターを細胞に導入することによって形質転換体を製造することができる。 The vector containing the DNA encoding the protein of the present invention thus constructed can be manufactured transformant by introducing into the cell.

【0052】宿主としては、例えばエシェリヒア属菌、 [0052] Examples of the host, for example bacteria belonging to the genus Escherichia,
バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが用いられる。 Bacillus, yeast, insect cells, insects, and animal cells. エシェリヒア属菌の具体例としては、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)K12・DH1 Specific examples of the bacteria belonging to the genus Escherichia, Escherichia coli (Escherichia coli) K12 · DH1
〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. Natl. Acad. Sci. USA),60巻,160 [Professional sheathing's of the National Academy of Saienshiizu-of-the-USA (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 60, pp. 160
(1968)〕,JM103〔ヌクイレック・アシッズ・ (1968)], JM103 [Nukuirekku Acids
リサーチ,(Nucleic Acids Research),9巻,309 Research, (Nucleic Acids Research), 9, pp. 309
(1981)〕,JA221〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー(Journal of Molecular Biolog (1981)], JA221 [Journal of Molecular Biology (Journal of Molecular Biolog
y)〕,120巻,517(1978)〕,HB101 y)], Vol. 120, 517 (1978)], HB101
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー,4 [Journal of Molecular Biology, 4
1巻,459(1969)〕,C600〔ジェネティックス(Genetics),39巻,440(1954)〕などが用いられる。 Volume 1, 459 (1969)], C600 [Genetics (Genetics), 39 vol., 440 (1954)], etc.. バチルス属菌としては、例えばバチルス・サチルス(Bacillus subtilis)MI114〔ジーン,2 The Bacillus, e.g. Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) MI114 [Gene, 2
4巻,255(1983)〕,207−21〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー(Journal of Biochemistr Volume 4, 255 (1983)], 207-21 [Journal of Biochemistry (Journal of Biochemistr
y),95巻,87(1984)〕などが用いられる。 y), 95 vol., 87 (1984)], etc.. 酵母としては、例えば、サッカロマイセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)AH22,AH22 Examples of yeast include Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae) AH22, AH22
- ,NA87−11A,DKD−5D,20B−1 R -, NA87-11A, DKD-5D , 20B-1
2、シゾサッカロマイセス ポンベ(Schizosaccharomy 2, Schizosaccharomyces pombe (Schizosaccharomy
ces pombe)NCYC1913,NCYC2036、ピキア パストリスKM71(Pichia pastoris)などが用いられる。 ces pombe) NCYC1913, NCYC2036, such as Pichia pastoris KM71 (Pichia pastoris) is used.

【0053】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがA [0053] Examples of the insect cells, for example, the virus A
cNPVの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞(Spodop In the case of cNPV, cabbage armyworm larvae derived from cell lines (Spodop
tera frugiperda cell;Sf細胞)、Trichoplusia ni tera frugiperda cell; Sf cells), Trichoplusia ni
の中腸由来のMG1細胞、Trichoplusia niの卵由来のH Of MG1 cells derived from mid-intestine, H derived from egg of Trichoplusia ni
igh Five TM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または igh Five TM cells, cells derived from Mamestra brassicae or
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。 Such as Estigmena acrea-derived cells are used. ウイルスがBmNPVの場合は、蚕由来株化細胞(Bombyx mor If the virus is BmNPV, silkworm-derived cell line (Bombyx mor
i N;BmN細胞)などが用いられる。 i N; BmN cell), etc. is used. 該Sf細胞としては、例えば、Sf9細胞(ATCC CRL1711)、Sf21 As the Sf cells include, for example, Sf9 cell (ATCC CRL1711), Sf21
細胞(以上、Vaughn, JLら、イン・ヴィトロ(in Vit Cell (or more, Vaughn, JL et al., In-Vitoro (in Vit
ro),13, 213-217,(1977))などが用いられる。 ro), 13, 213-217, and (1977)) is used. 昆虫としては、例えばカイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、ネイチャー(Nature),315巻,592(198 As the insect, for example, a larva of Bombyx mori can be used [Maeda et al, Nature (Nature), 315, pp. 592 (198
5)〕。 5)]. 動物細胞としては、例えば、サル細胞COS− Examples of animal cells include monkey cell COS-
7,Vero細胞,チャイニーズハムスター細胞CHO 7, Vero cells, Chinese hamster cell CHO
(以下、CHO細胞と略記),dhfr遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞CHO(以下、CHO(dhf (Hereinafter, CHO cells), dhfr gene deficient Chinese hamster cell CHO (hereinafter, CHO (DHF
- )細胞と略記),L細胞,ミエローマ細胞,ヒトF r -) cells and abbreviated), L cells, myeloma cells, human F
L細胞,293細胞,C127細胞,マウス細胞,BA L cells, 293 cells, C127 cells, mouse cells, BA
LB3T3細胞,Sp-2/O細胞などが用いられる。 LB3T3 cells, Sp-2 / O cells are used.
これらの中でも、CHO細胞、CHO(dhfr - )細胞、293細胞などが好ましい。 Among them, CHO cell, CHO (dhfr -) cells, 293 cells are preferred. 用いる宿主細胞に応じて、一般的な手法を用いて形質転換を行なうことができる。 Depending on the host cell used, it is possible to perform transformation using the general procedure.

【0054】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. Natl. Acad. Sci. USA),69巻,21 [0054] Bacteria belonging to the genus Escherichia can be transformed, for example, professional sheathing's of the National Academy of Saienjiizu-of-the-USA (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 69 vol. , 21
10(1972)やジーン(Gene),17巻,107(1 10 (1972) and Gene (Gene), 17 vol., 107 (1
982)などに記載の方法に従って行なうことができる。 982) can be carried out according to the method described in such as. バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス(Mole Bacteria of the genus Bacillus can be transformed, for example, Molecular and General Genetics (Mole
cular & General Genetics),168巻,111(19 cular & General Genetics), 168, pp. 111 (19
79)などに記載の方法に従って行なうことができる。 79) can be carried out according to the method described in such as.
酵母を形質転換するには、例えば、メッソズ・イン・エンザイモロジー(Methods in Enzymology),194 Yeast can be transformed, for example, Messozu-in-Enzymology (Methods in Enzymology), 194
巻,182−187(1991)、プロシージングズ・ Winding, 182-187 (1991), Pro sheathing's
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. Natl. Acad. Sc Of the National Academy of Saienshiizu-of-the-USA (Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA),75巻,1929(1978)に記載の方法に従って行なうことができる。 i. USA), 75 vol., by the method described in 1929 (1978). 昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ/テクノロジー(Bi Insect cells or insects can be transformed, for example, Bio / Technology (Bi
o/Technology),6, 47-55(1988)などに記載の方法に従って行なうことができる。 o / Technology), 6, can be carried out according to the method described in such as 47-55 (1988). 動物細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊8 新細胞工学実験プロトコール,263−267(1995)(秀潤社発行)、ヴィロロジー(Virology),52巻,456(1973)に記載の方法に従って行なうことができる。 Animal cells can be transformed, for example, Cell Engineering Supplement 8 New Cell Engineering Experiment Protocol, 263-267 (1995) (Shujunsha issued), Viroroji (Virology), 52 vol. A method according to 456 (1973) it can be carried out in accordance with. 発現ベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法〔Graham, FL and van der Eb, AJヴィロロジー(Virology) 52, 456-467(1973)〕、電気穿孔法〔Neumann, E. et al. エンボ・ジャーナル(EMBO J.) As a method for introducing into the expression vector cells, for example, calcium phosphate method [Graham, FL and van der Eb, AJ Viroroji (Virology) 52, 456-467 (1973)], electroporation [Neumann, E. et al. EMBO journal (EMBO J.)
1,841-845(1982)〕等が挙げられる。 1,841-845 (1982)], and the like. このようにして、本発明のタンパク質をコードするDNAを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体が得られる。 Thus, transformants obtained with the expression vector containing the DNA encoding the protein of the present invention have been transformed.

【0055】なお、動物細胞を用いて、本発明のタンパク質を安定に発現させる方法としては、上記の動物細胞に導入された発現ベクターが染色体に組み込まれた細胞をクローン選択によって選択する方法がある。 [0055] Incidentally, by using an animal cell, as a method for protein stably expressing the present invention, a method of selecting by clonal selection of cells into which the expression vector is integrated into the chromosome, which is introduced into the animal cells . 具体的には、上記の選択マーカーを指標にして形質転換体を選択する。 Specifically, transformants are selected using as an index the selection marker. さらに、このように選択マーカーを用いて得られた動物細胞に対して、繰り返しクローン選択を行なうことにより本発明のタンパク質の高発現能を有する安定な動物細胞株を得ることができる。 Furthermore, it is possible in this way with respect to animal cells obtained using selection markers, to obtain a stable animal cell lines with a high expression ability of the proteins of the present invention by repeating the clonal selection. また、dhfr遺伝子を選択マーカーとして用いた場合、MTX濃度を徐々に上げて培養し、耐性株を選択することにより、dhfr In the case of using the dhfr gene as a selectable marker, by culturing gradually increasing the MTX concentration to select resistant strains, dhfr
遺伝子とともに、本発明のタンパク質をコードするDN With the gene, DN encoding a protein of the present invention
Aを細胞内で増幅させて、さらに高発現の動物細胞株を得ることもできる。 The A and amplified in the cell may further obtain an animal cell line highly expressed. 上記の形質転換体を本発明のタンパク質をコードするDNAが発現可能な条件下で培養し、 DNA encoding the protein of the present invention the above transformant is cultured under possible conditions expression,
本発明のタンパク質を生成、蓄積せしめることによって、本発明のタンパク質またはその塩を製造することができる。 Produce the protein of the present invention, by allowed to accumulate, it is possible to produce the protein or salt thereof of the present invention.

【0056】宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。 [0056] Where the host is bacteria belonging to the genus Escherichia or the genus Bacillus, as a medium used for the culture liquid medium is suitable, among which required for the growth of the transformant carbon sources, nitrogen sources, inorganic materials, and the like. 炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。 Examples of the carbon sources include glucose, dextrin, soluble starch, sucrose, etc. The nitrogen sources such as ammonium salts, nitrates, corn steep liquor, peptone, casein, meat extract, soybean cake, potato extract, etc. inorganic or organic substances, etc. Examples of the inorganic materials are calcium chloride, sodium dihydrogen phosphate, and magnesium chloride. また、 Also,
酵母抽出液、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよい。 Yeast extract, vitamins, growth promoting factors etc. may also be added. 培地のpHは約5〜8が望ましい。 pH of the medium is about 5 to about 8. エシェリヒア属菌を培養する際の培地としては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むM9培地〔ミラー(Miller),ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス(Journal of Experiments in Mo As a medium for culturing the bacteria belonging to the genus Escherichia, for example, glucose, M9 medium [Miller (Miller), including casamino acid, Journal of Aix Peri Apartments in Molecular Genetics (Journal of Experiments in Mo
lecular Genetics),431−433,Cold Spring Ha lecular Genetics), 431-433, Cold Spring Ha
rbor Laboratory, New York1972〕が好ましい。 rbor Laboratory, New York1972] is preferred. ここに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、例えば3β−インドリルアクリル酸のような薬剤を加えることができる。 To activate the promoter efficiently necessary here, it is possible to add agents such as 3β--indolyl acrylic acid. 宿主がエシェリヒア属菌の場合、 When the host is bacteria belonging to the genus Escherichia,
培養は通常約15〜43℃で約3〜24時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。 The culture is carried out usually at about 15 to 43 ° C. to about 3 to 24 hours, if necessary, may be aerated or agitated. 宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約30〜40℃で約6〜 When the host is Bacillus, cultivation is about 6 usually about 30 to 40 ° C.
24時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもできる。 It performed 24 hours, with aeration and stirring, if necessary.

【0057】宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホールダー(Burkho [0057] When the host, the transformant is cultivated in yeast, the culture medium, e.g., Burke holder (Burkho
lder)最小培地〔Bostian, KL ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. Natl. Aca lder) minimum medium [Bostian, KL, et al., professional sheathing's of the National Academy of Saienshiizu-of-the-USA (Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA),77巻,4505(1980)〕や0.5%カザミノ酸を含有するSD培地〔Bitter, GA d. Sci. USA), 77 vol., 4505 (1980)] or SD medium [Bitter containing 0.5% casamino acids, GA
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー(Proc. Natl. Acad. Sci. USA),81巻,53 Et al., Professional sheathing's of the National Academy of Saienshiizu-of-the-USA (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 81, pp. 53
30(1984)〕が挙げられる。 It includes 30 (1984)]. 培地のpHは約5〜 The pH of the medium is about 5 to
8に調整するのが好ましい。 Preferably adjusted to 8. 培養は通常約20℃〜35 Culture is usually about 20 ℃ ~35
℃で約24〜72時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。 It performed ℃ about 24 to 72 hours, with aeration or agitation if necessary. 宿主が昆虫細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Medium(Grace, T. The host, the transformant is cultivated in insect cells, the medium, Grace's Insect Medium (Grace, T.
CC,ネイチャー(Nature),195,788(1962))に非動化した10%ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。 CC, Nature (Nature), and 195,788 (1962)) to that appropriate additive such as 10% inactivated bovine serum is used. 培地のpHは約6.2〜6.4に調整するのが好ましい。 The pH of the medium is preferably adjusted to about 6.2 to 6.4. 培養は通常約27℃で約3〜5日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。 Cultivation is carried out generally about 3 to 5 days at about 27 ° C., with aeration or agitation if necessary. 宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約5〜20%の胎児牛血清を含むMEM培地〔サイエンス(Seience),122巻,501(1952)〕, The host, the transformant is cultivated animal cells, as a medium, for example, MEM medium containing about 5 to 20% fetal bovine serum [Science (Seience), 122, pp. 501 (1952)],
DMEM培地〔ヴィロロジー(Virology),8巻,39 DMEM medium [Viroroji (Virology), 8, pp. 39
6(1959)〕,RPMI 1640培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション(The Jounal of the American Medical Associatio 6 (1959)], RPMI 1640 medium [Journal of The American Medical Association (The Jounal of the American Medical Associatio
n)199巻,519(1967)〕,199培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン(Proceeding of the Societ n) 199, pp. 519 (1967)], 199 medium [Proceedings Managing Of The Society For The Biological Medicine (Proceeding of the Societ
y for the Biological Medicine),73巻,1(195 y for the Biological Medicine), 73 vol., 1 (195
0)〕などが用いられる。 0)] and the like can be used. pHは約6〜8であるのが好ましい。 Preferably, the pH is about 6-8. 培養は通常約30℃〜40℃で約15〜72時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。 Cultivation is carried out generally from about 30 ° C. to 40 ° C. for about 15-72 hours, with aeration or agitation if necessary. 特に、C In particular, C
HO(dhfr - )細胞およびdhfr遺伝子を選択マーカーとして用いる場合、チミジンをほとんど含まない透析ウシ胎児血清を含むDMEM培地を用いるのが好ましい。 HO (dhfr -) When using cells and dhfr gene as a selectable marker, it is preferable to use a DMEM medium containing dialyzed fetal bovine serum containing almost no thymidine. 以上のようにして、形質転換体に本発明のタンパク質を生成せしめることができる。 As described above, it can be produced a protein of the present invention to a transformant.

【0058】上記培養物から本発明のタンパク質を分離精製するには、例えば、下記の方法により行なうことができる。 [0058] To separate and purify the protein of the present invention from the culture described above, for example, it can be carried out by the following method. 本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび/または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により本発明のタンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用い得る。 To extract the protein of the present invention from the culture or cells, after cultivation, collected bacteria or cells in a known manner, which was suspended in a suitable buffer, ultrasound, lysozyme and / or freeze-thaw, etc. then disrupted cells or cells by, a method of obtaining a crude extract of the protein of the present invention by centrifugation or filtration may be used as appropriate. 緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどのたんぱく変性剤や、トリトンX−100 TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。 Protein denaturing agent such as buffers urea or guanidine hydrochloride, may contain a surfactant such as Triton X-100 TM. 培養液中にタンパク質が分泌される場合には、培養終了後、それ自体公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。 If the protein is secreted into the culture broth, after completion of the cultivation, separated from the microorganisms or cells and the supernatant in a manner known per se, the supernatant is collected. このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる本発明のタンパク質の精製は、自体公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。 The thus obtained culture supernatant or purification of the protein of the present invention contained in the extract, can be performed by appropriately combining the publicly known methods for separation and purification. これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられる。 These known separating and purifying methods, methods utilizing solubility such as salting-out and solvent precipitation, dialysis, principally the molecular weight of such ultrafiltration, gel filtration, and SDS- polyacrylamide gel electrophoresis methods utilizing a difference of, utilizing a difference in hydrophobicity such as ion-exchange method utilizing a difference in electric charge such as chromatography, methods utilizing specific affinity such as affinity chromatography, reversed phase high performance liquid chromatography method, such as methods utilizing difference in isoelectric point such as isoelectric focusing method is used. かくして得られる本発明のタンパク質が遊離体で得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他の塩に変換することができる。 When the protein of the present invention thus obtained is in a free form, it can be converted into the salt by publicly known methods or modifications thereof to, or known methods (I) is obtained as a salt in the opposite the method analogous thereto, can be converted into a free form or other salts. なお、組換え体が産生する本発明のタンパク質を、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。 Incidentally, the protein of the present invention produced by the recombinant can be treated, by the action of suitable protein-modifying enzyme before or after purification, or optionally modified, the polypeptide may be partially removed. 蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、 The protein-modifying enzyme include trypsin, chymotrypsin, arginyl endopeptidase,
プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。 Protein kinase, glycosidase and the like. かくして生成する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイまたはラジオイムノアッセイなどにより測定することができる。 Thus the presence of the protein of the present invention to be produced, can be determined by an enzyme immunoassay or radio immunoassay using a specific antibody.

【0059】本発明のタンパク質、その部分ペプチド、 [0059] proteins of the present invention, its partial peptide,
前駆体タンパク質またはそれらの塩(以下、本発明のタンパク質等と略記する)に対する抗体は、本発明のタンパク質等を認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。 Precursor protein or a salt thereof (hereinafter referred to as such as proteins of the present invention) antibody to, if antibodies capable of recognizing the protein of the present invention, polyclonal antibodies may be either monoclonal antibodies. さらには、本発明のタンパク質等に対する抗体は、本発明のタンパク質等の活性を中和する活性を有するものであってもよい。 Furthermore, antibodies to the protein, etc. of the present invention may be one having an activity of neutralizing the activity of the protein of the present invention. 本発明のタンパク質等に対する抗体は、本発明のタンパク質等を抗原として用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。 Antibodies against the protein, etc. of the present invention can be a protein, etc. of the present invention used as an antigen, produced according to per se known methods for manufacturing antibodies or antisera.

【0060】〔モノクローナル抗体の作製〕 (a)モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質等は、哺乳動物に対して投与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。 [0060] Preparation of Monoclonal Antibody] (a) protein of manufacturing the present invention monoclonal antibody-producing cells per se or carrier site where the production of antibody is possible by administration to a mammal, is administered with a diluent that. 投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。 In order to potentiate the antibody productivity upon the administration, it may be administered a complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant. 投与は通常2〜6週毎に1回ずつ、計2〜10回程度行なわれる。 Administration usually once every 2 to 6 weeks and 2 to 10 times in total. 用いられる哺乳動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギが挙げられるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。 Mammals to be used include monkeys, rabbits, dogs, guinea pigs, mice, rats, sheep, goats, mice and rats being preferred. モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原を免疫された哺乳動物、例えば、マウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の2〜5日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種の温血動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することができる。 In the preparation of monoclonal antibody-producing cells, antigen immunized mammal, for example, the spleen or lymph node is collected after 2 to 5 days for the selected final immunization individuals observed from a mouse antibody titer, they contain the antibody-producing cells by fusing with warm-blooded animal myeloma cells of the same or different, to give monoclonal antibody-producing hybridoma. 抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質等と抗血清とを反応させたのち、 Measurement of the antibody titer in antisera may, for example, by reacting a later labeled protein or the like and the antiserum,
抗体に結合した標識剤の活性を測定することによりなされる。 Done by measuring the activity of the labeling agent bound to the antibody. 融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー(Nature)、256、495 (197 The fusion known methods, for example, the method of Kohler and Milstein [Nature (Nature), 256,495 (197
5)〕に従い実施することができる。 Can be carried out according to 5)]. 融合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはPEGが用いられる。 Examples of the fusion accelerator are polyethylene glycol (PEG), Sendai virus and the like, preferably PEG is used. 骨髄腫細胞としては、例えば、NS−1、 Examples of the myeloma cells, NS-1,
P3U1、SP2/0、AP−1などの温血動物の骨髄腫細胞などが挙げられるが、P3U1が好ましく用いられる。 P3U1, SP2 / 0, although such warm-blooded animals of myeloma cells, such as AP-1 In particular, P3U1 is preferably employed. 用いられる抗体産生細胞(脾臓細胞)数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は1:1〜20:1程度であり、PEG(好ましくは、PEG1000〜PEG60 A preferred ratio between antibody-producing cells (spleen cells) to the number of myeloma cells to be used 1: 1 to 20: is about 1, PEG (preferably, PEG1000~PEG60
00)が10〜80%程度の濃度で添加され、約20〜 00) is added in a concentration of about 10% to 80%, from about 20
40℃、好ましくは約30〜37℃で約1〜10分間インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。 40 ° C., preferably carried an efficient cell fusion by incubating at about 30 to 37 ° C. to about 1 to 10 minutes.

【0061】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を直接あるいは担体とともに吸着させた固相(例、マイクロプレート)にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体(細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる)またはプロテインAを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインAを吸着させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識したタンパク質等を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げられる。 [0061] While the screening of monoclonal antibody-producing hybridoma Various methods can be used, for example, a solid phase (e.g., microplate) adsorbed either directly or with a carrier protein antigens of the hybridoma culture supernatant was added to and then (when the cells used for the cell fusion are those of mouse, anti-mouse immunoglobulin antibody is used) anti-immunoglobulin antibody labeled with a radioactive substance or an enzyme or protein a and detecting the monoclonal antibody bound to the solid phase was added an anti-immunoglobulin antibody or hybridoma culture supernatant to a solid phase adsorbed protein a, a radioactive substance or an enzyme, such as labeled protein, etc. in addition, and detecting the monoclonal antibody bound to the solid phase It is. モノクローナル抗体の選別は、自体公知あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができるが、通常はHAT(ヒポキサンチン、 The monoclonal antibody can be carried out according to publicly known methods or their modifications, usually HAT (hypoxanthine,
アミノプテリン、チミジン)を添加した動物細胞用培地などで行なわれる。 Aminopterin, thymidine) is carried out in such a medium for animal cells added. 選別および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような培地を用いても良い。 Selection and breeding medium, any medium may be used so far as hybridoma is able to grow. 例えば、1〜20%、好ましくは10〜 For example, 1-20%, preferably 10 to
20%の牛胎児血清を含むRPMI 1640培地、1 RPMI 1640 medium containing 20% ​​fetal bovine serum, 1
〜10%の牛胎児血清を含むGIT培地(和光純薬工業(株))またはハイブリドーマ培養用無血清培地(SF GIT medium containing 10% fetal bovine serum (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), or serum-free medium for hybridoma culture (SF
M−101、日水製薬(株))などを用いることができる。 M-101, or the like can be used Nissui Pharmaceutical Co.). 培養温度は、通常20〜40℃、好ましくは約37 The culture temperature is usually 20 to 40 ° C., preferably about 37
℃である。 ℃ it is. 培養時間は、通常5日〜3週間、好ましくは1週間〜2週間である。 Culture time is usually 5 days to 3 weeks, preferably 1 to 2 weeks. 培養は、通常5%炭酸ガス下で行なうことができる。 Culturing can be carried out normally in 5% CO 2. ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。 Antibody titer of hybridoma culture supernatant can be measured in the same manner as for the determination of serum antibody titer described above.

【0062】(b)モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、通常のポリクローナル抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体(例、DEAE)による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相またはプロテインAあるいはプロテインGなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なうことができる。 [0062] (b) separation and purification of the purified monoclonal antibody of a monoclonal antibody separation and purification of immunoglobulin separation and purification methods similar conventional polyclonal antibody [for example, salting-out, alcohol precipitation, isoelectric point precipitation , electrophoresis, ion exchangers (eg, DEAE) adsorption and desorption, ultracentrifugation, gel filtration, and collecting only an antibody with an activated adsorbent such as an antigen-binding solid phase or protein a or protein G, binding dissociating can be performed according to specific purification method] to obtain the antibody.

【0063】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポリクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じる方法にしたがって製造することができる。 [0063] Polyclonal antibodies of [polyclonal production of antibodies The present invention can be prepared according to publicly known methods or their modifications thereto. 例えば、免疫抗原(タンパク質抗原)とキャリアー蛋白質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に哺乳動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のタンパク質等に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を行なうことにより製造できる。 For example, a complex of immunogen (protein antigen) and a carrier protein, performs immunized similarly mammals for the production of the monoclonal antibody, containing the antibody to the protein, etc. of the present invention from the immunized animal collected to be followed by separation and purification of the antibody. 哺乳動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、 In the complex of immunogen and carrier protein used to immunize a mammal, the mixing ratio of the type and carrier and hapten carrier protein, if the antibody is efficiently produced to the hapten immunized by crosslinking to the carrier may be crosslinked what kind of thing with what kind of proportion. for example,
ウシ血清アルブミン、ウシサイログロブリン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン等を重量比でハプテン1 Hapten bovine serum albumin, bovine thyroglobulin, keyhole limpet hemocyanin, etc. in a weight ratio of 1
に対し、約0.1〜20、好ましくは約1〜5の割合でカップルさせる方法が用いられる。 To about 0.1 to 20, preferably a method for couple is used in about 1-5 ratio. また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。 Further, the coupling of a carrier to hapten, can be used A variety of condensation agents, glutaraldehyde or carbodiimide, maleimide active ester, thiol groups, activated ester reagents containing dithiopyridyl group are used. 縮合生成物は、哺乳動物(例、マウス)に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。 The condensation product, mammals (e.g., mouse) with respect to itself or the carrier to the site that can produce the antibody by the administration with a diluent. 投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。 In order to potentiate the antibody productivity upon the administration, it may be administered a complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant. 投与は、通常約2〜6週毎に1回ずつ、計約3〜10回程度行なうことができる。 Administration is usually made once every about 2 to 6 weeks, it is possible to perform a total of about about 3-10 times. ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された哺乳動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取される。 Polyclonal antibody, the method in the blood of mammals immunized by, ascites, etc., preferably taken from the blood. 抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記ハイブリドーマ培養上清の抗体価の測定と同様にして測定できる。 The polyclonal antibody titer in antiserum can be measured in the same manner as the antibody titer measurement of the hybridoma culture supernatants. ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことができる。 Separation and purification of the polyclonal antibody can be performed according to separation and purification methods of the same immunoglobulin separation and purification of monoclonal antibodies described hereinabove.

【0064】本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたは前駆体タンパク質をコードする塩基配列を含有するDNAまたはmRNA(以下、本発明のDNAまたはm [0064] Proteins of the present invention, DNA or mRNA containing a base sequence encoding the partial peptide or precursor protein (hereinafter, DNA or m of the present invention
RNAと略記する)に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドまたはその誘導体としては、例えば、本発明のDNAまたはmRNAに相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、本発明のタンパク質等の発現を促進し得る作用を有するオリゴヌクレオチドまたはその誘導体であれば、いずれのものであってもよい。 The oligonucleotides or derivatives thereof having a complementary or substantially complementary base sequence to the RNA and abbreviated), for example, complementary to DNA or mRNA of the present invention, or substantially complementary base has the sequence, if the oligonucleotide or derivative thereof has an action capable of promoting the expression of the protein, etc. of the present invention, it may be any ones. 本発明のDNAまたはmRNAに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のDN The nucleotide sequence substantially complementary to the DNA or mRNA of the present invention, for example, DN of the present invention
AまたはmRNAに相補的な塩基配列(すなわち、本発明のDNAまたはmRNAの相補鎖)の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約60%以上、好ましくは約70% Nucleotide sequence complementary to the A or mRNA (i.e., complementary strands of DNA or mRNA of the present invention) total nucleotide sequence or partial nucleotide sequence of about 60% or more, preferably about 70%
以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有する塩基配列などが挙げられる。 More preferably about 80% or more, more preferably 90% or more, most preferably like nucleotide sequence that has about 95% homology. 特に、本発明のDN In particular, DN of the present invention
AまたはmRNAの相補鎖の全塩基配列うち、本発明のタンパク質等のN末端部位をコードする部分の塩基配列(例えば、開始コドン付近の塩基配列など)の相補鎖と約60%以上、好ましくは約70%以上、より好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するオリゴヌクレオチドまたはその誘導体が好適である。 The entire base sequence of the complementary strand of A or mRNA, the nucleotide sequence of the region encoding the N-terminal region of the protein etc. of the present invention (e.g., a nucleotide sequence around the initiation codon) of the complementary strand of about 60% or more, preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably at an oligonucleotide or a derivative thereof having about 95% homology. これらのオリゴヌクレオチドまたはその誘導体は、公知のDNA合成装置などを用いて製造することができる。 These oligonucleotides or derivatives thereof, can be produced using a known DNA synthesizer.

【0065】本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩は、例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性を有している。 [0065] Proteins, its partial peptide or a salt thereof of the present invention, for example, a nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, the physiological activity of forming memories action in the brain ing. したがって、本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩は、さまざまな用途に用いることができる。 Thus, the proteins of the present invention, its partial peptide or a salt thereof can be used in various applications. 以下に、本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩(以下、本発明のタンパク質等と略記する場合がある)、本発明のタンパク質をコードするDN Hereinafter, the proteins of the present invention, its partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes referred to as the protein of the present invention), DN encoding a protein of the present invention
A(以下、本発明のDNAと略記する場合がある)、本発明のタンパク質等に対する抗体(以下、本発明の抗体と略記する場合がある)およびオリゴヌクレオチドまたは誘導体の用途を説明する。 A (hereinafter, sometimes referred to as the DNA of the present invention), an antibody against the protein, etc. of the present invention (hereinafter, sometimes referred to as the antibody of the present invention) and illustrating the use of the oligonucleotide or derivative.

【0066】(1)医薬 本発明のタンパク質等または本発明のDNAは、例えば、本発明のタンパク質をコードする遺伝子の欠損やそれに起因する疾病あるいは本発明のタンパク質の機能の低下やそれに起因する疾病などの治療・予防剤などの医薬として有用である。 [0066] (1) DNA such as a protein or the present invention in the pharmaceutical present invention, for example, diseases caused decreases and that of the function of the protein defects or diseases or invention resulting therefrom of the gene encoding the protein of the present invention it is useful as pharmaceuticals, such as therapeutic or prophylactic agents, such as. 具体的には、本発明のタンパク質等または本発明のDNAは、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、痴呆症、小脳変性症などの治療・予防剤などの医薬として有用である。 Specifically, DNA such as a protein or the invention of the present invention, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dementia, treatment and prevention, such as cerebellar degeneration agents are useful as pharmaceuticals such as. 例えば、生体内において本発明のタンパク質等が減少あるいは欠損しているために、細胞における、本発明のタンパク質等の機能が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる場合に、 For example, to the protein, etc. of the present invention in vivo is reduced or deficient, in a cell, when the function of the protein, etc. of the present invention is sufficiently, or some patients not successfully exerted,
(イ)本発明のDNAを該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質等を発現させることによって、(ロ)細胞に本発明のDNAを挿入し、本発明のタンパク質等を発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、(ハ)本発明のタンパク質等を該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のタンパク質等の役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。 Administering the DNA of (a) the present invention to the patient, by expressing the protein of the present invention in vivo, by inserting the DNA of the present invention (B) cells were expressing the protein, etc. of the present invention later, by transplanting the cells into a patient, (c), such as by administering the protein, etc. of the present invention to the patient, as well the role of the protein, etc. of the present invention in the patient, or be properly exhibited can. 本発明のタンパク質等を上記の医薬として使用する場合は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、または水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。 When using the protein, etc. of the present invention as the pharmaceutical are, for example, tablets which may be sugar coated as necessary, capsules, elixirs, orally, or water or other pharmaceutical as such microcapsules parenterally in the form of injectable preparations such as aseptic solutions or suspensions, and acceptable solution to. 例えば、本発明のタンパク質等を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。 For example, to mix the protein of the present invention physiologically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, in a unit dosage form required for generally accepted pharmaceutical preparations such as binders it can be produced by. これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。 The amount of the active ingredient is intended to ensure that an appropriate dose within the specified range is obtained. 本発明のDNAを上記の治療・ Treatment and the DNA of the present invention described above
予防剤として使用する場合は、該DNAを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って哺乳動物に投与することができる。 When used as a prophylactic agent can be administered the DNA alone or retrovirus vector, adenovirus vector, is inserted into an appropriate vector such as adenovirus-associated virus vector, to a mammal in a conventional manner. 本発明のDNAは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。 DNA of the present invention may also be administered as such or formulated with a physiologically acceptable carrier to assist its uptake by gene gun or through a catheter such as a hydrogel catheter. 本発明のタンパク質等を上記の治療・予防剤として使用する場合は、少なくとも90%、好ましくは95% When using the protein, etc. of the present invention as a therapeutic or prophylactic agents described above, at least 90%, preferably 95%
以上、より好ましく98%以上、さらに好ましくは99 Or more, more preferably 98% or more, more preferably 99
%以上に精製されたものを使用するのが好ましい。 Preferable to use a purified% or more.

【0067】錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。 [0067] Tablets, Additives which can be incorporated into capsules, and the like, for example, gelatin, corn starch, tragacanth, binders such as gum arabic, an excipient such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid swelling agents such as, lubricants such as magnesium stearate, a sweetening agent such as sucrose, lactose or saccharin, a flavoring agent such as peppermint, akamono oil and cherry. 調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 When the unit dosage form is a capsule, it may contain a liquid carrier such as oil to the type of material. 注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。 Sterile compositions for injection can be formulated active substance in vehicle such as water for injection, sesame oil, in accordance with conventional pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending a naturally occurring vegetable oil such as coconut oil. 注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液(例えば、D−ソルビトール、D−マンニトール、塩化ナトリウムなど)などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール(例、エタノール)、ポリアルコール(例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール)、非イオン性界面活性剤(例、ポリソルベート80 TM 、HCO−50)などと併用してもよい。 Examples of an aqueous medium for injection include physiological saline and isotonic solutions containing glucose and other auxiliary agents (e.g., D- sorbitol, D- mannitol, sodium chloride etc.) and may be used with an appropriate dissolution aid , for example, alcohols (e.g., ethanol), polyalcohol (e.g., propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, polysorbate 80 TM, HCO-50) and the like can be used in combination. 油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。 As examples of oily solutions, sesame oil, and soybean oil is used, as a solubilizing agent such as benzyl benzoate, it may be used in combination such as benzyl alcohol. また、緩衝剤(例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液)、無痛化剤(例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど)、安定剤(例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど)、保存剤(例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど)、酸化防止剤などと配合してもよい。 Further, a buffer (e.g., phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agent (e.g., benzalkonium chloride, procaine hydrochloride), stabilizers (e.g., human serum albumin and polyethylene glycol), preservatives agents (e.g., benzyl alcohol, phenol), an antioxidant and the like. 調製された注射液などの医薬組成物は、通常、 The pharmaceutical compositions such as prepared injection solution is usually
適当なアンプルに充填される。 It filled in an appropriate ampoule. 本発明のDNAが挿入されたベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。 DNA has been inserted vector of the present invention is also similarly to the above formulation, generally used parenterally.

【0068】このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、哺乳動物(例えば、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど)に対して投与することができる。 [0068] preparation obtained in this way, since it is safe and low toxic, mammals (e.g., human, rat, mouse, guinea pig, rabbit, sheep, swine, cattle, horses, cats, dogs, monkeys it can be administered to, etc.). 本発明のタンパク質等の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、アルツハイマー病の治療目的で本発明のタンパク質等を経口投与する場合、一般的に成人(60kgとして)においては、一日につき該タンパク質等を約0.1 The dose of the protein of the present invention varies depending on target disease, albeit the difference administered, route for administration, etc. When the protein of the present invention for therapeutic purposes of Alzheimer's disease is orally administered, (60 kg in a) it is about the protein, etc., per day 0.1
mg〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。 Mg~100mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably administered from about 1.0 to 20 mg. 非経口的に投与する場合は、該タンパク質等の1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、アルツハイマー病の治療目的で本発明のタンパク質等を注射剤の形で成人(体重60kgとして)に投与する場合、一日につき該タンパク質等を約0.01〜30mg程度、 In parenteral administration, a single dose of such the protein subject of administration, etc. but the disease, for example, adult proteins etc. of the present invention is administered for therapeutic purposes of Alzheimer's disease ( when administered to a) as the body weight of 60 kg, about 0.01~30mg about the protein, etc., per day,
好ましくは約0.1〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を患部(例、脳)に注射することにより投与するのが好都合である。 Preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably it is convenient to administer by injection of about 0.1~10mg to the affected area (e.g., the brain). 他の動物の場合も、 In the case of other animals,
60kg当たりに換算した量を投与することができる。 It is possible to administer an amount converted per 60 kg.
本発明のDNAも上記と同様にして使用することができる。 DNA of the present invention can also be used in the same manner as described above.

【0069】(2)遺伝子診断剤 本発明のDNAは、例えば、プローブとして使用することにより、哺乳動物(例えば、ヒト、ラット、マウス、 [0069] (2) DNA of the gene diagnostic agent present invention, for example, by using as a probe, a mammal (e.g., human, rat, mouse,
モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど)における本発明のタンパク質等をコードするDNAまたはmRNA(以下、本発明のDN Guinea pigs, rabbits, sheep, pigs, cows, horses, cats, dogs, DNA or mRNA encoding the protein, etc. of the present invention in monkey etc.) (hereinafter, DN of the present invention
AまたはmRNAと略記)の異常(遺伝子異常)を検出することができるので、例えば、本発明のDNAまたはmRNAの損傷、欠損、発現低下あるいは突然変異などの遺伝子診断剤として有用である。 It is possible to detect the abnormality of the A or mRNA for short) (gene abnormality), for example, damage to the DNA or mRNA of the present invention, defect, a genetic diagnostic agent, such as reduced expression or mutation. 本発明のDNAを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションやPCR−SSCP法(ゲノミックス(Genomics),第5巻,874〜879頁(19 DNA The gene diagnosis described above using the present invention, for example, publicly known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics (Genomics), Vol. 5, pp. 874-879 (19
89年)、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・ 89 years), professional sheathing's of the National
アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー(Proceedings ofthe Natinal Academy of Sciences Academy of Saienshiizu Of USA (Proceedings ofthe Natinal Academy of Sciences
of the United States of America),第86巻,27 of the United States of America), 86, pp. 27
66〜2770頁(1989年))などにより実施することができる。 Pp. 66-2770 (1989)) can be carried out by such. 例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより該mRNAの発現低下が検出された場合やPC For example, if and PC decreased expression of the mRNA is detected by Northern hybridization
R−SSCP法によりDNAの突然変異が検出された場合は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、痴呆症、小脳変性症などの疾病である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。 If DNA mutation is detected by the R-SSCP method, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dementia, and diseases such as cerebellar degeneration, or it can be diagnosed that it is highly likely to suffer from these disease in the future.

【0070】(3)本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩の定量 本発明の抗体は、本発明のタンパク質等を特異的に認識することができるので、被検液中の本発明のタンパク質等の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。 [0070] (3) the protein of the present invention, the antibody quantitation present invention, its partial peptide or salts thereof, it is possible to specifically recognize the protein of the present invention, the present invention in the test liquid Determination of protein or the like, can be used in particular, for quantification by sandwich immunoassay. すなわち、本発明は、(i) That is, the present invention is, (i)
本発明のタンパク質等に対する抗体と、被検液および標識化された本発明のタンパク質等とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された本発明のタンパク質等の割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質等の定量法、および(ii)被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された別の本発明の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質等の定量法を提供する。 Measuring an antibody against the protein, etc. of the present invention, the proportion of the protein, etc. of the competitively reacted with the protein, etc. of the present invention in a test sample fluid, labeling, the present invention which is labeled bound to the antibody Determination of the protein of the present invention in a test fluid and a, and (ii) simultaneously or the antibody of another invention as antibodies and labeling of the present invention insolubilized on a test fluid and the carrier After it reacted continuously, to provide a method for the determination of the protein of the present invention in a sample fluid, which comprises measuring the activity of the labeling agent on the insoluble carrier.
上記(ii)の定量法においては、一方の抗体が本発明のタンパク質等のN端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質等のC端部に反応する抗体であることが望ましい。 In the quantification method of the (ii), in one antibody is an antibody recognizing the N-terminal region of the protein etc. of the present invention, that the other antibody is an antibody reacting with the C-terminal region of the protein etc. of the present invention desirable.

【0071】また、本発明のタンパク質等に対するモノクローナル抗体(以下、本発明のモノクローナル抗体と称する場合がある)を用いて本発明のタンパク質等の定量を行なえるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。 [0071] In addition, monoclonal antibodies against the protein, etc. of the present invention quantify addition performed such as proteins (hereinafter, this is sometimes referred to as the monoclonal antibody of the invention) the present invention with reference to, be detected by tissue staining etc. It can also be. これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のF(ab') 2 、Fab'、あるいはFab画分を用いてもよい。 For these purposes, an antibody molecule itself may be used, also, of the antibody molecule F (ab ') 2, Fab ', or may be used Fab fractions. 本発明の抗体を用いる本発明のタンパク質等の定量法は、 特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量(例えば、タンパク質量)に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。 Determination of the protein, etc. of the antibody present invention using the present invention is not subject to limitation, antigen amount in the test solution (e.g., protein content) antibody corresponding to the antigen or antibody - antigen complex amounts detected by chemical or physical means, which if measurement for calculating a standard curve prepared using standard solutions containing known amounts of antigen may be either of the measurement methods. 例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、 For example, nephelometry, the competitive method, immunometric method and sandwich method are suitably used,
感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。 In terms of sensitivity and specificity, particularly preferable to use a sandwich method described below. 標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、 Examples of the labeling agent used in the assay method using labeling substances, radioisotopes, enzymes, fluorescent substances,
発光物質などが挙げられる。 Such as a light-emitting substance, and the like. 放射性同位元素としては、 The radioactive isotope,
例えば、〔 125 I〕、〔 131 I〕、〔 3 H〕、〔 14 C〕などが、上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。 For example, [125 I], [131 I], [3 H], [14 C] and the like, examples of the enzyme, large preferably stable and specific activity, for example, beta-galactosidase, beta-glucosidase, alkaline phosphatase, peroxidase, malate dehydrogenase. 蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセントイソチオシアネートなどが用いられる。 The fluorescent substance, for example, fluorescamine, and fluorescein St. isothiocyanate are used. 発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。 As the light emitting material, for example, luminol, luminol derivatives, luciferin, and lucigenin. さらに、抗体または抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。 Furthermore, the biotin binding with an antibody or antigen to a labeling agent - avidin system may also be used.

【0072】抗原または抗体の不溶化に当っては、物理的吸着を用いてもよく、また通常タンパク質または酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。 [0072] In the immobilization of antigens or antibodies, it may be used physical adsorption, insolubilization ordinary proteins or enzymes or the like, a chemical bond or a method of using used for immobilizing. 担体としては、例えば、アガロース、 Examples of the carrier include agarose,
デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、 Dextran, insoluble cellulose polysaccharides, polystyrene, polyacrylamide, synthetic resin such as silicon,
またはガラス等が用いられる。 Or glass or the like is used. サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ(1次反応)、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ(2次反応)たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本発明のタンパク質量等を定量することができる。 In the sandwich method, a test sample fluid is reacted with monoclonal antibodies of the present invention insolubilized (primary reaction), then further was a monoclonal antibody of the present invention has been labeled by reacting (secondary reaction), on the insoluble carrier the protein content and the like of the present invention in the test fluid by measuring the activity of the labeling agent can be quantified. 1
次反応と2次反応は逆の順序に行なっても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。 Also the next and secondary reactions performed in reverse order or may be performed by shifting the may be performed at the same time time. 標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。 The labeling agent and the method of insolubilization may be the same as those described above. また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体または標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも1種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で2種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。 Further, using the immunoassay by the sandwich method, the antibody used for immobilized or labeled antibodies is not necessarily one kind, a mixture of two or more antibodies for the purpose of improving the measurement sensitivity it may be. 本発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質等の測定法においては、1次反応と2次反応に用いられる本発明の抗体は、本発明のタンパク質等の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。 In the measurement method of the protein, etc. of the present invention by the sandwich method of the present invention, the antibody of the present invention used for the primary and secondary reactions, antibodies that bind to different sites of the protein, etc. of the present invention is preferably used . すなわち、1 In other words, 1
次反応および2次反応に用いられる抗体は、例えば、2 The antibody used in the next reaction and the secondary reaction, for example, 2
次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質等のC The antibodies used in the next reaction, C of the protein, etc. of the present invention
端部を認識する場合、1次反応で用いられる抗体は、好ましくはC端部以外、例えばN端部を認識する抗体が用いられる。 When recognizing the end, the antibody used in the primary reaction is preferably other than the C-terminal portion, the antibody recognizes an example N-terminal region used.

【0073】本発明の抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。 [0073] The antibodies of the present invention a measuring system other than the sandwich method, for example, can be used, such as a competitive method, immunometric method or nephelometry. 競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原(F)と抗体と結合した標識抗原(B)とを分離し(B/F分離)、B, In the competitive method, to separate and After competitively reacted with an antigen and a labeled antigen in a test fluid to an antibody, labeled antigen bound to the unreacted labeled antigen (F) and antibody (B) ( B / F separation), B,
Fいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。 F is measured either labeled amount, to determine the antigen amount in the test solution. 本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、B This reaction method includes a soluble antibody as an antibody, B
/F分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第2抗体などを用いる液相法、および、第1抗体として固相化抗体を用いるか、または、第1抗体は可溶性のものを用い第2抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。 / Polyethylene glycol F separation, a second antibody, such as the use a liquid phase method for the antibodies, and, if using solid phase antibody as the first antibody, or the first antibody is a solid as the second antibody using a soluble and a solid phase method using a phased antibody is used. イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、または、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。 Or In the immunometric method, the solid phase is separated from the liquid phase after are competitively reacted with the antigen and the solid phase antigen in a test fluid a given amount of a labeled antibody or antigen in a test fluid It is reacted with an excess amount of labeled antibody, then conjugated with unreacted labeled antibody to the solid phase then added to immobilized antigen, separating the solid and liquid phases. 次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。 Next, to determine the antigen amount in the test solution was measured amount of the label in either phase. また、ネフロメトリーでは、ゲル内または溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。 Further, in nephelometry, the amount of insoluble precipitate produced after the antigen-antibody reaction in a gel or in solution. 被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にはレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。 The amount of antigen in the test fluid is small, laser nephelometry is preferably used for utilizing laser scattering if only a small amount of precipitate is obtained.

【0074】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。 [0074] For applying the measuring method of the present invention each of these immunological methods, particular conditions or procedures are not required. それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明のタンパク質等の測定系を構築すればよい。 Normal conditions in each method, may be constructed to measure system such as a protein of the present invention to procedure by adding ordinary technical consideration in the art. これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。 For details of these general technical means, review, and the like can be referred to textbooks. 例えば、入江 寛編「ラジオイムノアッセイ〕(講談社、昭和49年発行)、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ〕(講談社、昭和54年発行)、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」(医学書院、昭和53年発行)、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」(第2版)(医学書院、昭和57年発行)、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」(第3版)(医学書院、昭和62年発行)、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem For example, Irie Hiroshihen "radioimmunoassay] (Kodansha, published 1974), Irie Hiroshihen" continued radioimmunoassay] (Kodansha, published 1979), Eiji Ishikawa et al., Eds., "Enzyme Immunoassay" (Igaku Shoin, Showa issued 53 years), Eiji Ishikawa et al., eds., "enzyme immunoassay" (second Edition) (Igaku Shoin, 1982 issue), Eiji Ishikawa et al., eds., "enzyme immunoassay" (third Edition) (Igaku Shoin, Showa 62-year issue), "Methods in ENZYMOLOGY" Vol. 70 (Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem ical Techniques (Part A)), ibid. Vol. 73 (Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem ical Techniques (Part B)), ibid. Vol. 74 (Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem ical Techniques (Part C)), ibid. Vol. 84 (Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Monocl ical Techniques. (Part D: Selected Immunoassays)), ibid. Vol 92 (Immunochemical Techniques (Part E: Monocl
onal Antibodies and General Immunoassay Method onal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part s)), ibid. Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。 s)) (or more, and the like can be referred to published by Academic Press). 以上のようにして、本発明のタンパク質等に対する抗体を用いることによって、本発明のタンパク質等を感度良く定量することができる。 As described above, by using antibodies against the protein, etc. of the present invention, it can be quantified with high sensitivity to the protein of the present invention. さらには、本発明の抗体を用いて本発明のタンパク質等の濃度を定量することによって、本発明のタンパク質等が関与する種々の疾病の診断をすることができる。 Furthermore, by quantifying the level of the protein, etc. of the present invention using the antibody of the present invention, it is possible to diagnose various diseases such as proteins are involved in the present invention. 具体的には、本発明のタンパク質等の濃度の減少が検出された場合は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、痴呆症、小脳変性症などの疾病の可能性が高いと診断することができる。 Specifically, if the reduction in the concentration of the protein etc. of the present invention is detected, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dementia, cerebellar degeneration, etc. it can be diagnosed with a high likelihood of disease. このように、本発明の抗体は、上記疾患の診断剤として有用である。 Thus, antibodies of the present invention is useful as a diagnostic agent for the above diseases. さらに、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発明のタンパク質等を検出するために使用することができる。 Furthermore, antibodies of the present invention can be used to detect the protein, etc. of the present invention to be present in test samples such as body fluids or tissues. また、本発明のタンパク質等を精製するために使用する抗体カラムの作製、 Further, production of antibody columns used to purify the protein of the present invention,
精製時の各分画中の本発明のタンパク質等を検出するために使用することができる。 Protein of the present invention in each fraction during purification can be used to detect.

【0075】(4)各種疾病に対する医薬候補化合物のスクリーニング 本発明のタンパク質等の機能、例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、脳における記憶形成作用などの生理活性を促進する化合物またはその塩は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、痴呆症、小脳変性症などの各種疾病の治療・予防剤として使用できる。 [0075] (4) the function of the protein, etc. Screening invention pharmaceutical candidate compounds against various diseases, for example, nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action, such as a storage form action in the brain compound or its salt that promotes the physiological activity, for example, using Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dementia, as a therapeutic and preventive agent for various diseases such as cerebellar degeneration it can. したがって、本発明のタンパク質等は、本発明のタンパク質またはその塩の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニングのための試薬として有用である。 Thus, protein of the present invention is useful as a reagent for screening the compound or its salt that promotes the function of the protein or a salt thereof of the present invention. すなわち、本発明は、本発明のタンパク質等を用いることを特徴とする本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物(以下、本発明のタンパク質等の機能促進剤と略記する場合がある)のスクリーニング方法を提供する。 That is, the present invention is the screening of compounds which promote the functions of the protein, etc. of the present invention, which comprises using the protein of the present invention (hereinafter sometimes abbreviated as function promoter of the protein, etc. of the present invention) to provide a method. より具体的には、例えば、 More specifically, for example,
(a)(i)本発明のタンパク質等を神経細胞または神経組織に接触させた場合と(ii)本発明のタンパク質等および試験化合物を神経細胞または神経組織に接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のタンパク質等の機能促進剤のスクリーニング方法、および(b)(i)本発明のタンパク質等を脊髄動物に投与した場合と(ii)本発明のタンパク質等および試験化合物を脊髄動物に投与した場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のタンパク質等の機能促進剤のスクリーニング方法を提供する。 The (a) (i) the protein of the present invention is compared with the case where the protein or the like and a test compound with the case in contact with the nerve cells or nerve tissue (ii) the present invention is brought into contact with nerve cells or nerve tissue the screening method of the functional promoter of the protein etc. of the present invention, characterized in that, and (b) (i) such as proteins and test compounds when the protein, etc. of the present invention was administered to vertebrates and (ii) the present invention It provides a method of screening for function promoters such as a protein of the present invention and performing the comparison with when administered to vertebrates. 具体的には、上記スクリーニング方法(a)においては、例えば、(i)と(ii)の場合における、該タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩の中枢神経系などにおける神経伸長作用や、神経再生作用、グリア細胞活性化作用などの生理活性を測定して、比較することを特徴とするものである。 Specifically, in the above screening method (a), for example, the case in the protein, and nerve decompression action in such a partial peptide or the central nervous system of their salts (i) and (ii), nerve regeneration action, by measuring the physiological activity such as glial cell activation action, and is characterized in that comparison. 上記スクリーニング方法(b)においては、例えば、(i)と(ii)の場合における、該タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩の脳における記憶形成作用などを測定して、比較することを特徴とするものである。 In the above screening method (b), for example, and wherein in the cases (i) and (ii), the protein, and assaying the storage formation action in the brain of a partial peptide thereof or a salt thereof, the comparing it is intended to.

【0076】神経細胞としては、例えば、ニューロブラストーマ、グリオーマ細胞またはその雑種細胞(例、N [0076] The neuron, e.g., neuroblastoma, glioma cells or hybrid cells (eg, N
18TG−2、IMR−32、GOTO(例、GOTO 18TG-2, IMR-32, GOTO (eg, GOTO
−P3)、NB1、C6BU−1、U251、KNS4 -P3), NB1, C6BU-1, U251, KNS4
2、KNS81、NG108−15細胞、神経への分化能をもつPC12細胞など)などが用いられる。 2, KNS81, NG108-15 cells, such as PC12 cells with ability to differentiate into nerve) and the like. 神経組織としては、例えば、マウス神経上皮細胞、ラット海馬初代培養細胞、マウス胎児培養プルキンエ細胞、マウス後根神経節などが用いられる。 The nerve tissue, for example, mouse neural epithelial cells, primary culture of rat hippocampal cells, fetal mouse culture Purkinje cells, and mouse dorsal root ganglia used. 試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。 The test compounds include peptides, proteins, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma and the like, there these compounds are novel compounds may be, it may be a known compound. 上記のスクリーニング方法(a)を実施するには、 To carry out the above screening method (a) is
本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはその塩(以下、本発明のタンパク質等と略記する場合がある) Protein of the present invention, its partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes referred to as the protein of the present invention)
を、スクリーニングに適したバッファーに溶解または懸濁することにより本発明のタンパク質等の標品を調製する。 And preparing a preparation such as a protein of the present invention by dissolving or suspending in a buffer appropriate for screening. バッファーには、本発明のタンパク質等と神経細胞・組織との接触を阻害しないバッファー(例えば、pH The buffers, the buffer does not inhibit the contact between the proteins and the like and neural cells and tissues of the present invention (eg, pH
約4〜10(望ましくは、pH約6〜8)のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなど)であればいずれでもよい。 About 4-10 (preferably, pH about 6-8) phosphate buffer, Tris - may be any HCl buffer, etc.). 接触時間は、通常約1日〜10日、好ましくは約7日〜10日である。 The contact time is usually about 1 day to 10 days, preferably about 7 days to 10 days. 接触温度は、通常約37℃である。 Contact temperature is usually about 37 ° C.. 本発明のタンパク質等の中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用は、視覚的神経軸索の伸長の測定、細胞内Ca 2+濃度の変化の測定など常套手段を用いて測定することができる。 Nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as protein or the like of the present invention, glial cell activation effect, measurement of the elongation of the visual nerve axons, a conventional means such as the measurement of changes in intracellular Ca 2+ concentration it can be measured using. 例えば、上記(ii)の場合における神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用などの生理活性が上記(i)の場合に比べて、約20%以上、好ましくは約30%以上、より好ましくは約50%以上、さらに好ましくは70%以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物として選択することができる。 For example, nerve-extending activity or neuroregenerative activity in the above case (ii), physiological activity such as glial cell activation effect as compared with the above (i), about 20% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, more preferably be selected a test compound which promotes more than 70% as a compound that promotes the function of the protein, etc. of the present invention.

【0077】上記のスクリーニング方法(b)を実施するには、本発明のタンパク質等または試験化合物を、例えば、静脈注射、皮下注射、筋肉注射、経口投与などにより、脊椎動物に投与する。 [0077] To carry out the above screening method (b) is a protein, etc. or the test compound of the present invention, for example, intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, such as by oral administration, administered to a vertebrate. 本発明のタンパク質等の投与量は、経口投与の場合、一般的にチンパンジー(体重60kgとして)においては、一日につき約0.1〜1 The dose of the protein of the present invention, in the case of oral administration, in general, chimpanzee (weighing 60 kg), about every day 0.1
00mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mgである。 200 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. 非経口的に投与する場合は、その1回投与量は投与対象、投与方法などによっても異なるが、例えば注射剤の形では通常チンパンジー(体重60kgとして)において、一日につき約0.0 In parenteral administration, the single dose varies depending on subject to be administered, etc. but the method of administration, for example in the form of an injection in the normal chimpanzees (body weight 60 kg), about every day 0.0
1〜30mg程度、好ましくは約0.1〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 About 1 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably it is advantageous to administer about 0.1~10mg intravenously. 他の動物の場合も、 In the case of other animals,
60kg当たりに換算した量を投与することができる。 It is possible to administer an amount converted per 60 kg.
脊椎動物としては、例えば、魚類(例えば、コイ、サケ、ニシン、ニジマス、金魚など)などの他、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなどの哺乳動物などが用いられる。 The vertebrates, for example, fish (e.g. carp, salmon, herring, rainbow trout, goldfish, etc.) other such as human, mouse, rat, rabbit, sheep, swine, cattle, horses, cats, dogs, monkeys, chimpanzees, etc. such as a mammal is used. 本発明のタンパク質等の脳における記憶形成作用は公知の方法、例えば、モーリスの水迷路実験〔Mo Known methods of forming memories act in the brain, such as the proteins of the present invention, for example, Morris water maze experiment [Mo
rris, RGMJ Neurosci. Meth. 11, 47-60(1984)〕 rris, RGMJ Neurosci. Meth. 11, 47-60 (1984)]
などに従って測定することができる。 It can be measured in accordance with such. 例えば、上記(i For example, the above-mentioned (i
i)の場合における記憶形成作用が上記(i)の場合に比べて、約20%以上、好ましくは50%以上、より好ましくは70%以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物として選択することができる。 Memory formation action in the case of i) is compared with the case of the above (i), about 20% or more, preferably 50% or more, promotes the function of the protein, etc. of the present invention more preferably the test compound which promotes more than 70% it can be selected as a compound that.

【0078】本発明のスクリーニング用キットは、本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩を含有するものである。 [0078] The screening kit of the present invention, the protein of the present invention are those containing a partial peptide thereof or a salt thereof. 本発明のスクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。 Examples of the screening kit of the present invention are given below. 〔スクリーニング用試薬〕 測定用緩衝液 ハンクス液 タンパク質標品 本発明のタンパク質またはその塩 神経細胞または神経組織 前記した神経細胞または神経組織を10 4セル/ウェルでイーグルMEM、ハンクス液などを用いて24穴プレートで5%炭酸ガス下、37℃で培養したもの 検出 倒立顕微鏡による観察 〔測定法〕試験化合物を加えたウェルの単位視野あたりの神経軸索を伸ばしている細胞数をカウントし、試験化合物を加えていないコントロールウェルの単位視野あたりの神経軸索を伸ばしている細胞数との有意差検定を行なう。 Eagle [Screening reagent] Assay Buffer Hanks' solution protein preparations of the present invention the protein or a salt thereof nerve cell or nerve tissue the nerve cells or nerve tissue of 10 4 cells / well MEM, by using a Hank's solution 24 under 5% carbon dioxide in well plates, counting the number of cells extending the nerve axons per unit field of view of the well plus observed [measurement method] test compounds according detecting an inverted microscope which was cultured at 37 ° C., the test compound performing significant difference between the number of cells extending the nerve axons per unit field of view of the control wells with no added.

【0079】本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などから選ばれた化合物であり、本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物である。 The compounds or salts thereof obtained using the screening method or screening kit of the present invention, the test compounds described above, for example, peptides, proteins, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, a compound selected from such animal tissue extracts, a compound which promotes the function of the protein, etc. of the present invention. 本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物は、それ自体が中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用などの生理活性を示すことによって本発明のタンパク質等の機能を相加的または相乗的に促進することもあるし、あるいは、それ自体は該生理活性を示さないが本発明のタンパク質等の機能を促進することもある。 Compounds which promote the functions of the protein of the present invention, a nerve-extending activity and nerve regeneration effect in itself central nervous system such as, the function of the protein, etc. of the present invention by showing a physiological activity, such as glial cell activation effect additive or even to sometimes synergistically promote, or itself is also to promote the function of the protein, etc. of but the present invention does not exhibit the physiological activity. 該化合物の塩としては、生理学的に許容される塩基(例、アルカリ金属) The salt of the compound, physiologically acceptable bases (e.g., alkali metals)
や酸(例、有機酸、無機酸)との塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 And acid (e.g., organic acids, inorganic acids) salts with are used, physiologically acceptable acid addition salts. この様な塩としては、例えば無機酸(例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸)との塩、あるいは有機酸(例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、 Examples of such salts include salts with inorganic acids (e.g., hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) and salts with organic acids (e.g., acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid , tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid,
メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸)との塩などが用いられる。 Methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) is used. 本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物またはその塩は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(A Compound or its salt that promotes the function of the protein, etc. of the present invention, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (A
LS)、痴呆症、小脳変性症などの各種疾病に対する安全で低毒性な治療・予防剤などの医薬として有用である。 LS), dementia, it is useful as pharmaceuticals such as safe and low toxic treatment and prophylactic agent for various diseases such cerebellar degeneration.

【0080】本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。 [0080] When the compound obtained by the screening method or screening kit of the present invention as a therapeutic or prophylactic agents described above, it may be used in a conventional manner. 例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、または水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。 For example, tablets which may be sugar coated as necessary, capsules, elixirs, administered orally as microcapsules, or sterile solutions with water or other pharmaceutically acceptable liquid or suspension, parenterally in the form of injectable preparations such as. 例えば、該化合物またはその塩を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。 For example, admixing the compound or a salt thereof a physiologically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, in a unit dosage form required for pharmaceutical practice generally accepted with such binders it can be produced by. これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。 The amount of the active ingredient is intended to ensure that an appropriate dose within the specified range is obtained. これらの錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、注射剤としては、前記した本発明のタンパク質等を含有する治療・ These tablets, capsules, elixirs, microcapsules, Injections, treatment and containing the protein, etc. of the present invention described above
予防剤と同様のものが用いられる。 Those similar to the prophylactic agent is used. このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、哺乳動物(例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど)に対して投与することができる。 Since the thus obtained preparation is safe and low toxic, mammals (e.g., human, mouse, rat, rabbit, sheep, swine, cattle, horses, cats, dogs, monkeys, chimpanzees, etc.) to it can be administered Te. 該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、アルツハイマー病治療の目的で該化合物を経口投与する場合、一般的に成人(体重60kgとして)においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50m The dose of the compound or a salt thereof varies depending on target disease, although administration and the like route, for example, in the case of oral administration of the compound for the purposes of treating Alzheimer's disease, generally an adult (weighing 60kg) in a daily dose of about 0.1~100mg the compound, preferably about 1.0~50m
g、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。 g, more preferably administered from about 1.0 to 20 mg. 非経口的に投与する場合は、該化合物の1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、アルツハイマー病治療の目的で該化合物を注射剤の形で通常成人(60kgとして)に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg程度、好ましくは約0.1 In parenteral administration, the single dose varies depending on subject to be administered of the compound, target disease, etc., adult in the form of an injection of the compound for the purposes of Alzheimer's disease (as 60kg) when administered to about 0.01~30mg about the compound per day, preferably about 0.1
〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 About to 20 mg, more preferably it is advantageous to administer about 0.1~10mg intravenously. 他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。 For other animal species, it is possible to administer an amount converted per 60 kg.

【0081】(5)オリゴヌクレオチドまたはその誘導体 本発明のタンパク質等をコードするDNAまたはmRN [0081] (5) an oligonucleotide or DNA or mRN encoding the protein or the like of its derivatives present invention
Aに相補的に結合し、本発明のDNA、mRNAもしくはタンパク質等の発現を促進することができるオリゴヌクレオチドまたはその誘導体は、生体内における本発明のタンパク質等の機能を促進することができる。 Complementarily binds to A, an oligonucleotide or a derivative thereof is capable of promoting the expression of DNA, mRNA or protein, etc. of the present invention can facilitate the function of the protein, etc. of the present invention in vivo. したがって、該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、痴呆症、小脳変性症などの疾病の遺伝子治療・予防剤などの医薬として使用することができる。 Accordingly, the oligonucleotide or a derivative thereof, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dementia, pharmaceutical, such as gene therapy, prophylactic agent for diseases such as cerebellar degeneration it can be used as. 該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体を上記の治療・予防剤として使用する場合、前記した本発明のタンパク質またはDNAを含有する各種疾病の治療・予防剤と同様にして製造し、哺乳動物に投与することができる。 When using the oligonucleotide or derivative thereof as a therapeutic or prophylactic agent of the above, was prepared in a manner similar to the treatment and prevention agents for various diseases comprising a protein or DNA of the present invention described above, it is administered to a mammal it can. このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、哺乳動物(例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど)に対して投与することができる。 Since the thus obtained preparation is safe and low toxic, mammals (e.g., human, mouse, rat, rabbit, sheep, swine, cattle, horses, cats, dogs, monkeys, chimpanzees, etc.) to it can be administered Te. 該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体を上記の治療・予防剤として使用する場合は、該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体を単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って哺乳動物に投与することができる。 When using the oligonucleotide or derivative thereof as a therapeutic or prophylactic agents described above, it was inserted the oligonucleotide or derivative thereof alone or retrovirus vector, adenovirus vector, into a suitable vector such as adenovirus-associated virus vector after, it can be administered to a mammal in a conventional manner. 該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体は、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。 The oligonucleotide or a derivative thereof can be administered as naked or formulated with a physiologically acceptable carrier to assist its uptake by gene gun or through a catheter such as a hydrogel catheter. さらに、該オリゴヌクレオチドまたはその誘導体は、組織や細胞における本発明のD Furthermore, the oligonucleotide or derivative thereof, D of the present invention in tissues or cells
NAの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。 It can also be used as a diagnostic oligonucleotide probe for investigating the presence or the expression state of NA.

【0082】(6)本発明のタンパク質をコードするD [0082] (6) D encoding the protein of the present invention
NAを有する非ヒト動物の作製 本発明のDNAを用いて、本発明のタンパク質等を発現するトランスジェニック非ヒト動物を作製することができる。 Using DNA Preparation The present invention of a non-human animal having a NA, it is possible to produce a transgenic nonhuman animal that expresses a protein or the like of the present invention. 非ヒト動物としては、哺乳動物(例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど)(以下、動物と略記する)が挙げられるが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。 As the non-human animal, mammal (e.g., rats, mice, rabbits, sheep, swine, bovine, cats, dogs, monkeys, etc.) (hereinafter, abbreviated as animals) but are mentioned, in particular, mice, rabbits and the like it is preferred. 本発明のDNAを対象動物に転移させるにあたっては、該DNA In transfecting the DNA of the subject animal of the present invention, the DNA
を動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有利である。 It is generally advantageous to use a gene construct ligated downstream a promoter capable of expressing in animal cells. 例えば、マウス由来の本発明のDNAを転移させる場合、これと相同性が高い動物由来のプロモーターであって、本発明のDNAを動物細胞で発現させうる各種プロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラクトを、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明のタンパク質等を高産生するD For example, in the case of transfecting the DNA of the present invention derived from mouse, this homology is a promoter derived from a higher animal, the DNA of the present invention a gene construct ligated downstream of various promoters which are capable of expressing in animal cells, for example, D to high producing protein of the present invention by microinjection into fertilized mouse egg
NA転移動物を作出できる。 The NA transgenic animal can be produced. このプロモーターとしては、例えば、ウイルス由来プロモーター、メタロチオネイン等のユビキタスな発現プロモーターも使用することができる。 As the promoter, for example, virus-derived promoter, also ubiquitous expression promoter metallothionein, or the like can be used.

【0083】受精卵細胞段階におけるDNAの転移は、 [0083] transition of DNA in the fertilized egg cell stage,
対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。 It is preserved to be present in all the germ cells and somatic cells of the animal. DNA転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明のタンパク質等が存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞及び体細胞の全てに本発明のタンパク質等を有することを意味する。 The presence of the protein of the present invention in the germ cells in the DNA transfer, the offspring of the prepared animal means having a protein of the present invention in all of all germ and somatic cells. 遺伝子を受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明のタンパク質等を有する。 It inherited the gene progenies of the animal with a protein of the present invention in all germ and somatic cells. 本発明のDNA DNA of the present invention
転移動物は、交配により遺伝子を安定に保持することを確認して、該DNA保有動物として通常の飼育環境で飼育継代を行うことができる。 Transgenic animal is sure to stably hold the gene by mating, it is possible to perform bred in normal breeding environment as the DNA bearing animals. さらに、目的DNAを保有する雌雄の動物を交配することにより、導入遺伝子を相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該D Further, by mating male and female animals harboring the desired DNA, and obtaining a homozygotic animal having the introduced gene in both homologous chromosomes, all descendants said D by mating a male and female of the animal
NAを有するように繁殖継代することができる。 It can be bred to have a NA. 本発明のDNAが転移された動物は、本発明のタンパク質等が高発現させられているので、本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング用の動物などとして有用である。 Animals DNA of the present invention has been transferred, so the protein etc. of the present invention is highly expressed, is useful as a compound or animal for screening of its salt that promotes the function of the protein, etc. of the present invention. 本発明のDNA転移動物を、組織培養のための細胞源として使用することもできる。 The DNA transgenic animal of the present invention can also be used as a cell source for tissue culture. 例えば、本発明のDNA転移マウスの組織中のDN For example, DN of tissues of the DNA transgenic mouse of the present invention
AもしくはRNAを直接分析するかあるいは遺伝子により発現された本発明のタンパク質等が存在する組織を分析することにより、本発明のタンパク質等について分析することができる。 By analyzing the tissue protein, etc. of the present invention expressed by or genetic analyzes directly the A or RNA is present, can be analyzed for protein, etc. of the present invention. 本発明のタンパク質等を有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、例えば、脳や末梢組織のような一般に培養困難な組織からの細胞の機能を研究することができる。 Cells from tissues containing the protein, etc. of the present invention are cultured by the standard tissue culture technique, using these, for example, it is possible to study the function of the cells from the generally difficult to culture tissues such as the brain and peripheral tissues . また、 Also,
その細胞を用いることにより、例えば、各種組織の機能を高めるような医薬の選択も可能である。 By using the cell, for example, selection of pharmaceutical that enhances the functions of various tissues are also possible. また、高発現細胞株があれば、そこから、本発明のタンパク質等を単離精製することも可能である。 Further, if there is a high expressing cell line, from which it is possible to isolate and purify the protein of the present invention.

【0084】本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、IUPAC−IUB [0084] In the specification and drawings, to display such the codes of bases and amino acids, IUPAC-IUB
Commision on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、 Are based on or abbreviations in common use in relevant fields Commision on Biochemical Nomenclature,
その例を下記する。 An example is described below. またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければL体を示すものとする。 Also when an optical isomer may be present in amino acid, it is of the L-configuration, unless otherwise stated. DNA :デオキシリボ核酸 cDNA :相補的デオキシリボ核酸 A :アデニン T :チミン G :グアニン C :シトシン RNA :リボ核酸 mRNA :メッセンジャーリボ核酸 dATP :デオキシアデノシン三リン酸 dTTP :デオキシチミジン三リン酸 dGTP :デオキシグアノシン三リン酸 dCTP :デオキシシチジン三リン酸 ATP :アデノシン三リン酸 EDTA :エチレンジアミン四酢酸 SDS :ドデシル硫酸ナトリウム DNA: deoxyribonucleic acid cDNA: complementary deoxyribonucleic acid A: Adenine T: Thymine G: Guanine C: Cytosine RNA: ribonucleic acid mRNA: messenger ribonucleic acid dATP: deoxyadenosine triphosphate dTTP: deoxythymidine triphosphate dGTP: deoxyguanosine three phosphate dCTP: deoxycytidine triphosphate ATP: adenosine triphosphate EDTA: ethylenediaminetetraacetic acid SDS: sodium dodecyl sulfate

【0085】 Gly :グリシン Ala :アラニン Val :バリン Leu :ロイシン Ile :イソロイシン Ser :セリン Thr :スレオニン Cys :システイン Met :メチオニン Glu :グルタミン酸 Asp :アスパラギン酸 Lys :リジン Arg :アルギニン His :ヒスチジン Phe :フェニルアラニン Tyr :チロシン Trp :トリプトファン Pro :プロリン Asn :アスパラギン Gln :グルタミン pGlu :ピログルタミン酸 [0085] Gly: glycine Ala: alanine Val: valine Leu: leucine Ile: isoleucine Ser: serine Thr: threonine Cys: cysteine ​​Met: methionine Glu: glutamic acid Asp: aspartic acid Lys: lysine Arg: arginine His: histidine Phe: phenylalanine Tyr : tyrosine Trp: tryptophan Pro: proline Asn: asparagine Gln: glutamine pGlu: pyroglutamic acid

【0086】また、本明細書中で繁用される置換基、保護基および試薬を下記の記号で表記する。 [0086] Further, denoted substituents are frequently used herein, the protecting groups and reagents following symbols. Me :メチル基 Et :エチル基 Bu :ブチル基 Ph :フェニル基 TC :チアゾリジン−4(R)−カルボキサミド基 Tos :p−トルエンスルフォニル CHO :ホルミル Bzl :ベンジル Cl 2 −Bzl :2,6−ジクロロベンジル Bom :ベンジルオキシメチル Z :ベンジルオキシカルボニル Br−Z :2−ブロモベンジルオキシカルボニル Cl−Z :2−クロロベンジルオキシカルボニル Boc :t−ブチルオキシカルボニル DNP :ジニトロフェノール Trp :トリチル Bum :t−ブトキシメチル Fmoc :N−9−フルオレニルメトキシカルボニル HOBt :1−ヒドロキシベンズトリアゾール HOOBt :3,4−ジヒドロ−3−ヒドロキシ−4−オキソ− 1,2,3−ベンゾトリアジン HONB :1- Me: methyl group Et: ethyl group Bu: butyl group Ph: phenyl group TC: thiazolidine -4 (R) - carboxamide group Tos: p-toluenesulfonyl CHO: formyl Bzl: benzyl Cl 2 -Bzl: 2,6-dichlorobenzyl Bom: benzyloxymethyl Z: benzyloxycarbonyl Br-Z: 2-bromobenzyloxycarbonyl Cl-Z: 2-chlorobenzyloxycarbonyl Boc: t-butyloxycarbonyl DNP: dinitrophenol Trp: trityl Bum: t-butoxymethyl Fmoc: N-9-fluorenyl methoxy carbonyl HOBt: 1-hydroxybenztriazole HOOBt: 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo - 1,2,3-benzotriazine HONB: 1- ドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド DCC :N、N'−ジシクロヘキシルカルボジイミド Dorokishi-5-norbornene-2,3-dicarboximide DCC: N, N'-dicyclohexylcarbodiimide

【0087】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。 [0087] The sequence identification numbers in the sequence listing of the specification indicates the following sequence. 〔配列番号:1〕本発明のヒトependymin様タンパク質の成熟体のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 1 shows an amino acid sequence of the mature human ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:2〕本発明のラットependymin様タンパク質の成熟体のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 2] This shows the amino acid sequence of the mature body of rat ependymin-like protein of the present invention. 〔配列番号:3〕本発明のマウスependymin様タンパク質の成熟体のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 3 shows an amino acid sequence of the mature mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:4〕本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質およびマウスependym [SEQ ID NO: 4] Human ependymin like protein of the present invention, rat ependymin like protein and mouse ependym
in様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 It shows a common amino acid sequence between the in-like proteins. 〔配列番号:5〕本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質およびマウスependym [SEQ ID NO: 5] human ependymin like protein of the present invention, rat ependymin like protein and mouse ependym
in様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 It shows a common amino acid sequence between the in-like proteins. 〔配列番号:6〕本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質およびマウスependym [SEQ ID NO: 6] Human ependymin like protein of the present invention, rat ependymin like protein and mouse ependym
in様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 It shows a common amino acid sequence between the in-like proteins. 〔配列番号:7〕本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質およびマウスependym [SEQ ID NO: 7] Human ependymin like protein of the present invention, rat ependymin like protein and mouse ependym
in様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 It shows a common amino acid sequence between the in-like proteins. 〔配列番号:8〕本発明のヒトependymin様タンパク質とラットependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 8] This shows the amino acid sequences common to human ependymin like protein and rat ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:9〕本発明のヒトependymin様タンパク質とラットependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 9] This shows the amino acid sequences common to human ependymin like protein and rat ependymin like protein of the present invention.

【0088】〔配列番号:10〕本発明のヒトependymi [0088] [SEQ ID NO: 10] person ependymi of the present invention
n様タンパク質の前駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す。 It shows the amino acid sequence of the precursor protein of the n-like proteins. 〔配列番号:11〕本発明のヒトependymin様タンパク質の前駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 11] This shows the amino acid sequence of the precursor protein of human ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:12〕本発明のラットependymin様タンパク質の前駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 12] This shows the amino acid sequence of the precursor protein of rat ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:13〕本発明のマウスependymin様タンパク質の前駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 13] This shows the amino acid sequence of the precursor protein of a mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:14〕本発明のヒトependymin様タンパク質のシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 14] This shows the amino acid sequence of the signal peptide of human ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:15〕本発明のヒトependymin様タンパク質のシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 15] This shows the amino acid sequence of the signal peptide of human ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:16〕本発明のラットependymin様タンパク質のシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 16] This shows the amino acid sequence of the signal peptide of rat ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:17〕本発明のマウスependymin様タンパク質のシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 17] This shows the amino acid sequence of the signal peptide of mouse ependymin like protein of the present invention.

【0089】〔配列番号:18〕配列番号:1で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [0089] [SEQ ID NO: 18] SEQ ID NO: shows the base sequence of DNA encoding human ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 1. 〔配列番号:19〕配列番号:2で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のラットependyminタンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 19] SEQ ID NO: shows the base sequence of DNA encoding rat ependymin protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 2. 〔配列番号:20〕配列番号:3で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のマウスependyminタンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 20] SEQ ID NO: shows the base sequence of DNA encoding mouse ependymin protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 3. 〔配列番号:21〕配列番号:4で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 21] SEQ ID NO: represented by 4 is shows the nucleotide sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein, rat ependymin like protein and mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:22〕配列番号:5で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 22] SEQ ID NO: represented by 5 shows the nucleotide sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein, rat ependymin like protein and mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:23〕配列番号:6で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 23] SEQ ID NO: 6 is represented by, shows the base sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein, rat ependymin like protein and mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:24〕配列番号:7で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質、ラットependymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 24] SEQ ID NO: 7 is represented by, shows the base sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein, rat ependymin like protein and mouse ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:25〕配列番号:8で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質とラットependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 25] SEQ ID NO: 8 is represented by, shows the base sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein and rat ependymin like protein of the present invention. 〔配列番号:26〕配列番号:9で表わされる、本発明のヒトependymin様タンパク質とラットependymin様タンパク質との共通アミノ酸配列をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 26] SEQ ID NO: 9 represented by shows the nucleotide sequence of the DNA coding for the common amino acid sequence of human ependymin like protein and rat ependymin like protein of the present invention.

【0090】〔配列番号:27〕配列番号:10で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒトependymin様タンパク質の前駆体タンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [0090] [SEQ ID NO: 27] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA encoding the precursor protein of human ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 10. 〔配列番号:28〕配列番号:11で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒトependymin様タンパク質の前駆体タンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 28] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA encoding the precursor protein of human ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 11. 〔配列番号:29〕配列番号:12で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のラットependymin様タンパク質の前駆体タンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 29] SEQ ID NO: shows the base sequence of DNA encoding the precursor protein of rat ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 12. 〔配列番号:30〕配列番号:13で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のマウスependymin様タンパク質の前駆体タンパク質をコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 30] SEQ ID NO: shows the base sequence of DNA encoding the precursor protein of a mouse ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 13. 〔配列番号:31〕配列番号:14で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒトependymin様タンパク質のシグナルペプチドをコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 31] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA coding for the signal peptide of human ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 14. 〔配列番号:32〕配列番号:15で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒトependymin様タンパク質のシグナルペプチドをコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 32] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA coding for the signal peptide of human ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 15. 〔配列番号:33〕配列番号:16で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のラットependymin様タンパク質のシグナルペプチドをコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 33] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA coding for the signal peptide of rat ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 16. 〔配列番号:34〕配列番号:17で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のマウスependymin様タンパク質のシグナルペプチドをコードするDNAの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 34] SEQ ID NO: shows the base sequence of the DNA coding for the signal peptide of mouse ependymin like protein of the present invention having the amino acid sequence represented by 17. 〔配列番号:35〕実施例1において、本発明のヒトe [SEQ ID NO: 35] In Example 1, a human e of the present invention
pendymin様タンパク質をコードするDNAをクローニングするために使用したプローブの塩基配列を示す。 This shows the base sequence of the probe used for cloning the DNA encoding the pendymin like protein.

【0091】後述の実施例1で得られた形質転換体エシェリヒア コリ(Escherichia coli)XL1−Blue [0091] Transformants Escherichia coli obtained in Example 1 below (Escherichia coli) XL1-Blue
/phEDN1−95は、平成8年8月28日から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所(NIBH) / PhEDN1-95 is, the Ministry of International Trade and Industry Agency of Industrial Science and Technology life engineering from August 28, 1996 Industrial Technology Research Institute (NIBH)
に寄託番号FERM BP−5640として、平成8年9月2日から財団法人・発酵研究所(IFO)に寄託番号IFO 16011として寄託されている。 Deposited as number FERM BP-5640, it has been deposited as accession number IFO 16011 in the Institute for Fermentation (IFO) from September 2, 1996 to. 後述の実施例3で得られた形質転換体エシェリヒア コリ(Esch Obtained in Example 3 below transformant Escherichia coli (Esch
erichia coli)SURE/prEDN91−6は、平成8年11月28日から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所(NIBH)に寄託番号FERM BP− erichia coli) SURE / prEDN91-6 is, accession number FERM from November 28, 1996 to the National Institute of Bioscience and Human-Technology (NIBH) BP-
5759として、平成8年9月2日から財団法人・発酵研究所(IFO)に寄託番号IFO 16053として寄託されている。 As 5759, it has been deposited as accession number IFO 16053 in the Institute for Fermentation (IFO) from September 2, 1996. 後述の実施例5で得られた形質転換体エシェリヒア コリ(Escherichia coli)SURE/p Obtained in Example 5 below transformant Escherichia coli (Escherichia coli) SURE / p
mEDN78−13は、平成9年5月20日から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所(NIBH)に寄託番号FERM BP−5949として、平成9年6 mEDN78-13, as the accession number FERM BP-5949 from May 20, 1997 to the National Institute of Bioscience and Human-Technology (NIBH), 1997 6
月4日から財団法人・発酵研究所(IFO)に寄託番号IFO 16090として寄託されている。 It has been deposited as accession number IFO 16090 in the Institute for Fermentation (IFO) from the moon four days.

【0092】 [0092]

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, a more detailed description of the present invention to examples, the present invention is not limited thereto. なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法はモレキュラー・クローニング(Molecular cloning)に記載されている方法に従った。 The gene manipulation using Escherichia coli were performed according to the methods described in Molecular Cloning (Molecular Cloning).

【0093】 [0093]

【実施例1】ヒトependymin様タンパク質をコードするcDNAのクローニング ヒト胎盤由来のポリ(A) + RNA 5μg(クロンテック社)からXhoI部位を末端に持つオリゴ(dT)プライマーとSuperScript II MMLV RNアーゼ H 逆転写酵素(ギブコ・ビーアールエル社)を用いてfirst EXAMPLE 1 oligo (dT) primer having an XhoI site at the end of the poly-derived cloning human placenta cDNA encoding human ependymin like protein (A) + RNA 5μg (Clontech) and SuperScript II MMLV RN RNase H - first using a reverse transcriptase (Gibco BRL)
strandDNAを合成した後、大腸菌DNA ポリメラーゼI、RNアーゼ Hを用いてsecond strandを合成し、ポリ(A) + RNAから2本鎖cDNAを得た。 After synthesizing the StrandDNA, E. coli DNA polymerase I, using the RN RNase H to synthesize Second strand, to obtain a double-stranded cDNA from the poly (A) + RNA.
この2本鎖DNAをPfu DNAポリメラーゼ(ストラタジーン社)で処理し末端を平滑化した後、EcoR After the end processing this double-stranded DNA with Pfu DNA polymerase (Stratagene) was smoothed, EcoR
Iアダプターを付加した。 By adding the I adapter. この両末端にEcoRIアダプターが付加された2本鎖DNAをゲル濾過に付し約1 About 1 subjected double stranded DNA EcoRI adapter was added to the both ends gel filtration
000bp以下のcDNAを除去した後、T4ポリヌクレオチドキナーゼ(宝酒造(株))を用いてEcoRI After removal of the following cDNA 000bp, EcoRI using T4 polynucleotide kinase (Takara Shuzo)
アダプターにリン酸基を導入した。 It was introduced a phosphate group to the adapter. 次に、このcDNA Next, this cDNA
をXhoIで切断した後、λZAPIIEcoRI−Xh After that was cut with XhoI, λZAPIIEcoRI-Xh
oIアーム(ストラタジーン社)に組み込んだ後、in v After incorporating in oI arm (Stratagene), in v
itroパッケージングを行ない、全体で約2.1×10 7 pf It performs itro packaging, total of about 2.1 × 10 7 pf
uのヒト胎盤のcDNAライブラリー(挿入率99%以上)を作製した。 To prepare a cDNA library of u in human placenta (insertion ratio 99%). このうち約3.0×10 6 pfuのcDN CDN of which approximately 3.0 × 10 6 pfu
Aライブラリーのλファージを大腸菌XL1−Blue The λ phage A library of E. coli XL1-Blue
MRF'株に感染させた後、軟寒天プレート上に約2. After infection with the MRF 'strain, about the soft agar plate 2.
5×10 4プラークずつまき、37℃で一晩インキュベートしてプラークを形成させた。 5 × seeded by 10 4 plaques, were formed plaques were incubated overnight at 37 ° C.. プラークをナイロンメンブレンフィルター(ハイボンドN,アマシャム社)上に移した後、変性溶液〔0.5N 水酸化ナトリウム, After transferring the plaque nylon membrane filter (Hybond N, Amersham) on denaturing solution [0.5N sodium hydroxide,
1.5M 塩化ナトリウム〕、中和溶液〔0.5M トリス−塩酸(pH,7.0),1.5M 塩化ナトリウム〕、 1.5M sodium chloride], neutralization solution [0.5M Tris - HCl (pH, 7.0), 1.5M sodium chloride],
2×SSC〔20×SSC=3M 塩化ナトリウム,0. 2 × SSC [20 × SSC = 3M NaCl, 0.
3M クエン酸ナトリウム〕で順次処理し、風乾後、紫外線照射を行ないファージDNAをナイロンメンブレンフィルター上に固定した。 Sequentially treated with 3M sodium citrate], air-dried, and the phage DNA subjected to UV irradiation was fixed on a nylon membrane filter.

【0094】一方、プローブとして配列番号:35で表わされる塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを〔γ− [0094] Meanwhile, SEQ ID NO as a probe: an oligonucleotide having a nucleotide sequence represented by 35 [γ-
32 P〕ATP(デュポン社)とT4ポリヌクレオチドキナーゼ(宝酒造(株))を用いて標識した。 32 P] ATP (DuPont) and T4 polynucleotide kinase (Takara Shuzo Co., Ltd.) was used to label. ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔5×SSPE(20×SSPE=3.6 Hybridization hybridization buffer containing labeled probe [5 × SSPE (20 × SSPE = 3.6
M 塩化ナトリウム,0.2M リン酸ナトリウム(p M sodium chloride, 0.2M sodium phosphate (p
H,7.7),20mMEDTA)、5×Denhardt's H, 7.7), 20mMEDTA), 5 × Denhardt's
液、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA、0.1%SD Liquid, 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA, 0.1% SD
S〕中、65℃でハイブリダイゼーションを行なった。 In S], it was carried out hybridization at 65 ℃.
フィルターは最終的に0.1×SSC,0.1% SDS Filter finally 0.1 × SSC, 0.1% SDS
液中50℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするプラークを検索した。 After washing with 50 ° C. in the liquid, and search for plaques hybridizing with the probe and an autoradiogram. この方法を繰り返して、単一クローンにまで純化したファージクローンλhEDN59,64,82,9 Repeat this method, phage clones λhEDN59,64,82,9 was purified to a single clone
0,91,95,99−2,112の8クローンにそれぞれヘルパーファージを感染させてin vivo切り出しを行ない、pBluescriptSK(−)のEcoRI−Xho 8 clone of 0,91,95,99-2,112 were infected with helper phage each subjected to in vivo excised, pBluescriptSK - EcoRI-Xho of ()
I部位にcDNA断片が挿入されているプラスミドを大腸菌SOLR株に回収し、それぞれphEDN1−5 The plasmid cDNA fragment inserted was collected into E. coli SOLR strain I site, respectively phEDN1-5
9,−64,−82,−90,−91,−95,−99 9, -64, -82, -90, -91, -95, -99
−2,−112を得た。 -2, to obtain a -112. これらのプラスミドを保持している大腸菌株SOLRを培養した後、QIAGEN Plasmid M After culturing E. coli strain SOLR holding these plasmids, QIAGEN Plasmid M
ini Kit(キアゲン社)を用いてプラスミドDNAを精製し、DNA Sequencing Kit(パーキンエルマー社) Plasmid DNA was purified using the ini Kit (Qiagen), DNA Sequencing Kit (Perkin Elmer)
を用いて反応を行ない、挿入されているcDNA断片の塩基配列をDNAシークエンサー377(パーキンエルマー社)を用いて決定した。 Perform the reaction using the nucleotide sequence of the cDNA fragment inserted was determined using DNA Sequencer 377 (Perkin Elmer). このうち、phEDN1− Of these, phEDN1-
95はpoly(A) +鎖を含む2507bp〔図1〕から成るcDNA断片を保持しており、このcDNA断片には24または37アミノ酸のシグナルペプチドを含む22 95 includes a poly (A) + chain holds a cDNA fragment consisting of 2507bp [1] including the signal peptide of 24 or 37 amino acids in the cDNA fragment 22
4アミノ酸からなる新規なタンパク質がコードされていた。 The novel protein consisting of four amino acid has been code. また、このタンパク質にはN型糖鎖付加部位が2カ所存在していた。 Further, N-glycosylation sites in the protein were present two places. このタンパク質は硬骨魚類の脳に存在するependyminと弱い相同性があり、ニジマスのependym This protein has ependymin weak homology present in the brain of a teleost, Ependym rainbow trout
inとは23.6%の相同性を有していた。 And in had a 23.6% homology. さらに、epend In addition, epend
yminsに保存されている4つのシステイン残基の位置はすべて保存されていたことから、このタンパク質はヒト Since the positions of the four cysteine ​​residues that are conserved were all conserved in Ymins, this protein human
ependymin様タンパク質であることが分かった。 It was found to be ependymin-like protein. 一方、 on the other hand,
塩基配列を決定したクローンのうちphEDN1−99 Of the clones sequenced phEDN1-99
−2に挿入されているcDNAでは190 Arg(CG In cDNA is inserted into -2 190 Arg (CG
G)→ 190 Arg(CGT)と1塩基のサイレントな塩基置換がみられ、この塩基については多型性があるものと考えられる。 G) → 190 Arg (CGT) and 1 silent nucleotide base substitution was observed, this base is considered that there is polymorphism. 本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするDNAを保持するプラスミドphEDN1− Plasmid carrying the DNA encoding the human ependymin like protein of the present invention phEDN1-
95を大腸菌(Escherichia coli)XL1−Blue株に導入して、形質転換体大腸菌(Escherichia coli)X 95 was introduced into E. coli (Escherichia coli) XL1-Blue strain, the transformant E. coli (Escherichia coli) X
L1−Blue/phEDN1−95を得た。 To give the L1-Blue / phEDN1-95.

【0095】 [0095]

【実施例2】ヒト各組織のノザンハイブリダイゼーション ヒト各組織のpoly(A) + RNA 2μgをあらかじめブロッティングしてあるメンブレンフィルター(MTN blo EXAMPLE 2 Human Northern hybridization human organizations of each tissue poly (A) + membrane filter the RNA 2 [mu] g is previously blotting (MTN blo
t,クロンテック社)をハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE(20×SS t, Clontech) a hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE (20 × SS
PE=3.6M塩化ナトリウム,0.2M リン酸ナトリウム(pH,7.7),20mM EDTA)、5×Denh PE = 3.6M sodium chloride, 0.2M sodium phosphate (pH, 7.7), 20mM EDTA), 5 × Denh
ardt's液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中、42℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 ARDT's solution, in 0.1% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] was performed prehybridization at 42 ° C.. 一方、プローブとして図1に示されたヒト Meanwhile, human shown in Figure 1 as a probe
ependymin様タンパク質をコードするcDNAのBam cDNA of Bam encoding the ependymin-like protein
HI−SpeI 383bp cDNA断片(図1に示された塩基配列の第643番目〜第1025番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕dCTP(デュポン社)とランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 HI-SpeI 383 bp cDNA fragment (# 643 th to the 1025 th cDNA fragment having the nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) the [alpha-32 P] dCTP (DuPont) and random primer labeling kit (Amersham company) were labeled with. ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50%ホルムアミド、5×SSPE、5× Hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE, 5 ×
Denhardt's液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕を用いて42℃で12時間プレハイブリダイゼーションを行なった後、ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE、5×Denhard Denhardt's solution, 0.1% SDS, after performing 12-hour prehybridization at 42 ° C. with 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA], hybridization hybridization buffer containing labeled probe [50% formamide , 5 × SSPE, 5 × Denhard
t's液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中、42℃で18時間ハイブリダイゼーションを行なった。 t's solution, in 0.1% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] was carried out 18 hours hybridization at 42 ° C.. フィルターは最終的に0.1×SSC The filter was finally in 0.1 × SSC
〔20×SSC=3M 塩化ナトリウム,0.3M クエン酸ナトリウム〕,0.1% SDS液中55℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した。 [20 × SSC = 3M NaCl, 0.3M sodium citrate], washed with 55 ° C. in a 0.1% SDS solution and detected the band hybridizing with the probe and an autoradiogram. その結果、このタンパク質をコードするmRNAの大きさは約2.5kb As a result, the size of the mRNA encoding this protein is about 2.5kb
であり、骨格筋、心臓、脳での発現がもっとも多く、やや少ない発現が前立腺、卵巣、精巣でも観察された。 , And the skeletal muscle, heart, expression in the brain most, slightly less expression was observed prostate, ovary, and testis. また、腎臓では胎児においても発現が観察された〔図6〕。 Also, expressed in fetal was observed in the kidney [6].

【0096】 [0096]

【実施例3】ラットependymin様タンパク質ホモログc [Example 3] rat ependymin-like protein homolog c
DNAのクローニング 8週令雄性Sprague Dawleyラットから全脳を摘出し、グアニジン−イソチオシアネート法によって全RNAを調製した。 Excised Whole brains from cloning 8-week-old male Sprague Dawley rats DNA, guanidine - the total RNA was prepared by the isothiocyanate method. ここで得られた全RNAからオリゴ(dT)スパンカラム(ファルマシア社)によってポリ(A) + RN Here oligo from the total RNA obtained (dT) spun column (Pharmacia) by the poly (A) + RN
A画分を調製した。 It was prepared A fraction. このポリ(A) + RNA 5μgからN N from the poly (A) + RNA 5μg
otI部位を末端に持つオリゴ(dT)プライマーとSu Oligo with otI sites at the ends (dT) primer and Su
perScript II MMLV RNase H -逆転写酵素(ギブコ・ビーアールエル社)を用いてfirst strand DNAを合成した後、大腸菌DNAポリメラーゼI、大腸菌DNAリガーゼ、RNアーゼHを用いてsecond strand DNAを合成し、ポリ(A) + RNAから2本鎖cDNAを得た。 perScript II MMLV RNase H - after synthesizing the first strand DNA using reverse transcriptase (Gibco BRL), was synthesized Second strand DNA using E. coli DNA polymerase I, E. coli DNA ligase, the RN RNase H, to obtain a double-stranded cDNA from the poly (a) + RNA.
この2本鎖DNAをT4 DNAポリメラーゼ(ギブコ・ビーアールエル社)で処理し末端を平滑化した後、S After the end processing this double-stranded DNA with T4 DNA polymerase (Gibco BRL) was smoothed, S
alIアダプターを付加した。 alI by adding the adapter. この両末端にSalIアダプターが付加された2本鎖DNAをNotIで切断した後、ゲル濾過に付し約1000bp以下のcDNAを除去し、λgt22A SalI−NotIアーム(ギブコ・ビーアールエル社)に組み込んだ後、in vitroパッケージングを行ない、全体で約3.4×10 6 pfuのラット脳のcDNAライブラリー(挿入率99%以上)を作製した。 After the double-stranded DNA SalI adapter is added to the both ends were cut with NotI, removing approximately 1000bp following cDNA subjected to gel filtration, incorporated into λgt22A SalI-NotI arm (Gibco BRL) it then performs the in vitro packaging, to prepare a cDNA library of about 3.4 × 10 6 pfu of rat brain total (insertion rate of 99% or more). このうち約2.2×10 6 pfuのcDNAライブラリーのλファージを大腸菌Y1090r -株に感染させた後、軟寒天プレート上に約2.2×10 4プラークずつまき、37℃で一晩インキュベートしてプラークを形成させた。 Of which approximately 2.2 × 10 6 pfu of E. coli λ phage cDNA library Y1090r - after infection with strain, seeded by about 2.2 × 10 4 plaques soft agar plate, incubated overnight at 37 ° C. to form a plaque with. プラークをナイロンメンブレンフィルター(ハイボンドN,アマシャム社)上に移した後、変性溶液〔0.5N 水酸化ナトリウム,1.5M 塩化ナトリウム〕、中和溶液〔0.5M トリス−塩酸(pH,7. After transferring the plaque nylon membrane filter (Hybond N, Amersham) on denaturing solution [0.5N sodium hydroxide, 1.5M sodium chloride], neutralization solution [0.5M Tris - HCl (pH, 7.
0),1.5M 塩化ナトリウム〕、2×SSC〔20× 0), 1.5M sodium chloride], 2 × SSC [20 ×
SSC=3M 塩化ナトリウム,0.3M クエン酸ナトリウム〕で順次処理し、風乾後、紫外線照射を行ない、 SSC = 3M NaCl, treated sequentially with 0.3M sodium citrate], perform air-dried, irradiated with ultraviolet light,
ファージDNAをナイロンメンブレンフィルター上に固定した。 Phage DNA was fixed on a nylon membrane filter.

【0097】一方、プローブとして図1に示されたヒト [0097] On the other hand, human, shown in Figure 1 as a probe
ependymin様タンパクをコードするcDNAのBamH BamH of the cDNA encoding the ependymin-like protein
I−SpeI 383bp cDNA断片(図1に示された塩基配列の第643番目〜第1025番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕dCTP(デュポン社)とランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 I-SpeI 383 bp cDNA fragment (# 643 th to the 1025 th cDNA fragment having the nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) [alpha-32 P] dCTP (DuPont) and random primer labeling kit (Amersham company) were labeled with. ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔5×SSPE、5×Denhardt's液、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA、0.1% SDS〕中65℃でハイブリダイゼーションを行なった。 Hybridization was carried out hybridization buffer containing labeled probe [5 × SSPE, 5 × Denhardt's solution, 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA, 0.1% SDS] was hybridized at 65 ° C. in a. フィルターは最終的に2×SSC,0.1% SDS液中60℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするプラークを検索した。 Filter finally 2 × SSC, washed with 60 ° C. in a 0.1% SDS solution were searched plaques hybridizing with the probe and an autoradiogram. この方法を繰り返して、 Repeat this method,
シングルクローンにまで純化したファージクローンλr Phage clones λr was purified to a single clone
EDN8、56、88、91、100の5クローンからそれぞれファージDNAを抽出し、制限酵素SalI、 Each extract phage DNA from 5 clones EDN8,56,88,91,100, restriction enzyme SalI,
NotIで切断しcDNA断片を切り出した後、pGE After cutting out the cDNA fragment was digested with NotI, pGE
M11Zf(−)のSalI−NotI部位に挿入して、 M11Zf (-) was inserted into the SalI-NotI site of,
それぞれ、prEDN8、56、88、91−6、10 Respectively, prEDN8,56,88,91-6,10
0を得た。 0 was obtained. これらのプラスミドを保持している大腸菌株DH10Bを培養した後、QIAGEN Plasmid Mini Kit After culturing E. coli strain DH10B holding these plasmids, QIAGEN Plasmid Mini Kit
(キアゲン社)を用いてプラスミドDNAを精製し、D Plasmid DNA was purified using a (Qiagen), D
NA Sequencing Kit(パーキンエルマー社)を用いて反応を行ない、挿入されているcDNA断片の塩基配列をDNAシークエンサー377(パーキンエルマー社) NA Sequencing Kit performs reaction using a (Perkin Elmer), DNA Sequencer 377 the nucleotide sequence of the cDNA fragment inserted (Perkin Elmer)
を用いて決定した。 It was determined using. このうち、prEDN91−6はpo Of these, prEDN91-6 is po
ly(A) +鎖を含む2202bp(図2)から成るcDN ly (A) + chain consisting 2202Bp (Figure 2) containing cDN
A断片を保持しており、このcDNA断片には33または34アミノ酸のシグナルペプチドを含む224アミノ酸からなるラットependymin様タンパク質がコードされており、N型糖鎖付加部位は3カ所存在していた。 Holds the A fragment, this is the cDNA fragments and the rat ependymin like protein consisting of 224 amino acids including a signal peptide of 33 or 34 amino acids is encoded, N-glycosylation site was present three locations. ラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列はヒトependym The amino acid sequence of the rat ependymin-like protein human ependym
in様タンパク質と74.6%の相同性を有しており、成熟領域のシステイン残基の位置はすべて保存されていた。 Has an in-like protein and 74.6% of homology, the position of the cysteine ​​residues of the mature region had been saved. 本発明のラットependymin様タンパク質をコードするDNAを保持するプラスミドprEDN91−6を大腸菌(Escherichia coli)SURE株に導入して、形質転換体大腸菌(Escherichia coli)SURE/prED Plasmid prEDN91-6 carrying a DNA encoding rat ependymin like protein of the present invention was introduced into E. coli (Escherichia coli) SURE strain, the transformant E. coli (Escherichia coli) SURE / prED
N91−6を得た。 N91-6 was obtained.

【0098】 [0098]

【実施例4】ラット各組織のノザンハイブリダイゼーション 8週令Sprague Dawleyラット(日本チャールズ・リバー社)から各組織(脳、脊椎、心臓、肝臓、脾臓、胃、小腸、精巣、卵巣、胎盤)を摘出し、グアニジンチオシアネート法によって全RNAを調製した。 [Example 4] Northern hybridization 8-week-old Sprague Dawley rats of rat each organization each organization from (Japan Charles River Co., Ltd.) (brain, spine, heart, liver, spleen, stomach, small intestine, testis, ovary, placenta) a excised and the total RNA was prepared by guanidine thiocyanate method. この全RNAからオリゴ(dT)スパンカラム(ファルマシア社)にかけてポリ(A) + RNAを調製した。 Poly This total RNA subjected oligo (dT) spun column (Pharmacia) (A) + RNA was prepared. このポリ(A) + RNA The poly (A) + RNA
2.5μgを1.2%ホルマリン変性アガロースゲル電気泳動にかけた後、ナイロンメンブレンフィルター(バイオダインB、日本ポール社)にキャピラリーブロッティングにより16時間ブロッティングした。 After applying the 2.5μg to 1.2% formalin denaturing agarose gel electrophoresis, a nylon membrane filter (Biodyne B, Nihon Pall) was 16 hours blotting by capillary blotting. このナイロンメンブレンフィルターを紫外線処理によりブロッティングしたRNAを固定した後、ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE〔20 After fixing the blotted RNA with the nylon membrane filter ultraviolet treatment, a hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE [20
×SSPE=3.6M 塩化ナトリウム,0.2M リン酸ナトリウム(pH,7.7),20mM EDTA〕、5× × SSPE = 3.6M sodium chloride, 0.2M sodium phosphate (pH, 7.7), 20mM EDTA], 5 ×
Denhardt's液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 Denhardt's solution, was carried out Prehybridization with 0.1% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] in 42 ° C.. 一方、プローブとして図2に示されたラットependymin様タンパク質をコードするcDNAのE On the other hand, the cDNA encoding the rat ependymin like protein shown in Figure 2 as a probe E
co47III−PstI 1025bp cDNA断片(図2に示された塩基配列の第111番目〜第1135 co47III-PstI 1025bp cDNA fragment (# 111 th nucleotide sequence shown in Figure 2, second 1135
番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕 Th cDNA fragments) having the nucleotide sequence [alpha-32 P]
dCTPとランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 It was labeled with dCTP and a random primer labeling kit (Amersham). ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE、5×Denhardt' Hybridization hybridization buffer [50% formamide containing labeled probe, 5 × SSPE, 5 × Denhardt '
s液、0.5% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子D s solution, 0.5% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm D
NA〕中42℃で16時間ハイブリダイゼーションを行なった。 It was carried out 16 hours hybridization in NA] in 42 ° C.. フィルターは最終的に0.1×SSC,0.1% Filter finally 0.1 × SSC, 0.1%
SDS液中50℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した〔図7〕。 After washing with SDS solution 50 ° C., to detect the band hybridizing with the probe an autoradiogram [7]. その結果、約2.4kbの大きさのm As a result, approximately 2.4kb size of m
RNAが脳、脊椎および心臓で多く発現しており、卵巣および妊娠17.5日目の胎盤でも弱く発現していた。 RNA is the brain, has been highly expressed in the spine and heart, were weakly expressed in ovary and 17 of gestation. Fifth day of the placenta.

【0099】 [0099]

【実施例5】マウスependymin様タンパク質cDNAのクローニング 8週齢雄性C57 BL/6Nマウス(日本 Charles Ri [Example 5] mouse cloning of ependymin-like protein cDNA 8-week-old male C57 BL / 6N mice (Japan Charles Ri
ver社)を断頭により瞬時に屠殺した後脊髄を摘出し、a ver Co., Ltd.) was excised spinal cord after slaughter in an instant by decapitation, a
cid−phenol guanidine chloroform法によって全RNA Total RNA by cid-phenol guanidine chloroform method
を調製した。 It was prepared. ここで得られた全RNAからオリゴ(d Oligo from the total RNA obtained here (d
T)セルロースカラム(ファルマシア社)によってポリ(A) + RNA画分を調製した。 Poly (A) + a RNA fraction was prepared by T) cellulose column (Pharmacia). このポリ(A) + RNA The poly (A) + RNA
5μgからXhoI部位を末端に持つオリゴ(dT) Oligo with XhoI site at the end of 5 [mu] g (dT)
プライマーとSuperScript II MMLV RNase H -逆転写酵素(ギブコ・ビーアールエル社)を用いて first strand Primer and SuperScript II MMLV RNase H - first strand using reverse transcriptase (Gibco BRL)
DNAを合成した後、大腸菌DNAポリメラーゼI、R After synthesizing the DNA, E. coli DNA polymerase I, R
NアーゼHを用いて second strand DNAを合成し、 It was synthesized Second strand DNA using N RNase H,
ポリ(A) + RNAから2本鎖cDNAを得た。 To obtain a double-stranded cDNA from the poly (A) + RNA. この2 This 2
本鎖DNAをPfu DNA ポリメラーゼ(ストラタジーン社)で処理し末端を平滑化した後、EcoRIアダプターを付加した。 After the processing end of the stranded DNA with Pfu DNA polymerase (Stratagene) was smoothed, it was added EcoRI adapters. この両末端にEcoRIアダプターが付加された2本鎖DNAにT4ポリヌクレオチドキナーゼ(宝酒造)を用いてEcoRIアダプターにリン酸基を導入した。 Was introduced phosphate groups to EcoRI adapters with the double-stranded DNA in T4 polynucleotide kinase EcoRI adapter was added to the both ends (Takara Shuzo). このcDNAをXhoIで消化した後、 After the cDNA was digested with XhoI,
ゲル濾過に付し約400bp以下のcDNAを除去し、 About 400bp following cDNA subjected to gel filtration to remove,
λZAP II EcoRI−XhoIアーム(ストラタジーン社)に組み込んだ。 It was incorporated into λZAP II EcoRI-XhoI arm (Stratagene). この組換え体ファージDNAを The recombinant phage DNA
in vitro パッケージングを行ない、全体で約2.9× Subjected to in vitro packaging, about 2.9 × as a whole
10 6 pfuのマウス脊髄cDNAライブラリー(挿入率99%以上)を作製した。 10 6 pfu of mouse spinal cord cDNA library (inserted more than 99%) was prepared. このcDNAライブラリーのλファージを大腸菌XL1−Blue MRF'株に感染させた後、軟寒天プレート上に約2.7×10 4プラークずつまき、37℃で一晩インキュベートしてプラークを形成させた。 Then the λ phage cDNA library was infected into E. coli XL1-Blue MRF 'strain were plated by about 2.7 × 10 4 plaques soft agar plates and allowed to form overnight incubation to plaque at 37 ° C. . プラークをナイロンメンブレンフィルター(ハイボンドN + ,アマシャム社)上に移した後、変性溶液〔0.5N 水酸化ナトリウム,1.5M 塩化ナトリウム〕、中和溶液〔0.5M トリス−塩酸(pH7. Plaques nylon membrane filter (Hybond N +, Amersham) was transferred onto denaturing solution [0.5N sodium hydroxide, 1.5M sodium chloride], neutralization solution [0.5M Tris - HCl (pH 7.
0),1.5M 塩化ナトリウム〕、2×SSC〔20× 0), 1.5M sodium chloride], 2 × SSC [20 ×
SSC=3M 塩化ナトリウム,0.3M クエン酸ナトリウム〕で順次処理し、風乾後、紫外線照射を行ないファージDNAをナイロンメンブレンフィルター上に固定した。 SSC = 3M NaCl, successively treated with 0.3M sodium citrate], air-dried, and the phage DNA subjected to UV irradiation was fixed on a nylon membrane filter.

【0100】一方、プローブとして図2に示されたラットependymin様タンパク質をコードするcDNAのEc [0100] On the other hand, Ec of the cDNA encoding the rat ependymin like protein shown in Figure 2 as a probe
o47 III−PstI 1025bp cDNA断片(図2に示された塩基配列の第111番目〜第1135番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕dC o47 III-PstI 1025bp cDNA fragment (the nucleotide sequence shown in Figure 2 111 th to the 1135 th cDNA fragment having the nucleotide sequence) [alpha-32 P] dC
TP(デュポン社)とランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 It was labeled with TP (DuPont) and random primer labeling kit (Amersham). ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔5×SSPE、5×Denhardt's液、100 Hybridization buffer containing labeled probe hybridization [5 × SSPE, 5 × Denhardt's solution, 100
μg/ml 熱変性サケ精子DNA、0.5% SDS〕中6 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA, 0.5% SDS] in 6
5℃でハイブリダイゼーションを行なった。 It was subjected to hybridization at 5 ℃. フィルターは最終的に0.2×SSC,0.1% SDS液中50℃ Filter finally 0.2 × SSC, 50 ℃ in 0.1% SDS solution
で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするプラークを検索した。 After washing in, it was searched plaques hybridizing with the probe and an autoradiogram. この方法を繰り返して、シングルクローンにまで純化したファージクローンλmEDN4,8,30,32,47,5 Repeat this method, phage clones λmEDN4,8,30,32,47,5 was purified to a single clone
1,59,66,68,77,78,81,85,9 1,59,66,68,77,78,81,85,9
8,99の15クローンにそれぞれヘルパーファージを感染させてin vivo 切り出しを行ない、pBluescript S To 15 clones of 8,99 it was infected with helper phage each subjected to in vivo excised, pBluescript S
K(−)のEcoRI−XhoI部位にcDNA断片が挿入されているプラスミドを大腸菌XLOLR株に回収し、それぞれpmEDN4−1,8−1,30−3,3 K (-) plasmids cDNA fragment inserted was collected into E. coli XLOLR strain in EcoRI-XhoI sites of each pmEDN4-1,8-1,30-3,3
2−5,47−3,51−5,59−7,66−7,6 2-5,47-3,51-5,59-7,66-7,6
8−9,77−11,78−13,81−15,85− 8-9,77-11,78-13,81-15,85-
9,98−17,99−19を得た。 9,98-17,99-19 was obtained. これらのプラスミドのうちpmEDN4−1,8−1,32−5,47− Out of these plasmids pmEDN4-1,8-1,32-5,47-
3,59−7,66−7,68−9,77−11,78 3,59-7,66-7,68-9,77-11,78
−13,81−15,99−19をそれぞれ保持している大腸菌株XLOLRを培養した後、QIAGEN Plasmid M After culturing E. coli strain XLOLR holding respectively -13,81-15,99-19, QIAGEN Plasmid M
ini Kit(キアゲン社)を用いてプラスミドDNAを精製し、DNA Sequencing Kit(パーキンエルマー社) Plasmid DNA was purified using the ini Kit (Qiagen), DNA Sequencing Kit (Perkin Elmer)
を用いて反応を行ない、挿入されているcDNA断片の塩基配列をDNAシークエンサー377(パーキンエルマー社)を用いて決定した。 Perform the reaction using the nucleotide sequence of the cDNA fragment inserted was determined using DNA Sequencer 377 (Perkin Elmer). このうち、pmEDN78 Of these, pmEDN78
−13はpoly(A) +鎖を含む2403bp(配列番号:図3)から成るcDNA断片を保持しており、このcDNA断片には30もしくは37アミノ酸のシグナルペプチドを含む224アミノ酸から成るマウスependy -13 2403Bp including the poly a (A) + chain: holds the cDNA fragment consisting of (SEQ ID NO: 3), murine consisting 224 amino acids including a signal peptide of 30 or 37 amino acids in the cDNA fragment ependy
min様タンパク質がコードされていた。 min-like proteins have been code.

【0101】一方、塩基配列を決定したクローンのうち、pmEDN32−5,47−3,77−11,78 [0102] On the other hand, among the clones sequenced, PmEDN32-5,47-3,77-11,78
−13,81−15,99−19は、pmEDN78− -13,81-15,99-19 is, pmEDN78-
13と同じ位置にpoly(A) +鎖が付加されていたが、pm Poly in the same position as 13 (A) + chain had been added but, pm
EDNpmEDN4−1,8−1,59−7,66− EDNpmEDN4-1,8-1,59-7,66-
7,68−9はpmEDN78−13より上流のpoly 7,68-9 is upstream of the pmEDN78-13 poly
(A) +付加シグナルを認識することにより、3'非翻訳領域が113bp短くなったcDNA断片を保持していた。 By recognizing the (A) + addition signal, 3 'untranslated regions have held the cDNA fragments shorter 113 bp. マウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列はラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列と91.1 The amino acid sequence of the mouse ependymin-like protein and the amino acid sequence of the rat ependymin-like protein 91.1
%、ヒトependymin様タンパク質と74.4%の相同性を有しており、成熟領域のシステイン残基の位置、および2カ所のN型糖鎖付加部位はすべて保存されていた。 %, It has a human ependymin like protein and 74.4% homology, the position of the cysteine ​​residues of the mature region, and N-glycosylation sites of two positions had been saved. 本発明のマウスependymin様タンパク質をコードするDN DN encoding the mouse ependymin-like protein of the present invention
Aを保持するプラスミドpmEDN78−13を大腸菌(Escherichia coli)SURE株に導入して、形質転換体大腸菌(Escherichia coli)SURE/pmEDN7 By introducing a plasmid pmEDN78-13 to hold the A to E. (Escherichia coli) SURE strain, the transformant E. coli (Escherichia coli) SURE / pmEDN7
8−13を得た。 8-13 was obtained.

【0102】 [0102]

【実施例6】マウス各組織のノザンハイブリダイゼーション 8週齢C57 BL/6Nマウス(日本チャールズ・リバー社)から各組織(脳、脊髄、肺、肝臓)を摘出し、 [Example 6] mouse Northern hybridization 8-week-old C57 BL / 6N mice of each organization each organization from (Japan Charles River Co., Ltd.) (brain, spinal cord, lung, liver) were removed,
acid−phenol guanidine chloroform法によって全RN All RN by acid-phenol guanidine chloroform method
Aを調製した。 It was prepared A. この total RNAからオリゴ(dT) From this total RNA oligo (dT)
スパンカラム(ファルマシア社)にかけて poly(A) + Poly over the span column (Pharmacia) (A) + R
NAを調製した。 The NA was prepared. この poly(A) + RNA2.5μgを1. The poly (A) + RNA2.5μg 1.
2%ホルマリン変性アガロースゲル電気泳動にかけた後、ナイロンメンブレンフィルター(日本ポール社,Bi After being subjected to a 2% formalin denaturing agarose gel electrophoresis, a nylon membrane filter (Nihon Pall, Bi
odyne B)にキャピラリーブロッティングにより19時間ブロッティングした。 19 hours blotting by capillary blotting odyne B). このナイロンメンブレンフィルターに紫外線処理によりブロッティングしたRNAを固定した後、ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% After fixing the blotted RNA by UV treatment in this nylon membrane filter, hybridization buffer [50%
ホルムアミド、5×SSPE〔20×SSPE=3.6 Formamide, 5 × SSPE [20 × SSPE = 3.6
M 塩化ナトリウム,0.2M リン酸ナトリウム(pH M sodium chloride, 0.2M sodium phosphate (pH
7.7),20mM EDTA〕、5×Denhardt's 液、0. 7.7), 20 mM EDTA], 5 × Denhardt's solution, zero.
5% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 5% SDS, was performed prehybridization at 42 ° C. in 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA]. 一方、プローブとしてマウスependymin様タンパク質をコードするcDNAのSpeI 799bpcDNA断片(図3に示された塩基配列の第198番目〜第996番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕d On the other hand, the cDNA encoding mouse ependymin like protein as a probe SpeI 799BpcDNA fragment (198 th to the 996 th cDNA fragment having the nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in FIG. 3) [alpha-32 P] d
CTPとランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 It was labeled with CTP and random primer labeling kit (Amersham). ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE、5×Denhardt' Hybridization hybridization buffer [50% formamide containing labeled probe, 5 × SSPE, 5 × Denhardt '
s 液、0.5% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃で18時間ハイブリダイゼーションを行なった。 s solution, was carried out 18 hours hybridization in 0.5% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] in 42 ° C.. フィルターは最終的に 0.1×SSC,0. The filter was finally in 0.1 × SSC, 0.
1% SDS液中50℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した。 After washing with 50 ° C. in 1% SDS solution and detected the band hybridizing with the probe and an autoradiogram. その結果、約2.4kbの大きさのmRNA As a result, approximately 2.4kb size of mRNA
が脊髄で最も多く、次いで脳で多く発現しているのがわかった。 There most spinal cord, and then found that are highly expressed in the brain. また、肺でも弱く発現しているのが観察された〔図8〕。 Moreover, what it was weakly expressed in the lung was observed [Figure 8].

【0103】 [0103]

【実施例7】ヒト中枢神経系各部位のノザンハイブリダイゼーション ヒトの脳の各部位の poly(A) + RNA 2μgをあらかじめブロッティングしてあるメンブレンフィルター(M Example 7 of the human central nervous system Northern hybridization person of each part of each part of the brain poly (A) + membrane filter the RNA 2 [mu] g is previously blotting (M
TN blot,クロンテック社)を、ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE TN blot, Clontech), hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE
〔20×SSPE=3.6M 塩化ナトリウム,0.2M [20 × SSPE = 3.6M NaCl, 0.2 M
リン酸ナトリウム(pH7.7),20mMEDTA〕、 Sodium phosphate (pH 7.7), 20 mM EDTA],
5×Denhardt's 液、0.5% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 5 × Denhardt's solution, was carried out Prehybridization with 0.5% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] in 42 ° C.. 一方、プローブとしてヒトependymi On the other hand, human ependymi as a probe
n様タンパク質をコードするcDNAのBamHI−S BamHI-S of the cDNA encoding the n-like protein
peI 383bp cDNA断片(図1に示された塩基配列の第643番目〜第1025番目の塩基配列を有するcDNA断片)を〔α− 32 P〕dCTP(デュポン社)とランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 PEI 383 bp cDNA fragment (cDNA fragment having a # 643 th to the 1025 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) [alpha-32 P] dCTP (DuPont) and random primer labeling kit (Amersham) It was labeled with. ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE、5×Denha Hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE, 5 × Denha
rdt's 液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕を用いて42℃で12時間プレハイブリダイゼーションを行なった後、ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔50%ホルムアミド、5×SSPE、5×Denhardt's rdt's solution, 0.1% SDS, after performing 12-hour prehybridization at 42 ° C. with 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA], hybridization hybridization buffer containing labeled probe [50% formamide , 5 × SSPE, 5 × Denhardt's
液、0.1% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子D Liquid, 0.1% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm D
NA〕中42℃で18時間ハイブリダイゼーションを行なった。 It was carried out 18 hours hybridization in NA] in 42 ° C.. フィルターは最終的に 0.1×SSC〔20× Filter finally 0.1 × SSC [20 ×
SSC=3M 塩化ナトリウム,0.3M クエン酸ナトリウム〕,0.1% SDS液中55℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した〔図9〕。 SSC = 3M NaCl, 0.3M sodium citrate], washed with 55 ° C. in a 0.1% SDS solution and detected the band hybridizing with the probe and an autoradiogram [9]. その結果、中枢神経系のほとんどの部位でこのmRNAは発現しており神経組織において重要な働きをしていることが判明した。 As a result, the mRNA was found to play an important role in the expression to which neural tissue in most parts of the central nervous system.

【0104】 [0104]

【実施例8】ヒトependymin様タンパクを発現しているヒト培養細胞の探索 ヒトependymin 様タンパクの機能を調べる上で必要なヒト培養細胞の探索を実施例2と同様の方法でノザンハイブリダイゼーションを行なって調べた。 Performing Northern hybridization in Example 8 Human ependymin like exploring Example 2 In the same manner as in cultured human cells necessary in terms of protein expressing it has examined the functions of the search human ependymin-like protein in human cultured cells It was examined Te. 各種神経系、グリア系の細胞を培養し、acid−phenol guanidine chlor Various nervous system, the cells of the glial system and culture, acid-phenol guanidine chlor
oform法によって全RNAを調製した。 Total RNA was prepared by oform method. この全RNAからオリゴ(dT)スパンカラム(ファルマシア社)によってポリ(A) + RNAを調製した。 This was prepared poly (A) + RNA by the total RNA from oligo (dT) spun column (Pharmacia). このポリ(A) + The poly (A) + R
NA 2.5μgを1.5%ホルマリン変性アガロースゲル電気泳動にかけた後、ナイロンメンブレンフィルター(日本ポール社,Biodyne B)にキャピラリーブロッティングにより16時間ブロッティングした。 After applying the NA 2.5 [mu] g to 1.5% formalin denaturing agarose gel electrophoresis, a nylon membrane filter (Nihon Pall, Biodyne B) was 16 hours blotting by capillary blotting. このナイロンメンブレンフィルターに紫外線処理によりブロッティングしたRNAを固定した後、ハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、5×SSPE〔20 After fixing the blotted RNA by UV treatment in this nylon membrane filter, hybridization buffer [50% formamide, 5 × SSPE [20
×SSPE=3.6M塩化ナトリウム,0.2M リン酸ナトリウム(pH7.7),20mM EDTA〕、5×De × SSPE = 3.6M sodium chloride, 0.2M sodium phosphate (pH 7.7), 20 mM EDTA], 5 × De
nhardt's 液、0.5% SDS、100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 Nhardt's solution, was carried out Prehybridization with 0.5% SDS, 100μg / ml heat denatured salmon sperm DNA] in 42 ° C.. 一方、プローブとしてヒトependymin様タンパク質をコードするcDNAのSpeI−HindII On the other hand, SpeI-HindII of cDNA encoding human ependymin like protein as a probe
I 646bp cDNA断片(図1に示された塩基配列の第1022番目〜第1667番目の塩基配列を有するcDNA)を〔α− 32 P〕dCTPとランダムプライマーラベリングキット(アマシャム社)を用いて標識した。 Were labeled with I 646 bp cDNA fragment (cDNA having first 1022 th to the 1667 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) the [alpha-32 P] dCTP and a random primer labeling kit (Amersham) . ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔50% ホルムアミド、 Hybridization hybridization buffer containing labeled probe [50% formamide,
5×SSPE、5×Denhardt's 液、0.5% SDS、 5 × SSPE, 5 × Denhardt's solution, 0.5% SDS,
100μg/ml 熱変性サケ精子DNA〕中42℃で18 100 [mu] g / ml heat denatured salmon sperm DNA] in 42 ° C. at 18
時間ハイブリダイゼーションを行なった。 It was carried out time hybridization. フィルターは最終的に0.1×SSC,0.1% SDS液中50℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した。 Filter finally 0.1 × SSC, washed with 50 ° C. in a 0.1% SDS solution and detected the band hybridizing with the probe and an autoradiogram. その結果、神経系の細胞での発現は少なく、グリア系の細胞(特に、 As a result, expression in cells of the nervous system is small, glial cells (especially,
KNS−81)で顕著な ependymin 様タンパクmRN KNS-81) with significant ependymin-like protein mRN
Aの発現が観察された〔図10〕。 Expression of A was observed [Figure 10].

【0105】 [0105]

【実施例9】ヒトゲノムDNAのサザンハイブリダイゼーション ヒトゲノムDNA 5μgを各種制限酵素(BamH [Example 9] of human genomic DNA Southern hybridization human genomic DNA 5μg the various restriction enzymes (BamH
I、HindIII、BglII、SacI)で切断した後、アガロースゲル電気泳動にかけた後、ナイロンメンブレンフィルター(PALL,Biodyne B)にキャピラリーブロッティングにより16時間ブロッティングした。 I, HindIII, BglII, was digested with SacI), after subjecting to agarose gel electrophoresis, and 16 hours blotting by capillary blotting onto a nylon membrane filter (PALL, Biodyne B). このナイロンメンブレンフィルターに紫外線処理によりブロッティングしたDNAを固定した後、ハイブリダイゼーション用緩衝液〔0.5M リン酸ナトリウム(pH. After fixing the blotted DNA by UV treatment in this nylon membrane filter, hybridization buffer [0.5M sodium phosphate (pH.
7.4),7% SDS,1% BSA,1mM EDTA〕 7.4), 7% SDS, 1% BSA, 1mM EDTA]
中65℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 It was subjected to pre-hybridization in 65 ℃. 一方、プローブとしてヒトependymin様タンパク質をコードするcDNAのSpeI−HindIII 646bp On the other hand, SpeI-HindIII 646 bp of the cDNA encoding the human ependymin like protein as a probe
cDNA断片(図1に示された塩基配列の第1022番目〜第1667番目の塩基配列)を〔α− 32 P〕dCT cDNA fragment (the 1022 th to the 1667 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) [alpha-32 P] dCT
Pとランダムプライマーラベリングキット(アマシャム)を用いて標識した。 They were labeled with the P and random primer labeling kit (Amersham). ハイブリダイゼーションは標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔0. Hybridization hybridization buffer containing labeled probe [0.
5M リン酸ナトリウム(pH.7.4),7% SDS, 5M sodium phosphate (pH.7.4), 7% SDS,
1% BSA,1mM EDTA〕中65℃で16時間ハイブリダイゼーションを行なった。 1% BSA, was carried out 16 hours hybridization at 65 ° C. in 1 mM EDTA]. フィルターは最終的に0.1×SSC,0.1% SDS液中50℃で洗浄後、 Filter finally 0.1 × SSC, washed with 50 ° C. in a 0.1% SDS solution,
オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した。 And detect the band hybridizing with the probe an autoradiogram. その結果、BamH As a result, BamH
I、HindIII、BglII、SacIで切断したレーンでそれぞれ一本ずつのバンドが見られることから〔図11〕、ヒトependymin様タンパク遺伝子は、ハプロイドセル当たり1コピー存在することが明らかとなった。 I, HindIII, BglII, since the band of each respective present one lane cut with SacI are seen [11], human ependymin-like protein gene was found to be present one copy per Hapuroidoseru.

【0106】 [0106]

【実施例10】ヒトependymin様タンパク遺伝子の染色体番号の決定 ヒト各種染色体を持つマウス雑種細胞から得たDNAをBamHIで切断し、アガロースゲル電気泳動で分離したものをあらかじめブロッティング、固定してあるメンブレンフィルターをハイブリダイゼーション用緩衝液〔0.5M リン酸ナトリウム(pH.7.4),7% S Example 10 Human ependymin-like protein gene DNA from mouse hybrid cell with a decision various human chromosome chromosome number was cut with BamHI, advance blotting those separated by agarose gel electrophoresis, is fixed membrane buffer for hybridization filters [0.5M sodium phosphate (pH.7.4), 7% S
DS,1% BSA,1mM EDTA〕中65℃でプレハイブリダイゼーションを行なった。 DS, 1% BSA, was performed prehybridization at 65 ° C. in 1 mM EDTA]. 一方、プローブとしてヒトependymin様タンパク質をコードするcDNAのSpeI−HindIII 646bp cDNA断片(図1に示された塩基配列の第1022番目〜第1667番目の塩基配列)を〔α− 32 P〕dCTPとランダムプライマーラベリングキット(アマシャム)を用いて標識した。 On the other hand, the (first 1022 th to the 1667 th nucleotide sequence of the nucleotide sequence shown in Figure 1) [alpha-32 P] dCTP and a random SpeI-HindIII 646 bp cDNA fragment of the cDNA encoding the human ependymin like protein as a probe They were labeled using primers labeling kit (Amersham). 標識プローブを含むハイブリダイゼーション用緩衝液〔0.5M リン酸ナトリウム(pH.7.4),7% Hybridization buffer containing labeled probe [0.5M sodium phosphate (pH.7.4), 7%
SDS,1% BSA,1mM EDTA〕中65℃で16 SDS, 1% BSA, at 65 ° C. in 1 mM EDTA] 16
時間ハイブリダイゼーションを行なった。 It was carried out time hybridization. フィルターは最終的に0.1×SSC,0.1% SDS液中50℃で洗浄後、オートラジオグラムをとってプローブとハイブリダイゼーションするバンドを検出した。 Filter finally 0.1 × SSC, washed with 50 ° C. in a 0.1% SDS solution and detected the band hybridizing with the probe and an autoradiogram. その結果、男性ヒトゲノムDNA,女性ヒトゲノムDNA,ヒト7番染色体を含むマウス雑種細胞からとったDNAのレーンのみにそれぞれ一本ずつハイブリダイゼーションするバンドが見られたことより、ヒトependymin様タンパク遺伝子は、7番染色体上に存在することが明らかとなった〔図12〕。 As a result, the male human genomic DNA, female human genomic DNA, than that the band hybridization one by one each only in the DNA of the lane taken from mouse hybrid cells containing human chromosome 7 was observed, human ependymin-like protein gene, it became clear that the 7 on chromosome [12].

【0107】 [0107]

【発明の効果】本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩は、例えば、中枢神経系などにおける神経伸長作用や神経再生作用、グリア細胞活性化作用、 Protein of the present invention, its partial peptide or a salt thereof, for example, nerve-extending activity and nerve regeneration activity in the central nervous system such as, glial cell activation action,
脳における記憶形成作用などの生理活性を有している。 It has a physiological activity, such as a storage form action in the brain.
本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩、および本発明のタンパク質またはその部分をコードするDNAは、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、脳萎縮性側索硬化症(AL Protein of the present invention, its partial peptide or a salt thereof, and DNA encoding the protein or portion thereof of the present invention, for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, cerebral amyotrophic lateral sclerosis (AL
S)、痴呆症、小脳変性症などの治療・予防剤などの医薬として有用である。 S), dementia, are useful as pharmaceuticals, such as therapeutic or prophylactic agents, such as cerebellar degeneration. さらに、本発明のDNAは、本発明のDNAの発現異常を検出することができるので、遺伝子診断剤として有用である。 Furthermore, DNA of the present invention, it is possible to detect the abnormal expression of DNA of the present invention is useful as a gene diagnostic agent. 本発明のタンパク質、その部分ペプチド、前駆体タンパク質またはそれらの塩に対する抗体は、本発明のタンパク質、その部分ペプチド、前駆体タンパク質またはそれらの塩を特異的に認識することができるので、被検液中の本発明のタンパク質等の定量などに使用することができる。 Protein of the present invention, its partial peptide, antibodies against the precursor protein or a salt thereof, the protein of the present invention, its partial peptide, it is possible to specifically recognize the precursor protein or a salt thereof, the test liquid it can be used for such quantification of the protein of the present invention in the. さらに、本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩は、 Furthermore, the protein of the present invention, its partial peptide or a salt thereof,
本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩をスクリーニングするための試薬として有用である。 Protein of the present invention is useful as a reagent for screening a compound or its salt that promotes the function of a partial peptide thereof or a salt thereof.

【0108】 [0108]

【配列表】 [Sequence Listing]

【配列番号:1】 配列の長さ:187 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Ala Pro Arg Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10 15 Met Tyr Gln Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg Ala Leu Leu Ser Tyr 20 25 30 Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu 35 40 45 Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Asp Gly 50 55 60 Val Met Phe Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr 65 70 75 80 Leu Thr Gln Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe 85 90 95 Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Thr Val Gln 100 105 110 Glu Trp Ser Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly 115 120 125 Ile Tyr Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile 130 135 140 Asn Tyr Ser Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Ile Gln Leu Gly 145 150 155 160 Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys Gln Met Ala 165 170 175 Gln Leu Glu Lys Met Ser Glu [SEQ ID NO: 1] Length of sequence: 187 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Ala Pro Arg Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10 15 Met Tyr Gln Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg Ala Leu Leu Ser Tyr 20 25 30 Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu 35 40 45 Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Asp Gly 50 55 60 Val Met Phe Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr 65 70 75 80 Leu Thr Gln Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe 85 90 95 Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Thr Val Gln 100 105 110 Glu Trp Ser Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly 115 120 125 Ile Tyr Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile 130 135 140 Asn Tyr Ser Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Ile Gln Leu Gly 145 150 155 160 Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys Gln Met Ala 165 170 175 Gln Leu Glu Lys Met Ser Glu Asp Cys Ser Trp 180 185 Asp Cys Ser Trp 180 185

【0109】 [0109]

【配列番号:2】 配列の長さ:190 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Ser Pro Gly Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly 1 5 10 15 Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Ser Arg Ala Leu 20 25 30 Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg 35 40 45 Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr 50 55 60 Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Leu Cys Ala 65 70 75 80 Lys Ile Pro Leu Ala Glu Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn 85 90 95 Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile 100 105 110 Met Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr Glu Thr 115 120 125 Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr 130 135 140 Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Val Val Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Val 145 150 155 160 Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys 165 170 175 Gln Thr Ala Gln Pro Glu Lys [SEQ ID NO: 2] Length of sequence: 190 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Ser Pro Gly Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly 1 5 10 15 Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Ser Arg Ala Leu 20 25 30 Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg 35 40 45 Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr 50 55 60 Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Leu Cys Ala 65 70 75 80 Lys Ile Pro Leu Ala Glu Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn 85 90 95 Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile 100 105 110 Met Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr Glu Thr 115 120 125 Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr 130 135 140 Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Val Val Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Val 145 150 155 160 Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys 165 170 175 Gln Thr Ala Gln Pro Glu Lys Met Lys Glu Asn Cys Ser Leu 180 185 190 Met Lys Glu Asn Cys Ser Leu 180 185 190

【0110】 [0110]

【配列番号:3】 配列の長さ:187 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10 15 Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Asn Arg Ala Leu Val Ser Tyr 20 25 30 Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu 35 40 45 Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Glu Gly 50 55 60 Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ala Lys Ile Pro 65 70 75 80 Leu Val Glu Ser Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe 85 90 95 Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Leu Val Gln 100 105 110 Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly 115 120 125 Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Ile Arg 130 135 140 Asn Tyr Thr Val Val Met Ser Thr Arg Phe Phe Asp Val Gln Leu Gly 145 150 155 160 Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys Gln Ala Ala 165 170 175 Gln Pro Glu Lys Met Ser Asp [SEQ ID NO: 3] Length of sequence: 187 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10 15 Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Asn Arg Ala Leu Val Ser Tyr 20 25 30 Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu 35 40 45 Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Glu Gly 50 55 60 Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ala Lys Ile Pro 65 70 75 80 Leu Val Glu Ser Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe 85 90 95 Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Leu Val Gln 100 105 110 Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly 115 120 125 Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Ile Arg 130 135 140 Asn Tyr Thr Val Val Met Ser Thr Arg Phe Phe Asp Val Gln Leu Gly 145 150 155 160 Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys Gln Ala Ala 165 170 175 Gln Pro Glu Lys Met Ser Asp Gly Cys Ser Leu 180 Gly Cys Ser Leu 180

【0111】 [0111]

【配列番号:4】 配列の長さ:13 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10 [SEQ ID NO: 4] SEQ Length: 13 sequence types: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val 1 5 10

【0112】 [0112]

【配列番号:5】 配列の長さ:32 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln 1 5 10 15 Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 20 25 30 [SEQ ID NO: 5] Length of sequence: 32 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln 1 5 10 15 Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 20 25 30

【0113】 [0113]

【配列番号:6】 配列の長さ:25 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr [SEQ ID NO: 6 SEQ Length: 25 sequence types: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr
Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro 1 5 Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro 1 5
10 15 Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile Asn Tyr 20 10 15 Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile Asn Tyr 20

【0114】 [0114]

【配列番号:7】 配列の長さ:17 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val [SEQ ID NO: 7 SEQ Length: 17 Type of sequence: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val
Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys 1 5 Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys 1 5
10 15 Gln 10 15 Gln

【0115】 [0115]

【配列番号:8】 配列の長さ:39 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys 1 5 10 15 Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Val Met Phe Gln Ile 35 [SEQ ID NO: 8] Length of sequence: 39 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys 1 5 10 15 Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Val Met Phe Gln Ile 35

【0116】 [0116]

【配列番号:9】 配列の長さ:26 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 1 5 10 15 Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile 20 25 [SEQ ID NO: 9] Length of sequence: 26 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 1 5 10 15 Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile 20 25

【0117】 [0117]

【配列番号:10】 配列の長さ:200 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Trp Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser Leu Gly Ala Val Gly Ala Pro Arg 1 5 10 15 Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val Met Tyr Gln 20 25 30 Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg Ala Leu Leu Ser Tyr Asp Gly Leu 35 40 45 Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys 50 55 60 Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe 65 70 75 80 Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln 85 90 95 Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 100 105 110 Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Thr Val Gln Glu Trp Ser 115 120 125 Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr Thr 130 135 140 Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile Asn Tyr Ser 145 150 155 160 Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Ile Gln Leu Gly Ile Lys Asp 165 170 175 Pro Ser Val Phe Thr Pro [SEQ ID NO: 10] Length of sequence: 200 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Trp Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser Leu Gly Ala Val Gly Ala Pro Arg 1 5 10 15 Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp Glu Gly Arg Gln Val Met Tyr Gln 20 25 30 Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg Ala Leu Leu Ser Tyr Asp Gly Leu 35 40 45 Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys 50 55 60 Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe 65 70 75 80 Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln 85 90 95 Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln 100 105 110 Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu Gln Ile Thr Val Gln Glu Trp Ser 115 120 125 Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr Thr 130 135 140 Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln Glu Thr Phe Thr Ile Asn Tyr Ser 145 150 155 160 Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe Asp Ile Gln Leu Gly Ile Lys Asp 165 170 175 Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser Thr Cys Gln Met Ala Gln Leu Glu 180 185 190 Lys Met Ser Glu Asp Cys Ser Trp 195 200 Pro Ser Thr Cys Gln Met Ala Gln Leu Glu 180 185 190 Lys Met Ser Glu Asp Cys Ser Trp 195 200

【0118】 [0118]

【配列番号:11】 配列の長さ:224 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala Trp Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser 20 25 30 Leu Gly Ala Val Gly Ala Pro Arg Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40 45 Glu Gly Arg Gln Val Met Tyr Gln Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg 50 55 60 Ala Leu Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70 75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85 90 95 Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln 100 105 110 Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120 125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135 140 Gln Ile Thr Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr 145 150 155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165 170 175 Glu Thr Phe Thr Ile Asn [SEQ ID NO: 11] Length of sequence: 224 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala Trp Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser 20 25 30 Leu Gly Ala Val Gly Ala Pro Arg Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40 45 Glu Gly Arg Gln Val Met Tyr Gln Gln Ser Ser Gly Arg Asn Ser Arg 50 55 60 Ala Leu Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70 75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85 90 95 Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Asp Gln Ala Thr Lys Gln 100 105 110 Cys Ser Lys Met Thr Leu Thr Gln Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120 125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135 140 Gln Ile Thr Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Lys Ser Ala Arg Ser Tyr 145 150 155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Ile Tyr Thr Val Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165 170 175 Glu Thr Phe Thr Ile Asn Tyr Ser Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe 180 185 190 Asp Ile Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200 205 Thr Cys Gln Met Ala Gln Leu Glu Lys Met Ser Glu Asp Cys Ser Trp 210 215 220 Tyr Ser Val Ile Leu Ser Thr Arg Phe Phe 180 185 190 Asp Ile Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200 205 Thr Cys Gln Met Ala Gln Leu Glu Lys Met Ser Glu Asp Cys Ser Trp 210 215 220

【0119】 [0119]

【配列番号:12】 配列の長さ:224 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Leu Thr Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Glu Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Val Trp Ile Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40 45 Glu Gly Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Ser Arg 50 55 60 Ala Leu Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70 75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85 90 95 Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Leu 100 105 110 Cys Ala Lys Ile Pro Leu Ala Glu Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120 125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135 140 Gln Ile Met Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr 145 150 155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165 170 175 Glu Thr Phe Ile Arg Asn [SEQ ID NO: 12] Length of sequence: 224 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Leu Thr Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Glu Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Val Trp Ile Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40 45 Glu Gly Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln Ser Ser Gly His Asn Ser Arg 50 55 60 Ala Leu Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70 75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85 90 95 Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Phe Gln Ile Glu Gln Ala Thr Lys Leu 100 105 110 Cys Ala Lys Ile Pro Leu Ala Glu Pro Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120 125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135 140 Gln Ile Met Val Gln Glu Trp Ser Asp Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr 145 150 155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165 170 175 Glu Thr Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Val Val Leu Ser Thr Arg Phe Phe 180 185 190 Asp Val Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200 205 Thr Cys Gln Thr Ala Gln Pro Glu Lys Met Lys Glu Asn Cys Ser Leu 210 215 220 Tyr Thr Val Val Leu Ser Thr Arg Phe Phe 180 185 190 Asp Val Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200 205 Thr Cys Gln Thr Ala Gln Pro Glu Lys Met Lys Glu Asn Cys Ser Leu 210 215 220

【0120】 [0120]

【配列番号:13】 配列の長さ:224 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Pro Ala Arg Ala Pro Arg Arg Leu [SEQ ID NO: 13] sequence Length: 224 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Pro Ala Arg Ala Pro Arg Arg Leu
Val Gln Gly Pro Arg Gly Thr 1 5 Val Gln Gly Pro Arg Gly Thr 1 5
10 15 Trp Leu Leu Gly Ser Leu Trp Val Trp 10 15 Trp Leu Leu Gly Ser Leu Trp Val Trp
Val Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 Val Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25
30 Ala Gly Ser Leu Gly Thr Pro Gln Pro 30 Ala Gly Ser Leu Gly Thr Pro Gln Pro
Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40 Cys Gln Ala Pro Gln Gln Trp 35 40
45 Glu Gly Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln 45 Glu Gly Arg Gln Val Leu Tyr Gln Gln
Ser Ser Gly His Asn Asn Arg 50 55 Ser Ser Gly His Asn Asn Arg 50 55
60 Ala Leu Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn 60 Ala Leu Val Ser Tyr Asp Gly Leu Asn
Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70 Gln Arg Val Arg Val Leu Asp 65 70
75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys 75 80 Glu Arg Lys Ala Leu Ile Pro Cys Lys
Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85 Arg Leu Phe Glu Tyr Ile Leu 85
90 95 Leu Tyr Lys Glu Gly Val Met Phe Gln 90 95 Leu Tyr Lys Glu Gly Val Met Phe Gln
Ile Glu Gln Ala Thr Lys Gln 100 105 Ile Glu Gln Ala Thr Lys Gln 100 105
110 Cys Ala Lys Ile Pro Leu Val Glu Ser 110 Cys Ala Lys Ile Pro Leu Val Glu Ser
Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120 Trp Asp Pro Leu Asp Ile Pro 115 120
125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr 125 Gln Asn Ser Thr Phe Glu Asp Gln Tyr
Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135 Ser Ile Gly Gly Pro Gln Glu 130 135
140 Gln Ile Leu Val Gln Glu Trp Ser Asp 140 Gln Ile Leu Val Gln Glu Trp Ser Asp
Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr 145 150 Arg Arg Thr Ala Arg Ser Tyr 145 150
155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala 155 160 Glu Thr Trp Ile Gly Val Tyr Thr Ala
Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165 Lys Asp Cys Tyr Pro Val Gln 165
170 175 Glu Thr Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Val 170 175 Glu Thr Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Val
Val Met Ser Thr Arg Phe Phe 180 185 Val Met Ser Thr Arg Phe Phe 180 185
190 Asp Val Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro 190 Asp Val Gln Leu Gly Ile Lys Asp Pro
Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200 Ser Val Phe Thr Pro Pro Ser 195 200
205 Thr Cys Gln Ala Ala Gln Pro Glu Lys 205 Thr Cys Gln Ala Ala Gln Pro Glu Lys
Met Ser Asp Gly Cys Ser Leu 210 215 Met Ser Asp Gly Cys Ser Leu 210 215
220 220

【0121】 [0121]

【配列番号:14】 配列の長さ:37 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr [SEQ ID NO: 14] sequence length of 37 sequence types: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr
Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5 Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5
10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala Trp 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala Trp
Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser 20 25 Thr Leu Cys Gly Leu Cys Ser 20 25
30 Leu Gly Ala Val Gly 35 30 Leu Gly Ala Val Gly 35

【0122】 [0122]

【配列番号:15】 配列の長さ:24 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala 20 [SEQ ID NO: 15] Length of sequence: 24 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Pro Gly Arg Ala Pro Leu Arg Thr Val Pro Gly Ala Leu Gly Ala 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Ala 20

【0123】 [0123]

【配列番号:16】 配列の長さ:34 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Leu Thr Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Glu Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Val Trp Ile Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly [SEQ ID NO: 16] Length of sequence: 34 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Leu Thr Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Glu Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Gly Leu Trp Val Trp Ile Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly

【0124】 [0124]

【配列番号:17】 配列の長さ:37 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met Pro Ala Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Gly Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Ser Leu Trp Val Trp Val Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly Ser Leu Gly 35 [SEQ ID NO: 17] Length of sequence: 37 SEQ type: amino acid Topology: linear sequence type: peptide sequence Met Pro Ala Arg Ala Pro Arg Arg Leu Val Gln Gly Pro Arg Gly Thr 1 5 10 15 Trp Leu Leu Gly Ser Leu Trp Val Trp Val Leu Cys Gly Leu Gly Met 20 25 30 Ala Gly Ser Leu Gly 35

【0125】 [0125]

【配列番号:18】 配列の長さ:561 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 GCCCCGCGCC CGTGCCAGGC GCCGCAGCAG TGGGAGGGGC GCCAGGTTAT GTACCAGCAA 60 AGTAGCGGGC GCAACAGCCG CGCCCTGCTC TCCTACGACG GGCTCAACCA GCGCGTGCGG 120 GTGCTGGACG AGAGGAAGGC GCTGATCCCC TGCAAGAGAT TATTTGAATA TATTTTGCTG 180 TATAAGGATG GAGTGATGTT TCAGATTGAC CAAGCCACCA AGCAGTGCTC AAAGATGACC 240 CTGACACAGC CCTGGGATCC TCTTGACATT CCTCAAAACT CCACCTTTGA AGACCAGTAC 300 TCCATCGGGG GGCCTCAGGA GCAGATCACC GTCCAGGAGT GGTCGGACAG AAAGTCAGCT 360 AGATCCTATG AAACCTGGAT TGGCATCTAT ACAGTCAAGG ATTGCTATCC TGTCCAGGAA 420 ACCTTTACCA TAAACTACAG TGTGATATTG TCTACGCGGT TTTTTGACAT CCAGCTGGGT 480 ATTAAAGACC CCTCGGTGTT TACCCCTCCA AGCACGTGCC AGATGGCCCA ACTGGAGAAG 540 ATGAGCGAAG ACTGCTCCTG G 561 [SEQ ID NO: 18] Length of sequence: 561 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence GCCCCGCGCC CGTGCCAGGC GCCGCAGCAG TGGGAGGGGC GCCAGGTTAT GTACCAGCAA 60 AGTAGCGGGC GCAACAGCCG CGCCCTGCTC TCCTACGACG GGCTCAACCA GCGCGTGCGG 120 GTGCTGGACG AGAGGAAGGC GCTGATCCCC TGCAAGAGAT TATTTGAATA TATTTTGCTG 180 TATAAGGATG GAGTGATGTT TCAGATTGAC CAAGCCACCA AGCAGTGCTC AAAGATGACC 240 CTGACACAGC CCTGGGATCC TCTTGACATT CCTCAAAACT CCACCTTTGA AGACCAGTAC 300 TCCATCGGGG GGCCTCAGGA GCAGATCACC GTCCAGGAGT GGTCGGACAG AAAGTCAGCT 360 AGATCCTATG AAACCTGGAT TGGCATCTAT ACAGTCAAGG ATTGCTATCC TGTCCAGGAA 420 ACCTTTACCA TAAACTACAG TGTGATATTG TCTACGCGGT TTTTTGACAT CCAGCTGGGT 480 ATTAAAGACC CCTCGGTGTT TACCCCTCCA AGCACGTGCC AGATGGCCCA ACTGGAGAAG 540 ATGAGCGAAG ACTGCTCCTG G 561

【0126】 [0126]

【配列番号:19】 配列の長さ:570 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 TCCCCGGGAA CCCCGCAGCC ATGCCAGGCG CCC [SEQ ID NO: 19] Length of sequence: 570 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence TCCCCGGGAA CCCCGCAGCC ATGCCAGGCG CCC
CAGCAGT GGGAGGGACG TCAGGTTCTG 60 TACCAGCAGA GCAGCGGGCA CAACAGCCGC GCC CAGCAGT GGGAGGGACG TCAGGTTCTG 60 TACCAGCAGA GCAGCGGGCA CAACAGCCGC GCC
CTGGTGT CCTACGATGG TCTCAACCAG 120 CGCGTGCGGG TGCTGGACGA AAGGAAGGCG CTG CTGGTGT CCTACGATGG TCTCAACCAG 120 CGCGTGCGGG TGCTGGACGA AAGGAAGGCG CTG
ATCCCCT GCAAGAGATT ATTTGAATAC 180 ATTTTACTCT ATAAGGATGG AGTGATGTTT CAG ATCCCCT GCAAGAGATT ATTTGAATAC 180 ATTTTACTCT ATAAGGATGG AGTGATGTTT CAG
ATTGAAC AAGCCACCAA ACTGTGTGCA 240 AAGATACCCT TGGCAGAACC CTGGGATCCT CTC ATTGAAC AAGCCACCAA ACTGTGTGCA 240 AAGATACCCT TGGCAGAACC CTGGGATCCT CTC
GACATTC CCCAGAATTC TACCTTTGAA 300 GATCAGTACT CTATCGGAGG GCCTCAGGAG CAG GACATTC CCCAGAATTC TACCTTTGAA 300 GATCAGTACT CTATCGGAGG GCCTCAGGAG CAG
ATCATGG TCCAGGAATG GTCTGACAGG 360 AGGACAGCCA GATCCTATGA AACCTGGATT GGC ATCATGG TCCAGGAATG GTCTGACAGG 360 AGGACAGCCA GATCCTATGA AACCTGGATT GGC
GTTTATA CAGCCAAGGA TTGCTACCCG 420 GTCCAGGAGA CCTTCATTAG GAACTACACT GTG GTTTATA CAGCCAAGGA TTGCTACCCG 420 GTCCAGGAGA CCTTCATTAG GAACTACACT GTG
GTCCTGT CCACTCGGTT CTTTGATGTG 480 CAGTTGGGCA TTAAAGACCC CTCTGTGTTC ACC GTCCTGT CCACTCGGTT CTTTGATGTG 480 CAGTTGGGCA TTAAAGACCC CTCTGTGTTC ACC
CCACCAA GCACGTGCCA GACAGCACAG 540 CCAGAGAAGA TGAAAGAGAA CTGCTCCCTG CCACCAA GCACGTGCCA GACAGCACAG 540 CCAGAGAAGA TGAAAGAGAA CTGCTCCCTG
570 570

【0127】 [0127]

【配列番号:20】 配列の長さ:561 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ACCCCACAGC CATGCCAGGC ACCCCAGCAG TGG [SEQ ID NO: 20] Length of sequence: 561 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ACCCCACAGC CATGCCAGGC ACCCCAGCAG TGG
GAGGGAC GCCAGGTTCT GTACCAGCAG 60 AGCAGCGGGC ACAACAACCG CGCCCTGGTG TCC GAGGGAC GCCAGGTTCT GTACCAGCAG 60 AGCAGCGGGC ACAACAACCG CGCCCTGGTG TCC
TACGATG GTCTCAACCA GCGCGTGCGG 120 GTGCTGGACG AGAGGAAAGC GCTGATCCCC TGC TACGATG GTCTCAACCA GCGCGTGCGG 120 GTGCTGGACG AGAGGAAAGC GCTGATCCCC TGC
AAGAGAT TATTTGAATA CATTTTACTC 180 TATAAGGAGG GAGTGATGTT TCAGATTGAA CAA AAGAGAT TATTTGAATA CATTTTACTC 180 TATAAGGAGG GAGTGATGTT TCAGATTGAA CAA
GCCACCA AACAGTGTGC AAAGATCCCC 240 TTGGTGGAAT CCTGGGATCC TCTGGACATT CCC GCCACCA AACAGTGTGC AAAGATCCCC 240 TTGGTGGAAT CCTGGGATCC TCTGGACATT CCC
CAGAATT CTACCTTTGA AGATCAGTAC 300 TCCATCGGAG GGCCTCAGGA GCAGATCCTG GTC CAGAATT CTACCTTTGA AGATCAGTAC 300 TCCATCGGAG GGCCTCAGGA GCAGATCCTG GTC
CAGGAGT GGTCTGACAG AAGAACAGCA 360 AGATCCTATG AAACTTGGAT CGGCGTTTAT ACA CAGGAGT GGTCTGACAG AAGAACAGCA 360 AGATCCTATG AAACTTGGAT CGGCGTTTAT ACA
GCCAAGG ATTGTTATCC GGTCCAGGAG 420 ACCTTCATCA GGAACTACAC TGTGGTCATG TCC GCCAAGG ATTGTTATCC GGTCCAGGAG 420 ACCTTCATCA GGAACTACAC TGTGGTCATG TCC
ACGCGGT TCTTTGATGT GCAGCTAGGC 480 ATTAAGGACC CCTCTGTGTT CACCCCACCA AGC ACGCGGT TCTTTGATGT GCAGCTAGGC 480 ATTAAGGACC CCTCTGTGTT CACCCCACCA AGC
ACATGCC AGGCAGCGCA GCCAGAGAAG 540 ATGAGTGACG GCTGCTCCTT G ACATGCC AGGCAGCGCA GCCAGAGAAG 540 ATGAGTGACG GCTGCTCCTT G
561 561

【0128】 [0128]

【配列番号:21】 配列の長さ:39 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 CCGTGCCAGG CGCCGCAGCA GTGGGAGGGG CGCCAGGTT 39 [SEQ ID NO: 21] Length of sequence: 39 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence CCGTGCCAGG CGCCGCAGCA GTGGGAGGGG CGCCAGGTT 39

【0129】 [0129]

【配列番号:22】 配列の長さ:96 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 CAGATTGACC AAGCCACCAA GCAGTGCTCA AAG [SEQ ID NO: 22] Length of sequence: 96 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence CAGATTGACC AAGCCACCAA GCAGTGCTCA AAG
ATGACCC TGACACAGCC CTGGGATCCT 60 CTTGACATTC CTCAAAACTC CACCTTTGAA GAC ATGACCC TGACACAGCC CTGGGATCCT 60 CTTGACATTC CTCAAAACTC CACCTTTGAA GAC
CAG 96 CAG 96

【0130】 [0130]

【配列番号:23】 配列の長さ:75 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 TCCTATGAAA CCTGGATTGG CATCTATACA GTCAAGGATT GCTATCCTGT CCAGGAAACC 60 TTTACCATAA ACTAC 75 [SEQ ID NO: 23] Length of sequence: 75 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence TCCTATGAAA CCTGGATTGG CATCTATACA GTCAAGGATT GCTATCCTGT CCAGGAAACC 60 TTTACCATAA ACTAC 75

【0131】 [0131]

【配列番号:24】 配列の長さ:51 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 CAGCTGGGTA TTAAAGACCC CTCGGTGTTT ACC [SEQ ID NO: 24] Length of sequence: 51 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence CAGCTGGGTA TTAAAGACCC CTCGGTGTTT ACC
CCTCCAA GCACGTGCCA G 51 CCTCCAA GCACGTGCCA G 51

【0132】 [0132]

【配列番号:25】 配列の長さ:117 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 TCCTACGACG GGCTCAACCA GCGCGTGCGG GTG [SEQ ID NO: 25] Length of sequence: 117 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence TCCTACGACG GGCTCAACCA GCGCGTGCGG GTG
CTGGACG AGAGGAAGGC GCTGATCCCC 60 TGCAAGAGAT TATTTGAATA TATTTTGCTG TAT CTGGACG AGAGGAAGGC GCTGATCCCC 60 TGCAAGAGAT TATTTGAATA TATTTTGCTG TAT
AAGGATG GAGTGATGTT TCAGATT 117 AAGGATG GAGTGATGTT TCAGATT 117

【0133】 [0133]

【配列番号:26】 配列の長さ:78 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 CCCTGGGATC CTCTTGACAT TCCTCAAAAC TCCACCTTTG AAGACCAGTA CTCCATCGGG 60 GGGCCTCAGG AGCAGATC 78 [SEQ ID NO: 26] Length of sequence: 78 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence CCCTGGGATC CTCTTGACAT TCCTCAAAAC TCCACCTTTG AAGACCAGTA CTCCATCGGG 60 GGGCCTCAGG AGCAGATC 78

【0134】 [0134]

【配列番号:27】 配列の長さ:600 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 TGGACCCTGT GCGGCCTGTG CAGCCTGGGG GCGGTGGGAG CCCCGCGCCC GTGCCAGGCG 60 CCGCAGCAGT GGGAGGGGCG CCAGGTTATG TACCAGCAAA GTAGCGGGCG CAACAGCCGC 120 GCCCTGCTCT CCTACGACGG GCTCAACCAG CGCGTGCGGG TGCTGGACGA GAGGAAGGCG 180 CTGATCCCCT GCAAGAGATT ATTTGAATAT ATTTTGCTGT ATAAGGATGG AGTGATGTTT 240 CAGATTGACC AAGCCACCAA GCAGTGCTCA AAGATGACCC TGACACAGCC CTGGGATCCT 300 CTTGACATTC CTCAAAACTC CACCTTTGAA GACCAGTACT CCATCGGGGG GCCTCAGGAG 360 CAGATCACCG TCCAGGAGTG GTCGGACAGA AAGTCAGCTA GATCCTATGA AACCTGGATT 420 GGCATCTATA CAGTCAAGGA TTGCTATCCT GTCCAGGAAA CCTTTACCAT AAACTACAGT 480 GTGATATTGT CTACGCGGTT TTTTGACATC CAGCTGGGTA TTAAAGACCC CTCGGTGTTT 540 ACCCCTCCAA GCACGTGCCA GATGGCCCAA CTGGAGAAGA TGAGCGAAGA CTGCTCCTGG 600 [SEQ ID NO: 27] Length of sequence: 600 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence TGGACCCTGT GCGGCCTGTG CAGCCTGGGG GCGGTGGGAG CCCCGCGCCC GTGCCAGGCG 60 CCGCAGCAGT GGGAGGGGCG CCAGGTTATG TACCAGCAAA GTAGCGGGCG CAACAGCCGC 120 GCCCTGCTCT CCTACGACGG GCTCAACCAG CGCGTGCGGG TGCTGGACGA GAGGAAGGCG 180 CTGATCCCCT GCAAGAGATT ATTTGAATAT ATTTTGCTGT ATAAGGATGG AGTGATGTTT 240 CAGATTGACC AAGCCACCAA GCAGTGCTCA AAGATGACCC TGACACAGCC CTGGGATCCT 300 CTTGACATTC CTCAAAACTC CACCTTTGAA GACCAGTACT CCATCGGGGG GCCTCAGGAG 360 CAGATCACCG TCCAGGAGTG GTCGGACAGA AAGTCAGCTA GATCCTATGA AACCTGGATT 420 GGCATCTATA CAGTCAAGGA TTGCTATCCT GTCCAGGAAA CCTTTACCAT AAACTACAGT 480 GTGATATTGT CTACGCGGTT TTTTGACATC CAGCTGGGTA TTAAAGACCC CTCGGTGTTT 540 ACCCCTCCAA GCACGTGCCA GATGGCCCAA CTGGAGAAGA TGAGCGAAGA CTGCTCCTGG 600

【0135】 [0135]

【配列番号:28】 配列の長さ:672 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCG [SEQ ID NO: 28] sequence Length: 672 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCG
GGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CCTGGACCCT GTGCGGCCTG TGC GGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CCTGGACCCT GTGCGGCCTG TGC
AGCCTGG GGGCGGTGGG AGCCCCGCGC 120 CCGTGCCAGG CGCCGCAGCA GTGGGAGGGG CGC AGCCTGG GGGCGGTGGG AGCCCCGCGC 120 CCGTGCCAGG CGCCGCAGCA GTGGGAGGGG CGC
CAGGTTA TGTACCAGCA AAGTAGCGGG 180 CGCAACAGCC GCGCCCTGCT CTCCTACGAC GGG CAGGTTA TGTACCAGCA AAGTAGCGGG 180 CGCAACAGCC GCGCCCTGCT CTCCTACGAC GGG
CTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAGAGGAAGG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTA CTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAGAGGAAGG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTA
TTTGAAT ATATTTTGCT GTATAAGGAT 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA CCAAGCCACC AAG TTTGAAT ATATTTTGCT GTATAAGGAT 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA CCAAGCCACC AAG
CAGTGCT CAAAGATGAC CCTGACACAG 360 CCCTGGGATC CTCTTGACAT TCCTCAAAAC TCC CAGTGCT CAAAGATGAC CCTGACACAG 360 CCCTGGGATC CTCTTGACAT TCCTCAAAAC TCC
ACCTTTG AAGACCAGTA CTCCATCGGG 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCAC CGTCCAGGAG TGG ACCTTTG AAGACCAGTA CTCCATCGGG 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCAC CGTCCAGGAG TGG
TCGGACA GAAAGTCAGC TAGATCCTAT 480 GAAACCTGGA TTGGCATCTA TACAGTCAAG GAT TCGGACA GAAAGTCAGC TAGATCCTAT 480 GAAACCTGGA TTGGCATCTA TACAGTCAAG GAT
TGCTATC CTGTCCAGGA AACCTTTACC 540 ATAAACTACA GTGTGATATT GTCTACGCGG TTT TGCTATC CTGTCCAGGA AACCTTTACC 540 ATAAACTACA GTGTGATATT GTCTACGCGG TTT
TTTGACA TCCAGCTGGG TATTAAAGAC 600 CCCTCGGTGT TTACCCCTCC AAGCACGTGC CAG TTTGACA TCCAGCTGGG TATTAAAGAC 600 CCCTCGGTGT TTACCCCTCC AAGCACGTGC CAG
ATGGCCC AACTGGAGAA GATGAGCGAA 660 GACTGCTCCT GG ATGGCCC AACTGGAGAA GATGAGCGAA 660 GACTGCTCCT GG
672 672

【0136】 [0136]

【配列番号:29】 配列の長さ:672 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCTCACAC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAG [SEQ ID NO: 29] Length of sequence: 672 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCTCACAC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAG
GGGCCCC GGGAGACCTG GCTGCTTGGC 60 GGCCTCTGGG TCTGGATATT GTGCGGCCTG GGG GGGCCCC GGGAGACCTG GCTGCTTGGC 60 GGCCTCTGGG TCTGGATATT GTGCGGCCTG GGG
ATGGCGG GCTCCCCGGG AACCCCGCAG 120 CCATGCCAGG CGCCCCAGCA GTGGGAGGGA CGT ATGGCGG GCTCCCCGGG AACCCCGCAG 120 CCATGCCAGG CGCCCCAGCA GTGGGAGGGA CGT
CAGGTTC TGTACCAGCA GAGCAGCGGG 180 CACAACAGCC GCGCCCTGGT GTCCTACGAT GGT CAGGTTC TGTACCAGCA GAGCAGCGGG 180 CACAACAGCC GCGCCCTGGT GTCCTACGAT GGT
CTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAAAGGAAGG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTA CTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAAAGGAAGG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTA
TTTGAAT ACATTTTACT CTATAAGGAT 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA ACAAGCCACC AAA TTTGAAT ACATTTTACT CTATAAGGAT 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA ACAAGCCACC AAA
CTGTGTG CAAAGATACC CTTGGCAGAA 360 CCCTGGGATC CTCTCGACAT TCCCCAGAAT TCT CTGTGTG CAAAGATACC CTTGGCAGAA 360 CCCTGGGATC CTCTCGACAT TCCCCAGAAT TCT
ACCTTTG AAGATCAGTA CTCTATCGGA 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCAT GGTCCAGGAA TGG ACCTTTG AAGATCAGTA CTCTATCGGA 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCAT GGTCCAGGAA TGG
TCTGACA GGAGGACAGC CAGATCCTAT 480 GAAACCTGGA TTGGCGTTTA TACAGCCAAG GAT TCTGACA GGAGGACAGC CAGATCCTAT 480 GAAACCTGGA TTGGCGTTTA TACAGCCAAG GAT
TGCTACC CGGTCCAGGA GACCTTCATT 540 AGGAACTACA CTGTGGTCCT GTCCACTCGG TTC TGCTACC CGGTCCAGGA GACCTTCATT 540 AGGAACTACA CTGTGGTCCT GTCCACTCGG TTC
TTTGATG TGCAGTTGGG CATTAAAGAC 600 CCCTCTGTGT TCACCCCACC AAGCACGTGC CAG TTTGATG TGCAGTTGGG CATTAAAGAC 600 CCCTCTGTGT TCACCCCACC AAGCACGTGC CAG
ACAGCAC AGCCAGAGAA GATGAAAGAG 660 AACTGCTCCC TG ACAGCAC AGCCAGAGAA GATGAAAGAG 660 AACTGCTCCC TG
672 672

【0137】 [0137]

【配列番号:30】 配列の長さ:672 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCCCGCGC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCTC GGGGGACCTG GCTGCTGGGA 60 AGCCTCTGGG TCTGGGTGCT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GCTCCCTGGG AACCCCACAG 120 CCATGCCAGG CACCCCAGCA GTGGGAGGGA CGCCAGGTTC TGTACCAGCA GAGCAGCGGG 180 CACAACAACC GCGCCCTGGT GTCCTACGAT GGTCTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAGAGGAAAG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTATTTGAAT ACATTTTACT CTATAAGGAG 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA ACAAGCCACC AAACAGTGTG CAAAGATCCC CTTGGTGGAA 360 TCCTGGGATC CTCTGGACAT TCCCCAGAAT TCTACCTTTG AAGATCAGTA CTCCATCGGA 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCCT GGTCCAGGAG TGGTCTGACA GAAGAACAGC AAGATCCTAT 480 GAAACTTGGA TCGGCGTTTA TACAGCCAAG GATTGTTATC CGGTCCAGGA GACCTTCATC 540 AGGAACTACA CTGTGGTCAT GTCCACGCGG TTCTTTGATG TGCAGCTAGG CATTAAGGAC 600 CCCTCTGTGT TCACCCCACC AAGCACATGC CAGGCAGCGC AGCCAGAGAA GATGAGTGAC 660 GGCTGCTCCT TG 672 [SEQ ID NO: 30] Length of sequence: 672 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCCCGCGC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCTC GGGGGACCTG GCTGCTGGGA 60 AGCCTCTGGG TCTGGGTGCT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GCTCCCTGGG AACCCCACAG 120 CCATGCCAGG CACCCCAGCA GTGGGAGGGA CGCCAGGTTC TGTACCAGCA GAGCAGCGGG 180 CACAACAACC GCGCCCTGGT GTCCTACGAT GGTCTCAACC AGCGCGTGCG GGTGCTGGAC 240 GAGAGGAAAG CGCTGATCCC CTGCAAGAGA TTATTTGAAT ACATTTTACT CTATAAGGAG 300 GGAGTGATGT TTCAGATTGA ACAAGCCACC AAACAGTGTG CAAAGATCCC CTTGGTGGAA 360 TCCTGGGATC CTCTGGACAT TCCCCAGAAT TCTACCTTTG AAGATCAGTA CTCCATCGGA 420 GGGCCTCAGG AGCAGATCCT GGTCCAGGAG TGGTCTGACA GAAGAACAGC AAGATCCTAT 480 GAAACTTGGA TCGGCGTTTA TACAGCCAAG GATTGTTATC CGGTCCAGGA GACCTTCATC 540 AGGAACTACA CTGTGGTCAT GTCCACGCGG TTCTTTGATG TGCAGCTAGG CATTAAGGAC 600 CCCTCTGTGT TCACCCCACC AAGCACATGC CAGGCAGCGC AGCCAGAGAA GATGAGTGAC 660 GGCTGCTCCT TG 672

【0138】 [0138]

【配列番号:31】 配列の長さ:111 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCGGGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CCTGGACCCT GTGCGGCCTG TGCAGCCTGG GGGCGGTGGG A 111 [SEQ ID NO: 31] Length of sequence: 111 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCGGGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CCTGGACCCT GTGCGGCCTG TGCAGCCTGG GGGCGGTGGG A 111

【0139】 [0139]

【配列番号:32】 配列の長さ:72 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCGGGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CC 72 [SEQ ID NO: 32] sequence length of 72 sequence types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCCAGGAC GCGCTCCCCT CCGCACCGTC CCGGGCGCCC TGGGTGCCTG GCTGCTGGGC 60 GGCCTCTGGG CC 72

【0140】 [0140]

【配列番号:33】 配列の長さ:102 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCTCACAC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCCC GGGAGACCTG GCTGCTTGGC 60 GGCCTCTGGG TCTGGATATT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GC 102 [SEQ ID NO: 33] Length of sequence: 102 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCTCACAC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCCC GGGAGACCTG GCTGCTTGGC 60 GGCCTCTGGG TCTGGATATT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GC 102

【0141】 [0141]

【配列番号:34】 配列の長さ:111 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA 配列 ATGCCCGCGC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCTC GGGGGACCTG GCTGCTGGGA 60 AGCCTCTGGG TCTGGGTGCT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GCTCCCTGGG A 111 [SEQ ID NO: 34] Length of sequence: 111 SEQ types: the number of nucleic acid strands: double-stranded Topology: linear sequence type: cDNA sequence ATGCCCGCGC GCGCTCCCCG CCGCCTGGTC CAGGGGCCTC GGGGGACCTG GCTGCTGGGA 60 AGCCTCTGGG TCTGGGTGCT GTGCGGCCTG GGGATGGCGG GCTCCCTGGG A 111

【0142】 [0142]

【配列番号:35】 配列の長さ:21 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:合成DNA 配列 AGGTGGAGTT TTGAGGAATG T 21 [SEQ ID NO: 35] Length of sequence: 21 SEQ types: the number of nucleic acid strands: single strand Topology: linear sequence type: Synthetic DNA sequences AGGTGGAGTT TTGAGGAATG T 21

【0143】 [0143]

【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

【図1】実施例1で得られた本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするDNAの塩基配列およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 1 shows the nucleotide sequence and the amino acid sequence encoded thereby of the DNA encoding the human ependymin like protein of the present invention obtained in Example 1. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はmRNAの不安定性に関与するATTTA配列およびポリ(A) +付加シグナルをそれぞれ示す。 Underline indicates ATTTA sequence involved in mRNA instability and poly (A) + addition signal, respectively.

【図2】実施例3で得られた本発明のラットependymin Rats ependymin in Figure 2 the present invention obtained in Example 3
様タンパク質をコードするDNAの塩基配列およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 It shows the nucleotide sequence and amino acid sequence encoded thereby of the DNA encoding the like proteins. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図3】実施例5で得られた本発明のマウスependymin Mouse ependymin in Figure 3 of the present invention obtained in Example 5
様タンパク質をコードするDNAの塩基配列およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 It shows the nucleotide sequence and amino acid sequence encoded thereby of the DNA encoding the like proteins. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図4】実施例1で得られた本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列、実施例3で得られた本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列と実施例5で得られた本発明のマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列を比較した図を示す。 [4] obtained in Example 1 of the present invention the amino acid sequence of human ependymin like protein, of the present invention obtained in the amino acid sequence as in Example 5 Rat ependymin like protein of the present invention obtained in Example 3 It shows a diagram comparing the amino acid sequence of mouse ependymin like protein. hEpendyminは本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、rEp hEpendymin is the amino acid sequence of the human ependymin-like protein of the present invention, rEp
endyminは本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、mEpendyminは本発明のマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列を示す。 endymin is the amino acid sequence of the rat ependymin-like protein of the present invention, mEpendymin shows the amino acid sequence of the mouse ependymin-like protein of the present invention. 影をつけた箇所は、 Place that was shaded,
ヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列、ラットepe The amino acid sequence of the human ependymin-like protein, rat epe
ndymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列との相同なアミノ酸残基を示す。 It shows the homologous amino acid residues of the amino acid sequence of ndymin-like protein and mouse ependymin-like protein.

【図5】実施例1で得られた本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列と実施例3で得られた本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列を比較した図を示す。 Figure 5 shows a diagram comparing the amino acid sequence of rat ependymin like protein of the present invention obtained in the amino acid sequence as in Example 3 Human ependymin like protein of the present invention obtained in Example 1. Humanは本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、Ratは本発明のラットependymin Human is the amino acid sequence of the human ependymin-like protein of the present invention, Rat is of the present invention rat ependymin
様タンパク質のアミノ酸配列を示す。 It shows the amino acid sequence of the protein-like. 影をつけた箇所は、ヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列とラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列との相同なアミノ酸残基を示す。 Place shaded shows the homologous amino acid residues of the amino acid sequence of the amino acid sequence and the rat ependymin-like protein of the human ependymin-like protein.

【図6】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒトの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [6] The expression in each tissue of the human mRNA encoding human ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph). Heartは心臓を、Brainは脳を、Placentaは胎盤を、Lungは肺を、Liverは肝臓を、Skeletal Muscleは骨格筋を、Kidneyは腎臓を、Pancreasは膵臓を、Spleenは脾臓を、Thymusは胸腺を、Prostateは前立腺を、Testis Heart is the heart, Brain is a brain, Placenta is the placenta, Lung is a lung, Liver is the liver, the Skeletal Muscle skeletal muscle, Kidney is the kidney, Pancreas is the pancreas, Spleen is the spleen, Thymus thymus the, prostate is the prostate, Testis
は精巣を、Ovaryは卵巣、Small Intestineは小腸を、Co Is the testis, Ovary ovarian, Small Intestine is the small intestine, Co
lonは大腸を、Peripheral Bloodは末梢血を、Fetal Hea lon is the large intestine, Peripheral Blood in the peripheral blood, Fetal Hea
rtは胎児心臓を、Fetal Brainは胎児脳を、Fetal Lung rt is the fetal heart, Fetal Brain is the fetal brain, Fetal Lung
は胎児肺を、Fetal Liverは胎児肝臓を、Fetal Kidney The fetal lung, the Fetal Liver fetal liver, Fetal Kidney
は胎児腎臓を示す。 It shows fetal kidney. 左側の数字(kb)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kb) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図7】本発明のラットependymin様タンパク質をコードするmRNAのラットの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 Figure 7 shows the results of the expression level was examined by Northern hybridization in each tissue of rat mRNA encoding rat ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). Brainは脳を、Spinal cordは脊髄を、Heart Brain is the brain, the Spinal cord is the spinal cord, Heart
は心臓を、Lungは肺を、Liverは肝臓を、Pancreasは膵臓を、Stomachは胃を、、Small Intestineは小腸を、Te The heart, Lung is a lung, Liver is the liver, Pancreas is the pancreas, Stomach is the a ,, Small Intestine small intestine stomach, Te
stisは精巣を、Ovaryは卵巣を、Placentaは胎盤を示す。 stis is the testis, Ovary is the ovary, Placenta shows the placenta. 左側の数字(kb)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kb) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図8】本発明のマウスependymin様タンパク質をコードするmRNAのマウスの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [8] the expression level in each tissue of mice of the mRNA encoding mouse ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph). Brainは脳を、Spinal cordは脊髄を、Lungは肺を、Liverは肝臓を示す。 Brain is the brain, the Spinal cord is the spinal cord, Lung is a lung, Liver represents the liver. 左側の数字(kb)はRN The numbers on the left side (kb) is RN
A分子量マーカーの大きさを示す。 Indicating the size of the A molecular weight marker.

【図9】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒト中枢神経系各部位における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 Figure 9 shows the results of the expression level was examined by Northern hybridization in human central nervous system each part of the mRNA encoding the human ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). Cerebellumは小脳を、Cerebral cortex Cerebellum is the cerebellum, Cerebral cortex
は大脳皮質を、Medullaは延髄を、Spinal cordは脊髄を、Occipital poleは後葉頭を、Frontal lobeは前葉頭を、Temporal lobeは側葉頭を、Putamenは被殻を、Amyg The cerebral cortex, Medulla is the medulla oblongata, the Spinal cord is the spinal cord, Occipital pole is the posterior lobe head, the Frontal lobe before Haatama, the Temporal lobe is Gawahaatama, Putamen is the putamen, Amyg
dalaは扁桃核を、Caudate nucleusは尾状核を、Corpus dala is the amygdala, the Caudate nucleus is the caudate nucleus, Corpus
callosumは脳梁を、Hippocampusは海馬を、Whole brain callosum is the corpus callosum, Hippocampus is the hippocampus, Whole brain
は全脳を、Substantia nigraは黒質を、Subthal A is a whole brain, Substantia nigra is the substantia nigra, Subthal
amic nuclesは視床下核を、Thalamu amic nucles is the subthalamic nucleus, Thalamu
sは視床を示す。 s indicates the thalamus. G3PDHは内部マーカーとして用いたグリセルアルデヒド−3−リン酸 デヒドロゲナーゼをコードするmRNAの発現量を示す。 G3PDH shows the expression level of mRNA encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase was used as an internal marker. 左側の数字(k The numbers on the left side (k
b)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 b) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図10】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒト培養神経細胞における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [10] The expression level in human cultured neurons of mRNA encoding human ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph).

【図11】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするcDNA断片と、ヒトゲノムDNAを各種制限酵素で切断したDNA断片とを用いてサザンハイブリダイゼーションを行なった結果を示す(電気泳動写真)。 A cDNA fragment encoding the human ependymin like protein [11] The present invention, showing the results of Southern hybridization with a DNA fragment of human genomic DNA was cleaved with various restriction enzymes (electrophoretic photograph). B
amHI、HindIII、BglIIおよびSacIはそれぞれヒトゲノムDNAを切断した制限酵素を示す。 BamHI, showing HindIII, the restriction enzymes BglII and SacI are cut human genomic DNA, respectively. 左側の数字(kbp)はDNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kbp) indicates the size of the DNA molecular weight marker.

【図12】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードする遺伝子の染色体番号を調べた結果を示す(電気泳動写真)。 12 shows the results of examining the chromosomes number of the gene encoding the human ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). レーン1〜28はそれぞれ男性ヒトゲノムD Lanes 1 to 28 men the human genome D
NA、女性ヒトゲノムDNA、マウスゲノムDNA、ハムスターゲノムDNA、1番染色体、2番染色体、3番染色体、4番染色体、5番染色体、6番染色体、7番染色体、8番染色体、9番染色体、10番染色体、11番染色体、12番染色体、13番染色体、14番染色体、 NA, female human genomic DNA, the mouse genomic DNA, hamster genomic DNA, 1 chromosome, chromosome 2, chromosome 3, chromosome 4, chromosome 5, chromosome 6, chromosome 7, chromosome 8, chromosome 9, chromosome 10, chromosome 11, chromosome 12, chromosome 13, chromosome 14,
15番染色体、16番染色体、17番染色体、18番染色体、19番染色体、20番染色体、21番染色体、2 Chromosome 15, chromosome 16, chromosome 17, chromosome 18, chromosome 19, chromosome 20, chromosome 21, 2
2番染色体、X染色体およびY染色体を示す。 Chromosome 2 shows the X and Y chromosomes. 左側の数字(kbp)はDNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kbp) indicates the size of the DNA molecular weight marker.

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【手続補正書】 [Procedure amendment]

【提出日】平成9年11月10日 [Filing date] 1997 November 10,

【手続補正1】 [Amendment 1]

【補正対象書類名】明細書 [Correction target document name] specification

【補正対象項目名】図面の簡単な説明 A brief description of the correction target item name] drawings

【補正方法】変更 [Correction method] change

【補正内容】 [Correction contents]

【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

【図1−1】実施例1で得られた本発明のヒトependymi Human ependymi in Figure 1-1 of the present invention obtained in Example 1
n様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第1番目−第576番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 Nucleotide sequence of the DNA encoding the n-like protein (1st - 576 th) shows the and amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site.
下線はmRNAの不安定性に関与するATTTA配列およびポリ(A) +付加シグナルをそれぞれ示す。 Underline indicates ATTTA sequence involved in mRNA instability and poly (A) + addition signal, respectively.

【図1−2】実施例1で得られた本発明のヒトependymi Human ependymi in Figure 1-2 of the present invention obtained in Example 1
n様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第57 Nucleotide sequence of the DNA encoding the n-like protein (57
7番目−第1080番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 7 th - shows the 1080-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はmRNAの不安定性に関与するATTTA配列およびポリ(A) +付加シグナルをそれぞれ示す。 Underline indicates ATTTA sequence involved in mRNA instability and poly (A) + addition signal, respectively.

【図1−3】実施例1で得られた本発明のヒトependymi Human ependymi in Figure 1-3 of the present invention obtained in Example 1
n様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第10 Nucleotide sequence of the DNA encoding the n-like protein (10
81番目−第2268番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 81 th - indicating the first 2268-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はmRNAの不安定性に関与するATTTA Underlined involved in the instability of the mRNA ATTTA
配列およびポリ(A) +付加シグナルをそれぞれ示す。 It shows sequences and poly (A) + addition signal, respectively.

【図1−4】実施例1で得られた本発明のヒトependymi Human ependymi in Figure 1-4 of the present invention obtained in Example 1
n様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第22 Nucleotide sequence of the DNA encoding the n-like protein (22
69番目−第2507番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 69 th - indicating the first 2507-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はmRNAの不安定性に関与するATTTA Underlined involved in the instability of the mRNA ATTTA
配列およびポリ(A) +付加シグナルをそれぞれ示す。 It shows sequences and poly (A) + addition signal, respectively.

【図2−1】実施例3で得られた本発明のラットependy Rats ependy in Figure 2-1 of the present invention obtained in Example 3
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第1 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (first
番目−第540番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 Th - it shows the first 540-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site.
下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図2−2】実施例3で得られた本発明のラットependy Rats ependy in Figure 2-2 of the present invention obtained in Example 3
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第5 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (Fifth
41番目−第1116番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 41 th - indicating the first 1116-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図2−3】実施例3で得られた本発明のラットependy Rats ependy in Figure 2-3 of the present invention obtained in Example 3
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第1 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (first
117番目−第2202番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 117th - it shows a second 2202-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図3−1】実施例5で得られた本発明のマウスependy Mouse ependy in Figure 3-1 of the present invention obtained in Example 5
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第1 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (first
番目−第576番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 Th - it shows a 576-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site.
下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図3−2】実施例5で得られた本発明のマウスependy Mouse ependy in Figure 3-2 of the present invention obtained in Example 5
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第5 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (Fifth
77番目−第1152番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 77 th - indicating the first 1152-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図3−3】実施例5で得られた本発明のマウスependy Mouse ependy in Figure 3-3 of the present invention obtained in Example 5
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第1 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (first
153番目−第2340番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 153 th - indicating the first 2340-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図3−4】実施例5で得られた本発明のマウスependy Mouse ependy in Figure 3-4 of the present invention obtained in Example 5
min様タンパク質をコードするDNAの塩基配列(第2 Nucleotide sequence of the DNA coding for the min-like protein (second
341番目−第2403番目)およびそれにコードされるアミノ酸配列を示す。 341 th - indicating the first 2403-th) and the amino acid sequence encoded thereby. 矢印はシグナルペプチドの切断部位を示す。 The arrow indicates the cleavage site of the signal peptide. 四角で囲んだ部位はN−グリコシル化部位を示す。 Site surrounded by squares represent the N- glycosylation site. 下線はポリ(A) +付加シグナルを示す。 Underline indicates a poly (A) + addition signal.

【図4】実施例1で得られた本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列、実施例3で得られた本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列と実施例5で得られた本発明のマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列を比較した図を示す。 [4] obtained in Example 1 of the present invention the amino acid sequence of human ependymin like protein, of the present invention obtained in the amino acid sequence as in Example 5 Rat ependymin like protein of the present invention obtained in Example 3 It shows a diagram comparing the amino acid sequence of mouse ependymin like protein. hEpendyminは本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、rEp hEpendymin is the amino acid sequence of the human ependymin-like protein of the present invention, rEp
endyminは本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、mEpendyminは本発明のマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列を示す。 endymin is the amino acid sequence of the rat ependymin-like protein of the present invention, mEpendymin shows the amino acid sequence of the mouse ependymin-like protein of the present invention. 影をつけた箇所は、 Place that was shaded,
ヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列、ラットepe The amino acid sequence of the human ependymin-like protein, rat epe
ndymin様タンパク質とマウスependymin様タンパク質のアミノ酸配列との相同なアミノ酸残基を示す。 It shows the homologous amino acid residues of the amino acid sequence of ndymin-like protein and mouse ependymin-like protein.

【図5】実施例1で得られた本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列と実施例3で得られた本発明のラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列を比較した図を示す。 Figure 5 shows a diagram comparing the amino acid sequence of rat ependymin like protein of the present invention obtained in the amino acid sequence as in Example 3 Human ependymin like protein of the present invention obtained in Example 1. Humanは本発明のヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列を、Ratは本発明のラットependymin Human is the amino acid sequence of the human ependymin-like protein of the present invention, Rat is of the present invention rat ependymin
様タンパク質のアミノ酸配列を示す。 It shows the amino acid sequence of the protein-like. 影をつけた箇所は、ヒトependymin様タンパク質のアミノ酸配列とラットependymin様タンパク質のアミノ酸配列との相同なアミノ酸残基を示す。 Place shaded shows the homologous amino acid residues of the amino acid sequence of the amino acid sequence and the rat ependymin-like protein of the human ependymin-like protein.

【図6】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒトの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [6] The expression in each tissue of the human mRNA encoding human ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph). Heartは心臓を、Brainは脳を、Placentaは胎盤を、Lungは肺を、Liverは肝臓を、Skeletal Muscleは骨格筋を、Kidneyは腎臓を、Pancreasは膵臓を、Spleenは脾臓を、Thymusは胸腺を、Prostateは前立腺を、Testis Heart is the heart, Brain is a brain, Placenta is the placenta, Lung is a lung, Liver is the liver, the Skeletal Muscle skeletal muscle, Kidney is the kidney, Pancreas is the pancreas, Spleen is the spleen, Thymus thymus the, prostate is the prostate, Testis
は精巣を、Ovaryは卵巣、Small Intestineは小腸を、Co Is the testis, Ovary ovarian, Small Intestine is the small intestine, Co
lonは大腸を、Peripheral Bloodは末梢血を、Fetal Hea lon is the large intestine, Peripheral Blood in the peripheral blood, Fetal Hea
rtは胎児心臓を、Fetal Brainは胎児脳を、Fetal Lung rt is the fetal heart, Fetal Brain is the fetal brain, Fetal Lung
は胎児肺を、Fetal Liverは胎児肝臓を、Fetal Kidney The fetal lung, the Fetal Liver fetal liver, Fetal Kidney
は胎児腎臓を示す。 It shows fetal kidney. 左側の数字(kb)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kb) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図7】本発明のラットependymin様タンパク質をコードするmRNAのラットの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 Figure 7 shows the results of the expression level was examined by Northern hybridization in each tissue of rat mRNA encoding rat ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). Brainは脳を、Spinal cordは脊髄を、Heart Brain is the brain, the Spinal cord is the spinal cord, Heart
は心臓を、Lungは肺を、Liverは肝臓を、Pancreasは膵臓を、Stomachは胃を、、Small Intestineは小腸を、Te The heart, Lung is a lung, Liver is the liver, Pancreas is the pancreas, Stomach is the a ,, Small Intestine small intestine stomach, Te
stisは精巣を、Ovaryは卵巣を、Placentaは胎盤を示す。 stis is the testis, Ovary is the ovary, Placenta shows the placenta. 左側の数字(kb)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kb) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図8】本発明のマウスependymin様タンパク質をコードするmRNAのマウスの各組織における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [8] the expression level in each tissue of mice of the mRNA encoding mouse ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph). Brainは脳を、Spinal cordは脊髄を、Lungは肺を、Liverは肝臓を示す。 Brain is the brain, the Spinal cord is the spinal cord, Lung is a lung, Liver represents the liver. 左側の数字(kb)はRN The numbers on the left side (kb) is RN
A分子量マーカーの大きさを示す。 Indicating the size of the A molecular weight marker.

【図9】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒト中枢神経系各部位における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 Figure 9 shows the results of the expression level was examined by Northern hybridization in human central nervous system each part of the mRNA encoding the human ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). Cerebellumは小脳を、Cerebral cortex Cerebellum is the cerebellum, Cerebral cortex
は大脳皮質を、Medullaは延髄を、Spinal cordは脊髄を、Occipital poleは後葉頭を、Frontal lobeは前葉頭を、Temporal lobeは側葉頭を、Putamenは被殻を、Amyg The cerebral cortex, Medulla is the medulla oblongata, the Spinal cord is the spinal cord, Occipital pole is the posterior lobe head, the Frontal lobe before Haatama, the Temporal lobe is Gawahaatama, Putamen is the putamen, Amyg
dalaは扁桃核を、Caudate nucleusは尾状核を、Corpus dala is the amygdala, the Caudate nucleus is the caudate nucleus, Corpus
callosumは脳梁を、Hippocampusは海馬を、Whole brain callosum is the corpus callosum, Hippocampus is the hippocampus, Whole brain
は全脳を、Substantia nigraは黒質を、Subthalamic nu A is a whole brain, Substantia nigra is the substantia nigra, Subthalamic nu
clesは視床下核を、Thalamusは視床を示す。 cles is the subthalamic nucleus, Thalamus shows the thalamus. G3PDH G3PDH
は内部マーカーとして用いたグリセルアルデヒド−3− Glyceraldehyde was used as an internal marker 3-
リン酸 デヒドロゲナーゼをコードするmRNAの発現量を示す。 Showing the expression level of mRNA encoding a phosphate dehydrogenase. 左側の数字(kb)はRNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kb) indicates the size of the RNA molecular weight markers.

【図10】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするmRNAのヒト培養神経細胞における発現量をノザンハイブリダイゼーションで調べた結果を示す(電気泳動写真)。 [10] The expression level in human cultured neurons of mRNA encoding human ependymin like protein of the present invention showing the results of examining by Northern hybridization (electrophoretic photograph).

【図11】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードするcDNA断片と、ヒトゲノムDNAを各種制限酵素で切断したDNA断片とを用いてサザンハイブリダイゼーションを行なった結果を示す(電気泳動写真)。 A cDNA fragment encoding the human ependymin like protein [11] The present invention, showing the results of Southern hybridization with a DNA fragment of human genomic DNA was cleaved with various restriction enzymes (electrophoretic photograph). B
amHI、HindIII、BglIIおよびSacIはそれぞれヒトゲノムDNAを切断した制限酵素を示す。 BamHI, showing HindIII, the restriction enzymes BglII and SacI are cut human genomic DNA, respectively. 左側の数字(kbp)はDNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kbp) indicates the size of the DNA molecular weight marker.

【図12】本発明のヒトependymin様タンパク質をコードする遺伝子の染色体番号を調べた結果を示す(電気泳動写真)。 12 shows the results of examining the chromosomes number of the gene encoding the human ependymin like protein of the present invention (electrophoretic photograph). レーン1〜28はそれぞれ男性ヒトゲノムD Lanes 1 to 28 men the human genome D
NA、女性ヒトゲノムDNA、マウスゲノムDNA、ハムスターゲノムDNA、1番染色体、2番染色体、3番染色体、4番染色体、5番染色体、6番染色体、7番染色体、8番染色体、9番染色体、10番染色体、11番染色体、12番染色体、13番染色体、14番染色体、 NA, female human genomic DNA, the mouse genomic DNA, hamster genomic DNA, 1 chromosome, chromosome 2, chromosome 3, chromosome 4, chromosome 5, chromosome 6, chromosome 7, chromosome 8, chromosome 9, chromosome 10, chromosome 11, chromosome 12, chromosome 13, chromosome 14,
15番染色体、16番染色体、17番染色体、18番染色体、19番染色体、20番染色体、21番染色体、2 Chromosome 15, chromosome 16, chromosome 17, chromosome 18, chromosome 19, chromosome 20, chromosome 21, 2
2番染色体、X染色体およびY染色体を示す。 Chromosome 2 shows the X and Y chromosomes. 左側の数字(kbp)はDNA分子量マーカーの大きさを示す。 The numbers on the left side (kbp) indicates the size of the DNA molecular weight marker.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. 6識別記号 FI C07K 16/18 C12N 1/21 C12N 1/21 C12P 21/02 H 15/09 ZNA G01N 33/53 D C12P 21/02 A61K 37/02 AAM G01N 33/53 C12N 15/00 ZNAA //(C12N 1/21 C12R 1:19) (C12P 21/02 C12R 1:19) ────────────────────────────────────────────────── ─── front page continued (51) Int.Cl. 6 identifications FI C07K 16/18 C12N 1/21 C12N 1/21 C12P 21/02 H 15/09 ZNA G01N 33/53 D C12P 21/02 A61K 37 / 02 AAM G01N 33/53 C12N 15/00 ZNAA // (C12N 1/21 C12R 1:19) (C12P 21/02 C12R 1:19)

Claims (30)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】哺乳動物由来のエペンディミン様タンパク質またはその塩。 1. A Ependimin like protein, or a salt derived from a mammal.
  2. 【請求項2】配列番号:1、配列番号:2もしくは配列番号:3で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩。 Wherein SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence or a substantially protein or its salt containing the same amino acid sequence as those represented by 3.
  3. 【請求項3】配列番号:1、配列番号:2もしくは配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列が、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6または(および)配列番号:7で表わされるアミノ酸配列を含有するアミノ酸配列である請求項2記載のタンパク質。 3. SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or ( and) SEQ ID NO: 7 is the amino acid sequence containing the amino acid sequence represented by claim 2 wherein the protein.
  4. 【請求項4】配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列が、配列番号:1、配列番号:2または配列番号:3で表わされるアミノ酸配列と約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列である請求項2記載のタンパク質。 4. SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by 3, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: represented by 3 protein according to claim 2, wherein the the amino acid sequence having the amino acid sequence and about 95% homology.
  5. 【請求項5】神経伸長作用を有する請求項2記載のタンパク質。 5. The protein of claim 2 further comprising a nerve-extending effect.
  6. 【請求項6】請求項1または2記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩。 6. A partial peptide or a salt thereof of the protein of claim 1 or 2 wherein.
  7. 【請求項7】配列番号:4〜配列番号:9のいずれかの配列番号で表わされるアミノ酸配列を有する請求項6記載の部分ペプチド。 7. SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 9 partial peptide according to claim 6 further comprising the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NO.
  8. 【請求項8】配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12もしくは配列番号:13で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を有する請求項2記載のタンパク質の前駆体タンパク質またはその塩。 8. SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 or SEQ ID NO: 13 amino acid sequence represented by or precursor protein according to claim 2, further comprising them substantially the same amino acid sequence protein or a salt thereof.
  9. 【請求項9】配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16もしくは配列番号:17で表わされるアミノ酸配列またはそれらと実質的に同一のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドまたはその塩。 9. SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: signal peptide, or a salt thereof having an amino acid sequence or substantially the same amino acid sequence and those represented by 17.
  10. 【請求項10】請求項1または2記載のタンパク質をコードする塩基配列を有するDNAを含有するDNA。 10. A DNA containing a DNA having a nucleotide sequence encoding the protein of claim 1 or 2 wherein.
  11. 【請求項11】配列番号:18、配列番号:19または配列番号:20で表わされる塩基配列を有する請求項1 11. SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: claim 1 having the nucleotide sequence represented by 20
    0記載のDNA。 0 DNA described.
  12. 【請求項12】請求項8記載の前駆体タンパク質をコードする塩基配列を有するDNAを含有するDNA。 12. A DNA containing a DNA having a nucleotide sequence encoding the precursor protein of claim 8.
  13. 【請求項13】配列番号:27、配列番号:28、配列番号:29または配列番号:30で表わされる塩基配列を有する請求項12記載のDNA。 13. SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29 or SEQ ID NO: DNA according to claim 12 having the nucleotide sequence represented by 30.
  14. 【請求項14】請求項9記載のシグナルペプチドをコードする塩基配列を有するDNAを含有するDNA。 14. A DNA containing a DNA having a nucleotide sequence encoding the signal peptide of claim 9, wherein.
  15. 【請求項15】配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33または配列番号:34で表わされる塩基配列を有する請求項14記載のDNA。 15. SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 or SEQ ID NO: DNA according to claim 14 having the nucleotide sequence represented by 34.
  16. 【請求項16】請求項10記載のDNAを含有する組換えベクター。 16. A recombinant vector containing the DNA of claim 10.
  17. 【請求項17】請求項16記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体。 17. A transformant which is transformed with the recombinant vector of claim 16, wherein.
  18. 【請求項18】請求項17記載の形質転換体を培養し、 18. culturing the transformant according to claim 17,
    請求項1または2記載のタンパク質またはその塩を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする請求項1または2記載のタンパク質またはその塩の製造方法。 Produce proteins or a salt thereof according to claim 1 or 2 wherein the accumulation allowed, according to claim 1 or 2 protein or a salt thereof as claimed and collecting it.
  19. 【請求項19】請求項1または2記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる医薬。 19. The method of claim 1 or 2 wherein the protein, comprising the partial peptide or a salt thereof according to claim 6, wherein the pharmaceutical.
  20. 【請求項20】アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である請求項19記載の医薬。 20. Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the pharmaceutical according to claim 19, wherein the therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration.
  21. 【請求項21】請求項10記載のDNAを含有してなる医薬。 21. comprising the DNA of claim 10, wherein the pharmaceutical.
  22. 【請求項22】アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である請求項21記載の医薬。 22. Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the pharmaceutical according to claim 21, wherein the therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration.
  23. 【請求項23】請求項1または2記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチド、請求項8記載の前駆体タンパク質またはそれらの塩に対する抗体。 23. The protein of claim 1 or 2 wherein the partial peptide according to claim 6, claim 8 precursor protein or antibodies against their salts according.
  24. 【請求項24】請求項1または2項記載のタンパク質、 24. The method of claim 1 or 2 claim of proteins,
    請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴とする、請求項1または2記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方法。 Characterized by using the partial peptide or a salt thereof according to claim 6, wherein the protein of claim 1 or 2, wherein the compound promotes the function of the partial peptide or salt thereof according to claim 6, wherein or screening of a salt thereof Method.
  25. 【請求項25】機能が(i)中枢神経系における神経伸長作用またはグリア細胞活性化作用または(ii)脳における記憶形成作用である請求項24記載のスクリーニング方法。 25. features (i) nerve decompression effect or glial cell activation action or in the central nervous system (ii) screening method of claim 24, wherein the storage form action in the brain.
  26. 【請求項26】機能が神経伸長作用である請求項24記載のスクリーニング方法。 26. The screening method of claim 24, wherein function is nerve-extending activity.
  27. 【請求項27】請求項1または2記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有することを特徴とする請求項1または2記載のタンパク質、 27. Claim 1 or 2 wherein the protein according to claim 1 or 2 wherein the protein is characterized by containing a partial peptide or a salt thereof according to claim 6,
    請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。 Kit for screening a compound or its salt that promotes the function of claim 6 partial peptide or a salt thereof as claimed.
  28. 【請求項28】請求項24記載のスクリーニング方法または請求項27記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、請求項1または2記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩。 28. obtained by the screening method or claim 27 the screening kit according to claim 24, wherein the protein of claim 1 or 2, wherein the function of the partial peptide or salt thereof according to claim 6, wherein compound or its salt that promotes.
  29. 【請求項29】請求項24記載のスクリーニング方法または請求項27記載のスクリーニング用キットを用いて得られる請求項1記載のタンパク質、請求項6記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはその塩を含有してなる医薬。 29. Claim 24 wherein the screening method or obtainable using the screening kit according to claim 27, wherein claim 1, wherein the protein, compounds which promote the functions of the partial peptide or salt thereof according to claim 6, wherein or pharmaceutical composition comprising the salt thereof.
  30. 【請求項30】アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症または小脳変性症の治療・予防剤である請求項29記載の医薬。 30. Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, the pharmaceutical according to claim 29, wherein the therapeutic or prophylactic agent for dementia or cerebellar degeneration.
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