JPH11313574A - ヒト免疫応答を有するｓｃｉｄマウス - Google Patents
ヒト免疫応答を有するｓｃｉｄマウスInfo
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- JPH11313574A JPH11313574A JP4417199A JP4417199A JPH11313574A JP H11313574 A JPH11313574 A JP H11313574A JP 4417199 A JP4417199 A JP 4417199A JP 4417199 A JP4417199 A JP 4417199A JP H11313574 A JPH11313574 A JP H11313574A
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- mouse
- lymphocytes
- antigen
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric animals, e.g. comprising exogenous cells
Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫応答の研究に用いられる免疫不全哺乳類
の提供。 【解決手段】 移植したヒトリンパ球を含有する重症複
合免疫不全哺乳類であって、ヒトリンパ球が、移植前に
マウス組織抗原に耐性があるようにされており、移植時
から非マウス外来抗原に応答する能力を有することを特
徴とする前記哺乳類。
の提供。 【解決手段】 移植したヒトリンパ球を含有する重症複
合免疫不全哺乳類であって、ヒトリンパ球が、移植前に
マウス組織抗原に耐性があるようにされており、移植時
から非マウス外来抗原に応答する能力を有することを特
徴とする前記哺乳類。
Description
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫応答の研究に
用いられるマウス等の免疫不全哺乳類、特にヒト血液リ
ンパ球を移植したマウスに関する。
用いられるマウス等の免疫不全哺乳類、特にヒト血液リ
ンパ球を移植したマウスに関する。
【従来の技術】もし、ヒトリンパ球をマウス等の免疫不
全哺乳類に移植して、これらの細胞が免疫適格性を保持
するようにできたら、免疫刺激に対するヒトリンパ球応
答をモニターし、それによりワクチンと免疫治療のプロ
トコールを評価する可能性を有するであろう。さらに、
もしヒト腫瘍と患者のリンパ球とを同時移植できたら、
患者の抗腫瘍免疫をモニターし、この抗腫瘍免疫に対す
る免疫治療法の能力を認識することができるであろう。
本発明がなされるまで、ヒトの免疫応答を効率的にモニ
ターするための適切な動物モデルは存在しなかった。こ
れまで、例えば“Human Antibody Response in Human P
eripheral Blood Leukocyte/Severe Combined immunode
ficient Chimeric Model Is Dependent on Band T Cell
Constimulation Via CD40/CD40 Ligand", Chen et al,
Journal ofImmunology, 1995から、移植したヒトリン
パ球（末梢血白血球（huPBL））を含有する重症複合免
疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを創れることが知られてい
た。その移植したマウスは外来抗原（マウス抗原以外の
抗原）に対して正常なヒト免疫応答は示さなかったが、
ヒト抗マウス赤血球抗体の産生に起因すると思われる貧
血及び移植片対宿主病を発現した。それ故、得られるマ
ウスは、病弱でありかつ非マウス抗原に対する正常なヒ
ト応答を示さなかったという２つの理由から、ヒト免疫
応答研究には不適当であった。
全哺乳類に移植して、これらの細胞が免疫適格性を保持
するようにできたら、免疫刺激に対するヒトリンパ球応
答をモニターし、それによりワクチンと免疫治療のプロ
トコールを評価する可能性を有するであろう。さらに、
もしヒト腫瘍と患者のリンパ球とを同時移植できたら、
患者の抗腫瘍免疫をモニターし、この抗腫瘍免疫に対す
る免疫治療法の能力を認識することができるであろう。
本発明がなされるまで、ヒトの免疫応答を効率的にモニ
ターするための適切な動物モデルは存在しなかった。こ
れまで、例えば“Human Antibody Response in Human P
eripheral Blood Leukocyte/Severe Combined immunode
ficient Chimeric Model Is Dependent on Band T Cell
Constimulation Via CD40/CD40 Ligand", Chen et al,
Journal ofImmunology, 1995から、移植したヒトリン
パ球（末梢血白血球（huPBL））を含有する重症複合免
疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを創れることが知られてい
た。その移植したマウスは外来抗原（マウス抗原以外の
抗原）に対して正常なヒト免疫応答は示さなかったが、
ヒト抗マウス赤血球抗体の産生に起因すると思われる貧
血及び移植片対宿主病を発現した。それ故、得られるマ
ウスは、病弱でありかつ非マウス抗原に対する正常なヒ
ト応答を示さなかったという２つの理由から、ヒト免疫
応答研究には不適当であった。
【０００１】ヒトリンパ球を、抗ＣＤ４０モノクローナ
ル抗体（ｍＡｂ）Ｍ３（100μg/マウス）、Ｍ３−Ｆ
（ａｂ’）2（75μg/マウス）又は抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡ
ｂ Ｍ９１（100μg/マウス）又は種及びアイソタイプ
適合コントロール ｍＡｂ ２Ｃ３（100μg/マウス）
又はキメラ分子ＣＤ４０Ｆｃ（100μg/マウス）から選
ばれる遮断剤で処理した。免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス
に移植する２時間前又は直後にリンパ球と遮断剤とを混
合し、移植後二日後及び四日後に同じ遮断剤の半量を腹
腔内に投与した。上述の結果として、特にＣＤ４０、Ｃ
Ｄ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）及びＣＤ４０Ｆｃに特異
的な抗体を使用して、マウス抗原に対する応答を遮断し
た。上述の文献は、マウス抗原以外の抗原に対する移植
したリンパ球による応答の参考とはならない。あいに
く、リンパ球による他の全ての応答もまた数週間遮断さ
れることを続いて検討することができなかった。それ
故、これらのマウスは、特に移植後の最初の数週間、ヒ
ト免疫応答の研究をするのに不適当であった。
ル抗体（ｍＡｂ）Ｍ３（100μg/マウス）、Ｍ３−Ｆ
（ａｂ’）2（75μg/マウス）又は抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡ
ｂ Ｍ９１（100μg/マウス）又は種及びアイソタイプ
適合コントロール ｍＡｂ ２Ｃ３（100μg/マウス）
又はキメラ分子ＣＤ４０Ｆｃ（100μg/マウス）から選
ばれる遮断剤で処理した。免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス
に移植する２時間前又は直後にリンパ球と遮断剤とを混
合し、移植後二日後及び四日後に同じ遮断剤の半量を腹
腔内に投与した。上述の結果として、特にＣＤ４０、Ｃ
Ｄ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）及びＣＤ４０Ｆｃに特異
的な抗体を使用して、マウス抗原に対する応答を遮断し
た。上述の文献は、マウス抗原以外の抗原に対する移植
したリンパ球による応答の参考とはならない。あいに
く、リンパ球による他の全ての応答もまた数週間遮断さ
れることを続いて検討することができなかった。それ
故、これらのマウスは、特に移植後の最初の数週間、ヒ
ト免疫応答の研究をするのに不適当であった。
【０００２】
【課題を解決するための手段】本発明により、移植した
ヒトリンパ球を有する、正常なヒト免疫応答を示す能力
を有するマウス等の免疫不全哺乳類を開発した。マウス
等のこれらの哺乳類中のヒトリンパ球は、もはやヒトリ
ンパ球の異物応答を有さないが、特にヒトリンパ球をマ
ウスに移植した時から外来抗原に対して応答する能力を
有する。これは、ヒト免疫治療プロトコールの有効性を
試験できる動物モデルに帰着する。さらに、異物耐性
（xenotolerant)ヒトリンパ球（huPBL）とヒト腫瘍とを
混合することにより、ヒト抗腫瘍免疫をモニターするこ
とができる。さらに、本発明は、移植したヒト末梢血リ
ンパ球を含有する重症複合免疫不全マウスであって、該
ヒト末梢血リンパ球が、移植前にマウス組織抗原に耐性
があるようにされ、移植時から非マウス外来抗原に応答
する能力を有することを特徴とする前記マウスを含有す
る。
ヒトリンパ球を有する、正常なヒト免疫応答を示す能力
を有するマウス等の免疫不全哺乳類を開発した。マウス
等のこれらの哺乳類中のヒトリンパ球は、もはやヒトリ
ンパ球の異物応答を有さないが、特にヒトリンパ球をマ
ウスに移植した時から外来抗原に対して応答する能力を
有する。これは、ヒト免疫治療プロトコールの有効性を
試験できる動物モデルに帰着する。さらに、異物耐性
（xenotolerant)ヒトリンパ球（huPBL）とヒト腫瘍とを
混合することにより、ヒト抗腫瘍免疫をモニターするこ
とができる。さらに、本発明は、移植したヒト末梢血リ
ンパ球を含有する重症複合免疫不全マウスであって、該
ヒト末梢血リンパ球が、移植前にマウス組織抗原に耐性
があるようにされ、移植時から非マウス外来抗原に応答
する能力を有することを特徴とする前記マウスを含有す
る。
【０００３】
【発明の実施の形態】ヒト血液リンパ球は、移植前にリ
ンパ球上の同時刺激分子を遮断することにより、移植
後、そのような耐性を得るためにリンパ球をさらに遮断
処理しなくてもマウス組織抗原に耐性があるようにでき
ることが分かった。同時刺激遮断は、多数の方法により
行うことができる；但し、そのような遮断を得るため
に、移植後にさらなる処理を行う必要はない。本発明は
さらに、ヒト血液リンパ球及びマウスの両方に対して通
常は外来である抗原を本発明のマウスに抗原投与するこ
とによりヒト血液リンパ球免疫応答をモニターする方法
を含む。抗原は、例えばワクチン、腫瘍又はウイルス内
に見いだすことができる。本質的にいかなる免疫不全マ
ウスにも、さらに言えば他の哺乳類にも本発明を使用す
ることができる。使用できる免疫不全哺乳類の例として
は、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ
及び霊長類があげられる。マウス等の哺乳類は、ほぼ完
全に免疫不全でなければならない。すなわち、正常な哺
乳類が応答する抗原に対して免疫応答はほとんど全く示
してはならない。本明細書において使用される哺乳類と
しては重症免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスがあげられる。
いかなる免疫不全哺乳類（倫理的な理由によりヒトは除
く）を使用できると理解すべきである。ＳＣＩＤマウス
は種々の出所から容易に入手できる。ヒトリンパ球は、
公知の方法により、例えば健康なドナーから得られる末
梢血の白血球泳動（luekophoresis）により、ヒト血液
から容易に得ることができる。赤血球細胞を、例えば
０．８３％のＮＨ4Ｃｌで溶解させ、その後ＰＢＬを、
予め温めた０．５％ウシ血清アルブミンを含有するハン
クス液で洗浄することにより得ることができる。
ンパ球上の同時刺激分子を遮断することにより、移植
後、そのような耐性を得るためにリンパ球をさらに遮断
処理しなくてもマウス組織抗原に耐性があるようにでき
ることが分かった。同時刺激遮断は、多数の方法により
行うことができる；但し、そのような遮断を得るため
に、移植後にさらなる処理を行う必要はない。本発明は
さらに、ヒト血液リンパ球及びマウスの両方に対して通
常は外来である抗原を本発明のマウスに抗原投与するこ
とによりヒト血液リンパ球免疫応答をモニターする方法
を含む。抗原は、例えばワクチン、腫瘍又はウイルス内
に見いだすことができる。本質的にいかなる免疫不全マ
ウスにも、さらに言えば他の哺乳類にも本発明を使用す
ることができる。使用できる免疫不全哺乳類の例として
は、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ
及び霊長類があげられる。マウス等の哺乳類は、ほぼ完
全に免疫不全でなければならない。すなわち、正常な哺
乳類が応答する抗原に対して免疫応答はほとんど全く示
してはならない。本明細書において使用される哺乳類と
しては重症免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスがあげられる。
いかなる免疫不全哺乳類（倫理的な理由によりヒトは除
く）を使用できると理解すべきである。ＳＣＩＤマウス
は種々の出所から容易に入手できる。ヒトリンパ球は、
公知の方法により、例えば健康なドナーから得られる末
梢血の白血球泳動（luekophoresis）により、ヒト血液
から容易に得ることができる。赤血球細胞を、例えば
０．８３％のＮＨ4Ｃｌで溶解させ、その後ＰＢＬを、
予め温めた０．５％ウシ血清アルブミンを含有するハン
クス液で洗浄することにより得ることができる。
【０００４】哺乳類に移植する前に種々の公知の遮断剤
を使用して、ヒトリンパ球をマウス（又は他の哺乳類）
抗原に対して耐性にすることができる。そのような遮断
剤はパブリックドメイン又は専売品であり得る。リンパ
球は、例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡ
ｂ）Ｍ３（100μg/マウス）、Ｍ３−Ｆ（ａｂ’）2（75
μg/マウス）又は抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ Ｍ９１（100
μg/マウス）又は種及びアイソタイプ適合コントロール
ｍＡｂ ２Ｃ３（100μg/マウス）又はキメラ分子Ｃ
Ｄ４０Ｆｃ（100μg/マウス）から選ばれる遮断剤で処
理することができる。ヒトリンパ球をホスト抗原に対し
て耐性にする他の方法としては、ヒトＴ細胞上のＣＤ２
８分子をヒトＣＴＬＡ−４融合タンパク質で遮断し、続
いてその細胞をホスト（例えばマウス）組織抗原及び抗
原提示細胞に曝露することがあげられる。これは、３〜
５×１０7 huPBLを３０μｇのヒトＣＴＬＡ−Ｆｃ融合
タンパク質と共にインキュベートし、その細胞懸濁液を
ホスト哺乳類（マウス）の腹腔内に注入することにより
行うことができる。ホスト哺乳類抗原に対する耐性はま
た、免疫抑制剤と共にhuPBLをインキュベートすること
により確立することもできる。この方法はおそらく、非
ホスト抗原に対する正常な応答の潜在能力の減少のため
好ましくない。耐性はまた、接種前に抗原投与量が高い
帯域又は低い帯域にリンパ球を曝すことにより達成でき
る。全ての場合、本発明のテスト哺乳類を得るために、
免疫不全哺乳類、例えば（ＳＣＩＤ）マウスに移植する
前に、移植後にさらに曝露せずにリンパ球と遮断剤とを
混合する。
を使用して、ヒトリンパ球をマウス（又は他の哺乳類）
抗原に対して耐性にすることができる。そのような遮断
剤はパブリックドメイン又は専売品であり得る。リンパ
球は、例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡ
ｂ）Ｍ３（100μg/マウス）、Ｍ３−Ｆ（ａｂ’）2（75
μg/マウス）又は抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ Ｍ９１（100
μg/マウス）又は種及びアイソタイプ適合コントロール
ｍＡｂ ２Ｃ３（100μg/マウス）又はキメラ分子Ｃ
Ｄ４０Ｆｃ（100μg/マウス）から選ばれる遮断剤で処
理することができる。ヒトリンパ球をホスト抗原に対し
て耐性にする他の方法としては、ヒトＴ細胞上のＣＤ２
８分子をヒトＣＴＬＡ−４融合タンパク質で遮断し、続
いてその細胞をホスト（例えばマウス）組織抗原及び抗
原提示細胞に曝露することがあげられる。これは、３〜
５×１０7 huPBLを３０μｇのヒトＣＴＬＡ−Ｆｃ融合
タンパク質と共にインキュベートし、その細胞懸濁液を
ホスト哺乳類（マウス）の腹腔内に注入することにより
行うことができる。ホスト哺乳類抗原に対する耐性はま
た、免疫抑制剤と共にhuPBLをインキュベートすること
により確立することもできる。この方法はおそらく、非
ホスト抗原に対する正常な応答の潜在能力の減少のため
好ましくない。耐性はまた、接種前に抗原投与量が高い
帯域又は低い帯域にリンパ球を曝すことにより達成でき
る。全ての場合、本発明のテスト哺乳類を得るために、
免疫不全哺乳類、例えば（ＳＣＩＤ）マウスに移植する
前に、移植後にさらに曝露せずにリンパ球と遮断剤とを
混合する。
【０００５】本発明のモニター方法は、本発明のテスト
哺乳類（通常、移植したＳＣＩＤマウス）を使用するの
が好ましいが、続いて、例えば移植から二日後及び四日
後に腹腔内で遮断剤に後曝露することにより処理したマ
ウスを使用することができる。そのような後処理したマ
ウスは、移植後有意な時間、ヒト免疫応答が低いために
好ましくないが、移植から約１〜約３週はおそらく使用
することができるだろう。詳細には、ヒト末梢血リンパ
球（正常なドナー由来のもの又は癌患者由来のもののい
ずれか）は、ＳＣＩＤマウスに移植する直前にリンパ球
の表面上の同時刺激分子を遮断することによりマウス組
織抗原に対して耐性にされる。この遮断は、ヒトＣＤ４
０Ｆｃ融合タンパク質を添加することにより行うことが
できる。この融合タンパク質はヒトＴリンパ球上のＣＤ
４０リガンドに結合することができる。Ｔ細胞を（溶解
性ＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質により遮断したＣＤ４０
リガンド同時刺激分子と共に）マウス組織抗原に曝す
と、マウス組織抗原に対して特に非応答性（即ち耐性）
になる。これらの異物耐性huPBL（コントロールhuPBLで
はない）は、続いて外来抗原（すなわち、エプスタイン
・バーウイルス抗原）に対して応答できることが分かっ
た。異物耐性ヒトＰＢＬを移植し、ＥＢＶ糖タンパク質
をワクチン接種したＳＣＩＤマウス（すなわち、異物耐
性huPBL−ＳＣＩＤマウス）は、その後のエプスタイン
・バーウイルスによる致死的な抗原投与に耐えることが
できる。異物耐性huPBL−ＳＣＩＤマウスはまた、（ヒ
ト肺腫瘍の）腫瘍異種移植片を排除することができる
が、従来のhuPBL−ＳＣＩＤマウスは腫瘍異種移植片を
排除しない。これらの結果から、ＳＣＩＤマウスに腹腔
内注入し、ホスト（ＳＣＩＤマウス）組織抗原耐性にし
たhuPBLは、外来抗原に応答することができると考えら
れる。我々のデータにより、この修飾したhuPBL ＳＣ
ＩＤモデルはヒト抗腫瘍免疫を明らかしかつモニターす
ることができることを確立する。
哺乳類（通常、移植したＳＣＩＤマウス）を使用するの
が好ましいが、続いて、例えば移植から二日後及び四日
後に腹腔内で遮断剤に後曝露することにより処理したマ
ウスを使用することができる。そのような後処理したマ
ウスは、移植後有意な時間、ヒト免疫応答が低いために
好ましくないが、移植から約１〜約３週はおそらく使用
することができるだろう。詳細には、ヒト末梢血リンパ
球（正常なドナー由来のもの又は癌患者由来のもののい
ずれか）は、ＳＣＩＤマウスに移植する直前にリンパ球
の表面上の同時刺激分子を遮断することによりマウス組
織抗原に対して耐性にされる。この遮断は、ヒトＣＤ４
０Ｆｃ融合タンパク質を添加することにより行うことが
できる。この融合タンパク質はヒトＴリンパ球上のＣＤ
４０リガンドに結合することができる。Ｔ細胞を（溶解
性ＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質により遮断したＣＤ４０
リガンド同時刺激分子と共に）マウス組織抗原に曝す
と、マウス組織抗原に対して特に非応答性（即ち耐性）
になる。これらの異物耐性huPBL（コントロールhuPBLで
はない）は、続いて外来抗原（すなわち、エプスタイン
・バーウイルス抗原）に対して応答できることが分かっ
た。異物耐性ヒトＰＢＬを移植し、ＥＢＶ糖タンパク質
をワクチン接種したＳＣＩＤマウス（すなわち、異物耐
性huPBL−ＳＣＩＤマウス）は、その後のエプスタイン
・バーウイルスによる致死的な抗原投与に耐えることが
できる。異物耐性huPBL−ＳＣＩＤマウスはまた、（ヒ
ト肺腫瘍の）腫瘍異種移植片を排除することができる
が、従来のhuPBL−ＳＣＩＤマウスは腫瘍異種移植片を
排除しない。これらの結果から、ＳＣＩＤマウスに腹腔
内注入し、ホスト（ＳＣＩＤマウス）組織抗原耐性にし
たhuPBLは、外来抗原に応答することができると考えら
れる。我々のデータにより、この修飾したhuPBL ＳＣ
ＩＤモデルはヒト抗腫瘍免疫を明らかしかつモニターす
ることができることを確立する。
【０００６】我々はまた、抗ＮＫ細胞抗体を投与してマ
ウスＮＫ細胞活性を除くことにより、ＳＣＩＤマウス中
におけるヒトＰＢＬ及びヒト腫瘍異種移植片の移植を増
強する。本発明のモデルは、癌ワクチン及び癌治療用新
規免疫治療プロトコル（すなわち、樹状細胞ペプチドプ
ロトコル、組換えサイトカイン投与又はサイトカイン遺
伝子治療）を評価するための簡便かつ信頼性のある方法
として提供されることが期待される。他のワクチン（す
なわちＡＩＤＳ、肝炎用等）の有効性をテストする機会
を意味する。以下の特定の実施例は本発明を具体的に説
明するものであるが、本発明を制限するものではない。
マウスに適用される原理は他の哺乳類にも同じく適用す
ることができると理解すべきである。 ＳＣＩＤマウスに移植したヒトリンパ球に異物耐性を誘
発するために使用する方法：ヒト末梢血リンパ球（huPB
L）とＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質とを、ＳＣＩＤマウ
スに接種する直前に混合した。３〜５×１０7 huPBLを
３０μｇのヒトＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質に再懸濁
し、各ＳＣＩＤマウスに腹腔内注入した。マウスを、異
物耐性（ＣＤ４０Ｆｃ処理）又はコントロールhuPBLの
いずれかを接種して７〜１５日後に腫瘍で免疫化又は抗
原投与した。 huPBLの異物耐性は機能的免疫を増強することを示す実
施例：３つの実施例により（データと共に）、異物耐性
は、ＳＣＩＤマウスに移植したヒトＰＢＬの機能的免疫
能力を増強するという考えをサポートすることを示し
た。
ウスＮＫ細胞活性を除くことにより、ＳＣＩＤマウス中
におけるヒトＰＢＬ及びヒト腫瘍異種移植片の移植を増
強する。本発明のモデルは、癌ワクチン及び癌治療用新
規免疫治療プロトコル（すなわち、樹状細胞ペプチドプ
ロトコル、組換えサイトカイン投与又はサイトカイン遺
伝子治療）を評価するための簡便かつ信頼性のある方法
として提供されることが期待される。他のワクチン（す
なわちＡＩＤＳ、肝炎用等）の有効性をテストする機会
を意味する。以下の特定の実施例は本発明を具体的に説
明するものであるが、本発明を制限するものではない。
マウスに適用される原理は他の哺乳類にも同じく適用す
ることができると理解すべきである。 ＳＣＩＤマウスに移植したヒトリンパ球に異物耐性を誘
発するために使用する方法：ヒト末梢血リンパ球（huPB
L）とＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質とを、ＳＣＩＤマウ
スに接種する直前に混合した。３〜５×１０7 huPBLを
３０μｇのヒトＣＤ４０Ｆｃ融合タンパク質に再懸濁
し、各ＳＣＩＤマウスに腹腔内注入した。マウスを、異
物耐性（ＣＤ４０Ｆｃ処理）又はコントロールhuPBLの
いずれかを接種して７〜１５日後に腫瘍で免疫化又は抗
原投与した。 huPBLの異物耐性は機能的免疫を増強することを示す実
施例：３つの実施例により（データと共に）、異物耐性
は、ＳＣＩＤマウスに移植したヒトＰＢＬの機能的免疫
能力を増強するという考えをサポートすることを示し
た。
【０００７】実施例１ huPBL介在抗腫瘍免疫を増強するための腫瘍活性化され
た樹状細胞の能力を評価するための異物耐性モデルの使
用 小さくない細胞肺腫瘍を、肺癌患者から得た腫瘍バイオ
プシー組織からの培養において確立した。ＰＢＬは白血
球泳動により得た。これらのＰＢＬを使用して、ＣＤ４
０Ｆｃ融合タンパク質の添加により異種耐性を確立する
か又は確立しないで、５×１０7細胞を腹腔内に接種す
ることによりＳＣＩＤマウスに移植した。この同じ白血
球泳動からのＰＢＬを使用して樹状細胞（D.C.）を膨張
させた。これらのD.C.を、腫瘍で刺激せずに培養し（グ
ループ２）、テスト腫瘍で刺激して培養し（グループ
３）、又は他のヒト肺腫瘍で刺激して培養した（グルー
プ４）。１３日後、ＰＢＬを受けた（異物耐性又は異物
耐性でない）マウスに、グループ２〜４から２．５×１
０5D.C.を腹腔内投与した。グループ１はＤ．Ｃを受け
なかった。２日後、全てのマウスを２．５×１０6テス
ト腫瘍細胞により腹腔内に抗原投与した。６週間後、全
てのマウスを犠牲にして腫瘍の存在を検討した。腹腔中
の全ての腫瘍小結節の全重量を記録した。異物耐性化さ
れていないＰＢＬを受けたマウスに腫瘍抑制は観察され
なかった（図示せず）。異物耐性ＰＢＬ及びテスト腫瘍
で刺激したD.C.を受けたマウスの、５匹のうち３匹のマ
ウスの腹腔中に腫瘍が認められず、２匹に１ｇ未満の腫
瘍バーデン（burden）を有していた。異物耐性ＰＢＬ及
びコントロール腫瘍刺激D.C.を受けたマウス（グループ
４）は全て大きな腫瘍バーデンを有していた。グループ
１〜２のマウスはそれぞれ、犠牲にされる前に腫瘍で死
亡したマウスがグループ内に１匹おり、グループ内の残
りの全てのマウスは犠牲にされる時には腫瘍を（ほとん
どが１ｇより多い）有していた。結果を図１に示す。グ
ループ１は、樹状細胞ワクチンを接種しなかった（５匹
のマウスのうち、１匹死亡）。グループ２は刺激してい
ないDCでワクチン接種した（４匹のマウスのうち、１匹
死亡）。グループ３は、テスト腫瘍で刺激したワクチン
接種した（５匹のマウスのうち３匹に腫瘍が認められな
かった）。グループ４は、コントロール腫瘍で刺激した
DCでワクチン接種した（マウス５匹）。グループ間の有
意な差をマン−ホイットニーテストにより検討した：グ
ループ３と１の間ではＰ＝0.0318であり、グループ３と
２の間ではＰ＝0.0179であり、グループ３と４の間では
Ｐ＝0.0040であり、グループ３と、１、２及び４を組み
合わせた間ではＰ＝0.0019であった。
た樹状細胞の能力を評価するための異物耐性モデルの使
用 小さくない細胞肺腫瘍を、肺癌患者から得た腫瘍バイオ
プシー組織からの培養において確立した。ＰＢＬは白血
球泳動により得た。これらのＰＢＬを使用して、ＣＤ４
０Ｆｃ融合タンパク質の添加により異種耐性を確立する
か又は確立しないで、５×１０7細胞を腹腔内に接種す
ることによりＳＣＩＤマウスに移植した。この同じ白血
球泳動からのＰＢＬを使用して樹状細胞（D.C.）を膨張
させた。これらのD.C.を、腫瘍で刺激せずに培養し（グ
ループ２）、テスト腫瘍で刺激して培養し（グループ
３）、又は他のヒト肺腫瘍で刺激して培養した（グルー
プ４）。１３日後、ＰＢＬを受けた（異物耐性又は異物
耐性でない）マウスに、グループ２〜４から２．５×１
０5D.C.を腹腔内投与した。グループ１はＤ．Ｃを受け
なかった。２日後、全てのマウスを２．５×１０6テス
ト腫瘍細胞により腹腔内に抗原投与した。６週間後、全
てのマウスを犠牲にして腫瘍の存在を検討した。腹腔中
の全ての腫瘍小結節の全重量を記録した。異物耐性化さ
れていないＰＢＬを受けたマウスに腫瘍抑制は観察され
なかった（図示せず）。異物耐性ＰＢＬ及びテスト腫瘍
で刺激したD.C.を受けたマウスの、５匹のうち３匹のマ
ウスの腹腔中に腫瘍が認められず、２匹に１ｇ未満の腫
瘍バーデン（burden）を有していた。異物耐性ＰＢＬ及
びコントロール腫瘍刺激D.C.を受けたマウス（グループ
４）は全て大きな腫瘍バーデンを有していた。グループ
１〜２のマウスはそれぞれ、犠牲にされる前に腫瘍で死
亡したマウスがグループ内に１匹おり、グループ内の残
りの全てのマウスは犠牲にされる時には腫瘍を（ほとん
どが１ｇより多い）有していた。結果を図１に示す。グ
ループ１は、樹状細胞ワクチンを接種しなかった（５匹
のマウスのうち、１匹死亡）。グループ２は刺激してい
ないDCでワクチン接種した（４匹のマウスのうち、１匹
死亡）。グループ３は、テスト腫瘍で刺激したワクチン
接種した（５匹のマウスのうち３匹に腫瘍が認められな
かった）。グループ４は、コントロール腫瘍で刺激した
DCでワクチン接種した（マウス５匹）。グループ間の有
意な差をマン−ホイットニーテストにより検討した：グ
ループ３と１の間ではＰ＝0.0318であり、グループ３と
２の間ではＰ＝0.0179であり、グループ３と４の間では
Ｐ＝0.0040であり、グループ３と、１、２及び４を組み
合わせた間ではＰ＝0.0019であった。
【０００８】実施例２ ヒト肺腫瘍異種移植片に対するhuPBL応答を評価するた
めの異物耐性モデルの使用 この実施例により、アロジェネイックなヒト肺腫瘍の成
長を抑制する異物耐性（コントロールではない）ＰＢＬ
の能力を示す。この肺腫瘍は、ヒト前立腺特異抗原（Ｐ
ＳＡ）をコードする遺伝子を含有する哺乳類発現ベクタ
ーでトランスフェクトした。これらの腫瘍異種移植片に
より、ＰＳＡを産生及び分泌し、ＳＣＩＤマウスを有す
る腫瘍の血清中に分泌した。正常なヒトドナー由来の３
×１０7異物耐性又はコントロール（非異物耐性）ＰＢ
ＬをＳＣＩＤマウスに腹腔内移植した。一週間後、huPB
L接種マウスに、２×１０6 ２Ｅ９／ＰＳＡ腫瘍細胞を
腹腔内注入することにより抗原投与した。これは、ヒト
前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の遺伝子を含有する哺乳類発
現ベクターでトランスフェクトした、小さくない細胞肺
腫瘍セルラインである。血清中のＰＳＡレベルは腫瘍成
長と相関していた。図２に示した結果は、腫瘍抗原投与
後４週間で得られたものである。血清ＰＳＡレベルを定
期的にモニターでき、増加する血清ＰＳＡレベルが腫瘍
異種移植片の大きくなるサイズと相関することが確立さ
れた。この実験においてヒトＰＢＬは正常なドナーから
得たものであり、腫瘍は、huPBLに関してアロジェネイ
ックである。図２において、異物耐性マウスの血清中の
ＰＳＡレベル（即ち腫瘍サイズ）は、コントロール（非
異物耐性）huPBLを受けたマウス中のＰＳＡレベルと比
較して抑制されていることに注意されたい。
めの異物耐性モデルの使用 この実施例により、アロジェネイックなヒト肺腫瘍の成
長を抑制する異物耐性（コントロールではない）ＰＢＬ
の能力を示す。この肺腫瘍は、ヒト前立腺特異抗原（Ｐ
ＳＡ）をコードする遺伝子を含有する哺乳類発現ベクタ
ーでトランスフェクトした。これらの腫瘍異種移植片に
より、ＰＳＡを産生及び分泌し、ＳＣＩＤマウスを有す
る腫瘍の血清中に分泌した。正常なヒトドナー由来の３
×１０7異物耐性又はコントロール（非異物耐性）ＰＢ
ＬをＳＣＩＤマウスに腹腔内移植した。一週間後、huPB
L接種マウスに、２×１０6 ２Ｅ９／ＰＳＡ腫瘍細胞を
腹腔内注入することにより抗原投与した。これは、ヒト
前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の遺伝子を含有する哺乳類発
現ベクターでトランスフェクトした、小さくない細胞肺
腫瘍セルラインである。血清中のＰＳＡレベルは腫瘍成
長と相関していた。図２に示した結果は、腫瘍抗原投与
後４週間で得られたものである。血清ＰＳＡレベルを定
期的にモニターでき、増加する血清ＰＳＡレベルが腫瘍
異種移植片の大きくなるサイズと相関することが確立さ
れた。この実験においてヒトＰＢＬは正常なドナーから
得たものであり、腫瘍は、huPBLに関してアロジェネイ
ックである。図２において、異物耐性マウスの血清中の
ＰＳＡレベル（即ち腫瘍サイズ）は、コントロール（非
異物耐性）huPBLを受けたマウス中のＰＳＡレベルと比
較して抑制されていることに注意されたい。
【０００９】実施例３ エプスタイン・バーウイルス−ペプチドワクチン接種法
を評価するための異物耐性モデルの使用 以下のデータを、異物耐性によりＳＣＩＤマウスモデル
中のヒトＰＢＬの機能的免疫応答が増強されるという考
えをさらに裏付けるために提供する。ＥＢＶ陰性のドナ
ーから採取したＰＢＬ（５×１０7）を、ＣＤ４０Ｆｃ
融合タンパク質による異物耐性を確立するか又は確立せ
ずに、ＳＣＩＤマウスに腹腔内接種した。次にマウスを
３つのグループに分けた。グループ１は非耐性ＰＢＬを
受け、切断型のＥＢＶペプチドｇｐ３５０／２２０でワ
クチン接種した。グループ２のマウスは異物耐性ＰＢＬ
を受けたがワクチン接種しなかった。グループ３のマウ
スは異物耐性ＰＢＬを受け、切断型ＥＢＶペプチドでワ
クチン接種した。ワクチン接種後、全てのマウスを野生
型生ＥＢＶで抗原投与した。ワクチン接種しなかったす
べてのマウス（グループ２）８匹のうちの８匹がリンパ
腫を発達させたか又は犠牲にされる前にリンパ腫で死亡
した（表１）。コントロール（非異物耐性）ＰＢＬを受
けたマウスのグループをワクチン接種しても、ＥＢＶに
よる抗原投与からマウスを保護しなかった（グループ
１）。グループ３のマウス、すなわちＥＢＶペプチドで
ワクチン接種した異物耐性ＰＢＬマウスの、１３匹のう
ち３匹がリンパ腫を発達させたのみでウイルス抗原投与
から十分な保護を示した。
を評価するための異物耐性モデルの使用 以下のデータを、異物耐性によりＳＣＩＤマウスモデル
中のヒトＰＢＬの機能的免疫応答が増強されるという考
えをさらに裏付けるために提供する。ＥＢＶ陰性のドナ
ーから採取したＰＢＬ（５×１０7）を、ＣＤ４０Ｆｃ
融合タンパク質による異物耐性を確立するか又は確立せ
ずに、ＳＣＩＤマウスに腹腔内接種した。次にマウスを
３つのグループに分けた。グループ１は非耐性ＰＢＬを
受け、切断型のＥＢＶペプチドｇｐ３５０／２２０でワ
クチン接種した。グループ２のマウスは異物耐性ＰＢＬ
を受けたがワクチン接種しなかった。グループ３のマウ
スは異物耐性ＰＢＬを受け、切断型ＥＢＶペプチドでワ
クチン接種した。ワクチン接種後、全てのマウスを野生
型生ＥＢＶで抗原投与した。ワクチン接種しなかったす
べてのマウス（グループ２）８匹のうちの８匹がリンパ
腫を発達させたか又は犠牲にされる前にリンパ腫で死亡
した（表１）。コントロール（非異物耐性）ＰＢＬを受
けたマウスのグループをワクチン接種しても、ＥＢＶに
よる抗原投与からマウスを保護しなかった（グループ
１）。グループ３のマウス、すなわちＥＢＶペプチドで
ワクチン接種した異物耐性ＰＢＬマウスの、１３匹のう
ち３匹がリンパ腫を発達させたのみでウイルス抗原投与
から十分な保護を示した。
【００１０】表Ｉ ＥＢＶペプチド３５０／２２０で異物耐性ヒトＰＢＬを
ＳＣＩＤマウスにワクチン接種することによりウイルス
保護免疫を誘発する
ＳＣＩＤマウスにワクチン接種することによりウイルス
保護免疫を誘発する
【００１１】
【図１】樹状細胞を接種した異物耐性ＰＢＬ細胞を移植
したＳＣＩＤマウスと未接種のコントロールとの比較を
示す。
したＳＣＩＤマウスと未接種のコントロールとの比較を
示す。
【図２】異物耐性及び非異物耐性ＰＢＬを移植し、腫瘍
細胞発現前立腺特異抗原を抗原投与し、前立腺特異抗原
と共に腫瘍細胞の成長をテストしたＳＣＩＤマウスの比
較を示す。
細胞発現前立腺特異抗原を抗原投与し、前立腺特異抗原
と共に腫瘍細胞の成長をテストしたＳＣＩＤマウスの比
較を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｚ 33/574 Ｃ１２Ｎ 5/00 //(Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ファン アン チェン アメリカ合衆国 ニューヨーク州 14221 ウィリアムスヴィル サドバリー レー ン 25 (72)発明者 ネヤート ケイ エイギルメス アメリカ合衆国 ニューヨーク州 14051 イースト アムハースト プラムウッド コート 36
Claims (10)
- 【請求項１】移植したヒトリンパ球を含有する重症複合
免疫不全哺乳類であって、ヒトリンパ球が、移植前にマ
ウス組織抗原に耐性があるようにされており、移植時か
ら非マウス外来抗原に応答する能力を有することを特徴
とする前記哺乳類。 - 【請求項２】哺乳類がマウスであることを特徴とする請
求項１記載の哺乳類。 - 【請求項３】リンパ球が、該リンパ球上の同時刺激分子
を遮断することにより、移植前にマウス組織抗原に耐性
があるようにされているヒト血液リンパ球であることを
特徴とする請求項２記載の免疫不全マウス。 - 【請求項４】同時刺激遮断が、ヒトＣＤ４０Ｆｃ融合タ
ンパク質をリンパ球に添加してＣＤ４０リガンドをリン
パ球に結合させ、さらに、遮断したＣＤ４０サイトと共
に該リンパ球をマウス組織抗原に曝露することにより行
われることを特徴とする請求項３記載の免疫不全マウ
ス。 - 【請求項５】ヒト血液リンパ球及び哺乳類の両方に対し
て通常は外来である抗原を請求項１記載の哺乳類に抗原
投与することによりヒトリンパ球免疫応答をモニターす
る方法。 - 【請求項６】哺乳類がマウスであることを特徴とする請
求項５記載の方法。 - 【請求項７】抗原がワクチン内に見いだされることを特
徴とする請求項６記載の方法。 - 【請求項８】抗原が腫瘍内に見いだされることを特徴と
する請求項６記載の方法。 - 【請求項９】抗原がウイルス内に見いだされることを特
徴とする請求項６記載の方法。 - 【請求項１０】哺乳類及びヒトリンパ球に対して通常は
外来である抗原で哺乳類に抗原投与することによりヒト
リンパ球免疫応答をモニターする方法であって、前記哺
乳類が、哺乳類由来の抗原には耐性であるが外来抗原に
対する正常なヒト免疫応答を有する移植したヒトリンパ
球を含有することを特徴とする重症の免疫不全である前
記方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2841198A | 1998-02-24 | 1998-02-24 | |
| US09/028411 | 1998-02-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11313574A true JPH11313574A (ja) | 1999-11-16 |
Family
ID=21843310
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4417199A Pending JPH11313574A (ja) | 1998-02-24 | 1999-02-23 | ヒト免疫応答を有するｓｃｉｄマウス |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0937389A2 (ja) |
| JP (1) | JPH11313574A (ja) |
| AU (1) | AU1638399A (ja) |
| CA (1) | CA2261249A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2422618A1 (en) | 2010-08-27 | 2012-02-29 | Technologie Integrale Ltd. | Animal model for the evaluation of the efficacy of an HIV vaccine |
-
1999
- 1999-02-05 CA CA 2261249 patent/CA2261249A1/en not_active Abandoned
- 1999-02-10 AU AU16383/99A patent/AU1638399A/en not_active Abandoned
- 1999-02-13 EP EP19990102924 patent/EP0937389A2/en not_active Withdrawn
- 1999-02-23 JP JP4417199A patent/JPH11313574A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU1638399A (en) | 1999-09-09 |
| EP0937389A2 (en) | 1999-08-25 |
| CA2261249A1 (en) | 1999-08-24 |
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