JPH11286453A - 紫外線照射によるタンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法 - Google Patents
紫外線照射によるタンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法Info
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- JPH11286453A JPH11286453A JP10087136A JP8713698A JPH11286453A JP H11286453 A JPH11286453 A JP H11286453A JP 10087136 A JP10087136 A JP 10087136A JP 8713698 A JP8713698 A JP 8713698A JP H11286453 A JPH11286453 A JP H11286453A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 紫外線照射によるタンパク質含有組成物
のウイルス不活化処理法であって、タンパク質に実質的
に損傷を与えず、且つウイルスの感染力を抑制するのに
実質的に悪影響を及ぼさない程度に２５４ｎｍの波長の
光をを吸収する物質、好ましくはクレアチニン、アスコ
ルビン酸またはそれらの塩を添加したタンパク質含有溶
液に、ウイルスの感染力を抑制するのに十分な照射エネ
ルギー量の紫外線を照射する工程を含む方法。該方法に
より処理されたタンパク質含有組成物。クレアチニン、
アスコルビン酸またはそれらの塩を有効成分とする紫外
線照射に対するタンパク質安定化剤。 【効果】 本発明の方法は、低純度／高濃度のタンパク
質含有組成物のウイルス不活化にも適用できる点で有
用。また、特に耐熱性非エンベロープウイルスの不活化
に有用である。
のウイルス不活化処理法であって、タンパク質に実質的
に損傷を与えず、且つウイルスの感染力を抑制するのに
実質的に悪影響を及ぼさない程度に２５４ｎｍの波長の
光をを吸収する物質、好ましくはクレアチニン、アスコ
ルビン酸またはそれらの塩を添加したタンパク質含有溶
液に、ウイルスの感染力を抑制するのに十分な照射エネ
ルギー量の紫外線を照射する工程を含む方法。該方法に
より処理されたタンパク質含有組成物。クレアチニン、
アスコルビン酸またはそれらの塩を有効成分とする紫外
線照射に対するタンパク質安定化剤。 【効果】 本発明の方法は、低純度／高濃度のタンパク
質含有組成物のウイルス不活化にも適用できる点で有
用。また、特に耐熱性非エンベロープウイルスの不活化
に有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、紫外線照射による
タンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法および
該方法により製造されるウイルス不活化されたタンパク
質含有組成物に関する。また、本発明は、該ウイルス不
活化処理方法において使用される、紫外線照射に対する
タンパク質安定化剤に関する。
タンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法および
該方法により製造されるウイルス不活化されたタンパク
質含有組成物に関する。また、本発明は、該ウイルス不
活化処理方法において使用される、紫外線照射に対する
タンパク質安定化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】タンパク質製剤のウイルス不活化処理法
として、液状加熱処理、乾燥加熱処理、化学的処理等が
従来より用いられている。しかし、熱に不安定なタンパ
ク質ではウイルス不活化と同時にタンパク質の失活を生
じてしまう。また、界面活性剤などの化学的処理では、
非エンベロープウイルス、特にパルボウイルスやＡ型肝
炎ウイルス等が不活化されないという欠点がある。これ
ら耐熱性の非エンベロープウイルスの除去方法として
は、多孔性中空糸等のウイルス除去膜を用いる方法が挙
げられるが、フィブリノーゲンのような分子量が非常に
大きいタンパク質には適用することができない。
として、液状加熱処理、乾燥加熱処理、化学的処理等が
従来より用いられている。しかし、熱に不安定なタンパ
ク質ではウイルス不活化と同時にタンパク質の失活を生
じてしまう。また、界面活性剤などの化学的処理では、
非エンベロープウイルス、特にパルボウイルスやＡ型肝
炎ウイルス等が不活化されないという欠点がある。これ
ら耐熱性の非エンベロープウイルスの除去方法として
は、多孔性中空糸等のウイルス除去膜を用いる方法が挙
げられるが、フィブリノーゲンのような分子量が非常に
大きいタンパク質には適用することができない。
【０００３】一方、LoGrippoら（Bibl. Haematol., 7:
225-230, 1958 ）はヒト血漿をβ−プロピオラクトンで
処理し、さらに紫外線を照射する工程からなる有効なウ
イルス不活化処理法を報告しているが、該方法によれ
ば、凝固第VIII因子は０．１２Ｊ／ｃｍ2 の紫外線照射
で活性の７０％が失活する。小林と宮本（特開平７−１
９６５３１号公報）は、高純度に精製された血液凝固因
子を用いることにより、LoGrippoらの１／１０の紫外線
照射量で３種のウイルスを十分に不活化できることを示
した。しかしながら、この方法は、血漿のような未精製
画分のウイルス不活化には適用できない。
225-230, 1958 ）はヒト血漿をβ−プロピオラクトンで
処理し、さらに紫外線を照射する工程からなる有効なウ
イルス不活化処理法を報告しているが、該方法によれ
ば、凝固第VIII因子は０．１２Ｊ／ｃｍ2 の紫外線照射
で活性の７０％が失活する。小林と宮本（特開平７−１
９６５３１号公報）は、高純度に精製された血液凝固因
子を用いることにより、LoGrippoらの１／１０の紫外線
照射量で３種のウイルスを十分に不活化できることを示
した。しかしながら、この方法は、血漿のような未精製
画分のウイルス不活化には適用できない。
【０００４】Nur (WO 96/00091) は、照射光の波長領域
を調節できるレーザー装置を用いて、タンパク質に損傷
を与える波長の紫外光をカットすることによりタンパク
質の失活を抑えながらウイルスを不活化する方法を開示
している。しかしながら、ウイルス不活化に最も効果的
な波長である２５４ｎｍの紫外光は、同時にタンパク質
にも損傷を与えるので、この方法では、タンパク質の安
定性を重視すれば２５４ｎｍの紫外光を利用することが
できないし、２５４ｎｍの紫外光を利用すればタンパク
質の失活を招くというジレンマが生じる。また、照射光
の波長域を調節するには高価な特殊レーザー装置を必要
とする点でこの方法は汎用に適さない。
を調節できるレーザー装置を用いて、タンパク質に損傷
を与える波長の紫外光をカットすることによりタンパク
質の失活を抑えながらウイルスを不活化する方法を開示
している。しかしながら、ウイルス不活化に最も効果的
な波長である２５４ｎｍの紫外光は、同時にタンパク質
にも損傷を与えるので、この方法では、タンパク質の安
定性を重視すれば２５４ｎｍの紫外光を利用することが
できないし、２５４ｎｍの紫外光を利用すればタンパク
質の失活を招くというジレンマが生じる。また、照射光
の波長域を調節するには高価な特殊レーザー装置を必要
とする点でこの方法は汎用に適さない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】紫外線照射によるウイ
ルス不活化は、上述のように２５４ｎｍ付近の紫外光に
よりウイルス核酸中にピリミジンダイマーが形成され、
ＤＮＡの複製・転写の障害となることによると考えられ
るが、この波長の光は同時にタンパク質にも損傷を与え
る。したがって、タンパク質に損傷を与えず、且つウイ
ルスの感染力を抑制するのに十分であるように紫外線照
射量を制御する必要がある。しかしながら、従来の方法
ではそのような照射量の調節は容易ではない。
ルス不活化は、上述のように２５４ｎｍ付近の紫外光に
よりウイルス核酸中にピリミジンダイマーが形成され、
ＤＮＡの複製・転写の障害となることによると考えられ
るが、この波長の光は同時にタンパク質にも損傷を与え
る。したがって、タンパク質に損傷を与えず、且つウイ
ルスの感染力を抑制するのに十分であるように紫外線照
射量を制御する必要がある。しかしながら、従来の方法
ではそのような照射量の調節は容易ではない。
【０００６】したがって、本発明の目的は、タンパク質
に損傷を与えず、且つウイルスの感染力を抑制するのに
十分であるように紫外線照射量を制御する簡便な方法を
提供することにより、タンパク質の活性に不利な影響を
与えずに容易にウイルス不活化を達成し得るタンパク質
製剤のウイルス不活化処理法を提供することである。
に損傷を与えず、且つウイルスの感染力を抑制するのに
十分であるように紫外線照射量を制御する簡便な方法を
提供することにより、タンパク質の活性に不利な影響を
与えずに容易にウイルス不活化を達成し得るタンパク質
製剤のウイルス不活化処理法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、クレアチニンや
アスコルビン酸などの２５４ｎｍ付近の光を吸収する物
質を適当量タンパク質含有溶液に添加し、これに紫外線
を照射した場合、LoGrippoら（上述）と同レベル以上の
紫外線を照射してもタンパク質の高い活性を維持したま
ま、ウイルスの感染力を実質的に抑制し得ることを見い
だし、本発明を完成するに至った。
的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、クレアチニンや
アスコルビン酸などの２５４ｎｍ付近の光を吸収する物
質を適当量タンパク質含有溶液に添加し、これに紫外線
を照射した場合、LoGrippoら（上述）と同レベル以上の
紫外線を照射してもタンパク質の高い活性を維持したま
ま、ウイルスの感染力を実質的に抑制し得ることを見い
だし、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、紫外線照射によるタ
ンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法であっ
て、タンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルス
の感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程
度に、２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質、好ましく
は医薬上許容される添加剤、より好ましくはクレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
を添加したタンパク質含有溶液に、ウイルスの感染力を
抑制するのに十分な照射エネルギー量の紫外線を照射す
る工程を含む方法である。特に、本発明はクレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
の添加濃度が０．１〜４％（ｗ／ｖ）である上記方法で
ある。就中、本発明はウイルス不活化処理後のタンパク
質の残存活性が９８％以上であることを特徴とする上記
のいずれかの方法である。また、別の本発明は、上記の
いずれかの方法で処理された、感染力のある耐熱性非エ
ンベロープウイルスを実質的に含まないタンパク質含有
組成物、好ましくはウイルス不活化処理後のタンパク質
の残存活性が９０％以上、より好ましくは９８％以上で
あることを特徴とするタンパク質含有組成物、就中タン
パク質がフィブリノーゲン、血液凝固第XIII因子、血液
凝固第VIII因子、フォンビルブランド因子およびフィブ
ロネクチンからなる群より選択される上記のタンパク質
含有組成物である。さらに別の本発明は、クレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
を有効成分とする、紫外線照射に対するタンパク質安定
化剤である。
ンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法であっ
て、タンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルス
の感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程
度に、２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質、好ましく
は医薬上許容される添加剤、より好ましくはクレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
を添加したタンパク質含有溶液に、ウイルスの感染力を
抑制するのに十分な照射エネルギー量の紫外線を照射す
る工程を含む方法である。特に、本発明はクレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
の添加濃度が０．１〜４％（ｗ／ｖ）である上記方法で
ある。就中、本発明はウイルス不活化処理後のタンパク
質の残存活性が９８％以上であることを特徴とする上記
のいずれかの方法である。また、別の本発明は、上記の
いずれかの方法で処理された、感染力のある耐熱性非エ
ンベロープウイルスを実質的に含まないタンパク質含有
組成物、好ましくはウイルス不活化処理後のタンパク質
の残存活性が９０％以上、より好ましくは９８％以上で
あることを特徴とするタンパク質含有組成物、就中タン
パク質がフィブリノーゲン、血液凝固第XIII因子、血液
凝固第VIII因子、フォンビルブランド因子およびフィブ
ロネクチンからなる群より選択される上記のタンパク質
含有組成物である。さらに別の本発明は、クレアチニ
ン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容される塩
を有効成分とする、紫外線照射に対するタンパク質安定
化剤である。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の方法を適用し得るタンパ
ク質含有組成物に特に制限はなく、ウイルス夾雑の可能
性のあるあらゆるタンパク質含有溶液に適用可能であ
る。タンパク質としては、例えば、血液凝固第V, VII,
VIII, IX, X およびXIII因子、トロンビン、プロトロン
ビン、フィブリノーゲン、活性化プロテインＣ、プロテ
インＣ、フォンビルブランド因子、フィブロネクチン、
免疫グロブリン、アルブミン、ヘモグロビン、アンチト
ロンビンIII 、外因系凝固インヒビター、ヘパリンコフ
ァクターII、ＣＩインヒビター、α１−アンチトリプシ
ン、ハプトグロビン、インターフェロン、プラスミノー
ゲン、プラスミノーゲン活性化因子、インスリン、ヒト
成長ホルモン、キマーゼ等が挙げられる。特に、フィブ
リノーゲン、血液凝固第XIII因子、血液凝固第VIII因
子、フォンビルブランド因子およびフィブロネクチン等
の、ウイルス除去膜処理等の他のウイルス除去法に適さ
ないタンパク質にとって、本発明のウイルス不活化処理
法が有効に使用される。
ク質含有組成物に特に制限はなく、ウイルス夾雑の可能
性のあるあらゆるタンパク質含有溶液に適用可能であ
る。タンパク質としては、例えば、血液凝固第V, VII,
VIII, IX, X およびXIII因子、トロンビン、プロトロン
ビン、フィブリノーゲン、活性化プロテインＣ、プロテ
インＣ、フォンビルブランド因子、フィブロネクチン、
免疫グロブリン、アルブミン、ヘモグロビン、アンチト
ロンビンIII 、外因系凝固インヒビター、ヘパリンコフ
ァクターII、ＣＩインヒビター、α１−アンチトリプシ
ン、ハプトグロビン、インターフェロン、プラスミノー
ゲン、プラスミノーゲン活性化因子、インスリン、ヒト
成長ホルモン、キマーゼ等が挙げられる。特に、フィブ
リノーゲン、血液凝固第XIII因子、血液凝固第VIII因
子、フォンビルブランド因子およびフィブロネクチン等
の、ウイルス除去膜処理等の他のウイルス除去法に適さ
ないタンパク質にとって、本発明のウイルス不活化処理
法が有効に使用される。
【００１０】上記のようなタンパク質を含有するものと
しては、例えば、血漿または組織抽出液、各種分画法に
より得られるそれらの画分、遺伝子組換え宿主または組
織の培養により得られる培養液、市販の液状タンパク製
剤または乾燥製剤を適当な溶媒に溶解したものが挙げら
れる。含有されるタンパク質は単一であっても複数であ
ってもよく、タンパク質以外の生体物質、例えば脂質、
多糖類、核酸などが夾雑していてもよい。また、溶液中
のタンパク質濃度に特に制限はない。溶液のｐＨも、タ
ンパク質が活性な状態で安定に存在し得る範囲であれば
特に制限はない。
しては、例えば、血漿または組織抽出液、各種分画法に
より得られるそれらの画分、遺伝子組換え宿主または組
織の培養により得られる培養液、市販の液状タンパク製
剤または乾燥製剤を適当な溶媒に溶解したものが挙げら
れる。含有されるタンパク質は単一であっても複数であ
ってもよく、タンパク質以外の生体物質、例えば脂質、
多糖類、核酸などが夾雑していてもよい。また、溶液中
のタンパク質濃度に特に制限はない。溶液のｐＨも、タ
ンパク質が活性な状態で安定に存在し得る範囲であれば
特に制限はない。
【００１１】本発明の方法により不活化することができ
るウイルスは特に限定されないが、例えば、ワクシニア
ウイルス、ムンプスウイルス、ヘルペスウイルス（単純
疱疹ウイルス等）、エコーウイルス、パルボウイルス、
脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｇ型
肝炎ウイルス（ＨＧＶ）等が挙げられる。特に夾雑が危
惧されるウイルスとしては、ＨＩＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶ、
ＨＣＶ、ＨＧＶ等である。
るウイルスは特に限定されないが、例えば、ワクシニア
ウイルス、ムンプスウイルス、ヘルペスウイルス（単純
疱疹ウイルス等）、エコーウイルス、パルボウイルス、
脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｇ型
肝炎ウイルス（ＨＧＶ）等が挙げられる。特に夾雑が危
惧されるウイルスとしては、ＨＩＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶ、
ＨＣＶ、ＨＧＶ等である。
【００１２】紫外線照射処理は、液状のタンパク質含有
組成物に対して均一に紫外線を照射して行う。望ましく
は、被照射液の液層の厚みを薄くして、例えば３ｍｍ以
下、好ましくは０．５ｍｍ以下にして行う。照射に用い
られる容器は循環式のものが実用的であり、液層の厚み
を３ｍｍ以下、好ましくは０．５ｍｍ以下に調整する。
紫外線照射処理の際の温度は１〜３５℃、好ましくは１
０〜３０℃であり、紫外線の波長は１８０〜３５０ｎ
ｍ、好ましくは２００〜３２０ｎｍ、就中約２５０ｎｍ
付近である。照射エネルギー量は、ウイルスの感染力を
抑制するのに十分な量であれば特に限定されず、タンパ
ク質の濃度および純度、並びに夾雑ウイルスの種類およ
びその量などによって適宜変化させることができるが、
例えば０．０１〜１００Ｊ／ｃｍ2 、好ましくは０．１
〜１０Ｊ／ｃｍ2 、より好ましくは０．１〜１Ｊ／ｃｍ
2 である。照射エネルギー量とは、紫外線の強度と照射
時間の積で示される。紫外線強度と照射時間にも特に制
限はなく、所望の照射エネルギー量に応じて適宜調節す
ることができる。例えば、上記の０．０１〜１００Ｊ／
ｃｍ2 の照射エネルギー量を得るためには、紫外線強度
５〜１０7 μＷ／ｃｍ 2 で１秒〜１５分間照射すればよ
い。
組成物に対して均一に紫外線を照射して行う。望ましく
は、被照射液の液層の厚みを薄くして、例えば３ｍｍ以
下、好ましくは０．５ｍｍ以下にして行う。照射に用い
られる容器は循環式のものが実用的であり、液層の厚み
を３ｍｍ以下、好ましくは０．５ｍｍ以下に調整する。
紫外線照射処理の際の温度は１〜３５℃、好ましくは１
０〜３０℃であり、紫外線の波長は１８０〜３５０ｎ
ｍ、好ましくは２００〜３２０ｎｍ、就中約２５０ｎｍ
付近である。照射エネルギー量は、ウイルスの感染力を
抑制するのに十分な量であれば特に限定されず、タンパ
ク質の濃度および純度、並びに夾雑ウイルスの種類およ
びその量などによって適宜変化させることができるが、
例えば０．０１〜１００Ｊ／ｃｍ2 、好ましくは０．１
〜１０Ｊ／ｃｍ2 、より好ましくは０．１〜１Ｊ／ｃｍ
2 である。照射エネルギー量とは、紫外線の強度と照射
時間の積で示される。紫外線強度と照射時間にも特に制
限はなく、所望の照射エネルギー量に応じて適宜調節す
ることができる。例えば、上記の０．０１〜１００Ｊ／
ｃｍ2 の照射エネルギー量を得るためには、紫外線強度
５〜１０7 μＷ／ｃｍ 2 で１秒〜１５分間照射すればよ
い。
【００１３】本発明において、「タンパク質に実質的に
損傷を与えない」とは、ウイルス不活化処理後のタンパ
ク質含有組成物が所定の用途に使用し得る程度にタンパ
ク質の活性が保持されていることを意味する。より具体
的には、タンパク質の残存活性が約８０％以上、好まし
くは約９０％以上、最も好ましくは９８％以上である。
また、「ウイルスの感染力を抑制する」とは、タンパク
質含有溶液中のウイルス感染価を、所定のウイルスの感
染力を評価するのに当該分野で一般的に用いられる方法
により検定したときに、紫外線照射後のウイルス感染価
が、該タンパク質含有組成物の所定の用途に安全に使用
できる範囲内であるようにすることを意味する。例え
ば、紫外線照射後のウイルス感染価が照射前の１００分
の１以下、好ましくは１０，０００分の１以下、より好
ましくは１００，０００分の１以下となることである。
「ウイルスの感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及
ぼさない程度」とは、紫外線照射後のタンパク質含有溶
液中のウイルス感染価が、該タンパク質含有組成物の所
定の用途に安全に使用できる範囲を越えるような影響を
及ぼさない程度を意味する。
損傷を与えない」とは、ウイルス不活化処理後のタンパ
ク質含有組成物が所定の用途に使用し得る程度にタンパ
ク質の活性が保持されていることを意味する。より具体
的には、タンパク質の残存活性が約８０％以上、好まし
くは約９０％以上、最も好ましくは９８％以上である。
また、「ウイルスの感染力を抑制する」とは、タンパク
質含有溶液中のウイルス感染価を、所定のウイルスの感
染力を評価するのに当該分野で一般的に用いられる方法
により検定したときに、紫外線照射後のウイルス感染価
が、該タンパク質含有組成物の所定の用途に安全に使用
できる範囲内であるようにすることを意味する。例え
ば、紫外線照射後のウイルス感染価が照射前の１００分
の１以下、好ましくは１０，０００分の１以下、より好
ましくは１００，０００分の１以下となることである。
「ウイルスの感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及
ぼさない程度」とは、紫外線照射後のタンパク質含有溶
液中のウイルス感染価が、該タンパク質含有組成物の所
定の用途に安全に使用できる範囲を越えるような影響を
及ぼさない程度を意味する。
【００１４】本発明の方法においてタンパク質含有溶液
に添加される２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質は、
タンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルスの感
染力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程度に
２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質（以下、「本発明
の紫外線吸収物質」という場合もある）であれば特に限
定されないが、該タンパク質含有組成物が医薬組成物で
ある場合には、該物質は、最終タンパク製剤中に残存し
ても安全に使用できるように、医薬上許容される添加剤
であることが好ましい。この場合、最終のタンパク質精
製工程の後に該物質を添加して紫外線照射によるウイル
ス不活化処理を行い、そのまま液状製剤として最終製剤
とすることもできる。本発明の紫外線吸収物質として好
ましく使用される医薬添加物としては、例えば、クレア
チニン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容され
る塩が挙げられるがそれらに限定されない。一方、本発
明の紫外線吸収物質が医薬上許容される添加剤でない場
合には、該物質はウイルス不活化処理後に慣用の分離技
術により容易に除去し得るものである必要がある。ま
た、該物質が医薬上許容される添加剤であっても、適用
上最終製剤中に含まれない方がより好ましい場合には、
同様にウイルス不活化処理後に慣用の分離技術により除
去すればよい。
に添加される２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質は、
タンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルスの感
染力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程度に
２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質（以下、「本発明
の紫外線吸収物質」という場合もある）であれば特に限
定されないが、該タンパク質含有組成物が医薬組成物で
ある場合には、該物質は、最終タンパク製剤中に残存し
ても安全に使用できるように、医薬上許容される添加剤
であることが好ましい。この場合、最終のタンパク質精
製工程の後に該物質を添加して紫外線照射によるウイル
ス不活化処理を行い、そのまま液状製剤として最終製剤
とすることもできる。本発明の紫外線吸収物質として好
ましく使用される医薬添加物としては、例えば、クレア
チニン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許容され
る塩が挙げられるがそれらに限定されない。一方、本発
明の紫外線吸収物質が医薬上許容される添加剤でない場
合には、該物質はウイルス不活化処理後に慣用の分離技
術により容易に除去し得るものである必要がある。ま
た、該物質が医薬上許容される添加剤であっても、適用
上最終製剤中に含まれない方がより好ましい場合には、
同様にウイルス不活化処理後に慣用の分離技術により除
去すればよい。
【００１５】本発明の紫外線吸収物質の添加濃度は、タ
ンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルスの感染
力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程度に２
５４ｎｍの波長の光を吸収する濃度であれば特に制限は
ないが、タンパク質含有組成物が医薬組成物であり、該
紫外線吸収物質が最終製剤に含まれる場合には、該物質
の医薬上許容される濃度範囲を越えないことが必要であ
る。例えば、クレアチニン、アスコルビン酸またはそれ
らの製薬上許容される塩を使用する場合、その添加濃度
は０．１〜４％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．１〜２％
（ｗ／ｖ）である。
ンパク質に実質的に損傷を与えず、且つウイルスの感染
力を抑制するのに実質的に悪影響を及ぼさない程度に２
５４ｎｍの波長の光を吸収する濃度であれば特に制限は
ないが、タンパク質含有組成物が医薬組成物であり、該
紫外線吸収物質が最終製剤に含まれる場合には、該物質
の医薬上許容される濃度範囲を越えないことが必要であ
る。例えば、クレアチニン、アスコルビン酸またはそれ
らの製薬上許容される塩を使用する場合、その添加濃度
は０．１〜４％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．１〜２％
（ｗ／ｖ）である。
【００１６】本発明のウイルス不活化処理法により処理
されたタンパク質含有組成物は、タンパク質に実質的に
損傷を被ることなく、ウイルスの感染力が実質的に抑制
されたものである。特に、本発明のウイルス不活化処理
されたタンパク質含有組成物は、感染力のある耐熱性非
エンベロープウイルス、例えばパルボウイルスやＨＡＶ
を実質的に含まないことを特徴とする。したがって、本
発明のウイルス不活化処理法により処理されるタンパク
質としては、フィブリノーゲン、血液凝固第XIII因子、
血液凝固第VIII因子、フォンビルブランド因子およびフ
ィブロネクチン等の、ウイルス除去膜処理等の他のウイ
ルス除去法に適さないタンパク質が特に好ましく例示さ
れる。
されたタンパク質含有組成物は、タンパク質に実質的に
損傷を被ることなく、ウイルスの感染力が実質的に抑制
されたものである。特に、本発明のウイルス不活化処理
されたタンパク質含有組成物は、感染力のある耐熱性非
エンベロープウイルス、例えばパルボウイルスやＨＡＶ
を実質的に含まないことを特徴とする。したがって、本
発明のウイルス不活化処理法により処理されるタンパク
質としては、フィブリノーゲン、血液凝固第XIII因子、
血液凝固第VIII因子、フォンビルブランド因子およびフ
ィブロネクチン等の、ウイルス除去膜処理等の他のウイ
ルス除去法に適さないタンパク質が特に好ましく例示さ
れる。
【００１７】本発明のウイルス不活化処理されたタンパ
ク質含有組成物における、ウイルス不活化処理後のタン
パク質の残存活性は約８０％以上、好ましくは約９０％
以上、最も好ましくは９８％以上である。
ク質含有組成物における、ウイルス不活化処理後のタン
パク質の残存活性は約８０％以上、好ましくは約９０％
以上、最も好ましくは９８％以上である。
【００１８】本発明はまた、クレアチニン、アスコルビ
ン酸またはそれらの製薬上許容される塩を有効成分とす
る、紫外線照射に対するタンパク質安定化剤を提供す
る。該タンパク質安定化剤は、上記の紫外線照射による
タンパク質含有組成物のウイルス不活化処理法に使用す
ることができるだけでなく、例えば、日焼け止めクリー
ムのような形態で、紫外線に対する皮膚コラーゲンの損
傷抑制剤としても使用することができる。
ン酸またはそれらの製薬上許容される塩を有効成分とす
る、紫外線照射に対するタンパク質安定化剤を提供す
る。該タンパク質安定化剤は、上記の紫外線照射による
タンパク質含有組成物のウイルス不活化処理法に使用す
ることができるだけでなく、例えば、日焼け止めクリー
ムのような形態で、紫外線に対する皮膚コラーゲンの損
傷抑制剤としても使用することができる。
【００１９】紫外線照射によるタンパク質含有組成物の
ウイルス不活化処理法に使用する場合には、該タンパク
質安定化剤は、クレアチニン、アスコルビン酸またはそ
れらの製薬上許容される塩とともに適当な有機もしくは
無機の担体および／または添加剤を含有する固形、半固
形または液状製剤の形態で調製される。
ウイルス不活化処理法に使用する場合には、該タンパク
質安定化剤は、クレアチニン、アスコルビン酸またはそ
れらの製薬上許容される塩とともに適当な有機もしくは
無機の担体および／または添加剤を含有する固形、半固
形または液状製剤の形態で調製される。
【００２０】紫外線に対する皮膚コラーゲンの損傷抑制
剤として使用する場合には、該タンパク質安定化剤は、
クレアチニン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許
容される塩とともに適当な基剤を含有する外用剤の形態
で調製される。基剤としては、ワセリン、パラフィン、
プラスチベース、シリコン、植物油、ロウ等の油脂系基
剤、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリン、オイセリ
ン等の乳剤性基剤、マクロゴール類等の水溶性基剤等が
例示される。また、必要に応じてパラオキシ安息香酸等
の保存剤を添加してもよい。
剤として使用する場合には、該タンパク質安定化剤は、
クレアチニン、アスコルビン酸またはそれらの製薬上許
容される塩とともに適当な基剤を含有する外用剤の形態
で調製される。基剤としては、ワセリン、パラフィン、
プラスチベース、シリコン、植物油、ロウ等の油脂系基
剤、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリン、オイセリ
ン等の乳剤性基剤、マクロゴール類等の水溶性基剤等が
例示される。また、必要に応じてパラオキシ安息香酸等
の保存剤を添加してもよい。
【００２１】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより詳細に説
明するが、これらは単なる例示であって本発明を何ら限
定するものではない。
明するが、これらは単なる例示であって本発明を何ら限
定するものではない。
【００２２】参考例１ 各種薬剤の紫外線吸収波長 医薬添加物として従来使用されている各種薬剤の紫外線
吸収波長を常法により調べた結果を表１に示す。その結
果、アセチルトリプトファンが、一般にタンパク質に最
も損傷を与えると考えられている２８０ｎｍに吸収極大
を持つことが示された。クレアチニンは２３４ｎｍに吸
収極大を有しており、２５４ｎｍ付近でも吸収がみられ
た。クエン酸ナトリウム、アルギニン、グリシルグリシ
ン、ヒスチジンはいずれもクレアチニンの第１吸収ピー
ク（１９９ｎｍ）とほぼ同じ波長領域に唯一の吸収ピー
クを有していた。
吸収波長を常法により調べた結果を表１に示す。その結
果、アセチルトリプトファンが、一般にタンパク質に最
も損傷を与えると考えられている２８０ｎｍに吸収極大
を持つことが示された。クレアチニンは２３４ｎｍに吸
収極大を有しており、２５４ｎｍ付近でも吸収がみられ
た。クエン酸ナトリウム、アルギニン、グリシルグリシ
ン、ヒスチジンはいずれもクレアチニンの第１吸収ピー
ク（１９９ｎｍ）とほぼ同じ波長領域に唯一の吸収ピー
クを有していた。
【００２３】
【表１】
【００２４】実施例１ 紫外線照射に対するクレアチニ
ンのタンパク質安定化効果（１） （１）紫外線照射に対するタンパク質安定化剤のスクリ
ーニング フィブリノーゲン（フィブリノーゲンＨＴ−ミドリ，添
加剤としてクエン酸ナトリウムおよびアルギニンを含
む）の２％滅菌水溶液１ｍｌに、安定化剤としてアセチ
ルトリプトファン、ヒスチジン、グリシルグリシンまた
はクレアチニンを２％の濃度となるように添加した。該
溶液を６０ｍｍペトリ皿（面積：２１ｃｍ 2 ；コーニン
グ社製）に入れ（液相の高さ：０．５ｍｍ）、回転振と
う機（マリソル社製）に載せて振とう機の目盛９の速度
で振とうしながら、上部より紫外線ランプを３７０μＷ
／ｃｍ2 の強度で０，０．５，１，２，４および８分間
照射した。紫外線照射前後のフィブリノーゲンの凝固活
性を通常のゲル濾過分析により測定した（アセチルトリ
プトファンおよびヒスチジンを含むサンプルはゲル濾過
分析の前にＰＤ−１０にて脱塩した）。その結果を図１
に示す。安定化剤無添加の溶液では、紫外線照射時間の
延長（総照射量の増大）に伴って活性が徐々に低下し、
８分後（総照射量：０．１８Ｊ／ｃｍ2 ）には残存活性
は６６％にまで低下した。安定化剤としてアセチルトリ
プトファン、ヒスチジン、あるいはグリシルグリシンを
添加したものについても同様に残存活性が低下し、フィ
ブリノーゲン安定化効果は認められなかった。一方、ク
レアチニンは顕著なフィブリノーゲン安定化効果を示
し、８分後でも９４％以上の残存活性が観察された。
ンのタンパク質安定化効果（１） （１）紫外線照射に対するタンパク質安定化剤のスクリ
ーニング フィブリノーゲン（フィブリノーゲンＨＴ−ミドリ，添
加剤としてクエン酸ナトリウムおよびアルギニンを含
む）の２％滅菌水溶液１ｍｌに、安定化剤としてアセチ
ルトリプトファン、ヒスチジン、グリシルグリシンまた
はクレアチニンを２％の濃度となるように添加した。該
溶液を６０ｍｍペトリ皿（面積：２１ｃｍ 2 ；コーニン
グ社製）に入れ（液相の高さ：０．５ｍｍ）、回転振と
う機（マリソル社製）に載せて振とう機の目盛９の速度
で振とうしながら、上部より紫外線ランプを３７０μＷ
／ｃｍ2 の強度で０，０．５，１，２，４および８分間
照射した。紫外線照射前後のフィブリノーゲンの凝固活
性を通常のゲル濾過分析により測定した（アセチルトリ
プトファンおよびヒスチジンを含むサンプルはゲル濾過
分析の前にＰＤ−１０にて脱塩した）。その結果を図１
に示す。安定化剤無添加の溶液では、紫外線照射時間の
延長（総照射量の増大）に伴って活性が徐々に低下し、
８分後（総照射量：０．１８Ｊ／ｃｍ2 ）には残存活性
は６６％にまで低下した。安定化剤としてアセチルトリ
プトファン、ヒスチジン、あるいはグリシルグリシンを
添加したものについても同様に残存活性が低下し、フィ
ブリノーゲン安定化効果は認められなかった。一方、ク
レアチニンは顕著なフィブリノーゲン安定化効果を示
し、８分後でも９４％以上の残存活性が観察された。
【００２５】（２）紫外線照射に対するクレアチニンの
タンパク安定化効果の濃度依存性 上記（１）において、フィブリノーゲン濃度を０．５％
に変更して、クレアチニンの添加濃度を０，０．１，
０．５，１および２％と変化させてフィブリノーゲン安
定化効果の濃度依存性を調べた。その結果、８分間の紫
外線照射によるフィブリノーゲンの活性低下はクレアチ
ニンの濃度依存的に抑制され、クレアチニン１％でその
効果はプラトーに達した（図２）。
タンパク安定化効果の濃度依存性 上記（１）において、フィブリノーゲン濃度を０．５％
に変更して、クレアチニンの添加濃度を０，０．１，
０．５，１および２％と変化させてフィブリノーゲン安
定化効果の濃度依存性を調べた。その結果、８分間の紫
外線照射によるフィブリノーゲンの活性低下はクレアチ
ニンの濃度依存的に抑制され、クレアチニン１％でその
効果はプラトーに達した（図２）。
【００２６】実施例２ 紫外線照射に対するクレアチニ
ンのタンパク質安定化効果（２） 実施例１の（１）において、タンパク質含有溶液を０．
５％の血液凝固第IX因子を含むＮａＣｌ含有クエン酸緩
衝液（クリスマシンＨＴ−ミドリ）に変更し、紫外線照
射に対するクレアチニンの血液凝固第IX因子安定化効果
を調べた。８分間の紫外線照射後、安定化剤無添加の第
IX因子の残存活性は約５０％にまで低下したが、クレア
チニンを添加した溶液では第IX因子活性の低下はみられ
なかった。
ンのタンパク質安定化効果（２） 実施例１の（１）において、タンパク質含有溶液を０．
５％の血液凝固第IX因子を含むＮａＣｌ含有クエン酸緩
衝液（クリスマシンＨＴ−ミドリ）に変更し、紫外線照
射に対するクレアチニンの血液凝固第IX因子安定化効果
を調べた。８分間の紫外線照射後、安定化剤無添加の第
IX因子の残存活性は約５０％にまで低下したが、クレア
チニンを添加した溶液では第IX因子活性の低下はみられ
なかった。
【００２７】実施例３ 紫外線照射に対するアスコルビ
ン酸のタンパク質安定化効果 クエン酸ナトリウムおよびアルギニンを含まないフィブ
リノーゲン水溶液に、安定化剤としてクレアチニン、ク
エン酸ナトリウム、アルギニン、アスコルビン酸ナトリ
ウムまたは安息香酸ナトリウムを２％の濃度となるよう
に添加した。該溶液を６０ｍｍペトリ皿（面積：２１ｃ
ｍ2 ；コーニング社製）に入れ（液相の高さ：０．５ｍ
ｍ）、回転振とう機（マリソル社製）に載せて振とう機
の目盛９の速度で振とうしながら、上部より紫外線ラン
プを３７０μＷ／ｃｍ2 の強度で８分間照射した。紫外
線照射前後のフィブリノーゲンの凝固活性を通常のゲル
濾過分析により測定した。その結果を図３に示す。安定
化剤としてクエン酸ナトリウム、アルギニン、あるいは
安息香酸ナトリウムを添加したものについては、安定化
剤を添加しなかったものよりもさらにフィブリノーゲン
の残存活性が低下した。一方、アスコルビン酸ナトリウ
ムは、クレアチニンと同様に顕著なフィブリノーゲン安
定化効果を示した。
ン酸のタンパク質安定化効果 クエン酸ナトリウムおよびアルギニンを含まないフィブ
リノーゲン水溶液に、安定化剤としてクレアチニン、ク
エン酸ナトリウム、アルギニン、アスコルビン酸ナトリ
ウムまたは安息香酸ナトリウムを２％の濃度となるよう
に添加した。該溶液を６０ｍｍペトリ皿（面積：２１ｃ
ｍ2 ；コーニング社製）に入れ（液相の高さ：０．５ｍ
ｍ）、回転振とう機（マリソル社製）に載せて振とう機
の目盛９の速度で振とうしながら、上部より紫外線ラン
プを３７０μＷ／ｃｍ2 の強度で８分間照射した。紫外
線照射前後のフィブリノーゲンの凝固活性を通常のゲル
濾過分析により測定した。その結果を図３に示す。安定
化剤としてクエン酸ナトリウム、アルギニン、あるいは
安息香酸ナトリウムを添加したものについては、安定化
剤を添加しなかったものよりもさらにフィブリノーゲン
の残存活性が低下した。一方、アスコルビン酸ナトリウ
ムは、クレアチニンと同様に顕著なフィブリノーゲン安
定化効果を示した。
【００２８】実施例４ 紫外線照射に対するクレアチニ
ンのタンパク質安定化効果（３） 実施例１および２で使用されたフィブリノーゲン製剤に
は添加剤としてクエン酸ナトリウムおよびアルギニンが
含まれているが、これらの添加剤は紫外線照射によるタ
ンパク質の変性をむしろ増大させることが、実施例３の
実験で観察されたので（図３）、クエン酸ナトリウムお
よびアルギニンを含まないフィブリノーゲン溶液を用い
て実施例１の（２）と同様の実験を行った。その結果、
クレアチニンは、クエン酸ナトリウムおよびアルギニン
非存在下では、０．５％の添加濃度でフィブリノーゲン
の残存活性が９８％以上という高い安定化効果を示した
（図４）。
ンのタンパク質安定化効果（３） 実施例１および２で使用されたフィブリノーゲン製剤に
は添加剤としてクエン酸ナトリウムおよびアルギニンが
含まれているが、これらの添加剤は紫外線照射によるタ
ンパク質の変性をむしろ増大させることが、実施例３の
実験で観察されたので（図３）、クエン酸ナトリウムお
よびアルギニンを含まないフィブリノーゲン溶液を用い
て実施例１の（２）と同様の実験を行った。その結果、
クレアチニンは、クエン酸ナトリウムおよびアルギニン
非存在下では、０．５％の添加濃度でフィブリノーゲン
の残存活性が９８％以上という高い安定化効果を示した
（図４）。
【００２９】実施例５ 紫外線照射によるウイルス不活
化に対するクレアチニンの影響 フィブリノーゲン（フィブリノーゲンＨＴ−ミドリ；上
述）を０，０．５，１．０，２．０および４．０％の各
種濃度のクレアチニン溶液５０ｍｌに溶解し、該混合溶
液１０容に対してマウス脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）浮
遊液１容を加えて軽く混和した後、６０ｍｍペトリ皿に
１ｍｌずつ分注し、回転振とう機（マリソル社製）に載
せて振とう機の目盛９の速度で振とうしながら、上部よ
り紫外線ランプ（紫外線強度：３７０μＷ／ｃｍ2 ）を
用いて０，４．５，９，１３．５および１８分間紫外線
照射した（総照射量は、それぞれ０，０．１，０．２，
０．３および０．４Ｊ／ｃｍ2 ）。照射後、ＥＭＣ−フ
ィブリノーゲン懸濁液を回収しウイルス力価測定に供し
た。ウイルス力価は以下のように測定した。Ｖｅｒｏ細
胞（ＡＴＣＣより入手）を１％ウシ胎仔血清含有最少必
須培地（ＦＣＳ−ＭＥＭ）を含むＴ１５０プレート（フ
ァルコン社製）に播種して３７℃で一夜培養した。conf
luent になった細胞を、ＰＢＳで洗浄後トリプシン処理
して剥離し、cell scraperを用いて回収し、cell strai
ner を通した後、Ｔ１５０プレート４枚に播種して３７
℃で４日間培養した。confluent になった細胞を同様に
回収してcell strainer を通した後、一部をとって１０
倍希釈し、細胞数をカウントして５×１０5 個／プレー
トとなるように９６ウェルプレートに播種し、一夜培養
した。一方、ＥＭＣ−フィブリノーゲン懸濁液の５0 〜
５10＋ｍｏｃｋの５倍系列希釈を、９６ウェルプレート
を用いて作製した。該希釈検体１００μｌを上記のよう
に調製した細胞に添加し、３日間培養した。各ウェルに
１０％ホルマリン１００μｌを加えて３７℃で２時間イ
ンキュベートして細胞を固定した。培地−ホルマリン混
液を吸引除去し、クリスタルバイオレットを各ウェル５
０μｌずつ添加して２時間放置した後ＣＰＥを観察し、
ＴＣＩＤ50を算出した。その結果を表２に示す。クレア
チニンは濃度依存的にウイルス不活化効果を妨害した
が、十分なタンパク質安定化を得るのに有効な濃度であ
る０．５％においては０．３Ｊ／ｃｍ2 以上の紫外線照
射により４ｌｏｇのウイルス不活化効果があり、照射後
のＴＣＩＤ50値は２ｌｏｇにまで低下した。
化に対するクレアチニンの影響 フィブリノーゲン（フィブリノーゲンＨＴ−ミドリ；上
述）を０，０．５，１．０，２．０および４．０％の各
種濃度のクレアチニン溶液５０ｍｌに溶解し、該混合溶
液１０容に対してマウス脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）浮
遊液１容を加えて軽く混和した後、６０ｍｍペトリ皿に
１ｍｌずつ分注し、回転振とう機（マリソル社製）に載
せて振とう機の目盛９の速度で振とうしながら、上部よ
り紫外線ランプ（紫外線強度：３７０μＷ／ｃｍ2 ）を
用いて０，４．５，９，１３．５および１８分間紫外線
照射した（総照射量は、それぞれ０，０．１，０．２，
０．３および０．４Ｊ／ｃｍ2 ）。照射後、ＥＭＣ−フ
ィブリノーゲン懸濁液を回収しウイルス力価測定に供し
た。ウイルス力価は以下のように測定した。Ｖｅｒｏ細
胞（ＡＴＣＣより入手）を１％ウシ胎仔血清含有最少必
須培地（ＦＣＳ−ＭＥＭ）を含むＴ１５０プレート（フ
ァルコン社製）に播種して３７℃で一夜培養した。conf
luent になった細胞を、ＰＢＳで洗浄後トリプシン処理
して剥離し、cell scraperを用いて回収し、cell strai
ner を通した後、Ｔ１５０プレート４枚に播種して３７
℃で４日間培養した。confluent になった細胞を同様に
回収してcell strainer を通した後、一部をとって１０
倍希釈し、細胞数をカウントして５×１０5 個／プレー
トとなるように９６ウェルプレートに播種し、一夜培養
した。一方、ＥＭＣ−フィブリノーゲン懸濁液の５0 〜
５10＋ｍｏｃｋの５倍系列希釈を、９６ウェルプレート
を用いて作製した。該希釈検体１００μｌを上記のよう
に調製した細胞に添加し、３日間培養した。各ウェルに
１０％ホルマリン１００μｌを加えて３７℃で２時間イ
ンキュベートして細胞を固定した。培地−ホルマリン混
液を吸引除去し、クリスタルバイオレットを各ウェル５
０μｌずつ添加して２時間放置した後ＣＰＥを観察し、
ＴＣＩＤ50を算出した。その結果を表２に示す。クレア
チニンは濃度依存的にウイルス不活化効果を妨害した
が、十分なタンパク質安定化を得るのに有効な濃度であ
る０．５％においては０．３Ｊ／ｃｍ2 以上の紫外線照
射により４ｌｏｇのウイルス不活化効果があり、照射後
のＴＣＩＤ50値は２ｌｏｇにまで低下した。
【００３０】
【表２】
【００３１】
【発明の効果】本発明のタンパク質含有組成物のウイル
ス不活化処理方法は、タンパク質の活性をほとんど低下
させることなく夾雑するウイルスを実質的に不活化する
ことができるので、加熱処理や化学的処理に適さないタ
ンパク質含有組成物のウイルス不活化、並びに加熱処理
や化学的処理では不活化することができない耐熱性の非
エンベロープウイルスの不活化に有用である。特に、本
発明の方法は、特殊な装置の使用や、紫外線の照射エネ
ルギー量の厳密な調節を必要とせず、容易にタンパク質
に実質的に損傷を与えず且つウイルスの感染力を実質的
に抑制することができ、また、低純度および／または高
濃度のタンパク質含有組成物のウイルス不活化にも適用
することができる点できわめて有用である。さらに、本
発明のタンパク質安定化剤は、上記ウイルス不活化処理
のための添加剤、並びに紫外線に対する皮膚コラーゲン
の損傷抑制剤等として有用である。
ス不活化処理方法は、タンパク質の活性をほとんど低下
させることなく夾雑するウイルスを実質的に不活化する
ことができるので、加熱処理や化学的処理に適さないタ
ンパク質含有組成物のウイルス不活化、並びに加熱処理
や化学的処理では不活化することができない耐熱性の非
エンベロープウイルスの不活化に有用である。特に、本
発明の方法は、特殊な装置の使用や、紫外線の照射エネ
ルギー量の厳密な調節を必要とせず、容易にタンパク質
に実質的に損傷を与えず且つウイルスの感染力を実質的
に抑制することができ、また、低純度および／または高
濃度のタンパク質含有組成物のウイルス不活化にも適用
することができる点できわめて有用である。さらに、本
発明のタンパク質安定化剤は、上記ウイルス不活化処理
のための添加剤、並びに紫外線に対する皮膚コラーゲン
の損傷抑制剤等として有用である。
【図１】紫外線照射に対する各種添加剤のタンパク質安
定化効果の、照射時間による推移を示す図である。
定化効果の、照射時間による推移を示す図である。
【図２】紫外線照射に対するクレアチニンのタンパク質
安定化効果の濃度依存性を示す図である。
安定化効果の濃度依存性を示す図である。
【図３】紫外線照射に対する各種添加剤のタンパク質安
定化効果を示す図である。
定化効果を示す図である。
【図４】クエン酸ナトリウムおよびアルギニン非存在下
での、紫外線照射に対するクレアチニンのタンパク質安
定化効果の濃度依存性を示す図である。
での、紫外線照射に対するクレアチニンのタンパク質安
定化効果の濃度依存性を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 北村 妙 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字内
Claims (9)
- 【請求項１】 紫外線照射によるタンパク質含有組成物
のウイルス不活化処理方法であって、タンパク質に実質
的に損傷を与えず、且つウイルスの感染力を抑制するの
に実質的に悪影響を及ぼさない程度に、２５４ｎｍの波
長の光を吸収する物質を添加したタンパク質含有溶液
に、ウイルスの感染力を抑制するのに十分な照射エネル
ギー量の紫外線を照射する工程を含む方法。 - 【請求項２】 タンパク質に実質的に損傷を与えず、且
つウイルスの感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及
ぼさない程度に、２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質
が、医薬上許容される添加剤である請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 タンパク質に実質的に損傷を与えず、且
つウイルスの感染力を抑制するのに実質的に悪影響を及
ぼさない程度に、２５４ｎｍの波長の光を吸収する物質
が、クレアチニン、アスコルビン酸またはそれらの製薬
上許容される塩である請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 クレアチニン、アスコルビン酸またはそ
れらの製薬上許容される塩の添加濃度が０．１〜４％
（ｗ／ｖ）である請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 ウイルス不活化処理後のタンパク質の残
存活性が９８％以上であることを特徴とする請求項１〜
４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 請求項１〜５のいずれかに記載の方法で
処理された、感染力のある耐熱性非エンベロープウイル
スを実質的に含まないタンパク質含有組成物。 - 【請求項７】 ウイルス不活化処理後のタンパク質の残
存活性が９８％以上であることを特徴とする請求項６記
載のタンパク質含有組成物。 - 【請求項８】 該タンパク質が、フィブリノーゲン、血
液凝固第XIII因子、血液凝固第VIII因子、フォンビルブ
ランド因子およびフィブロネクチンからなる群より選択
される請求項６または７記載のタンパク質含有組成物。 - 【請求項９】 クレアチニン、アスコルビン酸またはそ
の製薬上許容される塩を有効成分とする、紫外線照射に
対するタンパク質安定化剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10087136A JPH11286453A (ja) | 1998-03-31 | 1998-03-31 | 紫外線照射によるタンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10087136A JPH11286453A (ja) | 1998-03-31 | 1998-03-31 | 紫外線照射によるタンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11286453A true JPH11286453A (ja) | 1999-10-19 |
Family
ID=13906561
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10087136A Pending JPH11286453A (ja) | 1998-03-31 | 1998-03-31 | 紫外線照射によるタンパク質含有組成物のウイルス不活化処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11286453A (ja) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006029571A1 (en) * | 2004-09-14 | 2006-03-23 | The University Of Hong Kong | Photochemically crosslinked collagen scaffolds and methods for their preparation |
| JP2007511517A (ja) * | 2003-11-14 | 2007-05-10 | アルザ・コーポレーシヨン | 薬剤と照射を受けた賦形剤の製剤の中の薬剤の酸化を最小化 |
| EP2156832A1 (en) * | 2007-06-14 | 2010-02-24 | Pola Pharma Inc. | Pharmaceutical composition |
| JP2010515759A (ja) * | 2007-01-12 | 2010-05-13 | アルベマール・コーポレーシヨン | 食用の果物および野菜の殺微生物処理 |
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