JPH11271306A - 生物学的活性物質の高分子量化 - Google Patents
生物学的活性物質の高分子量化Info
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- JPH11271306A JPH11271306A JP9391398A JP9391398A JPH11271306A JP H11271306 A JPH11271306 A JP H11271306A JP 9391398 A JP9391398 A JP 9391398A JP 9391398 A JP9391398 A JP 9391398A JP H11271306 A JPH11271306 A JP H11271306A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生物学的活性物質を片末端に有する重合体を
形成しうるラジカル重合誘発剤、ならびに、その免疫検
定への使用 【解決手段】生物学的活性物質（例えば、抗体）に共有
結合した、有機カルボン酸残基またはエチレン型不飽和
二重結合を有する化合物の残基を有するラジカル重合誘
発剤、ならびに該誘発剤を用いる重合体の製造方法およ
び該方法を用いる生物学的試料中の微量物質の検出方
法。
形成しうるラジカル重合誘発剤、ならびに、その免疫検
定への使用 【解決手段】生物学的活性物質（例えば、抗体）に共有
結合した、有機カルボン酸残基またはエチレン型不飽和
二重結合を有する化合物の残基を有するラジカル重合誘
発剤、ならびに該誘発剤を用いる重合体の製造方法およ
び該方法を用いる生物学的試料中の微量物質の検出方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は生物学的活性物質の
高分子量化のための組成物に関する。かような組成物
は、例えば、生体内微量物質の検出に使用することがで
きる。
高分子量化のための組成物に関する。かような組成物
は、例えば、生体内微量物質の検出に使用することがで
きる。
【０００２】
【従来の技術】生体内微量物質を検出するために、ＥＬ
ＩＳＡを初めとし、酵素標識を用いるイムノアッセイが
広く使用されている。これは、理論的には酵素反応時間
を長くすればする程、該反応を介して得られるシグナル
が増強でき、高感度アッセイが可能であること等によ
る。
ＩＳＡを初めとし、酵素標識を用いるイムノアッセイが
広く使用されている。これは、理論的には酵素反応時間
を長くすればする程、該反応を介して得られるシグナル
が増強でき、高感度アッセイが可能であること等によ
る。
【０００３】しかしながら、高感度を達成するには、酵
素反応時間を比較的長くする必要があり、また使用する
酵素の安定性に応じて、操作条件が限定されることもよ
くある。
素反応時間を比較的長くする必要があり、また使用する
酵素の安定性に応じて、操作条件が限定されることもよ
くある。
【０００４】こうような酵素標識を用いる短所を考慮
し、改良された免疫比濁法（turbidimetric immunoassa
y）も提案されている。例えば、特開平９−５４０９２
号公報には、免疫学的活性物質重合体を検体中の被検物
質と接触させて生じる反応生成物の比濁分析が記載され
ている。また、特開平９−６８５３０号公報には、酵素
重合体（複数の酵素をペンダントとして有する重合体）
に免疫学的活性物質を化学修飾した重合体も記載されて
いる。なお、この重合体は酵素標識を用いる免疫測定法
に分類されるものである。
し、改良された免疫比濁法（turbidimetric immunoassa
y）も提案されている。例えば、特開平９−５４０９２
号公報には、免疫学的活性物質重合体を検体中の被検物
質と接触させて生じる反応生成物の比濁分析が記載され
ている。また、特開平９−６８５３０号公報には、酵素
重合体（複数の酵素をペンダントとして有する重合体）
に免疫学的活性物質を化学修飾した重合体も記載されて
いる。なお、この重合体は酵素標識を用いる免疫測定法
に分類されるものである。
【０００５】特開平９−５４０９２号公報では、ラジカ
ル重合可能な重合性基が共有結合した抗体分子それ自体
をマクロモノマーとして用い、重合させて得られた複数
のペンダントとして抗体分子を有する重合体が公表され
ており、さらにかかる重合体を用いる抗原の比濁分析も
公表されている。具体的には、被検体として抗原を含有
する試料に上記重合体を加え、生成する免疫複合体によ
る吸光度の変化を指標に抗原濃度を評価しようとするも
のである。
ル重合可能な重合性基が共有結合した抗体分子それ自体
をマクロモノマーとして用い、重合させて得られた複数
のペンダントとして抗体分子を有する重合体が公表され
ており、さらにかかる重合体を用いる抗原の比濁分析も
公表されている。具体的には、被検体として抗原を含有
する試料に上記重合体を加え、生成する免疫複合体によ
る吸光度の変化を指標に抗原濃度を評価しようとするも
のである。
【０００６】この従来技術によれば、測定感度が高まる
ことが示唆されているが、複数の抗体をペンダントとし
て有する重合体を用いるため、必ずしも抗体が効率よく
利用されているとはいえない。また、巨大分子である抗
体等が結合したラジカル重合可能な重合性基を介する重
合反応は、必ずしも容易に進行させることができず、そ
のため所望の重合体を調製することが困難な場合もあ
る。
ことが示唆されているが、複数の抗体をペンダントとし
て有する重合体を用いるため、必ずしも抗体が効率よく
利用されているとはいえない。また、巨大分子である抗
体等が結合したラジカル重合可能な重合性基を介する重
合反応は、必ずしも容易に進行させることができず、そ
のため所望の重合体を調製することが困難な場合もあ
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、主と
して、免疫比濁法に都合よく用いることのできる試薬を
提供することにある。さらに一般的には、本発明は生物
体に微量に存在する物質（本明細書では生物学的活性物
質とも称する）のある一定の物質との特異的結合能を利
用できる生物学的活性物質の化学的修飾体を提供するこ
とも目的とする。
して、免疫比濁法に都合よく用いることのできる試薬を
提供することにある。さらに一般的には、本発明は生物
体に微量に存在する物質（本明細書では生物学的活性物
質とも称する）のある一定の物質との特異的結合能を利
用できる生物学的活性物質の化学的修飾体を提供するこ
とも目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、特に、抗
体などの高分子量物質の化学的修飾や該物質の特異的結
合能を効率よく利用するための手段を探究してきた。そ
の結果、特定の官能基で該物質を化学修飾した場合、そ
れらの官能基を介してラジカル重合を効率よく誘発でき
ることを見い出した。
体などの高分子量物質の化学的修飾や該物質の特異的結
合能を効率よく利用するための手段を探究してきた。そ
の結果、特定の官能基で該物質を化学修飾した場合、そ
れらの官能基を介してラジカル重合を効率よく誘発でき
ることを見い出した。
【０００９】したがって、本発明によれば、式 Ｂｉｏ−Ｉｎｔ （Ｉ） ［式中、Ｉｎｔは、ラジカル開始剤の存在下でラジカル
を発生しうる基を有する少なくとも１個の残基を示し、
Ｂｉｏは、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリゴ）ヌクレ
オチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズしうるポリ
（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプターとリガン
ド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジンとビオチ
ンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれる特異的
結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両構成員に
より形成された複合体に由来する残基を示し、そしてＢ
ｉｏとＩｎｔは、Ｉｎｔの数に応じた数の共有結合によ
って結合している、但し、こうして結合しているＢｉｏ
−ＩｎｔのＩｎｔ部分に存在するラジカルを発生しうる
基は、それら自体を介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形
成することができないものである］で表される生物学的
活性物質を担持するラジカル重合誘発剤を含んでなる重
合用組成物が提供される。
を発生しうる基を有する少なくとも１個の残基を示し、
Ｂｉｏは、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリゴ）ヌクレ
オチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズしうるポリ
（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプターとリガン
ド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジンとビオチ
ンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれる特異的
結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両構成員に
より形成された複合体に由来する残基を示し、そしてＢ
ｉｏとＩｎｔは、Ｉｎｔの数に応じた数の共有結合によ
って結合している、但し、こうして結合しているＢｉｏ
−ＩｎｔのＩｎｔ部分に存在するラジカルを発生しうる
基は、それら自体を介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形
成することができないものである］で表される生物学的
活性物質を担持するラジカル重合誘発剤を含んでなる重
合用組成物が提供される。
【００１０】かような重合用組成物は、適当な単量体の
共存下でラジカル重合反応、殊にレドックス重合に供す
ると、生物学的活性物質に悪影響を及ぼすことなく、片
末端に生物学的活性物質が共有結合した重合体を効率よ
く製造するのに使用できる。したがって、もう一つの態
様の本発明として、上記生物学的活性物質を担持するラ
ジカル重合誘発剤を、ラジカル重合性のエチレン型不飽
和二重結合を有する少なくとも１種の単量体およびラジ
カル開始剤を含有する水性媒体中で共重合させることを
特徴とする生物学的活性物質を分子の片末端に有する重
合体の製造方法も提供される。かような重合反応は、極
めて迅速に重合反応が進行する。
共存下でラジカル重合反応、殊にレドックス重合に供す
ると、生物学的活性物質に悪影響を及ぼすことなく、片
末端に生物学的活性物質が共有結合した重合体を効率よ
く製造するのに使用できる。したがって、もう一つの態
様の本発明として、上記生物学的活性物質を担持するラ
ジカル重合誘発剤を、ラジカル重合性のエチレン型不飽
和二重結合を有する少なくとも１種の単量体およびラジ
カル開始剤を含有する水性媒体中で共重合させることを
特徴とする生物学的活性物質を分子の片末端に有する重
合体の製造方法も提供される。かような重合反応は、極
めて迅速に重合反応が進行する。
【００１１】したがって、ある一定の試料中に存在する
ことが疑われる被検体に応じて、上記生物学的活性物質
を選び、試料中で被検体と生物学的活性物質とを特異的
に結合させた複合体を形成した後、上記重合反応を試料
中で実施すれば、かような複合体上で重合体鎖を迅速に
成長させることができる。すなわち、上記重合反応を利
用すれば、試料中で被検体を短時間で目視可能な程度ま
で巨大分子化することができる。こうして得られる重合
体の量は、被検体の存否または存在量に比例して変化す
るので、上記重合反応により生成する重合体の量は、被
検体の指標として容易に評価することができる。かくし
て、本発明によれば、生物学的試料中に存在することが
疑われる被検体の検出方法であって、（Ａ）上記ラジカ
ル重合誘発剤を、前記試料に加える工程、（Ｂ）工程
（Ａ）の前もしくは後または同時にラジカル重合性のエ
チレン型不飽和二重結合を有する少なくとも１種の単量
体およびレドックス開始剤の還元剤を含有する水性液を
前記生物学的試料に加える工程、（Ｃ）レドックス開始
剤の酸化剤を含有する水性液を加えて重合反応を行う工
程、ならびに（Ｄ）工程（Ｃ）で形成される重合体の存
否を生物学的試料中の被検体の存否の指標として評価す
る工程、を含んでなる検出方法も提供される。上述した
ごとく、かような方法によれば、検出の容易な巨大分子
を迅速に生成しうるので、被検体の迅速かつ高感度の検
出方法が提供できる。
ことが疑われる被検体に応じて、上記生物学的活性物質
を選び、試料中で被検体と生物学的活性物質とを特異的
に結合させた複合体を形成した後、上記重合反応を試料
中で実施すれば、かような複合体上で重合体鎖を迅速に
成長させることができる。すなわち、上記重合反応を利
用すれば、試料中で被検体を短時間で目視可能な程度ま
で巨大分子化することができる。こうして得られる重合
体の量は、被検体の存否または存在量に比例して変化す
るので、上記重合反応により生成する重合体の量は、被
検体の指標として容易に評価することができる。かくし
て、本発明によれば、生物学的試料中に存在することが
疑われる被検体の検出方法であって、（Ａ）上記ラジカ
ル重合誘発剤を、前記試料に加える工程、（Ｂ）工程
（Ａ）の前もしくは後または同時にラジカル重合性のエ
チレン型不飽和二重結合を有する少なくとも１種の単量
体およびレドックス開始剤の還元剤を含有する水性液を
前記生物学的試料に加える工程、（Ｃ）レドックス開始
剤の酸化剤を含有する水性液を加えて重合反応を行う工
程、ならびに（Ｄ）工程（Ｃ）で形成される重合体の存
否を生物学的試料中の被検体の存否の指標として評価す
る工程、を含んでなる検出方法も提供される。上述した
ごとく、かような方法によれば、検出の容易な巨大分子
を迅速に生成しうるので、被検体の迅速かつ高感度の検
出方法が提供できる。
【００１２】
【発明の具体的な態様】本発明にいう「ラジカル重合誘
発剤」とは、それ自体は重合せず、適当なラジカル開始
剤（触媒）と協同してラジカル重合反応を開始させるよ
うに作用する化合物を意味する。したがって、該ラジカ
ル重合誘発剤を使用して、適当な単量体をラジカル重合
させると、生成する重合体分子の片末端（開始末端）を
該重合誘発剤の残基が占める。
発剤」とは、それ自体は重合せず、適当なラジカル開始
剤（触媒）と協同してラジカル重合反応を開始させるよ
うに作用する化合物を意味する。したがって、該ラジカ
ル重合誘発剤を使用して、適当な単量体をラジカル重合
させると、生成する重合体分子の片末端（開始末端）を
該重合誘発剤の残基が占める。
【００１３】このような残基中には、生物学的活性物質
が含有されていることに、本発明の特徴がある。本発明
では、生物学的活性物質とは、主として、生物体中の微
量成分と特異的に結合（バインディング）しうる物質を
意味し、具体的には、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリ
ゴ）ヌクレオチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズし
うるポリ（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプター
とリガンド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジン
とビオチンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれ
る特異的結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両
構成員により形成される複合体を意味する。
が含有されていることに、本発明の特徴がある。本発明
では、生物学的活性物質とは、主として、生物体中の微
量成分と特異的に結合（バインディング）しうる物質を
意味し、具体的には、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリ
ゴ）ヌクレオチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズし
うるポリ（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプター
とリガンド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジン
とビオチンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれ
る特異的結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両
構成員により形成される複合体を意味する。
【００１４】したがって、式（Ｉ）におけるＢｉｏ−
は、抗体および抗原を初めとする上記特異的結合性対の
いずれか一方の構成員、ならびに両構成員の複合体から
なる群より選ばれる物質由来の残基である。これらの残
基は、一般に、上記物質を構成する分子中のアミノ基お
よび／水酸基から水素原子が除去された形態にある。か
ような残基は、上記ラジカル重合誘発剤の使用目的に応
じて適当に選ぶことができ、生物学的試料中の被検体を
検出する免疫比濁法においては、抗原または抗体のいず
れか、殊に抗体に由来する残基であることが好ましい。
こうして抗体がＢｉｏ−中に含有される場合、Ｂｉｏ−
Ｉｎｔと単量体との重合反応によって形成される重合体
は、上述の比濁法における検出用指標となるだけでな
く、抗体の機能を利用して、適当な薬剤の送達用担体と
しても使用できるであろう。このような目的では、予め
適当な薬剤を共有結合した単量体を、上記重合反応で使
用するか、または単量体から成長した重合体鎖中に疎水
結合等の物理的結合（バインディング）能を介して担持
させてもよい。
は、抗体および抗原を初めとする上記特異的結合性対の
いずれか一方の構成員、ならびに両構成員の複合体から
なる群より選ばれる物質由来の残基である。これらの残
基は、一般に、上記物質を構成する分子中のアミノ基お
よび／水酸基から水素原子が除去された形態にある。か
ような残基は、上記ラジカル重合誘発剤の使用目的に応
じて適当に選ぶことができ、生物学的試料中の被検体を
検出する免疫比濁法においては、抗原または抗体のいず
れか、殊に抗体に由来する残基であることが好ましい。
こうして抗体がＢｉｏ−中に含有される場合、Ｂｉｏ−
Ｉｎｔと単量体との重合反応によって形成される重合体
は、上述の比濁法における検出用指標となるだけでな
く、抗体の機能を利用して、適当な薬剤の送達用担体と
しても使用できるであろう。このような目的では、予め
適当な薬剤を共有結合した単量体を、上記重合反応で使
用するか、または単量体から成長した重合体鎖中に疎水
結合等の物理的結合（バインディング）能を介して担持
させてもよい。
【００１５】式（Ｉ）における−Ｉｎｔ部分、すなわち
ラジカル開始剤（好ましくは、レドックス開始剤）の存
在下でラジカルを発生しうる基を有する残基は、限定さ
れるものでないが、典型的には、式 −Ｌ−Ａ−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2（Ｉｎｔ−ａ）または−Ｌ−
Ｂ−ＣＯ2Ｈ（Ｉｎｔ−ｂ） で表され、ここでＡは単結合または基Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2の
存在に起因してラジカルを発生する上で悪影響を及ぼさ
ない二価の炭化水素基を示し、そしてＲは水素原子また
はメチル基を示し、Ｂは基−ＣＯ2Ｈの存在に起因して
ラジカルを発生する上で悪影響を及ぼさない二価の炭化
水素基を示し、Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−Ｃ
ＳＮＨ−を示す。また、上記式中の連結基−Ｌ−は、−
Ｏ−で置き換っていてもよく、この場合、Ｂｉｏ−にお
ける結合基は、生物学的活性物質中のカルボキシル基に
由来する−ＣＯＯ−であることができる。
ラジカル開始剤（好ましくは、レドックス開始剤）の存
在下でラジカルを発生しうる基を有する残基は、限定さ
れるものでないが、典型的には、式 −Ｌ−Ａ−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2（Ｉｎｔ−ａ）または−Ｌ−
Ｂ−ＣＯ2Ｈ（Ｉｎｔ−ｂ） で表され、ここでＡは単結合または基Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2の
存在に起因してラジカルを発生する上で悪影響を及ぼさ
ない二価の炭化水素基を示し、そしてＲは水素原子また
はメチル基を示し、Ｂは基−ＣＯ2Ｈの存在に起因して
ラジカルを発生する上で悪影響を及ぼさない二価の炭化
水素基を示し、Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−Ｃ
ＳＮＨ−を示す。また、上記式中の連結基−Ｌ−は、−
Ｏ−で置き換っていてもよく、この場合、Ｂｉｏ−にお
ける結合基は、生物学的活性物質中のカルボキシル基に
由来する−ＣＯＯ−であることができる。
【００１６】こうして、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤
のＢｉｏ部分とＩｎｔ部分は、限定されるものでない
が、好ましくは−ＮＨＣＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＣＯ
ＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−または−ＣＯＯ−によって共
有結合されている。
のＢｉｏ部分とＩｎｔ部分は、限定されるものでない
が、好ましくは−ＮＨＣＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＣＯ
ＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−または−ＣＯＯ−によって共
有結合されている。
【００１７】上記式（Ｉｎｔ−ａ）で表される残基の特
に好ましいものとしては、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ2、−Ｃ
Ｏ−Ｃ(ＣＨ3)＝ＣＨ2、
に好ましいものとしては、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ2、−Ｃ
Ｏ−Ｃ(ＣＨ3)＝ＣＨ2、
【００１８】
【化７】
【００１９】が挙げられる。一方、上記式（Ｉｎｔ−
ｂ）で表される残基は、より具体的には、式中のＢが−
ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−、−(ＣＨ2)
a−（ここで、ａは１〜８のいずれかの整数である）、
ｂ）で表される残基は、より具体的には、式中のＢが−
ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−、−(ＣＨ2)
a−（ここで、ａは１〜８のいずれかの整数である）、
【００２０】
【化８】
【００２１】からなる群より選ばれるいずれの連結基で
あるものを挙げることができる。これらのうち、特に好
ましい残基は、−ＣＯＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−ＣＯＯＨ、−
ＣＯＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−ＣＯＯＨ、−ＣＯＣＨ2ＣＨ2−
ＣＯＯＨ、−ＣＯＣＨ2ＣＯＯＨ、
あるものを挙げることができる。これらのうち、特に好
ましい残基は、−ＣＯＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−ＣＯＯＨ、−
ＣＯＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−ＣＯＯＨ、−ＣＯＣＨ2ＣＨ2−
ＣＯＯＨ、−ＣＯＣＨ2ＣＯＯＨ、
【００２２】
【化９】
【００２３】−ＣＯＮＨＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−ＣＯＯＨ、
−ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−ＣＯＯＨ、−ＣＳＮＨＣ
Ｈ2Ｃ(ＣＨ3)2−ＣＯＯＨおよび−ＣＳＮＨＣＨ2ＣＨ
(ＣＨ3)−ＣＯＯＨである。
−ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−ＣＯＯＨ、−ＣＳＮＨＣ
Ｈ2Ｃ(ＣＨ3)2−ＣＯＯＨおよび−ＣＳＮＨＣＨ2ＣＨ
(ＣＨ3)−ＣＯＯＨである。
【００２４】さらに、−Ｉｎｔは、式
【００２５】
【化１０】
【００２６】［式中、Ｍは
【００２７】
【化１１】
【００２８】または−ＮＨＮＨ−を示し、ｂは２〜８の
いずれかの整数である］で表される基であることができ
る。
いずれかの整数である］で表される基であることができ
る。
【００２９】上記のようなＢｉｏ部分を構成する生物学
的活性物質は、官能基として、一、二もしくは三級アミ
ノ基、水酸基、カルボキシル基またはメルカプト基を有
している。したがって、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分との間
の共有結合を形成するには、Ｉｎｔ部分の出発原料とし
て、例えば、上記式（Ｉｎｔ−ａおよびＩｎｔ−ｂ）の
−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2または−ＣＯ2Ｈ以外に、上記Ｂｉｏの
官能基との縮合反応によって共有結合を形成しうる、カ
ルボキシル基、水酸基またはメルカプト基を有する化合
物を選べばよい。上記のＢｉｏ部分およびＩｎｔ部分の
それぞれの出発原料を、それ自体既知の、例えば、ジシ
クロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤を用いて、縮合
させるか、またはＩｎｔ部分が式（Ｉｎｔ−ｂ）で表さ
れる場合には、対応するジカルボン酸の酸無水物を用
い、またはイソシアナートもしくはチオイソシアナート
基を有するカルボン酸を用い直接、Ｂｉｏのアミノ基ま
たは水酸基に反応させて、ペプチド結合、エステル結合
またはウレイドもしくはチオウレイド結合を形成するこ
とにより、式（Ｉ）のＢｉｏ−Ｉｎｔを提供できる。ま
た、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分は、上記のように、それぞ
れ対応する出発原料どうしを直接結合することができる
が、上記に挙げた官能基を分子の両末端に有する化合物
をスペーサーとして用いて、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分を
連結することもできる。このような結合様式をもつＢｉ
ｏ−Ｉｎｔも本発明の範囲内に入る。このようなスペー
サーを形成することのできる化合物としては、アルキレ
ン鎖が酸素または窒素原子で中断されていてもよいアル
キレンジアミン、アルキレンジオールを挙げることがで
きる。このようなスペーサー基の導入方法も、上記のよ
うな縮合反応を介して実施することができる。
的活性物質は、官能基として、一、二もしくは三級アミ
ノ基、水酸基、カルボキシル基またはメルカプト基を有
している。したがって、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分との間
の共有結合を形成するには、Ｉｎｔ部分の出発原料とし
て、例えば、上記式（Ｉｎｔ−ａおよびＩｎｔ−ｂ）の
−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2または−ＣＯ2Ｈ以外に、上記Ｂｉｏの
官能基との縮合反応によって共有結合を形成しうる、カ
ルボキシル基、水酸基またはメルカプト基を有する化合
物を選べばよい。上記のＢｉｏ部分およびＩｎｔ部分の
それぞれの出発原料を、それ自体既知の、例えば、ジシ
クロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤を用いて、縮合
させるか、またはＩｎｔ部分が式（Ｉｎｔ−ｂ）で表さ
れる場合には、対応するジカルボン酸の酸無水物を用
い、またはイソシアナートもしくはチオイソシアナート
基を有するカルボン酸を用い直接、Ｂｉｏのアミノ基ま
たは水酸基に反応させて、ペプチド結合、エステル結合
またはウレイドもしくはチオウレイド結合を形成するこ
とにより、式（Ｉ）のＢｉｏ−Ｉｎｔを提供できる。ま
た、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分は、上記のように、それぞ
れ対応する出発原料どうしを直接結合することができる
が、上記に挙げた官能基を分子の両末端に有する化合物
をスペーサーとして用いて、Ｂｉｏ部分とＩｎｔ部分を
連結することもできる。このような結合様式をもつＢｉ
ｏ−Ｉｎｔも本発明の範囲内に入る。このようなスペー
サーを形成することのできる化合物としては、アルキレ
ン鎖が酸素または窒素原子で中断されていてもよいアル
キレンジアミン、アルキレンジオールを挙げることがで
きる。このようなスペーサー基の導入方法も、上記のよ
うな縮合反応を介して実施することができる。
【００３０】上記のようなＢｉｏ部分とＩｎｔ部分の結
合方法によると、Ｂｉｏ部分に対して１個ないし複数個
のＩｎｔ部分が結合しうる。例えば、Ｂｉｏ部分が抗体
分子に由来する場合、抗体の有する生物学的活性（抗原
に対する特異的結合能）は、１分子のＢｉｏに対して１
００分子のＩｎｔが結合しても、残存しうる。したがっ
て、式（Ｉ）のＢｉｏ−Ｉｎｔは、１分子のＢｉｏに対
して、１ないし１００分子のＩｎｔが結合したものが包
含される。
合方法によると、Ｂｉｏ部分に対して１個ないし複数個
のＩｎｔ部分が結合しうる。例えば、Ｂｉｏ部分が抗体
分子に由来する場合、抗体の有する生物学的活性（抗原
に対する特異的結合能）は、１分子のＢｉｏに対して１
００分子のＩｎｔが結合しても、残存しうる。したがっ
て、式（Ｉ）のＢｉｏ−Ｉｎｔは、１分子のＢｉｏに対
して、１ないし１００分子のＩｎｔが結合したものが包
含される。
【００３１】式（Ｉ）のＢｉｏ−Ｉｎｔは、水性媒体
中、ラジカル開始剤の存在下でラジカルを発生し、ラジ
カル重合性のエチレン型不飽和二重結合を有する単量体
が共存すると、それらの単量体に基づく重合鎖を、Ｉｎ
ｔ部分上に成長させることができる。なお、Ｂｉｏ−Ｉ
ｎｔにおけるラジカルを発生しうる基が−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ
2の場合、Ｂｉｏ−Ｉｎｔは、それ自体がマクロモノマ
ーとして重合しうることもある。このように、Ｂｉｏ−
Ｉｎｔがマクロモノマーとして重合しうる時には、Ｂｉ
ｏ−Ｉｎｔは、Ｂｉｏを介して固体支持体上に固定され
ていることが必要であるかも知れない。すなわち、本発
明の「但し」書きにいう、「Ｂｉｏ−ＩｎｔのＩｎｔ部
分に存在するラジカルを発生しうる基は、それら自体を
介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形成することができな
いものである」とは、上記のように、Ｂｉｏ−Ｉｎｔが
固体支持体上に固定される場合を包含する。固体支持体
としては、各種材料から作製された試験管またはビーカ
ー等の壁、やその他水不溶性重合体ビーズもしくは膜等
が挙げられる。
中、ラジカル開始剤の存在下でラジカルを発生し、ラジ
カル重合性のエチレン型不飽和二重結合を有する単量体
が共存すると、それらの単量体に基づく重合鎖を、Ｉｎ
ｔ部分上に成長させることができる。なお、Ｂｉｏ−Ｉ
ｎｔにおけるラジカルを発生しうる基が−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ
2の場合、Ｂｉｏ−Ｉｎｔは、それ自体がマクロモノマ
ーとして重合しうることもある。このように、Ｂｉｏ−
Ｉｎｔがマクロモノマーとして重合しうる時には、Ｂｉ
ｏ−Ｉｎｔは、Ｂｉｏを介して固体支持体上に固定され
ていることが必要であるかも知れない。すなわち、本発
明の「但し」書きにいう、「Ｂｉｏ−ＩｎｔのＩｎｔ部
分に存在するラジカルを発生しうる基は、それら自体を
介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形成することができな
いものである」とは、上記のように、Ｂｉｏ−Ｉｎｔが
固体支持体上に固定される場合を包含する。固体支持体
としては、各種材料から作製された試験管またはビーカ
ー等の壁、やその他水不溶性重合体ビーズもしくは膜等
が挙げられる。
【００３２】Ｂｉｏ−Ｉｎｔにラジカルを発生させるに
は、それ自体既知のラジカル開始剤が使用できるが、生
物学的活性物質に悪影響を及ぼさないものを選ぶことが
望まれる。かような観点から、好ましいものとしてはレ
ドックス開始剤を挙げることができる。本発明に従う、
Ｂｉｏ−Ｉｎｔは、レドックス開始剤を用いて、効率よ
くラジカルを発生させうることに特徴がある。使用でき
るレドックス開始剤は、上記目的に沿うものであれば、
いかなる酸化性物質（または酸化剤ともいう）と還元性
物質（または還元剤ともいう）との組み合わさった系で
あることができる。限定されるものでないが、好ましく
は水系の過硫酸アンモニウムもしくは過硫酸カリウムと
硝酸銀の系、過硫化水素とＦｅ2+（フェントン試薬）、
過硫酸カリウムもしくは過硫酸アンモニウムと亜硫酸ナ
トリウムもしくは亜硫酸水素ナトリウムの系等をレドッ
クス開始剤として挙げることができる。
は、それ自体既知のラジカル開始剤が使用できるが、生
物学的活性物質に悪影響を及ぼさないものを選ぶことが
望まれる。かような観点から、好ましいものとしてはレ
ドックス開始剤を挙げることができる。本発明に従う、
Ｂｉｏ−Ｉｎｔは、レドックス開始剤を用いて、効率よ
くラジカルを発生させうることに特徴がある。使用でき
るレドックス開始剤は、上記目的に沿うものであれば、
いかなる酸化性物質（または酸化剤ともいう）と還元性
物質（または還元剤ともいう）との組み合わさった系で
あることができる。限定されるものでないが、好ましく
は水系の過硫酸アンモニウムもしくは過硫酸カリウムと
硝酸銀の系、過硫化水素とＦｅ2+（フェントン試薬）、
過硫酸カリウムもしくは過硫酸アンモニウムと亜硫酸ナ
トリウムもしくは亜硫酸水素ナトリウムの系等をレドッ
クス開始剤として挙げることができる。
【００３３】このようなレドックス開始剤を使用する場
合、酸化性物質と還元性物質のいずれか一方、好ましく
は、還元性物質を、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤およ
ぴ単量体と組み合わせて含有する水性組成物は、例え
ば、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤を、その中の生物学
的活性物質の特異的結合能を利用して、他の特異的結合
性構成員と結合させた後、残りの酸化性物質を加える
と、イン・サイチュー（insitu）で重合反応が起こり、
水性組成物中で不溶性の重合体が現れてくる。この重合
体は目視さえ可能である。したがって、式（Ｉ）のラジ
カル重合誘発剤、単量体および還元性物質を含有する水
性組成物は、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤中に存在す
る生物学的活性物質（例えば、抗体）と特異的結合性対
を構成する他の構成員（例えば、抗原）の検出用試薬と
して有用である。当然なことに、該試薬で検出できる被
検体は、抗原に限らず、式（Ｉ）のＢｉｏ部分に存在す
る特異的結合性対の他方の構成員であることもできる。
合、酸化性物質と還元性物質のいずれか一方、好ましく
は、還元性物質を、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤およ
ぴ単量体と組み合わせて含有する水性組成物は、例え
ば、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤を、その中の生物学
的活性物質の特異的結合能を利用して、他の特異的結合
性構成員と結合させた後、残りの酸化性物質を加える
と、イン・サイチュー（insitu）で重合反応が起こり、
水性組成物中で不溶性の重合体が現れてくる。この重合
体は目視さえ可能である。したがって、式（Ｉ）のラジ
カル重合誘発剤、単量体および還元性物質を含有する水
性組成物は、式（Ｉ）のラジカル重合誘発剤中に存在す
る生物学的活性物質（例えば、抗体）と特異的結合性対
を構成する他の構成員（例えば、抗原）の検出用試薬と
して有用である。当然なことに、該試薬で検出できる被
検体は、抗原に限らず、式（Ｉ）のＢｉｏ部分に存在す
る特異的結合性対の他方の構成員であることもできる。
【００３４】単量体は、ラジカル重合性のエチレン型不
飽和二重結合を有するものであれば、いずれも使用でき
る。このような単量体の具体的なものとしては、各種ス
チレン類、（メタ）アクリル酸アルキル、（メタ）アク
リル酸アミド、ピロリドン、Ｎ−置換マレイミド（置換
基としては、さらに置換されていてもよいアリール基、
アルキル基、等）、またはそれらの２種以上の組み合わ
せが挙げられる。上記反応系を検出用試薬として用いる
場合は、（メタ）アクリル酸アルキルのアルキル基に代
え、発色もしくは蛍光色素となりうる基を導入したもの
や、またＮ−置換マレイミドのＮ−置換基として、該色
素となりうる基を導入したものが、好ましいこともあ
る。あるいは、上記のような色素分子等に代え、医薬化
合物を、上記の単量体に担持させると、上述の反応系で
製造される重合体は、ドラッグデリバリー用の薬物とし
て使用しうる可能性もある。
飽和二重結合を有するものであれば、いずれも使用でき
る。このような単量体の具体的なものとしては、各種ス
チレン類、（メタ）アクリル酸アルキル、（メタ）アク
リル酸アミド、ピロリドン、Ｎ−置換マレイミド（置換
基としては、さらに置換されていてもよいアリール基、
アルキル基、等）、またはそれらの２種以上の組み合わ
せが挙げられる。上記反応系を検出用試薬として用いる
場合は、（メタ）アクリル酸アルキルのアルキル基に代
え、発色もしくは蛍光色素となりうる基を導入したもの
や、またＮ−置換マレイミドのＮ−置換基として、該色
素となりうる基を導入したものが、好ましいこともあ
る。あるいは、上記のような色素分子等に代え、医薬化
合物を、上記の単量体に担持させると、上述の反応系で
製造される重合体は、ドラッグデリバリー用の薬物とし
て使用しうる可能性もある。
【００３５】特に、式（Ｉ）の重合誘発剤を用いて、被
検体が存在することの疑われる生物学的試料中でイン・
サイチューの重合反応を行い、被検体を検出する場合、
式（Ｉ）の重合誘発剤が有する生物学的活性物質は、抗
体であることが好ましい。この際、被検体は、反応容
器、例えば、試験管、マイクロタイターウェル、等の壁
に固定化されたさらなる抗体によって捕捉された状態で
あることが望ましい。また、式（Ｉ）のラジカル重合誘
発剤としては、好ましくは、下式
検体が存在することの疑われる生物学的試料中でイン・
サイチューの重合反応を行い、被検体を検出する場合、
式（Ｉ）の重合誘発剤が有する生物学的活性物質は、抗
体であることが好ましい。この際、被検体は、反応容
器、例えば、試験管、マイクロタイターウェル、等の壁
に固定化されたさらなる抗体によって捕捉された状態で
あることが望ましい。また、式（Ｉ）のラジカル重合誘
発剤としては、好ましくは、下式
【００３６】
【化１２】
【００３７】［式中、Ａｂは抗体の残基であって、抗体
を構成するペプチド結合に関与しないアミノ基または水
酸基を有するアミノ酸部分から水素原子が除去された残
基を示し、Ｂは−ＣＨ2−Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2−ＣＨ
(ＣＨ3)−、−(ＣＨ2)a−（ここで、ａは１〜８のいず
れかの整数である）、
を構成するペプチド結合に関与しないアミノ基または水
酸基を有するアミノ酸部分から水素原子が除去された残
基を示し、Ｂは−ＣＨ2−Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2−ＣＨ
(ＣＨ3)−、−(ＣＨ2)a−（ここで、ａは１〜８のいず
れかの整数である）、
【００３８】
【化１３】
【００３９】からなる群より選ばれる二価の基を示し、
Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−ＣＳＮＨ−を示
し、そしてｍは１〜１００のいずれかの整数である］で
表される生物学的活性物質を担持する化合物、特に好ま
しくは、上記Ｂが−ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−である化合物が
使用できる。
Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−ＣＳＮＨ−を示
し、そしてｍは１〜１００のいずれかの整数である］で
表される生物学的活性物質を担持する化合物、特に好ま
しくは、上記Ｂが−ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−である化合物が
使用できる。
【００４０】前記抗体は、ポリクローナルもしくはモノ
クローナル抗体のいずれをも包含し、限定されるもので
ないが、アレルゲン、例えばハウスダスト、花粉、ダ
ニ、アルブミンに対する抗体であることができる。これ
らの抗体は市販のものを使用することもできる。
クローナル抗体のいずれをも包含し、限定されるもので
ないが、アレルゲン、例えばハウスダスト、花粉、ダ
ニ、アルブミンに対する抗体であることができる。これ
らの抗体は市販のものを使用することもできる。
【００４１】以上のとおり、本発明に従い提供される式
（Ｉ）のラジカル重合誘発剤を含有する組成物は、片末
端に生物学的活性物由来の残基を有する重合体を提供す
るのに有用である上に、生物学的試料、例えば、動植物
の細胞調製物、ならびに動物の血液、尿、その他の体
液、中の微量成物、例えば、タンパク質、ペプチド、
糖、核酸の検出に有用である。
（Ｉ）のラジカル重合誘発剤を含有する組成物は、片末
端に生物学的活性物由来の残基を有する重合体を提供す
るのに有用である上に、生物学的試料、例えば、動植物
の細胞調製物、ならびに動物の血液、尿、その他の体
液、中の微量成物、例えば、タンパク質、ペプチド、
糖、核酸の検出に有用である。
【００４２】
【実施例】以下、具体例を挙げて、本発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
【００４３】製造例１：スチレン標識ヒトアルブミン抗
体の製造 本例は、式（Ｉ）のＢｉｏ部分がヒトアルブミン抗体残
基を有し、そしてＩｎｔ部分がスチレン型の部分を有す
るラジカル重合誘発剤（以下、スチレン標識ヒトアルブ
ミン抗体という）の製造例を記述する。
体の製造 本例は、式（Ｉ）のＢｉｏ部分がヒトアルブミン抗体残
基を有し、そしてＩｎｔ部分がスチレン型の部分を有す
るラジカル重合誘発剤（以下、スチレン標識ヒトアルブ
ミン抗体という）の製造例を記述する。
【００４４】（１） ４−ビニル安息香酸スクシンイミ
ジルエステルの合成 ナスフラスコに４−ビニル安息香酸（１００ｍｇ ０.６
７ｍｍｏｌ）を入れ、アルゴンで置換した後、２ｍｌの
脱水アセトニトリルを加え溶解させた。次いで、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミド（７７ｍｇ ０.６７ｍｍｏｌ）
／０.５ｍｌアセトニトリルとＮ,Ｎ−ジシクロヘキシル
カルボジイミド（１３９ｍｇ ０.６７ｍｍｏｌ）／０.
５ｍｌアセトニトリルを加え、室温で１２時間撹拌し
た。ウレアをろ過で取り除き、結晶をアセトニトリルで
洗浄した後アセトニトリルを減圧留去すると目的物の４
−ビニル安息香酸スクシンイミジルエステルを１５５ｍ
ｇ（収率１００％）で得た。
ジルエステルの合成 ナスフラスコに４−ビニル安息香酸（１００ｍｇ ０.６
７ｍｍｏｌ）を入れ、アルゴンで置換した後、２ｍｌの
脱水アセトニトリルを加え溶解させた。次いで、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミド（７７ｍｇ ０.６７ｍｍｏｌ）
／０.５ｍｌアセトニトリルとＮ,Ｎ−ジシクロヘキシル
カルボジイミド（１３９ｍｇ ０.６７ｍｍｏｌ）／０.
５ｍｌアセトニトリルを加え、室温で１２時間撹拌し
た。ウレアをろ過で取り除き、結晶をアセトニトリルで
洗浄した後アセトニトリルを減圧留去すると目的物の４
−ビニル安息香酸スクシンイミジルエステルを１５５ｍ
ｇ（収率１００％）で得た。
【００４５】（２） スチレン標識ヒトアルブミン抗体
の合成 １０ｍｇの４−ビニル安息香酸スクシンイミジルエステ
ルを１ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解
させた。次いで、ヒトアルブミン抗体を０.１Ｍほう酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８.８）に１ｍｇ／ｍｌになる
ように溶解させた。次いで、その抗体０.１ｍｇ／０.１
ｍｌに対して４−ビニル安息香酸スクシンイミジルエス
テルのＤＭＳＯ溶液を０.００３ｍｌ（０.０３ｍｇ）加
え室温で４時間反応させ、１Ｍ塩化アンモニウム溶液を
０.００２４ｍｌ加え、室温で１０分間反応させること
によって、ヒトアルブミン抗体にスチレン標識をカップ
リングした。
の合成 １０ｍｇの４−ビニル安息香酸スクシンイミジルエステ
ルを１ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解
させた。次いで、ヒトアルブミン抗体を０.１Ｍほう酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８.８）に１ｍｇ／ｍｌになる
ように溶解させた。次いで、その抗体０.１ｍｇ／０.１
ｍｌに対して４−ビニル安息香酸スクシンイミジルエス
テルのＤＭＳＯ溶液を０.００３ｍｌ（０.０３ｍｇ）加
え室温で４時間反応させ、１Ｍ塩化アンモニウム溶液を
０.００２４ｍｌ加え、室温で１０分間反応させること
によって、ヒトアルブミン抗体にスチレン標識をカップ
リングした。
【００４６】機能試験例１：本例は、製造例１で得られ
たスチレン標識ヒトアルブミン抗体の機能について試験
するものである。
たスチレン標識ヒトアルブミン抗体の機能について試験
するものである。
【００４７】（１） スチレン標識ヒトアルブミン抗体
とヒトアルブミンのカップリングアルブミン抗原をホス
フェート緩衝液（ＰＢＳ）に０.１および０.０１ｍｇ／
ｍｌの２条件で溶解した。次いで、その抗原をマイクロ
プレートに０.１ｍｌ／ウエルずつ分注し４℃オーバー
ナイトインキュベートした。次いで、洗浄液によって洗
浄し、４倍希釈ブロッキング液によってブロッキング
し、室温で３０分間インキュベートした。次いで、洗浄
し、スチレン標識アルブミン抗体をＰＢＳブロッキング
液に０.１および０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で希釈し、
抗原が固定された各ウエルに０.１ｍｌずつ注入し、室
温で１時間反応させた。（スチレン標識抗体が固定化抗
原と結合している状態の確認として、ＰＢＳブロッキン
グ液で１０００倍希釈したアルカリホスフェターゼ標識
マウスＩｇＧ抗体を２次抗体として１時間カップリング
させ、次いで、リン酸化された４−ニトロフェノールの
水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を０.１ｍｌを加え、室温で
１時間反応させると黄色い発色が確認された。こうし
て、ヒトアルブミンとスチレン標識ヒトアルブミン抗体
の結合が確認された。） （２） スチレン標識ヒトアルブミン抗体上での重合体
化反応 （２−１） 重合体化試薬の調製 反応溶液Ａの調製：試験管にＮ−フェニルマレイミド
（５０ｍｇ、０.２８８ｍｍｏｌ）を入れ、そこにピバ
リン酸（０.２９ｍｇ、０.０１ｍｏｌｅｑ）のジメチル
アミド（０.０１４４Ｍ）溶液を０.２ｍｌ加え、完全に
溶解させた。次いで、スチレン（０.０３３ｍｌ、０.２
８８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、硝酸銀水溶液（０.２
Ｍ）を０.０１ｍｌ（０.０１ｍｏｌｅｑ）を加え、さら
に蒸留水を０.２６ｍｌ加えた。この反応溶液をＡとす
る。
とヒトアルブミンのカップリングアルブミン抗原をホス
フェート緩衝液（ＰＢＳ）に０.１および０.０１ｍｇ／
ｍｌの２条件で溶解した。次いで、その抗原をマイクロ
プレートに０.１ｍｌ／ウエルずつ分注し４℃オーバー
ナイトインキュベートした。次いで、洗浄液によって洗
浄し、４倍希釈ブロッキング液によってブロッキング
し、室温で３０分間インキュベートした。次いで、洗浄
し、スチレン標識アルブミン抗体をＰＢＳブロッキング
液に０.１および０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で希釈し、
抗原が固定された各ウエルに０.１ｍｌずつ注入し、室
温で１時間反応させた。（スチレン標識抗体が固定化抗
原と結合している状態の確認として、ＰＢＳブロッキン
グ液で１０００倍希釈したアルカリホスフェターゼ標識
マウスＩｇＧ抗体を２次抗体として１時間カップリング
させ、次いで、リン酸化された４−ニトロフェノールの
水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を０.１ｍｌを加え、室温で
１時間反応させると黄色い発色が確認された。こうし
て、ヒトアルブミンとスチレン標識ヒトアルブミン抗体
の結合が確認された。） （２） スチレン標識ヒトアルブミン抗体上での重合体
化反応 （２−１） 重合体化試薬の調製 反応溶液Ａの調製：試験管にＮ−フェニルマレイミド
（５０ｍｇ、０.２８８ｍｍｏｌ）を入れ、そこにピバ
リン酸（０.２９ｍｇ、０.０１ｍｏｌｅｑ）のジメチル
アミド（０.０１４４Ｍ）溶液を０.２ｍｌ加え、完全に
溶解させた。次いで、スチレン（０.０３３ｍｌ、０.２
８８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、硝酸銀水溶液（０.２
Ｍ）を０.０１ｍｌ（０.０１ｍｏｌｅｑ）を加え、さら
に蒸留水を０.２６ｍｌ加えた。この反応溶液をＡとす
る。
【００４８】反応溶液Ｂの調製：２Ｍの過硫酸アンモニ
ウム水溶液を調製した。
ウム水溶液を調製した。
【００４９】（２−２） 重合体化反応 上記機能の試験例で、ヒトアルブミン抗原とスチレン標
識ヒトアルブミン抗体を結合操作後、洗浄を行い、洗浄
緩衝液を留去後、反応液Ａを５０μｌ加え、次いで反応
液Ｂを１０μｌ加えると直後に結晶が析出した（重合体
化反応が起きた）。次いで、非特異的な重合体を除去す
るため、緩衝液で洗浄すると抗体に結合した重合体の結
晶が目視によって観察できた。
識ヒトアルブミン抗体を結合操作後、洗浄を行い、洗浄
緩衝液を留去後、反応液Ａを５０μｌ加え、次いで反応
液Ｂを１０μｌ加えると直後に結晶が析出した（重合体
化反応が起きた）。次いで、非特異的な重合体を除去す
るため、緩衝液で洗浄すると抗体に結合した重合体の結
晶が目視によって観察できた。
【００５０】製造例２：２,２−ジメチルプロピオン酸
標識ヒトアルブミン抗体の製造 本例は、式（Ｉ）のＢｉｏ部分がヒトアルブミン抗体残
基を有し、そしてＩｎｔ部分が−ＣＯＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2
ＣＯＯＨを有するラジカル重合誘発剤（以下、２,２−
ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体という）
の製造例を記述する。
標識ヒトアルブミン抗体の製造 本例は、式（Ｉ）のＢｉｏ部分がヒトアルブミン抗体残
基を有し、そしてＩｎｔ部分が−ＣＯＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2
ＣＯＯＨを有するラジカル重合誘発剤（以下、２,２−
ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体という）
の製造例を記述する。
【００５１】（１） ２,２−ジメチルコハク酸無水物
の合成 ３０ｍｌナス型フラスコに２,２−ジメチルコハク酸
（２ｇ、０.０１３７ｍｏｌ）を入れ、アルゴン置換
後、蒸留した無水酢酸（８ｍｌ）加え溶解した。次い
で、加熱還流を４時間行い、ＴＬＣにより、原料の消失
を確認した。次いで、蒸留により溶媒留去すると、ガム
状の沈殿物が得られた。この沈殿を、脱水蒸留したテト
ラヒドロフラン／脱水蒸留したヘキサン（１：３）で再
結晶を行った。次いで、吸引濾過で結晶を取り出し、乾
燥させると目的物の２,２−ジメチルコハク酸無水物が
９８％収率で得られた。
の合成 ３０ｍｌナス型フラスコに２,２−ジメチルコハク酸
（２ｇ、０.０１３７ｍｏｌ）を入れ、アルゴン置換
後、蒸留した無水酢酸（８ｍｌ）加え溶解した。次い
で、加熱還流を４時間行い、ＴＬＣにより、原料の消失
を確認した。次いで、蒸留により溶媒留去すると、ガム
状の沈殿物が得られた。この沈殿を、脱水蒸留したテト
ラヒドロフラン／脱水蒸留したヘキサン（１：３）で再
結晶を行った。次いで、吸引濾過で結晶を取り出し、乾
燥させると目的物の２,２−ジメチルコハク酸無水物が
９８％収率で得られた。
【００５２】1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
δ１.４５（６Ｈ，ｓ），２.８２（２Ｈ，ｓ） （２） ２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブ
ミン抗体の合成 １０ｍｇの２,２−ジメチルコハク酸無水物を１ｍｌの
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた。一
方、ヒトアルブミン抗体を０.１Ｍほう酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ８.８）に１ｍｇ／ｍｌになるように溶解さ
せた。次いで、その抗体０.１ｍｇ／ｍｌに対して２,２
−ジメチルコハク酸無水物のＤＭＳＯ溶液を０.００３
ｍｌ（０.０３ｍｇ）加え室温で１時間反応させ、さら
に１Ｍ塩化アンモニウム溶液を０.００２４ｍｌ加え室
温で１０分間反応させることによって、ヒトアルブミン
抗体にスチレン標識をカップリングした。
δ１.４５（６Ｈ，ｓ），２.８２（２Ｈ，ｓ） （２） ２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブ
ミン抗体の合成 １０ｍｇの２,２−ジメチルコハク酸無水物を１ｍｌの
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた。一
方、ヒトアルブミン抗体を０.１Ｍほう酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ８.８）に１ｍｇ／ｍｌになるように溶解さ
せた。次いで、その抗体０.１ｍｇ／ｍｌに対して２,２
−ジメチルコハク酸無水物のＤＭＳＯ溶液を０.００３
ｍｌ（０.０３ｍｇ）加え室温で１時間反応させ、さら
に１Ｍ塩化アンモニウム溶液を０.００２４ｍｌ加え室
温で１０分間反応させることによって、ヒトアルブミン
抗体にスチレン標識をカップリングした。
【００５３】機能試験例２：本例は、製造例２で得られ
た、２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブミン
抗体の機能について試験するものである。
た、２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブミン
抗体の機能について試験するものである。
【００５４】（１） 表面プラズモン共鳴解析装置によ
る２,２−ジメチルプロピオン酸標識の確認 上記製造例２の操作（２）において、カップリング反応
を１時間および３時間、それぞれ行い、表面プラズモン
共鳴解析装置による２,２−ジメチルプロピオン酸標識
効率を検討した。方法として、まず、比較として、４℃
に未標識のヒトアルブミン抗体を１時間および３時間、
それぞれ放置した抗体と、室温に未標識のヒトアルブミ
ン抗体を１時間および３時間、それぞれ放置した抗体そ
れぞれ用意した。次いで、表面プラズモン共鳴解析装置
のチップにヒトアルブミン抗原０.０１μｇ／ｍｌを固
定化し、次いで、上記６種類の抗体をリン酸バッファー
（ｐＨ７.２）で１００倍希釈した溶液を泳動させた。
泳動溶媒はリン酸バッファー（ｐＨ７.２）で行った。
それぞれの抗体の抗原との結合効率（＝標識化合物のカ
ップリング効率）を表１に示す。
る２,２−ジメチルプロピオン酸標識の確認 上記製造例２の操作（２）において、カップリング反応
を１時間および３時間、それぞれ行い、表面プラズモン
共鳴解析装置による２,２−ジメチルプロピオン酸標識
効率を検討した。方法として、まず、比較として、４℃
に未標識のヒトアルブミン抗体を１時間および３時間、
それぞれ放置した抗体と、室温に未標識のヒトアルブミ
ン抗体を１時間および３時間、それぞれ放置した抗体そ
れぞれ用意した。次いで、表面プラズモン共鳴解析装置
のチップにヒトアルブミン抗原０.０１μｇ／ｍｌを固
定化し、次いで、上記６種類の抗体をリン酸バッファー
（ｐＨ７.２）で１００倍希釈した溶液を泳動させた。
泳動溶媒はリン酸バッファー（ｐＨ７.２）で行った。
それぞれの抗体の抗原との結合効率（＝標識化合物のカ
ップリング効率）を表１に示す。
【００５５】表１：表面プラズモン共鳴解析装置による
２,２−ジメチルプロピオン酸の抗体への標識効率
２,２−ジメチルプロピオン酸の抗体への標識効率
【００５６】
【表１】
【００５７】表１より、２,２−ジメチルプロピオン酸
標識ヒトアルブミン抗体は、抗体１分子当たり約８０分
子の標識が共有結合していることが予測できる。
標識ヒトアルブミン抗体は、抗体１分子当たり約８０分
子の標識が共有結合していることが予測できる。
【００５８】（２） ２,２−ジメチルプロピオン酸標
識ヒトアルブミン抗体とヒトアルブミンのカップリング アルブミン抗原をホスフェート緩衝液（ＰＢＳ）に０.
１および０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で溶解した。次い
で、その抗原をマイクロプレートに０.１ｍｌウエルず
つ分注し４℃オーバーナイトインキュベートした。次い
で、洗浄液によって洗浄し、４倍希釈ブロッキング液に
よってブロッキングし、室温で３０分間インキュベート
した。次いで、洗浄し、２,２−ジメチルプロピオン酸
標識アルブミン抗体をＰＢＳブロッキング液に０.１及
び０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で希釈し、抗原が固定さ
れた各ウエルに０.１ｍｌずつ注入し、室温で１時間反
応させた。（２,２−ジメチルプロピオン酸標識抗体が
固定化抗原と結合している状態の確認として、ＰＢＳブ
ロッキング液で１０００倍希釈したアルカリホスフェタ
ーゼ標識マウスＩｇＧ抗体を、２次抗体として１時間カ
ップリングさせ、次いで、リン酸化された４−ニトロフ
ェノールの水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を０.１ｍｌを加
え、室温で１時間反応させると黄色い発色が確認され
た。このことより、ヒトアルブミンと２,２−ジメチル
プロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体の結合が確認され
た。） （３） ２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブ
ミン抗体上でのポリマー化反応（３−１）：重合体化試
薬の調製 反応溶液Ａの調製：試験管にＮ−フェニルマレイミド
（５０ｍｇ、０.２８８ｍｍｏｌ）を入れ、そこにＮ,Ｎ
−ジメチルホルムアミド溶液を０.５ｍｌ加え、完全に
溶解させた。次いで、スチレン（３.３μｌ、０.０２８
８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、硝酸銀水溶液（０.２
Ｍ）を０.０１ｍｌ（０.０１ｍｏｌｅｑ）を加え、さら
に蒸留水を０.２４ｍｌ加えた。この反応溶液（０.７５
ｍｌ）をＡとする。
識ヒトアルブミン抗体とヒトアルブミンのカップリング アルブミン抗原をホスフェート緩衝液（ＰＢＳ）に０.
１および０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で溶解した。次い
で、その抗原をマイクロプレートに０.１ｍｌウエルず
つ分注し４℃オーバーナイトインキュベートした。次い
で、洗浄液によって洗浄し、４倍希釈ブロッキング液に
よってブロッキングし、室温で３０分間インキュベート
した。次いで、洗浄し、２,２−ジメチルプロピオン酸
標識アルブミン抗体をＰＢＳブロッキング液に０.１及
び０.０１ｍｇ／ｍｌの２条件で希釈し、抗原が固定さ
れた各ウエルに０.１ｍｌずつ注入し、室温で１時間反
応させた。（２,２−ジメチルプロピオン酸標識抗体が
固定化抗原と結合している状態の確認として、ＰＢＳブ
ロッキング液で１０００倍希釈したアルカリホスフェタ
ーゼ標識マウスＩｇＧ抗体を、２次抗体として１時間カ
ップリングさせ、次いで、リン酸化された４−ニトロフ
ェノールの水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を０.１ｍｌを加
え、室温で１時間反応させると黄色い発色が確認され
た。このことより、ヒトアルブミンと２,２−ジメチル
プロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体の結合が確認され
た。） （３） ２,２−ジメチルプロピオン酸標識ヒトアルブ
ミン抗体上でのポリマー化反応（３−１）：重合体化試
薬の調製 反応溶液Ａの調製：試験管にＮ−フェニルマレイミド
（５０ｍｇ、０.２８８ｍｍｏｌ）を入れ、そこにＮ,Ｎ
−ジメチルホルムアミド溶液を０.５ｍｌ加え、完全に
溶解させた。次いで、スチレン（３.３μｌ、０.０２８
８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、硝酸銀水溶液（０.２
Ｍ）を０.０１ｍｌ（０.０１ｍｏｌｅｑ）を加え、さら
に蒸留水を０.２４ｍｌ加えた。この反応溶液（０.７５
ｍｌ）をＡとする。
【００５９】反応溶液Ｂの調製：２Ｍの過硫酸アンモニ
ウム水溶液を調製した。
ウム水溶液を調製した。
【００６０】（３−２）：重合体化反応 上記（２）のヒトアルブミン抗原と２,２−ジメチルプ
ロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体を結合操作後洗浄を
行った。洗浄緩衝液を留去後、反応液Ａを７５μｌ加
え、次いで反応液Ｂを２５μｌ加えると３分後に結晶が
析出した（重合体化反応が起きた）。次いで、非特異的
なポリマーを除去するため、緩衝液で洗浄すると抗体に
結合した重合体の白い結晶が目視によって観察できた。
ロピオン酸標識ヒトアルブミン抗体を結合操作後洗浄を
行った。洗浄緩衝液を留去後、反応液Ａを７５μｌ加
え、次いで反応液Ｂを２５μｌ加えると３分後に結晶が
析出した（重合体化反応が起きた）。次いで、非特異的
なポリマーを除去するため、緩衝液で洗浄すると抗体に
結合した重合体の白い結晶が目視によって観察できた。
【００６１】製造例３〜９ 本例は、各種カルボン酸（抗体に結合していない）をラ
ジカル重合誘発剤として用い、レドックス開始剤の存在
下で重合反応を行った場合の重合の進行状況を確認する
ためのものである。
ジカル重合誘発剤として用い、レドックス開始剤の存在
下で重合反応を行った場合の重合の進行状況を確認する
ためのものである。
【００６２】レドックス開始剤を用いた懸濁重合法によ
る重合体化 試験管にＮ−フェニルマレイミド（５０ｍｇ、０.２８
９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、トルエン０.３ｍｌ、ス
チレン（３３μｌ、０.２８９ｍｍｏｌ）を加え、溶解
させた。そこに０.０２８９Ｍの下記表２に示す各種有
機カルボン酸（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶
液、０.０２８９Ｍの硝酸銀（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏ
ｌｅｑ）水溶液、０.０２８９Ｍの過硫酸アンモニウム
（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶液を順に加え、
室温で３０分撹拌すると、それぞれ沈殿物が析出した。
ここに、塩化メチレンをいれ、抽出し、脱水後、溶媒留
去した。得られた結晶を塩化メチレンに溶解させ、その
溶液をメタノールにゆっくり滴下し再沈を行った。吸引
濾過で、結晶を取り出し、ＧＰＣ（ゲル透過クロマトグ
ラフィー）により分子量分布を測定し、分子量を計算し
た。結果をまとめて表２に示す。
る重合体化 試験管にＮ−フェニルマレイミド（５０ｍｇ、０.２８
９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、トルエン０.３ｍｌ、ス
チレン（３３μｌ、０.２８９ｍｍｏｌ）を加え、溶解
させた。そこに０.０２８９Ｍの下記表２に示す各種有
機カルボン酸（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶
液、０.０２８９Ｍの硝酸銀（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏ
ｌｅｑ）水溶液、０.０２８９Ｍの過硫酸アンモニウム
（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶液を順に加え、
室温で３０分撹拌すると、それぞれ沈殿物が析出した。
ここに、塩化メチレンをいれ、抽出し、脱水後、溶媒留
去した。得られた結晶を塩化メチレンに溶解させ、その
溶液をメタノールにゆっくり滴下し再沈を行った。吸引
濾過で、結晶を取り出し、ＧＰＣ（ゲル透過クロマトグ
ラフィー）により分子量分布を測定し、分子量を計算し
た。結果をまとめて表２に示す。
【００６３】
【表２】
【００６４】比較製造例：ラジカル重合誘発剤である有
機カルボン酸を加えないときの重合体化 本例は、上記製造例３〜９における反応系に有機カルボ
ン酸を加えないで重合を行った場合の、単量体（Ｎ−フ
ェニルマレイミドおよびスチレン）の反応性を検討する
ものである。
機カルボン酸を加えないときの重合体化 本例は、上記製造例３〜９における反応系に有機カルボ
ン酸を加えないで重合を行った場合の、単量体（Ｎ−フ
ェニルマレイミドおよびスチレン）の反応性を検討する
ものである。
【００６５】試験管にＮ−フェニルマレイミド（５０ｍ
ｇ、０.２８９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、トルエン０.
３ｍｌ、スチレン（３３μｌ、０.２８９ｍｍｏｌ）を
加え、溶解させた。そこに水（０.１ｍｌ）、０.０２８
９Ｍの硝酸銀（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶
液、０.０２８９Ｍの過硫酸アンモニウム（０.１ｍｌ、
０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶液を順に加え、室温で３０分
から１時間撹拌しても沈殿物は析出しなかった。ここ
に、塩化メチレンをいれ、抽出し、脱水後、溶媒留去し
た。得られた結晶を塩化メチレンに溶解させ、その溶液
をメタノールにゆっくり滴下し再沈を行った。吸引濾過
で、結晶を取り出し、ＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフ
ィー）により分子量分布を測定し、分子量を計算した。
分子量は５１０であった。
ｇ、０.２８９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、トルエン０.
３ｍｌ、スチレン（３３μｌ、０.２８９ｍｍｏｌ）を
加え、溶解させた。そこに水（０.１ｍｌ）、０.０２８
９Ｍの硝酸銀（０.１ｍｌ、０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶
液、０.０２８９Ｍの過硫酸アンモニウム（０.１ｍｌ、
０.０１ｍｏｌｅｑ）水溶液を順に加え、室温で３０分
から１時間撹拌しても沈殿物は析出しなかった。ここ
に、塩化メチレンをいれ、抽出し、脱水後、溶媒留去し
た。得られた結晶を塩化メチレンに溶解させ、その溶液
をメタノールにゆっくり滴下し再沈を行った。吸引濾過
で、結晶を取り出し、ＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフ
ィー）により分子量分布を測定し、分子量を計算した。
分子量は５１０であった。
【００６６】このことより、本発明に従う、生物学的活
性物質を標識する予定のラジカルを発生しうる基、すな
わち有機カルボン酸残基が存在しないと重合体化が進行
しないことが予期できる。換言すれば、式（Ｉ）のラジ
カル重合誘発剤において、有機カルボン酸残基が重合体
鎖を成長させる上で、重要な役割を担っていることがわ
かる。
性物質を標識する予定のラジカルを発生しうる基、すな
わち有機カルボン酸残基が存在しないと重合体化が進行
しないことが予期できる。換言すれば、式（Ｉ）のラジ
カル重合誘発剤において、有機カルボン酸残基が重合体
鎖を成長させる上で、重要な役割を担っていることがわ
かる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 融 健 愛知県愛知郡東郷町御岳２−18−19
Claims (16)
- 【請求項１】 式 Ｂｉｏ−Ｉｎｔ （Ｉ） ［式中、Ｉｎｔは、ラジカル開始剤の存在下でラジカル
を発生しうる基を有する少なくとも１個の残基を示し、 Ｂｉｏは、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリゴ）ヌクレ
オチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズしうるポリ
（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプターとリガン
ド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジンとビオチ
ンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれる特異的
結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両構成員に
より形成された複合体に由来する残基を示し、そしてＢ
ｉｏとＩｎｔは、Ｉｎｔの数に応じた数の共有結合によ
って結合している、但し、 こうして結合しているＢｉｏ−ＩｎｔのＩｎｔ部分に存
在するラジカルを発生しうる基は、それら自体を介して
重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形成することができないもの
である］で表される生物学的活性物質を担持するラジカ
ル重合誘発剤を含んでなる重合用組成物。 - 【請求項２】 ラジカル開始剤がレドックス開始剤であ
る請求項１記載の組成物。 - 【請求項３】 Ｂｉｏが抗体または抗原−抗体からなる
免疫複合体に由来する残基である請求項１または２記載
の組成物。 - 【請求項４】 −Ｉｎｔが式 −Ｌ−Ａ−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ２または −Ｌ−Ｂ−ＣＯ2Ｈ ［式中、Ａは単結合または基Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ2の存在に起
因してラジカルを発生する上で悪影響を及ぼさない二価
の炭化水素基を示し、そしてＲは水素原子またはメチル
基を示し、Ｂは基−ＣＯ2Ｈの存在に起因してラジカル
を発生する上で悪影響を及ぼさない二価の炭化水素基を
示し、Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−ＣＳＮＨ−
を示す］で表される請求項１〜３のいずれかに記載の組
成物。 - 【請求項５】 −Ｉｎｔが式 【化１】 ［式中、Ｍは 【化２】 または−ＮＨＮＨ−を示し、ｂは２〜８のいずれかの整
数である］で表される請求項１〜３のいずれかに記載の
組成物。 - 【請求項６】 −Ｉｎｔが式−ＣＯ−Ａ−Ｃ(Ｒ)＝ＣＨ
2で示され、Ａが単結合でありそしてＲが水素もしくは
メチル基であるか、あるいは 【化３】 である請求項４記載の組成物。 - 【請求項７】 −Ｉｎｔが式 −ＣＯ−Ｂ−ＣＯ2Ｈで示
され、Ｂが−ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)
−、−(ＣＨ2)a−（ここで、ａは１〜８のいずれかの整
数である）、 【化４】 からなる群より選ばれる請求項４記載の組成物。 - 【請求項８】 −ＩｎｔがＢｉｏに対して１〜１００モ
ル当量存在する請求項１〜７のいずれかに記載の組成
物。 - 【請求項９】 さらに、ラジカル重合性のエチレン型不
飽和二重結合を有する少なくとも１種の単量体およびレ
ドックス開始剤を構成する還元剤を含んでなる請求項１
記載の組成物。 - 【請求項１０】 単量体がスチレンおよびＮ−フェニル
マレイミドである請求項９記載の組成物。 - 【請求項１１】 式 Ｂｉｏ−Ｉｎｔ （Ｉ） ［式中、Ｉｎｔは、ラジカル開始剤の存在下でラジカル
を発生しうる基を有する少なくとも１個の残基を示し、 Ｂｉｏは、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリゴ）ヌクレ
オチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズしうるポリ
（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプターとリガン
ド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジンとビオチ
ンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれる特異的
結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両構成員に
より形成された複合体に由来する残基を示し、そしてＢ
ｉｏとＩｎｔは、Ｉｎｔの数に応じた数の共有結合によ
って結合している、但し、こうして結合しているＢｉｏ
−ＩｎｔのＩｎｔ部分に存在するラジカルを発生する基
は、それら自体を介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形成
することができないものである］で表される生物学的活
性物質を担持するラジカル重合誘発剤を、ラジカル重合
性のエチレン型不飽和二重結合を有する少なくとも１種
の単量体およびラジカル開始剤を含有する水性媒体中で
共重合させることを特徴とする生物学的活性物質を分子
の片末端に有する重合体の製造方法。 - 【請求項１２】 ラジカル開始剤がレドックス開始剤で
ある請求項１１記載の重合体の製造方法。 - 【請求項１３】 生物学的試料中に存在することが疑わ
れる被検体の検出方法であって、（Ａ） 式 Ｂｉｏ−Ｉｎｔ （Ｉ） ［式中、Ｉｎｔは、ラジカル開始剤の存在下でラジカル
を発生しうる基を有する少なくとも１個の残基を示し、 Ｂｉｏは、抗体と抗原、ポリ（もしくはオリゴ）ヌクレ
オチドと該ヌクレオチドにハイブリダイズしうるポリ
（もしくはオリゴ）ヌクレオチド、レセプターとリガン
ド、酵素−その阻害剤もしくは基質、アビジンとビオチ
ンおよびレクチンと糖類からなる群より選ばれる特異的
結合性対のいずれか一方の構成員、あるいは両構成員に
より形成された複合体に由来する残基を示し、そしてＢ
ｉｏとＩｎｔは、Ｉｎｔの数に応じた数の共有結合によ
って結合している、但し、こうして結合しているＢｉｏ
−ＩｎｔのＩｎｔ部分に存在するラジカルを発生する基
は、それら自体を介して重合したＢｉｏ−Ｉｎｔを形成
することができないものである］で表される生物学的活
性物質を担持するラジカル重合誘発剤を、前記生物学的
試料に加え、（Ｂ） 工程（Ａ）の前もしくは後または
同時に、ラジカル重合性のエチレン型不飽和二重結合を
有する少なくとも１種の単量体およびレドックス開始剤
の還元剤を含有する水性液を前記生物学的試料に加え、
（Ｃ） レドックス開始剤の酸化剤を含有する水性液を
加えて重合反応を行い、次で（Ｄ） 工程（Ｃ）で形成
される重合体の存否を生物学的試料中の被検体の存否の
指標として評価する、ことを特徴とする被検体の検出方
法。 - 【請求項１４】 単量体がスチレンおよびＮ−フェニル
マレイミドである請求項１３記載の検出方法。 - 【請求項１５】 レドックス開始剤の還元剤が銀（Ｉ）
イオンであり、そして酸化剤が過硫酸イオンである請求
項１３または１４記載の検出方法。 - 【請求項１６】 式 【化５】 ［式中、Ａｂは抗体の残基であって、抗体を構成するペ
プチド結合に関与しないアミノ基または水酸基を有する
アミノ酸部分から水素原子が除去された残基を示し、 Ｌは−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−ＣＳＮＨ−を示
し、 Ｂは−ＣＨ2Ｃ(ＣＨ3)2−、−ＣＨ2ＣＨ(ＣＨ3)−、−
(ＣＨ2)a−（ここで、ａは１〜８のいずれかの整数であ
る）、 【化６】 からなる群より選ばれる二価の基であり、そしてｍは１
〜１００のいずれかの整数である］で表される生物学的
活性物質を担持する化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9391398A JPH11271306A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | 生物学的活性物質の高分子量化 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9391398A JPH11271306A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | 生物学的活性物質の高分子量化 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11271306A true JPH11271306A (ja) | 1999-10-08 |
Family
ID=14095722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9391398A Pending JPH11271306A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | 生物学的活性物質の高分子量化 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11271306A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090298746A1 (en) * | 2005-06-10 | 2009-12-03 | Acharya Seetharama A | Pegylated hemoglobin and albumin and uses thereof |
-
1998
- 1998-03-24 JP JP9391398A patent/JPH11271306A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090298746A1 (en) * | 2005-06-10 | 2009-12-03 | Acharya Seetharama A | Pegylated hemoglobin and albumin and uses thereof |
| US8741832B2 (en) * | 2005-06-10 | 2014-06-03 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Pegylated albumin and uses thereof |
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