JPH11217330A - 神経栄養因子分泌促進剤 - Google Patents

神経栄養因子分泌促進剤

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JPH11217330A
JPH11217330A JP10033757A JP3375798A JPH11217330A JP H11217330 A JPH11217330 A JP H11217330A JP 10033757 A JP10033757 A JP 10033757A JP 3375798 A JP3375798 A JP 3375798A JP H11217330 A JPH11217330 A JP H11217330A
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bdnf
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Hiroyuki Naba
宏之 那波
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Sumitomo Pharmaceuticals Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 神経変性疾患などの治療に用いうる低分子の
神経栄養因子分泌促進剤を提供する。 【構成】 酸化窒素（ＮＯ）ドナーを有効成分として含
有する製剤。 【効果】 神経細胞に作用し、ＢＤＮＦを始めとする神
経栄養因子の分泌を促進する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、神経変性疾患等の
治療に有用な神経栄養因子分泌促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮細胞が
作り出す内因性物質として発見され、血管緊張状態（to
ne）、血小板凝集、神経伝達及び免疫活性化の調節に関
係することが知られているフリーラジカル性の気体であ
る（文献１）。中枢神経系においても、ＮＯが神経伝達
物質様作用を有し、ＬＴＰ（長期増強）や学習記憶に関
与しているとの知見が報告されている（文献２、３、４
および５）。
【０００３】しかしながら、ＮＯと神経変性疾患（アル
ツハイマー病や筋萎縮性側索硬化症など）との関連は、
現在も解明されていない。患者脳脊髄液の成分分析（文
献６）や脳の組織染色（文献７）などの技法を用いた検
討が報告されているものの、組織内ＮＯ産生系と病因と
の関わりについて確たる示唆は与えていない。また、組
織内ＮＯの増加が神経変性疾患の治療において有益かに
ついては、むしろ否定的な概念が一般的と言える。近
年、神経細胞に於けるＮＯ産生を減らすため、ＮＯ合成
酵素阻害剤を投与して神経変性疾患を治療するという技
術思想が、多数特許出願されているが（文献８、９）、
これらは、ＮＯが神経細胞毒性に関わるという仮説に基
づくもので、本発明の技術思想と相反するものである。
【０００４】例外的に、ＮＯ合成促進による中枢疾患の
治療を示唆する特許出願も有るが（文献１０）、ここで
開示された方法は、オゾンガスと紫外線照射によって、
血中のＮＯ濃度を高め、血小板凝集関連疾病、高血圧、
うつ病、感染症、インポテンスを治療するというもので
ある。うつ病は、神経変性疾患ではなく、神経栄養因子
で治療されている病気でもない。また、外因性に投与さ
れたＮＯドナーが神経栄養因子の分泌を促進するという
本発明技術思想について示唆する記載は全く無い。
【０００５】また、神経栄養因子、特にＮＧＦの分泌に
関しては、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、プロス
タグランジン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、線維芽細胞増
殖因子（ＦＧＦ）などが促進作用を示すことが報告され
ているが、ＮＯドナーが、神経細胞において神経栄養因
子、特にＢＤＮＦの分泌を促進することは報告されてい
ない。
【０００６】（文献１）Snyder et al.: Scientific Am
erican, p.68-77, (1992.5) （文献２）Haley, J et al.: Neuron 8, 211-216 (199
2) （文献３）Schuman, E.M. and Madison, D.V.: Ann. Re
v. Neurosci. 17, 153-183 (1995) （文献４）Toyoda, MS et al.: Jpn. J. Pharmacol. 7
1, 205-211 (1996) （文献５）Yamada, K et al.: Neuroscience 74 (2), 3
65-374 (1996) （文献６）Milstein, S et al.: J. Neurochemistry 63
(3), 1178-1180 (1994) （文献７）Rebeck, G.W. et al.: Neuroscience letter
s 152 , 165-168 (1993) （文献８）特開平４−２７０２５５（ＥＰ４４６６９
９）：メレル ダウ （文献９）ＷＯ９６／１４８４２：メルク （文献１０）特表平７−５０３７２２（ＷＯ９３／１５
７７９）：バソゲン
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ＢＤＮＦなどの神経栄
養因子は、神経変性疾患や虚血や外傷による神経損傷、
さらには視神経損傷などに対する薬効が期待されてい
る。これらの因子は、本来、生体内で発現および分泌さ
れているタンパクであり、その分泌を促進しうる低分子
化合物は、医療現場で有用と目される。本発明の目的
は、低分子化合物を有効成分とし、かつ生体内で神経栄
養因子活性を促進させる医薬、即ち、神経栄養因子感受
性疾患の治療剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、一種の神経
壊死の原因とみなされていたＮＯが、神経系において
は、ＢＤＮＦと極めて類似した作用を示すことに着目
し、大脳皮質細胞培養系で、ＮＯドナー添加の影響を検
討した。その結果、ＮＯドナーは、ＢＤＮＦの発現およ
び神経細胞からの分泌を促進することを確認し、その知
見に基づいて本発明を完成した。
【０００９】すなわち、本発明は、以下の特徴を有する
ものである。 （１）ＮＯドナーを有効成分として含有する神経栄養因
子分泌促進剤。 （２）ＮＯドナーが、自発的ＮＯドナーである（１）の
神経栄養因子分泌促進剤。 （３）神経変性疾患の治療のためにヒトに投与されるこ
とを特徴とする（１）の神経栄養因子分泌促進剤。 （４）ＮＯドナーを有効成分として含有するニューロト
ロフィン分泌促進剤。 （５）ＮＯドナーを有効成分として含有するＢＤＮＦ分
泌促進剤。
【００１０】以下、本発明についてより詳細に説明す
る。 （言葉の定義）本明細書において、「ＮＯドナー」と
は、生理条件下で一酸化窒素（ＮＯ）を持続的に放出で
きる薬剤の総称である。通常、硝酸薬あるいはニトロ薬
と称されるニトロ基を有する化合物がこの範疇に入る。
硝酸薬の代表的例としては、ニトロプルシドナトリウム
（Sodium Nitropruside：ＳＮＰ）、ニトログリセリン
（nitroglycerin：ＮＴＧ）、グリセリルトリニトレー
ト（gryceryltrinitrate）、イソソルビッドモノニトレ
ート（isosorbidmononitrate：ＩＳＭＮ）、イソソルビ
ットジニトレート（isosorbiddinitrate：ＩＳＤＮ）、
モルシドミン（molsidomine）、が挙げられる（文献１
１）。
【００１１】硝酸薬は、生体内でチオール基と反応し、
生じたニトロソチオールからＮＯが発生するとされる
が、生体内チオールを消費せずに、ＮＯを生成させる化
合物も存在する。これらは「自発的ＮＯドナー」と称さ
れ、近年、循環系薬剤として注目されている。Ｓ−ニト
ロソ−Ｎ−アセチル−ＤＬ−ペニシラミン（S-nitroso-
N-acetyl-DL-penicillamine：ＳＮＡＰ）、ＦＫ４０９
（＝ＮＯＲ：化１）、ＮＯＮＯａｔｅ（＝ＮＯＣ：化
２）あるいはＳＩＮ−１がこの範疇に入る（文献１
２）。 ＳＮＰなどの古典的な硝酸薬で、時にニトロソ
チオールの毒性やチオール枯渇によるＮＯ耐性発現が治
療上の難点とされているのに対し、この自発的ＮＯドナ
ー：ＳＮＡＰ、ＮＯＲ、ＮＯＣ等は、細胞毒性や耐性発
現がより少なく、本発明の実施に好適であると期待され
る。上記のＮＯドナーには、種々の誘導体が知られてい
るが、生体、特に中枢および末梢神経系において、ＮＯ
を産生し、神経栄養因子を遊離促進させる限り、全て本
発明に含まれるものである。
【００１２】
【化１】
【００１３】
【化２】
【００１４】また、ＳＮＡＰ以外にも、ＳＨ基を有する
化合物やタンパクを予めニトロソ化した誘導体は、すべ
て自発的ＮＯドナーとして作用しうる。このような誘導
体の例としては、Ｓ−ニトロソアルブミンなどのニトロ
ソ化タンパク、ニトロシステイン、ニトロソグルタチオ
ン、ニトロソパントテン酸、ニトロソカプトプリルが有
る。 なお、本明細書においては特別に、ＮＯ合成酵素
（ＮＯＳ）活性を増強する物質という広い意味で、生理
的なＮＯＳ基質であるアルギニンも、ＮＯドナーに含ま
れるものとする。 （文献１１）木之下正彦、高橋正行 医学のあゆみ 別
冊 p.193-196 (96.11） （文献１２）片山佳樹 医学のあゆみ 別冊 p.35-40
(96.11）
【００１５】「神経栄養因子分泌促進剤」とは、インビ
ボあるいはインビトロで神経細胞に接触させた場合、そ
の細胞からの神経栄養因子の分泌を促進する作用を示す
薬剤を意味する。神経栄養因子とは、１９５０年に発見
された神経成長因子（ＮＧＦ）のように、神経細胞の生
存維持、神経分化促進などの生理作用を有するタンパク
質の総称である。具体的には、脳由来神経栄養因子（Ｂ
ＤＮＦ）、ＮＧＦ、ニューロトロフィン３（ＮＴ−
３）、ニューロトロフィン４／５（ＮＴ−４／５）、さ
らにはニューロトロフィン６（ＮＴ−６）を含むニュー
ロトロフィンファミリー（文献１３、１４）、更にグリ
ア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、グリア成長因子（Ｇ
ＧＦ２）、中枢神経系成長因子（ＡＦ−１）等を意味す
る。
【００１６】「ニューロトロフィン」とは、生体では、
神経成長の標的となる細胞、あるいは標的に向かって伸
長している細胞から分泌される神経栄養因子、または自
己分泌や傍分泌により神経（ニューロン）の成長、分
化、生存を助けて、神経回路（シナプス）を形成させる
神経栄養因子を意味する。ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＮＴ−
３、ＮＴ−４／５、ＮＴ−６が現在知られており、アミ
ノ酸配列の相同性も高い類似構造のタンパク質群であ
る。 （文献１３）R.M. Lindsay et al., TINS vol.17, p.18
2 (1994) （文献１４）R.M. Lindsay et al., Phil. Trans. R. S
oc. London B vol.351 p.365-373 (1996)
【００１７】「神経変性疾患」とは、中枢あるいは末梢
神経系の神経細胞の脱落、壊死を伴う疾患の総称であ
り、アルツハイマー病（Alzheimers Disease:AD）、ハ
ンチントン病(Huntington s Disease)、筋萎縮性側索硬
化症（Amyotrophic Lateral Sclerosis :ALS）、パーキ
ンソン病(Parkinsons Disease)がその代表例である。ま
た、糖尿病性あるいは薬物誘発性の末梢神経障害、網膜
神経障害も、本発明に於ける神経変性疾患の概念に含ま
れるものとする。
【００１８】（製造方法）本発明の神経栄養因子分泌促
進剤は、以下のようにして入手または製造できる。 [硝酸薬]ニトログリセリン（nitroglycerin：ＮＴ
Ｇ）、商品名、ニトログリセリン錠０．３ｍｇ（日本化
薬）、ミオコールスプレー（山之内）、ニトロダームＴ
ＴＳ（ノバルティス）など。イソソルビッドモノニトレ
ート（isosorbidmononitrate：ＩＳＭＮ）、商品名、ア
イトロール錠１０ｍｇ（山之内）など。イソソルビット
ジニトレート（isosorbiddinitrate：ＩＳＤＮ）、商品
名、アパティアテープ（テイコク）、ニトロール錠５ｍ
ｇ（エーザイ）など。以上は医薬品として販売されてお
り、臨床使用可能である。また、モルシドミン（molsid
omine）、Ｋチャンネルオープナー、ニコランジル（nic
orandil）やβブロッカー、ニプラディロール（nipurad
ilol）もＮＯドナーとしての作用を有する医薬である。
【００１９】[自発的ＮＯドナー] ・ＳＮＡＰ： ＳＮＡＰ、すなわち、Ｓ−ニトロソ−Ｎ
−アセチル−ＤＬ−ペニシラミン（S-nitroso-N-acetyl
-DL-penicillamine）は、和光純薬工業から試薬として
購入できる。 ・ＮＯＮＯａｔｅ（＝ＮＯＣ）： ＮＯＮＯａｔｅ誘導
体、すなわち、１−置換−ダイアゼン−１−イウム−
１，２−ダイオレエート（1-substituted diazen-1-ium
-1,2-dioleate）は、文献１５および文献１６に記載の
方法で得ることが出来る。 ・ＦＫ４０９（＝ＮＯＲ）： ＦＫ４０９、すなわち、
（±）−（Ｅ）−４−エチル−２−[（Ｅ）−ヒドロキ
シイミノ]−５−ニトロ−３−ヘキセンアミド(±-(E)-4
-ethyl-2-[(E)-hyrroxyimino]-5-nitro-3-hexeneamide)
は、文献１７に記載の方法で得ることが出来る。 ・ＳＩＮ−１： ＳＩＮ−１、すなわち、３―モルフォ
リノ−シドノンイミディウム クロライド(3-morpholin
o-sydnoniminium chloride)あるいはその誘導体は、文
献１８および１９に記載の方法で得ることができる。
【００２０】（文献１５）Keefer, LK et al.: Method
in Enzymol. 268, 281-293 (1996) （文献１６）Saavedra, JE et al.: J. Med. Chem. 40,
1947-1950 (1997) （文献１７）特開昭５９−１５２３６６（＝ＥＰ１１３
１０６、ＵＳ４７６７７６９／藤沢薬品工業） （文献１８）ドイツ特許ＤＥ４４２０５２３（Ｃａｓｓ
ｅｌｌａ ＡＧ） （文献１９）特開平４−２４４０７１（＝ＥＰ４７１２
３２、ＵＳ５１６６１６６／Ｃａｓｓｅｌｌａ ＡＧ）
【００２１】（製剤）上記の硝酸薬、あるいは他のＮＯ
ドナーは、医薬分野で通常用いられる担体と組み合わせ
て製剤化できる。
【００２２】（投与方法）上記のあるいは他のＮＯドナ
ーは、狭心症の治療に用いられている方法に準じ、種々
の投与方法で人体に投与できる。本発明の神経栄養因子
分泌促進剤として、投与する場合は、有害な末梢血管拡
張作用や血圧降下作用、メトヘモグロビン症が発現しな
ければ、投与量は適宜増量できる。持続的製剤を用いた
慢性投与も可能である。 [硝酸薬]ニトログリセリン（nitroglycerin：ＮＴＧ）
を用いる場合は、経口投与で０．５〜１０ｍｇ／患者／
日、例えば、舌下錠あるいは噴霧液として、患者一人あ
たり０．３〜０．６ｍｇ、貼付剤として２．５ｍｇを一
日三回投与できる。静脈注射の場合には、２０〜４０μ
ｇ／ｋｇの量を持続注入できる。過量投与により、低血
圧や貧血を起こす可能性があるので、既往症のある患者
では、調節が必要である（１９９７年版医療薬日本医薬
品集、薬業時報社、ｐ．１０６６−１０７４）。イソソ
ルビッドモノニトレート（isosorbidmononitrate：ＩＳ
ＭＮ）を用いる場合は、経口投与で１０−１００ｍｇ／
患者／日、例えば、１回２０ｍｇを一日２回投与でき
る。イソソルビットジニトレート（isosorbiddinitrat
e：ＩＳＤＮ）の場合、経口投与で１０〜１００ｍｇ／
患者／日、例えば、１回１０ｍｇを一日３回投与可能で
ある（上記医薬品集、ｐ．６７４−６７９）。
【００２３】[自発的ＮＯドナー]経口投与、静脈／皮下
内注射などいずれも可能であるが、自発的ＮＯドナー、
ＮＯＮＯａｔｅ、ＦＫ４０９等は、硝酸薬よりも分子あ
たりのＮＯ産生量が多いため、０．１〜１００ｍｇ／患
者／日、好ましくは、０．５〜２０ｍｇ／日の経口投与
が適当と考えられる。 [アルギニン]下垂体機能検査用医薬として、塩酸アルギ
ニン（アルギニン３０ｇ注：ルセル森下−日本ＨＭ
Ｒ）、高アンモニア血症改善剤として、グルタミン酸ア
ルギニン（アルギメート２０ｇ注：ルセル森下−日本Ｈ
ＭＲ）が販売されている。経口、静脈注射いずれも可能
であるが、０．５〜２０ｇ／患者／日でＮＯ産生促進効
果が得られるものと考えられる。
【００２４】（毒性）代表的な硝酸薬、ＩＳＭＮの毒性
は、動物実験におけては、ラットＬＤ５０＝１０５０〜
１５５０ｍｇ／ｋｇ（p.o.）、４０ｍｇ／ｋｇ(i.v.)で
ある。ヒト経口投与においては、ＩＳＤＮでは、一日数
十ｍｇまで、ＮＴＧでは、一日数ｍｇまで、重篤な副作
用は無いと考えられる。アルギニンの場合、グルタミン
酸アルギニン点滴静注で一日２０ｇまで投与可能とされ
ており、毒性は極めて低い。
【００２５】
【実施例】以下、本発明の有用性を説明するために、実
施例を示す。 実施例１ [大脳新皮質ニューロンの初代培養系でのＮＯ産生にお
ける神経細胞型酸化窒素合成酵素（neuronal Nitrogen
Oxide Synthase:ｎＮＯＳ ）の役割] 神経細胞によるＮＯ産生を確認し、酸化窒素合成酵素の
３種のアイソザイム（文献ｅ１、ｅ２）：神経細胞型
（neuronal type: nNOS）、内皮細胞型(endothelial ty
pe: eNOS)、誘導型(inducible type: iNOS)のうちどれ
が、ＮＯ産生に関与しているのかを明らかにするため、
以下の実験を行った。
【００２６】培養神経細胞の調製には、ラット胎児（Ｅ
１８）の大脳新皮質から得た神経細胞を用い、無血清培
地で７日間培養した（文献ｅ３）。培養上清を採取し、
亜硝酸濃度を測定して、ＮＯ総産生量の指標とした（図
１Ａ）。亜硝酸濃度の測定は、グリースの方法で行った
（文献ｅ４）。培養日数を重ねるにつれ、上清中の亜硝
酸の蓄積量は増加した。培養細胞中のＮＯＳ発現は、ウ
ェスタンブロッティングで検出した（図１Ｂ）。ニトロ
セルロース膜上に泳動させた培養細胞からの抽出タンパ
クを、３種の抗ＮＯＳ抗体（トランスダクション ラ
ボ： Transduction Lab.、１／５００〜１０００希
釈）でラベリングし、ペルオキシダーゼ結合抗ＩｇＧ抗
体処理と化学発光反応を行って可視化し、検出した（ア
マシャム社ＥＣＬキット）。ｎＮＯＳ様の免疫反応は神
経培養サンプル中に検出されたが、ｅＮＯＳ免疫活性は
殆ど、ｉＮＯＳ免疫活性は全く検出されなかった。上記
ｎＮＯＳ免疫反応物は約１６０ｋＤの分子量を持ってお
り、ｎＮＯＳ分子量の文献報告に一致した。一方、肺や
腹腔内マクロファージの細胞抽出物では、ｅＮＯＳやｉ
ＮＯＳの明確な活性が認められ、大脳神経細胞と対照的
であった。また、免疫組織化学的に、抗ｎＮＯＳ抗体
（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ．）で培養神経細胞
を染色した結果、数パーセントのニューロンがｎＮＯＳ
に免疫反応を示し、そのうちのいくつかは、同時に抗ｔ
ｒｋＢ抗体と反応することが分かった。これらの結果か
ら、ｎＮＯＳ陽性ニューロンは、主に新皮質培養系のＮ
Ｏ産生に関与する一方、ＢＤＮＦに反応しうることが示
唆された。 （文献ｅ１）Bredt,DS and Snyder,SH : Annu.Rev.Bioc
hem. 63, 175-195 (1994) （文献ｅ２）Knowles,RG and Moncada,S : Biochem. J.
298, 249-258 (1994) （文献ｅ３）Nawa,H et al.: J. Neurochem. 60, 772-7
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【００２７】実施例２ [ＮＯ産生剤のＢＤＮＦ発現に対する影響]培養脳神経系
でＮＯ合成の阻害が、ＢＤＮＦ遺伝子発現を高めたこと
から、内因性のＮＯが、ＢＤＮＦ遺伝子発現の調節に影
響することが明らかになった。外因性のＮＯを培養系に
直接添加することによって、この現象をさらに検討し
た。他のＮＯドナーより細胞毒性が弱いことから広く使
用されている自発的ＮＯドナー、ＳＮＡＰを用いた（文
献ｅ５）。種々の濃度のＳＮＡＰを培養系に添加し、３
時間および５時間後、実施例２と同様の方法で、ＢＤＮ
ＦｍＲＮＡを定量的ＲＴ−ＰＣＲで、細胞内ＢＤＮＦタ
ンパク量をＥＩＡで、それぞれ測定した。亜硝酸の測定
により、所期の通り、ＮＯドナーからＮＯが遊離したこ
とが確認された（図２Ａ）。
【００２８】この系において、ＳＮＡＰは極めて高い濃
度（１０００μＭ）で、ＢＤＮＦｍＲＮＡ発現を阻害し
たが、より低濃度（３０−３００μＭ）では、ＢＤＮＦ
遺伝子の発現を用量依存的に増加させた（図２Ｂ）。高
濃度における阻害は、細胞の発育に変化が無かったこと
から、ＳＮＡＰの細胞毒性に起因するものではないと考
えられる。また、近年開発されたＮＯドナー、ＮＯＲ１
も同様の促進効果を示した。一方、同時に行ったＥＩＡ
では、細胞内ＢＤＮＦタンパクは、ＳＮＡＰ ３０μＭ
の条件でのみ増加し、ｍＲＮＡ測定の結果に一致するも
のの、より高い濃度では、むしろ用量依存的なＢＤＮＦ
タンパク量の減少が観察された（図２Ｃ）。ｍＲＮＡ測
定の結果は、低濃度のＮＯは神経を刺激してＢＤＮＦを
産生させるが、１０００μＭもの高濃度では逆にＢＤＮ
Ｆ合成を抑制することを示している。１００μＭ以上の
高濃度ＳＮＡＰ添加条件で見られた不整合（ＢＤＮＦｍ
ＲＮＡレベルの上昇と神経細胞内タンパク量の減少）
は、神経細胞からのＢＤＮＦタンパクの遊離促進のよう
な、翻訳過程以降の要因が変化している可能性を示唆す
る。 （文献ｅ５）Garg, UC and Hassid, A: Eur. J. Pharma
col.237, 243-249 (1993)
【００２９】実施例３ [ＮＯ産生剤のＢＤＮＦ遊離に対する影響]高用量ＳＮＡ
ＰのＢＤＮＦタンパク蓄積に対する阻害的効果を解明す
るため、ＮＯドナーのＢＤＮＦ遊離に関する影響を検討
した。最初に、培養上清中のＢＤＮＦ濃度を測定するこ
とを試みたが、普通のＥＩＡでは検出限界以下であっ
た。これは、遊離されたＢＤＮＦが直ぐに細胞表面、し
かもｔｒｋＢ受容体に結合するためと考えられた。そこ
で、抗−汎ｔｒｋ受容体−抗体を用いて、細胞表面ｔｒ
ｋＢ受容体に吸着されたＢＤＮＦを定量するためのサン
ドイッチイムノアッセイを試みた。既知濃度のＢＤＮＦ
を培養系に添加して測定を行ったところ、添加量と測定
値に良好な相関が得られたため（図３Ａ）、この新たに
確立された測定方法で、ＮＯドナーが、神経細胞からの
ＢＤＮＦ遊離に与える影響を検討した。
【００３０】実験の結果、ＮＯドナー：ＳＮＡＰは、１
００μＭ以上の濃度で、顕著にＢＤＮＦ−ｔｒｋＢ結合
体量を増加させることが分かった（図３Ｂ）。一方、対
照として用いたグルタミン酸（興奮性神経伝達物質）
は、強いＢＤＮＦ合成促進作用を有するわりには、ＳＮ
ＡＰのような顕著な分泌促進作用は示さなかった。上記
の現象は、ＮＯがその細胞内ＢＤＮＦ合成促進作用とは
別に、特有のメカニズムを介したＢＤＮＦ遊離促進能を
有することを強く示唆するものである。このＮＯドナー
の神経細胞内からの神経栄養因子遊離促進作用は、比較
的高濃度で見られるとは言え、代表的な興奮性神経伝達
物質グルタミン酸以上のレベルに達するものであり、新
たに見いだされたＮＯドナーの特異的生理活性と言えよ
う。
【００３１】
【発明の効果】本発明の薬剤は、神経細胞に作用し、Ｂ
ＤＮＦなどの神経栄養因子の分泌を促進し、同因子を介
した神経細胞保護効果、神経変性疾患治療効果を期待す
ることが出来る。
【００３２】
【図面の簡単な説明】
【図１】 （Ａ）ラット胎児（Ｅ１８）大脳神経細胞培
養系におけるＮＯの生成を示すグラフである。縦軸は、
培養液中の亜硝酸濃度（μＭ）、横軸は、培養日数を表
す。（Ｂ）神経細胞培養系におけるＮＯ合成酵素（ｎＮ
ＯＳ）の免疫化学的検出を示す電気泳動写真。縦軸は、
分子量（ｋＤ）、左から、腹腔内マクロファージ／大脳
神経細胞培養系、肺／大脳神経細胞培養系および大脳／
大脳神経細胞培養系細胞抽出サンプルのウェスタンブロ
ットを示す。
【図２】 （Ａ） ＮＯドナーの神経細胞培養系におけ
るＮＯ生成に対する影響。棒グラフ：黒塗りはＳＮＡＰ
添加３時間後、斜線はＳＮＡＰ添加５時間後の亜硝酸レ
ベルを表す。 縦軸は、亜硝酸濃度（μＭ）、横軸の数
値は培地中のＳＮＡＰ濃度（μＭ）である。 （Ｂ）
種々のＳＮＡＰ濃度におけるＢＤＮＦｍＲＮＡの誘導。
棒グラフ、縦軸は、同一サンプルにおけるＢＤＮＦｍＲ
ＮＡ・ＰＣＲ増幅物のβ−アクチンｍＲＮＡ増幅物に対
する比率（％）を表す。横軸の数値は培地中のＳＮＡＰ
濃度（μＭ）である。 （Ｃ） 種々のＳＮＡＰ濃度に
おける神経細胞内ＢＤＮＦタンパクの誘導。棒グラフ、
縦軸は、培養容器中のＢＤＮＦタンパク含量（ｐｇ／ｄ
ｉｓｈ）、横軸の数値は培地中のＳＮＡＰ濃度（μＭ）
を表す。
【図３】 （Ａ） ＥＩＡによるｔｒｋＢ受容体／ＢＤ
ＮＦ結合体の定量。グラフは既知ＢＤＮＦ添加サンプル
によるＥＩＡの検量線を示す。縦軸は吸光度、横軸の数
値は培養系に添加したＢＤＮＦの濃度の対数（ng/ml l
og）である。 （Ｂ） 種々のＳＮＡＰ濃度における神
経細胞からのＢＤＮＦタンパクの遊離。棒グラフ、縦軸
は吸光度、横軸の数値は培地中のＳＮＡＰあるいはグル
タミン酸の濃度（μＭ）を表す。

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】一酸化窒素（ＮＯ）ドナーを有効成分とし
    て含有する神経栄養因子分泌促進剤。
  2. 【請求項２】ＮＯドナーが、自発的ＮＯドナーである請
    求項１の神経栄養因子促進剤。
  3. 【請求項３】神経変性疾患の治療のためにヒトに投与さ
    れることを特徴とする請求項１の神経栄養因子分泌促進
    剤。
  4. 【請求項４】ＮＯドナーを有効成分として含有するニュ
    ーロトロフィン分泌促進剤。
  5. 【請求項５】ＮＯドナーを有効成分として含有するＢＤ
    ＮＦ分泌促進剤。
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