JPH11155583A

JPH11155583A - Ａｓｐ５

Info

Publication number: JPH11155583A
Application number: JP10236037A
Authority: JP
Inventors: David J Powell; ジェイ．ポウェルデビッド; John Kay; ケイジョン; Jeffrey Hill; ヒルジェフリー; Trudi Smith; スミストルディ
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1997-08-21
Filing date: 1998-08-21
Publication date: 1999-06-15
Also published as: EP0897986A2; JP2004000196A; EP0897986A3; CA2241428A1

Abstract

(57)【要約】【課題】ＡＳＰ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドを提供する。【解決手段】配列番号２のアミノ酸配列に対して少な
くとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでな
るＡＳＰ５ポリペプチド、および配列番号１のヌクレオ
チド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するヌ
クレオチド配列を含んでなるＡＳＰ５ポリヌクレオチド
を得る。【効果】ＡＳＰ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは高血圧、喘息を含む機能障害または疾病の治療と、
このような疾病の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療
の際のまたは治療に有効でありうるアゴニスト、アンタ
ゴニストおよび／またはインヒビターである化合物を同
定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの生産方法に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】薬物
探索プロセスには目下根本的な大変化が生じている。と
いうのは、それが「機能的ゲノム学」(functional geno
mics) 、すなわち高処理量のゲノムまたは遺伝子ベース
の生物学に及んでいるからである。このアプローチは
「ポジショナルクローニング」に基づいた比較的初期の
アプローチに急速に取って代わりつつある。表現型、つ
まり生物学的機能または遺伝病、が同定され、続いてそ
の遺伝子地図の位置を手がかりとして病因遺伝子が突き
止められるだろう。機能的ゲノム学は、現在入手できる
多くの分子生物学データベースから興味のもてそうな遺
伝子配列を同定するための生物情報科学(bioinformatic
s)の様々なツールに大きく依存している。依然として、
まだ未解明の遺伝子およびその関連ポリペプチド／タン
パク質を薬物探索の標的として同定し特性づける必要性
が存在している。

【０００３】現在5種のヒト・アスパラギン酸プロテア
ーゼ、すなわちペプシン、ガストリクシン、カテプシン
Ｄ、カテプシンＥおよびレニンが知られており、これら
は多種多様な機能を有している。ペプシンおよびガスト
リクシンは胃における栄養過程に関与しており、カテプ
シンＤは多くの細胞型におけるタンパク質の代謝回転に
関与している。またレニンはアンギオテンシンの前駆体
であるアンギオテンシノーゲンからのアンギオテンシン
の産生という高度に特異的な機能を有する。いくつかの
上皮細胞型におけるカテプシンＥの所在は抗原プロセシ
ングにおける役割を示したものの、カテプシンＥの正確
な役割についてはまだ確認されないでいる。カテプシン
Ｅは特定の炎症性症状、例えば胃におけるヘリコバクタ
ー・ピロリ感染症にも関与しているかもしれない。レニ
ンおよびカテプシンＤ（カテプシンＤの場合には少ない
程度に）は高血圧(レニン)およびアルツハイマー病(カ
テプシンＤ)の潜在的な治療標的として同定されてい
る。

【０００４】本発明は、ＡＳＰ５、特にＡＳＰ５ポリペ
プチドおよびＡＳＰ５ポリヌクレオチド、組換え物質、
並びにその生産方法に関する。もう一つの態様におい
て、本発明は、高血圧および喘息（以後まとめて「前記
疾患」という）の治療をはじめとする、前記ポリペプチ
ドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。他の態
様では、本発明は、本発明により提供される物質を用い
てアゴニストおよびアンタゴニスト／インヒビターを同
定する方法、並びに同定された化合物を用いてＡＳＰ５
平衡異常と関連した症状を治療することに関する。さら
に他の態様において、本発明は不適当なＡＳＰ５活性ま
たはＡＳＰ５レベルと関連した疾病を検出するための診
断アッセイに関する。

【０００５】

【課題を解決するための手段】一つの態様において、本
発明はＡＳＰ５ポリペプチドに関する。この種のペプチ
ドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ
酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは
少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも
９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の
同一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一
性を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペ
プチドが含まれる。こうしたポリペプチドとしては配列
番号２のアミノ酸配列を含むものがある。

【０００６】本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸
配列が配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸
配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少
なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９
０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同
一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性
を有する単離されたポリペプチドが含まれる。こうした
ポリペプチドとしては配列番号２のアミノ酸配列からな
るポリペプチドがある。本発明の更なるペプチドには、
配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペプ
チドが含まれる。

【０００７】本発明のポリペプチドはアスパラギン酸プ
ロテアーゼファミリーのメンバーであると考えられる。
それゆえ、それらには興味がもてる。なぜなら、アスパ
ラギン酸プロテアーゼは高血圧に見られるようないくつ
かの症状に関与しているからである。これらの特性を以
後「ＡＳＰ５活性」または「ＡＳＰ５ポリペプチド活
性」または「ＡＳＰ５の生物学的活性」という。これら
の活性の中には、前記ＡＳＰ５ポリペプチドの抗原性お
よび免疫原性、特に配列番号２のポリペプチドの抗原性
および免疫原性も含まれる。本発明のポリペプチドはＡ
ＳＰ５の少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好
ましい。

【０００８】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列な
どがある。

【０００９】また、前記ポリペプチドの変異体、すなわ
ち同類アミノ酸置換（ある残基が性質の似ている他の残
基により置換される）により基準ポリペプチドと相違し
ているポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこう
した置換は、Ala, Val, Leuおよび Ileの間；Ser とThr
の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個、１
〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異体が好適であ
る。

【００１０】本発明のポリペプチドは任意の適当な方法
で製造することができる。このようなポリペプチドに
は、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産さ
れたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプ
チドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【００１１】本発明の更なる態様において、本発明は、
ＡＳＰ５ポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌ
クレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド
が含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性
を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９
８〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、
少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドが最も
好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、
配列番号２のポリペプチドをコードする配列番号１に含
まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド
が挙げられる。

【００１２】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも７
０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、
より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ま
しくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜
９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少な
くとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最も
好ましいものである。

【００１３】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号１の全長にわたる配列番号１のポリヌクレオチド
に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なく
とも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％
の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリ
ヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９
７％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましい
が、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものがよ
り一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが最も好ましいものである。かかるポリ
ヌクレオチドとして、配列番号１のポリヌクレオチドを
含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１のポリヌ
クレオチドが挙げられる。本発明はまた、上記の全ての
ポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチドを
提供する。

【００１４】配列番号１のヌクレオチド配列はＡＳＰ４
(PCT WO98/11236)との相同性を示す。配列番号１のヌク
レオチド配列はｃＤＮＡ配列であり、420アミノ酸から
なる配列番号２のポリペプチドをコードするポリペプチ
ドコード配列（ヌクレオチド248−1507）を含む。配列
番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
は、配列番号１に含まれるポリペプチドコード配列と同
一であっても、遺伝子コードの重複性（縮重）のため、
やはり配列番号２のポリペプチドをコードする、配列番
号１に含まれる配列以外の配列であってもよい。配列番
号２のポリペプチドはアスパラギン酸プロテアーゼファ
ミリーの他のタンパク質と構造的に関連しており、ＡＳ
Ｐ４(PCT WO98/11236)との相同性および／または構造類
似性を有する。

【００１５】本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドは、とりわけ、それと相同なポリペプチドお
よびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をも
つことが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つのＡＳ
Ｐ５活性を有する。

【００１６】また、本発明は、配列番号１および配列番
号２の対応する全長配列の決定に先立って最初に同定さ
れた部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドに関する。したがって、更なる態様において、本
発明は、(a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌ
クレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性、最も好ましくは９７〜９９％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチ
ド、(b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチド、(c) 配列番号３のヌクレオチド配列か
らなるポリヌクレオチド、または(d) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポ
リペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる
ポリヌクレオチド、を提供する。

【００１７】さらに、本発明は、(a) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでな
るポリペプチド、(b) 配列番号４のアミノ酸配列を含ん
でなるポリペプチド、(c) 配列番号４のアミノ酸配列か
らなるポリペプチド、または(d) 配列番号３に含まれる
ヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチド、を提供する。

【００１８】配列番号３のヌクレオチド配列およびそれ
によりコードされるペプチド配列はエクスプレスド・シ
ーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配
列から誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若
干のヌクレオチド配列読み取り誤差が必然的に存在する
ことを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 377
(supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号
３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペ
プチド配列は配列精度において同一の固有限界を受け
る。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド配
列は、相同性または構造類似性が最も高いタンパク質と
同一の領域、または相同性および／または構造類似性
（例えば、同類アミノ酸の差異）が高い領域を含んでい
る。

【００１９】本発明のポリヌクレオチドは、標準的なク
ローニングおよびスクリーニングにより、ヒト肺の細胞
中のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーか
ら、ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, Science (1991) 252:
1651-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 355:632-63
4; Adams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174）を
用いて得ることができる。また、本発明のポリヌクレオ
チドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得
ることができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて
合成することもできる。

【００２０】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、
または他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌
配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク質配
列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの）と
同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドの
コード配列が含まれる。例えば、融合ポリペプチドの精
製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。本発明
のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、
ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gen
tzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86:821-824
に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、ま
たはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチドは5'
および3'非コード配列、例えば、転写されるが翻訳され
ない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を
含んでいてもよい。

【００２１】本発明の更なる具体例としては、数個、例
えば５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、また
は１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチド
がある。

【００２２】配列番号１に含まれるヌクレオチド配列と
同一であるか実質的に同一であるポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよび
ゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１に
対して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒト以外の
種に由来する相同体およびオーソログ体(ortholog)をコ
ードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクロー
ンを単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用の
ハイブリダイゼーションプローブとして、または核酸増
幅（ＰＣＲ）反応用のプライマーとして用いることがで
きる。一般的に、これらのヌクレオチド配列は基準のヌ
クレオチド配列と好ましくは８０％、より好ましくは９
０％、最も好ましくは９５％同一である。プローブまた
はプライマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含
み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレ
オチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３
０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００２３】本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由
来する相同体およびオーソログ体を含む）をコードする
ポリヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド配列ま
たはその断片を有する標識プローブを用いて、ストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライ
ブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配列
を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各
工程を含んでなる方法により得られる。このようなハイ
ブリダイゼーション技法は当業者に公知である。好まし
いストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、
50% ホルムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン
酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５
×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/ml
の変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２
℃で一夜インキュベートし、次いでフィルターを 0.1×
SSC 中約６５℃で洗浄することを含む。かくして、本発
明は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を
有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスク
リーニングすることにより得られるポリヌクレオチドを
も包含する。

【００２４】当業者には理解されるように、多くの場
合、ポリペプチドをコードする領域がそのｃＤＮＡの5'
末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配
列は不完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであ
り、この酵素はもともと「プロセシビティ」（processi
vity：重合中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の能力
の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳
型のＤＮＡコピーを完成させることができない。

【００２５】全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃ
ＤＮＡを伸長させるための、当業者に公知で利用可能な
方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法
（ＲＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohman
ら, PNAS USA 85, 8998-9002,1988を参照のこと）。例
えばMarathonTM技術(Clontech Laboratories Inc.)によ
り示されるような、上記技法の最近の改良により、より
長いｃＤＮＡの検索が大いに簡便化された。MarathonTM
技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡからｃＤ
ＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結す
る。続いて、遺伝子特異的およびアダプター特異的なオ
リゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて核酸増幅
（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅す
る。次に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物の
内部にアニールするように設計されたプライマー（典型
的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするア
ダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさら
に5'側にアニールする遺伝子特異的プライマー）を用い
てＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物をＤ
ＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤ
ＮＡに直接結合するか、または5'プライマー設計用の新
たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うことによ
り、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００２６】本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界
で公知の方法を用いて、発現系を含有する遺伝子操作宿
主細胞から生産することができる。したがって、更なる
態様において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレ
オチドを含有する発現系、該発現系により遺伝子操作さ
れた宿主細胞、および組換え技法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導さ
れたＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するため
に、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００２７】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み込むために宿
主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチ
ドの導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Bi
ology (1986) および Sambrookら, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)
などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方
法により行うことができる。好適なこうした方法とし
て、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション(transvection)、マイクロインジェク
ション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エ
レクトロポレーション、形質導入、スクレープローディ
ング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic introduct
ion)または感染などがある。

【００２８】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００２９】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入因子由来、酵母染色体要素由
来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよう
なパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイル
ス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来する
ベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプ
ラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来する
ものがある。これらの発現系は発現を起こさせるだけで
なく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般
的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌク
レオチドを維持し、増やし、発現することができる系ま
たはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecu
lar Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載され
るような、日常的に用いられる公知の技法のいずれかに
より、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入すること
ができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細
胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、
適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むこ
とができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに
対して内因性であっても、異種シグナルであってもよ
い。

【００３０】スクリーニングアッセイで使用するため本
発明のポリペプチドを発現させようとする場合、一般に
そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適
である。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用
に先立って細胞を回収する。該ポリペプチドが培地に分
泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するた
めに培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その
細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必
要がある。

【００３１】組換え細胞培養物から本発明のポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポ
リペプチドが単離および／または精製中に変性されると
きは、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００３２】本発明はまた、診断薬としての本発明のポ
リヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連した、
配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺
伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現
または変化した発現により生ずる疾病またはその疾病へ
の罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を下
しうる診断用ツールを提供するだろう。該遺伝子に突然
変異がある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベル
で見つけ出すことができる。

【００３３】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料由来の細胞か
ら得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接
使用してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を
使ってゲノムＤＮＡを酵素的に増幅してもよい。同様の
方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。
欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較した
ときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突
然変異は増幅ＤＮＡを標識ＡＳＰ５ヌクレオチド配列と
ハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチ
した配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差異により区別できる。また、Ｄ
ＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲル
でのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、また
は直接ＤＮＡ塩基配列決定によっても検出できる（例え
ば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこ
と）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクシ
ョンアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテク
ション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-
4401を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝
子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、ＡＳＰ
５ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレ
オチドプローブのアレイ(array)を構築することができ
る。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、
遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分
子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられ
ている（例えば、M. Cheeら, Science, Vol.274, pp.61
0-613 (1996) を参照のこと）。

【００３４】診断アッセイは、前記の方法によりＡＳＰ
５遺伝子の変異を検出することで、前記疾患への罹りや
すさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被
験者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲ
ＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する方法に
より、前記疾患の診断を下すことができる。発現の低下
または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量
法、例えば核酸増幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、Ｒ
Ｎアーゼプロテクション、ノーザンブロッティング、そ
の他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮ
Ａレベルで測定することができる。宿主から得られたサ
ンプル中の本発明ポリペプチドのようなタンパク質のレ
ベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られてい
る。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセ
イ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬ
ＩＳＡアッセイなどがある。

【００３５】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、(a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配
列番号１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b)
(a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、
(c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）もしくはその断片、または(d) 本発明の
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関す
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。
かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特に高
血圧および喘息を診断するうえで有用である。

【００３６】また、本発明のヌクレオチド配列は染色体
の同定にも有用である。この配列は個々のヒト染色体上
の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置とハ
イブリダイズすることができる。本発明に従って関連配
列の染色体地図を作成することは、これらの配列と遺伝
子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階であ
る。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされた
ら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図デ
ータと相関させることができる。この種のデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (J
ohns Hopkins University Welch Medical Library から
オンラインで入手可能) 中に見いだせる。その後、同一
の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連
鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認
する。

【００３７】罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたは
ゲノム配列の差異も調べることができる。罹患個体の一
部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体
にも観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因で
ある可能性がある。

【００３８】本発明のポリペプチド、その断片もしくは
類似体、またはそれらを発現する細胞は、本発明のポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原と
しても使用することができる。「免疫特異的」とは、そ
の抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対す
るその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質
的に高い親和性を示すことを意味する。

【００３９】本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外
の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断
片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られ
る。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養
物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.お
よびMilstein, C., Nature(1975) 256:495-497)、トリ
オーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, Monoclonal Antibodies an
d Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss,Inc., 198
5) などがある。

【００４０】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、米国特許第4,946,778 号に記載される
ような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。
また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニ
ックマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用す
ることができる。前記の抗体を用いて、そのポリペプチ
ドを発現するクローンを単離・同定したり、アフィニテ
ィークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製する
こともできる。

【００４１】本発明のポリペプチドに対する抗体は、と
りわけ、前記疾患の治療に使用できる可能性がある。

【００４２】本発明の更なる態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドまたはその断片と、各種サブクラ
ス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリ
ンのＨ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含ん
でなる遺伝子工学的に作製された可溶性融合タンパク質
に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特にＩ
ｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒ
ンジ領域で起こる。特定例では、血液凝固因子Ｘａで開
裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部分を簡単
に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク
質の遺伝子工学的作製方法、並びに薬物スクリーニン
グ、診断および治療におけるそれらの使用に関する。ま
た、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質を
コードするポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質
技術の例は国際特許出願 WO94/29458 およびWO94/22914
に見いだせる。

【００４３】本発明の更なる態様は哺乳動物において免
疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に前
記疾患から該動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチ
ドを哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗体
を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in
vivo で本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドの発現を指令するベクターを介して該ポリペプチ
ドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫
学的応答を引き出す方法に関する。

【００４４】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物において本発明のポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを含有する。ワクチン製剤
は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチド
は胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に
（例えば、皮下、筋肉内、静脈内または皮内注射によ
り）投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤
としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤
を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および
非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含
みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした
製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アン
プルおよびバイアル）で提供することができ、また、使
用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥
状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤
の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水
中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性
により変化するが、ルーチンな実験操作により簡単に決
定できる。

【００４５】本発明のポリペプチドは、多くの病的状
態、特に前記疾患を含めて、さまざまな生物学的機能に
関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺
激または抑制する化合物を同定するスクリーニング法を
開発することが望ましい。したがって、更なる態様にお
いて、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制す
る化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を
提供する。一般的には、前記疾患の治療および予防目的
のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用され
る。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学
物質ライブラリーおよび天然産物の混合物から化合物を
同定することができる。このように同定されたアゴニス
ト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合によ
り、該ポリペプチドの天然のまたは修飾された基質、リ
ガンド、受容体、酵素などであってよく、また、その構
造的または機能的なミメティックであってもよい（Coli
ganら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapt
er 5 (1991)を参照のこと）。

【００４６】スクリーニング法では、本発明のポリペプ
チド、または該ポリペプチドを担持する細胞もしくは
膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合
を、候補化合物に直接または間接的に結合された標識を
用いて簡単に測定できる。あるいはまた、スクリーニン
グ法では標識した競合物質との競合を用いることもあ
る。さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合
物がポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグ
ナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて試験することができ
る。一般的には、既知のアゴニストの存在下で活性化の
インヒビターをアッセイして、アゴニストによる活性化
に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニスト
またはインヒビターの不在下で、候補化合物がポリペプ
チドの活性化を抑制するか否かを調べることによる逆ア
ゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、
構成的に活性のあるポリペプチドが用いられる。さら
に、これらのスクリーニング法は、候補化合物と本発明
のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつ
くり、この混合物中のＡＳＰ５活性を測定し、そしてこ
の混合物のＡＳＰ５活性をスタンダードと比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチドの
アンタゴニストを同定する高処理量スクリーニングアッ
セイでは、上記のようなＦｃ部分とＡＳＰ５ポリペプチ
ドから作製されるような融合タンパク質も使用すること
ができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-5
8 (1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270
(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。さらに、全て
のアスパラギン酸プロテアーゼはペプスタチンによって
阻害されるので、本発明のポリペプチドについてのスク
リーニングアッセイにペプスタチンを使用してもよい。

【００４７】また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチドまたは該ポリペプチドに対する抗体を用いて、細
胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添
加化合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組
み立てることができる。例えば、当業界で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのポ
リペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれ
アンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用
いることができる。

【００４８】膜に結合した受容体または可溶性の受容体
が存在するのであれば、当業界で公知の標準的な受容体
結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明の
ポリペプチドを用いることができる。こうした受容体結
合法には、限定するものではないが、リガンド結合アッ
セイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で
標識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）するか、
または検出や精製に適したペプチド配列に融合させ、そ
して推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織
抽出物、体液など）とインキュベートする。その他の方
法としては、表面プラズモン共鳴および分光学のような
生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、
該ポリペプチドまたは（存在するのであれば）その受容
体への結合と競合する該ポリペプチドのアゴニストまた
はアンタゴニストを同定するために用いることもでき
る。スクリーニングアッセイを行うための標準的な方法
は当業界でよく理解されている。

【００４９】本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、該ポリペプ
チドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係
があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例え
ば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断片）、また
は本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子など
がある。

【００５０】かくして、他の態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポ
リペプチドの産生を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) 本発明のポリペプチド、(b) 本発明のポリペプ
チドを発現している組換え細胞、(c) 本発明のポリペプ
チドを発現している細胞膜、または(d) 本発明のポリペ
プチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチド
は好ましくは配列番号２のポリペプチドである。このよ
うなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実
質的な構成成分であることが理解されよう。

【００５１】当業者であれば、本発明のポリペプチド
は、その構造に基づいて該ポリペプチドのアゴニスト、
アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも
使用できることが容易に理解されよう。この方法は、
(a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、(b)
アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実
と思われる反応部位または結合部位の三次元構造を想定
し、(c) 想定された反応部位または結合部位と結合また
は反応すると予想される候補化合物を合成し、そして
(d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニス
トまたはインヒビターであるか否かを調べる、ことを含
んでなる。これは通常相互作用プロセスであることがさ
らに理解されよう。

【００５２】更なる態様において、本発明は、ＡＳＰ５
ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係し
た、例えば高血圧および喘息などの異常な状態の治療法
を提供する。

【００５３】該ポリペプチドの活性が過剰である場合
は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのア
プローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素な
どの結合をブロックすることにより、または第２のシグ
ナルを抑制することで異常な状態を軽減することによ
り、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、
上記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学
上許容される担体とともに患者に投与することを含んで
なる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペプチ
ドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと
結合する能力がまだある可溶性形態のポリペプチドを投
与することができる。このような競合物質の典型的な例
はＡＳＰ５ポリペプチドの断片である。

【００５４】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ＡＳＰ５ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で産生されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする（例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝子
発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキ
シヌクレオチド), CRCPress, Boca Raton, FL (1988)
中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を参照のこ
と）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせんを形
成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる（例
えば、Leeら, Nucleic Acids Res (1979) 6:3073; Coon
eyら, Science (1988) 241:456; Dervanら, Science (1
991) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーは
それ自体を投与することもできるし、関連オリゴマーを
in vivo で発現させることもできる。

【００５５】ＡＳＰ５およびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有
効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すな
わち、前記アゴニスト）を製剤学上許容される担体とと
もに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含ん
でなる。別法として、患者の関連細胞においてＡＳＰ５
を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることが
できる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイ
ルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオ
チドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物
を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを
含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入
されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッ
ケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイ
ルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作およ
びin vivo ポリペプチド発現のために、これらの産生細
胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Hu
man Molecular Genetics, T Strachan and A P Read, B
IOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 2
0, Gene Therapy andother Molecular Genetic-based T
herapeutic Approaches(およびその中の引用文献) を参
照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明のポ
リペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与するこ
とである。

【００５６】更なる態様において、本発明は、治療に有
効な量のポリペプチド（例えば、可溶性形態の本発明ポ
リペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプ
チド、または小分子化合物を製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤と共に含有する医薬組成物を提供する。この
種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロー
ス、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組
合せがあるが、これらに限らない。本発明はさらに、上
記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容
器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００５７】医薬組成物は投与経路、例えば全身または
経口による投与経路に適合させることができる。全身投
与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注であ
る。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も
使用できる。全身投与の別の手段には、胆汁酸塩、フシ
ジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘
膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチ
ドまたは他の化合物を腸溶剤またはカプセル剤として製
剤化し得るのであれば、経口投与も可能である。これら
の化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投
与しても、かつ／または局在化させてもよい。

【００５８】必要な投与量範囲は、本発明のペプチドま
たは他の化合物の選択、投与経路、製剤の性質、患者の
状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な
投与量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲であ
る。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効
率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は広
範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静
注による投与よりも高い投与量を必要とすると予想され
よう。こうした投与量レベルの変動は、当業界でよく理
解されているような、標準的経験的な最適化手順を用い
て調整することができる。

【００５９】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプ
ラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的に
操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００６０】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配
列は、類似の相同性を有する別の配列を同定する際の価
値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコン
ピュータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデ
ータを用いてＧＣＣのような公知の検索ツールにより配
列データベースを検索することで最大限促進される。し
たがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１
の配列を含んでなるポリヌクレオチドおよび／またはそ
れによりコードされるポリペプチドを保存したコンピュ
ータ読み取り可能媒体を提供する。

【００６１】以下の定義は上記の説明中でしばしば用い
られた用語を理解しやすくするためのものである。本明
細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗
体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によっ
て」改変されたことを意味する。「単離された」組成物
または物質が天然に存在するのであれば、それはそのも
との環境から変化しているか分離されており、またはそ
の両方である。例えば、生存している動物の体内に自然
界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物
質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書中で用いられるように、「単離された」も
のである。

【００６２】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を行う
ことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自
然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスお
よび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオ
リゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチ
ドも包含する。

【００６３】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペ
プチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」
は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴ
マーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の
両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化
アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセス
で、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修
飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的
な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述さ
れている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノ
またはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこで
も行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペ
プチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異
なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチド
が多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチ
ドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある
又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、また
は分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセス
から生じることがあり、また、合成法によって製造する
こともできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、
ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド
誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、
ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の
形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホル
ミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩア
ンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミ
リストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（例えば、
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s: Post-translational Modifications and Aging", An
n NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと）。

【００６４】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付
加、融合および末端切断（トランケーション）をもたら
しうる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプ
チドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準
ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似
しており、多くの領域で同一となるような相違に限られ
る。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１
以上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違して
いてよい。置換または付加されるアミノ酸残基は遺伝子
コードによりコードされるものであっても、なくてもよ
い。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はア
レリック変異体のように天然に存在するものでも、天然
に存在することが知られていない変異体であってもよ
い。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在
しない変異体は、突然変異誘発法または直接合成により
作製することができる。

【００６５】当業界で知られた「同一性」とは、ポリペ
プチド配列またはポリヌクレオチド配列の比較により決
定された、２以上のかかる配列間の関係のことである。
当業界ではまた、「同一性」はポリペプチド配列または
ポリヌクレオチド配列の鎖間のマッチ(match)により決
定された、このような配列間の配列関係の程度を意味す
る。「同一性」は公知の方法により難なく算出すること
ができ、こうした方法として、例えば Computational M
olecular Biology, Lesk, A.M.編, Oxford University
Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics a
nd Genome Projects, Smith, D.W. 編, Academic Pres
s, New York, 1993; Computer Analysisof Sequence Da
ta, Part I, Griffin, A.M. and Griffin, H.G. 編, Hu
mana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in
Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Pres
s, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. an
d Devereux, J. 編, M Stockton Press, New York, 199
1; および Carillo, H. andLipman, D., SIAM J. Appli
ed Math., 48: 1073 (1988) に記載された方法がある
が、これらに限らない。「同一性」を決定する方法は、
検討する配列間で最大級のマッチが得られるように設計
される。さらに、「同一性」を決定する方法は一般に利
用可能なコンピュータプログラムに編集されている。２
配列間の「同一性」を決定するコンピュータプログラム
法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Devereux,
J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (1984))、BL
AS TP、BLASTINおよびFASTA(Atschul, S.F.ら, J. Mole
c. Biol. 215:403-410 (1990))があるが、これらに限ら
ない。BLAST XプログラムはNCBIおよび他のソースから
一般に入手可能である (BLAST Manual, Altschul, S.
ら, NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S.
ら, J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990))。公知のSmit
h Watermanアルゴリズムも同一性の決定に使用すること
ができる。

【００６６】ポリペプチド配列を比較するためのパラメ
ーターは次のものを含む：１）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970) 比較マトリックス：Hentikoff and Hentikoff, Proc. N
atl. Acad. Sci. USA,89: 10915-10919 (1992) からのB
LOSSUM62 ギャップペナルティー：１２ギャップ長ペナルティー：４これらのパラメーターと共に有用なプログラムは Genet
ics Computer Group (Madison WI) から「gap」プログ
ラムとして一般に入手可能である。前記のパラメーター
はペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(defau
lt parameter)である（末端ギャップのペナルティーは
無し）。

【００６７】ポリヌクレオチド配列を比較するための好
適なパラメーターは次のものを含む：１）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970) 比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０ギャップペナルティー：５０ギャップ長ペナルティー：３ Genetics Computer Group (Madison WI)から「gap」プ
ログラムとして入手可能である。前記のパラメーターは
ポリヌクレオチド比較のためのデフォルトパラメーター
である。

【００６８】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの
「同一性」に関する好適な意味は以下の(1) および(2)
に提供される。 (1) ポリヌクレオチドの具体例としては、配列番号１の
基準配列に対して少なくとも50、60、70、80、85、90、
95、97または100％の同一性を有するポリヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドがある。
このポリヌクレオチド配列は配列番号１の基準配列と同
一であっても、該基準配列に対して、ある整数個までの
ヌクレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少な
くとも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジショ
ンおよびトランスバージョンを含む）または付加よりな
る群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配
列の5'もしくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の
間のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチド
の間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグ
ループとして点在することができる。ヌクレオチド変異
の前記の数は、配列番号１のヌクレオチドの総数に、同
一性％を規定する整数を100 で割った値を掛け、その積
を配列番号１のヌクレオチドの総数から差し引くことに
より、すなわち、次式：ｎ_n≦ｘ_n−（ｘ_n・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_nはヌクレオチド
変異の数であり、ｘ_nは配列番号１のヌクレオチドの総
数であり、ｙは50％については0.50、60％については0.
60、70％については0.70、80％については0.80、85％に
ついては0.85、90％については0.90、95％については0.
95、97％については0.97または100％については1.00で
あり、・は掛け算記号であり、ここでｘ_nとｙの非整数
の積は、その積をｘ_nから引く前に、最も近似する整数
に切り下げる。配列番号２のポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド配列を改変すると、そのコード配列に
ナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異
が生じ、こうした変異後に該ポリヌクレオチドによりコ
ードされたポリペプチドを改変させることもできる。

【００６９】例えば、本発明のポリヌクレオチド配列は
配列番号２の基準配列と同一でありうる。すなわち、そ
れは100％同一であっても、同一性％が100％未満となる
ように該基準配列に対して、ある整数個までのアミノ酸
変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１個の
核酸の欠失、置換（トランジションおよびトランスバー
ジョンを含む）または付加よりなる群から選択され、こ
うした変異は基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端
位置、またはこれらの末端位置の間のどこに存在しても
よく、基準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または
基準配列内に１以上の連続するグループとして点在する
ことができる。所定の同一性％に関する核酸変異の数
は、配列番号２のアミノ酸の総数に、同一性％を規定す
る整数を100 で割った値を掛け、その積を配列番号２の
アミノ酸の総数から差し引くことにより、すなわち、次
式：ｎ_n≦ｘ_n−（ｘ_n・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_nはアミノ酸変異
の数であり、ｘ_nは配列番号２のアミノ酸の総数であ
り、ｙは70％については0.70、80％については0.80、85
％については0.85といった数字であり、・は掛け算記号
であり、ここでｘ_nとｙの非整数の積は、その積をｘ_nか
ら引く前に、最も近似する整数に切り下げる。

【００７０】(2) ポリペプチドの具体例としては、配列
番号２のポリペプチド基準配列に対して少なくとも50、
60、70、80、85、90、95、97または100％の同一性を有
するポリペプチドを含んでなる単離されたポリペプチド
がある。このポリペプチド配列は配列番号２の基準配列
と同一であっても、該基準配列に対して、ある整数個ま
でのアミノ酸変異を含んでいてもよい。前記変異は少な
くとも１個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非同類
アミノ酸置換を含む）または付加よりなる群から選択さ
れ、こうした変異は基準ポリペプチド配列のアミノもし
くはカルボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間
のいずれに存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間
に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグルー
プとして点在することができる。アミノ酸変異の前記の
数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、同一性％を規定
する整数を100 で割った値を掛け、その積を配列番号２
のアミノ酸の総数から差し引くことにより、すなわち、
次式：ｎ_a≦ｘ_a−（ｘ_a・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_aはアミノ酸変異
の数であり、ｘ_aは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは50％については0.50、60％については0.60、70
％については0.70、80％については0.80、85％について
は0.85、90％については0.90、95％については0.95、97
％については0.97または100％については1.00であり、
・は掛け算記号であり、ここでｘ_aとｙの非整数の積
は、その積をｘ_aから引く前に、最も近似する整数に切
り下げる。

【００７１】例えば、本発明のポリペプチド配列は配列
番号２の基準配列と同一でありうる。すなわち、それは
100％同一であっても、同一性％が100％未満となるよう
に該基準配列に対して、ある整数個までのアミノ酸変異
を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１個のアミ
ノ酸の欠失、置換（同類および非同類アミノ酸置換を含
む）または付加よりなる群から選択され、こうした変異
は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカルボキシ末
端位置、またはこれらの末端位置の間のいずれに存在し
てもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々に、または
基準配列内に１以上の連続するグループとして点在する
ことができる。所定の同一性％に関するアミノ酸変異の
数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、同一性％を規定
する整数を100 で割った値を掛け、その積を配列番号２
のアミノ酸の総数から差し引くことにより、すなわち、
次式：ｎ_a≦ｘ_a−（ｘ_a・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_aはアミノ酸変異
の数であり、ｘ_aは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは70％については0.70、80％については0.80、85
％については0.85といった数字であり、・は掛け算記号
であり、ここでｘ_aとｙの非整数の積は、その積をｘ_aか
ら引く前に、最も近似する整数に切り下げる。

【００７２】「融合タンパク質」とは、２つの、しばし
ば無関係の、融合された遺伝子またはその断片によりコ
ードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A
-0 464には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部
分と他のヒトタンパク質またはその一部とを含んでなる
融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部とし
て免疫グロブリンＦｃ領域を使用することが有利であ
り、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する（例
えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつか
の使用にとっては、その融合タンパク質を発現させ、検
出し、精製した後でＦｃ部分を除去することが望ましい
だろう。

【００７３】

【実施例】実施例1 Clontech Laboratories社から購入したヒト多組織ノー
ザンブロット(MTNカタログ番号7760-1)を、Ａｓｐ４ｃ
ＤＮＡクローンのEcoRI/SalI制限エンドヌクレアーゼ消
化により作製したＡｓｐ４ｃＤＮＡプローブ(298ヌク
レオチド長)とハイブリダイズさせた。 GATCCTCGGCGACGTTTTCTTGGGGGCGTATGTGACCGTCTTCGACCGCG
GGGACATGAAGAGCGGCGCACGAGTGGGACTGGCGCGCGCTCGCCCTCGC
GGAGCGGACCTGGGAAGGCGCGAGACCGCGCAGGCGCAGTACCGCGGGTG
CCGCCCAGGTGATGCGCATGCGCACCGGGTAGCAGAGCTAGCGCTACTCA
GTAAAAATCCAATATTTCCATTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAATTCC
CATCACATTGGAGATCTCCAATCACTAGTGCGGCCGCCTGCAGGTCgA
（配列番号5）Ａｓｐ４とＡｓｐ５との同一性が＞90％であるため、こ
のプローブはどちらの遺伝子にもハイブリダイズできる
だろう。プローブＤＮＡをランダムプライミング反応中
に³²P-dCTPを取り込ませて放射性標識し(RadPrime DNA
Labelling System,Gibco-BRL)、次にこの標識プローブ
をCHROMA SPIN+TE-30カラム(Clontechカタログ番号K132
1-1)を用いて精製した。プレハイブリダイゼーションを
一時間行なった後に、ExpressHyb緩衝液(Clontech)を使
用し、プローブを最終濃度１×10⁶cpm/mlまで加えて68
℃で2時間ハイブリダイゼーションを行なった。ハイブ
リダイゼーションの後に、膜を2×SSC，0.05％SDSで各2
0分ずつ2回洗浄し、さらに0.1×SSC，0.1％SDSで各50℃
で20分ずつ2回洗浄した。次にこの膜をプラスチック製
のラップで覆い、2枚の増感紙を使用して−70℃でＸ線
フィルムに露光した。これにより、ＡＳＰ４/ＡＳＰ５
は肺で最も高く発現され、次に腎臓で発現されることが
わかった(試験した組織は心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、
骨格筋、腎臓および膵臓であった)。該プローブの肺お
よび腎臓への局在は、以前に観察されたＡＳＰ５につい
てのＥＳＴの位置確認と一致している。

【００７４】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００７５】

【配列表】

SEQUENCE LISTING ＜110＞SmithKline Beecham Corporation ＜120＞ASP5 ＜130＞PA98-280 ＜150＞U.S. Provisional Application No.60/056,480 ＜151＞1997-8-21 ＜150＞U.S.Non-Provisional Application No.09/111,7
27 ＜151＞1998-7-8 ＜160＞5 ＜170＞FastSEQ for Windows Version 2.0 ＜210＞ 1 ＜211＞ 1648 ＜212＞ DNA ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞1 ccaccaccac tgccacccaa gtagggagtg aggagcacca ggagcacagg atgctacttc 60 tgccaaccct acaaaaatac tctgcacaaa tcttcaaaaa acatccttgt cccactgcgt 120 cacctgcgga cagatttcat gtcctggtct ccttctaaac ctggaggtgg ggcatgaaca 180 gggtggagtc acaggggaaa gaaaatgagc ccccaggaca cctgggttca cacccaggtc 240 cccagcgatg tctccaccac cgctgctgca acccctgctg ctgctgctgc ctctgctgaa 300 tgtggagcct tccggggcca cactgatccg catccctctt catcgagtcc aacctggacg 360 caggatcctg aacctactga ggggatggag agaaccagca gagctcccca agttgggggc 420 cccatcccct ggggacaagc ccatcttcgt acctctctcg aactacaggg atgtgcagta 480 ttttggggaa attgggctgg gaacgcctcc acaaaacttc actgttgcct ttgacactgg 540 ctcctccaat ctctgggtcc cgtccaggag atgccacttc ttcagtgtgc cctgctggtt 600 acaccaccga tttgatccca aagcctctag ctccttccag gccaatggga ccaagtttgc 660 cattcaatat ggaactgggc gggtagatgg aatcctgagc gaggacaagc tgactattgg 720 tggaatcaag ggtgcatcag tgattttcgg ggaggctctg tgggagccca gcctggtctt 780 cgtttttgcc cattttgatg ggatattggg cctcggtttt cccattctgt ctgtggaagg 840 agttcggccc ccgatggatg tactggtgga gcaggggcta ttggataagc ctgtcttctc 900 cttttacctc aacagggacc ctgaagagcc tgatggagga gagctggtcc tggggggctc 960 ggacccggca cactacatcc cacccctcac cttcgtgcca gtcacggtcc ctgcctactg 1020 gcagatccac atggagcgtg tgaaggtggg cccagggctg actctctgtg ccaagggctg 1080 tgctgccatc ctggatacgg gcacgtccct catcacagga cccactgagg agatccgggc 1140 cctgcatgca gccattgggg gaatcccctt gctggctggg gagtacatca tcctgtgctc 1200 ggaaatccca aagctccccg cagtctcctt ccttcttggg ggggtctggt ttaacctcac 1260 ggcccatgat tacgtcatcc agactactcg aaatggcgtc cgcctctgct tgtccggttt 1320 ccaggccctg gatgtccctc cgcctgcagg gcccttctgg atcctcggtg acgtcttctt 1380 ggggacgtat gtggccgtct tcgaccgcgg ggacatgaag agcagcgccc gggtgggcct 1440 ggcgcgcgct cgcactcgcg gagcggacct cggatgggga gagactgcgc aggcgcagtt 1500 ccccgggtga cgcccaagtg aagcgcatgc gcagcgggtg gtcgcgtagg tcctgctacc 1560 cagtaaaaat ccactatttc cattgagaaa aaacaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaactcg 1620 aggggggccc gtacccaatt cgccctat 1648 ＜210＞ 2 ＜211＞ 420 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜401＞2 Met Ser Pro Pro Pro Leu Leu Gln Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu 1 5 10 15 Leu Asn Val Glu Pro Ser Gly Ala Thr Leu Ile Arg Ile Pro Leu His 20 25 30 Arg Val Gln Pro Gly Arg Arg Ile Leu Asn Leu Leu Arg Gly Trp Arg 35 40 45 Glu Pro Ala Glu Leu Pro Lys Leu Gly Ala Pro Ser Pro Gly Asp Lys 50 55 60 Pro Ile Phe Val Pro Leu Ser Asn Tyr Arg Asp Val Gln Tyr Phe Gly 65 70 75 80 Glu Ile Gly Leu Gly Thr Pro Pro Gln Asn Phe Thr Val Ala Phe Asp 85 90 95 Thr Gly Ser Ser Asn Leu Trp Val Pro Ser Arg Arg Cys His Phe Phe 100 105 110 Ser Val Pro Cys Trp Leu His His Arg Phe Asp Pro Lys Ala Ser Ser 115 120 125 Ser Phe Gln Ala Asn Gly Thr Lys Phe Ala Ile Gln Tyr Gly Thr Gly 130 135 140 Arg Val Asp Gly Ile Leu Ser Glu Asp Lys Leu Thr Ile Gly Gly Ile 145 150 155 160 Lys Gly Ala Ser Val Ile Phe Gly Glu Ala Leu Trp Glu Pro Ser Leu 165 170 175 Val Phe Val Phe Ala His Phe Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gly Phe Pro 180 185 190 Ile Leu Ser Val Glu Gly Val Arg Pro Pro Met Asp Val Leu Val Glu 195 200 205 Gln Gly Leu Leu Asp Lys Pro Val Phe Ser Phe Tyr Leu Asn Arg Asp 210 215 220 Pro Glu Glu Pro Asp Gly Gly Glu Leu Val Leu Gly Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 Ala His Tyr Ile Pro Pro Leu Thr Phe Val Pro Val Thr Val Pro Ala 245 250 255 Tyr Trp Gln Ile His Met Glu Arg Val Lys Val Gly Pro Gly Leu Thr 260 265 270 Leu Cys Ala Lys Gly Cys Ala Ala Ile Leu Asp Thr Gly Thr Ser Leu 275 280 285 Ile Thr Gly Pro Thr Glu Glu Ile Arg Ala Leu His Ala Ala Ile Gly 290 295 300 Gly Ile Pro Leu Leu Ala Gly Glu Tyr Ile Ile Leu Cys Ser Glu Ile 305 310 315 320 Pro Lys Leu Pro Ala Val Ser Phe Leu Leu Gly Gly Val Trp Phe Asn 325 330 335 Leu Thr Ala His Asp Tyr Val Ile Gln Thr Thr Arg Asn Gly Val Arg 340 345 350 Leu Cys Leu Ser Gly Phe Gln Ala Leu Asp Val Pro Pro Pro Ala Gly 355 360 365 Pro Phe Trp Ile Leu Gly Asp Val Phe Leu Gly Thr Tyr Val Ala Val 370 375 380 Phe Asp Arg Gly Asp Met Lys Ser Ser Ala Arg Val Gly Leu Ala Arg 385 390 395 400 Ala Arg Thr Arg Gly Ala Asp Leu Gly Trp Gly Glu Thr Ala Gln Ala 405 410 415 Gln Phe Pro Gly 420 ＜210＞ 3 ＜211＞ 1519 ＜212＞ DNA ＜213＞ Homo sapiens ＜402＞3 acagattnna tgtcctggtc tccttctaaa cctggaggtg gggcatgaac agggtggagt 60 cacaggggaa agaaaatgag gccccaggac acctgggttc acacccaggt ccccagcgat 120 gtctccacca ccgctgctgc aacccctgct gctgctgctg cctctgctga atgtggagcc 180 ttccggggcc acactgatcc gcatccctct tcatcgagtc caacctggac gcaggatcct 240 gaacctactg aggggatgga gagaaccagc agagctcccc aagttggggg ccccatcccc 300 tggggacaag cccatcttcg tacctctctc gaactacagg gatgtgcagt attttgggga 360 aattgggctg ggaacgcctc cacaaaactt cactgttgcc tttgacactg gctcctccaa 420 tctctgggtc ccgtccagga gatgccactt cttcagtgtg ccctgctggt tacaccaccg 480 atttgatccc aaagcctcta gctccttcca ggccaatggg accaagtttg ccattcaata 540 tggaactggg cgggtagatg gaatcctgag cgaggacaag ctgactattg gtggaatcaa 600 gggtgcatca gtgattttcg gggaggctct gtgggagccc agcctggtct tcgtttttgc 660 ccattttgat gggatattgg gcctcggttt tcccattctg tctgtggaag gagttcggcc 720 cccgatggat gtactggtgg agcaggggct attggataag cctgtcttct ccttttacct 780 caacagggac cctgaagagc ctgatggagg agagctggtc ctggggggct cggacccggc 840 acactacatc ccacccctca ccttcgtgcc agtcacggtc cctgcctact ggcagatcca 900 catggagcgt gtgaaggtgg gcccagggct gactctctgt gccaagggct gtgctgccat 960 cctggatacg ggcacgtccc tcatcacagg acccactgag gagatccggg ccctgcatgc 1020 agccattggg ggaatcccct tgctggctgg ggagtacatc atcctgtgct cggaaatccc 1080 aaagctcccc gcagtctcct tccttcttgg gggggtctgg tttaacctca cggcccatga 1140 ttacgtcatc cagactactc gaaatggcgt ccgcctctgc ttgtccggtt tccaggccct 1200 ggatgtccct ccgcctgcag ggcccttctg gatcctcggt gacgtcttct tggggacgta 1260 tgtggccgtc ttcgaccgcg gggacatgaa gagcagcgcc cgggtgggcc tggcgcgcgc 1320 tcgcactcgc ggagcggacc tcggatgggg agagactgcg caggcgcagt tccccgggtg 1380 acgcccaagt gaagcgcatg cgcagcgggt ggtcgcgtag gtcctgctac ccagtaaaaa 1440 tccactattt ccattgagaa aaaacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaactc gaggggggcc 1500 cgtacccaat tcgccctat 1519 ＜210＞ 4 ＜211＞ 465 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜403＞4 Met Ser Pro Pro Pro Leu Leu Gln Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu 1 5 10 15 Leu Asn Val Glu Pro Ser Gly Ala Thr Leu Ile Arg Ile Pro Leu His 20 25 30 Arg Val Gln Pro Gly Arg Arg Ile Leu Asn Leu Leu Arg Gly Trp Arg 35 40 45 Glu Pro Ala Glu Leu Pro Lys Leu Gly Ala Pro Ser Pro Gly Asp Lys 50 55 60 Pro Ile Phe Val Pro Leu Ser Asn Tyr Arg Asp Val Gln Tyr Phe Gly 65 70 75 80 Glu Ile Gly Leu Gly Thr Pro Pro Gln Asn Phe Thr Val Ala Phe Asp 85 90 95 Thr Gly Ser Ser Asn Leu Trp Val Pro Ser Arg Arg Cys His Phe Phe 100 105 110 Ser Val Pro Cys Trp Leu His His Arg Phe Asp Pro Lys Ala Ser Ser 115 120 125 Ser Phe Gln Ala Asn Gly Thr Lys Phe Ala Ile Gln Tyr Gly Thr Gly 130 135 140 Arg Val Asp Gly Ile Leu Ser Glu Asp Lys Leu Thr Ile Gly Gly Ile 145 150 155 160 Lys Gly Ala Ser Val Ile Phe Gly Glu Ala Leu Trp Glu Pro Ser Leu 165 170 175 Val Phe Val Phe Ala His Phe Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gly Phe Pro 180 185 190 Ile Leu Ser Val Glu Gly Val Arg Pro Pro Met Asp Val Leu Val Glu 195 200 205 Gln Gly Leu Leu Asp Lys Pro Val Phe Ser Phe Tyr Leu Asn Arg Asp 210 215 220 Pro Glu Glu Pro Asp Gly Gly Glu Leu Val Leu Gly Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 Ala His Tyr Ile Pro Pro Leu Thr Phe Val Pro Val Thr Val Pro Ala 245 250 255 Tyr Trp Gln Ile His Met Glu Arg Val Lys Val Gly Pro Gly Leu Thr 260 265 270 Leu Cys Ala Lys Gly Cys Ala Ala Ile Leu Asp Thr Gly Thr Ser Leu 275 280 285 Ile Thr Gly Pro Thr Glu Glu Ile Arg Ala Leu His Ala Ala Ile Gly 290 295 300 Gly Ile Pro Leu Leu Ala Gly Glu Tyr Ile Ile Leu Cys Ser Glu Ile 305 310 315 320 Pro Lys Leu Pro Ala Val Ser Phe Leu Leu Gly Gly Val Trp Phe Asn 325 330 335 Leu Thr Ala His Asp Tyr Val Ile Gln Thr Thr Arg Asn Gly Val Arg 340 345 350 Leu Cys Leu Ser Gly Phe Gln Ala Leu Asp Val Pro Pro Pro Ala Gly 355 360 365 Pro Phe Trp Ile Leu Gly Asp Val Phe Leu Gly Thr Tyr Val Ala Val 370 375 380 Phe Asp Arg Gly Asp Met Lys Ser Ser Ala Arg Val Gly Leu Ala Arg 385 390 395 400 Ala Arg Thr Arg Gly Ala Asp Leu Gly Trp Gly Glu Thr Ala Gln Ala 405 410 415 Gln Phe Pro Gly Arg Pro Ser Glu Ala His Ala Gln Arg Val Val Ala 420 425 430 Val Leu Leu Pro Ser Lys Asn Pro Leu Phe Pro Leu Arg Lys Asn Lys 435 440 445 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Thr Arg Gly Gly Pro Val Pro Asn Ser Pro 450 455 460 Tyr 465 ＜210＞ 5 ＜211＞ 298 ＜212＞ DNA ＜213＞ Homo sapiens ＜404＞5 gatcctcggc gacgttttct tgggggcgta tgtgaccgtc ttcgaccgcg gggacatgaa 60 gagcggcgca cgagtgggac tggcgcgcgc tcgccctcgc ggagcggacc tgggaaggcg 120 cgagaccgcg caggcgcagt accgcgggtg ccgcccaggt gatgcgcatg cgcaccgggt 180 agcagagcta gcgctactca gtaaaaatcc aatatttcca ttgaaaaaaa aaaaaaaaaa 240 aaagaattcc catcacattg gagatctcca atcactagtg cggccgcctg caggtcga 298

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 ＡＢＵＣ０７Ｋ 16/18 Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｐ 21/02 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者ジョンケイイギリス国シーエフ４８アールティーウェールズ，カーディフ，サイカモアツリークロースラディア１ (72)発明者ジェフリーヒルイギリス国シーエフ５２ディーエルウェールズ，カーディフ，ザクレセントランダフ，カスウェルハウス 41 (72)発明者トルディスミスアメリカ合衆国 19087 ペンシルバニア州，ラドナー，レモントンウェイ 122

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の(i)〜(iii)から選択される単離さ
れたポリペプチド： (i)配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含んでなるポリペプチド、(ii) 配列番号２のア
ミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、および(iii) 配
列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
【請求項２】以下の(i)〜(vi)から選択される単離さ
れたポリヌクレオチド、またはそのヌクレオチド配列に
相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド： (i)配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含んでなるポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列を含んでなるポリヌクレオチド、(ii)配列番号２
のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列に対して、その全長にわたって、少なくと
も７０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでな
るポリヌクレオチド、(iii) 配列番号１の全長にわたる
配列番号１のヌクレオチド配列に対して少なくとも７０
％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリ
ヌクレオチド、(iv) 配列番号２のアミノ酸配列からな
るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで
なるポリヌクレオチド、(v) 配列番号１のヌクレオチド
配列からなるポリヌクレオチド、および(vi) 適当なラ
イブラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件下で、配列番号１のヌクレオチド配列またはそ
の断片をもつ標識プローブでスクリーニングすることに
より得られるポリヌクレオチド。
【請求項３】請求項１に記載のポリペプチドに対して
免疫特異的な抗体。
【請求項４】以下の(i)または(ii)の医薬組成物： (i) 請求項１に記載のポリペプチドの活性または発現を
増強する必要がある被験者を治療するための医薬組成物
であって、 (a)治療に有効な量の、該ポリペプチドに対するアゴニ
スト、および／または(b)該ポリペプチド活性のin vivo
産生をもたらす形態の、該ポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、を含有
する医薬組成物；または(ii) 請求項１に記載のポリペ
プチドの活性または発現を抑制する必要がある被験者を
治療するための医薬組成物であって、 (a)治療に有効な量の、該ポリペプチドに対するアンタ
ゴニスト、および／または(b)該ポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列の発現を抑制する核酸分子、およ
び／または(c)治療に有効な量の、該ポリペプチドのリ
ガンド、基質または受容体に関して該ポリペプチドと競
合するポリペプチド、を含有する医薬組成物。
【請求項５】被験者における請求項１に記載のポリペ
プチドの発現または活性に関連した疾病または該疾病へ
の罹りやすさを検査する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列に突然変異があるか否かを調べるこ
と、および／または(b) 該被験者から得られたサンプル
中の該ポリペプチド発現の存在または量を分析するこ
と、を含んでなる方法。
【請求項６】請求項１に記載のポリペプチドの機能を
刺激または抑制する化合物を同定するためのスクリーニ
ング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直接または
間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存在下で測
定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制に
より生ずるシグナルをもたらすか否かを、該ポリペプチ
ドを担持している細胞または細胞膜に適した検出系を用
いて調べること、 (d) 候補化合物と、該ポリペプチドを含有する溶液と、
を一緒にして混合物を調製し、該混合物中の該ポリペプ
チドの活性を測定して、該混合物の活性をスタンダード
と比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコード
するｍＲＮＡおよび該ポリペプチドの産生に及ぼす効果
を検出すること、よりなる群から選択される方法を含ん
でなるスクリーニング法。
【請求項７】請求項１に記載のポリペプチドのアゴニ
ストまたはアンタゴニスト。
【請求項８】下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
するとき請求項１に記載のポリペプチドを産生し得るポ
リヌクレオチドを含有する発現系。
【請求項９】宿主細胞が適当な培養条件下で配列番号
２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチドを産生するように、請求項８に記載の
発現系を用いて細胞を形質転換またはトランスフェクシ
ョンすることを含んでなる、組換え宿主細胞の作製方
法。
【請求項１０】請求項９に記載の方法により得られる
組換え宿主細胞。
【請求項１１】配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有
するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを発現して
いる請求項１０に記載の組換え宿主細胞の膜。
【請求項１２】請求項１０に記載の宿主細胞を前記ポ
リペプチドを産生させるのに十分な条件下で培養し、そ
の培養培地から該ポリペプチドを回収することを含んで
なる、前記ポリペプチドの生産方法。
【請求項１３】以下の(a)〜(d)から選択される単離さ
れたポリヌクレオチド： (a)配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するヌク
レオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌ
クレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド、および (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列を含んでなるポリヌクレオチド。
【請求項１４】以下の(a)〜(d)から選択される単離さ
れたポリペプチド： (a)配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含んでなるポリペプチド、 (b) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
ド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
および (d) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでな
るポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。
【請求項１５】以下の(a)または(b)の単離されたポリ
ペプチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
または(b) 配列番号２のアミノ酸配列において、少なく
とも１個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたア
ミノ酸配列からなり、かつＡＳＰ５活性を有するポリペ
プチド。
【請求項１６】請求項１５に記載のポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド。
【請求項１７】以下の(a)または(b)の単離されたポリ
ヌクレオチド： (a) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド、または(b)(a)のポリヌクレオチドとストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズしかつＡＳＰ５活性を
有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。