JPH11155567A - 核酸精製用酸化ジルコニウム及び類縁化合物 - Google Patents

核酸精製用酸化ジルコニウム及び類縁化合物

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JPH11155567A
JPH11155567A JP10235176A JP23517698A JPH11155567A JP H11155567 A JPH11155567 A JP H11155567A JP 10235176 A JP10235176 A JP 10235176A JP 23517698 A JP23517698 A JP 23517698A JP H11155567 A JPH11155567 A JP H11155567A
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Daniel L Woodard
ダニエル・エル・ウッダード
Wayne F Beyer Jr
ウェイン・エフ・バイヤー，ジュニア
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Becton Dickinson and Co
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 より効果的で効率的な核酸精製の技術を提供
することを目的とする。 【解決手段】 本発明は核酸を結合する特定の組成物に
関する。前記組成物は試料から核酸を精製する方法にお
いて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】関連出願及び特許 本出願は１９９６年９月２５日出願の米国特許出願番号
第０８／７１９，６０３の一部継続出願である。本発明
は概して固相抽出法による核酸の精製に関し、更に詳し
くは、適当な条件下で核酸を結合及び溶出可能な酸化ジ
ルコニウム及び関連表面材に関する。
【０００２】
【従来の技術】分子生物学においては、高純度二本鎖
（ｄｓ）プラスミドＤＮＡ，一本鎖（ｓｓ）ファージＤ
ＮＡ，染色体ＤＮＡ，アガロースゲル精製ＤＮＡフラグ
メント及びＲＮＡの生成及び精製は非常に重要である。
理想的には、核酸の精製方法は簡潔で、迅速でかつ、追
加される試料操作がたとえあったとしても少ないのが望
ましい。このような方法で得られた核酸はすぐにも転
換、制限分析、ライゲーション（ligation）、塩基配列
の決定に付すことが可能である。核酸試料の生成を自動
化において、このような特徴を備えた方法があれば非常
に魅力的だし、研究診断施設の一つの目標でもある。
【０００３】通常、プラスミドＤＮＡを粗アルコール析
出物から生成するには手間がかかり、ＣｓＣｌ勾配、ゲ
ル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、又はリボヌク
レアーゼ、プロテイナーゼＫ及びアルコール析出工程の
繰り返しを利用することが多い。これらの方法はＣｓＣ
ｌ及び他の塩、臭化エチジウム及びアルコールを除去す
るためにかなり下流での試料操作を必要とする。ＤＮＡ
フラグメントの精製にこれらの内のいずれかを用いた場
合も、同様のことがいえる。これらの方法はさらに、微
少な陰電荷細胞成分がＤＮＡと同時に精製されるという
問題を有する。その結果ＤＮＡは望ましくない量の汚染
を含んでしまう。
【０００４】核酸はまた、固相を用いても精製可能であ
る。従来の固相抽出技術に用いられていた表面材は、
（１）表面材が、核酸分子を溶出中に容易に回収できる
ように設計されているために、十分な量の核酸分子を吸
着保持することができない、或いは（２）表面材に核酸
分子が過剰に接着するので、溶出中の核酸分子の回収に
手間取るという欠点を有していた。固相抽出に用いられ
てこのような問題を起こす従来の金属表面材としては、
例えばガラス、セライト等のシリカ表面材が挙げられ
る。核酸とこのような表面材を十分に結合させるには、
通常、毒性を有し、腐食性で、及び／又は高価であるカ
オトロープやアルコールを高濃度で用いるしかなかっ
た。例えば、ＤＮＡはカオトロープの存在下で破砕粉末
ガラスやガラス繊維フィルターと結合することが知られ
ている。通常カオトロピックイオンはアルコールで洗い
落とされ、ＤＮＡは低塩溶液又は水で溶出する。重要な
ことは、ＲＮＡと蛋白質は結合しないことである。しか
し、破砕粉末ガラスを用いる難点は、その結合能力が低
いことにある。更に、粉末ガラスは回収率が一定せず、
ほう酸塩緩衝液と相溶性がなく、大きいＤＮＡに傷をつ
けやすいという欠点を有することが多い。同様にガラス
繊維フィルターは、非多孔質表面材であり、ＤＮＡとの
結合能力が低い。シリカゲル、ガラスビーズ等の他のシ
リカはＤＮＡ結合及び回収に適していない。現在ＤＮＡ
の固相抽出に選択使用される固相としては、Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ研究所の“Prep-A-Gene"（商標）のようなセライト
である。破砕粉末ガラスに関して言えば、ＤＮＡをセラ
イトに十分に結合させるためには、高濃度のカオトロー
プが必要である。
【０００５】ＤＮＡの精製法にはいろいろなプロトコル
があるが、例えば、米国特許第４，９２３，９７８号に
は、蛋白質とＤＮＡの溶液をヒドロキシル化した支持体
上を通過させて、この蛋白質を結合させ、ＤＮＡを溶出
させるＤＮＡの精製方法が開示されている。米国特許第
４，９３５，３４２号には、ＤＮＡを陰イオン交換体に
選択的に結合させ、次に溶出させてＤＮＡを精製する方
法が開示されている。米国特許第４，９４６，９５２号
には、水溶性ケトンと析出させてＤＮＡを単離する方法
が開示されている。更に、カオトロープ及び透析ＤＮＡ
を用いたＤＮＡの精製方法が米国特許第４，９００，６
７７号に開示されている。
【０００６】Ｂｏｏｍ他による米国特許第５，２３４，
８０９号及びＬｉｔｔｌｅ他による米国特許第５，０７
５，４３０号に示されたように、核酸の精製に珪藻も用
いられている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、より効果的
で効率的な核酸精製の技術を提供することを目的とす
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】より効果的で効率的な核
酸精製の技術を提供するために、本発明は酸化ジルコニ
ウム組成物に関する。この組成物は酸化ジルコニウムを
水酸化ナトリウムで還流することにより変性しても良
い。この酸化ジルコニウム組成物は他の細胞成分から核
酸を精製するのに非常に有用である。このような核酸精
製方法における有用性が判明した他の類縁組成物として
は、酸化ハフニウム及び酸化アルミニウムがある。これ
らすべての金属酸化物組成物は水和物、非水和物にかか
わらず核酸精製に有用である。このような核酸精製方法
は、酸化ジルコニウム又は他の類縁組成物を細胞成分を
含む試料に暴露し、次にこの試料から前記組成物を分離
することからなる。試料中の核酸は酸化ジルコニウム又
は類縁組成物に結合しており、適当な溶出緩衝液で溶出
することにより回収可能である。本発明の酸化ジルコニ
ウム又は類縁組成物を核酸の精製方法に用いる場合、キ
ット状に梱包しやすいように、粒状またはビーズ状であ
る。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明は新規組成物に関する。こ
の組成物としては、核酸と結合する、酸化ジルコニウム
組成物、酸化ハフニウム組成物及び酸化アルミニウム組
成物が挙げられる。これらの組成物に結合した核酸は組
成物から溶出する。本発明の組成物は例えば酸化ジルコ
ニウム、酸化ハフニウム又は酸化アルミニウムのような
出発物質を適当なアルカリ物質例えば水酸化ナトリウム
で還流することにより変性したものでもよい。還流反応
への使用に適した出発物質は、粒状又はペレット状で色
々な所から市販されているが、いずれの形状の出発物質
も本発明の組成物の水和物を生成する還流反応に適して
いる。
【００１０】出発物質の還流は適当なアルカリ物質を用
いて行われる。この物質は、得られる本発明の水和組成
物が十分に電気的に陽性となることに貢献する組成物で
ある。つまり、得られた組成物が十分に電気的に陽性で
あれば、相対的に電気的に陰性である核酸と結合するか
らである。大部分の強塩基の水溶液が出発物質を還流さ
せて、本発明の水和組成物を生成するのに適したアルカ
リ物質であろう。このようなアルカリ物質としては、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化物イオンを生
じる他の塩基等が挙げられる。
【００１１】結合した核酸は後続する反応に付される
が、その反応により、どのアルカリ物質が好ましいか決
まる。例えば、ナトリウムイオンは鎖置換増幅（“ＳＤ
Ａ”）反応を阻止すると考えられているので、水和珪酸
ジルコニウム組成物に結合した核酸がＳＤＡにより増幅
される場合は水酸化ナトリウム以外の水酸化物イオン供
与体例えば水酸化カリウムが好ましい。還流反応で用い
られるアルカリ物質の量は、反応に用いられる出発材料
の量に対して、通常約０．１Ｍ当量から約５Ｍ当量であ
る。本発明の水和組成物を生成するための還流反応は、
通常約１００℃（還流温度）で約１８から９６時間行わ
れる。得られた水和組成物は、還流後、任意に濾過さ
れ、硫酸又は塩酸等の水性の酸で洗浄される。還流後
に、前記の水性の酸で水和組成物の還流懸濁液を酸化し
てｐＨを６．０以下にし、濾過し、適当な洗浄緩衝液例
えば水及び／又はアセトンで洗浄してもよい。
【００１２】上述の還流反応で生成された水和組成物は
核酸と結合する。核酸の結合が起きる少なくとも一つの
理由としてあげられるのは電気的に陽性の水和組成物が
電気的に陰性の核酸に引き付けられるためである。即
ち、陽電荷原子、例えばＨｆＯ 2 のＨｆ4+、ＺｒＯ2 の
Ｚｒ4+、Ａｌ2 Ｏ3 のＡｌ3+が水和組成物に十分な電気
的陽性を供給しそれにより、核酸の陰電荷リン酸塩と相
互作用がおこり結合するのである。
【００１３】下記の実施例で詳細に述べるように、本発
明の未水和組成物と同様に水和組成物の核酸結合能力
は、純粋な（即ち非標的核酸を含まない）試料からある
特定の条件下で表面材に結合する核酸の比率により求め
られる。通常核酸を精製するための試料は少量であるの
で、結合した核酸の比率は少量の（即ち２．５ｍｇ）水
和又は非水和組成物、及び核酸が精製される典型的試料
の通常の核酸総量（即ち約１０4 標的核酸分子）に基づ
いたものである。試料から核酸を精製する方法において
有用であるためには、約１０4 標的核酸コピーを含む試
料中に約２．５ｍｇ存在する核酸結合用組成物は、少な
くともこの標的核酸コピーの約８５％と結合しなくては
ならない。下記の実施例に示した様に、本発明の水和及
び非水和組成物はこの要件にかなっている。
【００１４】本発明の組成物に結合する核酸としては、
ＤＮＡ、ＲＮＡが挙げられ、例えば粗細胞抽出物、生体
液、ファージ上澄み液、アガロースゲル、放射性同位元
素標識反応から得られたものなどが挙げられるがそれら
に限定されずいずれから得られたものでもよい。核酸特
にＤＮＡは、二本鎖、一本鎖、環状、直線状いずれでも
よく、大きさも可変である。核酸を得るための従来の方
法は、公知のものだが、核酸を生成するために用いられ
るもので、この方法で生成したあと精製される。つま
り、核酸を得るための代表的な工程は、溶液に核酸を懸
濁して終わる。生体試料から核酸を分離する方法は、Ha
rding, J.D. 他、"Nucleic Acids Research （核酸研
究）", 17:6947 (1989) 及び、Marko, M.A. 他, "Analy
tical Biochemistry（分析生化学）", 121:382 (1982)
が参照される。プラスミドＤＮＡの分離方法について
は、Lutze, L.H. 他、"Nucleic Acids Research （核酸
研究）",20:6150 (1990) に記載されている。生体試料
から二本鎖ＤＮＡを抽出する方法は Yamada, O. 他、"J
ournal of Virological Methods （ウィルス学的方法
誌）", 27:203(1990) に記載されている。ＤＮＡ溶液は
大体、適当な緩衝液例えばＴＥ（トリスＥＤＴＡ）又は
ＴＥＡ（４０９ｍｍトリス−酢酸塩、１ｍｍＥＤＴＡ）
緩衝液に溶解したＤＮＡ又は溶解産物である。 Sambroo
k, J. 他、"MolecularCloning: A Laboratory Manual
（分子クローニング：研究室の手引き）" 第２版、Cold
Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989)も
参照される。
【００１５】いったん核酸が適当な試料形態、通常懸濁
液又は溶液の形態で得られたら、本発明の組成物を、試
料中の核酸が組成物に結合するまで十分な時間この試料
に暴露する。通常このような暴露は約０℃から約２５℃
の温度で約３０秒から約６０分間行う。例えば水又はｐ
Ｈが約７．０未満の酸性緩衝液等の適当な結合緩衝液を
用いて、核酸とこの組成物の結合を助けてもよい。核酸
が結合した組成物は、次に試料から分離されるが、この
分離は通常遠心分離又は濾過によって行われる。
【００１６】組成物は次に洗浄して、その組成物から核
酸を回収してもよい。洗浄は普通低分子量アルコール又
は他の適当な洗浄液、例えばエタノールと５０ｍＭトリ
スの８０％／２０％混合液（ｐＨ７．０）、水又は他の
低ｐＨ緩衝液を用いて行われる。結合した核酸は、通
常、適当な溶出緩衝液による溶出により組成物から回収
される。適当な溶出緩衝液としては、ｐＨが約７．０以
上の塩基性緩衝液なら殆ど使用可能で、例えば、５０ｍ
Ｍトリス、ＫＰＩ、ＫＰＤＧ等いずれの低塩緩衝液も使
用可能である。溶出緩衝液としては、回収後の核酸に対
する処理をできるだけ妨害せず、環境への悪影響が最小
限であるものが好ましい。通常、約１分から約６０分間
にわたり、約４℃から約９５℃の温度で組成物から溶出
により核酸を回収する。このような溶出は、溶出緩衝液
を核酸の結合した組成物に流し、核酸の溶出を引き起こ
すことによって行う。或は核酸の結合した組成物を溶出
緩衝液に入れて分離することによって溶出緩衝液から核
酸を回収する。
【００１７】本発明の組成物を用いて精製した核酸は、
そのまま制限酵素消化、クローニング、塩基配列決定、
診断等に用いても良い。本発明で得られた核酸の品質の
高さ及び、最低限の下流加工で核酸が精製される速度
は、この組成物が核酸試料生成の自動化に有用である事
を意味している。自動化した核酸試料生成に特に有用な
発明組成物の形は粒状である。組成物を粒状化すること
により、核酸結合のための最大の表面積が得られる。こ
の粒状組成物は種々の形、例えば、球、立方体、卵形、
カプセル、錠剤、形容できないランダムな形等をしてい
てよく、又一定形状でも不定形状でもよい。粒子の形に
かかわらず、その粒子の最大点における直径は通常約
０．１ｍｍから約０．１５ｍｍの範囲である。本発明の
組成物の好ましい粒子形としては、普通の球状のぺレッ
トと又はビーズが好ましい。
【００１８】本発明の組成物の水和物は、密度範囲が約
１．０ｍｇ／ｕＬから約４．０ｍｇ／ｕＬ、好ましくは
約３．３ｍｇ／ｕＬであるので、粒状の場合に特に有用
である。比較すると、水和セライトの密度は約０．４ｍ
ｇ／ｕＬである。このように本発明組成物の水和物の密
度がかなり高いので、結合した核酸を含む組成物の粒子
を試料から容易に遠心分離により分離することができ
る。さらに、粒子の密度が高いので、遠心分離により形
成されたペレットは密度の低い化合物よりも固く、それ
により、ペレット部分を除去せずに上澄み液（試料）を
より多く除去することができるし、又遠心分離と上澄み
液（試料）除去の間に必要ならばより長く時間をおいて
もよい。細胞の上澄み液をより多く除去する能力は特に
重要である、というのは、精製後に行なわれる核酸の処
理を妨害する細胞破壊物や結合緩衝液がより多く除去さ
れるからである。
【００１９】粒状の本発明の組成物はキットとして使用
しやすいという点においても優れている。粒子は、適当
な容器に容易にかつ効率的に入れる事ができ、試料から
核酸を精製するためのキット或はキットの一部として用
いられる。本発明の粒状組成物用の容器としては、ガラ
ス瓶、管、真空管、真空容器、核酸含有試料を装入可能
な他の容器等が適している。キットには、結合緩衝液、
洗浄緩衝液及び／又は溶出緩衝液、及び試料から核酸を
精製するための工程の一部として必要な他の成分を入れ
る容器も含まれる。次の実施例は、本明細書に述べられ
た本発明の特定の態様を示したものである。同業者には
明らかなように、種々の変更及び修正が可能であり、こ
れらも述べられた本発明の範囲であると考えられる。
【００２０】
【実施例】実施例１ 水和酸化ジルコニウム組成物の製造 Ａｌｄｒｉｃｈ社から得られた酸化ジルコニウムビーズ
４ｇを５．２ｇの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の８０
ｍＬ水溶液に添加し、得られた懸濁液を６８時間還流
し、次に室温に冷却して、１８００ｒｐｍで３．５分遠
心分離した。得られた上澄みを除去し、廃棄した。次
に、この懸濁液に１％の硫酸（Ｈ2 ＳＯ4 ）を２０ｍｌ
と１０％のＨ2 ＳＯ4 を５ｍｌ加えて酸性（ｐＨ約２．
０）にした。この場合、溶液から固形分を分離して酸性
溶液に加えてもよい。得られた酸性懸濁液を一時間室温
で揺動し、次に１８００ｒｐｍで３．５分間遠心分離
し、得られた上澄みを除去し、廃棄した。各試験管に２
０ｍｌの水を加えて、得られた懸濁液を渦状に回転さ
せ、ろ過して、１００ｍｌの水と１００ｍｌのアセトン
で洗浄した。最後に、得られた粉末を１時間風乾し、次
に１００℃で１６時間オーブン乾燥した。得られた水和
酸化ジルコニウム粉末は核酸を結合するのに十分なほど
電気的に陽性であり、これら核酸は下記の実施例で示し
たように、容易に組成物から溶出できた。
【００２１】実施例２ 水和酸化ハフニウム組成物の製造 Ａｌｄｒｉｃｈ社から得た酸化ハフニウムビーズ４ｇを
３．０４ｇの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の８０ｍｌ
水溶液に加え、実施例１と同様にして、水和酸化ジルコ
ニウムビーズを得た。ビーズは核酸を結合するのに十分
なほど電気的に陽性であり、これら核酸は下記の実施例
で示したように、容易に組成物から溶出できた。
【００２２】実施例３ 水和酸化アルミニウム組成物の製造 Ａｌｄｒｉｃｈ社から得た酸化アルミニウムビーズ４ｇ
を６．２８ｇの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の８０ｍ
ｌ水溶液に加え、実施例１と同様にして、核酸を結合す
るのに十分なほど電気的に陽性である水和酸化アルミニ
ウムビーズを得た。これら核酸は下記の実施例で示した
ように、容易に組成物から溶出できた。
【００２３】実施例４ 核酸の水和組成物への結合及び水和組成物からの溶出 水和及び未水和の酸化ジルコニウム、酸化ハフニウム及
び酸化アルミニウムの核酸結合及び溶出特性を証明する
ために本実験を行なった。実施例１、２及び３で得られ
た組成物（それぞれ水和酸化ジルコニウム、水和酸化ハ
フニウム及び水和酸化アルミニウム）及びこれら３種類
の組成物の未水和物を２００μｌの水と混合し、次に１
μｌの１０6 Ｐ32標識M.tuberculosisＤＮＡを添加し
た。得られた懸濁液を室温で３０分間回転装置により培
養した。遠心分離した後、上澄み液を除去し、１０ｍｌ
の計数用シンチレーション液に添加した。水２００μｌ
を残ったペレットに加え、得られた混合物を６５℃で３
０分間培養した。遠心分離し、得られた上澄み液を計数
し、溶出工程を繰り返した。結果は下記の通りである。
【００２４】考察 未水和の酸化ジルコニウム、酸化ハフニウム及び酸化ア
ルミニウム組成物も核酸精製に有用であるが、これらの
水和物の方が同様の条件下でより多くの核酸の結合及び
溶出をしたことから、核酸精製という目的のためには、
水和物の方が有用であることがわかる。又、これら水和
物は、水和珪酸ジルコニウム組成物と同等の核酸精製特
性を示した。
【００２５】実施例５ 水和組成物からの核酸の溶出に与えるｐＨ増加の影響 本実験は水和珪酸ジルコニウムビーズ（実施例４の比較
組成物）に結合した核酸がｐＨを変化させても溶出する
かどうかを調べるために行なわれた。最初の遠心分離の
次に、水と共に、異なった濃度のＮａＯＨを溶出緩衝液
として用いた以外は実施例４と同様にして、M.tubercul
osisＤＮＡを１０ｍｇの水和珪酸ジルコニウムビーズに
結合させた。結果は下記の通りである。
【００２６】
【表１】 考察 他の要因もあるかもしれないが、溶出緩衝液のｐＨと溶
出ＤＮＡ率に実質的な相関関係は見られない。実施例４
に示したような他の水和組成物も同様の核酸精製特性を
有するので、このような水和組成物は溶出緩衝液と溶出
ＤＮＡ率の間に同様の相関関係を示すと考えられる。
【００２７】実施例６ 水和組成物に結合した核酸に与える溶出緩衝液の影響 本実験は水和珪酸ジルコニウムビーズに結合した核酸が
緩衝液を変えても溶出するかどうかを調べるために行な
われた。１０ｍｇの水和珪酸ジルコニウムビーズを含有
する遠心分離管に２００μＬの水を加え、次に１μＬの
ＤＮＡ（１０4 コピーのM.tuberculosisゲノムＤＮＡ）
加えた。得られた懸濁液を室温で３０分間回転装置上で
インキュベートした。遠心分離後、上澄み液を除去し、
１０ｍＬのシンチレーション液に加えて計数した。得ら
れたペレットに２００μＬの緩衝液を加えて、得られた
懸濁液を６５℃で３０分間インキュベートした。次に遠
心分離し、上澄み液を除去し、上述のように計数して溶
出工程を繰り返した。結果は下記の通りである。
【００２８】
【表２】 考察 水と比べて、用いた溶出緩衝液は多量のＤＮＡを溶出し
た。実施例５と同様に、実施例４で示したような他の水
和組成物も同様の核酸精製特性を有するので、このよう
な水和組成物は水和珪酸ジルコニウムと同様の溶出特性
を示すと考えられる。
【００２９】実施例７ 水和組成物の核酸結合条件 本実験は５ｍｇの水和珪酸ジルコニウム組成物に核酸を
結合させる好ましい条件を調べるために行なわれた。結
合緩衝液及び培養時間を下記の表に従い、溶出のための
遠心分離を行なわなかった以外は実施例４と同じような
プロトコルで実験を行なった。結果は下記の通りであ
る。
【００３０】
【表３】 考察 本実験で用いた水及びＨＣｌは両方とも酸性であり、他
の二つの結合緩衝液（どちらも塩基性であるが）と比較
して、水和珪酸ジルコニウム組成物に対する核酸の結合
に優れていた。実施例４で示したように他の水和組成物
も同様の核酸精製特性を示しているので、酸性条件がこ
のような他の水和組成物に対する核酸の結合に好ましい
影響を与えるものと考えられる。少なくとも本発明の条
件下では温度は結合に影響を与えなかったようである。
【００３１】実施例８ 水和組成物からの核酸の溶出に与えるｐＨ減少の影響 本実験は、水和珪酸ジルコニウム組成物のＤＮＡ溶出効
率に溶出緩衝液のｐＨの減少が影響を与えるかどうかを
調べるために行なわれた。ｐＨの増加がこれらの表面材
からのＤＮＡの溶出に明確な影響を与えた事は既に示し
た（実施例５）。２種類の酸を異なったｐＨ値でそれぞ
れテストした。具体的には、各表面材５ｍｇを２００μ
Ｌの水に加え、１μＬの32Ｐ標識ＤＮＡ（１０4 ゲノム
コピーのM.tuberculosisＤＮＡ）を加えた。得られた懸
濁液を回転装置上で３０分間培養して、遠心分離し、上
澄み液を除去して、１０ｍＬの計数用シンチレーション
液に加えた。残ったペレットに２００μＬの溶出緩衝液
を加えて得られた懸濁液を６５℃で３０分間培養した。
遠心分離し、得られた上澄み液を除去し前記と同様に計
数した。結果は下記の通りである。
【００３２】
【表４】 考察 水と比較してｐＨの低下がM.tuberculosisの溶出量に影
響を与えているようには見えないが、ＤＮＡを組成物に
結合させるのには有用かもしれない。又、組成物へのＤ
ＮＡの結合は再現性が高い。実施例４に示した同様の核
酸精製特性に基づいて、他の水和組成物でも同様の結果
が考えられる。いくつか特定して本発明を述べたが、同
業者に明らかな変更は本発明の範囲を逸脱しない限り可
能である。本発明の種々の特徴は次の請求項に述べる。
フロントページの続き (71)出願人 595117091 １ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡ ＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥ ＲＳＥＹ 07417−1880， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ (72)発明者 ウェイン・エフ・バイヤー，ジュニア アメリカ合衆国ノースカロライナ州27503, バハマ，ベッキー・ドライヴ 2012

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 水和酸化ジルコニウム、水和酸化ハフニ
    ウム、水和酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム、酸化
    ハフニウム及び酸化アルミニウムからなる群から選択さ
    れる核酸を結合する組成物。
  2. 【請求項２】 水中で核酸を結合する請求項１記載の組
    成物。
  3. 【請求項３】 少なくとも１．０ｍｇ／ｕＬの密度を有
    する請求項１記載の組成物。
  4. 【請求項４】 請求項１記載の組成物であって、前記組
    成物２．５ｍｇが、他の核酸を含有しない試料中の標的
    核酸１０4 コピーの少なくとも約８５％を結合する組成
    物。
  5. 【請求項５】 （ａ）前記試料を、前記試料中の核酸が
    前記組成物に結合するのに十分な時間請求項１の組成物
    に暴露する工程、及び（ｂ）前記組成物を前記試料から
    分離する工程を含む試料から核酸を精製する方法。
  6. 【請求項６】 試料からの組成物の分離を遠心分離又は
    ろ過により行なう請求項６記載の方法。
  7. 【請求項７】 （ｃ）前記組成物から核酸を回収する工
    程をさらに含む請求項６記載の方法。
  8. 【請求項８】 請求項１の組成物からなる、試料から核
    酸を精製するためのキット。
  9. 【請求項９】 前記組成物が粒状である、請求項８記載
    のキット。
  10. 【請求項１０】 （ａ）ｐＨが約７．０以下である緩衝
    溶液の存在下核酸を表面材に接触させる工程；及び
    （ｂ）ｐＨが約７．０以下である緩衝溶液の存在下、前
    記表面材から前記核酸を溶出させる工程を含む核酸を結
    合可能な表面材から、核酸を結合し次に表面材から溶出
    する方法。
JP10235176A 1997-08-22 1998-08-21 核酸精製用酸化ジルコニウム及び類縁化合物 Pending JPH11155567A (ja)

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