JPH1077296A

JPH1077296A - 組換えマラセチア抗原性蛋白質並びにその遺伝子

Info

Publication number: JPH1077296A
Application number: JP8257613A
Authority: JP
Inventors: Kazutada Takesako; 一任竹迫; Hisashi Daimon; 尚志大門; Masanobu Kuroda; 正伸黒田; Ikunoshin Katou; 郁之進加藤; Hiroshi Yasueda; 浩安枝; Kazuo Akiyama; 一男秋山; Hideyo Yamaguchi; 英世山口
Original assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Current assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Priority date: 1996-09-05
Filing date: 1996-09-05
Publication date: 1998-03-24

Abstract

(57)【要約】【解決手段】（１）新規な組換えマラセチア抗原性蛋白
質、（２）それをコードするポリヌクレオチド、（３）
少なくとも１つのＢ細胞エピトープを含む抗原性断片、
（４）前記組換えマラセチア抗原性蛋白質又は抗原性断
片に特異的に結合する抗体又は抗体断片、（５）前記ポ
リヌクレオチドとハイブリダイズする合成オリゴヌクレ
オチドプローブ、合成オリゴヌクレオチドプライマー、
（６）前記組換えマラセチア抗原性蛋白質又は抗原性断
片を有効成分とするマラセチアアレルギー疾患又はマラ
セチア感染症の診断薬、（７）前記組換えマラセチア抗
原性蛋白質又は抗原性断片を有効成分とするマラセチア
アレルギー疾患又はマラセチア感染症の治療薬。【効果】本発明により、新規な組換えマラセチア抗原性
蛋白質及びそれをコードする遺伝子、並びに該蛋白質の
エピトープなどが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、マラセチアを原因
菌とするアレルギー疾患及び感染症の診断、治療、予防
に利用可能な、マラセチア菌より単離精製された新規な
抗原性蛋白質、及びその蛋白質をコードする遺伝子、さ
らにその蛋白質のエピトープに関する。

【０００２】

【従来の技術】アレルギー疾患の多くは、その疾患の原
因抗原に感作されることにより、血清および組織で抗原
（アレルゲン）に特異的なＩｇＥ抗体（レアギン抗体）
が産生され、再びその抗原に暴露されることにより、肥
満細胞又は好塩基球と結合したＩｇＥと特異的なアレル
ゲンが組み合わさると、ＩｇＥが細胞表面上で架橋し、
ＩｇＥ−抗原相互作用の生理学的効果を生ずる。これら
の生理学的効果としては、ヒスタミン、セロトニン、ヘ
パリン、好酸球遊走因子又は各種ロイコトリエン等の放
出が挙げられる。そして、それにより長期間の気管支平
滑筋の収縮を起こす。放出されたこれらの物質は、ケミ
カルメディエーターであり、ＩｇＥと特定のアレルゲン
の組み合わせにより起こるアレルギー症状を惹起する。
アレルゲンの効果はそれらを通じて現れる。これらの効
果は抗原が体内に入る経路及び肥満細胞又は好塩基球上
にＩｇＥが沈着するパターンに依存して全身的又は局所
的に起こり得る。局所的症状は一般にアレルゲンが体内
に入った位置の上皮表面に起こる。全身的効果は、血管
内の抗原へのＩｇＥ−好塩基球応答の結果であり、アナ
フィラキシーショックがその典型である。これらの一連
の反応において重要な働きをしているのが、ヘルパーＴ
（Ｔｈ）細胞である。抗原刺激により活性化されたＴｈ
細胞の産生する種々のサイトカインのうち、ＩＬ４はＩ
ｇＥ産生を促進する。

【０００３】ヒトにアレルギー症状を惹起させる物質は
多岐にわたっており、これまでアレルゲンは、花粉ある
いは室内塵に代表される、多くの物質の集合体として扱
われていた。近年になって、分離精製技術及びアレルゲ
ン活性評価法が進展した結果、アレルゲンは単独あるい
は数種の主要な物質がその本体であることが明らかとな
った。特に、スギ花粉、ダニ、ネコアレルゲン等におい
て急速な進歩を遂げ、スギ花粉よりCry j １、Cry j
２、ダニよりDer f １, Der f ２, Der f ３、ネコより
Fel d １といった主要アレルゲンが単離されている。更
に、それらのアレルゲン蛋白質をコードする遺伝子も単
離され、遺伝子工学的手法により純粋なアレルゲン蛋白
質を大量に調製することが可能になっている。

【０００４】アレルギー疾患の診断においては、まず原
因となっている抗原を同定する必要があり、そのために
まず100 種を超える市販の抗原エキス、時には自製のも
のについて、疑わしい抗原エキスを用いて皮内テストに
より試験を行っている。原因抗原としての可能性の高い
抗原が見つかると、ＲＡＳＴ法等による血清中のＩｇＥ
抗体価の測定、誘発テスト、又は全血やリンパ球を用い
たヒスタミン遊離試験により抗原を特定することができ
る。しかし、これらの抗原エキスには明確な力価が規定
されていないため、使用の際にはアナフィラキシー誘発
の危険性を伴うため注意が必要である。アレルギー疾患
の治療法としては、抗ヒスタミン薬、ステロイド性抗炎
症薬、メディエーター遊離抑制薬などが使用されている
が、診断により特定された抗原を用いた減感作療法が優
れた治療法である。しかし、現在の減感作療法は抗原液
を週１〜２回、小量ずつ皮内に投与し３〜４ケ月かけて
増量し、維持量に上げ、更に１〜３年投与し続ける必要
がある。増量が容易であれば、優れた治療効果をより容
易に得られることが期待できる。しかし、前記のように
使用する抗原の力価がはっきりしないため、更にその抗
原が多くの不純物を伴っているため、重篤な副作用が起
こることがあり、使用に大きな制限がある。

【０００５】マラセチア（Malassezia、以下、M.と略
す）属に属する菌としては、M. furfur （Pityrosporum
ovaleやPityrosporum orbiculare とも呼ばれている、
以下、M.ファーファと記す ), M. pachydermatis, M. s
ympodialis等が知られている。マラセチアは各種動物や
ヒトの体表に常在しているといわれており、その病原性
及びアレルギー疾患における役割については、古くから
研究されてきた。病原性については、皮膚炎、癜風、毛
包炎、フケなどの原因菌として疑われている。また、ア
トピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患との関連も疑わ
れており、原因菌として関わっている可能性が高い。現
在、マラセチア由来の抗原エキスが市販されているが、
これらはM.ファーファの培養物より得られた未精製また
は部分精製物であり、当然、蛋白質、糖、脂質を始めと
する複雑な混合物であると考えられる。

【０００６】従来、このようにして得られた抗原エキス
中に含有されるマラセチア由来のアレルゲン性蛋白質と
しては、マラセチア菌由来の粗抽出物をSDS-ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（PAGE）により分離後、アレルギ
ー患者の血清中ＩｇＥ抗体を用いたイムノブロッティン
グにより検出される、87, 76, 67, 45, 37, 28, 25,14,
13 kDa等の多くのＩｇＥ結合性蛋白質がアレルゲン性
蛋白質として報告されている（Siv Johansson ら, Acta
Derm Venereol, 71巻, 11-16 頁, 1991年; E.Jensen-J
arolim ら, J. Allergy Clin Immunol, 89 巻, 44-51
頁, 1992年; Zargari ら, Allergy, 49 巻, 50-56 頁,
1994年）。マラセチアは、アトピー性皮膚炎を始めとす
るアレルギー性疾患の原因真菌として注目されているに
も関わらず、それらのＩｇＥ結合性蛋白質の単離精製に
は誰も成功していない。従って、単離された蛋白質とし
てアレルギー患者血清を用いた抗原性の確認は行われて
いない。さらに、その蛋白化学的性質、アミノ酸配列に
関しては全く報告されていない。また、その蛋白質をコ
ードする遺伝子の単離の報告例もない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】原因菌の可能性を診断
するためには、微生物学的培養試験の他、上記のような
マラセチア菌体抽出物である粗抗原を用いた皮膚試験、
誘発試験、RAST法やヒスタミン遊離測定などによる各種
ＩｇＥ抗体の定量試験、等により診断が行われている。
しかし、この粗抗原は多種類の不純物を含んでいるた
め、正確な診断ができない。また、皮膚試験、誘発試験
に用いる際、副作用等が生ずる危険性がある。さらに、
アレルギー疾患の有用な治療法である減感作療法に使用
するためには、アナフィラキシー誘発の危険性を伴うた
め、この粗抗原の投与量が極度に制限され、治療効果を
期待できず、また、感染防御のためにワクチンとして利
用することも難しい。現在までのところ、このマラセチ
ア由来の精製された、純粋な抗原の単離に成功した例は
なく、マラセチアによる感染やアレルギー疾患の診断、
治療に非常に大きな困難が生じている。

【０００８】従って、本発明の目的は、（１）新規な組
換えマラセチア抗原性蛋白質、（２）それをコードする
ポリヌクレオチド、（３）少なくとも１つのＢ細胞エピ
トープを含む抗原性断片、（４）前記組換えマラセチア
抗原性蛋白質又は抗原性断片に特異的に結合する抗体又
は抗体断片、（５）前記ポリヌクレオチドとハイブリダ
イズする合成オリゴヌクレオチドプローブ、合成オリゴ
ヌクレオチドプライマー、（６）前記組換えマラセチア
抗原性蛋白質又は抗原性断片を有効成分とするマラセチ
アアレルギー疾患又はマラセチア感染症の診断薬、
（７）前記組換えマラセチア抗原性蛋白質又は抗原性断
片を有効成分とするマラセチアアレルギー疾患又はマラ
セチア感染症の治療薬を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、マラセチ
アアレルゲンの単離を目的として、マラセチア属に属す
る一菌株であるＭ．ファーファＴＩＭＭ２７８２の細胞
よりＭＦ−１〜６と命名した６種の抗原性蛋白質の単離
に成功すると共に、これらの蛋白質の部分アミノ酸配列
の決定にも成功した。そして、単離されたマラセチア抗
原性蛋白質の部分アミノ酸配列の情報をもとに合成した
プライマーとなるポリヌクレオチドを用いて、Ｍ．ファ
ーファ細胞のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡを材料としてポリ
メラーゼ・チェイン・リアクション（ＰＣＲ）を行い、
目的とするマラセチア抗原性蛋白質をコードする遺伝子
の一部を得た。次に、このＰＣＲ断片の全部または一部
をプローブとして用い、Ｍ．ファーファ細胞のｃＤＮＡ
ライブラリーより目的とする遺伝子を単離した。また、
ＭＦ−１のアミノ酸配列を基にオーバーラッピングペプ
チドを合成し、これを用いて患者血清のＩｇＥ抗体に対
するエピトープの検索、ＭＦ−１モノクローナル抗体に
対するエピトープの検索を行い、Ｂ細胞エピトープを見
出すことができることを明らかにし、本発明を完成し
た。

【００１０】即ち、本発明の要旨は、（１）配列表の
配列番号：７に記載のアミノ酸配列の全部又は一部から
なるペプチド、又は該ペプチドを含むペプチドであっ
て、マラセチアアレルゲン活性を有する組換えマラセチ
ア抗原性蛋白質、（２）配列表の配列番号：７に記載
のアミノ酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列に
おいて、１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿
入又は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセ
チアアレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋
白質、（３）配列表の配列番号：８に記載のアミノ酸
配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチド
を含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性を
有する組換えマラセチア抗原性蛋白質、（４）配列表
の配列番号：８に記載のアミノ酸配列、又はその一部か
らなるアミノ酸配列において、１又は２以上のアミノ酸
残基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１つを生
じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有する組換
えマラセチア抗原性蛋白質、（５）配列表の配列番
号：９に記載のアミノ酸配列の全部又は一部からなるペ
プチド、又は該ペプチドを含むペプチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性
蛋白質、（６）配列表の配列番号：９に記載のアミノ
酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列において、
１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置
換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレ
ルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質、
（７）配列表の配列番号：１０に記載のアミノ酸配列
の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチドを含
むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性を有す
る組換えマラセチア抗原性蛋白質、（８）配列表の配
列番号：１０に記載のアミノ酸配列、又はその一部から
なるアミノ酸配列において、１又は２以上のアミノ酸残
基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１つを生じ
させ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有する組換え
マラセチア抗原性蛋白質、（９）配列表の配列番号：
１１に記載のアミノ酸配列の全部又は一部からなるペプ
チド、又は該ペプチドを含むペプチドであって、マラセ
チアアレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋
白質、（１０）配列表の配列番号：１１に記載のアミ
ノ酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列におい
て、１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又
は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチア
アレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白
質、（１１）配列表の配列番号：１２に記載のアミノ
酸配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチ
ドを含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性
を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質、（１２）配
列表の配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、又はその
一部からなるアミノ酸配列において、１又は２以上のア
ミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
る組換えマラセチア抗原性蛋白質、（１３）配列表の
配列番号：１に記載の塩基配列の全部又は一部からなる
ポリヌクレオチド、又は該ポリヌクレオチドを含むポリ
ヌクレオチドであって、マラセチアアレルゲン活性を有
するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオ
チド、（１４）配列表の配列番号：１に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド、（１５）前記（１３）又は（１４）に記載のポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレ
ルゲン活性を有する抗原性蛋白質をコードするポリヌク
レオチド、（１６）配列表の配列番号：２に記載の塩
基配列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は
該ポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、
マラセチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋
白質をコードするポリヌクレオチド、（１７）配列表
の配列番号：２に記載の塩基配列、又はその一部からな
る塩基配列において、１又は２以上の塩基の欠失、付
加、挿入又は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、
マラセチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋
白質をコードするポリヌクレオチド、（１８）前記
（１６）又は（１７）に記載のポリヌクレオチドにハイ
ブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲン活性を有する
マラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド、（１９）配列表の配列番号：３に記載の塩基配列
の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポリ
ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラセ
チアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質を
コードするポリヌクレオチド。（２０）配列表の配列
番号：３に記載の塩基配列、又はその一部からなる塩基
配列において、１又は２以上の塩基の欠失、付加、挿入
又は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチ
アアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチド、（２１）前記（１９）又
は（２０）に記載のポリヌクレオチドにハイブリダイズ
可能な、マラセチアアレルゲン活性を有するマラセチア
抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチド、（２２）
配列表の配列番号：４に記載の塩基配列の全部又は一
部からなるポリヌクレオチド、又は該ポリヌクレオチド
を含むポリヌクレオチドであって、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド、（２３）配列表の配列番号：４に記
載の塩基配列、又はその一部からなる塩基配列におい
て、１又は２以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の
少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド、（２４）前記（２２）又は（２３）
に記載のポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能な、マ
ラセチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白
質をコードするポリヌクレオチド、（２５）配列表の
配列番号：５に記載の塩基配列の全部又は一部からなる
ポリヌクレオチド、又は該ポリヌクレオチドを含むポリ
ヌクレオチドであって、マラセチアアレルゲン活性を有
するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオ
チド、（２６）配列表の配列番号：５に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド、（２７）前記（２５）又は（２６）に記載のポリ
ヌクレオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレ
ルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードす
るポリヌクレオチド、（２８）配列表の配列番号：６
に記載の塩基配列の全部又は一部からなるポリヌクレオ
チド、又は該ポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド
であって、マラセチアアレルゲン活性を有するマラセチ
ア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチド、（２
９）配列表の配列番号：６に記載の塩基配列、又はそ
の一部からなる塩基配列において、１又は２以上の塩基
の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１つを生じさ
せ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有するマラセチ
ア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチド、（３
０）前記（２８）又は（２９）に記載のポリヌクレオ
チドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲン活
性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌ
クレオチド、（３１）配列表の配列番号：７〜１２の
いずれかに記載のアミノ酸配列に含まれる、少なくとも
１つのＢ細胞エピトープを含む抗原性断片、（３２）
該エピトープが配列表の配列番号：３７〜３９のいずれ
かに記載のアミノ酸配列から選ばれるものである前記
（３１）記載の抗原性断片、（３３）前記（１）〜
（１２）いずれか記載の組換えマラセチア抗原性蛋白
質、又は請求項３１、３２のいずれかに記載の抗原性断
片に特異的に結合する抗体又は抗体断片、（３４）前
記（１３）〜（３０）いずれか記載のポリヌクレオチド
とハイブリダイズする合成オリゴヌクレオチドプローブ
又は合成オリゴヌクレオチドプライマー、（３５）前
記（１）〜（１２）いずれか記載の組換えマラセチア抗
原性蛋白質、又は前記（３１）、（３２）のいずれかに
記載の抗原性断片を有効成分とすることを特徴とするマ
ラセチアアレルギー疾患又はマラセチア感染症の診断
薬、（３６）前記（１）〜（１２）いずれか記載の組
換えマラセチア抗原性蛋白質、又は前記（３１）、（３
２）のいずれかに記載の抗原性断片を有効成分とするこ
とを特徴とするマラセチアアレルギー疾患又はマラセチ
ア感染症の治療薬、に関する。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下に、本発明を詳細に説明す
る。本発明の第１の発明は、組換えマラセチア抗原性蛋
白質（以下、単に抗原性蛋白質と略す場合がある）であ
り、配列番号：７〜１２のアミノ酸配列を有するＭＦ−
１〜６からなるペプチド群であり、該ペプチドの機能的
同等物も含まれる。即ち、配列番号：７〜１２のいずれ
かに記載のアミノ酸配列の全部又は一部からなるペプチ
ド、又は該ペプチドを含むペプチドであって、マラセチ
アアレルゲン活性を有するもの、さらに配列番号：７〜
１２のいずれかに記載のアミノ酸配列、又はその一部か
らなるアミノ酸配列において、１又は２以上のアミノ酸
残基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１つを生
じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有するもの
も本発明に含まれる。ここで、マラセチアアレルゲン活
性とは、アレルギー疾患患者由来のＩｇＥ抗体、特にマ
ラセチアアレルギー疾患患者由来のＩｇＥ抗体との結合
活性をいう。

【００１２】本発明の組換えマラセチア抗原性蛋白質
は、後述の本発明の遺伝子を利用して遺伝子工学的手法
により大腸菌などの細菌、出芽酵母などの酵母、麹菌な
どのカビ、昆虫細胞又は哺乳類細胞等で発現されるよう
に適宜ベクターを選択し、発現ベクターを作製して該細
胞に導入し、組換え蛋白質として得られる。従って、本
質的にマラセチア由来の他の蛋白質を含まないものであ
る。

【００１３】本発明の抗原性蛋白質の機能的同等物は、
本発明の抗原性蛋白質をコードするＤＮＡの特定部位の
突然変異誘発を用い、既知の方法により抗原性蛋白質の
構造を改変することができる。例えば、後述のポリヌク
レオチド上の１又は２以上の塩基の置換、挿入、欠失又
は付加によってアミノ酸残基の置換、挿入、欠失又は付
加を起こすことができる。さらに、生物活性を保持した
ままの変異体を選択することも可能である。

【００１４】該変異体の作製方法としては、ギャップド
・デュプレックス法（Nucleic Acids Research 12, 24,
9441 〜9456, 1984) 、デレーション法（Gene 33, 103
〜119, 1985)、ＰＣＲ法(Gene 102, 67-70, 1991）、ウ
ラシルＤＮＡ法(Methods inEnzymology, 154, 367〜38
2, 1987, Pro.N.A.S., 79, 7258 〜7262, 1982) やカセ
ット変異法(Gene, 34, 315〜323, 1985)等が知られてい
る。

【００１５】本発明の抗原性蛋白質の精製を容易にした
り、溶解度を向上させるために、ペプチド鎖にタグ基を
付加することができる。タグ基の例としてはポリヒスチ
ジン等が挙げられ、金属アフィニティクロマトグラフィ
ーで精製することができる。さらに必要ならタグ基と目
的のペプチドの間にエンドプロテアーゼ特異的な認識部
位を導入して該プロテアーゼで処理することにより、無
関係な配列を含まないペプチドの単離を容易にすること
ができる。

【００１６】ペプチド抗原に対する患者の脱感作に成功
するためには、ペプチドへの官能基の付加又はペプチド
中に疎水性Ｔ細胞エピトープ、疎水性エピトープもしく
は疎水性領域を含有しないことにより、ペプチドの溶解
度を上げることが必要である。また、ペプチド抗原内の
Ｔ細胞エピトープの適した抗原プロセシングを助けるた
めに、それぞれ少なくとも１個のＴ細胞エピトープを含
む領域間にエンドプロテアーゼ認識部位を、前述の組換
え又は合成により作製することができる。例えば、LysL
ys又はArgArgなどの帯電アミノ酸対をペプチド内の領域
間に導入することができ、得られるペプチドはカテプシ
ン及び／又は他のトリプシン様酵素による切断に感受性
となり、１又は２個以上のＴ細胞エピトープを含むペプ
チド断片を生成することができる。さらにそのような帯
電アミノ酸残基はペプチドの溶解度を向上させることも
可能である。

【００１７】本発明の第２の発明は、組換えマラセチア
抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチドであり、配
列表の配列番号：１〜６に記載の塩基配列の全部又は一
部からなるポリヌクレオチド、又は該ポリヌクレオチド
を含むポリヌクレオチドであって、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチドが挙げられる。例として配列番号：１〜
６に示す塩基配列を有するポリヌクレオチドが挙げら
れ、これらは、各々前記組換えマラセチア抗原性蛋白質
ＭＦ−１〜６をコードしている。また、配列表の配列番
号：１〜６に記載の塩基配列、又はその一部からなる塩
基配列において、１又は２以上の塩基の欠失、付加、挿
入又は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセ
チアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質を
コードするポリヌクレオチドが挙げられる。さらにこれ
らのポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能な、マラセ
チアアレルゲン活性を有する抗原性蛋白質をコードする
ポリヌクレオチドが挙げられる。

【００１８】後述のマラセチア由来のエピトープをコー
ドする遺伝子も本発明の第２の発明の範囲内であり、マ
ラセチアアレルゲンの全アミノ酸配列をコードする塩基
配列より塩基の数が少ない配列を言う。一般に、エピト
ープをコードする塩基配列は成熟蛋白質をコードする塩
基配列から選ばれるが、ある場合には本発明のリーダー
配列部分を含むように選ぶのが望ましい。本発明の遺伝
子は、制限エンドヌクレアーゼ認識部位を含むリンカー
配列及び／又は、所望の遺伝子のクローニング、発現あ
るいは精製に有用な配列も含むことができる。即ち、具
体的には少なくとも１つのＢ細胞エピトープをコード
し、かつ配列番号：１〜６の塩基配列の一部を有するポ
リヌクレオチド、又は化学的、物理的方法により一部を
改変させたポリヌクレオチドも本発明に含まれる。例え
ば、本発明に使用した以外のＭ．ファーファおよびそれ
以外のマラセチア属の真菌、例えば M.pachydermatis,
M.sympodialis の有する、対応するポリヌクレオチドも
本発明に含まれる。すなわち、Ｍ．ファーファはその生
理学的性質から５群に分類可能であり（医真菌誌、内田
勝久）、それぞれが対応する遺伝子を有していると思わ
れ、これらも本発明に含まれる。

【００１９】さらに、本発明には配列番号：１〜６の塩
基配列又は少なくとも１つのＢ細胞エピトープをコード
する塩基配列を有するポリヌクレオチドとハイブリダイ
ズ可能なポリヌクレオチドも本発明に含まれる。本発明
において、ハイブリダイズ可能とは、次のような条件で
ハイブリダイズできることをいう。すなわち、ＤＮＡを
固定したメンブレンを０．５％ＳＤＳ、０．１％ウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）、０．１％ポリビニルピロリド
ン、０．１％フィコール４００、０．０１％変性サケ精
子ＤＮＡを含む６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．
０を示す）中で、５０℃にて１２〜２０時間、プローブ
とともにインキュベートする。インキュベーション終了
後、０．５％ＳＤＳを含む２×ＳＳＣ中、３７℃での洗
浄から始めて、ＳＳＣ濃度は０．１倍までの範囲で、ま
た、温度は５０℃までの範囲で変化させ、固定されたＤ
ＮＡ由来のシグナルがバックグラウンドと区別できるよ
うになるまでメンブレンを洗浄したうえ、プローブの検
出を行う。また、こうして得られた新たなＤＮＡについ
て、そこにコードされているタンパクの有する活性を上
記同様の方法によって調べることにより、得られたＤＮ
Ａが目的とするものであるかどうかを確認することがで
きる。

【００２０】本発明の遺伝子とハイブリダイズ可能なポ
リヌクレオチドとしては、例えば、本発明で使用した
Ｍ．ファーファＴＩＭＭ２７８２菌は配列番号：５のＭ
Ｆ−５遺伝子を有すると共に、この塩基配列と９０％以
上のホモロジーを有する、図１に示した推定塩基配列を
有する遺伝子をも有している。両遺伝子のコードする蛋
白質は既知の蛋白質の中でジヒドロリポアミドデヒドロ
ゲナーゼとホモロジーを有する。また、本菌は配列番
号：６のＭＦ−６遺伝子を有すると共に、この塩基配列
と９０％以上のホモロジーを有する、図２に示した推定
塩基配列をも有する遺伝子も有している。両遺伝子のコ
ードする蛋白質は既知の蛋白質の中でマレートデヒドロ
ゲナーゼとホモロジーを有する。さらに、本発明のＭＦ
−１遺伝子（配列番号：１）とＭＦ−２遺伝子（配列番
号：２）も塩基配列で６０％以上のホモロジーを有し
（図３）、ハイブリダイズ可能である。両遺伝子のコー
ドする蛋白質は Candida boidinii 由来のペルオキシゾ
ーム膜蛋白質（ＰＭＰ−２０）とホモロジーがある。ま
た、本発明のＭＦ−３遺伝子（配列番号：３）とＭＦ−
４遺伝子（配列番号：４）も塩基配列上６０％以上のホ
モロジーを有し（図４）、相互にハイブリダイズ可能で
ある。両遺伝子のコードする蛋白質はスーパーオキシド
デスムターゼとホモロジーがあり、実際その酵素活性を
有している。従って、アレルギーの原因となっている他
の真菌の有する、本発明の塩基配列とハイブリダイズ可
能な、抗原性蛋白質をコードする遺伝子も本発明に含ま
れる。

【００２１】本発明の遺伝子は特に限定されないが、Ｄ
ＮＡ又はＲＮＡであり、天然又は合成どちらでも構わな
い。本発明の遺伝子を発現させるために適したプロモー
ター、エンハンサー及び他の発現調節要素を含む発現ベ
クターは、例えば、Sambrooket al. Molecular Clonin
g: A Laboratory manual 第２版、Cold Spring Harbor
Laboratory Press (1989)に記載されているものを利用
することができる。哺乳類、酵母、カビ、又は昆虫細胞
で発現された組換え体は、グリコシル化及び適したジス
ルフィド結合等の修飾を受けることができる。酵母細胞
での発現に適したベクターとしては、ｐＹＥＳ２，Ｙｅ
ｐＳｅｃ等が挙げられ、入手可能である。昆虫細胞で
は、バキュロウイルスベクターが商業的に入手でき（フ
ァルミンゲン社製、サンディエゴ、ＣＡ）、哺乳類の
細胞ではｐＭＳＧベクターが入手可能である（ファルマ
シア社製）。

【００２２】大腸菌における発現の場合、ｐＴＶ１１８
ベクター等を使用すればよい。また、ｐＭＡＬ、ｐＳＥ
Ｍ、ｐＧＥＸを用いると、それぞれマルトース結合蛋白
質、β−ガラクトシダーゼ、グルタチオンＳ−トランス
フェラーゼとの融合蛋白質として発現させることができ
る。融合蛋白質として発現させる場合、キャリヤー蛋白
質とマラセチア由来の抗原性蛋白質又はその断片の間の
融合連結部位に酵素認識部位を導入するのが特に有利で
ある。融合蛋白質として単離精製後、酵素認識部位での
切断、続いて従来の方法を用いた生化学的精製手段によ
り、抗原性蛋白質又はその断片のみを回収することがで
きる。酵素認識部位には血液凝固因子Ｘａまたはトロン
ビンの認識部位が含まれ、これらの酵素は市販のものが
利用できる。さらに、ＩＰＴＧ又は温度等による発現誘
導可能なベクターも利用できる。

【００２３】発現ベクターの宿主細胞への導入方法は、
リン酸カルシウム又は塩化カルシウム共沈法、ＤＥＡＥ
−デキストラン法、又はエレクトロポレーション法など
の従来法を用いて行う。

【００２４】本発明の第３の発明は、少なくとも１つの
Ｂ細胞エピトープを含む抗原性断片であり、その機能的
に同等な誘導体も本発明に含まれる。具体的には、配列
表の配列番号：７〜１２のいずれかに記載のアミノ酸配
列に含まれる、少なくとも１つのＢ細胞エピトープを含
む抗原性断片である。例えば、該エピトープが配列表の
配列番号：３７〜３９のいずれかに記載のアミノ酸配列
から選ばれるものが挙げられる。これらの抗原性断片は
ペプチド合成技術を利用して化学的に合成することもで
きるし、遺伝子の一部を用いて形質転換された宿主細胞
中で目的のエピトープが発現された組換えマラセチアア
レルゲンとしても得ることができる。例えば、抗原性蛋
白質を重複のない所望の長さの断片に任意に分けたり、
好ましくは所望の長さの重複したペプチド断片に分け、
調製する。それらのペプチド断片を抗体との結合作用を
測定したり、免疫応答活性を測定する（Ｔ細胞応答性活
性化作用、Ｔ細胞アナージー作用等）ことにより、抗原
性を決定する。

【００２５】本発明の第４の発明は、前記組換えマラセ
チア抗原性蛋白質又は抗原性断片に特異的に結合する抗
体又は抗体断片である。本発明の抗体は常法により得る
ことができ、ポリクローナル抗体でも、モノクローナル
抗体のいずれでもよい。抗体断片は前記組換えマラセチ
ア抗原性蛋白質又は抗原性断片に特異的に結合するもの
であれば特に限定されない。

【００２６】本発明の第５の発明は、本発明のポリヌク
レオチドとハイブリダイズする合成オリゴヌクレオチド
プローブ、合成オリゴヌクレオチドプライマーである。
例えば、本発明は、配列番号：１〜６の塩基配列の全部
または一部を含有するプローブ又はプライマーを含む。
このプローブを用いたハイブリダイゼーション法によ
り、同等の機能を有する蛋白質をコードする遺伝子を単
離することができる。このプローブは、例えば前記遺伝
子または遺伝子断片を適当なベクターに挿入し、大腸菌
に導入して複製させた後、菌体破砕液からフェノール等
により抽出する。そして、該挿入部位を認識する制限酵
素で切断して電気泳動を行った後、ゲルより切り出して
調製する。また、プローブは、配列番号：１〜６の塩基
配列に基づき、ＤＮＡ合成機による化学合成やＰＣＲに
よる遺伝子増幅技術によっても調製できる。該プローブ
は使用時の検出感度を上げるために放射性同位体や蛍光
で標識することもできる。

【００２７】本発明の第６の発明は、本発明の組換えマ
ラセチア抗原性蛋白質又は抗原性断片を有効成分とする
マラセチアアレルギー疾患又はマラセチア感染症の診断
薬である。ここで述べるマラセチアアレルギー疾患と
は、アトピー性気管支喘息、アレルギー性鼻炎、アレル
ギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等、マラセチア菌が原
因となるあらゆるアレルギー性疾患を言う。また、マラ
セチア感染症とは、癜風、マラセチア毛包炎、フケ等の
マラセチア菌が原因となるあらゆる感染症をいう。

【００２８】本発明のアレルギー疾患診断薬は、マラセ
チアによるアレルギー疾患に対する皮内反応診断試薬及
びアレルギー診断用滴定試薬として用いられる。皮内反
応診断試薬として用いる場合は、本発明の抗原性蛋白質
又は本発明の抗原性断片をフェノールを含む生理食塩水
で溶解し、希釈し常法に従って用いられる。また、アレ
ルギー診断用滴定試薬として用いる場合も同様に常法に
より調製されるが、例えば本発明の抗原性蛋白質又は本
発明の抗原性断片をハンクス緩衝液で適当に溶解し、希
釈してヒスタミン遊離滴定用試薬として用いる。使用方
法は、通常、以下の操作手順による、即ち、アレルギー
疾患患者の血液及びこの血液から遠心分離により得られ
た血球画分を緩衝液に懸濁した血球浮遊液の一定量に対
し、該抗原性蛋白質の溶液を滴定試薬として滴定し、ア
レルゲン刺激により好塩基球から遊離するヒスタミン量
をHPLCを用いて測定する。

【００２９】本発明の抗原性蛋白質又は本発明の抗原性
断片は、マラセチアアレルギー疾患の検出及び診断に用
いることもできる。例えば、これはマラセチアに対する
感受性を評価しなければならない患者から得た血液又は
血液成分を、本発明の抗原性蛋白質等と適当な条件下で
インキュベートし、抗原性蛋白質と血液中の成分（例え
ば抗体、Ｔ細胞、Ｂ細胞）との結合の程度を決定するこ
とにより診断を行うことができる。

【００３０】本発明の第７の発明は、本発明の組換えマ
ラセチア抗原性蛋白質又は抗原性断片を有効成分とする
マラセチアアレルギー疾患又はマラセチア感染症の治療
薬である。マラセチア由来の抗原性断片を治療目的で用
いる場合、本来のマラセチアアレルゲンとＩｇＥが結合
する場合より実質的に低い濃度で、そのようなＩｇＥと
結合し、その際、肥満細胞又は好塩基球からメディエー
ターを遊離しない抗原性断片が好ましい。Ｔ細胞応答性
活性化作用を有すること、及び／又はＴ細胞アナージー
作用を誘起することができるものがさらに好ましい。マ
ラセチアアレルゲン又はその抗原性断片は、実験動物、
ヒトのボランティアへの皮膚試験、皮内試験の他、ＲＡ
ＳＴ、ＥＬＩＳＡ、又はヒスタミン遊離などの試験管内
試験において評価することができる。

【００３１】本発明の抗原性蛋白質並びにその遺伝子
は、マラセチアアレルギー疾患治療剤として利用可能で
ある。該治療剤は、前記のマラセチア抗原性蛋白質、そ
の抗原性断片、あるいはエピトープを有するペプチドを
有効成分とするものであり、各種のマラセチアによるア
レルギー疾患の治療剤として用いられる。さらに、前記
の遺伝子も治療剤として利用することができ、その際、
哺乳類で発現可能なベクターに挿入し、裸のＤＮＡ分子
として、または適当なウイルスベクターに組み込んでウ
イルス粒子として投与すればよい。この投与により、ト
レランスを誘導し、疾患を治療することが可能である。

【００３２】本発明のアレルギー疾患治療剤の調製方法
は、特に制限されないが、例えば、前記の方法により調
製された組換えマラセチアアレルゲン、マラセチアアレ
ルゲン断片、もしくはエピトープを有するペプチド、ま
たは該遺伝子をベクターに組み込んだＤＮＡ分子を乾燥
して粉末状で採取し、マラセチアによるアレルギー疾患
に対する減感作治療剤として用いられる。本発明のアレ
ルギー疾患治療剤は、減感作治療剤として用いられる場
合、そのままで、または必要に応じて一般的に用いられ
るアジュバントや各種の添加剤、例えば安定剤、賦形
剤、溶解補助剤、乳濁化剤、緩衝剤、無痛化剤、保存
剤、着色剤等を常法により添加した配合剤として用いる
ことができる。例えば、粉末状の精製されたマラセチア
アレルゲンをフェノールを添加した生理食塩水に溶解
し、減感作治療用抗原の原液として用いる。

【００３３】本発明のアレルギー疾患治療剤は、通常の
投与経路例えば経口、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内等の
投与経路により行うことができる。更に、例えば、トロ
ーチ、舌下剤、点眼剤、鼻腔内噴霧剤、パップ剤、クリ
ーム剤、ローション剤等の経皮、経粘膜薬として使用す
ることができる。本発明のアレルギー疾患治療剤の投与
量及び投与回数は、投与経路、症状などに応じて成人１
回あたり約20mg以下の範囲となるように適宜選択し、毎
週１回程度投与される。また、本発明のアレルギー疾患
治療剤は、マラセチアアレルギー疾患に対する治療剤の
みならず予防剤としても有用である。アナフィラキシー
誘発作用は少ないか又はなく、人体に対して安全に用い
ることができるからである。

【００３４】本発明のマラセチアアレルギー疾患治療剤
は、前記の抗原性蛋白質、その抗原性断片を有効成分と
するものであり、各種のマラセチアアレルギー疾患の治
療剤および予防剤として用いられる。減感作治療剤とし
て用いるためには、エピトープを有し、かつマラセチア
に特異的なＩｇＥに結合しないかまたは結合しても肥満
細胞もしくは好塩基球からヒスタミンを放出させないも
のが特に有利である。

【００３５】

【実施例】以下、実施例、実験例により本発明をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例によりなん
ら限定されるものではない。

【００３６】実験例１マラセチア由来の抗原性蛋白質の単離及びその物理化学
的性質１−１）マラセチア部分精製粗抗原２７８２の調製 M. furfur TIMM 2782 株（ＦＥＲＭＢＰ−５６１１）
をディクソン培地（バクトマルトエキストラクトブロス
6.0%、バクトオックスゴール 2.0% 、ツィーン４０ 1.0
% 、グリセロールα−モノオレイン酸 0.25%）１５０ｍ
ｌを入れた５００ｍｌ容三角フラスコ50本中で27℃、5
日間振とう培養して得た培養物から、遠心分離によって
集めた菌体をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で５回洗浄し
た後、菌体湿重量の２倍量のＰＢＳに浮遊させ、等量の
０．５ｍｍ径のガラスビーズを加え、ＭＳＫセルホモゲ
ナイザー（Ｂ．ブラウン社製）により菌体を破砕抽出し
た。得られた菌体破砕抽出液を遠心分離（18,000 rpm,
30 min）にかけ、上清を得た。この上清を精製水に対し
て透析、0.45μm のメンブレンフィルターでろ過滅菌
後、凍結乾燥することによりマラセチア粗抗原２７８２
約 900ｍｇを得た。前記マラセチア粗抗原２７８２約80
0 ｍｇを0.05M トリス塩酸緩衝液（pH 8.0）に溶解し
て、硫安塩析を行った。硫安50％から90％飽和で沈殿す
る画分を遠心分離で集め、0.05M トリス塩酸緩衝液（pH
8.0）に溶解し、続いて同緩衝液に透析し、マラセチア
部分精製粗抗原２７８２とした。

【００３７】１−２）マラセチア由来の抗原性蛋白質の
探索マラセチア部分精製粗抗原２７８２を凍結乾燥後、４ｍ
ｇ／ｍｌとなるように２Ｍ硫酸アンモニウムを含有する
０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（pH 7.0）で溶解後、そ
のうち１００μｌを２Ｍ硫酸アンモニウムを含有する同
緩衝液（pH 7.0）で予め平衡化した Phenyl Superose P
C1.6/5（カラム容積0.1 ml、ファルマシア社製）にか
け、0.1 Ｍ同緩衝液で硫酸アンモニウム２Ｍから０Ｍま
での直線的グラジエント溶出を行った。得られた抗原性
蛋白質含有画分をビストリス緩衝液（pH 6.5）に対して
透析した後、MonoQ PC 1.6/5（カラム容積0.1 ml、ファ
ルマシア社製）にかけ、同緩衝液で食塩0 M から0.3 M
までの直線的グラジエント溶出を行った（流速：100 μ
l ／分、検出：280 nm）。50μl ずつ26本に分画後、分
画１〜２０について患者血清を用いたDirect RAST(EIA)
法によるＩｇＥ抗体結合性を調べた。

【００３８】即ち、各分画を0.01% ツィーン20入り0.1
M ほう酸緩衝液（pH8.0 ）で10、100 、1000倍希釈し、
その45μl を臭化シアンで活性化したペーパーディスク
にカップリングし、ついでエタノールアミンでブロッキ
ングした。その後、各ディスクに５倍希釈したプール血
清（ＲＡＳＴ法で高値を示した患者血清１０名分をまと
めたもの）50μl ずつを加えて、その後、希釈したβ−
ガラクトシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＥ抗血清を反応さ
せ、酵素基質を加え、415nm の吸光度を測定した。その
結果、複数のアレルゲン蛋白質が存在することが明らか
となり、例えばフラクション６及びフラクション１２、
１３付近に患者ＩｇＥと結合する蛋白質が存在した。

【００３９】また、各分画をＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、クー
マシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）染色により蛋白質
の検出を行うと共に、代表的画分について下記のように
イムノブロッティングを行った。即ち、それぞれの画分
をＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、ニトロセルロース膜へトランス
ファーし、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロッ
キングし、そして患者プール血清で処理した。その後、
希釈したアルカリフォスファターゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇ
Ｅ抗血清を反応させ、酵素基質を加え、アレルゲン蛋白
質を検出した。その結果、複数のアレルゲン蛋白質の存
在が明らかとなった。例えば、フラクション12に、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ上の20 kDa付近に検出される蛋白質（アレ
ルゲンMF−１として単離した）等がアレルゲン蛋白質と
して含まれていることが明らかとなった。フラクション
６には、フラクション12の20 kDaとほぼ同じ分子量のア
レルゲン蛋白質（アレルゲンMF−２として単離した）お
よび80 kDa付近に検出される蛋白質等が含まれているこ
とが明らかとなった。

【００４０】１−３）抗原性蛋白質MF−１、MF−２、MF
−３、MF−４の単離前記のマラセチア部分精製粗抗原２７８２の凍結乾燥物
０．２５ｍｇをビストリス緩衝液（pH 6.5）溶液１ｍｌ
に溶解後、１−２）に示したMono Q PC 1.6/5によるク
ロマトグラフィーと同様の方法で、Mono Q HR 5/5 （カ
ラム容積１ml、ファルマシア社製）にかけ、ピーク１、
ピーク２、ピーク３、ピーク４を集めた。それぞれのピ
ークについて、ゲルろ過、疎水クロマトグラフィー、最
後にMonoQ PC 1.6/5 によるイオン交換クロマトグラフ
ィーを行い、ピーク１よりMF−２、ピーク２よりMF−
１、ピーク３よりMF−３、ピーク４よりMF−４と命名し
た、純粋な抗原性蛋白質を単離した。単離された４種類
の蛋白質については、上記の患者プール血清を用いたEI
A 法によるＩｇＥ抗体結合性を調べることにより、マラ
セチアアレルゲン蛋白質であることを確認した。

【００４１】精製方法について詳しく説明すると、Mono
Q HR 5/5 により分離されたピーク１〜４をそれぞれ４
M 硫酸アンモニウムを含有する0.1 M リン酸カリウム緩
衝液（pH7.0 ）で２倍に希釈後、 2M 硫酸アンモニウム
を含有する0.1 M リン酸カリウム緩衝液（pH7.0 ）で予
め平衡化したPhenyl Superose PC1.6/5 ( カラム容積0.
1 ml、ファルマシア社製）にかけ、0.1 M 同緩衝液で硫
酸アンモニウム２M から０M までの直線的グラジエント
溶出を行った。得られた抗原性蛋白質含有画分を限外濾
過膜（MW 10,000 ）で濃縮後、セファデックスG-75スー
パーファインカラム（1.5 x 100 cm）によるゲルろ過ク
ロマトグラフィーを行い、分子量４万付近に溶出される
画分を得た。さらに、得られたゲルろ過物を再度Mono Q
PC 1.6/5 によるイオン交換クロマトグラフィーを行
い、前記と同様の溶出を行い、抗原性蛋白質を単離し
た。即ち、ピーク２よりMF−１を、ピーク１よりMF−２
を、ピーク３よりMF−３を、ピーク４よりMF−４を単離
した。

【００４２】抗原性蛋白ＭＦ−５、ＭＦ−６の単離さらに、前記のマラセチア部分精製粗抗原２７８２の１
５０μｇを８Ｍ尿素、０．５％ＮＰ−４０、２％β−メ
ルカプトエタノール、０．８％Pharmalyte（ファルマシ
ア製）、０．０１％ブロモフェノールブルーを含む溶液
に溶解した。一次元目の等電点電気泳動は、Immobiline
DryStrip ゲル（ｐＨ４〜７、ファルマシア製）を用い
て常法により行った。二次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥは、
ExelGelSDS-Homogeneous(１２．５％、ファルマシア社
製）を用いて行った後、ＣＢＢ染色により蛋白質の検出
（図８）を行うと共に、ＰＶＤＦ膜（ミリポア社製）に
転写後、アレルギー患者ＩｇＥ抗体および健常者ＩｇＥ
抗体を用いてイムノブロットを行い、陽性スポットを検
出した（図９）。陽性スポットのうち、分子量約２１ｋ
Ｄａで等電点約５．３、分子量約２０ｋＤａで等電点約
５．８、分子量約２７ｋＤａで等電点約６．５、分子量
約２６ｋＤａで等電点６．３のスポットについて、Ｎ末
端配列の結果などをもとに、各々ＭＦ−１、ＭＦ−２、
ＭＦ−３、およびＭＦ−４であると同定した。また、新
たに分子量約６６ｋＤａ、等電点約６．１（ＭＦ−５と
命名）、及び分子量約４３ｋＤａ、等電点約６．２（Ｍ
Ｆ−６と命名）の蛋白質がアレルギー患者ＩｇＥ抗体に
結合する蛋白質であることを見出し、これらの蛋白質を
ゲルより抽出し、単離した。

【００４３】１−４）抗原性蛋白質MF−１、MF−２、MF
−３、MF−４、MF−５、MF−６の部分アミノ酸配列の決
定Ｎ末端アミノ酸配列分析を常法により行った。その結
果、MF−１は Pro Gly Asp Pro Thr Ala Thr Ala Lys Gly Asn Glu Il
e Pro Asp Thr Leu MetGly Tyr Ile Pro Trp Thr Pro G
lu Leu Asp（配列番号：４０）のアミノ酸配列を有することが明らかとなった。

【００４４】MF−２については、Ｎ末端がブロックされ
ていたため、ピリジルエチル化後、リジルエンドペプチ
ダーゼで消化し、得られたペプチド断片をC18 逆相HPLC
により分析した。得られた種々のピークを分取し、いく
つかについてアミノ酸配列決定を行い、27.07 、28.20
、31.15 分に溶出された３種類のペプチド断片のＮ末
端アミノ酸配列をそれぞれ、 Val Glu Tyr Phe Gly Ile Asp Glu Gly Glu Pro Lys
（配列番号：４１）、 Asp Asn Leu Thr Phe Ala Gln Asp Val Asn Cys Glu Ph
e（配列番号：４２）、 Val Val Ile Val Ala Val Pro Gly Xaa Phe Thr Pro Th
r Cys Thr Ala Asn HisVal Pro Xaa Tyr Xaa Glu（配列
番号：４３）（Xaa は未決定のアミノ酸である）、と決定した。

【００４５】MF−３についても、Ｎ末端がブロックされ
ていたため、ピリジルエチル化後、リジルエンドペプチ
ダーゼで消化し、得られたペプチド断片をC18 逆相HPLC
により分析した。得られた種々のピークを分取し、いく
つかについてアミノ酸配列決定を行い、35.68 、36.68
、29.15 分に溶出された３種類のペプチド断片のＮ末
端アミノ酸配列をそれぞれ Asp Gln Asp Pro Leu Thr Thr His His Pro Val Ile Gl
y Trp Asp Xaa Xaa GluHis Ala（配列番号：４４）（Xa
a は未決定のアミノ酸である）、 Ala Trp Trp Asn Val Val Asn Trp Ala Glu Ala Glu Ly
s（配列番号：４５）、 Phe Xaa Gly Gly Gly His Ile Asn Xaa Ser Leu Phe
（配列番号：４６）（Xaaは未決定のアミノ酸であ
る）、と決定した。

【００４６】また、MF−４は Lys Tyr Thr Leu Pro Pro Leu Pro Tyr Asp Tyr Gly Al
a Leu Glu Pro Ala IleSer Gly Glu Ile Met Glu Thr H
is Tyr Glu Lys His（配列番号：４７）のアミノ酸配列を有することが明らかとなった。

【００４７】また、MF−５は Glu Pro Tyr Asp Val Ile Xaa Ile Gly Gly Gly Pro Gl
y Gly Tyr Val Ala AlaIle Lys Ala Ala Gln （配列番
号：４８）のアミノ酸配列を有することが明らかとなった。

【００４８】また、MF−６は Arg Lys Val Ala Val Leu Gly Ala Ser Gly Gly Ile Gl
y Gln Pro Leu Ser LeuLeu Met Lys Leu Asn Pro Lys V
al Thr Glu Leu Arg （配列番号：４９）のアミノ酸配列を有することが明らかとなった。

【００４９】実施例１Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−１遺伝子のク
ローニング１−ａ）Ｍ．ファーファからの全ＲＮＡの精製Ｍ．ファーファＴＩＭＭ２７８２株の菌体より全ＲＮＡ
を得るため、該菌株を３００ｍｌのＹＮＢ培地（０．６
７％バクトイーストナイトロゲンベース、０．５％バク
トカシトン、０．１％ツィーン６０、２．０％グルコー
ス、５％ＭＥＭ−ビタミン液）で７２時間培養後、３０
００ｒｐｍで１５分間の遠心分離により集菌し、菌体を
液体窒素により急速凍結した。乳鉢により凍結菌体を粉
末状に破砕した後、ＲＮＡエクストラクションキット
（ファルマシア社製）により１．３ｍｇの全ＲＮＡを回
収、精製した。

【００５０】１−ｂ）ＭＦ−１遺伝子のＲＴ−ＰＣＲに
よる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−１蛋白質のＮ末端からの
アミノ酸配列より推定されるオリゴヌクレオチドＭＦ１
Ｆ１とＭＦ１Ｆ２を合成、精製しＰＣＲのプライマーと
した。ＭＦ１Ｆ１とＭＦ１Ｆ２の塩基配列は、それぞれ
配列表の配列番号：１３と１４に示す。実施例１−ａ）
で精製された全ＲＮＡ１μｇを用いて、ＲＮＡＰＣＲ
キットＶｅｒ．２（宝酒造社製）を使用し、ＲＴ−Ｐ
ＣＲ法によりＭＦ−１ｃＤＮＡを増幅した。具体的に
は、オリゴ（ｄＴ）２０−Ｍ４アダプタープライマーを
用いて、１μｇの全ＲＮＡからＡＭＶ逆転写酵素の反応
（４２℃、６０分間）によりｃＤＮＡを合成した。この
ｃＤＮＡを鋳型とし、ＭＦ１Ｆ１とキットに含まれてい
るＭ１３Ｍ４プライマーを用いて、９４℃で１分、５５
℃で２分、７２℃で１．５分の温度シフトを４０サイク
ル繰り返し、ＰＣＲ反応を行った。さらに、このＰＣＲ
反応液を鋳型として、２回目のＰＣＲ反応（ｎｅｓｔｅ
ｄＰＣＲ反応）を行った。この反応では、ＭＦ１Ｆ２
とＭ１３Ｍ４プライマーを使用した。ＰＣＲの結果、約
５７０ｂｐの長さのｃＤＮＡ断片が増幅した。このｃＤ
ＮＡをｐＵＣ１１８ベクター（宝酒造社製）にクローニ
ングした後、塩基配列を決定した。その塩基配列を配列
表の配列番号：１５に示す。配列番号：１５より予想さ
れるアミノ酸配列は、ＭＦ−１蛋白質より決定したアミ
ノ酸配列と一致したことから、このｃＤＮＡ断片はＭＦ
−１遺伝子であることが明らかとなった。

【００５１】１−ｃ）Ｍ．ファーファのｃＤＮＡライブ
ラリーの作製オリゴテックス−ｄＴ３０＜スーパー＞（宝酒造社製）
を用いて、実施例１−ａ）の全ＲＮＡ１ｍｇから２０μ
ｇのポリ（Ａ）⁺ＲＮＡを精製した。該ポリ（Ａ）⁺Ｒ
ＮＡ５μｇを用いて、ｃＤＮＡ合成キット（宝酒造社
製）によりｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡと
ラムダファージベクターλＳＨｌｏｘ^TM（ノヴァジェン
社製）と連結した後、ファージメーカーシステムとファ
ージパックエクストラクト（ノヴァジェン社製）により
インビトロパッケージングを行い、ｃＤＮＡライブラリ
ーを構築した。

【００５２】１−ｄ）ＭＦ−１ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｃ）で得られたｃＤＮＡライブラリーを宿主
大腸菌ＥＲ１６４７株に感染させ、トップアガロース
（０．７％バクトアガーを含むＬＢ培地）と混合後、Ｌ
Ｂプレート上に重層し、３７℃で一晩培養することによ
りプラークを形成させた。生じたプラークをナイロンメ
ンブレン（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ、アマシャム社製）へ移
し、プラークハイブリダイゼーションを行った。実施例
１−ｂ）で得られたＭＦ−１の約５７０ｂｐのｃＤＮＡ
断片を、ランダムプライマーＤＮＡラベリングキット
（宝酒造社製）を用いて[ α−³²Ｐ] ｄＣＴＰで標識
し、ハイブリダイゼーションのプローブとして使用し
た。１．６×１０⁵個のプラークをスクリーニングした
後、陽性のクローンの中からシグナルの強い１０個のク
ローンについて、さらに解析した。すなわち、大腸菌内
でのオートマチックサブクローニングにより、これらの
ファージからＭＦ−１ｃＤＮＡを含む領域を自動的にサ
ブクローニングされたプラスミドを有する大腸菌を得
た。これらの大腸菌からプラスミドを精製し、最長の６
００ｂｐのｃＤＮＡを含むｐＭＦ１−７を選んだ。該ｃ
ＤＮＡをｐＵＣ１１８ベクター（宝酒造社製）へサブク
ローニングし、塩基配列を決定した。その塩基配列は配
列表の配列番号：１に示す通りであり、ＭＦ−１遺伝子
は、配列表の配列番号：７に示したアミノ酸配列を有す
るポリペプチドをコードしている。

【００５３】１−ｅ）Ｍ．ファーファからのゲノムＤＮ
Ａの精製Ｍ．ファーファＴＩＭＭ２７８２株の菌体よりゲノムＤ
ＮＡを得るため、該菌株を２００ｍｌのＹＮＢ培地で７
２時間培養後、３０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離に
より集菌し、洗浄液（０．９％ＮａＣｌ、０．０５％ツ
ィーン８０）で５回、ＰＫバッファー（０．１５ＭＮ
ａＣｌ、０．１ＭＥＤＴＡ）で３回洗浄した。菌体を
８ｍｌのＰＫバッファーに懸濁した後、等容量のガラス
ビーズ（径４２５〜６００μｍ、シグマ社製）を加え、
ミニービードビーダー（バイオスペスプロダクツ社
製）により菌体を破砕した。菌破砕液にプロテアーゼＫ
とＳＤＳをそれぞれ終濃度０．１５ｍｇ／ｍｌ、１％
（ｗ／ｖ）となるように加え、ゆっくりと攪拌しながら
５０℃で３時間処理した。該破砕液をフェノール抽出、
フェノール／クロロホルム抽出、及びクロロホルム抽出
（各１回）し、エタノール沈殿を行って核酸を精製し
た。１００００ｒｐｍで１５分間の遠心分離により得ら
れた核酸をＴＥバッファー（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、１ｍＭＥＤＴＡ）に溶解した後、ＲＮアーゼＡを
終濃度４０μｇ／ｍｌとなるように加え、３７℃で４０
分間処理した。該溶液をフェノール抽出、フェノール／
クロロホルム抽出及びクロロホルム抽出（各１回）し、
エタノール沈殿によりＤＮＡを回収、精製した。

【００５４】１−ｆ）ＭＦ−１ゲノムＤＮＡのクローニ
ング実施例１−ｅ）で得られたゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩ又
はＰｓｔＩにより完全切断した後、それぞれの断片をｐ
ＵＣ１１８ベクターにクローニングし、２種類のゲノム
ＤＮＡライブラリーを作製した。実施例１−ｄ）で得ら
れたＭＦ−１のｃＤＮＡをプローブとして用いて、該ラ
イブラリーからＭＦ−１ゲノムＤＮＡをコロニーハイブ
リダイゼーションによりスクリーニングした。ＢａｍＨ
Ｉ断片を含むライブラリーより８．５ｋｂｐ、ＰｓｔＩ
断片を含むライブラリーより４．９ｋｂｐのＤＮＡを含
むクローンが得られた。４．９ｋｂｐのＰｓｔＩ断片に
ついて、ｃＤＮＡの塩基配列をもとにして、塩基配列を
決定した。ＭＦ−１遺伝子を含むゲノムＤＮＡの塩基配
列は、配列表の配列番号：１６に示す。この塩基配列よ
りＭＦ−１遺伝子は、配列表の配列番号：１７に示した
アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている。
さらに、ゲノムＤＮＡには３７ｂｐと３９ｂｐのイント
ロンが２ヶ所存在していることが明らかになった。ゲノ
ムＤＮＡとｃＤＮＡの関係を図７に示す。

【００５５】実施例２Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−２遺伝子のク
ローニング２−ａ）ＭＦ−２遺伝子のＲＴ−ＰＣＲによる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−２蛋白質の内部アミノ酸
配列より推定されるオリゴヌクレオチドＭＦ２Ｆ１を合
成、精製しＰＣＲのプライマーとした。ＭＦ２Ｆ１の塩
基配列は、配列表の配列番号：１８に示す。実施例１−
ｂ）に記載の方法に従って、ＲＴ−ＰＣＲを行い、ＭＦ
−２ｃＤＮＡ断片を増幅した。ＰＣＲ反応にはＭＦ２Ｆ
１とＭ１３Ｍ４プライマーを用いた。１回目のＰＣＲ反
応の結果、約２８０ｂｐの長さのｃＤＮＡ断片が増幅し
た。増幅したｃＤＮＡ断片の塩基配列を配列表の配列番
号：１９に示す。配列番号：１９より予想されるアミノ
酸配列は、ＭＦ−２蛋白質より決定したアミノ酸配列と
一致したことから、このｃＤＮＡ断片はＭＦ−２遺伝子
であることが明らかとなった。

【００５６】２−ｂ）ＭＦ−２ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｄ）に記載の方法により、実施例２−ａ）で
得られた配列番号：１９で表わされる約２８０ｂｐのＭ
Ｆ−２ｃＤＮＡ断片をプローブとして、プラークハイブ
リダイゼーションを行った。陽性のクローンの中からシ
グナルの強い１０個のクローンについて、さらに解析し
た。すなわち、大腸菌内でのオートマチックサブクロー
ニングにより、これらのファージからＭＦ−２ｃＤＮＡ
を含む領域を自動的にサブクローニングされたプラスミ
ドを有する大腸菌を得た。これらの大腸菌からプラスミ
ドを精製し、最長の５５０ｂｐのｃＤＮＡを含むｐＭＦ
−２−２を選んだ。該ｃＤＮＡをｐＵＣ１１８ベクター
へサブクローニングし、塩基配列を決定した。その塩基
配列は配列表の配列番号：２に示す通りであり、ＭＦ−
２遺伝子は配列表の配列番号：８に示すアミノ酸配列を
有するポリペプチドをコードしている。

【００５７】実施例３Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−３遺伝子のク
ローニング３−ａ）ＭＦ−３遺伝子のＲＴ−ＰＣＲによる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−３蛋白質の内部アミノ酸
配列より推定されるオリゴヌクレオチドＭＦ３Ｆ１、Ｍ
Ｆ３Ｆ２、ＭＦ３Ｒ３を合成、精製しＰＣＲのプライマ
ーとした。ＭＦ３Ｆ１、ＭＦ３Ｆ２、ＭＦ３Ｒ３の塩基
配列は、それぞれ配列表の配列番号：２０〜２２に示
す。実施例１−ｂ）に記載の方法に従って、ＲＴ−ＰＣ
Ｒを行い、ＭＦ−３ｃＤＮＡ断片を増幅した。１回目の
ＰＣＲ反応にはＭＦ３Ｆ１とＭ１３Ｍ４プライマーを用
い、２回目のＰＣＲ反応にはＭＦ３Ｆ１とＭＦ３Ｒ３の
組み合わせとＭＦ３Ｆ２とＭ１３Ｍ４プライマーの組み
合わせを用いた。ＰＣＲ反応の結果、ＭＦ３Ｆ１とＭＦ
３Ｒ３の組み合わせでは約３８０ｂｐ、ＭＦ３Ｆ２とＭ
１３Ｍ４プライマーの組み合わせでは約２８０ｂｐの長
さのｃＤＮＡ断片が増幅した。増幅したｃＤＮＡ断片の
塩基配列をそれぞれ配列表の配列番号：２３と２４に示
す。配列番号：２３と２４より予想されるアミノ酸配列
は、ＭＦ−３蛋白質より決定したアミノ酸配列と一致し
たことから、これらのｃＤＮＡ断片はＭＦ−３遺伝子で
あることが明らかとなった。

【００５８】３−ｂ）ＭＦ−３ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｄ）に記載の方法により、実施例３−ａ）で
得られた配列表の配列番号：２３で表わされる約３８０
ｂｐのＭＦ−３ｃＤＮＡ断片をプローブとして、プラー
クハイブリダイゼーションを行った。陽性のクローンの
中からシグナルの強い６個のクローンについて、さらに
解析した。すなわち、大腸菌内でのオートマチックサブ
クローニングにより、これらのファージからＭＦ−３ｃ
ＤＮＡを含む領域を自動的にサブクローニングされたプ
ラスミドを有する大腸菌を得た。これらの大腸菌からプ
ラスミドを精製し、最長の約７５０ｂｐのｃＤＮＡを含
むｐＭＦ３−１を選び、該ｃＤＮＡの塩基配列を決定し
た。その塩基配列は配列表の配列番号：３に示す通りで
あり、ＭＦ−３遺伝子は配列表の配列番号：９に示すア
ミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている。

【００５９】実施例４Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−４遺伝子のク
ローニング４−ａ）ＭＦ−４遺伝子のＲＴ−ＰＣＲによる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−４蛋白質のＮ末端アミノ
酸配列より推定されるオリゴヌクレオチドＭＦ４Ｆ１と
ＭＦ４Ｆ２を合成、精製しＰＣＲのプライマーとした。
ＭＦ４Ｆ１とＭＦ４Ｆ２の塩基配列は、それぞれ配列表
の配列番号：２５と２６に示す。実施例１−ｂ）に記載
の方法に従って、ＲＴ−ＰＣＲを行い、ＭＦ−４ｃＤＮ
Ａ断片を増幅した。１回目のＰＣＲ反応にはＭＦ４Ｆ１
とＭ１３Ｍ４プライマーを用い、２回目のＰＣＲ反応に
はＭＦ４Ｆ２とＭ１３Ｍ４プライマーを用いた。ＰＣＲ
反応の結果、約７００ｂｐの長さのｃＤＮＡ断片が増幅
した。増幅したｃＤＮＡ断片の塩基配列を配列表の配列
番号：２７に示す。配列番号：２７より予想されるアミ
ノ酸配列は、ＭＦ−４蛋白質より決定したアミノ酸配列
と一致したことから、このｃＤＮＡ断片はＭＦ−４遺伝
子であることが明らかとなった。

【００６０】４−ｂ）ＭＦ−４ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｄ）に記載の方法により、実施例４−ａ）で
得られた配列表の配列番号：２７で表わされる約７００
ｂｐのＭＦ−４ｃＤＮＡ断片をプローブとして、プラー
クハイブリダイゼーションを行った。陽性のクローンの
中からシグナルの強い４個のクローンについて、さらに
解析した。すなわち、大腸菌内でのオートマチックサブ
クローニングにより、これらのファージからＭＦ−４ｃ
ＤＮＡを含む領域を自動的にサブクローニングされたプ
ラスミドを有する大腸菌を得た。これらの大腸菌からプ
ラスミドを精製し、最長の約８２０ｂｐのｃＤＮＡを含
むｐＭＦ４−４を選び、該ｃＤＮＡの塩基配列を決定し
た。その塩基配列は配列表の配列番号：４に示す通りで
あり、ＭＦ−４遺伝子は配列表の配列番号：１０に示す
アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている。

【００６１】実施例５Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−５遺伝子のク
ローニング５−ａ）ＭＦ−５遺伝子のＲＴ−ＰＣＲによる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−５蛋白質のＮ末端アミノ
酸配列より、この蛋白質はＤＬＤＨとホモロジーがある
ものと考えられたため、該アミノ酸配列と他生物のＤＬ
ＤＨアミノ酸配列から推定されるオリゴヌクレオチドＭ
Ｆ５Ｆ１と、他生物間のＤＬＤＨアミノ酸配列を比較し
ホモロジーの高い領域に対応するオリゴヌクレオチドＭ
Ｆ５Ｒ２を合成、精製しＰＣＲのプライマーとした。Ｍ
Ｆ５Ｆ１とＭＦ５Ｒ２の塩基配列は、それぞれ配列表の
配列番号：２８と２９に示す。実施例１−ｂ）に記載の
方法に従って、ＲＴ−ＰＣＲを行い、ＭＦ−５ｃＤＮＡ
断片を増幅した。１回目のＰＣＲ反応にはＭＦ５Ｆ１と
Ｍ１３Ｍ４プライマーを用い、２回目のＰＣＲ反応には
ＭＦ５Ｆ１とＭＦ５Ｒ２を用いた。ＰＣＲ反応の結果、
約９００ｂｐの長さのｃＤＮＡ断片が増幅した。増幅し
たｃＤＮＡ断片の塩基配列を配列表の配列番号：３０に
示す。配列番号：３０より予想されるアミノ酸配列は、
ＭＦ−５蛋白質より決定したアミノ酸配列と一致したこ
とから、このｃＤＮＡ断片はＭＦ−５遺伝子であること
が明らかとなった。

【００６２】５−ｂ）ＭＦ−５ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｄ）に記載の方法により、実施例５−ａ）で
得られた配列表の配列番号：３０で表わされる約９００
ｂｐのＭＦ−５ｃＤＮＡ断片をプローブとして、プラー
クハイブリダイゼーションを行った。陽性のクローンの
中からシグナルの強い１２個のクローンについて、さら
に解析した。すなわち、大腸菌内でのオートマチックサ
ブクローニングにより、これらのファージからＭＦ−５
ｃＤＮＡを含む領域を自動的にサブクローニングされた
プラスミドを有する大腸菌を得た。これらの大腸菌から
プラスミドを精製し、最長の約１．６ｋｂｐのｃＤＮＡ
を含むｐＭＦ５−６とｐＭＦ５−７を選び、該ｃＤＮＡ
の塩基配列を決定した。その塩基配列は配列表の配列番
号：５と３１に示す通りであり、ＭＦ−５遺伝子は配列
表の配列番号：１１と３２に示したアミノ酸配列を有す
るポリペプチドをコードしている。これら２種類の遺伝
子は、塩基配列で９２％、コードするアミノ酸配列で９
６％のホモロジーを有し、ＭＦ−５蛋白質より決定した
アミノ酸配列とほぼ一致したため、両方ともＭＦ−５遺
伝子であることが明らかとなった。

【００６３】実施例６Ｍ．ファーファ由来の抗原性蛋白質ＭＦ−６遺伝子のク
ローニング６−ａ）ＭＦ−６遺伝子のＲＴ−ＰＣＲによる増幅実験例１−４）に記載のＭＦ−６蛋白質のＮ末端アミノ
酸配列から推定されるオリゴヌクレオチドＭＦ６Ｆ１と
ＭＦ６Ｆ２を合成、精製しＰＣＲのプライマーとした。
ＭＦ６Ｆ１とＭＦ６Ｆ２の塩基配列は、それぞれ配列表
の配列番号：３３と３４に示す。実施例１−ｂ）に記載
の方法に従って、ＲＴ−ＰＣＲを行い、ＭＦ−６ｃＤＮ
Ａ断片を増幅した。１回目のＰＣＲ反応にはＭＦ６Ｆ１
とＭ１３Ｍ４プライマーを用い、２回目のＰＣＲ反応に
はＭＦ６Ｆ２とＭ１３Ｍ４プライマーを用いた。ＰＣＲ
反応の結果、約１．０ｋｂｐの長さのｃＤＮＡ断片が増
幅した。増幅したｃＤＮＡ断片をｐＵＣ１１８ベクター
へクローニングした結果、制限酵素切断パターンが違う
２種類のｃＤＮＡが検出された。これらのｃＤＮＡ断片
の塩基配列は配列表の配列番号：３５と３６に示す通り
であり、塩基配列で９０％、塩基配列より予想されるア
ミノ酸配列で９４％のホモロジーを有するが、異なる遺
伝子であった。配列番号：３５と３６より予想されるア
ミノ酸配列は、ＭＦ−６蛋白質より決定したアミノ酸配
列とほぼ一致したことから、これらのｃＤＮＡ断片はＭ
Ｆ−６遺伝子であることが明らかとなった。

【００６４】６−ｂ）ＭＦ−６ｃＤＮＡのクローニング実施例１−ｄ）に記載の方法により、実施例６−ａ）で
得られた配列表の配列番号：３５及び３６で表わされる
約１．０ｋｂｐのＭＦ−６ｃＤＮＡ断片をプローブとし
て、プラークハイブリダイゼーションを行った。陽性の
クローンの中からシグナルの強い１０個のクローンにつ
いて、さらに解析した。すなわち、大腸菌内でのオート
マチックサブクローニングにより、これらのファージか
らＭＦ−６ｃＤＮＡを含む領域を自動的にサブクローニ
ングされたプラスミドを有する大腸菌を得た。これらの
大腸菌からプラスミドを精製し、最長の約１．２ｋｂｐ
のｃＤＮＡを含むｐＭＦ６−１２とｐＭＦ６−１３を選
び、該ｃＤＮＡの塩基配列を決定した。その塩基配列は
配列表の配列番号：６に示す通りであり、ＭＦ−６遺伝
子は配列表の配列番号：１２に示したアミノ酸配列を有
するポリペプチドをコードしている。

【００６５】実施例７モノクローナル抗体の作製７−１）マウスの免疫、細胞融合及びハイブリドーマの
クローニング実験例１のようにして得られた、抗原性蛋白質MF−１、
MF−２及びMF−３を、それぞれ10μg ずつフロイント完
全アジュバントに懸濁させ、５週令の雄のBALB/cマウス
の腹腔内に投与した。４週後に、フロイント完全アジュ
バントに懸濁させたアレルゲン20μg で腹腔内に追加免
疫後、更にその４週後に生理食塩水に溶解した同じアレ
ルゲン20μg を静脈内に投与した。最終免疫から３日後
に脾臓細胞を取り出し、４：１の割合でミエローマ細胞
（P3X63-Ag8.653 ）と混合し、43% ポリエチレングリコ
ール2000を加えて細胞融合を実施した。これを96穴マイ
クロプレートのウェルに脾臓細胞２x １０⁵個／ウェル
の割合でまき込み、HAT 培地中でハイブリドーマを選択
的に増殖させた。培養上清を用いて目的の抗体産生の有
無をELISA により測定し、抗体産生細胞を選択した。そ
の結果、抗原性蛋白質MF−１に対するＭ−４０モノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマのクローンとして
５Ｂ４株（ＦＥＲＭＢＰ−５６０８）を取得した。抗
原性蛋白質MF−２に対するＭ−３モノクローナル抗体を
産生するハイブリドーマのクローンとして８Ｇ１１株
（ＦＥＲＭＢＰ−５６０９）を取得した。抗原性蛋白
質MF−３に対するＭ−１モノクローナル抗体を産生する
ハイブリドーマのクローンとして１０Ｃ１株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−５６１０）を取得した。

【００６６】７−２）腹水の調製及びモノクローナル抗
体の精製予めプリスタンで前処理したヌードマウスの腹腔内に10
⁷個のハイブリドーマを注射して増殖させ、１〜２週後
に腹水を採取した。得られた腹水からプロテインＡカラ
ムのキット（アマーシャム社製）によりモノクローナル
抗体を精製した。MF−１に対するＭ−４０モノクローナ
ル抗体を得た。また上記と同様の方法にてＭＦ−１に対
するモノクローナル抗体ＭｍＡｂ３７、ＭＡｂ５１を得
た。又MF−２に対するＭ−３モノクローナル抗体、MF−
３に対するＭ−１モノクローナル抗体を得た。Ｍ−４０
モノクローナル抗体、Ｍ−３モノクローナル抗体、Ｍ−
１モノクローナル抗体のアイソタイプは、すべてＩｇＧ
１であった。

【００６７】実施例８ＭＦ−１オーバーラップペプチドの合成及び抗体結合部
位の推定８−ａ）ＭＦ−１オーバーラップペプチドの合成ペプチド合成機（ＰＳＳＭ−８、（株）島津製作所製）
を用いて、ＭＦ−１オーバーラップペプチドを合成し
た。各ペプチドのアミノ酸配列は配列番号：７に示すＭ
Ｆ−１の配列に基づき、全配列を３３種類のペプチドで
網羅した（図５）。各ペプチドは１５残基（一部１６ま
たは１７残基）のアミノ酸からなり、アミノ酸１０残基
ずつをオーバーラップしている。各ペプチドのＣ末端ア
ミノ酸のＦｍｏｃ体があらかじめ結合（０．２〜０．５
ｍｍｏｌ／ｇ樹脂）した樹脂（５０ｍｇ）をまず、３０
％ピペリジン／ＤＭＦ（０．５ｍｌ）で処理してＦｍｏ
ｃ基を除去した。ＤＭＦ（０．６ｍｌ×５回）で樹脂を
洗浄後、ＰｙＢＯＰ及びＨＯＢｔで活性化した目的のア
ミノ酸のＦｍｏｃ体（Ｃ末端アミノ酸の量に対して１０
倍過剰量を含むＤＭＦ溶液として用いた）及びＮ−メチ
ルモルホリン／ＤＭＦ溶液を加え、室温で３０分間反応
させた。ＤＭＦ（０．６ｍｌ×５回）で樹脂を洗浄し
た。この一連の操作を、目的とする配列を有するペプチ
ドが得られるまで繰り返した。

【００６８】次に、この樹脂にＴＦＡを主成分とする混
合溶液（９４％ＴＦＡ、５％アニソール、１％エタンジ
チオール（ＥＤＴ））（０．７ｍｌ）を加えて室温で２
時間放置した（尚、トリプトファン含有ペプチドに対し
ては、ＴＦＡ（９４％）、アニソール（３％）、ＥＤＴ
（３％）、２−メチルインドール（５ｍｇ）を、アルギ
ニン含有ペプチドに対しては、ＴＦＡ（８２％）、Ｈ₂
Ｏ（５％）、チオアニソール（５％）、ＥＤＴ（３
％）、エチルメチルスルフィド（２％）、フェノール
（３％）の混合溶液を用い、アルギニン含有ペプチドの
場合は室温で８時間放置した）。樹脂を濾去し、濾液に
エチルエーテル（１４ｍｌ）を加えて結晶化した。析出
した結晶を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）で回収
し、エチルエーテルで洗浄後、再び遠心分離して上清を
除き、結晶を減圧乾燥した。得られた結晶は逆相ＨＰＬ
Ｃで純度を検定した。さらに、必要に応じて、ＬＣ−Ｍ
Ｓで分子量を確認し、逆相ＨＰＬＣで精製した。

【００６９】８−ｂ）ヒト血清中のＩｇＥ抗体に対する
結合ペプチドの同定ペプチドコーティングキット（宝酒造社製）を用いて、
９６ウェルマイクロプレートに図５のペプチドを１μｇ
／ウェルとなるようにコーティングした。各ウェルに
Ｍ．ファーファＲＡＳＴ陽性の患者血清１３人分、及び
プール血清１、計１４種の血清の２倍希釈液を加え、マ
ニュアルに従い反応させた後、β−ガラクトシダーゼ標
識抗ＩｇＥ抗体、続いて酵素基質を加え、４１５ｎｍの
吸光度を測定した。３３個のペプチドに対する健常者由
来の血清における吸光度が平均２０であった。この２倍
の４０以上の吸光度を示したものを陽性とし、さらに、
４０以上を４段階に分け図６に結果を示した。Ｍ．ファ
ーファＲＡＳＴ陽性の患者血清は、４〜５種類のペプチ
ド断片に対して強く反応した。

【００７０】８−ｃ）ＭＦ−１に対するマウスモノクロ
ーナル抗体のエピトープの推定実施例８−ｂ）に記載の図５のペプチドをコーティング
したマイクロプレートに、ＭＦ−１に対する３種類のモ
ノクローナル抗体である、Ｍ−４０、ＭｍＡｂ３７およ
びＭＡｂ５１を加え反応させた後、ペルオキシダーゼ標
識抗ＩｇＧ抗体、続いて酵素基質を加え、４５０ｎｍの
吸光度を測定した。Ｍ−４０およびＭｍＡｂ３７は、ペ
プチド５に反応し、ＭＡｂ５１はペプチド２５、２６に
反応した。図６の結果を合わせて考えると、これらのペ
プチドにはＢ細胞エピトープが含まれていることが明ら
かとなった。

【００７１】実施例９組換えマラセチア抗原性蛋白質の診断への応用９−１）RAST法による特異的ＩｇＥ抗体の測定方法臭化シアンによるペーパーディスクの活性化、及び組換
えマラセチア抗原性蛋白質のペーパーディスクへのカッ
プリングは宮本らの方法（アレルギー、２２巻、５８４
−５９４頁、１９７３年）に準じて行った。ポリスチレ
ンチューブに該抗原性蛋白質をカップリングさせたペー
パーディスク１枚と患者血清５０μl を加えて、室温で
３時間インキュベートした。0.2%のツィーン20を含む生
理食塩水でペーパーディスクを３回洗浄後、ファルマシ
ア製RAST-RIAキットの¹²⁵Ｉ標識抗ヒトＩｇＥ抗体５０
μl を加えて室温で一晩インキュベートした。再度３回
洗浄後、ガンマカウンターで放射能を測定した。同時に
測定したキットのリファレンス試薬で作成した標準曲線
からＩｇＥ抗体価を算出した。標準曲線の上限（＞17.5
PRU/ml ）より高い値が得られた検体は、ウマ血清で10
倍、又は100 倍に希釈してから再測定を行い、抗体価を
算出した。

【００７２】９−２）組換えマラセチア抗原性蛋白質MF
−１、MF−２、MF−４による診断アトピー性皮膚炎(Atopic Dermatitis：以下ＡＤと略
す。）、アレルギー性喘息（Bronchial Asthma：以下Ｂ
Ａと略す。）及び両方の合併（ＡＤ＋ＢＡ）の患者に対
して、該抗原性蛋白質による皮膚試験を実施したとこ
ろ、ＡＤ患者が５７名中４３名（７５％）、ＢＡ患者が
９１９名中１０８名（１２％）、ＡＤ＋ＢＡ患者が１０
２名中４７名が陽性であり、ＡＤ患者で非常に高い陽性
率を示した。また、皮膚テスト陽性のＡＤ、ＢＡ、及び
ＡＤ＋ＢＡ患者中、各々１００％、５９％、及び８５％
の患者がＲＡＳＴ法によるＩｇＥ抗体測定において陽性
であった。

【００７３】該抗原性蛋白質を用いた皮膚試験で陽性、
更にRAST陽性（スコア１以上）の患者76例（ＡＤ：30
名，ＢＡ：20名，ＡＤ＋ＢＡ：26名）を対象にして、３
種類の抗原性蛋白質MF−１、MF−２、MF−４に対するＩ
ｇＥ抗体価をRAST法(RIA法) で測定した。皮膚試験陰性
者（健常人）12名についても同様に該抗原性蛋白質に対
するＩｇＥ抗体価を測定した。その結果、非常に高率に
患者血清中に抗原性蛋白質に対するＩｇＥ抗体が存在す
ることが明確になった。特に、MF−１、MF−２に対する
陽性率が高かった。更に、驚くべきことにＩｇＥ抗体価
が非常に高く、特にＡＤの患者ではMF−１、MF−２に対
して平均100 ＰＲＵ、最高1000ＰＲＵを超える患者もあ
った。また、マラセチア抗原に対するRAST陽性の患者全
員の血清中に抗原性蛋白質MF−１、MF−２、MF−４のい
ずれかに対するＩｇＥ抗体が存在していた。

【００７４】

【発明の効果】本発明により、新規な組換えマラセチア
抗原性蛋白質及びそれをコードする遺伝子、並びに該蛋
白質のエピトープなどが提供される。

【００７５】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：618 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GCCTGGTGAT CCTACTGCTA CTGCCAAGGG TAACGAGATC CCCGACACCC TCATGGGCTA 60 CATCCCCTGG ACCCCGGAGC TCGACTCGGG TGAGGTGTGT GGTATCCCCA CCACCTTCAA 120 GACCCGCGAC GAGTGGAAGG GCAAGAAGGT TGTGATTGTC TCGATCCCGG GTGCCTACAC 180 CCCCATCTGC CACCAGCAGC ACATCCCCCC GCTTGTGAAG CGTGTGGATG AGCTCAAGGC 240 CAAGGGTGTC GACGCCGTGT ACGTCATTGC GTCGAACGAC CCCTTCGTCA TGGCTGCCTG 300 GGGCAACTTC AACAACGCCA AGGACAAGGT CGTCTTTGCC ACCGACATTG ACCTGGCCTT 360 CTCCAAGGCT CTCGGCGCGA CGATCGACCT GAGCGCCAAG CACTTTGGTG AGCGCACGGC 420 CCGCTACGCT CTGATCATTG ACGACAACAA GATTGTCGAC TTTGCTTCGG ACGAGGGCGA 480 CACTGGCAAG CTCCAGAACG CGTCGATCGA CACGATCCTC ACCAAGGTCT AAAATGGCGC 540 ATGTGCGTTG TGTGACCACT ACCTAAAGGG TCCGTAGAGT TCCAAGTCAA GTCGTATATT 600 TTTTTTTTAA AAAAAAAA 618

【００７６】配列番号：２配列の長さ：551 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CGGAAATTGG CTCGACGATC CCCAACGCTA CGTTTGCATA CGTGCCGTAC AGCCCCGAGC 60 TCGAGGACCA CAAAGTGTGT GGCATGCCGA CGAGCTTCCA GAGCCACGAG CGCTGGAAGG 120 GCAAGAAGGT GGTGATTGTC GCGGTGCCCG GTGCGTTCAC GCCGACGTGC ACCGCGAACC 180 ATGTGCCGCC GTACGTGGAA AAGATCCAGG AGCTCAAGAG CAAGGGCGTC GACGAGGTCG 240 TGGTGATCTC GGCGAACGAC CCGTTCGTGC TGAGCGCATG GGGCATCACC GAGCACGCCA 300 AGGACAACCT GACGTTTGCG CAGGACGTCA ACTGCGAGTT CTCCAAGCAC TTTAACGCGA 360 CGCTGGACCT GTCGTCGAAG GGCATGGGCC TGCGCACCGC GCGCTACGCG CTGATCGCGA 420 ACGACCTCAA GGTCGAGTAC TTTGGCATCG ACGAGGGCGA GCCGAAGCAG TCGTCGGCCG 480 CGACGGTGCT GAGCAAGCTG TAGTGCCGTT CTACTTAGTC AAACAATCGG GTATAGTCGC 540 GTAAAAAAAA A 551

【００７７】配列番号：３配列の長さ：728 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GGGAACGTCA TGACTGAGTA CACTCTCCCT CCTCTGCCCT ACGCCTACGA TGCGCTGGAG 60 CCGTTTATCT CTAAGGAGAT CATGACGGTC CACCACGACA AGCACCACCA GACCTACGTG 120 AACAACCTCA ACGCCGCCGA GAAGGCGTAC GCTGAGGCGA CGGCCGCGAA CGACGTGCTT 180 AAGCAGATCC AGCTGCAGAG TGCGATCAAG TTCAACGGCG GTGGCCACAT CAACCACTCG 240 CTGTTCTGGA AGAACCTGGC CCCCCAGAGC GAGGGTGGTG GCCAACTGAA CGATGGCCCT 300 CTCAAGCAGG CCATCGAGCA GGAGTTCGGC GACTTTGAGA AGTTCAAGAC GACCTTCAAC 360 ACGAAGGCGG CCGGCATCCA GGGTTCGGGC TGGCTGTGGC TCGGTGTTGC CCCGACGGGC 420 AACCTCGACC TGGTCGTTGC CAAGGACCAG GACCCGCTCA CGACGCACCA CCCCGTCATT 480 GGCTGGGATG GCTGGGAGCA CGCCTGGTAC CTGCAGTACA AGAACGACAA GGCTTCCTAC 540 CTTAAGGCCT GGTGGAACGT GGTGAACTGG GCCGAGGCCG AGAAGCGCTT CCTCGAGGGT 600 AAGAAGAAGG CCCAGCTGTA ATGGCACGTT TGTAGATGAT GAACGACACA CGATTTTAGG 660 TCGCACGGCC GAGGCTACTA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 720 AAAAAAAA 728

【００７８】配列番号：４配列の長さ：812 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GATGTTCACG CTTGCTACGC GCCGCGCTGC TGCCGCCCCC CTCGCGAACG CCGCCCAGAT 60 GGGTGTGCGC ACCAAGTACA CGCTGCCGCC GCTGCCGTAC GACTACGGCG CGCTCGAGCC 120 GGCGATCTCG GGCGAGATCA TGGAGACGCA CTACGAGAAG CACCACCGCA CCTACGTCAA 180 CAACCTGAAC GCCGCGGAGG ACAAGCTGAT CGACGCGCTC CCGCAGCAGA GCCCGCTCGG 240 CGAGATTGCG CAGCTGAACG CGATCAAGTT CAACGGCGGT GGCCACATCA ACCACTCGCT 300 CTTCTGGAAG AACCTCGCGC CGACGAACAA GGGCGGCGGC GAGCTCGACT CGGGCGAGCT 360 GCGCTCCGCG ATCGACCGCG ACTTTGGCTC GGTCGACGCC ATGAAGGAGA AGTTCAACGC 420 GGCGCTCGCG GGCATCCAGG GCAGCGGCTG GGGCTGGCTC GGCCTGAACC CCACGACGCA 480 GAAGCTCGAC ATCATCACGA CCGCGAACCA GGACCCGCTC CTGTCGCACA AGCCGCTGAT 540 TGGCATCGAT GCGTGGGAGC ACGCGTTCTA CCTGCAGTAC AAGAACGTCA AGGCCGACTA 600 CTTCAAGGCG ATCTGGACCG TGATCAACTT TGAGGAGGCC GAGAAGCGTC TCAAGGAGGC 660 GCTCGCCAAG AACTAGACAC GTTCGGTTTT TTTTTTCTCC GTAGCTTCGC AATGACCTGC 720 CCACGCTAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 780 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 812

【００７９】配列番号：５配列の長さ：1607 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GTTGAGCTCT GTGCTGAAGC GCTCGCCGCA GCTCTCTACT AAGGCTCTGA AGCAGCCGCT 60 TACGCTCCCG CGTCTGCTCC CCATTGGCGC TACGCCGCTG GCTCGTGGCT ACGCCTCGAG 120 CTCGGAGCCG TACGATGTCA TTGTGATCGG CGGTGGCCCC GGTGGCTACG TGGCCGCCAT 180 CAAGGCCGCA CAGGGTGGTC TGAAGACTGC GTGTGTTGAG AAGCGTGGTG CCCTTGGCGG 240 TACGTGCTTG AACGTGGGCT GTATCCCGTC CAAGTCGTTG CTCAACAACT CGCACATCTA 300 CCACCAGACG CAGCATGACC TCAAGAACCG CGGTATTGAC GTCGGCGACA TTAAGCTGAA 360 CCTGCCGCAG ATGCTCAAGG CGAAGGAGAG CTCGGTTACT GCACTCACCA AGGGTGTCGA 420 GGGTCTGTTC AAGAAGAACA AGGTCGACTA CATCAAGGGC ACTGCCAGCT TTGCCAGCCC 480 CACGACGGTG GACGTGAAGC TGAACGATGG TGGTGAGCAG CAGATCGAGG GCAAGAACAT 540 CATCATTGCA ACCGGCTCTG AGGTGACGCC CTTCCCGGGT GTTGAAATCG ACGAGGAGCA 600 GATCATCAGC TCGACGGGTG CGCTCTCGCT CAAGGAGGTG CCCGAGAAGA TGGTCGTGAT 660 CGGTGGTGGT GTGATCGGTC TTGAGCTTGG CAGCGTGTGG ACCCGTCTGG GTGCCAAGGT 720 GACCGTGGTC GAGTTCCAGG AGGCGATCGG TGGTCCCGGT CTGGACAGCG AGGTGAGCCA 780 ACAGTTCAAG AAGCTGCTCG AGAAGCAGGG CATCCACTTC AAGCTCGGCA CCAAGGTCAA 840 CGGCATTGAG AAGGAGAACG GCAAGGTGAC TGTCCGCACT GAGGGTAAGG ATGGCAAGGA 900 GCAGGACTAC GATGCCAATG TTGTGCTCGT GTCCATTGGC CGTCGCCCGG TGACCAAGGG 960 CCTCAACCTC GAGGCGATCG GGGTCGAGCT CGACAAGAAG GGCCGCGTGG TGGTGGACGA 1020 CGAGTTCAAC ACGACGTGCA AGGGTGTCAA GTGCATTGGT GACGCGACGT TCGGCCCCAT 1080 GCTTGCGCAC AAGGCCGAGG ACGAGGGTAT TGCCGTCGCC GAGATGCTTG CGACCGGTTA 1140 TGGCCACGTC AACTACGACG TGATCCCTGC GGTGATCTAC ACGCACCCTG AGATCGCGTG 1200 GGTCGGCAAG TCGGAGCAGG AGCTCAAGAA CGAGGGCGTC CAGTACAAGG TGGGCAAGTT 1260 CCCCTTCCTG GCCAACTCGC GTGCCAAGAC CAACGTCGAC ACCGACGGCT TCGTCAAGTT 1320 CCTCGTGGAG AAGGAGACCG ACAAGATTCT CGGCGTGTTC ATTATCGGCC CGAACGCTGG 1380 CGAGATGATC GCCGAGGCTG GCCTGGCTAT GGAGTACGGC GCGAGTGCTG AGGATGTTGC 1440 GCGCACCTGC CACGCGCACC CGACGCTCTC CGAGGCGTTC AAGGAGGGTG CGATGGCCGC 1500 CTACTCGAAG CCCATCCACT TTTGATTTCG TAGGCTACCC CCGATAGGCG CCCGATACGT 1560 TTTCTCTCCA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAA 1607

【００８０】配列番号：６配列の長さ：940 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CGGATCTCTC GCACATCAAC ACCCCCGCGG TGACTTCGGG CTACGCCCAG GACGACCTCG 60 AGGGTGCCGT CGACGGTGCG GAGATTGTGC TGATCCCCGC CGGTATGCCG CGCAAGCCCG 120 GCATGACCCG TGACGACCTG TTCAACTCGA ACGCCTCGAT TGTCCGTGAC CTCGCCAAGG 180 TCGTGGCTAA GGTCGCCCCA AAGGCTTACA TCGGCGTCAT CTCGAACCCC GTCAACTCGA 240 CGGTGCCGAT CGTCGCTGAG GTGTTCAAGA AGGCCGGTGT GTACGACCCC AAGCGCCTCT 300 TCGGTGTGAC CACGCTCGAC ACCACGCGCG CGGCCACCTT CCTGTCGGGC ATTGCTGGCT 360 CGGACCCGCA GACCACCAAC GTCCCCGTCA TTGGTGGCCA CTCGGGTGTG ACCATTGTGC 420 CCCTGATCTC GCAGGCCGCC CAGGGTGACA AGGTGCAGGC TGGCGAGCAG TACGACAAGC 480 TTGTGCACCG CATCCAGTTC GGTGGTGACG AGGTCGTCAA GGCCAAGGAC GGTGCCGGCT 540 CGGCGACGCT CTCGATGGCC TACGCCGCCG CTGTCTTCAC CGAGGGCCTG CTCAAGGGTC 600 TCGACGGTGA GGCGGTGACG CAGTGCACCT TCGTCGAGAG CCCCCTGTTC AAGGACCAGG 660 TCGACTTCTT CGCCTCGCCC GTCGAGTTCG GCCCCGAGGG TGTGAAGAAC ATCCCTGCTC 720 TGCCGAAGCT CACCGCCGAG GAGCAGAAGC TGCTCGACGC CTGCCTGCCC GACCTTGCCA 780 AGAACATCAA GAAGGGCGTT GCGTGGGCCG CCGAGAACCC GTAAATGCGC AAAGCAATCT 840 TTTACGGAGC TTGCGCGAAG GAAAGGAAAT GTACGTTTCT ATAGAACGTA GATCTGTCCC 900 TTTCCACCTA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 940

【００８１】配列番号：７配列の長さ：176 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Pro Gly Asp Pro Thr Ala Thr Ala Lys Gly Asn Glu Ile Pro Asp 1 5 10 15 Thr Leu Met Gly Tyr Ile Pro Trp Thr Pro Glu Leu Asp Ser Gly 20 25 30 Glu Val Cys Gly Ile Pro Thr Thr Phe Lys Thr Arg Asp Glu Trp 35 40 45 Lys Gly Lys Lys Val Val Ile Val Ser Ile Pro Gly Ala Tyr Thr 50 55 60 Pro Ile Cys His Gln Gln His Ile Pro Pro Leu Val Lys Arg Val 65 70 75 Asp Glu Leu Lys Ala Lys Gly Val Asp Ala Val Tyr Val Ile Ala 80 85 90 Ser Asn Asp Pro Phe Val Met Ala Ala Trp Gly Asn Phe Asn Asn 95 100 105 Ala Lys Asp Lys Val Val Phe Ala Thr Asp Ile Asp Leu Ala Phe 110 115 120 Ser Lys Ala Leu Gly Ala Thr Ile Asp Leu Ser Ala Lys His Phe 125 130 135 Gly Glu Arg Thr Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ile Asp Asp Asn Lys 140 145 150 Ile Val Asp Phe Ala Ser Asp Glu Gly Asp Thr Gly Lys Leu Gln 155 160 165 Asn Ala Ser Ile Asp Thr Ile Leu Thr Lys Val 170 175

【００８２】配列番号：８配列の長さ：166 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Glu Ile Gly Ser Thr Ile Pro Asn Ala Thr Phe Ala Tyr Val Pro 1 5 10 15 Tyr Ser Pro Glu Leu Glu Asp His Lys Val Cys Gly Met Pro Thr 20 25 30 Ser Phe Gln Ser His Glu Arg Trp Lys Gly Lys Lys Val Val Ile 35 40 45 Val Ala Val Pro Gly Ala Phe Thr Pro Thr Cys Thr Ala Asn His 50 55 60 Val Pro Pro Tyr Val Glu Lys Ile Gln Glu Leu Lys Ser Lys Gly 65 70 75 Val Asp Glu Val Val Val Ile Ser Ala Asn Asp Pro Phe Val Leu 80 85 90 Ser Ala Trp Gly Ile Thr Glu His Ala Lys Asp Asn Leu Thr Phe 95 100 105 Ala Gln Asp Val Asn Cys Glu Phe Ser Lys His Phe Asn Ala Thr 110 115 120 Leu Asp Leu Ser Ser Lys Gly Met Gly Leu Arg Thr Ala Arg Tyr 125 130 135 Ala Leu Ile Ala Asn Asp Leu Lys Val Glu Tyr Phe Gly Ile Asp 140 145 150 Glu Gly Glu Pro Lys Gln Ser Ser Ala Ala Thr Val Leu Ser Lys 155 160 165 Leu

【００８３】配列番号：９配列の長さ：206 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Gly Asn Val Met Thr Glu Tyr Thr Leu Pro Pro Leu Pro Tyr Ala 1 5 10 15 Tyr Asp Ala Leu Glu Pro Phe Ile Ser Lys Glu Ile Met Thr Val 20 25 30 His His Asp Lys His His Gln Thr Tyr Val Asn Asn Leu Asn Ala 35 40 45 Ala Glu Lys Ala Tyr Ala Glu Ala Thr Ala Ala Asn Asp Val Leu 50 55 60 Lys Gln Ile Gln Leu Gln Ser Ala Ile Lys Phe Asn Gly Gly Gly 65 70 75 His Ile Asn His Ser Leu Phe Trp Lys Asn Leu Ala Pro Gln Ser 80 85 90 Glu Gly Gly Gly Gln Leu Asn Asp Gly Pro Leu Lys Gln Ala Ile 95 100 105 Glu Gln Glu Phe Gly Asp Phe Glu Lys Phe Lys Thr Thr Phe Asn 110 115 120 Thr Lys Ala Ala Gly Ile Gln Gly Ser Gly Trp Leu Trp Leu Gly 125 130 135 Val Ala Pro Thr Gly Asn Leu Asp Leu Val Val Ala Lys Asp Gln 140 145 150 Asp Pro Leu Thr Thr His His Pro Val Ile Gly Trp Asp Gly Trp 155 160 165 Glu His Ala Trp Tyr Leu Gln Tyr Lys Asn Asp Lys Ala Ser Tyr 170 175 180 Leu Lys Ala Trp Trp Asn Val Val Asn Trp Ala Glu Ala Glu Lys 185 190 195 Arg Phe Leu Glu Gly Lys Lys Lys Ala Gln Leu 200 205

【００８４】配列番号：１０配列の長さ：224 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Phe Thr Leu Ala Thr Arg Arg Ala Ala Ala Ala Pro Leu Ala 1 5 10 15 Asn Ala Ala Gln Met Gly Val Arg Thr Lys Tyr Thr Leu Pro Pro 20 25 30 Leu Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala Leu Glu Pro Ala Ile Ser Gly Glu 35 40 45 Ile Met Glu Thr His Tyr Glu Lys His His Arg Thr Tyr Val Asn 50 55 60 Asn Leu Asn Ala Ala Glu Asp Lys Leu Ile Asp Ala Leu Pro Gln 65 70 75 Gln Ser Pro Leu Gly Glu Ile Ala Gln Leu Asn Ala Ile Lys Phe 80 85 90 Asn Gly Gly Gly His Ile Asn His Ser Leu Phe Trp Lys Asn Leu 95 100 105 Ala Pro Thr Asn Lys Gly Gly Gly Glu Leu Asp Ser Gly Glu Leu 110 115 120 Arg Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Ser Val Asp Ala Met Lys 125 130 135 Glu Lys Phe Asn Ala Ala Leu Ala Gly Ile Gln Gly Ser Gly Trp 140 145 150 Gly Trp Leu Gly Leu Asn Pro Thr Thr Gln Lys Leu Asp Ile Ile 155 160 165 Thr Thr Ala Asn Gln Asp Pro Leu Leu Ser His Lys Pro Leu Ile 170 175 180 Gly Ile Asp Ala Trp Glu His Ala Phe Tyr Leu Gln Tyr Lys Asn 185 190 195 Val Lys Ala Asp Tyr Phe Lys Ala Ile Trp Thr Val Ile Asn Phe 200 205 210 Glu Glu Ala Glu Lys Arg Leu Lys Glu Ala Leu Ala Lys Asn 215 220

【００８５】配列番号：１１配列の長さ：507 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Leu Ser Ser Val Leu Lys Arg Ser Pro Gln Leu Ser Thr Lys Ala 1 5 10 15 Leu Lys Gln Pro Leu Thr Leu Pro Arg Leu Leu Pro Ile Gly Ala 20 25 30 Thr Pro Leu Ala Arg Gly Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Pro Tyr Asp 35 40 45 Val Ile Val Ile Gly Gly Gly Pro Gly Gly Tyr Val Ala Ala Ile 50 55 60 Lys Ala Ala Gln Gly Gly Leu Lys Thr Ala Cys Val Glu Lys Arg 65 70 75 Gly Ala Leu Gly Gly Thr Cys Leu Asn Val Gly Cys Ile Pro Ser 80 85 90 Lys Ser Leu Leu Asn Asn Ser His Ile Tyr His Gln Thr Gln His 95 100 105 Asp Leu Lys Asn Arg Gly Ile Asp Val Gly Asp Ile Lys Leu Asn 110 115 120 Leu Pro Gln Met Leu Lys Ala Lys Glu Ser Ser Val Thr Ala Leu 125 130 135 Thr Lys Gly Val Glu Gly Leu Phe Lys Lys Asn Lys Val Asp Tyr 140 145 150 Ile Lys Gly Thr Ala Ser Phe Ala Ser Pro Thr Thr Val Asp Val 155 160 165 Lys Leu Asn Asp Gly Gly Glu Gln Gln Ile Glu Gly Lys Asn Ile 170 175 180 Ile Ile Ala Thr Gly Ser Glu Val Thr Pro Phe Pro Gly Val Glu 185 190 195 Ile Asp Glu Glu Gln Ile Ile Ser Ser Thr Gly Ala Leu Ser Leu 200 205 210 Lys Glu Val Pro Glu Lys Met Val Val Ile Gly Gly Gly Val Ile 215 220 225 Gly Leu Glu Leu Gly Ser Val Trp Thr Arg Leu Gly Ala Lys Val 230 235 240 Thr Val Val Glu Phe Gln Glu Ala Ile Gly Gly Pro Gly Leu Asp 245 250 255 Ser Glu Val Ser Gln Gln Phe Lys Lys Leu Leu Glu Lys Gln Gly 260 265 270 Ile His Phe Lys Leu Gly Thr Lys Val Asn Gly Ile Glu Lys Glu 275 280 285 Asn Gly Lys Val Thr Val Arg Thr Glu Gly Lys Asp Gly Lys Glu 290 295 300 Gln Asp Tyr Asp Ala Asn Val Val Leu Val Ser Ile Gly Arg Arg 305 310 315 Pro Val Thr Lys Gly Leu Asn Leu Glu Ala Ile Gly Val Glu Leu 320 325 330 Asp Lys Lys Gly Arg Val Val Val Asp Asp Glu Phe Asn Thr Thr 335 340 345 Cys Lys Gly Val Lys Cys Ile Gly Asp Ala Thr Phe Gly Pro Met 350 355 360 Leu Ala His Lys Ala Glu Asp Glu Gly Ile Ala Val Ala Glu Met 365 370 375 Leu Ala Thr Gly Tyr Gly His Val Asn Tyr Asp Val Ile Pro Ala 380 385 390 Val Ile Tyr Thr His Pro Glu Ile Ala Trp Val Gly Lys Ser Glu 395 400 405 Gln Glu Leu Lys Asn Glu Gly Val Gln Tyr Lys Val Gly Lys Phe 410 415 420 Pro Phe Leu Ala Asn Ser Arg Ala Lys Thr Asn Val Asp Thr Asp 425 430 435 Gly Phe Val Lys Phe Leu Val Glu Lys Glu Thr Asp Lys Ile Leu 440 445 450 Gly Val Phe Ile Ile Gly Pro Asn Ala Gly Glu Met Ile Ala Glu 455 460 465 Ala Gly Leu Ala Met Glu Tyr Gly Ala Ser Ala Glu Asp Val Ala 470 475 480 Arg Thr Cys His Ala His Pro Thr Leu Ser Glu Ala Phe Lys Glu 485 490 495 Gly Ala Met Ala Ala Tyr Ser Lys Pro Ile His Phe 500 505

【００８６】配列番号：１２配列の長さ：273 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Asp Leu Ser His Ile Asn Thr Pro Ala Val Thr Ser Gly Tyr Ala 1 5 10 15 Gln Asp Asp Leu Glu Gly Ala Val Asp Gly Ala Glu Ile Val Leu 20 25 30 Ile Pro Ala Gly Met Pro Arg Lys Pro Gly Met Thr Arg Asp Asp 35 40 45 Leu Phe Asn Ser Asn Ala Ser Ile Val Arg Asp Leu Ala Lys Val 50 55 60 Val Ala Lys Val Ala Pro Lys Ala Tyr Ile Gly Val Ile Ser Asn 65 70 75 Pro Val Asn Ser Thr Val Pro Ile Val Ala Glu Val Phe Lys Lys 80 85 90 Ala Gly Val Tyr Asp Pro Lys Arg Leu Phe Gly Val Thr Thr Leu 95 100 105 Asp Thr Thr Arg Ala Ala Thr Phe Leu Ser Gly Ile Ala Gly Ser 110 115 120 Asp Pro Gln Thr Thr Asn Val Pro Val Ile Gly Gly His Ser Gly 125 130 135 Val Thr Ile Val Pro Leu Ile Ser Gln Ala Ala Gln Gly Asp Lys 140 145 150 Val Gln Ala Gly Glu Gln Tyr Asp Lys Leu Val His Arg Ile Gln 155 160 165 Phe Gly Gly Asp Glu Val Val Lys Ala Lys Asp Gly Ala Gly Ser 170 175 180 Ala Thr Leu Ser Met Ala Tyr Ala Ala Ala Val Phe Thr Glu Gly 185 190 195 Leu Leu Lys Gly Leu Asp Gly Glu Ala Val Thr Gln Cys Thr Phe 200 205 210 Val Glu Ser Pro Leu Phe Lys Asp Gln Val Asp Phe Phe Ala Ser 215 220 225 Pro Val Glu Phe Gly Pro Glu Gly Val Lys Asn Ile Pro Ala Leu 230 235 240 Pro Lys Leu Thr Ala Glu Glu Gln Lys Leu Leu Asp Ala Cys Leu 245 250 255 Pro Asp Leu Ala Lys Asn Ile Lys Lys Gly Val Ala Trp Ala Ala 260 265 270 Glu Asn Pro

【００８７】配列番号：１３配列の長さ：23 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： CCNGGNGAYC CNACNGCNAC NGC 23

【００８８】配列番号：１４配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： ACNYTNATGG GNTAYATHCC NTGGAC 26

【００８９】配列番号：１５配列の長さ：599 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： ACACTGATGG GATACATTCC CTGGACCCCG GAGCTCGACT CGGGTGAGGT GTGTGGTATC 60 CCCCACCACC TTCCAAGACC CGCGACGAGT GGAAGGGCAA GAAGGTTGTG ATTGTCTCGA 120 TCCCGGGTGC CTACACCCCC ATCTGTCCAC CAGCAGAACA TCCCCCCGCT TTGTGAAGCG 180 TGTGGATGAG CTCAAGGCCA AGGGTGTCCC GACGCCGTGT ACGTCATTGC GTCGAACGAC 240 CCCTTCGTCA TGGCTGCCTG GGGCCAACTT CAACAACGCC AAGGACAAGG TCGTCTTTGG 300 CACCGACATT GACCTGGCCT TCTCCCAAGG CTCTCGGCGC GACGATCCGA CCTGAGCGCC 360 AAGCACTTTG GTGAGCGCAC GGCCCGCTAC GCTCTGATCA TTGACGACAA CAAGATTGTC 420 GACTTTGGTT CGGACGAGGG CGACACTGGC AAGCTCCAGA ACGCGTCGAT CGACACGATC 480 CTCACCAAGG TCTTAAAATT GGCGCATGTG CGTTGTGGTG ACCACTACCT AAAGGGTCCG 540 TAGAGTTCCA AGTCAAGTCG TATATTTTTA ATTTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAA 599

【００９０】配列番号：１６配列の長さ：991 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： AGACAGCAGG GACATGGTTT AGAAGCACAA TTCGCGGTAG CTGGCGCTGA AGCGATACTC 60 GCTGAGAAAT TCACTTTCCC CCCGCTGACG GCCAGACCCC CGAACTGTCC CGAATTACCA 120 AGCAAATGCA CGTGACGTTT GTGGAGGCTC GGGGATTATC AGGCCACGTA TCAGTGAGCC 180 GAGCACCGCG TGGCTTCGGC TGGCTGCATA TAAAGCCGGG TGGGCCGTGC TCACAGCTTC 240 ATCTTCCACG ACAATCATTA TGCCTGGTGT AGGTACCGCG AAGTGACACG CATGCTGACC 300 ATCAGGATCC TACTGCTACT GCCAAGGGTA ACGAGATCCC CGACACCCTC ATGGGCTACA 360 TCCCCTGGAC CCCGGAGCTC GACTCGGGTG AGGTGTGTGG TATCCCCACC ACCTTCAAGA 420 CCCGCGACGA GTGGAAGGGC AAGAAGGTTG TGATTGTCTC GATCCCGGGT GCCTACACCC 480 CCATCTGCCA CCAGCAGCAC ATCCCCCCGC TTGTGAAGCG TGTGGATGAG CTCAAGGCCA 540 AGGGTGTCGA CGCCGTGTAC GTCATTGCGT CGAACGACCC CTTCGTCATG GGTATGTACT 600 GCTCTGTCAT TTCTTTATGC TAACCGACAG CTGCCTGGGG CAACTTCAAC AACGCCAAGG 660 ACAAGGTCGT CTTTGCCACC GACATTGACC TGGCCTTCTC CAAGGCTCTC GGCGCGACGA 720 TCGACCTGAG CGCCAAGCAC TTTGGTGAGC GCACGGCCCG CTACGCTCTG ATCATTGACG 780 ACAACAAGAT TGTCGACTTT GCTTCGGACG AGGGCGACAC TGGCAAGCTC CAGAACGCGT 840 CGATCGACAC GATCCTCACC AAGGTCTAAA ATGGCGCATG TGCGTTGTGT GACCACTACC 900 TAAAGGGTCC GTAGAGTTCC AAGTCAAGTC GTATATTTTT TTTTTACAGG ATGGTGTGTA 960 CTGCCACCTG CCTTTGAGCA AGGCGTGCCA G 991

【００９１】配列番号：１７配列の長さ：177 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Pro Gly Asp Pro Thr Ala Thr Ala Lys Gly Asn Glu Ile Pro 1 5 10 15 Asp Thr Leu Met Gly Tyr Ile Pro Trp Thr Pro Glu Leu Asp Ser 20 25 30 Gly Glu Val Cys Gly Ile Pro Thr Thr Phe Lys Thr Arg Asp Glu 35 40 45 Trp Lys Gly Lys Lys Val Val Ile Val Ser Ile Pro Gly Ala Tyr 50 55 60 Thr Pro Ile Cys His Gln Gln His Ile Pro Pro Leu Val Lys Arg 65 70 75 Val Asp Glu Leu Lys Ala Lys Gly Val Asp Ala Val Tyr Val Ile 80 85 90 Ala Ser Asn Asp Pro Phe Val Met Ala Ala Trp Gly Asn Phe Asn 95 100 105 Asn Ala Lys Asp Lys Val Val Phe Ala Thr Asp Ile Asp Leu Ala 110 115 120 Phe Ser Lys Ala Leu Gly Ala Thr Ile Asp Leu Ser Ala Lys His 125 130 135 Phe Gly Glu Arg Thr Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ile Asp Asp Asn 140 145 150 Lys Ile Val Asp Phe Ala Ser Asp Glu Gly Asp Thr Gly Lys Leu 155 160 165 Gln Asn Ala Ser Ile Asp Thr Ile Leu Thr Lys Val 170 175

【００９２】配列番号：１８配列の長さ：25 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： ACNTTYGCNC ARGAYGTNAA YTGYG 25

【００９３】配列番号：１９配列の長さ：261 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： ACCTTTGCAC AGGACGTCAA TTGCGAGTTC TCCAAGCACT TTAACGCGAC GCTGGACCTG 60 TCGTCGAAGG GCATGGGCCT GCGCACCGCG CGCTACGCGC TGATCGCGAA CGACCTCAAG 120 GTCGAGTACT TTGGCATCGA CGAGGGCGAG CCGAAGCAGT CGTCGGCCGC GACGGTGCTG 180 AGCAAGCTGT AGTGCCGTTC TACTTAGTCA AACAATCGGG TATAGTCGCG TTGGAAAAAA 240 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A 261

【００９４】配列番号：２０配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： CARACNTAYG TNAAYAAYYT NAAYGC 26

【００９５】配列番号：２１配列の長さ：25 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： ACNCAYCAYC CNGTNATHGG NTGGG 25

【００９６】配列番号：２２配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： ATNACNGGRT GRTGNGTNGT NARNGG 26

【００９７】配列番号：２３配列の長さ：371 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CAGACCTATG TCAACAACCT GAACGCCGCC GAGAAGGCGT ACGCTGAGGC GACGGCCGCG 60 AACGACGTGC TTAAGCAGAT CCAGCTGCAG AGTGCGATCA AGTTCAACGG CGGTGGCCAC 120 ATCAACCACT CGCTGTTCTG GAAGAACCTG GCCCCCCAGA GCGAGGGTGG TGGCCAACTG 180 AACGATGGCC CTCTCAAGCA GGCCATCGAG CAGGAGTTCG GCGACTTTGA GAAATTCAAG 240 ACGACCTTCA ACACGAAGGC GGCCGGCATC CAGGGTTCGG GCTGGCTGTG GCTCGGTGTT 300 GCCCCGACGG GCAACCTCGA CCTGGTCGTT GCCAAGGACC AGGACCCGCT GACCACCCAT 360 CACCCCGTGA T 371

【００９８】配列番号：２４配列の長さ：263 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： ACGCATCATC CCGTGATTGG CTGGGATGGC TGGGAGCACG CCTGGTACCT GCAGTACAAG 60 NACGACAAGG CTTCCTACCT TAAGGCCTGG TGGAACGTGG TGAACTGGGC CGAGGCCGAG 120 AAGCGCTTCC TCGAGGGTAA GAAGAAGGCC CAGCTGTAAT GGCACGTTTG TAGATGATGA 180 ACGACACACG ATTTTAGGTC GCCAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 240 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAA 263

【００９９】配列番号：２５配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： CCNCCNYTNC CNTAYGAYTA YGGNGC 26

【０１００】配列番号：２６配列の長さ：28 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： GARCCNGCNA THWSNGGNGA RATHATGG 28

【０１０１】配列番号：２７配列の長さ：630 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GAACCTGCTT TCTGGGGGGA GATAATGGAG ACGCACTACG AGAAGCACCA CCGCACCTAC 60 GTCAACAACC TGAACGCCGC GGAGGACAAG CTGATCGACG CGCTCCCGCA GCAGAGCCCG 120 CTCGGCGAGA TTGCGCAGCT GAACGCGATC AANTTCATCG GCGGTGGCCA CATCAACCAC 180 TCGCTCTTCT GGAAGAACCT CGCGCCGACG AACAAGGGCG GCGGCGAGCT CGACTCGGGC 240 GAGCTGCGCT CCGCGATCGA CCGCGACTTT GGCTCGGTCG ACGCCATGAA GGAGAAGTTC 300 AACGCGGCGC TCGCGGGCAT CCAGGGTATC GGCTGGGGCT GGCTCGGCCT GAACCCCACG 360 ACGCAGAAGC TCGACATCAT CACGACCGCG AACCAGGACC CGCTCCTGTC GCACAAGCCG 420 CTGATTGGCA TCGATGCGTG GGAGCACGCG TACTACCTGC AGTACAAGAA CGTCAAGGCC 480 GACTACTTCA AGGCGATCTG GACCGTGATC AACTTTGAGG AGGCCGAGAA GCGTCTCA?G 540 GAGGCGCTCG CCAAGAACTA GACACGTTCG GTTTTTTTTT TATCACTAGC TTAGCAATGA 600 CCTGCCCACG CTAAAAAAAA AAAAAAAAAA 630

【０１０２】配列番号：２８配列の長さ：23 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列の特徴：３、９、１２、１５番目のＮはイノシンを
示す。配列： GGNTAYGTNG CNGCNATHAA RGC 23

【０１０３】配列番号：２９配列の長さ：23 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列の特徴：６、１５、１８番目のＮはイノシンを示
す。配列： TCYTCNGCYT TRTGNGCNAR CAT 23

【０１０４】配列番号：３０配列の長さ：938 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GGGTNCGTGG CGGCGATAAA GGCCGCGCAG GGTGGTCTGA AGACTGCATG TGTTGAGAAG 60 CGCGGTGCGC TTGGTGGTAC CTGCTTGAAC GTGGGCTGTA TCCCTTCCAA GTCGTTGGTG 120 AACAACTCGC ACATCTTCCA CCAGACGCAG CACGACCTCA AGAACCGCGG TATTGACGTC 180 AGCGAGGTCA AGTTGANCCT GCCGCAGATG CTCAAGGCGA AGGAGAGCTC GGTCACTGCG 240 CTCACCAAGG GTGTCGAGGG CCTGTTCAAG AAGAACAAGG TCGCCTACCT CAAGGGGACA 300 GACAGATTCG CGAGCCCTAC GACGGTGGAC GTGAAGCTGA GCGATGGCGG TGAACAGNAG 360 ATTGAGGGCA AGAACATTAT CATTGCGACT GGCTCTGAGG TGACGCCTTN CCCTGGTGTG 420 GAGATCGCCG AGGAGCAGAT TATCAGCTCG ACGGGTGCGC TCTCGCTCAA GGAGGTGCCT 480 NAGAAGATGG TCGTGATCGG TGGTGGTGTG ANCGCTCTTG AGCTCGNTAG CGTGTGGAGC 540 CGTCTGGNCC CCAAGGTGAC CGTGGNTGAG TTCCAGGACG CGATTGTTGC CCCCGGTCTG 600 GACAGCGAGG TGACCCAGCA GTTCAAGAAG CTGCTCGAGA AGCAGGGCAT CCAGTTCAAG 660 CTTGCCACTA AGGTGAACGG GATTGAGAAG CAGGATGCCA AAGTGATGGT CCGCACCGAG 720 GGCAAGGACG GCAAGGAGCA GGACNACGAC GCCAACGTTG TGCTCGTGTC CATCGGTCNC 780 CNCCCGGTGA CGAAGGGCTT GAACCTCGAG GCGATCGGCG TTGAGCTTGA TAAGAAGGCC 840 CGCGTGGTGG TGGACGATGA GTTCAACACG ACGTGCAAGG GTGTCAAGTG CATTGGTGAC 900 GCGACGTTCG GCCCTATGCT CGCCCACAAG GCCGAAGA 938

【０１０５】配列番号：３１配列の長さ：1600 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： GTTGAGCTCT GTGCTGAAGC GCTCGCCGCA GCTCTCTACT AAGGCTCTGA AGCAGCCGCT 60 TACGCTCCCG CGTCTGCTGC CCATTGGTGC TGCGCCGCTG GCTCGTGGCT ATGCCTCGAG 120 CTCGGAGCCA TACGATGTCA TTGTGATTGG TGGTGGCCCC GGTGGCTACG TGGCCGCGAT 180 CAAGGCCGCG CAGGGTGGTC TGAAGACTGC ATGTGTTGAG AAGCGCGGTG CGCTTGGTGG 240 TACCTGCTTG AACGTGGGCT GTATCCCTTC CAAGTCGTTG CTGAACAACT CGCACATCTT 300 CCACCAGACG CAGCACGACC TCAAGAACCG CGGTATTGAC GTCAGCGAGG TCAAGTTGAA 360 CCTGCCGCAG ATGCTCAAGG CGAAGGAGAG CTCGGTCACT GCGCTCACCA AGGGTGTCGA 420 GGGCCTGTTC AAGAAGAACA AGGTCGACTA CCTCAAGGGC ACAGCCAGCT TCGCGAGCCC 480 TACGACGGTG GACGTGAAGC TGAACGATGG CGGTGAACAG CAGATTGAGG GCAAGAACAT 540 TATCATTGCG ACTGGCTCTG AGGTGACGCC CTTCCCTGGT GTGGAGATCG ACGAGGAGCA 600 GATTATCAGC TCGACGGGTG CGCTCTCGCT CAAGGAGGTG CCTGAGAAGA TGGTCGTGAT 660 CGGTGGTGGT GTGATCGGTC TGGAGCTCGG TAGCGTGTGG AGCCGTCTGG GCGCCAAGGT 720 GACCGTGGTT GAGTTCCAGG ACGCGATTGG TGGCCCCGGT CTGGACAGCG AGGTGAGCCA 780 GCAGTTCAAG AAGCTGCTCG AGAAGCAGGG CATCCAGTTC AAGCTTGGCA CTAAGGTGAA 840 CGGGATTGAG AAGCAGGATG GCAAAGTGAT GGTCCGCACC GAGGGCAAAG ACGGCAAGGA 900 GCAGGACTAC GACGCCAACG TTGTGCTCGT GTCCATCGGT CGCCGCCCGG TGACGAAGGG 960 CTTGAACCTC GAGGCGATCG GCGTTGAGCT TGATAAGAAG GGCCGCGTGG TGGTGGACGA 1020 TGAGTTCAAC ACGACGTGCA AGGGTGTCAA GTGCATTGGT GACGCGACGT TCGGCCCTAT 1080 GCTTGCGCAC AAGGCCGAGG ACGAGGGTAT CGCCGTTGCT GAGATGCTCG CGACCGGCTA 1140 CGGCCACGTC AACTACGACG TGATCCCTGC GGTGATCTAC ACGCACCCCG AGATTGCGTG 1200 GGTCGGCAAG TCGGAGCAGG AGCTCAAGAA CGATGGCGTG CAGTACAAGG TGGGCAAGTT 1260 CCCCTTCCTG GCCAACTCGC GTGCTAAGAC CAACGTCGAC ACCGACGGTT TTGTCAAGTT 1320 CCTCGTGGAG AAGGACACCG ACAAGATTCT CGGCGTGTTC ATCATCGGTC CGAACGCCGG 1380 CGAGATGATT GCCGAGGCTG GCCTGGCTAT GGAGTACGGT GCGAGTGCAG AGGATGTCGC 1440 GCGCACCTGC CACGCGCACC CGACGCTCTC GGAGGCCTTC AAGGAGGGTG CGATGGCCGC 1500 CTACTCGAAG CCGATTCACT TTTGATTTCG TAGGTTTCCC CCGATAGGCG CCCGATACGT 1560 CTTCCTCAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1600

【０１０６】配列番号：３２配列の長さ：507 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Leu Ser Ser Val Leu Lys Arg Ser Pro Gln Leu Ser Thr Lys Ala 1 5 10 15 Leu Lys Gln Pro Leu Thr Leu Pro Arg Leu Leu Pro Ile Gly Ala 20 25 30 Ala Pro Leu Ala Arg Gly Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Pro Tyr Asp 35 40 45 Val Ile Val Ile Gly Gly Gly Pro Gly Gly Tyr Val Ala Ala Ile 50 55 60 Lys Ala Ala Gln Gly Gly Leu Lys Thr Ala Cys Val Glu Lys Arg 65 70 75 Gly Ala Leu Gly Gly Thr Cys Leu Asn Val Gly Cys Ile Pro Ser 80 85 90 Lys Ser Leu Leu Asn Asn Ser His Ile Phe His Gln Thr Gln His 95 100 105 Asp Leu Lys Asn Arg Gly Ile Asp Val Ser Glu Val Lys Leu Asn 110 115 120 Leu Pro Gln Met Leu Lys Ala Lys Glu Ser Ser Val Thr Ala Leu 125 130 135 Thr Lys Gly Val Glu Gly Leu Phe Lys Lys Asn Lys Val Asp Tyr 140 145 150 Leu Lys Gly Thr Ala Ser Phe Ala Ser Pro Thr Thr Val Asp Val 155 160 165 Lys Leu Asn Asp Gly Gly Glu Gln Gln Ile Glu Gly Lys Asn Ile 170 175 180 Ile Ile Ala Thr Gly Ser Glu Val Thr Pro Phe Pro Gly Val Glu 185 190 195 Ile Asp Glu Glu Gln Ile Ile Ser Ser Thr Gly Ala Leu Ser Leu 200 205 210 Lys Glu Val Pro Glu Lys Met Val Val Ile Gly Gly Gly Val Ile 215 220 225 Gly Leu Glu Leu Gly Ser Val Trp Ser Arg Leu Gly Ala Lys Val 230 235 240 Thr Val Val Glu Phe Gln Asp Ala Ile Gly Gly Pro Gly Leu Asp 245 250 255 Ser Glu Val Ser Gln Gln Phe Lys Lys Leu Leu Glu Lys Gln Gly 260 265 270 Ile Gln Phe Lys Leu Gly Thr Lys Val Asn Gly Ile Glu Lys Gln 275 280 285 Asp Gly Lys Val Met Val Arg Thr Glu Gly Lys Asp Gly Lys Glu 290 295 300 Gln Asp Tyr Asp Ala Asn Val Val Leu Val Ser Ile Gly Arg Arg 305 310 315 Pro Val Thr Lys Gly Leu Asn Leu Glu Ala Ile Gly Val Glu Leu 320 325 330 Asp Lys Lys Gly Arg Val Val Val Asp Asp Glu Phe Asn Thr Thr 335 340 345 Cys Lys Gly Val Lys Cys Ile Gly Asp Ala Thr Phe Gly Pro Met 350 355 360 Leu Ala His Lys Ala Glu Asp Glu Gly Ile Ala Val Ala Glu Met 365 370 375 Leu Ala Thr Gly Tyr Gly His Val Asn Tyr Asp Val Ile Pro Ala 380 385 390 Val Ile Tyr Thr His Pro Glu Ile Ala Trp Val Gly Lys Ser Glu 395 400 405 Gln Glu Leu Lys Asn Asp Gly Val Gln Tyr Lys Val Gly Lys Phe 410 415 420 Pro Phe Leu Ala Asn Ser Arg Ala Lys Thr Asn Val Asp Thr Asp 425 430 435 Gly Phe Val Lys Phe Leu Val Glu Lys Asp Thr Asp Lys Ile Leu 440 445 450 Gly Val Phe Ile Ile Gly Pro Asn Ala Gly Glu Met Ile Ala Glu 455 460 465 Ala Gly Leu Ala Met Glu Tyr Gly Ala Ser Ala Glu Asp Val Ala 470 475 480 Arg Thr Cys His Ala His Pro Thr Leu Ser Glu Ala Phe Lys Glu 485 490 495 Gly Ala Met Ala Ala Tyr Ser Lys Pro Ile His Phe 500 505

【０１０７】配列番号：３３配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： AARGTNGCNG TNYTNGGNGC NWSNGG 26

【０１０８】配列番号：３４配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： YTNWSNYTNY TNATGAARYT NAAYCC 26

【０１０９】配列番号：３５配列の長さ：1009 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： TTCTCTCTGT TGATGAAGCT CAACCCCAAG GTCACCGAGC TGCGCCTGTA CGACATCCGT 60 CTTGCTCCGG GTGTTGCTGC GGACCTCTCG CACATCAACA CGCCTGCGGT GACCTCGGGC 120 TACGCCCAGG ACNATCTTGA GGGTGCCGTT GACGGCGCAA AGATTGTCCT GATCCCCGCC 180 GGTATGCCGC GCAAGCCCGG CATGACCCGT GACGATCTGT TCAACTCGAA CGCCTCGATC 240 GTCCGTGACC TCGCCAAGAC CGTGGCCAAG GTTGCCCCCA AGGCCTACAT TGGTATCATC 300 TCGAACCCCG TCAACTCGAC GGTGCCGATC GTCGCCGAGG TGTTCAAGAA GGCGGGTGTG 360 TACGACCCCA AGCGCCTCTT CGGTGTGACC ACGCTCGACA CCACGCGTGC GGCCACCTTC 420 CTGTCGGGCA TCACTGGCTC GGAACCGCAG ACCACCAATG TCCCGGTCAT TGGTGGTCAC 480 TCGGGTGTGA CCATCGTGCC TCTGGTCTCG CAGGCCCCCC AGGGTGACAA GGTGCAGGCC 540 GGCGAGCAGT ACGACAAGCT CGTCCACCGC ATTCAGTTCG GTGGTGACGA GGTCGTTAAG 600 GCCAAGGACG GTGCGGGTTC GGCGACGCTG TCGATGGCCT ACGCCGCCGC TGTCTTCACT 660 GAGGGCCTGC TCAAGGGTCT TGACGGTGAG GCGGTGACGC AGTGCACCTT CGTTGAGAGC 720 CCCCTGTTCA AGGACCAGGT TGACTTCTTC GCTTCGCCCG TCGAGTTCGG CCCCGAGGGC 780 GTGAAGAACA TCCCTGCCCT GCCCAAGCTC ACCGCTGAGG AGCAGAAGCT GNTNGACGCC 840 TGCCTGCCCG ACCTTGCCAA GAACATCAAG AAGGGTGTTG CGTGGGTTGC CGAGAACCCC 900 TAAATGCGCA GAACCAGCTT CCACGGAGCT TGCGCCAAGG AAAGGAAACG CACATTTNTA 960 TAGAGCGTAG CTTTGTCCCT TTCCATTTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAA 1009

【０１１０】配列番号：３６配列の長さ：1008 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列： CTAAGATTCT TGATGAAGCT GAACCCCAAG GTTACCGAGC TCCGCCTGTA CGACATCCGC 60 CTCGCTCCGG GTGTTGCTGC GGATCTCTCG CACATCAACA CCCCCGCGGT GACTTCGGGC 120 TACGCCCAGG ACGACCTCGA GGGTGCCGTC GACGGTGCGG AGATTGTGCT GATCCCCGCC 180 GGTATGCCGC GCAAGCCCGG CATGACCCGT GACGACCTGT TCAACTCGAA CGCCTCGATT 240 GTCCGTGACC TCGCCAAGGT CGTGGCTAAG GTCGCCCCAA AGGCTTACAT CGGCGTCATC 300 TCGAACCCCG TCAACTCGAC GGTGCCGATC GTCGCTGAGG TGTTAAAGAA GGCCGGTGTG 360 TACGACCCCA AGCGCCTCTT CGGTGTGACC ACGCTCGACA CCACGCGCGC GGCCACCTTC 420 CTGTCGGGCA TTGCTGGCTC GGAACCGCAG ACCACCAACG TCCCCGTCAT TGGTGGCCAC 480 TCGGGTGTGA CCATTGTGCC CCTGATCTCG CAGGCCGCCC AGGGTGACAA GGTGCAGGCT 540 GGCGAGCAGT ACGACAAGCT TGTGCACCGC ATCCAGTTCG GTGGTGACGA GGTCGTCAAG 600 GCCAAGGACG GTGCCGGTTC GGCGACGCTC TCGATGGCCT ACGCCGCCGC TGTTTTCACC 660 GAGGGCCTGC CCAAGGGTCT CGACGGTGAG GCGGTGACGC AGTGCACCTT CGTCGAGAGC 720 CCCCTGTTCA AGGACCAGGT CGANTTCTTC GCTTCGCCCG TCGAGTTCGG CCCCGAGGGT 780 GTGAAGAACA TCCCTGNTCT GCCGAAGCTC ACCGCCGAGG AGCAGAAGCT GNTNGACGCC 840 TGCCTGCCCG ACCTTGCCAA GAACATCAAG AAGGGCGTTG CGTGGGCCGC CGAGAACCCG 900 TAAATGCGCA AAGCAATNTT TTACGGAGCT TGCGCGAAGG AAAGGAAATG TACGTTTNTA 960 TAGAACGTAG ATCTGTCCCT TTCCACCTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA 1008

【０１１１】配列番号：３７配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ile Pro Trp Thr Pro Glu Leu Asp Ser Gly Glu Val Cys Gly Ile 1 5 10 15

【０１１２】配列番号：３８配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ser Lys Ala Leu Gly Ala Thr Ile Asp Leu Ser Ala Lys His Phe 1 5 10 15

【０１１３】配列番号：３９配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ala Thr Ile Asp Leu Ser Ala Lys His Phe Gly Glu Arg Thr Ala 1 5 10 15

【０１１４】配列番号：４０配列の長さ：２８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Pro Gly Asp Pro Thr Ala Thr Ala Lys Gly Asn Glu Ile Pro Asp Thr 5 10 15 Leu Met Gly Tyr Ile Pro Trp Thr Pro Glu Leu Asp 20 25

【０１１５】配列番号：４１配列の長さ：１２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【０１１６】配列番号：４２配列の長さ：１３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Asn Leu Thr Phe Ala Gln Asp Val Asn Cys Glu Phe 5 10

【０１１７】配列番号：４３配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Val Val Ile Val Ala Val Pro Gly Xaa Phe Thr Pro Thr Cys Thr Ala 5 10 15 Asn His Val Pro Xaa Tyr Xaa Glu 20

【０１１８】配列番号：４４配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Gln Asp Pro Leu Thr Thr His His Pro Val Ile Gly Trp Asp Xaa 5 10 15 Xaa Glu His Ala 20

【０１１９】配列番号：４５配列の長さ：１３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Ala Trp Trp Asn Val Val Asn Trp Ala Glu Ala Glu Lys 5 10

【０１２０】配列番号：４６配列の長さ：１２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【０１２１】配列番号：４７配列の長さ：３０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Lys Tyr Thr Leu Pro Pro Leu Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala Leu Glu Pro 5 10 15 Ala Ile Ser Gly Glu Ile Met Glu Thr His Tyr Glu Lys His 20 25 30

【０１２２】配列番号：４８配列の長さ：２３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Glu Pro Tyr Asp Val Ile Xaa Ile Gly Gly Gly Pro Gly Gly Tyr Val 5 10 15 Ala Ala Ile Lys Ala Ala Gln 20

【０１２３】配列番号：４９配列の長さ：３０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Arg Lys Val Ala Val Leu Gly Ala Ser Gly Gly Ile Gly Gln Pro Leu 5 10 15 Ser Leu Leu Met Lys Leu Asn Pro Lys Val Thr Glu Leu Arg 20 25 30

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、２種類のＭＦ−５ｃＤＮＡのヌクレオ
チド配列の比較の図である。

【図２】図２は、２種類のＭＦ−６ＰＣＲ断片のヌクレ
オチド配列の比較の図である。

【図３】図３は、ＭＦ−１ｃＤＮＡとＭＦ−２ｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列の比較の図である。

【図４】図４は、ＭＦ−３ｃＤＮＡとＭＦ−４ｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列の比較の図である。

【図５】図５は、ＭＦ−１オーバーラッピングペプチド
のアミノ酸配列である。

【図６】図６は、ＭＦ−１オーバーラッピングペプチド
とＭ．ファーファＲＡＳＴ陽性患者血清の反応である。

【図７】図７は、ＭＦ−１ｃＤＮＡとＭＦ−１ゲノムＤ
ＮＡの比較の図である。

【図８】図８は、マラセチア粗抗原２７８２の二次元電
気泳動の写真である。クーマシーブリリアントブルー染
色により蛋白質の検出を行う。

【図９】図９は、マラセチア粗抗原２７８２の二次元電
気泳動の写真である。健常者ＩｇＥ抗体（Ａ）およびア
レルギー患者ＩｇＥ抗体（Ｂ）を用いてイムノブロット
法によりスポットを検出する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 33/569 Ｆ 33/569 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者加藤郁之進滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号寳酒造株式会社中央研究所内 (72)発明者安枝浩神奈川県相模原市桜台18−１国立病院官舎Ａ−401 (72)発明者秋山一男神奈川県川崎市宮前区けやき平１−10− 402 (72)発明者山口英世神奈川県川崎市多摩区栗谷２−15−５

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列表の配列番号：７に記載のアミノ酸
配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチド
を含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性を
有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項２】配列表の配列番号：７に記載のアミノ酸
配列、又はその一部からなるアミノ酸配列において、１
又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置換
の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレル
ゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項３】配列表の配列番号：８に記載のアミノ酸
配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチド
を含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性を
有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項４】配列表の配列番号：８に記載のアミノ酸
配列、又はその一部からなるアミノ酸配列において、１
又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置換
の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレル
ゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項５】配列表の配列番号：９に記載のアミノ酸
配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチド
を含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性を
有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項６】配列表の配列番号：９に記載のアミノ酸
配列、又はその一部からなるアミノ酸配列において、１
又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置換
の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレル
ゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項７】配列表の配列番号：１０に記載のアミノ
酸配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチ
ドを含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性
を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項８】配列表の配列番号：１０に記載のアミノ
酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列において、
１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又は置
換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチアアレ
ルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項９】配列表の配列番号：１１に記載のアミノ
酸配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプチ
ドを含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活性
を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項１０】配列表の配列番号：１１に記載のアミ
ノ酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列におい
て、１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又
は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチア
アレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白
質。
【請求項１１】配列表の配列番号：１２に記載のアミ
ノ酸配列の全部又は一部からなるペプチド、又は該ペプ
チドを含むペプチドであって、マラセチアアレルゲン活
性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白質。
【請求項１２】配列表の配列番号：１２に記載のアミ
ノ酸配列、又はその一部からなるアミノ酸配列におい
て、１又は２以上のアミノ酸残基の欠失、付加、挿入又
は置換の少なくとも１つを生じさせ、かつ、マラセチア
アレルゲン活性を有する組換えマラセチア抗原性蛋白
質。
【請求項１３】配列表の配列番号：１に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】配列表の配列番号：１に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項１５】請求項１３又は１４に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有する抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオ
チド。
【請求項１６】配列表の配列番号：２に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１７】配列表の配列番号：２に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項１８】請求項１６又は１７に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド。
【請求項１９】配列表の配列番号：３に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２０】配列表の配列番号：３に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項２１】請求項１９又は２０に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド。
【請求項２２】配列表の配列番号：４に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２３】配列表の配列番号：４に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項２４】請求項２２又は２３に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド。
【請求項２５】配列表の配列番号：５に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２６】配列表の配列番号：５に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項２７】請求項２５又は２６に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド。
【請求項２８】配列表の配列番号：６に記載の塩基配
列の全部又は一部からなるポリヌクレオチド、又は該ポ
リヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであって、マラ
セチアアレルゲン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質
をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２９】配列表の配列番号：６に記載の塩基配
列、又はその一部からなる塩基配列において、１又は２
以上の塩基の欠失、付加、挿入又は置換の少なくとも１
つを生じさせ、かつ、マラセチアアレルゲン活性を有す
るマラセチア抗原性蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項３０】請求項２８又は２９に記載のポリヌク
レオチドにハイブリダイズ可能な、マラセチアアレルゲ
ン活性を有するマラセチア抗原性蛋白質をコードするポ
リヌクレオチド。
【請求項３１】配列表の配列番号：７〜１２のいずれ
かに記載のアミノ酸配列に含まれる、少なくとも１つの
Ｂ細胞エピトープを含む抗原性断片。
【請求項３２】該エピトープが配列表の配列番号：３
７〜３９のいずれかに記載のアミノ酸配列から選ばれる
ものである請求項３１記載の抗原性断片。
【請求項３３】請求項１〜１２のいずれかに記載の組
換えマラセチア抗原性蛋白質、又は請求項３１、３２の
いずれかに記載の抗原性断片に特異的に結合する抗体又
は抗体断片。
【請求項３４】請求項１３〜３０のいずれかに記載の
ポリヌクレオチドとハイブリダイズする合成オリゴヌク
レオチドプローブ又は合成オリゴヌクレオチドプライマ
ー。
【請求項３５】請求項１〜１２のいずれかに記載の組
換えマラセチア抗原性蛋白質、又は請求項３１、３２の
いずれかに記載の抗原性断片を有効成分とすることを特
徴とするマラセチアアレルギー疾患又はマラセチア感染
症の診断薬。
【請求項３６】請求項１〜１２のいずれかに記載の組
換えマラセチア抗原性蛋白質、又は請求項３１、３２の
いずれかに記載の抗原性断片を有効成分とすることを特
徴とするマラセチアアレルギー疾患又はマラセチア感染
症の治療薬。